JPH0236182B2 - - Google Patents
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- JPH0236182B2 JPH0236182B2 JP57147846A JP14784682A JPH0236182B2 JP H0236182 B2 JPH0236182 B2 JP H0236182B2 JP 57147846 A JP57147846 A JP 57147846A JP 14784682 A JP14784682 A JP 14784682A JP H0236182 B2 JPH0236182 B2 JP H0236182B2
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- ldl
- measuring
- serum
- cholesterin
- sample
- Prior art date
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/92—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving lipids, e.g. cholesterol, lipoproteins, or their receptors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/04—Endocrine or metabolic disorders
- G01N2800/044—Hyperlipemia or hypolipemia, e.g. dyslipidaemia, obesity
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
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- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は体液中のβ−リポプロテイン（Low
Density Lipoprotein（LDL））フラクシヨンの測
定法に関する。 高コレステリン血症及び高トリグリセリン血症
はアテローム性動脈硬化症及び心臓硬塞の発生を
うながす。従つて、血清中のコレステリン及びト
リグリセリドの測定は臨床化学用簡易実験室にお
いて最も多く実施されるテストに属する。 トリグリセリド量及びコレステリン量の変化を
測定するだけでなく、病理学上の原因によるリポ
プロテインパターンの変化を調べる場合、個々の
冠状動脈疾患のおそれをより良好に把握すること
ができるということが多くの脂質代謝検査から結
論されている（Mu¨nch.med.wschr.第121巻、
1979年、第1639頁）。 公知の血漿リポプロテインは蛋白質、ホスホリ
ピド、コレステリン及びトリグリセリドを種々の
量で含有している。これらは分析超遠心分離にお
けるその挙動（異なる密度）により異なる三種の
クラスに分けることができる： プレ−β−リポプロテイン＝VLDL（Very
Low Density Lipoprotein、超低密度リポプロ
テイン）、 β−リポプロテイン＝LDL（Low Density
Lipoprotein、低密度リポプロテイン）、 α−リポプロテイン＝HDL（High Density
Lipoprotein、高密度リポプロテイン）。 リポプロテインの機能の検査により、リポプロ
テインのうちのLDLが決定的なアテロゲン成分
を形成しており、血中でのアテロゲン成分の上昇
は冠状動脈疾患であるという危検性の上昇を示
す。この状態の早期の発見及び治療は極めて重要
である。従つて、血清及び血漿中のLDL−濃度
の定量測定のための実施可能な方法が必要となつ
た。 従来、LDL−リポプロテインフラクシヨンの
測定には主に次の４種の方法を使用したが、これ
らはいずれも欠点を有する： １ 超遠心分離法 この方法のためには特別な装置が必要であ
り、この実施のためには著しく綿密な作業技術
及び非常に長い時間（105000ｇで２×20時間）
を必要とするので、この方法は簡易実験室には
好適でない。従つて、この分析法は従来医学研
究実験室においてのみ行なわれている。 ２ 沈殿反応 LDL−含量はポリアニオン、例えばヘパリ
ン−Na又はデキストランスルフエート及び二
価のカチオン、例えばCa++、Mn++、Mg++を
用いて分別沈殿することにより、同様に測定す
る。リポプロテインはポリアニオンの濃度が上
昇すると共にVLDL、LDL次にHDLの順に析
出する。しかしながらこの方法は二工程を必要
とし、そのために非実用的であり、かつ自動化
することができない：VLDLを第１の沈殿工程
で分離し、引き続き、沈殿剤の濃度を上昇させ
ることによりLDL−リポプロテインフラクシ
ヨンを析出させ、混濁測定法により測定する
（H.OKabe、X.Int.Congr.of Clin.Chem.、メ
キシコ、1978年）。 ３ フリーデワルド式（Friedewald Formel）
によるLDL−濃度の測定法 この方法により試料のトリグリセリド含量、
コレステリン含量及びHDL−コレステリン含
量を測定し、フリーデワルド法によりLDL−
コレステリン含量を計算する（Clin.Chem.第
18巻、1972年、499頁）。この煩雑な方法は全く
正確な値を示さず、このことはトリグリセリド
を多く含有する血清において著しい。 ４ 電気泳動分離及びポリアニオン沈殿による評
価 しかしながら、この方法は時間がかかり、電
気泳動装置並びに評価のための密度計を必要と
する（Lab.Med.、第１巻、1977年、第145頁）。 従つて、本発明の課題は、LDLを簡易実験室
で直接測定することのできる実用的で、自動化可
能な方法をつくり出すことである。この課題は、
体液、例えば血清又は血漿中のβ−リポプロテイ
ンフラクシヨン（LDL）を測定するために、カ
リウム、ナトリウム、リチウム及びアンモニウム
からなる群より選ばれた１価のカチオンを有し、
かつ基礎になつているビニルアルコール単位の少
なくとも70％がスルフエート基を有するポリビニ
ルスルフエート0.1〜0.01重量／容量％を添加す
ることにより体液からβ−リポプロテインフラク
シヨンを選択的に析出させ、測定することを特徴
とする体液中のβ−リポプロテインフラクシヨン
の測定法により解決する。 本発明による方法は、１価のカチオンを有する
ポリビニルスルフエートを添加することにより、
VLDL及びHDLの存在下にLDLを選択的に実事
上定量的に析出させ、測定することができるとい
う意外な事実の発見に基づく：従来公知のLDL
を析出させる検査によれば、VLDLをあらかじめ
分離しない場合、常にVLDLが共に析出するの
で、この発見は意外である（M.Bur stein、H.R.
Scholnick著、“Protides of the Biological
Fluids”、Peeters出版、第21〜28頁（1972）；
A¨rztl.Lab.第23巻、第101〜110頁、1977年）。 本発明による沈殿処理は前処理を行なつていな
い完全血清中で直接行なうのが有利である。沈殿
を、有利に遠心分離により分離する。 本発明においてポリビニルスルフエートとはポ
リビニルアルコールのヒドロキシル基を硫酸でエ
ステル化することにより、これから誘導されたポ
リマーである。分子の大きさは、これが十分に水
溶性であるかぎり、この方法に対し特別な影響を
与えない。本発明においては、基礎になつている
ビニルアルコール単位の少なくとも70％はスルフ
エートエステル基を有している。エステル化度80
％以上、特に90％以上が有利である。 それぞれ必要なポリビニルスルフエート量は簡
単な前実験により容易に決めることができる。試
料溶液１容量あたりポリビニルスルフエート0.1
〜0.01重量％を添加するのが有利である。ポリビ
ニルスルフエートの添加を水１あたりポリビニ
ルスルフエート（PVS）約１〜20ｇの希釈水溶
液の形で行なうのが有利である。しかしながら、
試料溶液を十分に撹拌することができる場合は、
本発明を濃縮溶液で、又はPVSを固体の形で添
加して実施することもできる。しかしながら、一
般に試料溶液量は非常にわずかであるので、希釈
溶液の形で添加するのが有利である。例えば血清
200容量部に0.1〜１％PVS−溶液40容量部を加え
る。特に良好な結果は0.2〜0.5％の水溶液を、こ
の水溶液１に対して試料溶液５の容量比で加える
と得られる。 試料溶液にPVSの他にポリグリコールメチル
エーテル又はポリビニルピロリドンを加えるのが
有利である。この組み合わせを使用する場合、析
出は特に良好な再現性を有する。ポリグリコール
メチルエーテル又は／及びポリビニルピロリドン
を試料溶液に有利に５〜10容量％の量で加える。 本発明の方法において、二価のカチオンが測定
可能量存在しないということは重要である。通
常、二価のカチオンの血清中に存在する量は僅か
な痕跡量程度であり、この量では全く妨害は生じ
ないので、この要件は無視することができる。し
かしながら、二価のカチオン含量の並みはずれて
高い異常な試料の出現を全く除くことはできない
ので、前記の物質の他に多価カチオンのための錯
化剤を添加するのが有利である。このためには、
例えばエチレンジアミン四酢酸（EDTA）のよ
うなポリアミンアセテートが有利である。この種
の錯化剤を試料溶液中の濃度0.01〜0.001モル／
であるような量で使用するのが有利である。 本発明により析出したLDL−フラクシヨンの
評価は有利に、リポプロテインの公知の測定法を
使用することにより行なわれる。リポプロテイン
中に含有されるコレステリンはこのために公知の
方法により有利に測定される。例えばコレステリ
ンオキシダーゼでの酸化及び酸化により生じた
H2O2の測定により行なわれる。この測定の実施
は有利に、試料中の全コレステリン並びに沈殿上
澄中のコレステリンを測定し、この差からLDL
−量を推定するか又はLDL−沈殿を溶かし、こ
のようにして得られた溶液中でコレステリン測定
を実施することにより行なわれる。リポプロテイ
ンフラクシヨン中のコレステリン量は一定である
ので、測定コレステリン量はリポプロテイン量に
相当する。 PVSは有利にカリウム塩として使用されるが、
他の１価のカチオン、特にナトリウム、リチウム
及びアンモニウムを同様に使用することができ
る。 本発明により体液中のβ−リポプロテインフラ
クシヨンを測定するための試薬が得られ、これは
ポリビニルスルフエートを含有していることを特
徴とする。ポリビニルメチルエーテル及び／又は
ポリビニルピロリドンを付加的に含有するのが有
利である。もう１つの有利な実施形式によれば、
試薬は更に多価カチオン用の錯化剤を含有してお
り、特にポリアミンアセテートが有利である。 前記の有利な種類の典型的な試薬はそれぞれ血
清容量に対してポリビニルスルフエート0.1〜
0.01重量％、ポリグリコールメチルエーテル及
び／又はポリビニルピロリドン５〜10容量％並び
に濃度0.01〜0.001モルの錯化剤を含有している。 本発明による方法及びこれから得られる試薬は
特に容易さ及び確実さにおいて優れている。一般
に認められた、著しく煩雑な測定法と比較する
と、結果の優れた一致が得られる。次に実施例に
つき本発明を詳細に説明する： 例 １ (A) 沈殿試薬の製造 溶液、PVS／ポリエチレングリコールメチ
ルエーテル PVS溶液（Ｃ＝３ｇ／） 34ml ポリエチレングリコールメチルエーテル（分子
量190〜550） 16ml EDTA（0.01モル） 50ml 溶液、PVS／プラスドン（Plasdone） PVS溶液（Ｃ＝３ｇ／） 34ml H2O 16ml EDTA（0.01モル） 50ml プラスドン 、K29−32（ポリビニルピロリド
ン） 6.5ｇ (B) 沈殿
Density Lipoprotein（LDL））フラクシヨンの測
定法に関する。 高コレステリン血症及び高トリグリセリン血症
はアテローム性動脈硬化症及び心臓硬塞の発生を
うながす。従つて、血清中のコレステリン及びト
リグリセリドの測定は臨床化学用簡易実験室にお
いて最も多く実施されるテストに属する。 トリグリセリド量及びコレステリン量の変化を
測定するだけでなく、病理学上の原因によるリポ
プロテインパターンの変化を調べる場合、個々の
冠状動脈疾患のおそれをより良好に把握すること
ができるということが多くの脂質代謝検査から結
論されている（Mu¨nch.med.wschr.第121巻、
1979年、第1639頁）。 公知の血漿リポプロテインは蛋白質、ホスホリ
ピド、コレステリン及びトリグリセリドを種々の
量で含有している。これらは分析超遠心分離にお
けるその挙動（異なる密度）により異なる三種の
クラスに分けることができる： プレ−β−リポプロテイン＝VLDL（Very
Low Density Lipoprotein、超低密度リポプロ
テイン）、 β−リポプロテイン＝LDL（Low Density
Lipoprotein、低密度リポプロテイン）、 α−リポプロテイン＝HDL（High Density
Lipoprotein、高密度リポプロテイン）。 リポプロテインの機能の検査により、リポプロ
テインのうちのLDLが決定的なアテロゲン成分
を形成しており、血中でのアテロゲン成分の上昇
は冠状動脈疾患であるという危検性の上昇を示
す。この状態の早期の発見及び治療は極めて重要
である。従つて、血清及び血漿中のLDL−濃度
の定量測定のための実施可能な方法が必要となつ
た。 従来、LDL−リポプロテインフラクシヨンの
測定には主に次の４種の方法を使用したが、これ
らはいずれも欠点を有する： １ 超遠心分離法 この方法のためには特別な装置が必要であ
り、この実施のためには著しく綿密な作業技術
及び非常に長い時間（105000ｇで２×20時間）
を必要とするので、この方法は簡易実験室には
好適でない。従つて、この分析法は従来医学研
究実験室においてのみ行なわれている。 ２ 沈殿反応 LDL−含量はポリアニオン、例えばヘパリ
ン−Na又はデキストランスルフエート及び二
価のカチオン、例えばCa++、Mn++、Mg++を
用いて分別沈殿することにより、同様に測定す
る。リポプロテインはポリアニオンの濃度が上
昇すると共にVLDL、LDL次にHDLの順に析
出する。しかしながらこの方法は二工程を必要
とし、そのために非実用的であり、かつ自動化
することができない：VLDLを第１の沈殿工程
で分離し、引き続き、沈殿剤の濃度を上昇させ
ることによりLDL−リポプロテインフラクシ
ヨンを析出させ、混濁測定法により測定する
（H.OKabe、X.Int.Congr.of Clin.Chem.、メ
キシコ、1978年）。 ３ フリーデワルド式（Friedewald Formel）
によるLDL−濃度の測定法 この方法により試料のトリグリセリド含量、
コレステリン含量及びHDL−コレステリン含
量を測定し、フリーデワルド法によりLDL−
コレステリン含量を計算する（Clin.Chem.第
18巻、1972年、499頁）。この煩雑な方法は全く
正確な値を示さず、このことはトリグリセリド
を多く含有する血清において著しい。 ４ 電気泳動分離及びポリアニオン沈殿による評
価 しかしながら、この方法は時間がかかり、電
気泳動装置並びに評価のための密度計を必要と
する（Lab.Med.、第１巻、1977年、第145頁）。 従つて、本発明の課題は、LDLを簡易実験室
で直接測定することのできる実用的で、自動化可
能な方法をつくり出すことである。この課題は、
体液、例えば血清又は血漿中のβ−リポプロテイ
ンフラクシヨン（LDL）を測定するために、カ
リウム、ナトリウム、リチウム及びアンモニウム
からなる群より選ばれた１価のカチオンを有し、
かつ基礎になつているビニルアルコール単位の少
なくとも70％がスルフエート基を有するポリビニ
ルスルフエート0.1〜0.01重量／容量％を添加す
ることにより体液からβ−リポプロテインフラク
シヨンを選択的に析出させ、測定することを特徴
とする体液中のβ−リポプロテインフラクシヨン
の測定法により解決する。 本発明による方法は、１価のカチオンを有する
ポリビニルスルフエートを添加することにより、
VLDL及びHDLの存在下にLDLを選択的に実事
上定量的に析出させ、測定することができるとい
う意外な事実の発見に基づく：従来公知のLDL
を析出させる検査によれば、VLDLをあらかじめ
分離しない場合、常にVLDLが共に析出するの
で、この発見は意外である（M.Bur stein、H.R.
Scholnick著、“Protides of the Biological
Fluids”、Peeters出版、第21〜28頁（1972）；
A¨rztl.Lab.第23巻、第101〜110頁、1977年）。 本発明による沈殿処理は前処理を行なつていな
い完全血清中で直接行なうのが有利である。沈殿
を、有利に遠心分離により分離する。 本発明においてポリビニルスルフエートとはポ
リビニルアルコールのヒドロキシル基を硫酸でエ
ステル化することにより、これから誘導されたポ
リマーである。分子の大きさは、これが十分に水
溶性であるかぎり、この方法に対し特別な影響を
与えない。本発明においては、基礎になつている
ビニルアルコール単位の少なくとも70％はスルフ
エートエステル基を有している。エステル化度80
％以上、特に90％以上が有利である。 それぞれ必要なポリビニルスルフエート量は簡
単な前実験により容易に決めることができる。試
料溶液１容量あたりポリビニルスルフエート0.1
〜0.01重量％を添加するのが有利である。ポリビ
ニルスルフエートの添加を水１あたりポリビニ
ルスルフエート（PVS）約１〜20ｇの希釈水溶
液の形で行なうのが有利である。しかしながら、
試料溶液を十分に撹拌することができる場合は、
本発明を濃縮溶液で、又はPVSを固体の形で添
加して実施することもできる。しかしながら、一
般に試料溶液量は非常にわずかであるので、希釈
溶液の形で添加するのが有利である。例えば血清
200容量部に0.1〜１％PVS−溶液40容量部を加え
る。特に良好な結果は0.2〜0.5％の水溶液を、こ
の水溶液１に対して試料溶液５の容量比で加える
と得られる。 試料溶液にPVSの他にポリグリコールメチル
エーテル又はポリビニルピロリドンを加えるのが
有利である。この組み合わせを使用する場合、析
出は特に良好な再現性を有する。ポリグリコール
メチルエーテル又は／及びポリビニルピロリドン
を試料溶液に有利に５〜10容量％の量で加える。 本発明の方法において、二価のカチオンが測定
可能量存在しないということは重要である。通
常、二価のカチオンの血清中に存在する量は僅か
な痕跡量程度であり、この量では全く妨害は生じ
ないので、この要件は無視することができる。し
かしながら、二価のカチオン含量の並みはずれて
高い異常な試料の出現を全く除くことはできない
ので、前記の物質の他に多価カチオンのための錯
化剤を添加するのが有利である。このためには、
例えばエチレンジアミン四酢酸（EDTA）のよ
うなポリアミンアセテートが有利である。この種
の錯化剤を試料溶液中の濃度0.01〜0.001モル／
であるような量で使用するのが有利である。 本発明により析出したLDL−フラクシヨンの
評価は有利に、リポプロテインの公知の測定法を
使用することにより行なわれる。リポプロテイン
中に含有されるコレステリンはこのために公知の
方法により有利に測定される。例えばコレステリ
ンオキシダーゼでの酸化及び酸化により生じた
H2O2の測定により行なわれる。この測定の実施
は有利に、試料中の全コレステリン並びに沈殿上
澄中のコレステリンを測定し、この差からLDL
−量を推定するか又はLDL−沈殿を溶かし、こ
のようにして得られた溶液中でコレステリン測定
を実施することにより行なわれる。リポプロテイ
ンフラクシヨン中のコレステリン量は一定である
ので、測定コレステリン量はリポプロテイン量に
相当する。 PVSは有利にカリウム塩として使用されるが、
他の１価のカチオン、特にナトリウム、リチウム
及びアンモニウムを同様に使用することができ
る。 本発明により体液中のβ−リポプロテインフラ
クシヨンを測定するための試薬が得られ、これは
ポリビニルスルフエートを含有していることを特
徴とする。ポリビニルメチルエーテル及び／又は
ポリビニルピロリドンを付加的に含有するのが有
利である。もう１つの有利な実施形式によれば、
試薬は更に多価カチオン用の錯化剤を含有してお
り、特にポリアミンアセテートが有利である。 前記の有利な種類の典型的な試薬はそれぞれ血
清容量に対してポリビニルスルフエート0.1〜
0.01重量％、ポリグリコールメチルエーテル及
び／又はポリビニルピロリドン５〜10容量％並び
に濃度0.01〜0.001モルの錯化剤を含有している。 本発明による方法及びこれから得られる試薬は
特に容易さ及び確実さにおいて優れている。一般
に認められた、著しく煩雑な測定法と比較する
と、結果の優れた一致が得られる。次に実施例に
つき本発明を詳細に説明する： 例 １ (A) 沈殿試薬の製造 溶液、PVS／ポリエチレングリコールメチ
ルエーテル PVS溶液（Ｃ＝３ｇ／） 34ml ポリエチレングリコールメチルエーテル（分子
量190〜550） 16ml EDTA（0.01モル） 50ml 溶液、PVS／プラスドン（Plasdone） PVS溶液（Ｃ＝３ｇ／） 34ml H2O 16ml EDTA（0.01モル） 50ml プラスドン 、K29−32（ポリビニルピロリド
ン） 6.5ｇ (B) 沈殿
【表】
混合、15分間室温で放置、10000ｇで２分間
（又は1500ｇで15分間）遠心分離を行なう。遠
心分離後、VLDL−含量及び乳〓脂粒によりそ
れぞれ透明又は混濁の外観を有する上澄液を分
離し、CHOD−PAP−法でのコレステリン測
定のために使用する。CHOD−PAP−法はコ
レステリンオキシダーゼを用いるコレステリン
の酸化及び、この際生じたH2O2をフエノール
及び４−アミノアンチピリンと呈色反応させる
ことによる測光法による測定に基づく。 (C) コレステリン測定 波長：Hg546nｍ（470〜560nｍ） 分光光度計：500nｍ キユベツト：厚さ１cm 恒温保持温度：20〜25℃又は37℃試薬−空値
（RL）に対する測定 それぞれの測定例にとつて１つの試薬−空値で
十分である。
（又は1500ｇで15分間）遠心分離を行なう。遠
心分離後、VLDL−含量及び乳〓脂粒によりそ
れぞれ透明又は混濁の外観を有する上澄液を分
離し、CHOD−PAP−法でのコレステリン測
定のために使用する。CHOD−PAP−法はコ
レステリンオキシダーゼを用いるコレステリン
の酸化及び、この際生じたH2O2をフエノール
及び４−アミノアンチピリンと呈色反応させる
ことによる測光法による測定に基づく。 (C) コレステリン測定 波長：Hg546nｍ（470〜560nｍ） 分光光度計：500nｍ キユベツト：厚さ１cm 恒温保持温度：20〜25℃又は37℃試薬−空値
（RL）に対する測定 それぞれの測定例にとつて１つの試薬−空値で
十分である。
【表】
混合し、RL及び試料を20〜25℃で20分又は37
℃で12分間恒温保持する。１時間かけてRLに対
する試料の吸光度を測定する（Ｅ試料）。 比較例 LDLを参照例としてのフリーデワルドの方法
（Klin.Chem.第18巻、1972年、第499頁）により、
並びに例１の方法（ポリエチレングリコールメチ
ルエーテルを含有する場合と含有しない場合）に
より５回測定法で測定する。 ポリエチレングリコールメチルエーテルを含有
しない測定は例１と同様にして行なうか、この際
溶液はポリエチレングリコールメチルエーテル
を含有しない。 結果を第１表に示す：
℃で12分間恒温保持する。１時間かけてRLに対
する試料の吸光度を測定する（Ｅ試料）。 比較例 LDLを参照例としてのフリーデワルドの方法
（Klin.Chem.第18巻、1972年、第499頁）により、
並びに例１の方法（ポリエチレングリコールメチ
ルエーテルを含有する場合と含有しない場合）に
より５回測定法で測定する。 ポリエチレングリコールメチルエーテルを含有
しない測定は例１と同様にして行なうか、この際
溶液はポリエチレングリコールメチルエーテル
を含有しない。 結果を第１表に示す：
【表】
第１表はポリビニルスルフエート及びポリエチ
レングリコールメチルエーテルを添加する本発明
方法により、参照例の結果とほぼ同様な結果が得
られることを示す。ポリビニルスルフエートのみ
を添加する場合、ポリビニルスルフエートとポリ
エチレングリコールメチルエーテルとを添加する
場合より、参照例の結果からの差が僅かに大き
い。
レングリコールメチルエーテルを添加する本発明
方法により、参照例の結果とほぼ同様な結果が得
られることを示す。ポリビニルスルフエートのみ
を添加する場合、ポリビニルスルフエートとポリ
エチレングリコールメチルエーテルとを添加する
場合より、参照例の結果からの差が僅かに大き
い。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 試料に、カリウム、ナトリウム、リチウム及
びアンモニウムからなる群より選ばれた１価のカ
チオンを有し、かつ基礎になつているビニルアル
コール単位の少なくとも70％がスルフエート基を
有するポリビニルスルフエート0.1〜0.01重量／
容量％を添加することにより試料からβ−リポプ
ロテインフラクシヨン（LDL）を選択的に沈殿
させ、測定することを特徴とする体液中のβ−リ
ポプロテインフラクシヨンの測定法。 ２ コレステリン含量を沈殿中又は血清中及び上
澄液中で測定することによりLDL量を測定する
特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３ 試料に、カリウム、ナトリウム、リチウム及
びアンモニウムからなる群より選ばれた１価のカ
チオンを有し、かつ基礎になつているビニルアル
コール単位の少なくとも70％がスルフエート基を
有するポリビニルスルフエート0.1〜0.01重量／
容量％とポリグリコールメチルエーテル又はポリ
ビニルピロリドン５〜10容量％とを添加すること
により試料からβ−リポプロテインフラクシヨン
を選択的に沈殿させ、測定することを特徴とする
体液中のβ−リポプロテインフラクシヨンの測定
法。 ４ コレステリン含量を沈殿中又は血清中及び上
澄液中で測定することによりLDL量を測定する
特許請求の範囲第３項記載の方法。 ５ 多価カチオンのための錯化剤を更に添加する
特許請求の範囲第３項記載の方法。 ６ 錯化剤としてポリアミンアセテートを使用す
る特許請求の範囲第５項記載の方法。 ７ コレステリン含量を沈殿中又は血清中及び上
澄液中で測定することによりLDL量を測定する
特許請求の範囲第５項又は第６項記載の方法。
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|---|---|---|---|
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| JPS5845562A JPS5845562A (ja) | 1983-03-16 |
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| US4474887A (en) | 1984-10-02 |
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