JPH0249579A - 培地 - Google Patents
培地Info
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- JPH0249579A JPH0249579A JP1044393A JP4439389A JPH0249579A JP H0249579 A JPH0249579 A JP H0249579A JP 1044393 A JP1044393 A JP 1044393A JP 4439389 A JP4439389 A JP 4439389A JP H0249579 A JPH0249579 A JP H0249579A
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- wheat gluten
- glutamine
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は小麦グルテン酵素分解物を含有する培地に関す
る。本培地は動物細胞培地用培地として有用である。
る。本培地は動物細胞培地用培地として有用である。
従来の技術
従来、動物細胞用培地として、アミノ酸類、ビタミン類
、糖類、無機塩等を含有する培地（例えば、ＲＰＭ１１
６４０培地、イーグルのＭＥＭ培地など）が知られてい
る。しかしながら、これら培地を蒸気滅菌すると、培地
中のグルタミンが分解してしまい、グルタミンとして利
用されない欠点がある。これを改良するものとして、加
熱に対して安定であり、かつ動物細胞にＬ−グルタミン
として利用されるし一グルタミン誘導体（Ｌ−アミノ酸
−Ｌ−グルタミン）を含有する培地が知られている（特
開昭６１．−２７１９８５号公報）。
、糖類、無機塩等を含有する培地（例えば、ＲＰＭ１１
６４０培地、イーグルのＭＥＭ培地など）が知られてい
る。しかしながら、これら培地を蒸気滅菌すると、培地
中のグルタミンが分解してしまい、グルタミンとして利
用されない欠点がある。これを改良するものとして、加
熱に対して安定であり、かつ動物細胞にＬ−グルタミン
として利用されるし一グルタミン誘導体（Ｌ−アミノ酸
−Ｌ−グルタミン）を含有する培地が知られている（特
開昭６１．−２７１９８５号公報）。
発明が解決しようとする課題
培地を作成する際に、前記Ｌ−グルタミン誘導体以外に
培地成分として、培地に多種類のアミノ酸を加える必要
がある。
培地成分として、培地に多種類のアミノ酸を加える必要
がある。
蒸気滅菌が可能でグルタミンの培地への別添加は必要が
なく、かつ添加するアミノ酸の数を減少させた安価な動
物細胞培養用培地が求められる。
なく、かつ添加するアミノ酸の数を減少させた安価な動
物細胞培養用培地が求められる。
課題を解決するだめの手段
本発明は小麦グルテン酵素分解物を含有する培地および
該培地に酵母エキスを添加した培地を提供する。
該培地に酵母エキスを添加した培地を提供する。
本発明の培地は動物細胞の培養に用いられる培地の構成
成分として、少なくとも小麦クルテン酵素分解物が含ま
れていればいずれの培地でもよい。
成分として、少なくとも小麦クルテン酵素分解物が含ま
れていればいずれの培地でもよい。
例えば、糖類、ビタミン類および無機物を含む培地に小
麦クルテン酵素分解物を添加した培地又は糖類および無
機物に小麦グルテン酵素分解物および酵母エキスを添加
した培地である。さらに、通常の動物細胞培養に用いら
れる基礎培地に■小麦グルテン酵素分解物又は■液分解
物および酵母エキスを添加した培地も本発明の培地とし
てあげられる。さらに、本発明の培地にアミノ酸類、抗
生物質、その他動物細胞を生育させる物質などを添加し
てもよい。
麦クルテン酵素分解物を添加した培地又は糖類および無
機物に小麦グルテン酵素分解物および酵母エキスを添加
した培地である。さらに、通常の動物細胞培養に用いら
れる基礎培地に■小麦グルテン酵素分解物又は■液分解
物および酵母エキスを添加した培地も本発明の培地とし
てあげられる。さらに、本発明の培地にアミノ酸類、抗
生物質、その他動物細胞を生育させる物質などを添加し
てもよい。
本発明の培地の糖類としては、グルコース、ガラクトー
ス、フルクトースなどがあげられる。
ス、フルクトースなどがあげられる。
ビタミン類としては、ビオチン、葉酸、ｐ−アミノ安息
香酸、ニコチンアミド、パントテン酸カルシウム、ピリ
ドキシン、リボフラビン、チアミン、ンアノコハラミン
、塩化コリン、イノシトール、アスコルビン酸、チミジ
ンなどがあげられる。
香酸、ニコチンアミド、パントテン酸カルシウム、ピリ
ドキシン、リボフラビン、チアミン、ンアノコハラミン
、塩化コリン、イノシトール、アスコルビン酸、チミジ
ンなどがあげられる。
無機物としては、塩化す） ＩＪつｔ・、塩化カリウム
、リン酸−水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、
硫酸マグ２、シウト、硝酸カルシウム、塩化カルンウｌ
１、塩化マク不シウム、亜セレン酸などがあげられる。
、リン酸−水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、
硫酸マグ２、シウト、硝酸カルシウム、塩化カルンウｌ
１、塩化マク不シウム、亜セレン酸などがあげられる。
アミノ酸類としては、システィン、アルギニン、トリプ
上ファンなどがあげられる。
上ファンなどがあげられる。
抗生物質としては、ペニシリン、ストレプトマイシン、
カナマイシンなどがあげられる。
カナマイシンなどがあげられる。
動物細胞を生育させる物質としては牛胎児血清、修生血
清、馬血清などの動物血清、豚肝臓抽出濃縮物などの動
物臓器抽出物、インスリン、トランスフェリン、コレス
テロールなどのホルモン類などがあげられる。基礎培地
としては、一般の動物細胞の培養に用いられるものであ
ればいずれでもよい。例えば、ＲＰＭＩ’１６４０培地
、イークルのＭＥＭ培地、ハｌ、のＦ１２、ダルベツコ
変法イクル培地、１９９培地などがあげられる。
清、馬血清などの動物血清、豚肝臓抽出濃縮物などの動
物臓器抽出物、インスリン、トランスフェリン、コレス
テロールなどのホルモン類などがあげられる。基礎培地
としては、一般の動物細胞の培養に用いられるものであ
ればいずれでもよい。例えば、ＲＰＭＩ’１６４０培地
、イークルのＭＥＭ培地、ハｌ、のＦ１２、ダルベツコ
変法イクル培地、１９９培地などがあげられる。
本発明の培地に添加される小麦クルテン酵素分解物とし
ては、小麦クルテンを蛋白質分解酵素で分解したもので
あればいずれも用いられる。例えば、市販の小麦クルテ
ン酵素分解物、後記方法によって得られる小麦クルテン
酵素分解物等が用いられる。好ましくは、第、１図に示
すゲル濾過高性能液体クロマトグラフィーによる分子量
分布を有し、かつ後記第１表に示すアミノ酸組成を有す
る小麦グルテン酵素分解物、さらに好ましくは、第２図
に示すゲル濾過高性能液体クロマトグラフィーによる分
子量分布を有するものが用いられる。
ては、小麦クルテンを蛋白質分解酵素で分解したもので
あればいずれも用いられる。例えば、市販の小麦クルテ
ン酵素分解物、後記方法によって得られる小麦クルテン
酵素分解物等が用いられる。好ましくは、第、１図に示
すゲル濾過高性能液体クロマトグラフィーによる分子量
分布を有し、かつ後記第１表に示すアミノ酸組成を有す
る小麦グルテン酵素分解物、さらに好ましくは、第２図
に示すゲル濾過高性能液体クロマトグラフィーによる分
子量分布を有するものが用いられる。
ゲル濾過高性能液体クロマトグラフィーの測定条件
使用機器 、 島原製作所製 ＬＣ−６Ａカ ラ
ム ： ＴＳＫ Ｇｅｌ Ｇ３０００Ｓ
ｌｔｌ ＸＬ溶 媒 ０．５Ｍ食塩／４０ｍＭ
リン酸バッファ（ｐ）１８） １ｍｌ／ｍｉｎ ８０ｎｍ （第１図） 流 速 紫外部吸収 分子量マーカ 溶出位置（分） ８．４９７ １０．６６７ 分子量 ４３．０００ １３．７００ 分子量マーカー（第２図） 溶出位置（分） 分子量 １０、６６７ １３．７００ 培地に添加される小麦グルテン酵素分解物の量としては
、培地１１当り０．１−１０ｇ、好ましくは０．２５−
３ｇ（乾物換算）の範囲である。
ム ： ＴＳＫ Ｇｅｌ Ｇ３０００Ｓ
ｌｔｌ ＸＬ溶 媒 ０．５Ｍ食塩／４０ｍＭ
リン酸バッファ（ｐ）１８） １ｍｌ／ｍｉｎ ８０ｎｍ （第１図） 流 速 紫外部吸収 分子量マーカ 溶出位置（分） ８．４９７ １０．６６７ 分子量 ４３．０００ １３．７００ 分子量マーカー（第２図） 溶出位置（分） 分子量 １０、６６７ １３．７００ 培地に添加される小麦グルテン酵素分解物の量としては
、培地１１当り０．１−１０ｇ、好ましくは０．２５−
３ｇ（乾物換算）の範囲である。
培地に添加される酵母エキスとしては、一般に市販品が
用いられ、添加量としては、培地１１当り０、１ ＝２
ｇ、好ましくは０．２５−１ｇ（乾物換算）の範囲で
ある。
用いられ、添加量としては、培地１１当り０、１ ＝２
ｇ、好ましくは０．２５−１ｇ（乾物換算）の範囲で
ある。
小麦グルテン分解物は市販品以外に下記の方法で得られ
たものも使用できる。
たものも使用できる。
小麦グルテンを酵素で処理して小麦グルテン酵素分解物
を得ることができる。
を得ることができる。
使用する酵素としては、動物由来の酵素（トリプシン、
ペプシンなど）、植物由来の酵素（ブロメラン、パパイ
ンなど）、カビ由来の酵素（アルカリ性プロテアーセな
ど）、細菌由来の酵素（酸性プロテアーセなど）などが
あげられる。その使用量は、反応ｐＨ１反応温度、反応
時間などにもよるが、通常５０−５０万単位／小麦クル
テン１００ｇの範囲が好ましい。反応は各酵素の至適条
件下で行えばよいが、通常１０−７０℃で１−２４時間
行われる。
ペプシンなど）、植物由来の酵素（ブロメラン、パパイ
ンなど）、カビ由来の酵素（アルカリ性プロテアーセな
ど）、細菌由来の酵素（酸性プロテアーセなど）などが
あげられる。その使用量は、反応ｐＨ１反応温度、反応
時間などにもよるが、通常５０−５０万単位／小麦クル
テン１００ｇの範囲が好ましい。反応は各酵素の至適条
件下で行えばよいが、通常１０−７０℃で１−２４時間
行われる。
つぎに、本発明に用いる小麦クルテン酵素分解物のアミ
ノ酸組成の一例を第１表に示す。
ノ酸組成の一例を第１表に示す。
第 １ 表
（注）１．ＮＨ３遊離より推定してアスパラギン酸およ
びグルタミン酸の８０−９０％はアスパラギン酸 られる。
びグルタミン酸の８０−９０％はアスパラギン酸 られる。
２、分析方法、小麦クルテン酵素分解物を塩酸により加
水分解した後、アミノ酸アナライザー（日立Ｌ８５００
）で分析した。
水分解した後、アミノ酸アナライザー（日立Ｌ８５００
）で分析した。
小麦グルテン酵素分析物の蒸気滅菌（１２０℃、１５分
間）時のｒ＋ Ｈ安定性について、ナマルバ細胞の増殖
性を基に検討した実験例を以下に示す。
間）時のｒ＋ Ｈ安定性について、ナマルバ細胞の増殖
性を基に検討した実験例を以下に示す。
実験例１
ナマルバ細胞を２． ＯＸ １０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌに
なる様に下記組成の培地に懸濁させた懸濁戒名２ｍｌを
２４穴マイクロプレート （ヌンク社製）の名犬に添加
した後、５％ＣＯ２−９５％空気存在下、３７℃で２日
間培養した。培養後の細胞数を第２表に示す。
なる様に下記組成の培地に懸濁させた懸濁戒名２ｍｌを
２４穴マイクロプレート （ヌンク社製）の名犬に添加
した後、５％ＣＯ２−９５％空気存在下、３７℃で２日
間培養した。培養後の細胞数を第２表に示す。
培地組成
ハンクス液〔クルコースＩｇ／ｊＬ塩化ナトリウム８
ｇ ／ Ｉ、塩化カリウム０．４ｇ／ｊ！、リン酸水素
ナトリウム（無水＞４７．９ｍｇ／β、リン酸水素カリ
ウム（無水＞６０ｍｇ／β、硫酸マグネシウム（無水）
４８．８ｍｇ／ ＩＩ、塩化マグネシウム４６．８
ｍｇ／ｊｌ！、塩化カルシウム（無水）１４０ｍｇ／ｌ
及びフェノールレッド６ｍｇ／！、小麦グルテン酵素分
解物（植物性蛋白５Ｋ−５、千葉製粉■製） ０．５ｇ
／ｌ （ｐｆｌｌ、 ２． ４． ６． ８及び１０
で蒸気滅菌）、酵母エキス０．５ ｇ ／ Ｉ、システ
ィン塩酸塩−水塩６０ｍｇ／ｆｌ、トリプトファン１０
ｍｇ／β、アルギニン塩酸塩２００ｍｇ／β、ペニシリ
ン５０，０ＯＯＵ／ｊｌ！、ストレプトマイシン５０ｍ
ｇ／Ｉ！、ＨＥＰＥＳ （Ｎ−２−ヒドロキシエチルピ
ペラジン−２−エタンスルホン酸、フッドの緩衝液用試
薬＞ １０ｍＭ、インシュリン３ｍｇ／β、トランスフ
ェリン５ｍｇ／ｊ２． ピルビン酸５ｍＭ、亜セレン酸
０．１２５μＭおよびガラクト−２ニ炭酸水素ナトリウ
ムでｐＨを７．４に調節第 ２ 表 表から明らかな如く、小麦グルテン酵素分解物はｐＨ２
−８において蒸気滅菌されても、該分解物中のグルタミ
ンがほとんど分解されることなく、培地成分として、安
定して使用されることが判る。
ｇ ／ Ｉ、塩化カリウム０．４ｇ／ｊ！、リン酸水素
ナトリウム（無水＞４７．９ｍｇ／β、リン酸水素カリ
ウム（無水＞６０ｍｇ／β、硫酸マグネシウム（無水）
４８．８ｍｇ／ ＩＩ、塩化マグネシウム４６．８
ｍｇ／ｊｌ！、塩化カルシウム（無水）１４０ｍｇ／ｌ
及びフェノールレッド６ｍｇ／！、小麦グルテン酵素分
解物（植物性蛋白５Ｋ−５、千葉製粉■製） ０．５ｇ
／ｌ （ｐｆｌｌ、 ２． ４． ６． ８及び１０
で蒸気滅菌）、酵母エキス０．５ ｇ ／ Ｉ、システ
ィン塩酸塩−水塩６０ｍｇ／ｆｌ、トリプトファン１０
ｍｇ／β、アルギニン塩酸塩２００ｍｇ／β、ペニシリ
ン５０，０ＯＯＵ／ｊｌ！、ストレプトマイシン５０ｍ
ｇ／Ｉ！、ＨＥＰＥＳ （Ｎ−２−ヒドロキシエチルピ
ペラジン−２−エタンスルホン酸、フッドの緩衝液用試
薬＞ １０ｍＭ、インシュリン３ｍｇ／β、トランスフ
ェリン５ｍｇ／ｊ２． ピルビン酸５ｍＭ、亜セレン酸
０．１２５μＭおよびガラクト−２ニ炭酸水素ナトリウ
ムでｐＨを７．４に調節第 ２ 表 表から明らかな如く、小麦グルテン酵素分解物はｐＨ２
−８において蒸気滅菌されても、該分解物中のグルタミ
ンがほとんど分解されることなく、培地成分として、安
定して使用されることが判る。
次に小麦クルテン酵素分解物と酵母エキスとの混合によ
るナマルバ細胞の増殖性についての実験例を示す。
るナマルバ細胞の増殖性についての実験例を示す。
実験例２
実験例１において、ナマルバ細胞の濃度２．０×１０５
ｃｅ１１ｓ／ｒｒＩ！２を４． ２ Ｘ １ ０ ５ｃ
ｅｌｌｓ／ ｍｌに、培地組成の小麦グルテン酵素分解
物（植物性蛋白ＳＫ５、千葉製粉■製）０．５ｇ／ｆｆ
ｌを参考例１で得られた小麦クルテン酵素分解物（濃度
：０，０．５１．２．５．５及び１０ｇ＃）に代える以
外は実験例１と同様に培養した。培養後の細胞数を第３
表に示す。
ｃｅ１１ｓ／ｒｒＩ！２を４． ２ Ｘ １ ０ ５ｃ
ｅｌｌｓ／ ｍｌに、培地組成の小麦グルテン酵素分解
物（植物性蛋白ＳＫ５、千葉製粉■製）０．５ｇ／ｆｆ
ｌを参考例１で得られた小麦クルテン酵素分解物（濃度
：０，０．５１．２．５．５及び１０ｇ＃）に代える以
外は実験例１と同様に培養した。培養後の細胞数を第３
表に示す。
第 ３ 表
培養後の細胞数を第４表に示す。
第 ４ 表
４．９
実験例３
実験例１において用いた培地中の小麦クルテン酵素分解
物及び酵母エキスの使用量を第３表に示す使用量に変え
る以外は実験例１と同様に培養した。
物及び酵母エキスの使用量を第３表に示す使用量に変え
る以外は実験例１と同様に培養した。
細胞数： ｘｌＱ’ ｃｅｌｌｓ／ｍｌ実験例４
実験例１において、ナマルバ細胞の濃度２．０×１０５
ｃｅｌ Ｉｓ／ ｒｒ（Ｑを３． ＯＸ １０５ｃｅｌ
ｌｓ／ｍｆ！に、培養日数２日間を３日間に、及び小麦
グルテン酵素分解物（植物性蛋白５Ｋ−５、千葉製粉■
製）０．５ｇ／ｊ２を参考例１で得られた小麦グルテン
酵素分解物０．５ｇ／Ｉｌに代えて、さらに培地にリバ
ーコンセントレー）２０！−３（豚肝臓抽出濃縮物シグ
マ社製）０．２５ｇ／ｊ！、コレステロール０．１ｍｇ
／！もしくは１．０ ｍｇ／ Ｉｔ又はイノシトール１
０ｍｇ／ｆｌを添加する以外は実験例１と同様に培養し
た。
ｃｅｌ Ｉｓ／ ｒｒ（Ｑを３． ＯＸ １０５ｃｅｌ
ｌｓ／ｍｆ！に、培養日数２日間を３日間に、及び小麦
グルテン酵素分解物（植物性蛋白５Ｋ−５、千葉製粉■
製）０．５ｇ／ｊ２を参考例１で得られた小麦グルテン
酵素分解物０．５ｇ／Ｉｌに代えて、さらに培地にリバ
ーコンセントレー）２０！−３（豚肝臓抽出濃縮物シグ
マ社製）０．２５ｇ／ｊ！、コレステロール０．１ｍｇ
／！もしくは１．０ ｍｇ／ Ｉｔ又はイノシトール１
０ｍｇ／ｆｌを添加する以外は実験例１と同様に培養し
た。
培養後の細胞数を第５表に示す。
第 ５ 表
本発明の培地はナマルバ細胞、ヒト胃癌由来ＫＡＴＯ−
１１１細胞、ヒト子宮頚癌由来ＨｅＬａ細胞、ヒト羊膜
由来ＦＬ細抱、ヒト白血病由来ＨＬ６０細胞、アフリカ
ミドリザル腎由来Ｖｅｒ。
１１１細胞、ヒト子宮頚癌由来ＨｅＬａ細胞、ヒト羊膜
由来ＦＬ細抱、ヒト白血病由来ＨＬ６０細胞、アフリカ
ミドリザル腎由来Ｖｅｒ。
細胞、マウス繊維芽細胞Ｌ９２９細胞などの培養に用い
ることができる。
ることができる。
以下に実施例を示す。
実施例１
ナマルバ細胞を５ Ｘ １０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌになる
様に下記組成の培地に懸濁させた懸濁波谷２ｍｌを２４
穴マイクロプレート（ヌンク社製）の多穴に添加した後
、５％ＣＯ□−９５％空気存在下、３７℃で２日間培養
した。培養後の細胞数は？、 ＯＸ １０５ｃｅｌｌｓ
／ｍｌであった。
様に下記組成の培地に懸濁させた懸濁波谷２ｍｌを２４
穴マイクロプレート（ヌンク社製）の多穴に添加した後
、５％ＣＯ□−９５％空気存在下、３７℃で２日間培養
した。培養後の細胞数は？、 ＯＸ １０５ｃｅｌｌｓ
／ｍｌであった。
培地組成
ハンクス液、植物性蛋白５Ｋ−５０，５ｇ／ｊ！、シス
ティン塩酸塩−水塩６０ｍｇ／ｊ！、）リブトファン１
０ｍｇ／ｊ！、アルギニン塩酸塩２００ｍｇ／Ｉｌ、ペ
ニシリン５０，０ＯＯＵ／ｊ！、ストレプトマイシン５
０＋ｎｇ／β、ＨＥＰＥＳ １０ｍＭ、インシュリン３
ｍｇ／β、トランスフェリン５ｍｇ／ｊｉ！、ピルビン
酸５ｍＭ、亜セレン酸０．１２５μＭ、ガラクトス１ｇ
／Ｉｌ及びＲＰＭ１１６４０培地のビタミン混合物、ｐ
Ｈ７，４ 実施例２ ナマルバ細胞を５． ＯＸ １０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌに
なる様に下記組成の培地に懸濁させた懸濁液２５ｍ１を
Ｆ７５ｃｉｌ培養フラスコ （コーニング社製）に添加
した後、３７℃で３日間培養したところ、細胞数が１、
０７ Ｘ １０６ｃｅｌｌｓ／ｍｌに増殖した。ついで
、細胞数を再び５． ＯＸ １０５ｃｅｌｌｓ／ ｍｌ
に下げた後、同様に培養したところ、細胞数が１．０５
Ｘ １０６ｃｅｌｌｓ／ｍｌまで増殖した。
ティン塩酸塩−水塩６０ｍｇ／ｊ！、）リブトファン１
０ｍｇ／ｊ！、アルギニン塩酸塩２００ｍｇ／Ｉｌ、ペ
ニシリン５０，０ＯＯＵ／ｊ！、ストレプトマイシン５
０＋ｎｇ／β、ＨＥＰＥＳ １０ｍＭ、インシュリン３
ｍｇ／β、トランスフェリン５ｍｇ／ｊｉ！、ピルビン
酸５ｍＭ、亜セレン酸０．１２５μＭ、ガラクトス１ｇ
／Ｉｌ及びＲＰＭ１１６４０培地のビタミン混合物、ｐ
Ｈ７，４ 実施例２ ナマルバ細胞を５． ＯＸ １０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌに
なる様に下記組成の培地に懸濁させた懸濁液２５ｍ１を
Ｆ７５ｃｉｌ培養フラスコ （コーニング社製）に添加
した後、３７℃で３日間培養したところ、細胞数が１、
０７ Ｘ １０６ｃｅｌｌｓ／ｍｌに増殖した。ついで
、細胞数を再び５． ＯＸ １０５ｃｅｌｌｓ／ ｍｌ
に下げた後、同様に培養したところ、細胞数が１．０５
Ｘ １０６ｃｅｌｌｓ／ｍｌまで増殖した。
培地組成
ハンクス液、植物性蛋白５Ｋ−５０，５ｇ／β、酵母エ
キス０．５ｇ／Ａ、ＨＥＰＥＳ １０ｍＭ。
キス０．５ｇ／Ａ、ＨＥＰＥＳ １０ｍＭ。
インシュリン３ｍｇ／１１ ）ランスフェリ２５ｍｇ／
１１ピルビン酸５ｍＭ、亜セレン酸０．１２５ ｍＭ及
ＩＪガラクトースＩｇ／β、ｐＨ７，４ 実施例３ ヒト胃がん由来ＫＡＴＯＩＩＴ細胞を２．５ Ｘ １０
５ｃｅｌｌｓ／ｍ＋になる様に実施例２で用いた培地に
牛胎児血清４０ｇ／Ａを添加した培地で懸濁した懸濁液
１０ｍ１をＦ２５ｃＩＩｔ培地フラスコ（コーニング社
製）に添加した後、３７℃で５３日日間化培養を行った
。各培養日数の日にそれぞれ細胞数を測定した後、再度
細胞数を１０ Ｘ １０ ’ｃｅｌｌｓ／ｍｌに下げ培
養を続けた。その結果を第６表に示す。
１１ピルビン酸５ｍＭ、亜セレン酸０．１２５ ｍＭ及
ＩＪガラクトースＩｇ／β、ｐＨ７，４ 実施例３ ヒト胃がん由来ＫＡＴＯＩＩＴ細胞を２．５ Ｘ １０
５ｃｅｌｌｓ／ｍ＋になる様に実施例２で用いた培地に
牛胎児血清４０ｇ／Ａを添加した培地で懸濁した懸濁液
１０ｍ１をＦ２５ｃＩＩｔ培地フラスコ（コーニング社
製）に添加した後、３７℃で５３日日間化培養を行った
。各培養日数の日にそれぞれ細胞数を測定した後、再度
細胞数を１０ Ｘ １０ ’ｃｅｌｌｓ／ｍｌに下げ培
養を続けた。その結果を第６表に示す。
第 ６ 表
実施例４
ナマルバ細胞を４．２ Ｘ １０５ｃｅｌｌｓ／−にな
る様に下記組成の培地５ｍｌに懸濁させた後、Ｆ２５Ｃ
ｎｌ培養フラスコ（コーニング社製）に添加し、３７℃
で第７表に示す如く継代培養を行った。その結果を第７
表に示す。
る様に下記組成の培地５ｍｌに懸濁させた後、Ｆ２５Ｃ
ｎｌ培養フラスコ（コーニング社製）に添加し、３７℃
で第７表に示す如く継代培養を行った。その結果を第７
表に示す。
培地組成
塩化ナトリウム６．８ｇ／Ａ、塩化カリウム０．４ｇ／
ｊ！、リン酸二水素ナトリウム１０８．７ｍｇ／ｆｌ、
硫酸マグネシウム９７．７ ｍｇ／ ｊ！、塩化カルシ
ウム０．２ｇ／Ｉｌ、グルコースＩｇ／Ｃフェノールレ
ッド６ｍｇ／β、トリプトファン１０ｍｇ／Ａ、アルギ
ニン塩酸塩０．２ｇ／ｊ２、システィン塩酸塩−水塩６
０ｍｇ／ｌ、参考例１で得られた小麦グルテン加水分解
２．５ｇ／ｊ２、酵母エキス０．５ｇ／Ｃリバーコンセ
ントレート２０２−３ ０．２５ｇ／Ｃコレステロール
０、１ ｍｇ／ Ｒ１炭酸水素ナトリウム１．５ｇ／＊
、ペニシリン５００００Ｕ／β、ストレプトマイシン５
０，０００μｇ／ＣＨＥＰＥＳ ２．３８３ｇ／Ｒ，
インシュリン３ｍｇ／１１ ）ランスフェリン５ｍｇ／
Ｊ、ピルビン酸ナトリウム５５０．２ｍｇ／１２、亜セ
レン酸１６．１３μｇ／ｊ！、ガラクトースＩｇ／Ｃｐ
Ｈ７，４ 第 ７ 表 実施例５ ハンクス液〔グルコースＩｇ／ｊ７．塩化ナトリウム８
ｇ／Ｒ，塩化カリウム０．４ｇ／β、リン酸−水素ナト
リウム（無水）４７．９ｍｇ／ｊ、 リン酸二水素カリ
ウム（無水）６０ｍｇ／Ｉｌ、硫酸マグネシウム（無水
）４８．８ｍｇ７ｊ！、塩化マグネシラ１１４６、８
ｍｇ／ ｉ’、塩化カルシウム（無水）１４０ｍｇ／Ｉ
！及びフェノールレッド６ｍｇ／ｊＪに植物性蛋白ＳＫ
〜５ ０．５ｇ／矛、システィン塩酸塩−水塩６０ｍｇ
／ｊ！、トリプトファン１０ｍｇ／β、アルギニン塩酸
塩０．２ｇ／Ａ、ペニシリン５０，０ＯＯＵ／！、スト
レプトマイシン５０ ｍｇ／ Ｒ、）ＩＥＰＢ３１０
ｍＭ。
ｊ！、リン酸二水素ナトリウム１０８．７ｍｇ／ｆｌ、
硫酸マグネシウム９７．７ ｍｇ／ ｊ！、塩化カルシ
ウム０．２ｇ／Ｉｌ、グルコースＩｇ／Ｃフェノールレ
ッド６ｍｇ／β、トリプトファン１０ｍｇ／Ａ、アルギ
ニン塩酸塩０．２ｇ／ｊ２、システィン塩酸塩−水塩６
０ｍｇ／ｌ、参考例１で得られた小麦グルテン加水分解
２．５ｇ／ｊ２、酵母エキス０．５ｇ／Ｃリバーコンセ
ントレート２０２−３ ０．２５ｇ／Ｃコレステロール
０、１ ｍｇ／ Ｒ１炭酸水素ナトリウム１．５ｇ／＊
、ペニシリン５００００Ｕ／β、ストレプトマイシン５
０，０００μｇ／ＣＨＥＰＥＳ ２．３８３ｇ／Ｒ，
インシュリン３ｍｇ／１１ ）ランスフェリン５ｍｇ／
Ｊ、ピルビン酸ナトリウム５５０．２ｍｇ／１２、亜セ
レン酸１６．１３μｇ／ｊ！、ガラクトースＩｇ／Ｃｐ
Ｈ７，４ 第 ７ 表 実施例５ ハンクス液〔グルコースＩｇ／ｊ７．塩化ナトリウム８
ｇ／Ｒ，塩化カリウム０．４ｇ／β、リン酸−水素ナト
リウム（無水）４７．９ｍｇ／ｊ、 リン酸二水素カリ
ウム（無水）６０ｍｇ／Ｉｌ、硫酸マグネシウム（無水
）４８．８ｍｇ７ｊ！、塩化マグネシラ１１４６、８
ｍｇ／ ｉ’、塩化カルシウム（無水）１４０ｍｇ／Ｉ
！及びフェノールレッド６ｍｇ／ｊＪに植物性蛋白ＳＫ
〜５ ０．５ｇ／矛、システィン塩酸塩−水塩６０ｍｇ
／ｊ！、トリプトファン１０ｍｇ／β、アルギニン塩酸
塩０．２ｇ／Ａ、ペニシリン５０，０ＯＯＵ／！、スト
レプトマイシン５０ ｍｇ／ Ｒ、）ＩＥＰＢ３１０
ｍＭ。
インシュリン３ｍｇ／ｊ、）ランスフェリン５ｍｇ／β
、ピルビン酸５ｍＭ、亜セレン酸 ０１２５μＭ１ガラ
トクトース１ ｇ／ｊ！及びＲＰＭ１１６４０培地のビ
タミン混合物を添加し培地を得た。
、ピルビン酸５ｍＭ、亜セレン酸 ０１２５μＭ１ガラ
トクトース１ ｇ／ｊ！及びＲＰＭ１１６４０培地のビ
タミン混合物を添加し培地を得た。
実施例６
実施例５において、ＲＰＭ１１６４０培地のビタミン混
合物の代わりに酵母エキス０．５ｇ／ｊ２を用いる以外
は実施例５と同様にして培地を得た。
合物の代わりに酵母エキス０．５ｇ／ｊ２を用いる以外
は実施例５と同様にして培地を得た。
参考例１
小麦グルテンを５Ｗ／Ｖ％になる様に水溶液に懸濁した
後、塩酸でｐＨを４に調整した。該懸濁液にスミチーム
ＲＰ（酸性プロテアーセ：新日本化学社製）をグルテン
当りＩＷ／Ｖ％加え、５０℃で２時間振盪した後、カセ
イソーダでｐＨを７に調整した。これにスミチームＭＰ
（アルカリ性プロテアーゼ：新日本化学社製）をグルテ
ン当りＩＷ／Ｖ％加え、５０℃で２時間振盪後、遠心分
離（３０００ｒ、ｐ１ｍ８．１０分）し、上清を小麦ク
ルテン酵素分解物（グルテン濃度５Ｗ／Ｖ％）として得
た。
後、塩酸でｐＨを４に調整した。該懸濁液にスミチーム
ＲＰ（酸性プロテアーセ：新日本化学社製）をグルテン
当りＩＷ／Ｖ％加え、５０℃で２時間振盪した後、カセ
イソーダでｐＨを７に調整した。これにスミチームＭＰ
（アルカリ性プロテアーゼ：新日本化学社製）をグルテ
ン当りＩＷ／Ｖ％加え、５０℃で２時間振盪後、遠心分
離（３０００ｒ、ｐ１ｍ８．１０分）し、上清を小麦ク
ルテン酵素分解物（グルテン濃度５Ｗ／Ｖ％）として得
た。
発明の効果
本発明の培地はグルタミンがペプチドの形で存在する為
、蒸気滅菌してもり゛ルタミンが分解されることがなく
グルタミンを別途添加する必要はなし）。又、小麦グル
テン酵素分解物中には多種類のアミノ酸が含まれている
ため、別途添加するアミノ酸の種類も少なくなり、経済
的にも安価な培地となる。
、蒸気滅菌してもり゛ルタミンが分解されることがなく
グルタミンを別途添加する必要はなし）。又、小麦グル
テン酵素分解物中には多種類のアミノ酸が含まれている
ため、別途添加するアミノ酸の種類も少なくなり、経済
的にも安価な培地となる。
第１及び２図は本発明の培地に添加される小麦グルテン
酵素分解物のゲルｐ過高性能液体クロマトグラフィーに
よる分子量分布パターンの一例を示す。 但し、数値は溶出時間（分）、カッコ内の数値は分子量
を示す。
酵素分解物のゲルｐ過高性能液体クロマトグラフィーに
よる分子量分布パターンの一例を示す。 但し、数値は溶出時間（分）、カッコ内の数値は分子量
を示す。
Claims (2)
- （１）小麦グルテン酵素分解物を含有する培地。
- （２）小麦グルテン酵素分解物および酵母エキスを含有
する培地。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1044393A JPH0249579A (ja) | 1988-02-29 | 1989-02-23 | 培地 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4705488 | 1988-02-29 | ||
| JP63-47054 | 1988-02-29 | ||
| JP1044393A JPH0249579A (ja) | 1988-02-29 | 1989-02-23 | 培地 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0249579A true JPH0249579A (ja) | 1990-02-19 |
Family
ID=26384289
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1044393A Pending JPH0249579A (ja) | 1988-02-29 | 1989-02-23 | 培地 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0249579A (ja) |
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-
1989
- 1989-02-23 JP JP1044393A patent/JPH0249579A/ja active Pending
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