JPH02500540A - 液体試料中の抗原または抗体の存在を確認する方法と装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 液体試料中の抗原または抗体の存在を′＆ｖ認する方法と装置 抗原と特異的に結合する抗体がその表面上に固定されている固体を液体試料中に 浸せきし、染料で直接的にラベルされた接合抗体、または二次反応において染料 を形成する酵素と接合した接合抗体で更に処理する、液体試料中の抗原の存在を 確認するための多数の方法が知られている。

もしも液体試料中にめる抗原が存在すれば、この抗原は固体上に固定された抗体 と結合し、一方、過剰に存在する接合した、またはラベルされた他の抗体は抗原 に結合する。

このようにして、もしもめる抗原が試料中に存在すれば、固体上に染料が固定さ れまたは形成される；抗原が存在しなければ染料の固定または形成はない。

また、たとえば米国特許第４．６３２．９０１号に開示されているように、液体 中の抗原の存在を確認するための種々の装置が知られでいる。

この装置は、多孔質吸着剤が充填された円筒と、この吸着剤上部の、円筒の上端 部に隣接した横断的膜と、この膜上部の濾斗部から成る。抗原との結合が意図さ れる、対応する抗体は、それ自体、膜上に結合している。

この装置を使用するときには、検討されるべき試料が濾斗部に注ぎ込まれ、吸着 剤によって膜を透過され、試料が含む抗原は膜上に固定された抗体と結合せしめ られる。

かかる装置は、検討される試料容積があまりに大きくあるべきではなく、またあ まりに小量であるべきでもないので、試験されるべき特定容積の試料を濾斗部中 にピペットによって導入しなければならず、実験室的用途には確かに好適である 。

しかしながら、かかる容積の測定またはピペットの使用は、たとえば妊娠試験の ように、家庭での使用が困難である。なぜならば、多くの人々はピペットのよう な器具の使用に不慣れであり、従ってかかる方法および装置は極めて大きな誤差 リスクを伴う。

家庭での使用のためには、試験の実施が単純であり、かつ出来るだけ誤差の可能 性がなく信頼できるものでなければならない。

従って本発明は、従来の問題点にもとづいて、液体試料中の抗原または抗体の存 在を確認するための方法および装置を提供するものであり、この方法は不慣れな 人によって行なわれたときにとりわけ容易であり、かつ信頬性良く、かつ事実上 誰れもができるものである。

特に本発明の方法はピペットによる液体の採取を避け、また容積の何らかの他の 測定を回避することを意図している。好ましくは、尿のような試験溶液の移し変 えさえも回避すべきである。

液体試料中の抗原または抗体の存在を確認するための本発明による方法は、対応 する抗体または対応する抗原がその上に結合しており、かつ液体を吸収する多孔 質吸収剤が隣接する多孔質膜、および抗原または抗体と結合した接合した、また はラベルされた抗体と試料を接触せしめ、場合によっては、かかる抗体を染料の 形成下に発色させる方法であり、吸収剤の多孔容積を部分的にのみ満たすような 容積の液体試料が容器中に導入され、次いで吸収剤がそれに隣接する膜と共に液 体試料中に浸漬され、液体試料は実質的に完全に、または予め決定された容積が 膜を通って、かつ重力に抗して吸収剤中に吸込まれ、最後に試料から膜を除去し た後に、この膜を発色剤溶液中に浸漬し、重力に抗して発色剤溶液を吸収剤中に 吸込ませることに特徴がある。

接合した、またはラベルした抗体は液体試料と共に、または液体試料の後に膜を 経て吸引される。このために膜は吸収される液体試料中に含まれるか、または液 体試料の後に吸引される別個の溶液中に配置される。

吸収剤の容積および吸収されるべき液体試料の容積は、それぞれ、液体試料が吸 引されているとき吸収剤の孔が部分的にのみ満たされることが必須である。この 理由は吸収剤がその中に吸引すべき液体試料の望ましい容積のための十分な吸引 力を保持しなければならないからである。これは吸収剤の多孔がはやばやと液体 で満たされる場合にはあたらない、更に吸収剤は接合した、またはラベルされた 抗体または発色剤溶液を引き続き吸引するための十分な吸引能力を保持している べきである。

従って、本発明による方法は液体試料における抗原および抗体の両方の存在の確 認に使用することができる。抗原の確認の場合には、膜上に抗体が結合されてお り、この抗体にめられる抗体が結合し、次にこの抗原に、接合した、またはラベ ルされた第２の抗体が結合する。抗体の確認の場合には請求められる抗体が結合 するようになる抗原が膜に結合している。接合した、またはラベルされた第２の 抗体は、次いで抗原に結合した第１の抗体と結合するようになる。

好ましくは使用される接合抗体は、二次反応において染料を形成する酵素または 以後の酸化または還元によって染料を形成する基のような染料形成剤と接合した 抗体である。

抗体が直接的に染料でラベルされることを避けるために、二次反応または発色反 応において、接合した抗体が抗原および固定された抗体を介して、または第１の 抗体および固定された抗原を介して膜に結合したときにのみ染料が形成され、結 果を偽ることになる他の手段による膜への染料の吸収が起らないことを確実にす ることが可能である。

二次反応または染料の発色は単純であって抗原を膜と結合させ、この膜を隣接す る吸収剤と共に発色剤溶液中に単に浸漬することを要求するだけである。同時に 吸収剤は膜を通して発色剤溶液を吸引することができる十分な遊離孔をなお保持 すべきである。このことは、最初の作業段階においては、吸収剤の孔容積の一部 分のみが液体試料で満たされることを意味する。

一般に、膜上の第１の抗体を介して抗原を固定するための、または膜上の抗原を 介して第１の抗体を固定するための液体試料の吸引と発色剤溶液の吸引前との間 に膜から過剰の試料物質および／または接合またはラベルした抗体を洗い落すこ とが好都合である。

これは、たとえば水を流しながら、または膜をすすぎ水に浸漬し、次いですすぎ 水を吸取ることによって行なわれる。

更に、液体試料を膜を通して吸引させる前に膜の孔をふさぐであろう固体成分を 除去するために液体試料を濾過することが有利である。

本発明の方法においては、一方では吸収剤の全ての孔の容積が試料で満たされる ことを避けるために、他方では、あまりにも小量の孔容積において吸引すること を避けるために試料容積をある程度決定することが重要である。なぜならば、極 あて小量の抗原や抗体が膜に結合している場合には不十分な着色反応がもたらさ れるからである。

本発明による方法は実施が極めて簡単であり、不慣れな人でさえも誤差のリスク から事実上開放される。

何らの誤差の可能性なしで、縁部まで満たすことができ、たとえば妊娠試験のた めに尿流中に保持される形である小さい計量ビーカーで液体の特定容量が計量さ れ、そしてこの液体はその中で試験が行なわれる試料容器に移される。この代り に、また試料容器をそれ自体、計量ビーカーとして、かつ尿流中に保持されるよ うに構成することもできる。

この場合には、揺動による誤差源の可能性を伴う計量ビーカーを傾けて液体を試 料容器中に流出させる必要がない。

いずれの場合においても、次いで端部に膜を有する吸収剤容器が試料容器中に浸 漬され、従って試料溶液は膜を通して吸収剤中に吸込まれる。試料の特定容積ま たは好ましくは全試料が吸引によって吸込まれたとき、吸収剤容器を取り出し、 可能ならば洗浄し、次いで発色剤溶液中に浸漬する。

ある時間の後に、吸収剤容器を取り出し、試験をした膜がどのような発色反応を したかを視覚で確かめる。

ここで液体試料の予め決定された容積について注意がはられれるならば、このこ とは正確に順守する必要はないが、たとえば定性的結果に不利な影響を与えない ２０％または３０％までの変動とすることができる。

上記試験の実施の単純性および確実性の故に、本発明の方法および装置は家庭で 使用することができる。

その利点は下記のとおりである。試料液体をピペットで移し変える必要がない。

試料液体を濾斗中に、そしてこの液体が振とうされる危険性を伴う、股上に注ぐ ことが不必要である。

膜を単に浸漬するだけで、振とうの危険性なしで自動的に試料の膜透過がもたら される。

あるいは試験者の電話等による呼び出しによって、たとえ試験が中断されても、 たとえば米国特許第４，６３２、９０１号による装置の場合においてありうるよ うな・試験結果に被害を与えるであろう、膜が乾燥しきることがない。

膜の小さい表面積および比較的大きい透過量によって潜在的に高い感度水準が得 られる。小さい膜面積の理由によって、膜上に小量の第１の抗体が固定されるこ とが要求されるのみなので試薬の費用が最低になる。

また、第２の抗体に結合されるべき第１の抗体または抗原に比較して第２の接合 した、またはラベルされた抗体が過剰に存在し、かつ試料容器中に供給されるの で、第２の接合した、またはラベルされた抗体は試料が注ぎ込まれるときに試料 とブレンドされることも注目されるべきである。

とりわけ好都合な実施例によれば、本発明により用いられる膜に、試験が望むよ うに進行しているか、または過度に長期間の保存などによって役に立たなくなっ たことを同時に確認することができるモニター機能を同時に設けることができる 。このために、第１の抗体または抗原は膜の一部分に結合しているのみであり、 一方、膜の他の部分には第２の接合した、またはラベルされた抗体と結合する特 定の抗原または他の抗体が固定される。

もしも試験に適切になお進行中であるならば、いずれの場合においても、試料中 に過剰に存在する接合した、またはラベルされた第２の抗体が結合する。

もしもそれが、抗原ではなく、第２の抗体の結合のために固定された、第２の抗 体以外の抗体であるならば、この固定は第２の抗体を経て、またはこの抗体に結 合した酵母を経て直接に起る。

本発明による方法に使用した装置は、従来技術によって用いられた他の装置とは 同様に実質的に異なる。

抗原と結合するようになる抗体が結合している多孔質膜部、およびこの膜部に隣 接する多孔質吸収剤のカラムを育する本発明による装置は、試料容器および粒状 吸収剤容器を特徴とし、後者の粒状吸収剤容器は一端が膜部によって封じられて おり、他端が開放しており、試料容器および吸収剤容器は、底部に膜を育する吸 収剤容器が試料容器中に浸漬できる大きさになっている。

この装置の場合においては、吸収剤から分離された膜が使用され、この膜は厚み が少なく、かつ可撓性であるので、吸収剤がカラム内に押し込まれるときに膜が 外側に曲がる危険性がある。従って、吸収剤と膜との間に多孔質の硬い支持部材 を設けることが好都合である。それ故に、吸収剤は塊状であるか、または一本の 柱状物である。

好ましくは、吸収剤は柱状物であり、膜部に一体的に接続されている。かかる吸 収剤は、たとえば一端で連結された合成プラスチック材料の多孔質棒から成り、 従ってセルロース材料等から成る多孔質膜と一体化される。

必須であることは、液体に対して非透過性であるケーシングによって吸収剤が囲 まれていることであり、この結果、試料が膜を通してのみ吸収剤中に吸引される 。すなわち、ケーシングは液体に対して非透過性であり、柱状の吸収剤を収容す る筒状金属容器または合成プラスチック外皮である。

特に後者のプラスチック容器の場合には、筒状吸収剤容器を、いくつかのかかる 容器が相互に連結され、要求によって恐らくは希望する吸収剤容器の単位を側方 に曲げることによって、一つ一つに引きちぎったり、または破壊することができ る形状で市販することもでき、個々の連結された吸収剤容器の間に接断線または 容易に引きちぎることができる弱い部分の線を設けることが好都合である。

本発明の他の実施例の場合においては、複数の吸収剤容器を相互に硬く連結する ことができ、恐らくはたとえば実験室または医学的用途において一連の試験を実 施することができる。

かかる複合容器は、たとえば希釈試験板（ｄｉｌｕｔｉｏｎｔｅｓｔ　ｐｌａｔ ｅ）と共に用いることができ、希釈試験板における凹みが試料容器として役立つ 。

かかる装置によれば、連結した吸収剤容器が希釈試験板におけるいくつかの凹み の中に同時に浸漬されるので、−回でいくつかの試験を同時に実施することが可 能である。

膜の孔の目詰りを回避するために、膜と接触する以前に試料から固体粒子を除去 することが好都合であるので、試料の流れの方向および重力に反して腹部の前に フィルターを介在させるのが好ましい。かかるフィルターは膜の直前に設けられ 、吸収剤容器に固定された濾過板であっても良い、しかしながら、フィルターは 、また、全液体試料が膜に到達する前にフィルターを通過しなければならない好 適な位置に試料容器中に取り入れることもできる。

本発明による好ましい装置は、外部容器、この外部容器中に挿入することができ る試料容器、および一端が腹部によって封じられ、他端は開放されており、試料 容器中に挿入可能な筒状の吸収剤容器から成り、この吸収剤容器は外部容器上に ′位置することができる支持部材に固定されており更に支持部材中に係合するよ うに外部容器上に取付けることができる移動可能なスペーサーおよび試料容器の 延長から成り、前記移動可能なスペーサーは試料容器の延長を前記支持部分に分 離可能に連結し、外部容器、スペーサーおよび吸収剤容器は、スペーサーが取付 けられたときに腹部が試料容器上にあり、スペーサーが除去されたときに、膜部 が試料容器中にあるような大きさにある。

好ましくは、スペーサーは横方向に除去可能であって、この目的のために実質的 にＵ型であり、支持部材の舌部または溝部と係合する第１の溝部または舌部を有 し、かつ試料容器の延長の頂部領域の舌部または溝部に係合する第２の溝部また は舌部を有している。

これに関して、溝と係合する舌部を、たとえば実質的に溝を完全に満たすリブ形 状、またはたとえば溝と係合する線上にきちんと配列された個々の突起の形状の ような種々の形に作ることができる。

スペーサーは試料容器の延長部と単純な様式で分離可能に連結され、試料容器は 、舌部を形成し、好ましくはＵ字状のスペーサーにおいて溝中に押圧されうるビ ードを上端部に含む、これとは逆に、スペーサーを試料容器の延長の上端部にお いて溝と係合することができリブとすることも当然ながら可能である。もしも試 料容器の延長が、その上端部に、スペーサーの内側の肩部上に位置するリブを有 するならば、同様な効果を達成することができる。

これら全ての可能な実施例において必須なことは、スペーサーが取付けられたと き、支持部は延長部を介して試料容器に連結され、一方、支持部が除去されたと き、この連結は自動的に破壊され、従って支持部が外部容器から除去されたとき 試料容器が外部容器中に残されることである。

試料容器およびその延長部は種々の形状に構成されうる。試料容器の延長部は実 質的に筒状構造であることが好都合である。

試料容器それ自体は理想的にはビーカー型の筒状延長部の端部であり、すなわち 底部が封じられ、ビーカー型の底部からある間隔を置いて何方の液体導入口が設 けられている。かかる側方の液体導入口は、液体がこの導入口から導入されたと き、試料容器がこの何方の液体導入口までのみ満たされるので、試料容器におけ る液体の水準を決定する手段となる。このことは試料容器が予め決定された量の 試料をのみを収容することを確実にする。

支持部材は、試料容器がスペーサーを介して支持部材と連結されたときに外部容 器から試料容器を取除くことを意図するが、好ましくは外部容器を封する蓋とし て構成され、従って、装置が放置されているときに、たとえば異物が外部容器中 に落下することを防止することができる。支持部およびスペーサーは何らかの方 法で外部容器上に据え付けることができれば十分である。しかしながら、支持部 およびスペーサーの底端部のいずれか一方を外部容器の開口上に適合することが できるように構成することが好都合である。

本改良による装置は下記のように機能する。

初めに、装置は、スペーサーを取付けたとき、このスペーサーが外部容器と支持 部材との間に配置されるように組立てられ、この結果、試料容器は支持部材に連 結され、支持部材と共に外部容器から取出すことができる。

この装置を試験に用いるとき、支持部材はスペーサーを介してそれに固定された 試料容器と共に外部容器から分離され、次いで試料容器の開口は予め決定された 水準まで試料容器が尿で満たされるまで尿流中に保たれる。

このために試料容器の管状延長部が、その周囲に横方向の液体導入開口の間に、 その長手方向に延びる流出リブ（ｒｕｎ−ｏｆｆ　ｒｉｂ）を有することが好都 合である。

このことは装置の確実性ある機能を促進する。事実、その上に流出リブが設けら れている、試料容器の管状延長部が尿流中に保持されると、尿は流出リブの間に 形成された水路に沿って流れ、液体の水位が液体導入口に達するまで自動的に横 方法の液体導入開口内に流れ、次いでオーバーフローする。

このように装置が組立てられているので、支持部材に固定された管状の吸収剤容 器は、試料容器の管状延長部材中に挿入される。

スペーサーが取付けられた上述した条件においては、しかしながら、吸収剤容器 の底端部、すなわち腰部は試料容器上にあり、または換言すれば側方の液体導入 口上にあり、従ってこの条件下では試料容器中の尿中に浸漬されない。

試料容器が尿で満たされると、スペーサーはそれに固定された試料容器延長部と 共に、およびそれに固定された支持部と共に再び外部容器上に配置される。次い でスペーサーが除去され、すなわち好ましいＵ字型の場合においてスペーサーは 側方に除かれる。この状態になったとき、試料容器延長部が支持部材から分離さ れ、同時に吸収剤容器はそれに固定された支持部材と共に、スペーサーによって 残されたギャップを横切って滑り、膜が試料容器の内側に配置されるまで試料容 器の延長部内により深く移動する。

この条件において、吸収剤容器中の吸収剤の吸引効果によって試料容器中の試料 尿は腹部を通して吸収剤中に吸引され、試料尿中のめる抗原が膜部に結合された 抗体と結合するようになり、または尿試料中のめる抗体が腹部に結合した抗原と 結合する。

染料の二次反応または発色のために、外部容器が上述した部分に加えて、その中 に吸収剤容器を挿入することができる発色剤容器を含むことが好ましい。発色剤 容器は外部容器の一部であっても良く、またはたとえば外部容器に固定された管 状の外部容器であり、吸収剤容器を収容できる寸法である。

上述した工程が完結した上で、試験における次の工程は、膜部を通して吸引効果 によって吸収剤中に試料尿を吸引した後に、支持部材をそれに固定された吸収剤 容器と共に移動させ、回転させて吸収剤容器を発色剤容器中に浸漬することであ る。

二次反応または発色に要求される浸漬の時間の後に、吸収剤容器を支持部材によ って発色剤容器から取出し、これにより腹部に染料が形成されたか否か、そして 陽性の試験結果を示すか否かが視覚により確立される。

本発明をより詳細に図面にもとづき説明する。

第１図は本発明による装置の第１実施例の垂直断面図であり、第２図は本発明に よる装置の第２実施例の垂直断面図であり、第３図は吸収剤容器を下から見た好 ましい実施例の平面図であり、第４図は組立状態にあり、かつスペーサーが取付 けられた本改良による装置の実施例の透視図であり、第５図はスペーサーを除去 した後の、かつ吸収剤容器と共に取出された、第４図に示した実施例の斜視図で あり、第６図は種々の個々の要素から成る斜視図として第４図および第５図に示 した装置の分解図である。

第１図に示した本発明による装置の実施例は、実質的に試験管状の試料容器１か ら成る。この容器中にフィルター９によって底部が封じられた第２の容器２で同 心状に挿入される。第２容器２の中に吸収剤７が充填された吸収剤容器が挿入さ れる。

吸収剤容器３の底部は膜５を支持するキャップ４によって封じられる。膜５と吸 収剤７の間には多孔質の硬い支持部材６が存在する。

第１図による試験装置が使用されるときには、最初に、第２容器２および吸収剤 容器３を挿入するに先立って、試料液８が小さい計量ビーカーによって注ぎ込ま れる。次いで、底端部にフィルター９を有する容器２が挿入され、試料溶液をフ ィルター９を通して容器２中に流入させる。次いで吸収剤容器３がキャップ４を 下にして挿入される。すると、試料液８は膜５を通して自動的に吸収剤７中に吸 引される。試料液８が吸引されて膜５の水準にまで下ったとき、吸収剤７の孔容 積のなお十分な容量が残されており、吸収剤容器３を発色剤溶液中に移すと、発 色剤溶液から十分な量がなおも吸収剤中に吸引される。

第２図に示した本発明による装置の実施例は、計量ビーカーの使用や試料液の移 し換えを必要としないので、好ましい。

第２図における試料容器１０は、尿流中に位置する開口１５を有する試料容器１ ０を保持するための取っ手として同時に用いられる。管状頚部１４を含む、試料 容器１０は、開口１５とフィルター９の間、外側壁と分離壁１１の間の空間が試 料液で満たされたとき溢流する。このように限定されたこの空間が従って試験に められる試料液の容積を限定する。

短時間放置すると、試料液は次いでフィルター９を通して試料液８のための空間 １６中に十分に流れ、第２図に示した水位に到達する。

次いで下部に膜５ををする吸収剤容器３が管状頚部１４中に挿入され、試料液は 膜５の水位まで吸収剤７中に吸引される。

第２図に示した好ましい実施例においては、吸収剤７は孔が充満した合成プラス チック柱状物から成り、下端部において膜５と一体的に連結されており、液体非 透過性材料の外皮によって覆われている。

第３図は第１図に示した吸収剤容器３のキャップ４の好ましい実施例を示す。こ のキャップは相互に分離された二つの導入開口を膜上に有し、膜部１２はめる抗 原に対して特有な固定された抗体を担持し、一方、膜部１３は固定された抗原ま たは接合された、またはラベルされた第２の抗体以外の抗体を保持しており、抗 原および他の抗体の両方が第２の抗体と結合することができる。この膜部１３は 試験が適切に機能していることをチェックする手段として役立つ。

云うまでもなく、接合した、またはラベルされた第２の抗体を含む試料容器１ま たは１０が既に市販されており、従って試料が注ぎ込まれたとき、この第２の抗 体は自動的に、あるいは短い振とうによって試料液と混合される。

第４図、第５図および第６図に示した装置は、分離壁３２によって相互に分離さ れた二つの区画を有する外部容器３１から成り、この区画のうち一つは空であり 、一方、他の区画はその中に固定された、底部が封じられている管状形の発色剤 容器３３を含む。更に、この装置は、試料容器３５に隣接する延長部１８の長手 方間に延びる流出リブ１７の間の側方液導入開口３６のリングを備えたビーカー 型の試料容器３５を底端部に有する。延長部１８は頂端部にスペーサー２０の肩 部上に押さえつけられる環状の突起部１９を有する。

スペーサー２０は実質的にＵ字型であり、その底端部が外部容器３１の開口に適 合する。スペーサー２０は上部の両側に内側に面する溝２１を有し、この溝に支 持部材２４０両側のリプ２３を挿入することが可能である。加えて、スペーサー ２０は溝２１の下に各々肩部２２を有し、この肩部２２上に延長部１８上の環状 突起部１９を押しつけることが可能である。

吸収剤容器２５は支持部材２４に固定され、その底端部は浸漬膜によって封じら れ、一方、頂端部は図示されていないが、排気口から成り、吸収剤が充填される 。

第４図は初めの組立てられた状態下の装置を示し、Ｕ型スペーサー２０が支持部 材２４と外部容器３１の間に押込められており、舌部と溝部とのジヨイントが支 持部材を固定しており、一方、試料容器は、延長部１８上の環状突起部１９が肩 部２２上に静置される事実によって、それ自体固定される。かかる条件において 、腹部を有する吸収剤容器２５底端部は液体導入開口３６のリング上、従って試 料容器３５上である。従って、この条件下で、支持部材２４はスペーサー２０お よび試料容器３５およびその延長部１８と共に試料容器を尿流中に保つために外 部容器３１から取り外される。

第５図が示すように、スペーサー２０を取り除くと、試料容器３５上の延長部１ ８が取り外された結果になり、支持部材２４の除去によって延長部１８は吸収剤 容器２５と共に外部容器３１中に残される。

支持部材２４を外部容器３１の頂端部に取付けると、腹部を有する吸収剤容器２ ５の底端部は試料容器３５中に挿入され、従って試料容器３５中に含まれる尿試 料を吸引効果によって膜を通して吸引することができる。

しかる後に、第６図に示すように支持部材を再び取り除き、１８０°回転し、次 いで発色剤溶液中に浸漬して支持部材を外部容器３１の対向する方向に取り付け る。

発色時間経過後に、支持部材２４をそれに固定された吸収剤容器２５と共に発色 剤容器３３から取り外し、試験結果を膜部を見ることによって視覚により確かめ る。

実施例１ 吸収剤容器の外径よりも内径が２ｍｌ大きい円形容器中に上パツトで０．２　ｍ の尿を採取した。この尿にアルカリホスファターゼでラベルされ、０．５０．１ ００、および２００ｉ、ｕ、ＨＣＧ／　１．を夫々含む。ＨＣＧ（１）に対する 第２の抗体を混合した。

吸収剤の前方に置かれた膜は、３μの孔径を有し、ＨＣＧに対する第１の抗体に よって１７２が被覆され、他の半分がＨＣＧで覆われている。

吸収剤容器（外径１１鵬）を尿中に浸漬し、尿の全容積が吸引されるまで（約３ ０秒）尿中に放置した。しかる後に、吸収剤容器を、３ミリモル／１．インドキ シルホスフェートのジェタノールアミン１モル溶液、ｐＨ９，８（０，５ａ＋Ｎ ）を含む第２の円形容器に移した。

この第２の円形容器中に吸収剤容器を、同様に、洗浄液であると同時にアルカリ ホスファターゼに対する基体の役目もする第２の溶液の全容積が膜を通して吸引 されるまで放置した（約１分を要する）。下記の結果を得た。

ＨＣＧで覆われた膜の半分は、第２の容器から吸収剤容器を除去した後に、実験 に使用したいずれの原溶液について濃青色への変色を示した。

ＨＣＧに対する抗体で被覆された他の半分の膜は、）ＩｃＧを含まない尿にさら した時に白色の地色を示し、時間の経過につれて僅かに青い色合いに変色し、一 方、ＨＣＧを含む尿の場合には著しい変色が観察され、この変色は濃度の増加に つれてより濃い青色となった。

第２の溶液から除去した後に水道水を流しながら短時間（５へ・１０秒）膜を直 接洗浄することによって、ＨＣＧを含まない尿の場合における淡青色への変色が 防止、される。

実施例２ 初めに尿（０，２ｍ）を吸引させ、しかる後に第２の容器において、ラベルされ た抗体（０，２ｍＧを吸引させ、次いで基質と洗浄溶液（０，５ｙｒｒＲ’）を 吸収させた以外は、実施例１におけると同様な方法で試験を行なった。

結果は同一であり、この実施例において与えられた手順は、極めて大量の第２抗 体を使用することなしに極めて高イＨｃＧ　４度（２００，０００ｉ、ｕ、ＨＣ Ｇ／　１以上）によって陽性の結果が得られる利点を有する。

実施例３ 実施例１のそれと類似の方法で試験を行なった。第１の抗体とＨＣＧを交差させ て膜に通用し、第１の抗体を一つの横帯に、一方、ＨＣＧを交差の他の横帯に用 いた。この構成によって、）ＩＣＧを含有しない尿は一つの横帯、すなわち）Ｉ ｃＧから成る横帯を青に着色させ、これは負またはマイナスと解釈しなければな らず、一方、ＨＣＧを含む尿によって両方の帯が青への変色を示し、これは明ら かに陽性またはプラスの結果の証明である。

実際に家庭での使用では、この変色結果は容易に、かつ明らかに読み取ることが できるので、この変化は利点と考えなければならない。

実施例４ 実施例２における方法と類似の方法で試験を行ない、膜の一部分をルベラ（４’ 　（Ｒｕｂｅｌｌａ）−抗原で、一方、他の部分を羊からの１ｇに　０１　に対 して向けられた兎の抗体で被覆した。

初めに、ヒト血清（０，２ｘｔｄｌ）　をピペットによって試料容器に採取し、 しかる後に吸収剤容器を血清の全量が吸収されるまで（約１分）試料中に浸漬し た。次いで、ヒトのＩｇＧに向けられ、アルカリホスファターゼでラベルされた 、羊からの抗体（０，２ｍ）を含む第２の容器に吸収剤容器を移した。全量を吸 収させた後（約１分）、Ｔｗｅｅｎ２０　”　の０．２％を含む食塩緩衝溶液・ （０，９％）を含む第３の容器に移した（０．５ｄ、約９０秒を要する）。

次いで、第４の容器中で基質溶液を吸引させた（ｏ、５ｄ、約２分を要する）。

結果としての変色を実施例１で述べたように水道水ですすぐか、またはＴｗｅｅ ｎ２０の０．２％を含む食塩緩衝溶液を含む更に他の容器に再び移すことによっ て変色を安定化させることができた。

全ての血清は、羊のＩｇＧに対する兎抗体が被覆された領域においては、通用し た兎抗体の量によって制御することができ、かつ結果としての青色への変色がヒ ト血清中の抗体量に依存するように調整された青色への変色を示し、この変色は ヒト血清がルベラに対して十分な免疫性を有する場合にルベラ抗原で被覆された 領域において起る（一般に赤血球凝集阻害試験における１：８〜１：１６の滴定 量であり、参照法として用いられる）。

二つの領域の比較によって、試験されたいずれが十分な免疫性を示さない（ルベ ラで被覆された領域における青色変色が兎抗体で被覆された領域におけるよりも 劣る）かどうか、または免疫性が実際に存在するか（等しい強さの、または一方 がより強い青色変色）であるか否かを容易に確立することができる。

このタイプの試験は多くの種々の抗原および抗体に適用できることが容易に理解 できるであろう。

注：（１１Ｈｃｃ　、胎盤性腺刺激ホルモン（ｈｕｍａｎ−ｃｈｏｒｉｏｎ−ｇ ｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ） （２１１ｇに　、免疫グロブリンＧ ”　Ｔｗｅｅｎ２０　：非イオン性洗浄剤、商品名１４）　ルベラ（Ｒｕｂｅｌ ｌａ）　：風疹ウィルス（”：　ζ 国際調査報告 国際調査報告 ＤＥ　８８Ｔ１０４９Ｓ ＳＡ　２３８１０

Claims (19)

【特許請求の範囲】
1. １．試料を、その上に対応する抗体または対応する抗原が結合しているおり、か つ液体を吸収する多孔質吸収剤がそれに隣接している多孔質膜、および抗原また は抗体に結合している接合した、またはラベルされた抗体と試料を接触させ、場 合によっては該抗体を発色させて染料を形成させる液体試料中の抗原または抗体 の存在を確認する方法であり、前記吸収剤の孔の容積を部分的にのみ満たす容量 の液体試料を容器に導入し、しかる後に、それに隣接して前記吸収剤を有する前 記膜を前記液体試料中に浸漬して前記膜を通し重力に反して前記液体試料を実質 的に完全に、または予め決定された量で前記吸収剤に吸引させ、そして最後に、 場合によっては前記膜を前記試料から除去した後に、前記膜を発色剤溶液に浸漬 し、この発色剤溶液を重力に反して吸収剤に吸引させることを特徴とする液体試 料中の抗原または抗体の存在を確認する方法。
2. ２．前記液体試料の吸引に先立って、該液体試料を前記膜を通して濾過すること を特徴とする請求の範囲第１項記載の方法。
3. ３．前記液体試料を吸引によって吸い上げた後に、かつ前記発色剤溶液を吸い上 げるに先立って、前記膜を過剰の試料物質および／または接合した、またはラベ ルされた抗体ですすぐことを特徴とする請求の範囲第１項または第２項記載の方 法。
4. ４．前記液体試料が、接合した、またはラベルされた抗体と共に存在することを 特徴とする請求の範囲第１項、第２項または第３項記載の方法。
5. ５．前記液体試料が、その中に接合したまたはラベルされた抗体なしで提供され 、吸引によって該液体試料か吸引によって吸収された後に、前記膜を接合した、 またはラベルされた抗体の溶液中に浸漬させ、接合した、またはラベルされた抗 体の溶液を吸引によって吸い上げることを特徴とする請求の範囲第１項、第２項 または第３項記載の方法。
6. ６．液体試料中における抗原または抗体の存在を、前記抗原と結合するようにな る抗体または前記抗体と結合するようになる抗原が結合している多孔質膜部材、 および該多孔質膜部材に隣接する多孔質吸収剤のカラムによって確認するための 装置であり、試料容器（１，１０）と、一端が前記膜部材（５）によって封じら れ、他端に少なくとも一つの開口が設けられている管状の吸収剤容器（３）とか ら成り、該試料容器（１，１０）および該吸収剤容器（３）が該吸収剤容器を該 試料容器中に前記膜部材（５）を下に向けて浸漬できるような大きさであること を特徴とする液体試料中における抗原または抗体の存在を確認するための装置。
7. ７．前記吸収剤（７）と前記膜部材（５）が相互に分離されており、これらの間 に支持部材（６）が配置されていることを特徴とする請求の範囲第６項記載の装 置（第１図）。
8. ８．前記吸収剤（７）がカラムを形成して膜部材（５）と連結し、かつ膜部材（ ５）と一体をなしていることを特徴とする請求の範囲第６項記載の装置（第２図 ）。
9. ９．前記抗体または抗原が前記膜部材（５）の部分的領域（１２）または表面に のみ結合し、一方、前記抗原または他の抗体が前記膜部材（５）の異なる部分的 領域に結合していることを特徴とする請求の範囲第６項、第７項または第８項記 載の装置。
10. １０．フィルター（９）が前記試料の重力に反する流れの方向において前記膜部 材の前に位置することを特徴とする請求の範囲第６項、第７項、第８項または第 ９項記載の装置。
11. １１．前記フィルター（９）が前記吸収剤容器（３）にまたは試料容器（１０） に固定されていることを特徴とする請求の範囲第１０項記載の装置。
12. １２．外部容器（３１）、該外部容器に挿入されるようにされた試料容器（３５ ）、該試料容器（３５）に挿入可能であって前記外部容器（３１）上に載置され 、かつまた支持部材（２４）および前記試料容器（３５）の延長部（１８）と係 合し、前記外部容器（３１）上に載置される支持部材（２４）に固定された前記 吸収剤容器（２５）、前記試料容器（３５）の延長部（１８）を前記支持部材（ ２４）に分離可能に連結する取外し可能なスペーサー（２０）からなり、前記外 部容器（３１）、スペーサー（２０）および吸収材容器（２５）が、前記スペー サーを固定したとき前記膜部材が前記試料容器（３５）の上にあり、前記スペー サーを除去したとき前記膜部材が前記試料容器中に配置される大きさであること を特徴とする請求の範囲第６項記載の装置。
13. １３．前記スペーサー（２０）が実質的にＵ字型の構成であり、前記支持部材（ ２４）上の舌部（２３）または溝部と係合する第１の溝部（２１）または舌部を 有し、かつまた試料容器（３５）の延長部（１８）の上部の舌部（１９）または 溝部と係合する第２の溝部（１２）または舌部を有することを特徴とする請求の 範囲第１２項記載の装置。
14. １４．前記試料容器（３５）の実質的に管状延長部（１８）の上端部が前記スペ ーサー（２０）の内側面上の肩部（１２）上に直かれる縁部からなることを特徴 とする請求の範囲第１２項または第１３項記載の装置。
15. １５．前記外部容器（３１）が、その中に吸収剤容器（２５）が挿入されうる発 色剤容器（３３）を更に含む請求の範囲第１２項、第１３項または第１４項記載 の装置。
16. １６．前記試料容器（３５）が、底部がビーカー状で側部に液体導入開口（３６ ）を有する、管状延長部（１８）の末端部を形成することを特徴とする請求の範 囲第１２項、第１３項、第１４項または第１５項記載の装置。
17. １７．前記管状延長部（１８）が前記側部の液体導入開口（３６）の間にその長 手方向に延びる流出リブ（１７）を有することを特徴とする請求の範囲第１６項 記載の装置。
18. １８．前記支持部材（２４）がカバーとして構成されていることを特徴とする請 求の範囲第１２項、第１３項、第１４項、第１５項、第１６項または第１７項記 載の装置。
19. １９．前記支持部材（２４）およびスペーサー（２０）が前記外部容器（３１） の開口に適合することを特徴とする請求の範囲第１２項、第１３項、第１４項、 第１５項、第１６項、第１７項または第１８項記載の装置。