JPH02500616A

JPH02500616A - 検査装置及びそれを準備する方法、及び２個のｈｔｌｖまたはｈｉｖ抗体を同時検出するための検定キット及びその方法

Info

Publication number: JPH02500616A
Application number: JP63506952A
Authority: JP
Inventors: パプシデロ　ローレンス　ディーン
Original assignee: セルラー　プロダクツ　インク
Priority date: 1987-08-21
Filing date: 1988-08-19
Publication date: 1990-03-01
Also published as: PT88318B; ES2010316A6; EP0330694A1; PT88318A; AU629516B2; EP0330694A4; AU2265388A; US5039604A; WO1989001527A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】検査装置及びそれを準備する方法、及び２個のＨＴＬＶまたはＨＩＶ抗体を同時検出するための検定キット及びその方法主因■圀見この発明は、生物学上の標本における１組のＨＴＬＶ又はＨＩＶの同時検出のために使われるキット及びその方法に関する。それはまた、分析方法において有用な検査装置及びその検査装置を準備する方法に関する。

主ユ■！景人類のレトロウィルスは、科として、重要な増殖あるいは細胞変性効果をそれらが感染する目的Ｔ−リンパ球に及ぼす一群の関連した外因性レトロウィルスを表す。これらのレトロウィルスの効果は、Ｔ−セル増殖白血病、Ｔ−セル機能低下及びウィルスによって感染された人類における免疫抑制を含む。これらのレトロウィルスは、ＨＴＬＶ（人類Ｔ−セル白血病−リンパ腫ウィルス）及びＨＩＶ（人類免疫不全ウィルス）科としで知られこれらの科はＴ４熱帯レトロウィルスに属する。

最初に発見された人類のレトロウィルスであるＨＴＬＶ−■は、成熟したＴ−セル白血病及びリンパ腫の病因学的物質を成人Ｔ−セル白血病によって代表するものとして表すようにみえる。例えばポワエス（Ｐｏｉｅｓｚ）等、Ｐｒｏｃ。

％ａｔ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｉｊ、Ｓ、Ａ、、　７７、１９８０によって報告された研究及び吉田等、前述の文献、　７９．１９８２によって報告された研究を参照せよ。現在のところ、ＨＴＬＶ−１及びＴ−セルの悪性度の存在は所定のカリブ島や南日本の人々の間に、増加した割合で生じていると考えられているが、ＨＴＬＶ−１は今や世界的な医学的関心事として認識されている。

ＨＴＬＶ−１に感染した人々あるいは、そのウィルスと接触した人は一般にその体液ことにその血液中に、ＨＴＬＶ−１に対する抗体を有する。ことに熱帯痙性対不全麻痺は（Ｔｒｏｐｉｃａｌ　５ｐａｓｔｉｃ　Ｐａｒａｐａｒｅｓｉｓ）として知られている神経細胞的不調にかかっている患者のかなりの人たちは、ＨＴ　Ｌ　Ｖ　−１に対する抗体を有する。

大きな医学的重要さを有するいくつかのレトロウィルスがさらに存在するということが研究の継続の結果、明らかとなった。分離され特徴づけられた第３のレトロウィルスはいろいろな形で特定されるもので、即ちＨＴＬＶ−Ｉｔ。

リンパ除痛関連ウィルス（ＬＡＶ）及びＡＩＤＳ関連ウィルスである。後天性免疫不全ウィルス（ＡＩＤＳ）に対して責任のある病因学的因子としてそれは意味されてきた。

例えば、米国特許４，５２０，１１３号（ガロ（Ｇａ　］　ｌｏ）等に１９８５年５月２８日に発行された）を参照せよ。混乱を減少するために、科学的な世界においては、そのグループのウィルスを人類の免疫不全ウィルスとして名前を呼びかえている。

他のウィルス性疾患については、ＨＴＬＶ又はＨＩＶのいずれかへの接触あるいはその何れかからの惑染によって免疫応答を生じ、この免疫応答は、抗体の生産である。より具体的には、ウィルスの抗原に対する抗体は、多くの血清疫学研究において研究者と臨床医によって検出されてきた。ＨＴＬＶ−１またはＨＩＶ− ）特殊ウィルス性遺伝子の配列が感染されたセルに存在することが・Ｄ　Ｎ　Ａプローブ技術を使って確認された。両方のウィルスの伝達は垂直あるいは水平伝達の何れか一方によって起こるということを両方のラインは示している。人類の生物的流体、例えば、血液全体又は、その成分、精液、唾液、涙、膣内分泌物はかかるウィルスを広げるための潜在的なベクトルであると考える。血液のサンプルはウィルスの伝達に対して特に可能性のあるベクトルである。

ＨＩＶ−Ｔの伝達の危険を減少するために、すべての血液銀行は現在、ＨＩ　Ｖ　−］に対する抗体の存在のためにすべての供与者から得られた血液にスクリーンをかけている。

多数の有効なスクリーニング検定手段が開発されており、そのいくつかは、米国特許４，５２０，１１３　（上述）およびヨーロッパ公報１３６，７９８　（バイオチック研究所）および、２１６゜１９１（アボット（Ａｂｏｔｔ））に詳述されている。これに加えて、ＨＴＬＶ−１検定がヨーロッパ公ｔ１１３．）、３５２　（味の素）及び１３６，７９８（前述）に述べられている。ＨＴＬＶ−１抗体に対する血液又は他の生物学的流体のスクリーニングをルーチン化することが、将来は望まれることになる可能性がある。ヨーロッパ公Ｈ１７３，２９５にューヨーク血液センター）は抗原および抗体の存在を同時に検出する方法を述べている。

ＨＴＬＶ−１及びＨＩＶ−１の両方の抗体に対する生物学的な流体の検査の現在の技術によると、２個の別の検査を使う必要があり、それぞれのウィルス抗体に対してそれぞれ１つの検査が必要である。これによって２個の異なった検査キットを購入する必要があり、その検査キットは、異なった売り手から買わねばならない可能性があるので、それぞれの検査において、異なった分析決定装置を・必要とする。２個の別の検査を使うことによって、購入やスクリーニングのコストと共に検査時間を増してしまう。さらに、現在の２個の別々の検査を実行することにより、生物学的流体のサンプルを多量に必要とし、余分な取扱もまた必要とするので、環境あるいはスピレンジ（ｓｐｉｌｌａｇｅ）からの、あるいは不十分な保全処理手順から生ずる他の物質による汚染という危険な可能性があると共に、手順上の誤りを生ずる可能性がある。

血液サンプルのような、生物学上のサンプルを高度に感染しゃすいＨＴＬＶ及びＨＩＶウィルス科に対する抗体組を低価格で早く安全にかつ正確な対応で機掠的操作でスクリーンできることが強く望まれている。

主所坐翌立ＨＴＬＶ−１とＨＩ　Ｖ−１に対する個々の検査に関する上述した問題点は、第１の抗体と反応する第１のウィルス抗原と第２の抗体と反応する第２の抗原とからなる遊離した抗体混合物を、その上に固定化した固体キャリヤからなる検査装置を使用することで解決され、その第１及び第２のウィルス抗原は、°ウィルス抗原の１つがＨＴＬＶ−ＩＩからの°ものである時には他のものはＨＴＬＶ−１からであると仮定した場合に、ＨＴＬＶ−１，ＨＴＬＶ−ＩＩ、ＨＩＶ−１又はＨＩＶ−Ｉ［からのものとされる。

この発明は、第１及び第２の抗原を同時に検出する抗体であって、ＨＴＬＶ−１，ＨＴＬＶ−ＩＩ、ＨＩ　Ｖ−１またはＨＩＶ−ｎに対する抗体であるものを同時に検出するための検定キットを提供する。そして、そのキットは、下記のものからなる。

（ａ）　第１の抗体と反応する第１のウィルス抗原と第２のウィルス抗体と反応する第２のウィルス抗原とからなる無抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｆｒｅｅ）混合物を、その上に移動しないようにしてなる固体キャリア物質で、ウィルス抗原の１つがＨＬＶ−Ｉｔから得られる時に、他のウィルス抗原がＨＬ　■−■から得られる場合には第１．第２のウィルス抗原はＨＴＬＶ−１，ＨＴＬＶ−Ｉｔ、ＨＩＶ−Ｉ、ＨＩＶ−ＩＩから得られる。

（ｂｌ　第１及び第２の抗体と反応するラベル付けされる抗体とからなる。

さらに生物学上サンプルにおける第１．第２の抗体を同時に検出する方法であって、そのような抗体は、ＨＴＬＶ−１，ＨＴＬＶ−ＩＩ、ＨＴＶ−１又はＨＩ　Ｖ　−ＩＩ　ニ対するものにおいて、この方法は、以下のものからなる。

Ａ、第１のウィルス抗原と第２のウィルス抗原からなる無抗体混合物をその上に固定化した固体キャリア物質を生物学的なサンプルに接触させることであって、その抗原はウィルス抗原の１つがＨＬＶ−ｎのものであるとき、他のウィルス抗原はＨＴＬＶ−１のものである場合には抗原はＨＴＬＶ−１，ＨＴＬＶ−ｎ、ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−■の場合であり、そのサンプル中の第１及び第２の抗体と、固定化された第１及び第２のウィルス抗原との間に反応生成物をそれぞれ形成すること、Ｂ、ラベル付けされた反応生成物を形成するために第１及び第２の抗体と反応するラベル付けされた抗体と前記反応生成物を接触させること、及びＣ，ラベル付けされた反応生成物を検出する。

本発明は、ＨＴＬＶ及びＨＩ　Ｖ科の抗原に対して１組の抗体が存在することを同時に検出する、正確、迅速かつ簡単化された検定を提供する。この検定は、以下により詳細に説明される単一検査キットによって有効に実行される。

その結果、血：ａ、銀行及び他の血液スクリーニング機構は、別の検査装置又は、キット、機械、スクリーニング手順の助けを借りることなく、多数の生物学的な流体サンプルを迅速かつ正確に検査できる。この発明の検定によれば・この単一のヰ★査において組となった抗体をより鋭敏かつ精細に検出しこれによって、検出される抗体に対して２つの個別の検査を行う場合に観察されるであろう誤って陰性と認定されることはもはや生じないということが明らかである。

誤って陽性と判断される場合を少なくすることも重要であるが、重大な健康上の危険を避けるためには、過って陰性と認定されることがないことが、安全な血液の供与にとって、極めて重要である。

これらの利点は、適切な支持体上で抗体が決定されるべき抗原の無抗体混合物を固定化し、検査サンプルと支持体が接触した時に免疫反応が生しることによって、この発明によって達成できる。抗原の固定化された混合物は、どちらかの抗原の反応とも干渉しない。適当にラベル付けされた物に（以下に説明）と接触することにより検査サンプルの中に１組の抗体の一方が存在することを正確に検出することができる。

２１４」Ｉ町覧礼皿この発明のキットと検定は、ＨＴＬＶ、ＨＩＶの抗原に対する１組の抗体のために、同時に生物学的サンプルをスクリーニングするために用いる。このようにスクリーニングされる生物的サンプルは、血液全体又は、その成分（血清または血漿）、唾液、涙、を髄液、便、尿、膣内分泌物、精液、人聞の組織、又は器官のエキス及び人間の乳を含んだものがあるが、これらに限定されない。望ましくは、この検査は人間の血液の血清や血漿をスクリーンするために用いられる。

この発明は、１組の抗体を同時に検出するために行う。

例えば、ＨＴＬＶ−１，ＨＩＶ−１に対する抗体は同時に検出され、ＨＴＬＶ− １，ＨＴＬＶ−ｎ！：対する抗体も同時に検出される。これに加えて、ＨＴＬＶ −ｎはＨＴ　Ｌ　Ｖ−■とのみ同時に検出される。この発明はＨＴ　Ｌ　Ｖ　− １。

ＨＩＶ−］に対する抗体を同時検出されるために用いることが望ましい。

発明の検定によれば、検定は、第１のウィルス抗原と上述したように組になっている第２のウィルス抗原とからなる無抗体混合物をその上で動かないようにした固体キャリア物質からなる検査装置を利用する。この抗原混合物は、抗体を含まない。それは、動かないこと、あるいは、長期間の蓄積を助ける活性のない非免疫反応物質と共に、その検定と干渉しない他の抗原を含む。

ＨＴＬＶ及びＨＩＶ抗原は、適当な方法で得ることができる。それらは、自然に生成しているウィルス物質又は、その成分、又は、合成ペプチド、又は、例えばＰＣＴ公報８６１０１８３４　（カリフォルニア・バークレイ大学’Ｉ　、８６１０２９３０（バーバード大学）に述べられている再結合Ｄ　Ｎ　Ａ技術を使って発生されたポリペプチドである。ＨＴＬＶ及びＨＴＶ抗原を発生するための合成方法を記載している他の技術及び特許文献は余りにも多いので、ここでは言及しない。

抗原を得るための望ましい方法は、セルからのウィルスの除去が行われる適当なセルラインによってウィルスを培養することである。除去されたウィルスあるいは、その成分は、同様に培養され分離された第２０ウィルス或いは、その成分と混合される。その混合物は、検定において使われるための固形支持体上で以下に述べるように動かないようにされる。例えば、ＨＴＬＶ−１ウィルス抗原；ま、適当な主セルラインから分離されたＨＴＬＶ−１ウィルス粒子の界面活性溶解によって得ることができる。かかるセルラインは、Ｈｕｔ　１０２セルライン及びＭＴ−２及びその類似物を含むがこれに限定されるものではない。Ｈｕｔ　１０２セルラインはＡ＋ｎｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣＴＴＢ　１６２）から入手可能であるが、この発明を実施するために１−ＩＴＬＶ−Ｔ抗原を準備することが望ましい。ＨＴＬＶ−１は又、末梢血液Ｔ−セルあるいは組織、皮膚、Ｔ−セル白血球／リンパ腫患者から得られた組織によって得られた新しいセルラインから分離される。セルの培養とウィルス粒子の分離は、公知の方法によって実行される。ウィルス粒子は、多重セルから作られ上澄み体は、適当な界面活性剤溶解によって得られる。詳細な培養と分離手順は以下に説明される。ＨＴＬＶ−ｎ抗原も同様に得ることができる。

抗原源の例としては、ＨＩＶ−１ウイルス抗原は適当な主セルラインから分離された１−ＩＩＶ−１ウィルス粒子の界面活性剤溶解によって得ることができる。

かかるセルラインは、）（ＩＶ−１の成長を認めるものであって、Ｈｕｔ　１７８（ＡＴＣＣＴＩＢ　１６１）　Ｈ９（ＡＴＣＣＮｏ、ＣＲＬ　８５４３）、Ｍｏ１ｔ　３゜ＣＥＦＩ、　０ＸＴ４＋、　Ｔｉ７．４．　ＨＴ及びその類似物、米国特許５＋６４Ｌ７７３（１９８７年３月３日にガロ（Ｇａｌｌｏ）等に発行されたもの）及び４，６５２，５９９（１９８７年３月２４日にガロ（Ｇａｌｌｏ）等に発行されたもの）に記載された他のものを含むが、これらに限定されるものではない。ウィルス粒子は又、ＡＩＤＳあるいは前期ＡＩＤＳ　（ＡＩＤＳにしばしば先立って現れる慢性的に発生するリンパ腺病）を有する患者から得られた新しいセルラインから分離される。これに加えて抗原物質がＨＩＶに懇染した人から得られる。セルの培養とウィルス粒子の分離は、公知の方法を使って実行される。ウィルス粒子は、多重化されたセルや界面活性剤等の溶解による上澄み物から得られる。Ｈｕｔ　７８セルラインは、１度はＨＩ　Ｖ　−■に感染するが、１度感染したものはＨＩＶ−ｌ抗原を得ることが望ましい。ＨＩ　ｖ−ＩＩｌ抗原、同様に得ることができる。詳細な培養と分離手順は、以下に述べられる。

第１及び第２の抗原（例えば、個別の細胞溶解産物）は、共に混合され、キャリア物質上で適当な対応で動かないようにされる。抗原は被覆され、吸収され、共有的に止着され、あるいは他のいかなる方法によってもキャリア物質へと固定される。ある場合には、その抗原はリンキングあるいは結合手段を介して止着される。゛例えば１つのかかる結合手段は、キャリア物質に適当に止着された抗体混合物であり、抗原の両方に対して反応するものである。抗原は、直接的には汚染されていない、非免疫性の反応水溶結合物質を用いて、あるいはこれなしに、吸着によって直接的に止着される。動かない抗原混合物は、必要ならば、使用の前に不定な時間だけ蓄積される。十分な量の各抗原は、適当な免疫反応に対してキャリア物質の１つ又はそれ以上のゾーンにおいて動かないようにされる。

一般的に言って、それぞれのウィルス抗原の約７５から約５００　ｎｇまでのものがキャリア物質のそれぞれの反応ゾーンにおいて固定される。

有益なキャリア物質は、細胞溶解産物の混合物がいくつかの方法で止着される場合がある、いかなる非水溶性の免疫非反応物質を含む。それらは、ポリスチレン、ポリカーボネイト、ポリアミド、ポリオレフィン（例えばポリエチレン）及び当業者に知られた他のもののような、天然あるいは合成ポリマーからなる物質と、金属表面、含浸金属表面、シリコン金属を含むが、これらに限定されるものではなく、そしてそれらは、ファイバー、膜、試験管、スライド、プレート（例えばマイクロテスト板）１粒子等の形である。望ましい物質は高分子板とビーズ、例えば、ポリスチレンおよび他の高分子粒子及び複数の表面ウェルとあるいは、他の表面押し込みを有するマイクロテスト板からなる。多層マイクロテスト板がこの発明の実施においては最も望ましい。

この発明の検査装置は、キャリア物質上に第１の抗体と反応する第１のウィルス抗原と、第２０抗体と反応する第２のウィルス抗原からなる無抗体混合物（ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｆｒｅｅｍｉｘｔｕｒｅ）を固定することによって得られ、その第１及び第２のウィルス抗原は、１つのウィルス抗原がＨＴＬＶ−ＩＩである時に、他のものはＨＴＬＶ−１からである場合には、ＨＴＬＶ−Ｔ、ＨＴＬＶ−ＩＩ、ＨＩＶ−Ｉ　又はＨＩＶ−■から得られる。この準備的方法の一般的な説明は上述した。望ましい実施例の詳細な説明については、以下の例に示される。

上述した検査装置に加えて、この発明の検定キットは、検査装置を試験サンプルにおいて第１及び第２の抗体の両方とに反応するラベルづけされた抗体と結合することによって構成される。これらの反抗体は、結果として得られるラベルづけされた抗原−抗体−抗原（＊）からなる複合体が検出されるようにするのに適した方法においてラベル付けされており、ここで（＊）はラベルを意味する。適当なラベルの例とそれらを作るための代表的な方法を記述する膨大な文献がある。

かかるラベルは、酸素、ラジオアイソトープ、検出可能な粒子（たとえば、磁気粒子、発色ビーズあ為いは、きれいなビーズ、これらは光分散技術、金属粒子あるいは粒子状カーボンによって検出される）、化学ルミネフサンス化合物、クロモゲン、フルオロゲン、粘土ユーロピウムキレート、リン化合物、及び当業者に知られている他のものを含むが、これらに限定されるものではない。

望ましい実施例においては、このラベルは酵素である。

酵素のラベルづけされた抗体は、公知の技術を使って準備され複数の商業営業体から購入できる。酵素ラベルは、下記の代表酵素から選択され、これらは、アルカリフォスファターゼグルコースオキシターゼ、ベルオキシターゼ、ウレアーゼ及びβ−ガラクトシダーゼである。アルカリフォスファターゼはこの発明の実施において望ましいものである。酵素は適当な多り−ロン性或いは、単クローン性抗体、例えばヤギのアンチヒユーフッ１ｇＧ或いは、他の人類免疫グロブリンに或いはそれらペプチド鎖に対抗するように設けられた他の異種生物の抗体と結合される。

しかしながら、望ましくは、この発明のキットは、検定の正確さを確認するための１またはそれ以上の制御溶液からなる。例えば、第１及び第２のウィルス抗体であって、検査装置上に固定された第１及び第２のウィルス抗原に対する抗体と陰性反応であるウニタン・プロッティング（Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔｔｉｎｊ）によって示される陰性制御溶液を含む。一般的に言ってこの溶液は、固定された抗原に対して血清陰性である各個人から得られる。例えば、ＨＴＬＶ−１及びＨＩ　Ｖ　−１反−抗体に対する検査において、この溶液は、ＨＴＬＶ−１，ＨＩＶ−Ｔの血清陰性の個人から得られた人間の血清からなる。この溶液は、希釈されたり、或いは希釈されないで用いられるが、希釈された態様が望ましい。

１又はそれ以上の陽性制′４Ｂ溶液もまたキットの中に含まれる。第１の制御溶液は、第１の固定抗原、例えばＨＴＬｖ　ｌ抗原とのみ反応する抗体を含むことができる。この溶液は、第１の抗原（例えば、高−タイツ−ＨＴＬＶ−Ｔ血清陽性の個人）への高タイターの抗体を有する個人から得られた人間の血清からなる。そしてこの溶液は、ウェスタン・プロッティングによって示されたように抗原の主たるウィルス抗原成分に対して抗体の特質性を有する。この溶液は使用前に希釈される。

第２の制御溶液は、それが、第２のウィルス抗原のみと反応する抗体を含む場合を除いて、第１の制御溶液に類憤する。

検定に用いられるラベルが酵素であるとき、発色組成は、酵素の活性から検出できる発色した標本を得るために必要である。この組成の特殊な成分はまた、キットの中に用いられている特殊な酵素によっている。所定の酵素に対して必要とされる物質を記述する十分な特許あるいは他の文献がある。その組成は、発色した標本を提供するためにいくつかの方法で反応する適当な試薬と同様に酵素に対する基板を含む。これらの試薬は、標本を提供するために酵素と基板と直接反応でき、かつ酵素の反応のあとで一連の反応を介して行うものである。この基板は、発色物質と同じか、やや違っている。

例えば、ベルオキシターゼがラベルである場合、発色組成は、基板として過酸化水素を含み、モノアミン、ジアミン、フェノール、ポリフェノール、芳香族酸類、ロイコ染料及び、酸化された過酸化水素が存在している時に、色つきの標本を与える他の物質を含むことができる。同様な基板及び発色物質は、グルコースオキシダーゼ、ウレアーゼ、及び上述した他の酵素に対して知られている。

望ましい実施例においては、酵素ラベルがアルカリフォスファターゼである。この酵素に対する多数の色生成組成が知られており、色つき標本のｐ−二トロフェノール及び遊離フォスフアートを形成するために触媒化される望まし用するものが知られている。他のアルカリフォスファターゼ基板は、リン酸の有機モノ或いはジエステル或いは、その塩を含み、フェノールフタレンモノフォスファート、フェノールフタレンジフ戸スフアート、チモールフタレンモノフォスファート、インドキシルフォスフアート、フェニルフォスフアート、α−ナフトールフォスフアート、β−グリセロールフォスフアート、β−ナフトールフォスフアート、０−カルボキシフェニルフォスフアート、０−メチルフルオレセインフォスフアート、アルカリ金属又は、それらのアンモニウム塩及び、当業者に知られている他の物質（例えば、米国特許３．４２５．９１２）を含むが、これらには限定されない。

この発明の検査キ７）の任意の成分は、緩衝剤、希釈剤（検査サンプルを希釈するためのもので共役結合している溶液、制御溶液あるいは、基板）、洗液及び、酵素反応を停止するための停止溶液を含む。これるの物質は、当業者にとっては明らかである。特殊な物質が以下の例に説明される。

この発明の１実施例においては、生物学的サンプルにおける第１及び第２の抗体の同時検出の方法を提供し、その抗体はＨＴＬＶ−Ｉ、ＨＴＬＶ−ＩＩ、ＨＩ　Ｖ　−１又はＨＩＶ−Ｈに対するものであって、これは以下のものからなる。

Ａ、第１のウィルス抗原と第２のウィルス抗原からなる無抗体混合をその上に固定した固体キャリア物質と生物学的サンプルを接触させ、抗原は、ウィルス抗原の１つがＨＴＬＶ−ＩＩからのものである時、他のウィルス抗原は、ＨＴＬＶ− １からのもノテある場合には、ＨＴＬＶ−１，ＨＴＬＶ−ＩＩ、ＨＩＶ−１又はＨＩＶ−ＩＩから得られ、そのサンプルに存在する第１及び第２の抗体と固定された第１及び第２のウィルス抗原との間に反応生成物を形成し、Ｂ、接触工程へと同時に、あるいは、それに引き続いてラベル付けられた第１及び第２の抗体と、固定化された第１及び第２のウィルス抗原との間に反応生成物を形成するようにラベル付けされた、所定量の第１及び第２抗体と抗原混合物とを接触させることと、Ｃ０生物学的サンプルにおける第１及び第２の抗体の量を示すものとしてラベル付けされた反応生成物の量を測定することからなる。

この実施例は、競合的結合検定として当業者の間には、−ｍに知られている。かかる検定において、固定された抗原は所定量の対応するラベルづけされた第１及び第２の抗体と接触する。そのラベルは、上述したもののようにいかなる適当なラベルでもよい。これらのラベル付けされた抗体は第１及び第２の固定された抗原と反応し試験サンプルにおける第１及び第２の抗体と抗原サイトについて競合する。ラベルづけされた抗体をそれに続いて加えることが可能であるのだが、試験標本と同時にラベルづけされた抗体が御飯には加えられる。競合的結合反応においては、ラベルづけされた、及び、ラベルづけされてない反応生成物の両方が生成され、分離が検出のために必要ならば（分離は不均一な検定と反対な均一な検定とじて知られているものには必要ない。）、適当な方法で分離される。ラベルづけされた反応生成物はそれから適当な方法で積出されて、その試験標本において、第１及び第２の抗体の量を示す。

この発明の望ましい実施例においては、ＥＬ　Ｉ　ＳＡ試験として当業者に知ろれている方法が、用いられ、これによって、２つの分析（ここでは、−組のＨＴＬＶ又はＨＩＶ抗体）が２個の固定受容体（即ち、その分析と特に複合する分子）と複合し、その結果として生ずる反応の複合体は反応複合物（即ち、試験標本の抗体）と反応するラベルづけされた抗体を加えることによって検出される。

より具体的には、抗体を検出する第１の工程は、上述した固定対応抗原と生物学的流体標本とを接触させることである。この接触は、適当な方法で達成され、検査標本中にキャリア物質を浸すことを含み、キャリア物質へ例えば数滴試験標本を加えることによって達成される。望ましくは約５０乃至約２５０マイクロリツターの希釈標本がキャリア物質（例えば、マイクロテストプレートのウェル）を各々のゾーンへ適応されて、固定された抗体−抗原反応生成物を形成する。この発明の方法は、第１及び第２の抗体の一方あるいは両方が生物サンプルであるかどうかを検出するものということが理解されるべきである。

反応生成物の形成によって、約２０乃至４５℃まで、そして１２０分まで定温放置によって必要ならば、反応生成物の形成が促進される。もし必要ならば、反応しない物質は適当な方法で反応した物質から例えば、緩衝水溶液あるいは吸引によって除去される。

１度、反応生成物が形成されたならば、それらは適当なラベルづけされた抗体の共役結合と接触する。この共役結合の割合は固定された反応生成物における第１及び第２の抗体の両方と反応する。再び、適当な定温放置（ｉｈｃｕｂａｔｉｏｎ）を行ってこの複合を早め、複合されてない物質が洗浄あるいは他の手段で複合された物質から除去される。

検定のこの点においてラベルづけされた抗原−抗体−抗体（＊）反応生成物は適当な検出手続きと装置を使って検出される。ラベルがＵ素である実施例においては、適当な発色合成物であって、酵素基板と他の発色試薬を含むものが検出可能な発色標本を発生するために加えられる。この標本はそれから肉眼あるいは、適当なスペクトロ光度測定装置によって観察される。

以下の例は、限定的なものを意味せず、この発明の代表的な試験装置キー／　）及び方法を示す。それは又、試験装置を準備するための代表的な方法を示す。それに続く準備方法は以下の如くである。

ＨＩＶ−１抗原の＄偵ＨＩＶ−１は１０％のウシ胎児血清と５０μｇ／ｍｌゲンタマイシンを有するロズウェル・パーク・メモリアル・インステイチュート（Ｒｏｓｗｅｌｌ　Ｐａｒｋ　Ｍｅｍｏｒｉａｌ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ）　１６４０媒体におけるＨｕｔ　７８セルラインにおいて培養される。この培養は、定温放置内で３７°Ｃに保持される。セルの密度は約ｌＸｌ０’から１×１０６セル／ｍｌに保持され、そのセルは、この密度を保持するために、新しい媒体を加えることによって、紙代培養される。ウィルス粒子は０．４５μｍフィルタが設けられた被覆体を介して、セルの培養粒体を排出される保持タンクの中へ、その培養を蓄積することによって、閉じられたシステム内でのステンレススチール濾過／集中装置で分離される。この最初の濾過工程はセル全体及びセルの残漬物を除去した。セル無しの表面に浮かんだものは、のセル残渣を取り除くために０．２　μｍのフィルタが備えられた第２のフィルタを介して、排出される。第２の表面に浮かんだものは、その準備を適当な大きさへ集中するために１００．００ドルトンカツトオフ膜が設けられた集中力セントを介して排出される。このようにして得られた天然のウィルス粒子は約５０．０００Ｘ　ｇで２時間遠心分離器によって小球化され、再び約４０ｏ＋１の緩衝剤溶液（ｐＨ７，８，０，０１モル。

トリス（ハイドロキシメチル）−アミノメタンハイドロクロライド、　０．０１モル、　％ａＣ］、　０．００１モル、エチレンジアミンテトラアセートアシド）に置かれ、従来からあるゾーナルロータで緩衝剤の中に１３００ｍｌリニア２２−６５％サクローズ・グラジェントで層化され、そして、約３０．ＯＯＯＸｇで１昼夜超遠心分離器にかけられる。そのグラジェントは約１１０の小部分（１２ｍｌ）に分断され、そして１．１４と１．１８　ｇ　／ｍｌの間の４度を有する全ての小片がプールされ緩衝剤によって３から４倍希釈され、約２時間５０，０ＯＯＸ　ｇで遠心分離されて、純化されたＨ　Ｉ　Ｖ　−１ウィルス粒子を再生する。その粒子はそれから０．６モル、　ＭＣＩ及び０．５％の非イオン性のオクチルフェノキシポリエトキシエタノール界面活性剤を含む１０Ｍ１の溶液中におかれ、５秒間３個のバーストで音波処理され、３７℃で１時間定温放置され残漬物を除去するために１時間８０．ＯＯＯＸｇで遠心分離される。溶解ＨＴ　Ｖ−Ｉ準備はそれから同一の量の無水エーテルと共に２度抽出され、その結果の水溶相は以下の例で用いられる抗原混合物におけるＨＩＶ−Ｉ抗原源として用いられた。

ＨＴＬＶ−１細胞溶解産物（Ｌｙｓａ　ｔｅ）の準備ＨＴＬＶ−１はＨｕｔ　１０２．　Ｂ、　２セルラインで培養され、ＨＩＶ−１のように同様の対応で分離されるが、純化されたウィルス粒子が分断工程の一部で音波処理されなかった場合は、除かれる。Ｈｕｔ　１０２．　Ｂ、　２セルラインはＡＴＣＣから入手可能なＨｕｔ　１０２の副類憤物である。この副類似物はポワユス（Ｐｏｉｅｓｚ）等のキャンサー・セル（Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｅｌり３、　ｐｐ、　２３７−２４５（１９８３）に記述されている。

例以下キット成分は以下に述べられた検定における血液血清標本においてＨＴＬＶ −１及びＨＩＶ−１抗体を検出するために用いられる。

キットの素子１）上述したようにして準備されたＨＴＬＶ−Ｔウィルス抗原とＨＴＬＶ−１ウイルス抗原の混合物で被覆された標準マイクロテスト令反（９６ウエル）からなるテスト装置。

その抗原は抗原混合物を約１８時間室温で放置することによって、板内に吸着された。被覆はマイクロテスト板のウェルズの全てで達成された。各ウェルの中の各ウィルス抗原の量は約１５０　ｎｇであった。

２）ＨＴＬＶ−Ｉ及びＨＩＶ−１（７）血清陰性の個人から得られた人間の血清と０．０５％チメロサール防腐剤とからなに説明）と１：２１に希釈されて、検定がここで述べられるように行われる時、０．０と０．２の間に４０５　ｎｍで吸収読み取りを行う。マイクロテスト板の適当なウェルは希釈された陰性制′４ ’Ｂ溶液で被覆された。

３）高タイターＨＴＬＶ−１血清陽性の個人から得られた人間の血清と０．０５％チメロサール防腐剤とからなるＨＴＬＶ−１陽性制御溶液。使用の前にこの溶液は会社内基準（従来技術に従って準備された）に対して標準化されて標本希釈剤で１：２１に希釈され０．３５と１．３５の間に４０５ｎｍで吸光度読み取りを生ずる。マイクロテスト板の適当なウェルはこの陽性制御溶液で被覆される。

４）高タイターのＨＩ　Ｖ−ＩＱ性血清の個人から得られた人間の血清と０．０５χチメロサール防腐剤とからなるＨＩＶ　−１陽性制御溶液。使用の前に、この溶液は社内の標準（従来技術を使って＄備された）に対して標準化され標本希釈剤で１：２１に希釈されて０．３５と１．３５の間に４０５ｎｍで吸着度の読み取りを生ずる。マイクロテスト板の適当なウェルズはこの陽性制？１１溶液で被覆される。

５）フォスフアートで緩衝された塩水溶液（ｐＨ７，３）２０％熱非活性化された山羊の血清、０．０５％ポリキジレンツルビクン表面活性剤、１％ウシ血清アルブミン、０．０５％チメロサールと０．１％アジ化ナトリウム防腐剤からなる。この希釈剤は、試験標本と制御溶液と酵素抗体共役溶液を希釈するだめに用いられた。

６）アルカリフォスファターゼの凍結乾燥された結合体と山羊の圧入間１ｇＧ　（重及び軽チェーンスベシフインク）これはジャクソン免疫研究所アボンデール、ペンシルバニア州）から購入された。使用の前にこの結合体は標本希釈剤の１ｍｌと再水和されて、さらに希釈剤と１：５００の割合で希釈された。

７）シグマケミカル会社（セントルイス、ミズリー州）から購入された固形ｐ− ニトロフェニールフォスフアート基板タブレソ）（５ｍｇ）基板溶液は、以下に説明する希釈剤を使って使用される数分前に準備される。

８）０．５モル、マグネシウムクロライドと１モル、ジエチノールアミンにおける０、１％アジ化ナトリウム防腐剤とからなる基板に対する希釈剤。

９）必要な時に、板を洗浄するための洗浄緩衝剤は０．０５％ポリオキシエチレンソルビタン表面活性剤と０．１％クロラセタミド防腐剤を含むフォスフアート緩衝サリンからなる。

１０）　ｉ、（素反応の停止溶液は、４０５　ｎｍで各ウェル内で色を読み取る前にアルカリフォスファターゼの反応を終わらすものであって、３ノーマルソジウム水酸化物から構成された。

そのキ・７トは人間の血液血清サンプルにおけるＨ　Ｔ　Ｌ　Ｖ−１及びＨＩＶ −１抗体を以下のように検出するために使われた。

すべての検査成分は室温まで暖められることが可能であり、適当な溶液は上述したように、希釈された。２００μｍに希釈されたマイクロテスト板を用いてマイクロテスト板の４つのウェルはＨＴＬＶ−Ｔの腸性の制御溶液で充填され、４つのウェルは同様にＨＩＶ−１陽性制御溶液で充填される。２つの異なったウェルは陰性制御？８液（２００μ］毎）で充填される。試験サンプル（２００μｌ）は板の単一の異なったウェルへ置かれる。さらに他のウェルは標本希釈剤（２００μｌ）の標本でのみ充填される。

被覆された板はそれからカバーされ、約４５分間３７℃で定温放置されてそれぞれのウェルの内容を高める。各ウェルはそれから、上述した洗浄緩衝剤で洗浄されて、アスピレーションで乾燥される。

希釈された酵素ラベルづけされた抗体結合溶液（２００μｍ）が各ウェルへ与えられその板は、再びカバーされ、約４５レートされ、そして、そのウェルは、再び洗浄緩衝剤で６回洗浄される。再構成された基板（２００μｍ）は各ウェルに加えられて、その板はカバーされ、約３０分３７℃で定温放置される。

酵素反応は５０μｍでの停止溶液を各ウェルへ加えることで停止された。

各ウェルの吸光度は４０５　ｎｍフィルタが設けられた従来からのＥＬ　Ｉ　ＳＡプレートを使って゛酵素反応を停止してから６０秒以内に読み出される。この読み取り機は、おいているウェルの全ての吸光度の読み取りを行うようにプログラムされている。

試験の結果は以下のように計算される。２個の陰性制御読み取りがともに加えられて、２つに分割され、０と０．２０の間に（光学的な密度）おいているウェルの吸光度を差し引いた後で読み取られる平均吸光度を得る。平均吸光度はＨＴＬＶ−１及びＨＴ　■−１の陽性制御読み取りの各々に対して計算された。平均を計算するために４つの読み取りのうちの少なくとも３つが０．３５と１．３５０．Ｄ、のレンジ内に、あいたものを引算した後で入らなければならない。ＨＴＬＶ−１とＨＩＶ−Ｉの陽極制御の各々に対する１つの読み取り以上のものがその領域の外側にあるときには、その検定は繰り返されなければならない。それに加えて、平均値を計算するために用いられる読み取りは、計算された平均吸光度の３０％以内である。

陽極制御に対するカットオフ吸光度値は制御の最も低い平均吸光度を２つに分割することによって計算される。標本／カットオフ値（Ｓ／Ｃ）はテスト標本の吸光度をカットオフ吸光度値で分割することによって計算される。この値は非反応と反応読み取りとの間のカットオフ値として考慮される。１以下のＳ　／　Ｃ（！を与える検定は“陰性”と考えられる。１より大きいか１に等しいＳ／Ｃ値を与える検定は、同じ試験標本を使って２度繰り返えされた。両方の複製試験によれば１以下のＳ／Ｃ値を与えた時、その試験は非反応と考えられその試験標本に対して“陰性”を与えるものと考えられる。もし、複製試験の１又は両方が１より大きいかそれに等しいＳ／Ｃ値を与えるならば、その試験は°陽性”と考えられる。

その試験サンプルは又ＨＴＬＶ−１とＨＴＶ−ＩＯ抗体が存在するかを別々に市場で入手可能なＨＴＬＶ−ＩとＨＩＶ−１−ＥＬＩＳＡ検定を用いて試験され、（これはイーストマンコダノク社ロチニスター・ニューヨークから入手可能である）そして、これは、各テストについて抗体のただ１つだけの存在を検出する。

この発明に従った検査の結果は個別の制御検定を用いた場合と共に以下の結果を示す説明と共に以下の表１に示される。

表１において試験標本は以下の如くして得られた。

木　地方の血液銀行とアンプステート・メジカルセンター（シラソース、ニューヨーク）のパーナート・ボワエス博士（叶、　Ｂｅｒｎａｒｄ　Ｐｏ１ｅｓｚ）を介して通常の血液ドナーから得られた１０９の血液血清標本であって、そのサンプルは個別の制御検定とこの発明の検定との両方において、ＨＴＬＶ−１とＨＩＶ−１に対して試験された陰性を標本化したものである。

＊＊成人セル白血病として知られる患者からボワエス博士あるいは東洋紡株式会社（日本）を通して得られた２２の血液血清標本である。

＊＊＊ＡＴＤＳ又は前期−ＡＩＤＳを有するものとして診断された患者から得られた４０の血液血清標本である。

＠例えば動脈注射による薬の頻繁な使用者、怒染した患者の親族、ミニロバシーを有する人のように、ＨＴＬＶ−１又はＨＩＶ−１に対する怒染に大きなリスクが考えられる患者から得られた１０の血液血清標本である。

＃　癌患者から得られた７の血液血清標本Ｓ　ヘパティス、ミースレス、ルベラ、バラインフルエンザ、エプスタイン、バービラス、ハリセラシスターウィルス及びシトメガロウィルスのような各種のウィルスに怒染した患者から得られた２７の血液血清標本性　（ａ）誤った陽性は、個別の制御検定が負極値を示す時、ＨＴＬＶ−１／ＨＬＶ−１陽極Ｓ／Ｃ値の発生トシテ提示される。

注　（ｂ）誤った負極は、個別の制御検定がそれぞれのウィルス抗体に対する正の値を示す時、ＨＴＬＶ−Ｉ／ＨＩＶ−１陰性Ｓ／Ｃ値の発生として提示される。

注　（Ｃ）この陽性はＨＩＶ−１ウエスタン・プロットで確認された。

注　ｆｄ）この標本は以下の制御Ｓ／Ｃ値即ちＨＴＬＶ−１に対する０、８９及びＨＩ　Ｖ　−１に対する０、６１を与えた静脈注射による薬の常用者から得られたものである。

この発明二Ｊ、例えばＨＴＬＶ−１及びＨＩＶ−１抗体のような１組の抗体を同時に検出するための高度に鋭敏で精密な試験を提供するということが表１の試験結果から明らかである。

この発明は、特定の実施例に従って詳細に説明されたが、各変形例及び変化は、この発明の精神の範囲内で有効であると理解されるべきである。

国際調査報告

Claims

【特許請求の範囲】

１．第１の抗体と反応する第１のウィルス抗原と第２の抗体と反応する第２のウィルス抗原とからなる無抗体混合をその上に固定した固体キャリア物質からなり、前記第１及び第２のウィルス抗原は、前記ウィルス抗原の１つがＨＴＬＶ−ＩＩから得られる時、他のものはＨＴＬＶ−Ｉから得られるならば、ＨＴＬＶ−Ｉ，ＨＴＬＶ−ＩＩ，ＨＩＶ−ＩあるいはＨＩＶ−ＩＩから得られるようにしてなる試験装置。
２．前記キャリア物質はマイクロテスト板である請求項１記載の試験装置。
３．前記第１のウィルス抗原はＨＴＬＶ−Ｉからなり、前記第２のウィルス抗原はＨＴＬＶ−ＩＩからなる請求項１記載の試験装置。
４．前記第１のウィルス抗原はＨＴＬＶ−Ｉからなり、前記第２のウィルス抗原はＨＩＶ−Ｉからなる請求項１記載の試験装置。
５．前記第１のウィルス抗原はＨＴＬＶ−Ｉからなり第２のウィルス抗原はＨＩＶ−ＩＩからなる請求項１記載の試験装置。
６．前記第１のウィルス抗原はＨＩＶ−Ｉからなり前記第２ウィルス抗原はＨＩＶ−ＩＩからなる請求項１記載の試験装置。
７．ＨＴＬＶ−Ｉ、ＨＴＬＶ−ＩＩ、ＨＩＶ−Ｉ又はＨＩＶ−ＩＩに対する抗体である第１及び第２の抗体の同時検出のための検定キットであって、前記キットは前記第１の抗体と反応する第１のウィルス抗原と前記第２の抗体と反応する第２のウィルス抗原とからなり、前記第１及び第２のウィルス抗原は、前記ウィルス抗原の１つがＨＴＬＶ−ＩＩから得られた時、他のウィルス抗原がＨＴＬＶ− Ｉから得られる場合に、ＨＴＬＶ−Ｉ、ＨＴＬＶ−ＩＩ、ＨＩＶ−Ｉ又はＨＩＶ −ＩＩからのものであり、第１及び第２の抗体の両方と反応するラベルづけされた抗体からなる検定キット。
８．１又はそれ以上の陽性又は陰性制御溶液をさらに有する請求項７記載の検定キット。
９．前記第１のウィルス抗原はＨＴＬＶ−Ｉであり、前記第２のウィルス抗原はＨＩＶ−Ｉである請求項７記載の検定キット。
１０．前記ラベルづけされた抗体は酵素、ラジオアイソトープ、検出可能な粒子、化学ルミネッセンス化合物、クロモゲン、フルオロデン及びリン光化合物からなるグループから選ばれた検出可能な種類のものてラベルづけされている請求項７記載の検定キット。
１１．ＨＴＬＶ−Ｉ、ＨＴＬＶ−ＩＩ、ＨＩＶ−Ｉ又はＨＩＶ−ＩＩに対する抗体である第１及び第２の抗体の同時検出を行う検定キットであって、前記キットは（ａ）前記第１の抗体と反応する第１のウィルス抗原と前記第２の抗体と反応する第２のウィルス抗原とからなる無抗体混合物をその上に固定するソリッドキャリア物質であって、前記第１及び第２のウィルス抗原は、前記ウィルス抗原の１つがＨＴＬＶ−ＩＩから得られる時、他のウィルス抗原がＨＴＬＶ−Ｉから得られるならば、ＨＴＬＶ−Ｉ、ＨＴＬＶ−ＩＩ、ＨＩＶ−Ｉ又はＨＩＶ−ＩＩから得られてなるものと、（ｂ）第１及び第２のウィルス抗原のいずれかに対して抗体と非反応の陰性制御溶液と、（ｃ）前記第１のウィルス抗原と反応する抗体からなる陽性制御溶液と、（ｄ）前記第２のウィルス抗原と反応する抗体からなる陽性制御溶液と、（ｅ）第１及び第２の抗体と反応するラベルづけされた抗体のサンプルとからなる検定キット。
１２．前記ラベルづけされた抗体は酵素のラベルからなり前記キットはさらに前記酵素に対する発色成分からなる請求項１１記載のキット。
１３．前記酵素はアルカリフォスファターゼであり前記発色成分はアルカリフォスファターゼに対する基板からなる請求項１２記載のキット。
１４．前記基板はｐ−ニトロフェニルフォスファーテである請求項１３記載のキット。
１５．前記第１のウィルス抗原はＨＴＬＶ−Ｉからであり、前記第２のウィルス抗原はＨＩＶ−Ｉからのものである請求項２記載のキット。
１６．前記第１及び第２のウィルス抗原はウィルス生成セルから得られた細胞溶解産物の混合体の中にある請求項１１記載のキット。
１７．前記固体キャリア物質はマイクロテスト板である請求項１１記載のキット。
１８．生物サンプルにおいて第１及び第２の抗体を同時に検出する方法であって、前記抗体はＨＴＬＶ−Ｉ、ＨＴＬＶ−ＩＩ、ＨＩＶ−ＩまたはＨＩＶ−ＩＩに対するもので、前記方法は、Ａ．第１のウィルス抗原と第２のウィルス抗原とからなる無抗体混合を固定化する固体キャリア物質と前記生物サンプルを接触させて、前記抗原は、前記ウィルス抗原の１つガＨＴＬＶ−ＩＩからの物である時、他のウィルス抗原はＨＴＬＶ −Ｉからのものならば、ＨＴＬＶ−Ｉ、ＨＴＬＶ−ＩＩ、ＨＩＶ−ＩまたはＨＩＶ−ＩＩからであり、前記サンプル中に存在する第１及び第２の抗原と前記固定された第１及び第２のウィルス抗原との間に反応生成物を形成すること、Ｂ．ラベルづけされた反応生成物を形成するために、第１及び第２の抗体の両方ともと反応するラベルづけされた抗体と、前記反応生成物とを接触させ、Ｃ．前記ラベルづけされた反応生成物の存在を検出することからなる方法。
１９．前記生物サンプルは人間の全血液或いはその成分である請求項１８記載の方法。
２０．ＨＴＬＶ−Ｉ及びＨＩＶ−Ｉを同時に検出するための請求項１８記載の方法。
２１．ＨＴＬＶ−ＩとＨＴＬＶ−ＩＩとを同時に検出するための請求項１８記載の方法。
２２．ＨＩＶ−Ｉ及びＨＩＶ−ＩＩを同時に検出するための請求項１８記載の方法。
２３．ＨＴＬＶ−Ｉ及びＨＩＶ−ＩＩを同時に検出するための請求項１８記載の方法。
２４．前記ラベルづけされた抗体は酵素ラベルからなり、前記ラベルづけされた反応生成物は前記酵素に対する発色成分で検出される請求項１８記載の方法。
２５．前記酵素はアルカリフォスファターゼであり、前記発色生成物はアルカリフォスファターゼに対する基板からなる請求項２４記載の方法。
２６．人間の全血液あるいは組成分のサンプルにおいてＨＴＬＶ−ＩあるいはＨＩＶ−Ｉ抗原の一方に対する抗体の存在を同時に検出する方法であって、この前記方法は、Ａ．分断されたＨＴＬＶ−Ｉウィルス抗原と分断されたＨＩＶ−Ｉ抗原とからなる無抗体混合物をその上に固定するミクロタイター板と前記生物サンプルとを接触させるのであって、前記サンプル内に存在するＨＴＬＶ−Ｉ及びＨＩＶ−Ｉ抗体と前記固定化させたＨＴＬＶ−Ｉ及びＨＩＶ−Ｉ抗原との間の反応生成物を形成するもの、Ｂ．前記反応生成物の中のＨＴＬＶ−Ｉ及びＨＩＶ−Ｉ抗体の両方と反応する酵素ラベルづけされた抗体と前記反応生成物を接触させることと、Ｃ．ＨＴＬＶ−Ｉ又はＨＩＶ−Ｉ何れか一方の抗体が存在する結果として着色種を提供するために、前記酵素の基板からなる生成体を加え、Ｄ．前記発色種を検出すること、からなる方法。
２７．生物的サンプルの中に第１及び第２の抗体を同時に検出する方法であって、前記抗体はＨＴＬＶ−Ｉ，ＨＴＬＶ−ＩＩ，ＨＩＶ−Ｉ又はＨＩＶ−ＩＩへと前記抗体を対応させ、その方法は、Ａ．第１のウィルス抗原と第２のウィルス抗原とからなる無抗体物を固定化する固体キャリア物質で生物学的サンプルに接触するものであって、ウィルス抗原の１つがＨＴＬＶ−ＩＩからである時に他のウィルス抗原はＨＴＬＶ−Ｉからの場合には、前記抗原はＨＴＬＶ−Ｉ、ＨＴＬＶ−ＩＩ、ＨＩＶ−Ｉ又はＨＩＶ−ＩＩからであること、前記サンプル内に存在する第１及び第２の抗体と固定化された第１及び第２のウィルス抗原との間に反応生成物を形成すること、Ｂ．前記接触工程Ａと同時かあるいはそれに引き続いている時には、前記ラベルづけされた第１及び第２の抗体と前記固定された前記第１及び第２のウィルス抗原との間に反応生成物を形成するようにラベルづけされた前記第１及び第２の抗体の所定の量のものと前記抗原混合物とを接触させること、Ｃ．前記生物サンプルにおける前記第１及び第２の抗体の量の表示としてラベル化された反応生成物の量を測定することからなる方法。
２８．第１の抗体と反応する第１のウィルス抗原と第２の抗体と反応する第２のウィルス抗原からなる無抗体混合物をキャリア物質の上に固定することとからなり、前記第１及び第２のウィルス抗原は前記ウィルス抗原の１つがＨＴＬＶ−ＩＩからであり、他方がＨＴＬＶ−Ｉからであるとするなら、ＨＴＬＶ−Ｉ、ＨＴＬＶ−ＩＩ、ＨＩＶ−Ｉ又はＨＴＬＶ−ＩＩからである試験装置の準備の方法。
２９．前記第１の抗原はＨＴＬＶ−Ｉてあり、Ｈｕｔ　１０２セルあるいはそれのクローンから得られたＨＴＬＶ−Ｉウィルス抗原である請求項２８記載の方法。
３０．前記第２の抗原はＨｕｔ７８セルを感染するＨＩＶ−Ｉから得られたＨＩＶ−Ｉウィルス抗原である請求項２８記載の方法。
３１．前記キャリア物質はマイクロテスト板である請求項２８記載の方法。
３２．前記第１及び第２の抗原は吸収によって前記キャリア物質上に固定化される請求項２８記載の方法。
３３．前記第１及び第２の抗原は前記抗原と反応するラベルづけされてない抗体と共に前記キャリア物質上に固定化される請求項２８記載の方法。