JPH0249161A - 免疫クロマトグラフイー分析方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の背景 １）発明の分野 特定の化合物に対する天然の受容体または抗体を関心化
合物の存在の検定に使用する技術は急速に発展しつつあ
る免疫学的検定業務を創成してきた。特異的結合ペア（
ｓｂｐ）構成要素の相補性ペア、通常はリガントおよび
受容体（抗リガント）を包含する免疫学的ペアが各検定
に関与し、この場合ｓｂｐ構成要素の一つが検出可能シ
グナルを与える標識で標識されている。免疫学的検定方
法ではｓｂｐ構成要素の複合体中に結合したシグナル標
識と非結合シグナル標識の間にシグナル標識の分布を生
じる。結合および非結合シグナル標識間の判別は、非結
合シグナル標識から結合シグナル標識の物理的分離また
は結合および非結合シグナル標識間の検出可能シグナル
の転形の結果、可能になる。

多くの場合、免疫学的検定法は、臨床検査における広範
囲の関心化合物の定量的測定を指図するものであり、比
較約手の込んだ装置と気の抜けない技法を必要とする。

半定最的または定發的結果が得られ、検査技術によらず
たとえば家庭または開業医の診療室での測定が可能な免
疫学的検定法の商業的応用はそれほど広く行われていな
い。臨床検査室においても、未経験者により単純かつ迅
速にスクリーニング試験が実施できればかなりの経済性
が期待できる。

免疫学的検定法の開発に際しては、多くの考慮すべき事
項がある。その一つは、結合したシグナル標識と非結合
シグナル標識から生じる実測シグナル間の判別を可能に
することである。他の考慮すべぎ事項としては、関心化
合物の含有が疑われるサンプル中の内因性物質による妨
害を最小限にすることがある。さらに他の事項としては
、実測されるシグナルの検出、および関心濃度範囲にお
ける濃度間の判別が容易なことがある。他の考慮すべき
事項は、サンプル中の関心化合物の濃度である。他の因
子としては、試薬の調製の容易さ、サンプルおよび試薬
溶液の調製および測定に要求される正確さ、試薬の保存
安定性、プロトコールに必要な工程数、ならびに各工程
の実施に必要な熟練度Ｊ３よび正確さがある。したがっ
て、非熟練者による実施が可能な検定法、たとえば家庭
で、法医学的に、開業医による等の実施が可能な検定法
の開発に際しては、プロトコールの実行方法の変動によ
る実測結果への影響を最小限とし、各工程を実行するた
めの技法は単純なものとすることが必要になる。

一般に、サンプル中の希薄な被検物質の定量を可能にす
る免疫学的検定法の設計は難しく、これまで発表されて
きた方法は多数の工程と長時間を要するものである。

フロント分析（ｆｒｏｎｔａｌ　ａｎａｌｙｓｉｓ　；
またはエスケーバー分析）はクロマトグラフィーカラム
中の固体支持体上の活性基を定ｍする既知の方法である
（Ｃ，Ｒ，Ｌｏｗｅ　＆　Ｐ、　Ｄ、　Ｇ、　Ｄｅａｎ
著：アフィニティー・りＯＶトゲラフイー、Ｊｏｈｎ　
Ｗｉｌｅｙ　＆　５ｏｎｓＬｔｄ、、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒ
ｋ、　　１９７４　）　、フロント分析では、反応種の
既知濃度溶液をカラムに適用する。カラム流出液中の反
応種を検出してカラムの飽和に必要な容量を測定すると
くエスケーパー容Ｗ）、カラム上の活性基濃度の定量が
可能になる。

２）関連技術の説明 とくに液体サンプル中の物質を測定するための、サンプ
ルの特性を測定する試験デバイスは米国特許用４．０９
４，６４７号に開示されている。薄層クロマトグラフィ
ーデバイスおよびクロマトグラフィー試験を行う方法は
米国特許用４．３８４゜９５８号に開示されている。標
識抗体が固定化被検物質類縁体から追い出す免疫学的検
定法は米国特許用４．４３４．２３６号に記載されてい
る。

ミオグロビンを検出するデバイスおよび方法は米国特許
用４．１８９，３０４号に開示されている。

液体中に溶解された物質の分析用試験ストリップは米国
特許用４．４３８．０６７号に記載されている。液体サ
ンプル成分の存在の測定用多重層試験デバイスおよびこ
のようなデバイスの使用方法は、米国特許筒４，１６０
，００８号に記載されている。標識抗原による不溶性抗
体を用いた抗原の測定方法は日本特許出願公開公報５９
２５／７３号（１９７３年１月２５日）に開示されてい
る。

不均一免疫学的検定法における濃縮領域方法は米国特許
筒４．３６６．２４１号に開示されている。米国特許筒
４．１６８，１４６号には免疫学的検定試験ストリップ
が記載されている。米国特許筒３．９９０．８５０号お
よび第４．０５５゜３９４号には診断試験カードが記載
されている。

生物学的液体の定量分析のための自動化方法は、米国特
許筒４．３２７．０７３号に記載されている。色原体支
援免疫学的検定は、国際出願、ＰＣＴ／１Ｊｓ８３１０
１８８７号に開示されている。

免疫学的検定法における検出可能シグナルを産生ずる各
種技術に関しては、多種多様の特許および特許出願が広
範な文献を提供する。以下に挙げる例は、本発明におい
て応用できるこれらの技術の一部を単に例示するにすぎ
ない。以下、米国特許番号とそれに全般的記述がある標
識の種類を列記する。

米国特許筒３，６４６，３４６号、放射性標識；第３．
６５４．０９０号、第３，７９１．９３２号および第３
，８１７．８３８号、酵素標識：第３．９９６．３４５
号、蛍光物質−消光物質標識；第４，０６２，７３３号
、放射性標識；第４，０６７．９５９号、蛍光物質また
は酵素標識；第４゜１０４．０２９、化学発光ａｌ！識
；なラヒニ第４゜１６０．６４５号、非酵素触媒標識。

抗体領域を用いた電気泳動法については米国特許筒３，
９６６．８７９号、標識被検物質を最初に抗体を介して
固体支持体に結合させるＲＩＡについては米国特許筒４
．１２０．９４５号が参考になる。米国特許筒４．２３
３，４０２号は酵素ペア標識を、同第４．７２０．４５
０号は化学誘導蛍光標識を、同第４，２８７．３００号
は酵素陰イオン電荷標識を使用している。

１豆立１１ 本発明の方法は検定の実施に有用である。検定を実施す
るための本発明の一方法は、第１の吸水性構成要素領域
（「第１領域」）と成分を含有する液体メジウムの組合
せを提供することにより構成される。第１領域には、成
分と相互作用する試薬が非拡散性に結合されている。液
体メジウムとそれに含まれる成分の少なくとも部分が毛
細管作用によって第１領域のすべてを通過して第１領域
とは組成の異なる第２の吸水性構成要素領域（「第２領
域」）に移動する条件を採用する。成分が第２領域内へ
移動した距離またはメジウムおよび成分が第２領域内へ
移動した距離の差を測定する。上述の距離または差は、
液体メジウム中の成分の量または試薬の闇に相関する。

液体メジウム中の成分の４を定量するための本発明の他
の方法は、第１の吸水性構成要素領域（「第１領域］）
を、成分含有液体メジウムと接触させることからなる。

第１領域には、成分と相互作用する試薬が非拡散性に結
合されている。接触は、液体メジウムとそれに含まれる
成分の少なくとも部分が毛細管作用によって第１領域の
すべてを通過し第１領域とは組成の異なる第２の吸水性
構成要素領域（「第２領域」）に移動する条件下に行わ
れる。成分が第２領域内に移動した距離またはメジウム
および成分が第２領域内へ移動した距離の差を測定する
。その距離または差は、液体メジウム中の成分の量、ま
たは試薬の邑に相関する。

検定を実施するための本発明の他の方法は、被検物質の
溶液と第１の吸水性構成要素を組合せることからなり、
第１の吸水性構成要素には、被検物質と反応可能な試薬
が非拡散性に結合しているかまたは結合できる。成分を
含有する液体メジウムを第１の吸水性構成要素と合する
と、成分は試薬と相互作用する。第１の吸水性構成要素
は、それとは異なる組成の第２の吸水性構成要素と液体
授受関係にあるか、または第２の吸水性構成要素の空間
的に分離された部分である。条件は、液体メジウムと成
分が最初に第１の吸水性構成要素を、ついで第２の吸水
性構成要素の少なくとも部分を毛細管作用によって通過
するように選択される。

第２の吸水性構成要素上で、成分の濃度差によって定め
られる境界、または成分の反応生成物が確定される。境
界の位置は、溶液中の被検物質の量または第１の吸水性
構成要素上の試薬のけに相関する。

検定を行う他の方法は、第２の液体メジウム中、（１）
第１の吸水性構成要素と（２１ｉ＃検物質の組合せを提
供することにより構成され、被検物質に対する試薬は上
記メジウム中または、上記第１の吸水性構成要素上に存
在させる。第１の吸水性構成要素は、吸収性構成要素と
液体授受関係にある。条件は、第１のメジウムが第１の
吸水性構成要素と少なくとも吸収性構成要素の部分を毛
細管作用によって貫流し、被検物質は吸水性構成要素に
非拡散性に結合されるように選択する。上記吸水性構成
要素と上記吸収構成要素の間の液体授受関係は終結させ
る。第２の液体メジウム中、第１の吸水性構成要素およ
び、試薬と相互作用する成分からなる他の組合せを提供
し、第１の吸水性構成要素は第２の吸水性構成要素と液
体授受関係におく。この組合せは、第２のメジウムが第
１の吸水性構成要素と少なくとも第２の吸水性構成要素
の部分を毛細管作用によって通過するような条件で提供
される。

ただし、第１の吸水性構成要素は、吸収性構成要素およ
び第２の吸水性構成要素と、実質的に異なる時期に液体
授受関係にある。第２の吸水性構成要素上に境界が決定
され、境界の位置は第１のメジウム中の被検物質の量、
または第２の液体メジウム中の試薬の聞もしくは成分の
ｍと相関する。

本発明の他の方法は、被検物質の含有が疑われるサンプ
ル中の被検物質の存在の検定に有用である。本発明の方
法の一態様においては、第１の吸水性構成要素の部分を
、特異的結合ペア（ｓｂｐ）構成要素のような試薬を含
有する第１の液体、通常は水性のメジウムまたは溶液と
接触させて、試薬を第１の吸水性構成２！索に結合させ
る。第１の吸水性構成要素は吸収性構成要素と液体授受
関係に置くことができる。接触は、第１のメジウムが第
１の吸水性構成要素および少なくとも吸水性構成要素の
部分を毛細管作用により通過または貫流するような条件
下に行われる。次に、第１の吸水性構成要素を第２の吸
水性構成要素と液体授受関係に置く。第１の吸水性構成
要素の部分を、第２の液体、通常は水性メジウムと、第
２の水性メジウムが毛細管作用により第１の吸水性構成
要素および少なくとも第２の吸水性構成要素の部分を通
過するような条件下に接触させる。この方法により、第
２のメジウム中の成分は、第１のメジウム中の被検物質
の存在に関連して第２の吸水性構成要素によって吸着さ
れ、好ましくは第２の吸水性構成要素に非拡散的に結合
される。第２の吸水性構成要素の少なくとも部分上にお
ける成分の存在が測定され、これは被検物質の存在を指
示する。

本発明の他の局面においては、第１の液体、通常水性の
メジウムまたは溶液中の組合せを提供する。この組合せ
は、（１）第１の吸水性構成要素の少なくとも部分、第
１の試薬たとえばｓｂｐ構成要素が非拡散性に結合して
いる第１の吸水性構成要素の少なくとも部分、および（
り被検物質の含有が疑ねれるサンプルを包含する。被検
物質が第１の試薬に結合可能でない場合は、被検物質と
第１の試薬に結合可能な第２の試薬をメジウム中または
第１の吸水性構成要素上に存在させる。第１の吸水性構
成要素は吸収性構成要素と液体授受関係にある。条件は
、第１のメジウムまたは溶液が、第１の吸水性構成要素
および少なくとも吸収性構成要素の部分を毛細管作用に
より通過または貫流するように選択される。ついで第１
の吸水性構成要素を第２の吸水性構成要素と液体授受関
係に置く。

他の組合せを、第２の液体、通常は水性のメジウム中に
提供する。この組合せは、第１の吸水性構成要素の少な
くとも部分と、第１のメジウム中の被検物質の存在に関
連して第１または第２の試薬に結合可能な成分とを包含
する。第２の吸水性構成要素は好ましくは、その少なく
とも部分に、成分に対する特異的結合パートナ−が非拡
散性に結合されている。この組合せは、第２の液体メジ
ウムが第１の吸水性構成要素の少なくとも部分および第
２の吸水性構成要素の少なくとも部分を毛細管作用によ
って通過するような条件下に提供される。成分が第２の
吸水性構成要素を通過する距離を測定し、これはサンプ
ル中の被検物質の量に相関する。

本発明の他の局面においては、第１の吸水性構成要素と
吸収性構成要素の間の液体授受関係は、第１の吸水性構
成要素を第２の吸水性構成要素に接触させる前に終結さ
せる。

本発明の他の態様においては、第２の吸水性構成要素は
、免疫クロマトグラフ構成要素のようなりロマトグラフ
構成要素であり、境界はクロマトグラフ構成要素上に決
定される。境界の位置は第１のメジウム中の被検物質の
量または液体メジウム中の成分の囚もしくは第１の吸水
性構成要素上の試薬の量に相関する。

本発明の他の局面は、第１の液体、通常は水性メジウム
中、（１）少なくともその部分に第１の特異的結合ペア
（ｓｂｐ　）　ｍｆＩ２要素が非拡散性に結合した吸水
性構成要素の部分と（２）被検物質の含有が疑われるサ
ンプルの組合せを提供する被検物質の検定の実施方法に
関する。第１の試薬は、被検物質と結合可能な第２のｓ
ｂｐ構成要素およびメジウム中または吸水性構成要素上
に存在する第１のｓｂｐ構成要素と相補性の第３のｓｂ
ｐ構成要素からなる抱合体を包含することができる。吸
水性構成要素は吸収性構成要素と液体授受関係にある。

第１のメジウムは吸水性構成要素および少なくとも吸収
性構成要素の部分を毛細管作用によって通過し、抱合体
は吸水性構成要素に非拡散性に結合する。

吸水性構成要素と吸収性構成要素の間の液体授受関係を
終結させる。第２の液体、通常は水性のメジウム中に、
第１の吸水性構成要素と成分を包含する他の組合せを提
供する。成分は、シグナル生成システムの構成要素に結
合したまたは結合することが可能な被検物質類縁体から
なる。吸水性構成要素は、成分に対する結合パートナ−
が非拡散性に結合した免疫クロマトグラフ構成要素と液
体授受関係にある。使用された条件下に、第２のメジウ
ムは毛細管作用によって吸水性構成要素および少なくと
も免疫クロマトグラフ構成要素の部分を通過する。吸水
性構成要素は、吸収性構成要素および免疫クロマトグラ
フ構成２！！素と実質的に異なる時期に液体授受関係に
ある。第１のメジウム中の被検物質の量にその位置が相
関する免疫クロマトグラフ構成要素上の境界を決定する
。

本発明の他の局面は、第１の液体、通常は水性のメジウ
ム中（１）第１の試薬たとえば被検物質類縁体が非拡散
性に結合した第１の吸水性構成要素の部分と（２）被検
物質の含有が疑われるυンプルの組合せを提供すること
による被検物質の検定の実施方法に関する。上記被検物
質に結合可能な第２の試薬が溶液中または吸水性構成要
素上に存在する。

吸水性構成要素は吸収性構成要素と液体授受関係に置く
。第１のメジウムまたは溶液は毛細管作用によって吸水
性構成要素および少なくとも吸収性構成要素の部分を通
過または員流し、第２の試薬は、第１のメジウムまたは
溶液中における被検物質の岳に逆比例して吸水性構成要
素に非拡散性に結合する。吸水性構成要素と吸収性構成
要素の間の液体授受関係を終結さぼる。第２の液体、通
常は水性のメジウム中、上記吸水性構成要素の部分と成
分を包含する他の組合せを提供する。この成分は、シグ
ナル生成システムの構成要素を包含するかまたはそれに
結合することが可能であり、また吸水性構成要素に結合
している第１または第２の試薬に結合することができる
。吸水性構成要素は、成分に対する特異的結合パートナ
−が非拡散性に結合している免疫クロマトグラフ構成要
素と液体授受関係にある。使用した条件下に、第２のメ
ジウムが吸水性構成要素および少なくとも免疫クロマト
グラフ構成要素の部分を毛細管作用によって通過する。

吸水性構成要素は、吸収性構成要素および免疫クロマト
グラフ構成要素と実質的に異なる時期に液体授受関係に
置かれる。第１のメジウム中の被検物質の鰻がその位置
に相関する免疫クロマトグラフ構成要素上の境界を決定
する。

他の態様においては、（１）被検物質に対する抗体が非
拡散性に結合した吸水性構成要素、および（２）被検物
質の含有が疑われる第１の液体、通常は水性のメジウム
または溶液からなる組合せが提供される。吸水性構成要
素は吸収性構成要素と液体授受関係に置かれる。条件は
、第１のメジウムが毛細管作用によって吸水性構成要素
および少なくとも吸収性構成要素の部分を通過するよう
に選択される。上記吸水性構成要素と吸収性構成要素の
間の液体授受関係を終結させる。第２の液体、通常は水
性のメジウム中、吸水性構成要素と成分を包含する他の
組合せを提供する。この成分はシグナル生成システムの
構成要素に結合しているかまたは結合可能であり、また
上記被検物質に対する抗体に結合できる。吸水性構成要
素は、成分に対する特異的結合パートナ−が非拡散性に
結合した免疫クロマトグラフ構成要素と液体授受関係に
置く。

この方法の条件下で、第２のメジウムは吸水性構成要素
および少なくとも免疫クロマトグラフ構成要素を毛ｌｌ
Ｉ管作用によって通過する。ただし、吸水性構成要素は
、吸収性構成要素および免疫クロマトグラフ構成要素と
実質的に異なる時期に液体授受関係にある。免疫クロマ
トグラフ構成要素上に境界が決定される。この境界の位
置は、第１のメジウムもしくは溶液中の被検物質の石、
試薬の母、または第２のメジウム中の成分の量に相関す
る。

本発明の他の局面は、ジオキサンの検定を行う方法に関
する。この方法は、吸水性ストリップの未ｒａ部から遠
位領域に分子量５００未満の有機分子に対する抗体（Ａ
ｂ１）が非拡散的に結合しているそのストリップの末端
部とジゴキシンの含有が疑われる第１の水性メジウムま
たは溶液と接触させることからなる。ジゴキシンに対す
る抗体が有機分子に抱合または結合してなる抱合体を第
１のメジウム中または吸水性ストリップ上に存在させる
。選択された条件下に、第１のメジウムまたは溶液は毛
細管作用によって吸水性ストリップと、そのストリップ
と液体授受関係にある吸収性構成要素の少なくとも一部
を通過し、抱合体は非拡散性にＡｂｌに結合し、ジゴキ
シンが存在すれば抱合体に結合する。吸水性構成要素と
吸収性構成要素の間の液体授受関係を終結させる。第２
の液体、通常は水性メジウム中、吸水性ストリップの末
端部および酵素に結合したジゴキシン類縁体からなる成
分で構成される組合せを提供する。吸水性ストリップは
ジゴキシンに対する抗体が非拡散性に結合した免疫クロ
マトグラフストリップと液体授受関係に置く。第２のメ
ジウムは吸水性ストリップと少なくとも免疫りＯマドグ
ラフ構成要素の部分を毛細管作用によって通過させる。

ただし、ストリップは、吸収性構成要素および免疫クロ
マトグラフストリップと実質的に異なる時期に液体授受
関係に置く。この場合も、上記サンプル中の被検物質の
量がその位置に相関する免疫クロマトグラフストリップ
上の境界を決定する。

ジゴキシンの検定の他の態様においては、ジゴキシン類
縁体が非拡散性に結合された吸水性ストリップの末端部
を、ジゴキシンの含有が疑われるサンプルを含む第１の
液体、通常は水性のメジウムまたは溶液と接触させる。

ジゴキシンに対する抗体（Ａｂ、）は第１のメジウム中
または吸水性ストリップ上に存在させる。吸水性ストリ
ップは吸収性構成要素と液体授受関係に置き、第１のメ
ジウムが毛Ｉｌ管作用によって吸水性構成要素および少
なくとも吸収性構成要素の部分を通過し、サンプル中に
ジゴキシンが存在する場合にはジゴキシン類縁体に抗体
Ａｂ、が非拡散性に結合するような条件が選択される。

吸水性ストリップと吸収性構成要素の間の液体授受関係
を終結させる。第２の液体、通常は水性のメジウム中、
吸水性ストリップの末端部および酵素に結合したＡｂｏ
に対する抗体からなる抱合体を包含する組合せを提供す
る。吸水性ストリップは、Ａｂｏに対する抗体の受容体
が非拡散性に結合した免疫クロマトグラフストリップと
液体授受関係に置かれる。検定の条件下に、第２のメジ
ウムは吸水性ストリップと少なくとも免疫クロマトグラ
フストリップの部分を毛細管作用によって通過する。吸
水性ストリップは吸収性構成要素および免疫りＯマドグ
ラフストリップと、実質的に異なる時期に液体授受関係
に置かれる。境界が免疫クロマトグラフストリップ上に
決定される。境界の位置は第１のメジウム中の被検物質
の最に相関する。

本発明の方法の他の態様においては、ジゴキシンに対す
る抗体が非拡散性に結合した吸水性構成要素の末端部を
、ジゴキシンの含有が疑われるサンプルを含む第１の水
性メジウムまたは溶液と接触させる。吸水性ストリップ
は吸収性構成要素と液体授受関係に置き、条件は第１の
メジウムが吸水性構成要素および少なくとも吸収性構成
要素の部分を毛細管作用によって通過するように選択さ
れる。吸水性構成要素と吸収性構成要素の間の液体授受
関係を終結させる。第２の液体、通常は水性のメジウム
中、吸水性ストリップの末端部と、酵素に結合したジゴ
キシン類縁体からなる抱合体との組合せを形成させる。

吸水性ストリップは、抱合体に対する受容体が非拡散性
に結合した免疫クロマトグラフストリップと液体授受関
係に置く。

第２のメジウムは毛細管作用によって吸水性ストリップ
と少なくとも免疫クロマトグラフストリップの部分を通
過する。吸水性ストリップは、吸収性構成要素および免
疫クロマトグラフストリップと実質的に異なる時期に液
体授受関係に置かれる。

この場合も、記第１のメジウム中の被検物質の爵がその
位置に相関する免疫クロマトグラフストリップ上の境界
を決定する。

本発明はさらに、液体メジウム中の被検物質、試薬また
は成分の存在または存在量を分析するためのデバイスを
包含する。デバイスは第１の吸水性構成要素、吸収性構
成要素、および第２の吸水性構成要素からなる。吸水性
構成要素は、吸収性構成要素および第２の吸水性構成要
素と交互に液体授受関係に置くことが可能である。本発
明の方法を実施するためのキットも本発明に包含される
。

」乱匹星工皇ｌＪ 第１図は本発明によるデバイスを模式的に示した図であ
る。

特定の態様の説明 上述のように、本発明は、液体メジウム中の成分、試薬
、および／または被検物質の含有が疑われるサンプル中
の被検物質の、予め定められた最小検出可能量またはそ
れ以上の存在または存在量を決定するための方法、デバ
イスおよびキットを目的とするものである。本発明はと
くに、比較的希薄なメジウム中成分、表面上試薬または
サンプル中被検物質の定量に応用可能である。本発明は
、サンプル干渉を回避する手段を提供し、従来技術に比
べて感度が高く、迅速な方法を与える。本発明はまた、
サンプル中の被検物質分子数と最終的にシグナルを形成
する分子数の間の高い平衡を得る手段を提供する。

本発明の特定の態様についてさらに説明を進める前に、
多くの用語については以下に定義する。

被検物質−測定される化合物または組成物であって、抗
体またはキレート剤のような結合構成要素に特異的に結
合できる。通常は、抗原もしくは薬剤、または酸化もし
くは還元が可能な分子もしくはイオンのような化学的に
反応性の組成物である。

抗原および薬剤被検物質の正確な性質はその多数の例と
ともに、米国特許第４，２９９．９１６号（Ｌｉｔｓａ
ｎら）のとくに第１６欄〜第２３ａ！、および米国特許
第４，２７５．１４９号第１７欄および第１８１１１に
開示されている。

被検物質にはリガントおよび受容体が包含され、これら
は単一の結合部位を有するか（１価）または多数の結合
部位を有するかく多価）によって分類される。多価被検
物質は、通常、ポリ（アミノ酸）、すなわちポリペプチ
ドおよびタンパク質、多糖、核酸、ならびにそれらの配
合物である。このような配合物または集合体は、細菌、
ウィルス、染色体、遺伝子、ミトコンドリア、核、細胞
膜等が包含される。

多種類のタンパク質が、類似の構造的特徴を有するタン
パク質、特定の生物学的機能を有するタンパク質、特定
の微生物とくに疾患誘発微生物に関連するタンパク質等
、共通の特徴をもつ群として考慮することができる。

単一エピトープをもつリガント被検物質は一般に分子量
的１００〜２，０００、通常は分子１１２５〜１，００
０である。興味ある被検物質には薬剤、代謝物、有害生
物殺滅剤、汚染物質等が包含される。闘味ある薬剤には
アルカロイドが包含される。アルカロイドとしては、モ
ルフイン、コデイン、ヘロイン、デキストロメトロファ
ン、それらのｙｇ誘導体よび代謝物を含むモルフインア
ルカロイド：コカインおよびペンゾイルエコゴニン、そ
れらの誘導体および代謝物を含むコカインアルカＯイド
：リゼルグ酸ジエチルアミドを含む変角アルカロイド；
ステロイドアルカロイド；イミナゾイルアルカロイド：
キナゾリンアル力ロイド；イソキノリンアルカロイド；
キニンおよびキニジンを含むキノリンアルカロイド：ジ
テルペンアルカロイド ができる。

次の薬剤群には、エストロゲン類、アンドロゲン類、ア
ンドレオコーチカルステロイド類、胆汁酸類、ジゴキシ
ンおよびジゴキシゲニンを含む強心性グリコシドとアグ
リコン類、サポニン類およびサルゲニン類、それらの誘
導体および代謝物が包含される。また、ステロイド模倣
物質たとえばジエチルスチルベストロールも包含される
。

次の薬剤群としては５ないし６員環のラクタムがあり、
バルビッール酸類たとえばフエノバルビタールおよびセ
コパルごタール、ジフェニルヒダントイン、プリミドン
、エトスキシミドならびにそれらの代謝物が包含される
。

次の薬剤群としてはアルキルが２〜３個の炭素原子を有
するアミノアルキルベンゼンがあり、アンフェタミン類
、エフェドリン、Ｌ−ドーパ、エピネフリン、ナルセイ
ン、パバベリンおよびそれらの代謝物を含むカテコール
アミン類が包含される。

次の薬剤群としてはベンズ箕項環類があり、オキサゼパ
ム、クロルプロマジン、テグレトール、イミブラミン、
それらのＸｌｆｓ体および代謝物が包含され、異項環は
アゼピン、ジアゼピンおよびフェノチアジンである。

次の薬剤群としては、テオフィリン、カフェイン、それ
らの代謝物および誘導体を包含するプリン類がある。

次の薬剤群としては、カンナビノールおよびテトラヒド
ロカンナビノールを包含するマリファナから誘導される
薬剤がある。

次の薬剤群には、ビタミンＡ．ＢたとえばＢ１２。

Ｃ．Ｄ，Ｅおよびに，葉酸ならびにチアミンのようなビ
タミン類が包含される。

次の薬剤群としては、ヒドロキシル１．ｔ５よび不飽和
結合の数および位置が異なるブロスタグランジン類があ
る。

次の薬剤群としては抗生物質があり、ペニシリン、クロ
ロマイセチン、アクチノマイセヂン、テラマイシン、テ
ラマイシン、それらの代謝物および誘導体が包含される
。

次の薬剤群としてはヌクレオ′シトおよびヌクレオチド
があり、ＡＴＰ，ＮＡＤ．ＦＭＮ．アデノシン、グアノ
シン、チミジンおよびシチジン、それらの適当な糖およ
びリン酸置換体が包含される。

次の薬剤群としては雑多な個別の薬剤、たとえばメサト
ン、メプロバメート、セロトニン、メペリジン、アミト
リブチリン、ノルトリブチリン、リドカイン、プロ力イ
ンアミド、アセチルリブｌコカインアミド、プロプラノ
ロール、グリセオフルビン、パルプロ酸、ブチロフェノ
ン類、抗ヒスタミン剤、抗コリン剤たとえばアトロビン
、それらの代謝物および誘導体がある。

疾患状態に関連した代謝物には、スペルミン、ガラクト
ース、フェニルピルビン酸、およびボルノイリンＩ型が
包含される。

次の薬剤群としてはアミノグリコシド類、たとえばゲン
タマイシン、カナマイシン、トブラマイシンおよびアミ
カシンがある。

興味ある有害生物殺滅剤には、ポリハロゲン化ビフェニ
ル類、リン酸エステル類、チオホスフェート類、カルバ
メート類、ポリハロゲン化スルフェンアミド類、それら
の代謝物および誘導体がある。

受容体被検物質の場合は、分子量は一般に１０。

０００から２×１０８の範囲、通常１０，０００から１
０６である。免疫グロブリン、Ｉ　ｇＡ。

ＩｑＧ．ＩａＥおよびＩＱＭでは、分子量は一般に約１
６．０００から約１０６まで変動する。酵素では分子量
は一般に約１０，０００〜１．００ｏ、ｏｏｏの範囲で
ある。天然の受容体では分子量は広範囲に変動し、一般
には少なくとも約２５゜０００で、１０６またはそれ以
上のこともある。

このような物質としては、アビジン、ＤＮＡ。

ｒ（ＮＡ、サイロキシン結合グロブリン、サイロキシン
結合プレアルブミン、トランスコルチン等が挙げられる
。

特異的結合ペア構成要素（ｓｂｐ構成要素）−表面上ま
たは空洞内に、他分子と特異的に結合し、他分子の特定
の空間的および極性的構成と相補性であると定義される
領域をもつ２種の異種分子の一方。特異的結合ペア構成
要素はリガントおよび受容体（アンチリガント）とも呼
ばれる。これらは通常、抗原−抗体のような免疫学的ペ
アの構成要素であるが、他の特異的結合ペア、たとえば
ビオチン−アビジンホルモン−ホルモン受容体、核酸二
重鎖、ＩｑＧ−プロティンＡ、ＤＮＡ−ＤＮＡ、ＤＮＡ
−ＲＮＡ等は免疫学的ペアではないが、この定義に包含
される。被検物質はｓｂｐ構成要素であってよく、通常
ｓｂｐ構成要素である。

リガント−受容体が天然に存在するかまたは製造できる
任意の有機化合物 受容体くアンチリガント）−分子の特定の空間的および
極性的構成を認識できる任意の化合物または組成物、た
とえばエピトープまたは抗原決定部位である。受容体の
例には、天然の受容体たとえばナイロキシン結合グロブ
リン、抗体、酵素、Ｆａｂフラグメント、レクチン、核
酸、プロティンＡ、補体成分量１ｑ等がある。

標ｇｌ　ｓｂｐ構成要素−一般に電気化学的検出または
電磁放射線の吸収もしくは発光が可能な標識、触媒、多
くの場合酵素が結合したｓｂｐ構成要素である。標識ｓ
ｂｐ構成要素は一般にシグナル生成システムの構成要素
である。

抗体−表面上または空洞内に、他分子と特異的に結合し
、他分子の特定の空間的および極性的構成と相補性であ
ると定義される領域を有する免疫グロブリンまたはその
誘導体もしくはフラグメントである。抗体はモノクロー
ナル抗体でもポリクローナル抗体でもよく、本技術分野
でよく知られた方法、たとえば、宿主の免疫感作ついで
血清の収集またはハイブリッド細胞系技術によって製造
できる。

被検物質に対する抗体−被検物質に対して特異的な抗体 類縁被検物質−３Ｌｌ＋）構成要素、通常は受容体また
は抗体への結合において被検物質と競合できる修飾被検
物質または被検物質類縁体もしくは代替物。修飾は、標
識ｓｂｐ構成要素を提供するため被検物質類縁体を標識
に結合する手段を与える。被検物質類縁体は通常、必ず
しも必須ではないが、少なくとも被検物質類縁体をハブ
または標識に連絡させる結合で１個の水素が置換されて
いる点で被検物質とは胃なる。被検物質代替物の後は、
被検物質に対する抗体を結合する能力をもつ化合物を意
味する。すなわち、被検物質代替物は、被検物質に対す
る抗体と被検物質と同じ様式で結合できる。一方、代替
物はたとえば、被検物質に対する抗体のイディオタイプ
に向けられた抗体であってもよい。

吸水性構成要素−孔径少なくとも０．１μ、好ましくは
少なくとも１．０μで、毛細管作用によって水性メジウ
ムが貫流または通過できる多孔性物質である。このよう
な物質は一般に親水性であるか親水性とすることが可能
で、セルロース性物質またはセルロースから誘導される
物質、たとえば濾紙、クロマトグラフ用濾紙等の！ｌ雑
含有紙であることが好ましいが、無機粉末たとえばシリ
カ、硫酸マグネシウムおよびアルミナ、その他の天然ポ
リマー材料および合成または改良天然ポリマーたとえば
ニトロセルロース、酢Ｉｌｌルロース、ポリ（塩化ビニ
ル）、ポリアクリルアミド、架橋デキストラン、アガロ
ース、ポリアクリレート等の単独または伯の物質との結
合物、セラミック材料等も使用できる。吸水素構成要素
は支持体に付着させてもよい。一方、吸水性構成要素は
それ自体が支持体となるものでらよい。吸水性構成要素
は多官能性であってもよく、また受容体、抗体、キレー
ト剤、酸化剤、還元剤等の試薬との共有結合によって多
官能性とすることができてもよい。さらにシグナル生成
シスチルの部分を形成する他の化合物と結合させること
ができるものであってもよい。

吸水性材料への受容体リガントおよび検出剤の結合は、
文献で一般に利用されているよく知られた方法で行うこ
とができる［たとえば［固定化酵素Ｊ　　（Ｉｍｍｏｂ
ｉｌｉｚｅｄ　ＥｎｚｙＩｌｅｓ　）　、Ｉｃｈｉｒｏ
　Ｃｈｉｂａｔａ著、Ｈａｌｓｔｅｄ　Ｐｒｅｓｓ、　
Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　　（１９７８）およびＣｕａｔｒｅ
ｃａｓａｓ、　Ｊ、　Ｂｉｏｌ　　Ｃｈｅｍ、、　　２
４５　：　３０５９　（１９７０）参照］。

吸水性構成要素を形作る吸水性物質片は、ストリップに
切断した紙片のように単一構造でもよく、また、たとえ
ば７４層クロマトグラフィーの場合にみられるように支
持体らしくは固体表面に数個のストリップもしくは粒子
状物質を結合させ、吸収パッドを一体化部分としてもし
くは液体接触で設けてもよい。吸水性材料は液体授受関
係にあり、好ましくは支持体に結合された数個の区分か
ら構成されていてもよい。吸水性構成要素は、レーンを
有するかまたはレーン編成を導くスポツティングが可能
で、各レーンにおいて別個の検定ができるシートであっ
てもよい。

吸水性構成要素は、毛細管作用による液体メジウムの少
なくとも１方向への貫流または通過が可能であれば、矩
形、円形、卵形、三角形または他の任意の形状とするこ
とができる。卵形または円形片でその中心を試験溶液と
接触させる場合には、他方向への通過を生じてもよい。

しかしながら、多くの場合は少なくとも１方向への通過
が考慮される。以下の説明においては、吸水性物質のス
トリップについて例示するが、本発明はこれに限定され
るものではない。

支持体が望ましい場合または必要な場合の吸水性構成要
素の支持体は、通常、水不溶性、非多孔性、剛性で、通
常は吸水性構成要素と局長同幅であるが、それより長く
することも短くすることらできる。支持体が吸水性構成
要素の毛細管作用を妨害したり、検定成分を非特異的に
結合したり、またシグナル産生システムを妨害すること
がない限り、天然および合成両者の広範囲の右Ｉおよび
無機化合物、ならびにそれらの配合物を使用することが
できる。ポリマーの例には、ポリエチレン、ポリプロピ
レン、ポリ（４−メチルブテン）、ポリスチレン、ポリ
メタクリレート、ポリ（エチレンデトラフタレート）、
ナイロン、ポリ（酪酸ビニル）、ガラス、セラミック、
金属等が包含される。

吸収性構成要素−任意の多孔性、親水性吸水性物質、た
とえばＰｏｒｅｘＯ等のような多孔性ポリマ、紙、スポ
ンジ、フェルト等、液体を吸収できる物質が、本発明の
方法に使用される。吸収性構成要素には複数個の機能を
もつ。第１の機能は、第１の吸水性構成要素によって吸
収された液体の貯蔵または収納領域としての役割である
。第２の機能は必ずしも必須ではないが、第１の吸水性
構成要素を通過する液体の速度を制ｔｉｌｌする役割で
ある。吸収性構成要素が、寸法が小さいかまたは第１の
吸水性構成要素と別の材料でできている場合には、液体
が第１の吸水性構成要素を通過する速度を制御するよう
に作用させることができる。不規則な広がりをもたせる
ことにより、サンプルまたは試ｉ溶液の吸収に依存して
異なる速度を与えるように作用させることもできる。

吸収性構成要素の他の機能として吸収された液体ｍを測
定させることもできる。吸収性構成要素は一定容量の液
体を取り込むことができるものであることが好ましい。

第１の吸水性構成要素から吸収性構成要素に沿って連続
性の勾配を設けることにより、液体の＠線が所定の位置
に来て、メジウムからデバイスと取り出す時期を決定す
ることができる。また、液体の前線に溶解または接触し
て着色する染料を配置して、デバイスを取り出づべき時
期の明瞭なシグナルを設けることもできる。

たとえば、ｐｌ＋指示薬が使用できる。液体前線の存在
を明瞭に指示する任意の方法が使用できる。

ストリップ形態では、吸収性構成要素の長さは一般に少
なくとも約１．５ｃｍ、通常は２　ｃｔｔ＋　、約３０
ｃｔｓ以下、通常は約２０Ｃ１１以下である。幅は約０
．１ｓｙから約３ｃＩｉまで変動させることができる。

これらの寸法は、主として、吸収される溶液の割合およ
び吊のυ制御、取扱い−Ｆの便宜および溶媒前線の１！
察を容易にするためのものである。厚さは一般に約０．
１ｍ＋から５曙２通常は約０．５ｓｍから３ｓである。

パッド形態の場合、吸水性構成要素は一般に、厚さ０．
５〜１０ｍ、面ｆ１２５〜１５０／Ｗ２とする。

吸収性構成要素は、便利には透明なまたは部分的にもし
くは場合により完全に不透明な封入体の保護ケース中に
部分的にまたは完全に封入することもできる。吸収性構
成要素はサンプル溶液と直接接触してはならない。通常
は、被検物質を含む溶液の最小限または通常は特定の容
けが第１の吸水性構成要素を貫通することが必要である
。これは吸収性構成要素と検定サンプル溶液の接触を回
避することによって最も好都合に達成される。

採用された特定のプロトコールおよびデバイスの構成に
より、封入体は除去可能でも除去不能でもよく、吸収性
構成要素のみを封入してｂさらに第１および第２の吸水
性構成要素を封入してもよく、１個もしくは２個以上の
窓部を設けてもよく、また通常は、吸水性構成要素を機
械的に保護し、検定の実施を妨害しない丈夫な、不活性
の、非透過性材料で作られる。通常は封入体内に空気が
捕集されないように通気孔を設ける。

標識−標識は、シグナルの生成に必要なｓｂｐ構成要素
に結合した任意の分子である。本発明においては、標識
は不活性で単にシグナル生成手段の構成要素の結合部位
として作用するものでもよく、またそれ自体検出可能な
シグナルを生成しても、シグナル生成手段と協同して検
出可能なシグナルを生成してもよい。標識は同位元素で
も非同位元素でもよいが、非同位元素であることが好ま
しい。

しかしながら、写真フィルムによるオートラジオグラフ
検出を用いる同位元素標識は高感度の達成に好ましい。

シグナル生成手段−標識と相互作用して検出可能シグナ
ルを生成できる手段。このような手段には、たとえば、
電磁放射線、熱、化学試薬等が包含される。化学試薬を
使用する場合、一部の化学試薬は現像溶液の部分として
包含させることができる。化学試薬には、基質、補酵素
、エンハンサ、第２の酵素、アクティベーター、補因子
、インヒビター、スカベンジャー、金属イオン、シグナ
ル発生物質の結合に必要な特異的結合物質等が包含され
る。補ｌ１ｉｙ素、酵素産生物と反応する物質、他の酵
素および触媒等、一部の化学試薬はストリップに結合さ
せることができる。

シグナル生成システム−シグナル生成システムは１種ま
たは２種以上の成分を有してもよい。シグナル生成シス
テムは、標識および標識と相互作用してシグナルを生成
できるシグナル生成手段を含む、測定可能シグナルの生
成に必要な試薬のすべてを包含する。

シグナル生成システムは、通常は電磁放射線の測定によ
り、望ましくは視覚的検査により、外的手段で検出でき
るシグナルを提供する。多くの場合、シグナル生成シス
テムは、発色団物質がＰＩＩｆ索的に、紫外もしくは可
視領域の光を吸収する染料へ変換する発色団物質と酵素
、リン光体もしくは蛍光体、またはキレート剤、酸化還
元指示薬、ｐＨ指示薬等のような発色団指示薬を包含す
る。

シグナル生成システムには、標識として少なくとも１種
の触媒、通常は酵素、および少なくとも１種の基質を包
含し、２種または３種以上の触媒と複数個の基質を含ん
でいてもよく、また１つの酵素の基質が他の酵素の生成
物である酵素の組合せを含んでいてもよい。シグナル生
成システムの操作により、サンプル中の被検物質の存在
または存在量に関連した検出可能シグナルを与える生成
物が生成する。

２種の触媒は、１種の酵素と１種の非酵素触媒または２
種の酵素の組合せとして用いられ、２種の触媒は一方の
生成物が他方の基質の関係にある。

このシステムにおいては、これらの触媒によって接触さ
れる連続的変化を受けて、検出可能なシグナルの生成に
関与する化合物を生じる唯一の基質が必要である。しか
しながら、多くの場合、この系’／１１における第１の
酵素に対する基質と、シグナルの生成に関与する化合物
に対して前駆体と作用して通常はジグカルを生成する化
合物を与える第２の化合物とが用いられる。すなわち、
第１の酵素の生成物は、シグナルを発生する化合物を提
供するため、シグナル生成化合物に対する前駆体と反応
する。

２種の酵素を用いる場合、関連する反応は多くの場合、
加水分解または酸化還元反応である。加水分解の場合、
加水分解に不安定な結合を有する誘導染料前駆体、加水
分解酵素および遊離された染料前駆体を染料変換生成物
への変換を触媒する酵素がこのタイプのシステムの例で
ある。酸化還元反応では、第１の酵素が第２の酵素の要
求する必須酸化生成物を生成づることができ、第２の酵
素が酸化物質と染料前駆体との間の反応を触媒する。

２種の酵素を使用する場合、第１の酵素反応は基質の加
水分解切断または酸化還元反応で、他の酵素の基質であ
る生成物を与える。第１の段階では、たとえば、グルコ
ース−６−ホスフェートがアルカリホスファターゼによ
って接触的にグルコースに加水分解される。グルコース
はグルコースオキシダーゼの基質である。第２の段階で
は、たとえば、グルコースがグルコースオキシダーゼに
よって酸化されて過酸化水素を与え、これがＦｌｉ素的
に白色染料と反応してシグナル発生体を生成する。

触媒の組合せは酵素と非酵素触媒とを包含するものであ
ってもよい。酵素が非酵素触媒によって触媒される反応
を受ける反応原料を生成するか、または非酵素触媒が酵
素に対する基質（補酵素を含む）を生成する。使用でき
る広範囲の非酵素触媒が米国特許用４，１６０，６４５
号に記載されている。

シグナル発生化合物を得るには様々な酵素の組合せを使
用できる。とくに、ヒドロラーゼの組合せは、不溶性の
シグナル発生体を生成させるのに使用できる。別法とし
て、ヒドロラーゼとオキシドレダクターゼの組合せでも
シグナル発生化合物を提供できる。オキシドレダクター
ゼの組合せも不溶性のシグナル発生体を生成させるため
に使用できる。

酵素の組合せでは、一方の酵素は吸水性構成要素、第１
もしくは第２の吸水性構成要素に非拡散性に結合させ、
他方の酵素は被検物質に結合させる標識とすることもで
きる。さらに選ばれた特定のシグナル生成システムまた
は特定のプロトコールによっては、シグナル生成システ
ムの１種もしくは２種以上の他の構成要素を吸水性材料
に結合させることができる。

検定によっては、検出可能なシグナルを１９るために、
吸水性部位上のある領域における標識の存在によって生
じるシグナル構成要素を増幅する手段の提供が必要であ
る。したがって、通常、ｍ識は触媒、化学発光化合物ま
たは放射性同位元素とすることが好ましく、とくに触媒
とすることが好ましい。触媒は、シグナル標識から多数
のシグナル発生分子を生成できる酵素および補酵素であ
ることが好ましい。

光を吸収するたとえば染料または照射によって光を放出
するたとえば蛍光体のような生成物を生成することによ
って所望の増幅が得られる酵素または補酵素が用いられ
る。また、触媒反応が光の放出たとえば化学発光を生、
しるものであってもよい。このような生成物を与える多
数の酵素および補酵素が米国特許用４．．２７５．１４
９号の第１９１１Ｉから第２３［Ｉにわたって、また米
国特許用４゜３１８．９８０号第１０欄〜第１４１１Ｉ
に示されている。

多数の酵素の組合せが米国特許用４．２７５゜１４９号
第２３欄から第２８欄に挙げられていて、これらの組合
せは本発明に使用できる。

とくに興味があるのは、過酸化水素の生成を包含する酵
素と、染料前駆体を染料へ酸化する過酸化水素の使用で
ある。特定の組合せには、糖オキシダーゼたとえばグル
コースおよびガラクトースオキシダーゼまたは異項環オ
キシダーゼたとえばウリカーゼおよびキ丈ンチンオキシ
ダーゼと、過酸化水素を使用して染料前駆体を酸化する
酵素、すなわちペルオキシダーゼたとえば西洋ワサビペ
ルオキシダーゼ、ラクトペルオキシダーゼまたはミクロ
ペルオキシダーゼとの組合せがある。その他の酵素の組
合せは上に引用した特許の主題として認めることができ
る。単一の酵素を標識として用いる場合、他の酵素、た
とえばヒドロラーゼ、ｉ−ランスフェラーゼおよびオキ
シドレダクターゼ、好ましくはアルカリホスファターゼ
およびβ−ガラクトシダーゼのようなヒドロラーゼが使
用できる。また、ルシフェラーゼ、たとえばボタルルシ
フエラーピおよび細菌ルシフェラーゼら使用できる。

使用できる補酵素の例には、ＮΔＤ［Ｉ−１］；ＮＡＤ
Ｐ［Ｈ］、ピリドキサールホスフェート：ＦＡ　Ｄ　Ｅ
ｌ」］　、ＦＭＮ　［）−１］等、通常、環化反応が関
与する補酵素が包含される（とくに米国特許用４．３１
８．９８０号参照）。

酵素反応の生成物は通常、染料または蛍光体である。多
数の蛍光体の例が、米国特許用４，２７５．１４９号第
３０欄および第３１１１に示されている。

液体授受関係−液体が一方の吸水性構成要素から他方に
通過できるとき、２つの吸水性構成要素は液体授受関係
にある。この関係は直接でも間接でもよい。直接的な液
体授受関係は、一方の構成要素からの液体が毛細管作用
によって他方の構成要素へ通過し、一方から他方へ引き
付けるように２種の構成要素を互いに接触させることに
よって実現される。間接的な液体授受関係は、液体が一
方から他方に通過できるように２種の構成要素を近接し
た位置に置くことによって実現される。２種の構成要素
は、不活性で液流に抵抗を与えない多孔性空間によって
分離することができる。一方、またｔよ多孔性空間と結
合させて、液流抵抗性構成要素を用い２種の構成要素の
間の液の流速を制御することもできる。２種の構成要素
の空間的方向性を用いて、液体授受関係を達成すること
もできる。

免疫クロマトグラフ−免疫クロマトグラフは、吸水性支
持体の一定領域にｓｂｐ構成要素、リガントまたは受容
体が結合されていて、液体が毛細管作用によって、被検
物質および必要に応じてシグナル生成システムの任意の
構成要素を伴いその領域を通過し、移動できるように配
置されている。

ｓｂｐ構成要素は支持体に、共有結合または非共有結合
によって非拡散的に結合されている。ｓｂｐ構成要素が
均一に結合している領域は「免疫吸着領域」とも呼ばれ
る。さらに、シグナル生成システムの１種または２種以
上の構成要素が吸水性構成要素に、共有結合または非共
有結合によって非拡散性に結合されていてもよい。さら
に、標識に対する反応体たとえば酵素の基質を支持体に
結合させることもできる。

成分−関心分子であり、その量が本発明の−ｆ／１様に
よって測定される。成分は、無＾イオン、陽イオンまた
は陰イオンのような無機イオンであってもよく、たとえ
ば、リチウム、カリウム、ナトリウム等のようなアルカ
リ金属イオン、マグネシウム、カルシウム等のようなア
ルカリ土類金属イオン、銅、コバルト、マンガン、アル
ミニウム、鉄（第一鉄または第二鉄〉、クローム、ニッ
ケル、亜鉛、カドミウムイオン等、非金属イオンたとえ
ばハロゲン〈塩素、臭素、フッ素、ヨウ素等）イオン、
酸化物、硫化物、５Ａ酸塩、亜リン酸塩、リンｌ塩、セ
レン化物、酸化ハロゲンたとえばヨウ素酸塩、過ヨウ素
酸塩、塩素酸塩、次亜塩素酸塩等のイオンが包含される
。一般に、相互作用できる試薬が存在し比色的に、好ま
しくはその無機分子と反応して分光学的変化を与える化
合物との反応によって検出できる任意の無機分子が、本
発明よって定量できる。

成分は、結合パートナ−のような相互作用できる試薬た
とえばｓｂｐ構成要素が存在し比色的に、好ましくはそ
の有機化合物と反応して分光学的変化を与えることがで
きる化合物との反応によって検出できる任意の有機分子
であってもよい。成分は検定においてそれ自体が測定さ
れてもよいし、また被検物質の検定に用いられる化合物
であってもよい。代表的な有機分子成分には、酵素Ｗｆ
：質たとえばグルコース、エタノール、コレステロール
、アラビニトール、尿素、乳酸、アミノ酸、トリグリセ
ライド等；還元剤たとえばアスコルビン酸、尿酸、メル
カプタン、ハイドロキノン等：酸化剤たとえばキノンお
よびジスルフィド；リガント標識抱合体；受容体−標識
抱合体等が包含される。

被検物質ならびに成分および成分と相ｎ作用する試薬量
べてを定量的に測定できることが、本発明の一態様の重
要な特徴である。

成分と相互作用できる試薬−成分と化学的または物理的
に、化学ω論的に相互作用できて、第１の吸水性構成要
素領域に結合されたまた結合できる物質。化学的相互作
用とは一般に、試薬が化学結合を切断または形成して成
分を伯の物質に変換でき、それ自体新しい化合物に変換
することを意味する。物理的相互作用とは一般に、試薬
が化学的以外の様式で成分と化学ａ論的に相互作用丈る
ことを意味する。たとえば、試薬は、成分と、水素結合
の形成、静電的相互作用、疎水性相互作用等によって特
異的に結合するリガントまたは受容体であってよい。試
薬はまた、無機または有機分子であってもよい。無機分
子の例には、金属もしくは非金属イオン、酸化剤および
還元剤、遷移金属ハライド、有機水銀ハライド等がある
。有機分子の例としては、キレート剤、ｓｂρ構成要素
、ジアゾニウム塩、キノン、ヨードソ化合物、ジスルフ
ィド、ヨードアセトアミド、ハイドロキノン、ヒドロキ
シアニリン、ベンチジン、ヒドラジド、パラコート等を
挙げることができる。

相互作用には、酸化らしくは還元たとえば無機分子の酸
化もしくは還元、直接共有結合の形成、またはキレート
形成、求電子もしくは求核性置換を含む配位金属−リガ
ント結合形成、付加環化等が包含される。

第１領域とは異なる組成−第２の吸水性構成要素または
第２領域の組成は、第１の吸水性構成要素または第１領
域の組成と異なるものでなければならない。以下に、異
なる組成の実際を例丞的に説明するが、これに限定され
るものではない。他の例も本技術分野の熟練者には容易
に想到できるところであろう３．このような例には第２
の吸水性構成要素は化合物または被検物質と相互作用す
る物質を結合させない場合がある。他の例には、第２の
吸水性構成要素が、成分または成分と試薬の反応で生成
する生成物と反応し、第１の吸水性構成要素上の試薬と
は異なる物質を含有する場合がある。他の例には、第１
の吸水性構成要素の試薬が第２の吸水性構成要素上にも
あるが、画構成要素上のそれぞれの濃度は異なる場合が
ある。

補助材料−本発明の検定には様々な補助材料が使用され
るこ、とが多い。たとえば、検定メジウム中には緩衝剤
ならびに安定化剤が通常、添加される。これらの添加ｎ
１のほかに、しばしば、付加的タンパク質たとえばアル
ブミン、または界面活性剤とくに非イオン界面活性剤、
結合エンハンサ−たとえばポリアルキレングリコール等
が包含される。

上述のように、検定を実施づるための本発明の一方法に
よれば、第１の吸水性構成要素領域（［第１領域］）と
成分を含有する液体メジウムの組合せが提供される。第
１領域には上記成分と相互作用する試薬が非拡散性に結
合されている。

条件は、液体メジウムが第１領域のすべてを通過し、そ
こに含イｉされた成分の少なくとも部分がづべての試薬
と反応し、したがって第１領域のずべてを通過して液体
メジウムの毛細管移動によって、第１領域とは組成の異
なる第２の吸水性構成要素Ｔ４１１ｉ！〈「第２領域」
）内へ輸送されるように選択される。成分が第２領域内
へ移動する距離または液体メジウムと成分が第２領域内
へ移動する距離の差を測定する。距離または差は液体メ
ジウム中の成分岱または試薬量に相関する。これらの物
質の一方の吊の測定が所望の場合は、他の物質の聞は予
め決定され、移動距離を既知カリブレーターで１！１ら
れた距離と関連づけることになる。移動距離は、第２領
域を適当な検出剤と接触させることにより、成分の存在
に関連して第２領域上に検出可能なシグナルを生成させ
る適当な検出剤を第２領域上に存在させるか結合させる
ことにより、または第２領域上の成分を直接検出するこ
とにより、検出できる。

検定は成分濃度または試薬濃度を測定するように配置す
ることもできる。

上述のように、液体メジウムと第１領域の組合せに先立
って、第１領域を試薬含有溶液と接触させることにより
、試薬を第１領域に非拡散的に結合させることができる
。先に定義した差または距離は、溶液中の試薬量に関連
させることができる。

さらに、試薬の溶液中の被検物質の恐に試薬量を関連さ
せることができる。

本発明の一態様における新規な特徴は、前述のエスケー
パー容量の測定方法にある。第１領域を通過した液体は
第２領域に入り、この領域に取り込まれた客用がこの領
域に沿った液体の移動距離に関連する。適当容積の液体
が第２領域に入ったのノう、成分を含有する領域と有意
なｉＩＪ度の成分を欠く領域を画する境界が得られる。

液体がこの領域に沿って移動した距離と境界によって画
された成分がこの領域に沿って移動した距離とを測定す
るとエスケーバー容倒の測定が可能になる。第２領域の
長さがリベての検定について同一で、第１領域を通過し
た容積が丁度第２領域を満たした場合には、移動距離す
なわち境界までの距離を測定するだけでエスケーパー容
量の測定に十分である。

移動距離は、第２領域上の成分の直接検出により、また
は第２領域を適当な検出剤と接触させることにより決定
できる。この検出剤が前もって存在しない場合には、こ
の検出剤が成分の存在に関連する検出可能シグナルを第
２領域上に生成することになる。検出剤は成分と化学的
に相互作用して通常、可視シグナルたとえば色を生成す
る物質とすることができる。検出剤はシグナル生成シス
デムの一構成要素であってもよい。一般に、検出剤は検
定成分または検定成分と試薬の反応生成物と反応し、こ
の反応で分光学的に検出できる変化が生じる。代表的な
検出剤は、キレート剤たとえばフエ犬ンスロリン類、カ
ルボキシピリドン類、フェノール類、β−ジケトン類等
、酸化剤たとえばキノン類、セリウムイオン類、二酸化
マンガン、過ヨウ素酸塩、クロム酸塩、ジスルフィド、
テトラゾリウム塩類等、還元剤たとえば白色染料、メル
カプタン類、チオ！Ａ酸塩類、ハイドロキノン類、ベン
チジン類等、触媒たとえば酵素、補酵素、補欠分子団、
メトラブル−等、酵素基質等である。

第１領域と第２領域は単一の吸水性構成要素に一体化す
ることができるが、２つの領域は液体メジウムが第２領
域に接触する前に第１領域を通過するように配置され、
また２種の領域は組成の異なるものでなければならない
。一方、第１領域は第１の吸水性構成要素と一体化し、
第２領域は第２の吸水性構成要素と一体化することがで
きる。

この場合、第１の領域はたとえば、第１領域と液体メジ
ウムの組合せを提供する前に、第２領域と液体授受関係
に配置する。本発明のこの局面に対して便利なデバイス
を第１図に示す。

成分と試薬はそれぞれ、特異的結合ペアの構成要素であ
ってもよい。たとえば、成分は酵素標識リガント類縁体
Ｃあり、試薬はそのリガントに対する抗体とすることが
できる。この方法はリガントである被検物質の覆の測定
も包含する。

前述のように、成分と試薬は化学的に相互作用または物
理的に相互作用するものとづ“ることができる。この方
法は無機、有礪、両分子の定量に応用可能である。

本発明のこの定積的局面における他のアプローチは、第
１の吸水性構成要素領域（「第１領域」）の成分含有液
体メジウムとの接触を包含する。第１領域には成分と相
互作用する試薬が非拡散性に結合している。接触は、液
体メジウムおよびそれに含まれる成分の少なくとも部分
が第１領域のすべてを通過し、第１領域とは組成の異な
る第２の吸水性構成要素領域（「第２領域」）内に毛細
管作用によって移動するような条件下に行われる。

成分が第２領域内に移動した距離またはメジウムと成分
が第２領域内に移動した距離の差を測定１゛ると液体メ
ジウム中の成分の歩の決定が可能になる。

本発明のこの局面における他のアプローチは、被検物質
の溶液と、被検物質と反応できる試薬が非拡散性に結合
しているかまたは結合する第１の吸水性領域との組合せ
を包含する。次に、試薬と相互反応する成分を含有する
液体メジウムを第１の吸水性構成要素と合する。第１の
吸水性構成要素は第２の吸水性構成要素と液体授受関係
に置かれる。条件は、液体メジＴクムが毛細管作用によ
って第１の吸水性構成要素と少なくとも第２の吸水性構
成要素の部分を通過するように選択される。

第２の吸水性領域上に境界が決定される。境界の位置は
、溶液中の被検物質の吊または第１の吸水性構成要素上
の試薬団もしくは液体メジウム中の成分量に相関する。

たとえば、被検物質は薬剤であり、試薬は薬剤に対する
抗体であり、成分は酵素標識薬剤類縁体とすることがで
きる。

他のアプローチにおいては、第１の液体メジウム中、（
１）第１の吸水性構成要素と（２）被検物質からなり、
被検物質に対する試薬がメジウム中または第１の吸水性
構成要素上に存在する組合せが提供される。第１の吸水
性構成要素は吸収性構成要素と液体授受関係に置く。条
件は、第１のメジウムが第１の吸水性構成要素と少なく
とも吸収性構成要素の部分を毛細管作用によって貞流し
、試薬および通常は被検物質が吸収性構成要素に非拡散
性に結合するような条件が選択される。すなわち、第１
の液体メジウムは、第１の構成要素のずべてと接触させ
て一度に第１の構成要素を貫流させるか、または第１の
吸水性構成要素の部分とのみ接触させることができる。

少者の場合、メジウムは毛細管作用によって構成要素の
残部を通過する。

ついで吸水性構成要素と吸収性構成要素の間の液体授受
関係を停止させる。第２の液体中、第１の吸水性構成要
素の部分と試薬とｌ’ｔｌ互作用する成分とからなり、
第１の吸水性構成要素は第２の吸水性構成要素と液体授
受関係にある組合せを提供する。条件は、第２のメジウ
ムが第１の吸水性構成要素と少なくとも第２の吸水性構
成要素の部分を毛細管作用によって通過するように選択
される。

ただし、第１の吸水性構成要素は、吸収性構成要素およ
び第２の吸水性構成要素とは実質的に異なる時期に液体
授受関係に置かれる。次に、第２の吸水性構成要素上に
境界が決定される。境界の位置は、第１のメジウム中の
被検物質の庁、または試薬の量、もしくは第２の液体メ
ジウム中の成分の最に相関する。

本発明の他の局面においては、方法は、第１の吸水性構
成要素を第１の液体メジウムもしくは溶液と接触させる
ことにより、第１のメジウム中のｓｂｐ構成要素のよう
な試薬を第１の吸水性構成要素に結合させることからな
る。第１の吸水性構成要素は吸収性構成要素と液体授受
関係に置く。条件は、第１のメジウムが毛細管作用によ
って、第１の吸水性構成要素および少なくとも吸収性構
成要素の部分を通過または貫流１°るように選択される
。第１の吸水性構成要素の機能は、試薬を定量的かつ強
固に結合することである。試薬は、関心被検物質の風足
の最小検出可能量に応じて、一定量または既定量が結合
されねばならない。一般に、結合される試薬は、第１の
吸水性構成要素を通過する被検物質または成分の槍の２
０分の１以上または２０倍未満である。多くの場合、第
１のメジウムまたは溶液中のすべての試薬が結合される
。

本発明における一アプローチでは、第１の液体、通常は
水性のメジウム中または溶液中、（１）その部分にｓｂ
ｐ構成要素のような第１の試薬が非拡散性に結合した第
１の吸水性構成要素と（２）被検物質の含有が疑われる
サンプルとを含む組合せが提供される。被検物質が第１
の試薬に結合できない場合は、被検物質および第１の試
薬に結合できる第２の試薬をメジウム中または第１の吸
水性構成要素上に存在させる。

組合せは、多数の順序のひとつで形成させることができ
る。たとえば、第１の吸水性構成要素に第１の試薬を結
合させることができる。第１の吸水性構成要素の部分（
［接触部分］）を、被検物質を含む第１のメジウムまた
は溶液と接触させる。

量ナンブルが被検物質を含む水性メジウムである場合に
は、サンプルが第１のメジウムまたは溶液の一部または
すべてを占めることができる。基本的に考慮すべき点は
、第１のメジウム中サンプルと第１の吸水性構成要素た
とえばストリップの部分上第１の試薬との組合せを提供
し、毛細管作用によって構成要素を貫流または通過させ
ることである。この移動は上方方向、上方方向、水平方
向またはそれらの組合せとすることができる。第１の吸
水性構成要素に沿ってまたはそれを貫く第１のメジウム
の移動は、第１の吸水性構成要素と液体授受関係にある
吸収性構成要素によって駆動させることができる。この
ような駆動または浸透型作用は、第１の吸水性構成要素
の化学的活性部分に接触する液体の制御を改善する。

被検物質が第１の試薬に結合できない場合には、被検物
質と第１の試薬に結合できる第２の試薬を、第１のメジ
ウムもしくは溶液中または第１の吸水性構成要素上に存
在させる。第２の試薬が第１の吸水性構成要素上にある
場合には、一般に拡散性に結合させ、したがって水性メ
ジウムとの接触により第２の試薬は第１のメジウム中に
拡散される。

この拡散は第１の吸水性構成要素に沿った第１のメジウ
ムによる移動中に起こる。

上述のように、第２の試薬は、被検物質および第１の試
薬に結合づる性質を有する。被検物質と第１の試薬が同
一または類縁体である場合には、第２の試薬は、被検物
質または被検物質類縁体に対するｓｂｐ構成要素のよう
な結合パートナ−とすることができる。しかしながら、
第１のｓｂｐ構成要素は被検物質または被検物質類縁体
以外のものであってもよい。第１の試薬の機能は、サン
プル中の被検物質の熾に関連して、被検物質または第２
の試薬に結合することである。したがって、第１の試薬
が被検物質または被検物質類縁体と結合しない場合には
、第１の試薬は第２の試薬に対する結合パートナ−であ
るように選択される。このような場合には、第２の試薬
は２つの組成、すなわち被検物質に結合できる組成たと
えば第２のｓｂｐ構成要素、および第１の試薬に結合で
きる組成たとえば第３のｓｂｐ構成要素をもつことにな
る。

被検物質に結合できる組成は被検物質に相補性で、被検
物質に対するｓｂρ構成要素たとえば抗体である。第２
の試薬の他の部分は、分子量５００未満、好ましくは２
５０以上の小有機分子であってもよい。この場合の第１
の試薬は、被検物質に相補性の成分または小有機分子に
相補性のｓｂｐ構成要素であってよい。すなわち、第１
の試薬はたとえば、抗体に対する抗体または小有機分子
に対する抗体である。小有機分子の例には、ビオチン、
フルオレセイン、ＬＳＤ、モルフイン、ペンゾイルエク
ゴニン等がある。

吸水性構成要素に結合する第２の試薬の量は、相当する
被検物質の既定の最小検出可能量またはそれを越える聞
でのサンプル中の存在に関連する。

この最小検出可能量は一般に被検物質が存在するとみな
される以上の吊である。たとえば薬剤の場合、興味があ
るのは薬剤がある濃度範囲で存在するときだけである。

薬剤がナンブルまたは試験溶液中にその範囲以下に存在
しても、その濃度は最小検出可能量またはそれ以上では
ないので存在するとみなす必要がない。

水性メジウムまたは溶液および液体メジウムは、約４０
＠社％までの他の極性溶媒とくに１個から６ｇ４まで、
さらに通常は１個から４個までの炭素原子を有する酸素
含有溶媒、たとえばアルコール、エーテル等から構成さ
れる。通常、約２０１憬％未黄の補溶媒が存在すること
もある。サンプルの性質によっては、水性メジウムの一
部またはすべてがサンプル自体によって与えられる場合
もある。

また場合によっては、極性または非極性有機溶媒の非水
溶液または液体メジウムを用いることもできる。これは
、たとえば、水が検定における物質の反応に不必要な場
合、または水がこのような物質の活性に有害な場合が挙
げられる。

水性メジウムを使用する場合、メジウムのｐＨは通常４
〜１１の範囲であり、さらに通常は５〜１０、好ましく
は約６〜９の範囲である。ｐＨは検定に関与する相互作
用を促進するように、たとえば結合構成要素の結合親和
性を有意なレベルおよびシグナル生成システムによるシ
グナルの至適発生を維持するように選択される。所望の
ｐＨを達成し、検定時そのｐＨを維持するためには、様
々な緩衝剤が使用できる。緩衝剤の例としては、ホウ酸
塩、リン酸塩、炭酸塩、トリス、バルビツール等がある
。使用される緩衝剤にはとくに制限はないが、個々の検
定ではある緩衝剤が他の緩衝剤より好ましいことがある
。

場合によっては、サンプルとともに約０．０５〜０．５
重１％の非イオン界面活性剤を添加することが望ましい
。約２００〜２０．０００ダルトンの各種ポリオキシア
ルキレン化合物が使用できる。

検定の実施に際しては、中等度、望ましくは実質的に一
定の温度が使用される。検定および検出可能なシグナル
の生成に際しての温度は一般に約４〜５０℃の範囲、通
常は約１０〜４０℃、多くの場合は室温、すなわち約１
５〜２５℃である。

検定される成分または被検物質の第１の水性メジウムま
たは溶液中の濃度は一般に、約１０−４〜約１０　　　
Ｍ、通常は約１０〜１０−１４Ｍを変動する。

他の試薬の濃度は通常、成分または関心被検物質の濃度
およびプロトコール等を考慮して決定される。

サンプルおよび試薬溶液中の各種試薬の多くの濃度は一
般に、成分および／または被検物質の関心濃度範囲によ
って決定されるが、少なくとも一部の試薬の最終濃度は
、関心範囲における検定の感度を最適にするように経験
的に決定される。ある種のプロトコールでは、個々の試
薬を、検定の感度に悪影響を与えることなく、かなり過
剰に使用することができる。

第１の吸水性構成要素としてストリップが用いられる場
合、ストリップの大きさはいくつかの因子によって決定
される。第１の因子は、十分な量の被検物質または試薬
もしくは成分が捕捉され、その結果、感度が高く正確な
検定を達成するために十分なシグナルが得られることで
ある。この点に関しては、メジウムが第１の吸水性構成
要素を貴流し、第１の吸水性構成要素と第２の吸水性構
成要素が液体授受関係に置かれる以前に、吸収性構成要
素内に流れることにより、第１の吸水性構成要素上のす
べての利用可能な結合部位を満たして被検物質または試
薬を濃縮させることができるので、本発明の質的な面で
は、感度の上背が与えられる。一般に、上昇法ストリッ
プの場合、液体保持言回は通常１μｍ以上、好ましくは
少なくとも５〜２００μｌである。下降法ストリップの
場合、保持言渋は最低１〜２０μｌとすることができる
が、５〜２００μｌが好ましい。

ストリップの厚さにはとくに制限はないが、−般には０
．０５〜２Ｊｗ、通常は０．１〜ｉｓ、好ましくは０．
２〜０．７ｍである。一般に厚さの下限は材料の強度お
よび容易に検出可能なシグナルの生成のための要求によ
って決定され、一方、幅の上限は取り扱いの便宜および
試薬の価格によって決定される。

試薬を節約し、限られた量のサンプルに対応するために
は、ストリップの幅は一般に比較的狭くされ、通常は２
０ｓ未満、好ましくは１０履未満である。一般には、ス
トリップの幅は約１．０ｆ１以上とし、通常的２ｍ〜１
２ａｍの範囲、好ましくは約４Ｉ１１１Ｒ〜８ａａ＋で
ある。

ストリップの長さは、被検物質または成分もしくは試薬
のｍ度、および実用上の問題たとえば取り扱いの容易さ
およびストリップ上の部位数によって決定され、約０．
５ｃｔｎ〜４０α、通常約１ｃｍ〜２５１．好ましくは
約４〜２０αであるが、実用的な任意の長さとすること
ができる。ストリップの構造は広く変動させることが可
能で、綱、中等度細、中等度、中等度粗および粗を使用
できる。

一般に、孔径が小さくて、材質が微細であるほど、毛Ｈ
Ｊ管移動は遅（、ストリップ上への所望の試薬の捕集効
率は高くなる。材質が粗く孔径が大きい材料はど流速は
早くなるが、捕集効率は低下する。

材料の多孔度の選択は、与えられた検定での成分の結合
率に依存する。孔径は液流を制限するほど小さくはなく
、たとえば血清が関心サンプルの場合には血清を吸蔵す
るほど大きくてはいけない。

適当な選択により、本発明の利点のひとつである洗浄工
程の必要性の回避が可能になる。

ストリップの断面の寸法は、矩形の場合について上述の
説明で述べたとおりであるが、これは単なる例示であっ
てそれに限定されるものではない。

上述のように、他の形状たとえば円形、三角形、卵形等
も本発明の範囲内に包含される。それらの寸法は、本明
細書の開示を参考に本技術分野の熟練者には容易に決定
できるものである。

検出システムたとえばシグナル生成システムの構成要素
である他の試薬の濃度は、特定のプロトコールおよびそ
れらのシグナル生成における役割によって広範囲に変動
できる。通常、第１の吸水性構成要素上の試薬たとえば
第１のｓｂｐ構成要素は、その接触部分と吸収性構成要
素の間の少なくとも部分に均一らしくは均等に結合され
、その耐は成分または被検物質の予め定められた最小検
出可能量によって決定される。通常、この准は検定され
る成分または被検物質の最大量の１０’倍以下、検定に
用いられる第１の試薬のような試薬の最小嬶にほぼ等し
い吊以上である。試薬の最小濃度は、成分の最小検知可
能量を参考に決定される。

この闇は検出の感度に依存し、１０　　モル〜１０　モ
ル、通常は１０　〜１０　　モルである。

第１の試薬が第２の試薬の捕集に用いられる場合には、
第１の吸水性構成要素上の第１の試薬の５１は、第２の
試薬の予め定められた間のみが結合されるように選択す
ることができる。

被検物質の検定を実施する場合には、プロトコールは通
常、水性メジウム中、被検物質の含有が疑われるサンプ
ルと第１の試薬の組合せの形成を包含する。サンプルは
広範囲の材料、たとえば唾液、血液、血清、血漿、尿、
接眼レンズ液、を髄液等の生理的液体、ミルクおよびワ
インのような食品、化学処理用水、食品廃水等からＭ導
される。

第１の吸水性構成要素の接触部分または全体は、通常メ
ジウム中に接触部分を浸すような浸漬によって、第１の
メジウムと接触させる。しかしながら、第１の吸水性構
成要素と第１の液体メジウムまたは溶液の接触は、他の
方法たとえば第１の吸水性構成要素上に第１のメジウム
を点滴することによっても実施できる。この方法はとく
に、ストリップ様、円形、卵形、シート状等の第１の吸
水性構成要素に適用される。毛細管作用による第１の吸
水性構成要素の湿潤は、定められた容饋のメジウムが吸
水性構成要素を通過するまで継続される。一般に第１の
メジウム中なくとも２０μｌ。

通常は少なくとも５０μｌ、多くの場合少なくとも１０
０μｌが吸水性構成要素を通過する。吸水性構成要素を
通過する第１のメジウムの上限は一般に、実用上の問題
から、たとえばデバイスの→ノイズによって決定される
。

実用上、第１のメジウムが第１の吸水性構成要素を通過
する時間は比較的短いことが望ましい。

一般に、第１のメジウムが第１の吸水性構成要素を通過
するに要する時間は少なくとも３０秒、１時間以下であ
り、通常は約１分〜３０分であるが。

２４時間程度の長時間も使用できる。

第１のメジウムが第１の吸水性構成要素と少なくとも吸
収性構成要素の部分を通過したのち、または第１の吸水
性構成要素の全体を第１のメジウムと接触させたのら、
第１の吸水性構成要素を第２の吸水性構成要素と液体授
受関係に置く。好ましい態様においては、第１の吸水性
構成要素は、吸収性構成要素および、毛細管作用によっ
て液体の移動が可能なりロマトグラフ構成要素たとえば
免疫クロマトグラフ構成要素と、実質的に異なる時期に
液体授受関係に置く。さらに好ましくは、第２の吸水性
構成要素と第２のメジウムの間の液体授受関係を設立す
る前に、第１の吸水性構成要素と吸収性構成要素の間の
液体授受関係を停止させる。第１の吸水性構成要素と一
方では吸収性構成要素および他方では第２の吸収性構成
要素との間の関係は、物理的もしくは機械的手段または
それらの組合せによって設立しまた停止させることかで
きる。

第２の吸水性構成要素の部分を第２の液体、通常は水性
のメジウムと接触させる。第２のメジウムは第１の吸水
性構成要素と少なくとも第２の吸水性構成要素の部分を
毛ｉｌｌ管作用によって通過する。第２のメジウム中の
成分は、第１のメジウム中の被検物質の存在に関連して
第２の吸水性構成要素に非拡散性に結合される。第２の
吸水性構成要素には検出剤を結合させておくこともでき
る。

本発明の方法は、被検物質、試薬または成分の定性的結
果または定ａ的測定を与えることができる。本発明によ
り定性的結果を得るためには、第１の吸水性構成要素と
第２の吸水性構成要素の間の液体授受関係は、成分また
は被検物質が第１の吸水性構成要素上に濃縮されたのち
にはじめて確立させる。定量的測定のためには、第２の
吸水性構成要素はクロマトグラフ構成要素たとえば免疫
クロマトグラフ構成要素とすることができる。試薬が用
いられる一態様においては、成分はたとえば、酵素と被
検物質類縁体との抱合体とすることができる。サンプル
中の被検物質の存在または存在量に応じて成分は、第１
の吸水性構成要素に非拡散性に結合した試薬に結合する
。被検物質がサンプル中に最小検出可能量以上存在する
と、比例した量の成分が第１の吸水性構成要素に結合し
ないで第２の吸水性構成要素に通過するように第１の試
薬の量が選択される。場合によっては、第２の吸水性構
成要素に、成分の結合パートナ−を含有させてもよい。

成分が酵素標識被検物質類縁体である場合には、この結
合パートナ−は抱合体の酵素部分または抱合体の被検物
質類縁体部分に結合する。したがって、この結合パート
ナ−は、酵素に対する抗体または被検物質類縁体に対す
る杭体であってもよい。成分は標識を包含してもよいし
、また標識に結合できるものであってもよい。

第２の吸水性構成要素上の結合パートナ−は抗体に対す
る受容体であってもよく、たとえば第１の試薬が免疫グ
ロブリンに対して特異的な抗原である場合プロティンＡ
で６よい。

免疫クロマトグラフ法の例は、米国特許第４゜１６８．
１４６号および第４．４３５．５０４号に記載されてい
る。本発明に適用される場合、第２の水性メジウム中の
成分は免疫クロマトグラフ構成要素の免疫吸着領域を通
過し、第１の吸水性構成要素からの液体とともに運ばれ
る。成分（よ第２の吸水性構成要素に、たとえば、ｓｂ
ｐ構成要素複合体の形成を介して結合してもよい。定性
的結果のためには、免疫吸着領域を狭いバンドが小部位
とし、そこにサンプル中の被検物質の存否を指示させる
ことができる。第２のメジウムが通過する第２の吸水性
構成要素の部分は用いられる特定のプロトコールによっ
て決定されるが、吸水性構成要素全体とすることが好ま
しい。しかしながら、一般には定性試験および定量測定
のいずれにおいても、メジウムは少なくとも免疫吸着領
域を通り、第２の吸水性構成要素の部分を通過する。第
２の吸水性構成要素の寸法は、第１の吸水性構成要素に
ついて上述したのと／ｉｌＵ点を考慮して決定できる。

免疫吸着領域の大きさと第２の吸水性構成要素の残部の
関係は、正確な検定を実現するために十分な量の成分が
免疫吸着領域を通過できるように設定される。

第２のメジウムが第１および第２の吸水性構成要素を通
過したのち、定性的検定においては、第２の吸水性構成
要素上のまたはそれに結合した成分の存在を確認する。

第２の吸水性構成要素上における成分の存在は、サンプ
ル中の被検物質の量に関連する。成分が標識を含有する
場合には、第２の吸水性構成要素について検知可能なシ
グナルの存在を検査すればよい。シグナルが放射性標識
等の結果である場合には、シグナルは第２の吸水性構成
要素で直接検知することができる。化学剤が標識を含め
たシグナル生成手段の一部を形成している場合には、第
１の吸水性構成要素の接触部分を、シグナル生成システ
ムの残りの構成要素を含む現像溶液に浸漬、または他の
方法で接触させる。第２の吸水性構成要素の部分のみを
接触さぼる場合には、この現像溶液を第１の吸水性構成
要素から第２の吸水性構成要素を通して流す。プロトコ
ールによっては、洗浄工程を設けてもまた設けなくても
よい。別法として、第２の吸水性構成要素を、たとえば
全体の浸漬、噴′Ｎ等により、直接現像溶液と接触させ
ることもできる。

プロトコールによっては、第２の吸水性構成要素をまず
現像溶液と接触させ、ついで第２の吸水性構成要素を現
像溶液中もしくは第１および第２のメジウム中には存在
しないかまたは第１もしくは第２の吸水性構成要素上に
存在するシグナル生成システムの残りの構成要素と接触
させるのが望ましい場合もある。

一般に、成分が存在するかまたは結合している第２の吸
水性構成要素の領域を決定するのに必要な量のシグナル
生成化合物が生成するのに十分な時間が経過してからシ
グナルを測定する。検知可能なシグナルが生成したなら
ば、サンプル中の被検物質の存否もしくは存在量および
／または試薬もしくは成分の世がわかる。定量的測定の
ためには、シグナル生成システムが、第２の吸水性構成
要素内の被検物質または成分が存在または結合している
領域を、それが存在しない領域と識別する方法を与える
。この方法ではクロマトグラフ上の既定の位置からのそ
の距離がサンプル中の被検物質および／または成分もし
くは試薬の吊の指標となる。−態様においては、成分が
通過した第２の吸水性構成要素の領域は、成分が存在す
る領域を通じて実質的に均一に検知可能なシグナルが生
成することにより観察可能となる。イ也の態様において
は、第２の試薬によって占められた第２の吸水性構成要
素内の領域に関連した境界に主として検知可能なシグナ
ルが認められる。

本発明の特定の一態様においては、被検物質の含有が疑
われるサンプルと、被検物質に対する抗体と小有機分子
の抱合体である第１の試薬を含む水性メジウムが調製さ
れる。水性メジウムを、小有様分子に対する抗体または
被検物質に対する抗体を認識する抗体が非拡散性に結合
されている吸水性ストリップの接触部分に接触させる。

吸水性ストリップの末端部は吸収性ストリップと接触さ
せる。溶液は吸水性ストリップと、吸収性ストリップの
部分を通過する。吸水性ストリップ上の抗体は第１の試
薬を捕捉する。水性メジウム中に被検物質が存在すると
、被検物質は第１の試薬の抗体によって捕捉される。

吸水性ストリップと吸収性構成要素の間の液体授受関係
を停止させ、吸水性ストリップは第２の吸水性ストリッ
プと液体授受関係に置く。酵素標識被検物質類縁体であ
る成分を含有する第２の液体メジウムを第１の吸水性ス
トリップの接触部分に接触させる。第２の吸水性ストリ
ップは、第２の試薬の被検物質類縁体部分もしくは酵素
部分またはその抱合体自体に結合する抗体を含有する。

第２の吸水性材料上の抗体は、第２の吸水性ストリップ
の実質的部分に非拡散性、均一に結合され、免疫クロマ
トグラフを形成する。第２の水性メジウムは第１の吸水
性ストリップと第２の吸水性ストリップを通過する。

サンプル中に被検物質が存在すると、被検物質は、第１
の吸水性ストリップに結合している被検物質に対する抗
体の結合部位を占拠する。したがって、酵素ＩＩＡ識被
検物質類縁体は、第１の吸水性構成要素上の占拠された
結合部位には結合せず、第２の吸水性ストリップに移動
し、ここで第２の吸水性ストリップ上の抗体によって捕
捉される。

したがって、使用される第１の試薬および成分の楢は、
被検物質の予想される関心濃度範囲に基づいて予め決定
された聞でなければならない。ナンブル中に被検物質が
存在しないかまたは被検物質の量が予め定められた関心
濃度以下の場合には、成分はすべて第１の吸水性構成要
素に結合し、成分は第２の吸水性ストリップには移動し
てこない。

しかしながら、被検物質がサンプル中に存在すると、成
分はサンプル中の被検物質の量に比例して第２の吸水性
構成要素に移動する。サンプル中に被検物質が存在しな
くても少なくとも一部の成分が第２の吸水性ストリップ
に移動するように吊を選択プ゛れば、成分は第２の吸水
性構成要素に沿って、サンプル中の被検物質の量に比例
する距離を移動するようにすることができる。

第２の液体メジウムが第１の吸水性ストリップおよび第
２の吸水性ストリップを通過したのらに、第１の吸水性
構成要素と第２の水性メジウムの接触を停止させる。つ
いで、第２の吸水性ストリップを現像剤溶液と接触させ
て、第２の吸水性ストリップに結合した酵素抱合体の場
所を調べる。この目的では、第１および第２の吸水性ス
トリップを現像剤溶液に浸漬するか、または第２の吸水
性ストリップの第１の吸水性ストリップとの液体授受関
係を解除しついで第のストリップをシグナル生成システ
ムの残りの構成要素を含有する現像剤溶液と接触させる
ことができる。このようにして、第２の吸水性ストリッ
プ上の成分の移動距離が決定され、この距離が定量的結
果を得るに当って、サンプル中の被検物質の量と関連す
る。この関連は、上記方法を既知サンプルについて実施
して移動距離を測定し、未知サンプルにおける移動距離
を既知の値と比較してリンプル中に存在する被検物質の
世を決定した結果である。

現像剤溶液にシグナル生成システムの残りの構成要素を
含有させることもできるし、また、ジグフル生成システ
ムの一部たとえば第２の酵素を第２の吸水性ストリップ
上に存在させることもできる。たとえば、米国特許出願
第６０２．２９７号（１９８４年４月２０日出願、ヨー
ロッパ特許出願用８５３０２７６１．３号、カナダ特許
出願箱５Ｎ４７９，６３４号および日本特許出願箱６０
−０８５２９７号に対応）および米国特許出願第７３３
．０１３号（１９８５年５月１０日出願、ヨーロッパ特
許出願用８６３０３５３３．３号、カナダ特許出願箱５
Ｎ５０８，８３３号および日本特許出願箱６１−１０７
５２４＠に対応）参照。

本発明の他の態様においては、被検物質類縁体が結合さ
れた第１の吸水性ストリップを接触部分において、被検
物質の含有が疑われるサンプルおＪ：び被検物質に対す
る抗体を含む水性メジウムと接触させる。第１の吸水性
ストリップは吸収性構成要素と液体授受関係に置き、メ
ジウムは第１の吸水性ストリップと、吸収性構成要素の
部分を通過させる。吸収性構成要素と第１の吸水性スｉ
・リップの間の液体授受関係を終結させ、第１の吸水性
ストリップを第２の吸水性ストリップと液体授受関係に
置く。第１の吸水性ストリップの接触部分を、被検物質
に対する抗体に結合する抗体酵素抱合体を含む第２の水
性メジウムと接触させる。

第２の吸水性ストリップは被検物質に対する抗体の受容
体たとえばプロティンＡを含有する。

サンプル中に被検物質が存在すると、被検物質はその相
補性構体に結合し、その結果、この複合体は第１の吸水
性ストリップに結合しなくなる。

しかしながら、被検物質がサンプル中に存在しないかま
たは予め定められた検出可能量以下しか存在しないと、
被検物質に対する抗体は、第１の吸水性構成要素上の被
検物質類縁体に結合する。第１の吸水性ストリップを、
抗体酵素抱合体を含む第２の水性メジウムと接触させる
と、被検物質に対する抗体が第１の吸水性ストリップに
結合している場合には、上記抱合体が第１の吸水性スト
リップに結合する。サンプル中に存在する被検物質の量
に関連する第１の吸水性構成要素に結合した被検物質に
対づる抗体の量に応じて、抱合体のある串が第２の吸水
性ストリップに移動し、そこで抗体に対する受容体によ
って捕捉される。

メジウムが第１の吸水性ストリップと第２の吸水性スト
リップとを通過したのち、第２の吸水性ストリップ上の
酵素活性を測定するため第２の吸水性ストリップを前述
の態様に関して上述したように処理する。この場合も、
第２の吸水性ストリップ上を抱合体が移動した距離はサ
ンプル中の被検物質の量に相関する。

他の態様においては、その部分に被検物質に対する抗体
が結合されている第１の吸水性ストリップを関心サンプ
ルを含有する水性メジウムと接触させる。サンプルは第
１の吸水性構成要素を通過し、第１の吸水性構成要素と
液体授受関係にある吸収性構成要素内へ毛細管作用によ
って駆動される。通過が起こったのち、第１の吸水性構
成要素と吸収性構成要素の間の液体授受関係を終結させ
、第１の吸水性構成要素を、被検物質に対する抗体が結
合している第２の吸水性構成要素と液体授受関係に誼く
。ついで第１の吸水性構成要素を、酵素標識被検物質類
縁体を含む水性メジウムと接触させる。この第２の水性
メジウムは第１の吸水性構成要素および第２の吸水性構
成要素を通過づ゛る。

サンプル中に被検物質が存在すると、最初の通過時に被
検物質は第１の吸水性構成要素に結合し、第１の吸水性
構成要素上の抗体結合部位を占拠する。したがって、第
２の水性メジウムが第１の吸水性構成要素を通過すると
きには、酵素ｊａ識被検物質類縁体は第１の吸水性構成
要素に結合しないで、サンプル中に存在する被検物質の
量に直接比例して第２の吸水性構成要素に移動しくでる
。この場合も第２の吸水性構成要素を処理して酵素活性
を検出すると移動距離の測定が可能となり、これがサン
プル中の被検物質の闇と相関する。

本発明は、サンプル中の１種または２種以上の被検物質
の存在および／または存在量を決定するだめの広範囲の
多様なプロトコールに対する適応性を有する。本発明の
一例においては、第１の水性メジウム中のｓｂｐ構成要
素を、第１の吸水性構成要素の部分をメジウムと接触さ
せることにより、第１の吸水性構成要素上に結合させる
。第１の吸水性構成要素は吸収性構成要素と液体授受関
係に置く。メジウムは第１の吸水性構成要素と少なくと
も吸水性構成要素の部分を毛細管作用によって通過する
。次に、第１の吸水性構成要素を第２の吸水性構成要素
と液体授受関係に置く。第２の水性メジウム中の成分は
、第１のメジウム中の被検物質の存在に関連して第２の
吸水性構成要素に非拡散性に結合することになる。第１
の吸水性構成要素の部分を第２の水性メジウムと、第２
のメジウムが毛細管作用によって第１の吸水性構成要素
と少なくとも第２の吸水性構成要素の部分を通過するよ
うな条件下に接触させる。第２の吸水性構成要素の少な
くとも部分における成分の存在またはその上の成分の移
動距離を調べて、サンプル中の被検物質の存在および／
または存在ａを決定する。米国特許出願用５Ｎ９０４，
５９７号（１９８６年９月５日出願、ヨーロッパ特許出
願箱８７３０７７７６．２号およびカナダ特許出願筒５
Ｎ５４６，０８１に対応）、米国特許出願用５Ｎ９２８
．２３３号（１９８６年１１月７日出願、ヨーＯツバ特
許出願第８７３０９７２３゜３号、カナダ特許出願筒５
Ｎ５５１．１７２＠および日本特許出願箱６２−２８１
９２１号に対応）Ｊ３よび米国特許出願用５Ｎ９２８，
７７１号（１９８６年１１月７日出願、ヨーロッパ特許
出願箱８７３０９７２４．０号、カナダ特許出願筒５Ｎ
５５１．１７１号および日本特許出願箱６２−２Ｆ３１
９２２号に対応）に記載されたようなプロトコールは本
発明に従って改変して、サンプル中の１種または２種以
上の被検物質を定ｄすることができる。

液体、通常は水性のメジウム中の成分たとえば金属イオ
ンまたは被検物質の川を測定するための検定を実施する
に際してのプロトコールは、一般に、液体メジウム中、
成分と第１の吸水性構成要素（「第１領域Ｊ）の組合せ
の形成を包含する。

関心成分は広鉋囲の材料たとえば化学処理用水、汚染物
質含有メジウム、廃水、生理学的液体等に見出される。

第１領域には成分と相互作用する試薬、たとえば金属イ
オンに対するキレート剤または被検物質に対するｓｂｐ
構成要素の既定レベルが非拡散性に結合されている。−
アプローチにおいては、第１領域の接触部分を液体メジ
ウムと接触させる。毛細管作用による第１領域の湿潤を
、メジウムＪ３よび成分が第１＃４域のすべてを通過し
、第２の吸収性構成要素領ｉ４（「第２領域」）内へ移
動するまで継続する。第２領域は、第１領域が設けられ
ている同じ吸水性構成要素の部分であってもよいが、２
つの領域に結合された試薬の組成は異なっている。別法
として、第２領域は、第１領域と接触していて、メジウ
ムと成分の毛細管作用による第２領域への移動が可能な
別個の吸水性構成要素の部分とすることもできる。

次に、第２領域を調べて、メジウムおよび成分の移動距
離を測定する。これは一般に、成分が直接検出可能であ
るかまたは検出剤が領域に結合されている場合を除いて
、領域を検出剤と接触させることによって達成される。

検出剤は、成分が酵素標識リガント類縁体の場合のよう
に酵素を含んでいるときには、酵素の基質を与えるたと
えば現像剤溶液とすることができる。成分が無機分子で
ある場合には、検出剤は、成分と相互作用してシグナル
たとえば色を生成する物質とすることができる。たとえ
ば、その構成要素として成分があり、反応の結果着色生
成物が発生する酸化−還元反応を使用することができる
。

検出剤は、たとえば第２領域を検出剤を含むメジウム中
に浸漬するかまたは検出剤を第２領域に噴霧等によって
適用して、第２領域と接触させる水性メジウムに含有さ
せる場合が多い。

適当な相互作用が必要な程度まで起こるのに十分な時間
を設ける。この時間は、相互作用が化学的なものである
か物理的はなものであるか、関与する分子の相互作用活
性等、相互作用の性質に依存する。

適当なレベルのシグナルが発生したのち、成分が第２領
域内へ移動した距＋１１ｔまたはメジウムと成分が第２
領域内へ移動した距離の差を測定する。

この距離または差は、液体メジウム中の成分社または試
薬片に関連する。たとえば成分および試薬の既知間を用
いて標準曲線を作成し、上述の距離または差を標準曲線
と比較することによって未知量を知ることができる。

第２のメジウムが第１および第２の吸水性構成要素を通
過したのち、定性的検定では、成分が第２の吸水性構成
要素に通過した距離を測定すると、これがナンブル中の
被検物質の量に相関する。成分が標識を含有する場合に
は、通過距離は通過領域における検知可能シグナルの存
在から決定できる。標識が蛍光の場合には、たとえば、
シグナルは第２の吸性橘成要秦において直接検出できる
。

検出剤が、標識を含めたシグナル生成シスデムの部分を
形成する場合には、検出剤を第２の吸水性構成要素に結
合させるかまたは第２の吸水性構成要素を現像剤の溶液
と接触させればよい。

一般に、成分が通過した第２の吸水性構成要素に沿った
距離を定めるのに必要な囚のシグナル生成化合物が生成
するのに十分な時間が経過してからシグナルを測定する
。検知可能なシグナルが生成したならば、サンプル中の
被検物質の量または試薬もしくは成分の囚が決定できる
。すなわち、クロマトグラフ上のメジウムが通過した最
遠点と成分が通過した最遠点との間の距離が、サンプル
中の被検物質の聞または成分もしくは試薬の量の指標と
なる。成分が通過した第２の吸水性構成要素の領域は通
常、成分が存在する領域を通じて実質的に均一な検出可
能シグナルとして観察される。

本発明はまた、被検物質または関心試薬もしくは成分の
存在または存在間を分析するためのデバイスを包含する
。第１図を参照しながら説明すると、デバイスは、第１
の吸水性構成要素１０．吸収性構成要素１８および第２
の吸水性構成要素２０から構成される。第１の吸水性構
成要素は、吸収性構成要素および第２の吸水性構成要素
と交互に液体授受関係に置くことができる。別の態様に
Ｊ３いては、本発明のデバイスはさらに液体授受関係を
変えるための手段を包含する。上述のように、この手段
は物理的または機械的手段のいずれでもよく、自動化さ
れていてもされてなくてもよい。

本発明のデバイスの一態様においては、第２の吸水性構
成要素は免疫クロマトグラフである。

便宜上の問題から、本発明において使用される試薬およ
びデバイスは、サンプル中の被検物質を検定する本発明
の方法の実施に使用するための既定量をパックとして組
合せたキットとして提供することができる。たとえば、
本発明の方法に有用なキットは、上述のデバイスと上述
の成分または成分と第１の試薬をバックとして組合わせ
て構成することができる。酵素を標識として使用する場
合には、試薬には酵素標識被検物質類縁体および現像剤
溶液を包含することができ、後者には、酵素の基質らし
くは任意の付加的基質を含めたその前駆体、酵素および
補酵素、ならびに検出可能な発色団または蛍光団を与え
るのに必要な酵素生成物の任意の反応パートナ−を含有
させることができる。さらに他の添加物たとえば補助剤
として、たとえば安定剤、緩衝剤等を含有させることも
できる。各種試薬の相対量は、検定の感度を至適にでき
る試薬溶液の濃度を与えるように広範囲に変動させるこ
とができる。１種または２種以上の試薬は、賦形剤を含
有した乾燥粉末、通常は凍結乾燥物として提供し、検定
の実施に際して適当な濃度の試薬溶液に溶解させること
もできる。各試薬は別個の容器に充填してもよく、また
反応性や貯蔵寿命に問題がなければ、いくつかの試薬を
ひとつの容器内にまとめることもできる。

例 本発明を以下の例示的な例によってさらに説明する。と
くに指示のない限り、部および百分率は重量／言回を示
す。

例１ 虱潰： ＰＶＡ−ポリビニルアルコール ＹＥＳ！ｌｆｉ液−２−モルホリノ１タンスルホン酸 ＴＮＢＳ−トリニトロベンゼンスルホン酸ＨＥＰＥＳ！
ｌ衝液−ヒドロキシエチルピペラジンエタンスルホン酸 ＤＭＦ−ジメチルホルムアミド ＰＢＳ−リン酸緩ｉｌｉ食塩水−１ＱＩＩＨリン酸ナト
リウム、１５０１１Ｈ＊塩、ρ１１７ ＮＨ８−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドＩａ−免疫グロ
ブリン １ｏＧ−免疫グロブリンＧ 材料 ニトロセルロースｇｌ（孔径１２１！　）　５ｃｈｌｅ
ｉｃｔ＋ｅｒ＆　５ｃｈｕｅｌｌから入手した。アフイ
ニテイ精製つサギ抗−マウスＩＱはＺｙｌｅｄから入手
した。グルタルアルデヒド（２５％水溶液）はＳｉｇａ
＋ａから得た。

ウシＩＱＧはＭｉｌｅｓ　Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓから
入手した。

モノクローナル抗＝フルオレセイン１１Ｈ７およびモノ
クローヅル抗−ジゴキシン２Ｈ６は、フルオレセイン標
識ウシｆｑＧおよびジゴキシン標識キーホールリンベッ
トヘモシアニンをそれぞれ免疫原として用いて、標準方
法（Ｇａｌｌ’ｒＯら：Ｎａｔｕｒｅ、　２６６　：　
５５０　、１９７７　）に従って調製した。リン酸緩衝
液はＯ，１Ｍリン酸ナトリウム、０．２Ｍ食塩、ｐＨ７
，３とした。硫酸ナトリウム緩衝液は、さらに９ｗ／ｗ
％の硫酸ナトリウムを含有するリン酸緩ｗｊ液とした。

西洋ワサビペルオキシダーゼはＳｈ　ｉ　ｎｋｏ＾ｍｅ
ｒｉｃａｎから入手した。

プロッティングペーパーはＢｉｏ−Ｒａｄから入手した
（カタログ番号１６５０９２１）。カルボキシフルオレ
セインはＫｏｄａｋから入手した。

固定化抗−フルオレセインの調製 ニトロセルロース膜（７，５Ｘ９ＣＩＩ）を、＠酸ナト
リウム緩衝液中４０μｇ／ｄのウサギ抗−マウスＩｑお
よび１４／ｄウシＩ（ＪＧを含む溶液５０ｄとともに３
０分間インキュベートした。股を＠酸ナトリウム緩衝液
５０ｍで１５分間洗浄し、ついで硫酸ナトリウムＭ衝液
中６２μｇ／−のグルタルアルデヒドを含有する溶液５
０−と２時間インキュベートして固定化した。股を２回
、各５０Ｉ１１のリン酸緩衝液で１５分間洗浄し、つい
でリン酸緩衝液中１００μｇ／ｄのモノクローナル抗フ
ルオレセインコ１Ｈ７および１＃？！Ｆ／ＩＩｒＲのウ
シＩｑＧを含有する溶液５０Ｉｄと１時間インキュベー
トした。膜をリン酸緩衝液５０ＩＩｄ！で１５分間、脱
イオン水５０Ｉｄで１５分間洗浄し、０．２ＪＦＦ／ｄ
２０／３０ＰＶＡ　　５０ｍとともにインキュベートし
た。膜はついで５０℃で１５分間乾燥した。

固　　　−ジゴキシンの調製 二］・ロセルロース膜（２７，５Ｘ９ｃａ）を３Ｍ９４
６０１−ランスファーアドヘツシブを用いて３−ｍ１ｌ
酢酸ビニルフイルム上に薄層化し、ついで、硫酸ナトリ
ウム緩衝液中１μｇ／ＩＲ１のウサギ抗−マウスＩｑお
よび１　ｔｒｔｙ／ｒｒｄｌのウシＩＱＧを含有する溶
液２５０ｄと３０分間インキュベートした。膜を硫酸ナ
トリウム緩衝液２５０ｍ１で１５分間洗浄し、ついで、
硫酸ナトリウム緩衝液中６２μｇ／−のグルタルアルデ
ヒドを含む溶液２５０−と２時間インキュベートして固
定化した。膜を２回、各２５０ｄのリン酸ｗｉ笥液と１
５分間洗浄し、ついで、リン酸緩衝液中１μｔｔ／ｄの
モノクローナル抗−ジゴキシン２Ｈ６および１　ｒＩｆ
Ｊ／ｄのウシＩａＧを含有する溶液と１時間インキュベ
ートした。膜を２５０ｍのリン！！！ｌｅｉ液で１５分
間、２５０−の脱イオン水で１５分間洗浄し、０．２Ｉ
！Ｉｇ／ｄ２０／３０ＰＶＡ２５０ａｊとインキュベー
トシた。膜はついで、５０℃で１５分間乾燥した。

遮断ニトロセルロース膜の調製 ニトロセルロース膜（７，５Ｘ９ｃｍ）を硫酸ナトリウ
ム緩衝液中１Ｒｇ／Ｉ／ｒｉウシＩＱＧの溶液５０−と
３０分間インキュベートした。膜を硫酸す１−リン酸緩
衝液５０ｍで１５分間洗浄し、ついで、硫酸ナトリウム
緩衝液中６２μｇ／ｄグルグルアルデヒド溶液５０ｄと
２＠間インキュベートした。

膜を２回、各回５０ｊｌｌＩＩのリン酸緩衝液で１５分
間洗浄し、リン酸Ｍ衝液中Ｉ　Ｒｇ／ｎｅのウシＩＱＧ
を含む溶液５ＯＮ１と１時間インキュベートした。膜を
リンＦｉｒｍ液５０−で１５分間、脱イオン水５０Ｉｄ
で１５分間洗浄し、０．２１１９／ｍ２０／３０ＰＶＡ
５０＃ｌｌ！とインキュベートした。膜はついで５０℃
で１５分間乾燥した。

ジゴキシン標識ＨＩ＜　Ｐの調製 ＨＲＰの溶液（１３８ｍＨＭＥＳ緩衝液、ｐＨ５，０，
６，６Ｉｎｌ中５０＋ｙ）にエチレンジアミン（３Ｍ、
ＤＩ＋５．Ｏ；　３．３３ｍ１）および１−（３−ジメ
チルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド（Ｉ
Ｍ、Ｏ，ｌＩｄ＞を加え、この混合物を室温で１５時間
保存した。得られたアミノ化ＨＲＰを５ｅｐｈａｄｅｘ
　　Ｇ−２５上、溶出液として０．０２％す１−リウム
アジド水溶液を用いたクロマトグラフィーにより精製し
、ＨＲＰあたり平均１１個のアミン基が存在することが
明らかにされた（ＴＮＢＳ滴定）。アミノ化ＨＲＰ　（
３７，９Ｒｇ）にＨＥＰＦＳ緩函液（２００ｍＨ，１ｕ
ｌｌｓ、　Ｏ；７ａｇ）中、９５μｍ部の無水コハク酸
（ＤＭＦ中２Ｍ）を１０分間隔で加えて処理し、各添加
の５分後に１Ｍ水酸化ナトリウム１９０μｍ部を加えて
ｐＨを８に保持した。スクシニル化されたアミノ化ＨＲ
Ｐを５ｅｐｈａｄｅｘ　　Ｇ　−２５上、溶出液として
０．０２％ナトリウムアジド水溶液を用いたクロマトグ
ラフィーにより精製した。スクシニル化されたアミノ化
１−ＩＲＰ（３０，８■）をＹＥＳ緩衝液（７０ｍＨ，
１１５，Ｏ：　４．　ｌａｉり中、エチレンジアミン（
３Ｍ、０１１５．Ｏ：　２．０７ｍ）および１−（３−
ジメチルアミノプロピル）−３−■チルカルボレジイミ
ド 温で６時間処理して再アミノ化した。再アミノ化ＨＲＰ
はＳｅｐｈａｄｅｘ　　Ｇ　−　２　５上、溶出液とし
て０、０２％ナトリウムアジド水溶液を用いてクロマト
グラフィーに付し精製したところ、ｌ−Ｉ　Ｒ　Ｐあた
り１５．５個のアミン基が認められた（ＴＮＢＳ滴定）
。再アミノ化ＨＲＰ　（ＰＢＳ。

ｐ１１７．０中２η／ｄ）を２００倍過剰の３−ジゴキ
シゲニンー〇ーカルボキシメチルオキシムＮＨＳエステ
ルと反応させ、透析した。得られたジゴキシン標ｇｌＨ
ＲＰは、トＩＲＰあたり１２個のジゴキシンを有した＜
ｙｓ留アミノ基のＴＮＢＳＷ４定に基づく）。

フルオレセイン標識　−ジゴキシン２Ｈ６の製 リン酸緩衝液中モノクローナル抗ージゴキシン２Ｈ６（
７．’３■／メ，０．２ｄ）に６−カルポギシルフルオ
レセインのＮＨＳエステル（ＤＭＦ中２０１１８：５μ
１）を加え、室温で５分間ついで４℃で１６時間インキ
ュベートした。フルオレセイン標識抗ージゴキシンはＳ
ｅｐｈａｄｅｘ　　Ｇ　−　２　５上、溶出液としてリ
ンＭ緩衝液を用いて精製した。抗体１分子あたり３．６
個のフルオレセインを有することが認められた。

デバイス（第１図参照） 第１の吸水性構成要素１０−６ａｗＸ６ａｍの遮断二１
〜ロセルロース膜の小片からなる末端部１２と６ｍＸ１
０＋＋＋ａ＋の固定化抗ーフルオレセイン片からなる捕
捉パッドを、この２つの部分が１　ｍｔｔｒだけ小なる
ように３−ｎｉｌアセテートフィルム１６上に薄層化し
た。

吸収性構成要素１８−１２ｍｍ＋Ｘ５０ｍのプロッティ
ングペーパーストリップ 第２の吸水性構成要素２０（定Ｍストリップ）−固定化
抗一ジゴキシンの６　ｔｎｔｔｔ　Ｘ　９　０　ｍスト
リップ 検定時には、第１の吸水性構成要素をまず吸収性構成要
素と液体授受関係（１ａｓ＋重なっている）に置き（以
下のサンプル取り込み工程参照）、ついで第２の吸水性
構成要素と液体授受関係に置く（以下の定は工程参照）
。

検定プロトコール 検定は２工程−サンプル取り込み工程と定量工程によっ
て実施される。サンプル取り込み工程では、シンプル（
１００μ１）とフルオレセイン標識抗ージゴキシン２Ｈ
６（１．２５μ９／戒，５０μりを１６Ｘ１００履の試
験管の底部に取り、混合した。第１図に示されたような
検定デバイスの第１の吸水性構成要素の末端部を試験管
内に置き、液体を第１の吸水性構成要素に沿って吸水体
に浸透させた。液体のすべてがデバイスに取り込まれた
のら、吸収体と第１の吸水性構成要素の間の接触を停止
させた。定量工程では、定量用ストリップを捕捉パッド
のト端と接触させた。検定デバイ、スの第１の吸水性構
成要素の末端部を、ジゴキシン標ＩＨＲＰ　（２５０ｎ
Ｌ’ａｅ．１００μｊりを含有する試験管内に置き、液
体を捕捉パッドを通って定量ストリップ内に、定量スト
リップが液体で満たされるまで通過させた。定量ストリ
ップをついでデバイスから取り出し、現像剤溶液（０，
５ｍｇ／ｄのジカルボキシジン、１０ｍ）を過酸化水素
を１００ｍＮクエン酸ナトリウム、ｐＨ５，０中に含有
）中に、定量ストリップの一部に青色が発色するまで置
いた。青色領域の長さ（移動高）を測定した。これがサ
ンプル中のジゴキシン濃度に相関した。

検定結果 ジゴキシンの既知濃度を含有する血清リンプル（カラム
ジゴキシンカリブレーター、　ＳｙｖａＣｏｍｐａｎｙ
　＞を用いて一連の検定を実施した。結果は第１表にま
とめる。

（ｎｏ／ｄ） 第１表 （＃Ｉ） 上記結果は、本発明の方法およびデバイスを用いて正確
かつ高感度のジゴキシンの検定が実施できることを示し
ている。ジゴキシン濃度が増大すると、定ｍストリップ
上に移動高の増加が認められた。

例２ ジゴキシン　　ＨＰの　　の 例１に記載したデバイスを用い、フルオレセイン標識抗
−ジゴキシンの４００ｎＱ／ａｔｅ溶液１００μｅを毛
ＭＪ管作用によって、第１の吸水性構成要素から吸収体
内に通過さけた。様々な濃度のジゴキシン標識ＨＲ１）
を含む溶液を毛ｌｌ１ｌ管作用によって第１の吸水性構
成要素から第２の吸水性構成要素内へ通過させることに
より、このデバイスを用いて上記溶液を分析した。以下
の第２表に示すように、移動距離はジゴキシン標識ＨＲ
Ｐの濃度の函数であった。

第２表 り２例１に記載したデバイスを用い、様々の濃度のフル
オレセイン標識抗−ジゴキシン溶液１２０μｌを毛細管
作用によって、第１の水性構成要素を通って吸水体内に
通過さぜた。ジゴキシン標識トＩＲＰ２７５ｎｑ／ｍ！
溶液を毛ｍ管作用によって第１の吸水性構成要素を通っ
て第２の吸水性構成要素内に通過させることにより、分
析が完了した。

以下の第３表に示すように、移動距離はフルオレセイン
標識抗−ジゴキシン濃度の函数であった。

第３表 例３ フルオレセイン標識抗−ジゴキシンの濶　の測ジゴキシ
ンの濃度（ｎｇ／ｄ）　　　　　（＃）例４ 塩　　マ　　　　シ　　ム　　　　の 第１図に従って、第２の吸水性構成要素が非処理ニトロ
セルロース膜（孔径１２μ）の小切（０，５Ｘ１０ｃｍ
）であるデバイスを調製する。

第１の吸水性構成要素（０，５Ｘ１　、Ｏｃｍ’）は、
Ｗｈａｔｍａｎ　１　Ｇクロマトグラフィー用濾紙を、
カルボニルジイミダゾール（Ｒ，Ｆ、　Ｚｕｋ　、　Ｖ
、　Ｋ。

Ｇｉｎｓｂｅｒｇ、　Ｔ、　ｆｌｏｕｔｓ　　ら：　Ｃ
ｌ１ｎ、　Ｃｈｃｍ、　、　３１　：１１４４〜１１５
０．１９８６）、エチレンジアミンおよびジエチレント
リアミンペンタ酢Ｍ無水物により、メチレンクロリド中
で順次処理する。

膜は乾燥し、くり返し水洗し、再乾燥する。

これらのデバイスを用い、様々の濃度の塩化マグネシウ
ム水溶液を、第１の吸水性構成要素を通して第２の吸水
性構成要素内に、毛細管作用によって通過させる。マグ
ネシウムイオンは第１の吸水性構成要素上のキレート化
基によって取り込まれる。第２の吸水性構成要素上の塩
化マグネシウム含有領域は、ストリップを、ｐ１１９に
緩衝化したエリオフロームブラック下の希溶液で噴霧す
ることにより可視化される。移動距離は塩化マグネシウ
ム濃度の函数である。

例５ ヨウ化ナトリウム濃度の測定 上側におけるデバイスと類似のデバイスの第１の吸水性
構成要素を過剰の塩化第一鉄水溶液で処理したのら、洗
浄し、乾燥する。様々の濃度のヨウ素酸ナトリウム水溶
液を第１の吸水性構成要素を通って、第２の吸水性構成
要素内に毛細管作用で通過させる。ヨウ素酸ナトリウム
はキレ−１・化された第一鉄イオンによってヨウ化ナト
リウムに還元される。第２の吸水性構成要素が液体で満
たされたのら、第２の吸水性構成要素をデンプンとヨウ
化ナトリウムを含む現像剤溶液と接触させて、還元され
ていないヨウ素酸ナトリウム含有領域を可視化する。移
動距離はヨウ素酸ナトリウム濃度の函数である。

塩化第一鉄濃度の測定 例４に記載したデバイスと類似のデバイスを用い、様々
の濃度の塩化第一鉄水溶液を第１の吸水性構成要素を毛
細管作用によって通過させ、吸水性ストリップ内まで移
動させる。ついで０．１０４゜ ｍＨのヨウＮ耐ナトリウム溶液を第１の吸水性構成要素
を毛Ｉｔ管作用によって通過させ、第２の吸水性構成要
素内へ移動させる。還元されないヨウ素酸ナトリウムを
含む第２の吸水性構成要素上の領域を前例と同様にして
可視化する。移動距離（よ、塩化第一鉄の濃度の函数で
ある。

例７ 塩化第一鉄１１度の別法による測定 塩化第一鉄水溶液のサンプル５μｌを、第１の吸水性構
成要素を通過させるのではなく直接第１の吸水性構成要
素に適用するほかは、例６に記載した塩化第一鉄の濃度
の測定操作を同様に行う。

移動距離は、塩化第一鉄Ｑ度の函数である。

以上、本発明を例示または実施例によって詳細に説明し
たが、これは理解を容易にするためのものであって、本
発明を限定するものではない。ある種の４変および修飾
が本発明の範囲から逸脱することな〈実施可能なことは
自明である。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明によるデバイスの見取図である。

Claims (36)

【特許請求の範囲】
1. （１）第１の液体メジウムが毛細管作用によつて第１の
   吸水性構成要素領域を貫流または通過するような条件下
   に上記液体メジウムと上記第１の吸水性構成要素領域と
   を接触させることにより上記第１の液体メジウム中の試
   薬を被検物質の存在または存在量に相関して上記第１の
   吸水性構成要素領域に結合させ、 第２の液体メジウムが毛細管作用によつて上記第１の吸
   水性構成要素領域および少なくとも第２の吸水性構成要
   素領域の部分を通過するような条件下に上記第１の吸水
   性構成要素の一部を上記第２の液体メジウムと接触させ
   ることにより上記第１のメジウム中の上記被検物質の存
   在に相関して第２の液体メジウム中の成分を第２の吸水
   性構成要素領域に吸着させ、 ついで上記被検物質の量を決定するためには上記成分が
   上記第２の吸水性構成要素領域を通過した距離を測定し
   、また上記被検物質の存在を決定するためには上記第２
   の吸水性構成要素の少なくとも部分における上記成分の
   存在を確認し、ただし、上記被検物質の存在のみを確認
   する場合には上記試薬を上記第１の吸水性構成要素に結
   合させたのちに上記第１の吸水性構成要素を上記第２の
   吸水性構成要素領域と液体授受関係に置くことからなる
   被検物質の検定を実施する方法
2. （２）第１の吸水性構成要素領域を第２のメジウムと接
   触させる前に第１の吸水性構成要素領域と第２の吸水性
   構成要素領域を液体授受関係におく特許請求の範囲第１
   項に記載の方法
3. （３）試薬を結合できる結合パートナーが第１の吸水性
   構成要素領域の少なくとも部分に非拡散的に結合されて
   いる特許請求の範囲第１項に記載の方法
4. （４）成分は、第１のメジウム中における被検物質の存
   在に応答して第２の吸水性構成要素領域に結合する特許
   請求の範囲第１項に記載の方法
5. （５）試薬と被検物質は互いに結合して複合体を形成し
   、この複合体が第１の吸水性構成要素領域に結合する特
   許請求の範囲第１項に記載の方法
6. （６）成分に対する結合パートナーが第２の吸水性構成
   要素領域に非拡散的に結合されている特許請求の範囲第
   １項に記載の方法
7. （７）被検物質はｓｂｐ構成要素である特許請求の範囲
   第１項に記載の方法
8. （８）第１の吸水性構成要素領域（「第１領域」）と成
   分を含有する液体メジウムの組合せを、第１領域には上
   記成分と相互作用する試薬が非拡散性に結合され、上記
   液メジウムとそれに含有される上記成分の少なくとも部
   分が毛細管作用によつて上記第１領域のすべてを通過し
   て、第１領域とは組成が異なり、被検物質が検出される
   場合を除いて上記成分を特異的に結合できない第２の吸
   水性構成要素領域（「第２領域」）内に移動するような
   条件下に提供すること、および上記試薬が存在する被検
   物質の量に相関して第１領域に結合するように構成する
   こと、ついで 上記液体メジウム中の上記成分量または上記試薬量に相
   関する第２領域内へ上記成分が移動した距離または第２
   領域内へ上記メジウムと上記成分が移動した距離の差を
   測定することからなる検定の実施方法
9. （９）上記組合せの配置前に、第１領域を試薬含有溶液
   と接触させることよつて試薬を第１領域に非拡散性に結
   合させ、上記差または上記距離は試薬量に相関する特許
   請求の範囲第８項に記載の方法
10. （１０）試薬量は、その試薬の溶液中における被検物質
    の量に相関する特許請求の範囲第９項に記載の方法
11. （１１）第１領域および第２領域は単一の吸水性構成要
    素に一体化されている特許請求の範囲第８項に記載の方
    法
12. （１２）第１領域は第１の吸水性構成要素と一体化され
    、第２領域は第２の吸水性構成要素と一体化され、上記
    組合せの配置前に第１領域は第２領域と液体授受関係に
    置く特許請求の範囲第８項に記載の方法
13. （１３）成分と試薬はそれぞれ特異的結合ペアの構成要
    素である特許請求の範囲第８項に記載の方法
14. （１４）第２領域内へ成分が移動した距離の測定には酸
    化または還元反応を包含する特許請求の範囲第８項に記
    載の方法
15. （１５）成分は酵素標識リガント類縁体であり、試薬は
    そのリガントに対する抗体である特許請求の範囲第８項
    に記載の方法
16. （１６）メジウムおよび成分が第２領域内へ移動した距
    離の差を測定する特許請求の範囲第８項に記載の方法
17. （１７）液体メジウムとそれに含有される成分の少なく
    とも一部が毛細管作用によつて第１の吸水性構成要素領
    域（「第１領域」）のすべてを通過して、上記第１の領
    域とは組成が異なり、上記成分を特異的に結合できない
    第２の吸水性構成要素領域（「第２領域」）内へ移動す
    る条件下に、上記成分と相互作用する試薬が非拡散的に
    結合された第１領域を上記成分を含有する液体メジウム
    と接触させ、 ついで、上記液体メジウム中の上記成分量または上記試
    薬量に相関する上記第２領域内へ上記成分が移動した距
    離または上記第２領域内へ上記メジウムおよび上記成分
    が移動した距離の差を測定して液体メジウム中の成分量
    を定量する特許請求の範囲第８項に記載の方法
18. （１８）被検物質の溶液をその被検物質と反応可能な試
    薬が非拡散性に結合しているかまたは結合できる第１の
    吸水性構成要素と合し、 上記試薬と相互作用する成分を含有する液体メジウムを
    、上記第１の吸水性構成要素と組成の異なる第２の吸水
    性構成要素と液体授受関係にあるかまたはその部分であ
    る上記第１の吸水性構成要素と、上記液体メジウムが毛
    細管作用によつて上記第２の吸水性構成要素および少な
    くとも上記第２の吸水性構成要素の部分を通過するよう
    な条件下に合し、 ついで、上記溶液中の被検物質の量または上記第１の吸
    水性構成要素上の試薬量にその位置が相関する上記第２
    の吸水性構成要素上の境界を決定して検定を行う特許請
    求の範囲第１項に記載の方法
19. （１９）第１の液体メジウム中（１）第１の吸水性構成
    要素と（２）被検物質の組合せを、上記被検物質に対す
    る試薬が上記メジウム中または上記第１の吸水性構成要
    素上に存在し、上記第１の吸水性構成要素は吸収性構成
    要素と液体授受関係に置き、上記第１のメジウムが毛細
    管作用によつて上記第１の吸水性構成要素および少なく
    とも上記吸収性構成要素の一部を貫流して上記被検物質
    が上記吸水性構成要素に非拡散性に結合するような条件
    下に提供すること、 上記吸水性構成要素と上記吸収性構成要素の間に液体授
    受関係を終結させること、 第２の液体メジウム中上記第１の吸水性構成要素の部分
    と上記試薬と相互反応する成分の組合せを、上記第１の
    吸水性構成要素が第２の吸水性構成要素と液体授受関係
    にあり、上記第２のメジウムが毛細管作用によつて上記
    第１の吸水性構成要素および少なくとも上記第２の吸水
    性構成要素の部分を通過するような条件下、ただし上記
    第１の吸水性構成要素は上記吸収性構成要素および上記
    第２の吸水性構成要素と実質的に異なる時期に液体授受
    関係にあるように提供すること、および上記第１のメジ
    ウム中の被検物質の量または上記第２の液体メジウム中
    の試薬量もしくは上記成分量にその位置が相関する上記
    第２の吸水性構成要素上の境界を決定して検定を行う特
    許請求の範囲第１項に記載の方法
20. （２０）第１の液体メジウム中（１）少なくともその部
    分に第１の試薬が非拡散性に結合された第１の吸水性構
    成要素と（２）被検物質の含有が疑われるサンプルの組
    合せを、上記被検物質が上記第１の試薬に結合可能でな
    い場合には、上記被検物質と上記第１の試薬に結合可能
    な第２の試薬を上記メジウム中または上記第１の吸水性
    構成要素上に存在させ、上記第１の吸水性構成要素が吸
    収性構成要素と液体授受関係にあり、上記第１のメジウ
    ムが毛細管作用によつて上記第１の吸水性構成要素およ
    び少なくとも上記吸収性構成要素の部分を通過するよう
    な条件下に提供すること、 上記第１の吸水性構成要素と第２の吸水性構成要素を液
    体授受関係に置くこと、 第２の水性メジウム中上記第１の吸水性構成要素の部分
    および成分の組合せを、上記成分は上記第１のメジウム
    中の上記被検物質の存在に相関して上記第１の試薬に結
    合可能であり、上記第２の吸水性構成要素には少なくと
    もその部分に上記成分に対する特異的結合パートナーが
    非拡散性で均一に結合され、上記第２のメジウムは毛細
    管作用により少なくとも第１の吸水性構成要素の部分お
    よび少なくとも第２の吸水性構成要素の部分を通過する
    ような条件下に提供すること、および上記サンプル中の
    上記被検物質の存在に関連する上記第２の吸水性構成要
    素上の上記成分の存在の確認または上記サンプル中の上
    記被検物質の量に相関する上記第２の吸水性構成要素上
    の上記成分の移動距離の測定により検定を行う特許請求
    の範囲第１項に記載の方法
21. （２１）第１の吸水性構成要素と吸収性構成要素の間の
    液体授受関係は第２の吸水性構成要素と第２のメジウム
    の接触前に終結させる特許請求の範囲第２０項に記載の
    方法
22. （２２）第２の吸水性構成要素は免疫クロマトグラフで
    あり、成分は酵素を包含し、上記免疫クロマトグラフ構
    成要素に結合した上記成分の量は上記免疫クロマトグラ
    フ構成要素上の境界の位置によつて測定する特許請求の
    範囲第２０項に記載の方法
23. （２３）被検物質は薬剤であり、薬剤は好ましくはジゴ
    キシンである特許請求の範囲第２０項に記載の方法
24. （２４）成分は標識に結合した被検物質からなり、標識
    は好ましくは酵素である特許請求の範囲第２０項に記載
    の方法
25. （２５）成分に対する特異的結合パートナーは抗体であ
    る特許請求の範囲第２０項に記載の方法
26. （２６）第１の試薬は被検物質類縁体であり、第２の試
    薬は被検物質に対する抗体である特許請求の範囲第２０
    項に記載の方法
27. （２７）成分は標識に結合した第１の試薬に対する抗体
    からなり、標識は好ましくは酵素である特許請求の範囲
    第２０項に記載の方法
28. （２８）第１の水性メジウム中（１）少なくともその部
    分に第１の特異体結合ペア（ｓｂｐ）構成要素が非拡散
    性に結合されてた吸水性構成要素の部分と（２）被検物
    質の含有が疑われるサンプルの組合せを、上記被検物質
    に結合可能な第２のｓｂｐ構成要素および上記第１のｓ
    ｂｐ構成要素の相補性の第３のｓｂｐ構成要素からなる
    抱合体を上記メジウムまたは上記吸水性構成要素上に存
    在させ、上記吸水性構成要素は吸収性構成要素と液体授
    受関係にあり、上記第１のメジウムが毛細管作用によつ
    て上記吸水性構成要素および少なくとも上記吸収性構成
    要素の部分を通過し、上記抱合体を上記吸水性構成要素
    に非拡散性に結合させるような条件下に提供すること、 上記吸水性構成要素と上記吸収性構成要素の間の液体授
    受関係を終結させること、 第２の水性メジウム中上記吸水性構成要素とシグナル生
    成システムの構成要素に結合したまたは結合させること
    が可能な被検物質類縁体からなる成分の組合せを、上記
    吸水性構成要素は上記成分に対する結合パートナーが非
    拡散性に結合した免疫クロマトグラフ構成要素と液体授
    受関係にあり、上記第２のメジウムが毛細管作用により
    上記吸水性要素および少なくとも上記免疫クロマトグラ
    フ構成要素の部分を通過するような条件下、ただし上記
    吸水性構成要素は上記吸収性構成要素および上記免疫ク
    ロマトグラフ構成要素と実質的に異なる時期に液体授受
    関係にあるように提供すること、および 上記第１のメジウム中の被検物質の量にその位置が相関
    する上記免疫クロマトグラフ構成要素上の境界を決定す
    ることにより被検物を検定する特許請求の範囲第１項に
    記載の方法
29. （２９）被検物質は薬剤であり、薬剤は好ましくはジゴ
    キシンである特許請求の範囲第２８項に記載の方法
30. （３０）抱合体は被検物質に対する抗体とタンパク質か
    らなる特許請求の範囲第２８項に記載の方法
31. （３１）第１の水性メジウム中（１）被検物質類縁体が
    非拡散性に結合した吸水性構成要素の部分と（２）被検
    物質の含有が疑われるサンプルの組合せを、上記被検物
    質に結合可能な試薬を上記メジウムまたは上記吸水性構
    成要素上に存在させ、上記吸水性構成要素は吸収性構成
    要素と液体授受関係にあり、上記第１のメジウムが毛細
    管作用によつて上記吸水性構成要素および少なくとも上
    記吸収性構成要素の部分を通過し、上記試薬が上記第１
    のメジウム中の上記被検物質の量と逆相関して上記吸水
    性構成要素に非拡散性に結合するような条件下に提供す
    ること、 上記吸水性構成要素と上記吸収性構成要素の間の液体授
    受関係を終結させること、 第２の水性メジウム中上記吸水性構成要素の部分と成分
    の組合せを、上記成分はシグナル生成システムの構成要
    素に結合しているかまたは結合可能であり、上記試薬が
    上記吸水性構成要素に非拡散性に結合しているときはそ
    の試薬に結合可能であり、上記吸水性構成要素は上記成
    分に対する特異的結合パートナーが非拡散性に結合して
    いる免疫クロマトグラフ構成要素と液体授受関係にあり
    、上記第２のメジウムが毛細管作用により上記吸水性構
    成要素および少なくとも上記免疫クロマトグラフ構成要
    素の部分を通過するような条件下、ただし上記吸水性構
    成要素は上記吸収性構成要素および上記免疫クロマトグ
    ラフ構成要素と実質的に異なる時期に液体授受関係にあ
    るように提供すること、および 上記第１のメジウム中の被検物質の量にその位置が相関
    する上記免疫クロマトグラフ構成要素上の境界を決定す
    ることにより被検物質を検定する特許請求の範囲第１項
    に記載の方法
32. （３２）第１の水性メジウム中（１）被検物質に対する
    抗体が非拡散性に結合した吸水性構成要素の部分と（２
    ）被検物質の含有が疑われるサンプルの組合せを、上記
    吸水性構成要素は吸収性構成要素と液体授受関係にあり
    、上記第１のメジウムが毛細管作用によつて上記吸水性
    構成要素および少なくとも上記吸収性構成要素の部分を
    通過するような条件下に提供すること、 上記吸水性構成要素と上記吸収性構成要素の間の液体授
    受関係を終結させること、 第２の水性メジウム中上記吸水性構成要素と成分の組合
    せを、上記成分はシグナル生成システムの構成要素に結
    合しているかまたは結合可能でまた上記被検物質に対す
    る上記抗体に結合可能であり、上記吸水性構成要素は上
    記成分に対する特異的結合パートナーが非拡散性に結合
    している免疫クロマトグラフ構成要素と液体授受関係に
    あり、上記第２のメジウムが毛細管作用により上記吸水
    性構成要素および少なくとも上記免疫クロマトグラフ構
    成要素の部分を通過するような条件下、ただし上記吸水
    性構成要素は上記吸収性構成要素および上記免疫クロマ
    トグラフ構成要素と実質的に異なる時期に液体授受関係
    にあるように提供すること、および 上記第１のメジウム中の被検物質の量にその位置が相関
    する上記免疫クロマトグラフ構成要素上の境界を決定す
    るにより被検物質を検定する特許請求の範囲第１項に記
    載の方法
33. （３３）吸水性ストリップの末端部から遠位領域に分子
    量１５００未満の有機分子に対する抗体（Ａｂ＿１）が
    非拡散性に結合しているそのストリップの末端部とジゴ
    キシンの含有が疑われるサンプルを含む第１の水性メジ
    ウムを、上記有機分子に結合したジゴキシンに対する抗
    体からなる抱合体が上記第１のメジウム中または上記吸
    水性ストリップ上に存在し、上記第１のメジウムが毛細
    管作用により上記吸水性ストリップ、および少なくとも
    上記吸収性構成要素の部分を通過して、上記抱合体が上
    記Ａｂ＿１に非拡散性に結合しまたジゴキシンが存在す
    ればそれが上記抱合体に結合するような条件下に接触さ
    せること、 上記吸水性構成要素と上記吸収性構成要素の間の液体授
    受関係を終結させること、 第２の水性メジウム中上記吸水性ストリップの上記末端
    部と酵素に結合したジゴキシン類縁体からなる成分の組
    合せを、上記吸水性ストリップはジゴキシンに対する抗
    体が非拡散性に結合している免疫クロマトグラフストリ
    ップと液体授受関係にあり、上記第２のメジウムが毛細
    管作用によつて上記吸水性ストリップおよび少なくとも
    上記免疫クロマトグラフ構成要素の部分を通過するよう
    な条件下、ただし上記ストリップは上記吸収性構成要素
    および上記免疫クロマトグラフストリップと実質的に異
    なる時期に液体授受関係にあるように提供すること、お
    よび 上記サンプル中の被検物質の量にその位置が相関する上
    記免疫クロマトグラフストリップ上の境界を決定するこ
    とによりジゴキシンを検定する特許請求の範囲第１項に
    記載の方法
34. （３４）第１の吸水性構成要素、吸収性構成要素および
    第２の吸水性構成要素からなり、第１の吸水性構成要素
    は交互に上記吸収性構成要素および上記第２の吸水性構
    成要素と液体授受関係に置くことが可能な検定実施用デ
    バイス
35. （３５）（ａ）特許請求の範囲第３４項に記載のデバイ
    ス、および（ｂ）検定を実施するための試薬をセットに
    組合せてなる検定を実施するためのキット
36. （３６）特異的結合ペア（ｓｂｐ）構成要素を含有する
    第１の水性メジウムを、吸収性構成要素と液体授受関係
    にある第１の吸水性構成要素の部分と、上記第１のメジ
    ウムが毛細管作用によつて第１の吸水性構成要素と少な
    くとも上記吸収性構成要素の部分を通過するような条件
    下に接触させて上記ｓｂｐ構成要素を第１の吸水性構成
    要素に結合させること、 上記第１の吸水性構成要素を第２の吸水性構成要素と液
    体授受関係におくこと、 上記第１の吸水性構成要素の部分を、成分を含有する第
    ２の水性メジウムと、上記第２の水性メジウムが毛細管
    作用によつて第１の吸水性構成要素および少なくとも上
    記第２の吸水性構成要素の部分を通過するような条件下
    に接触させて、上記第１のメジウム中の被検物質の存在
    に関連して上記第２の水性メジウム中の成分を上記第２
    の吸水性構成要素に吸収させること、および 上記第２の吸水性構成要素の少なくとも部分における上
    記成分の存在を確認することからなる被検物質の検定の
    実施方法