JPH02504283A

JPH02504283A - 芳香族多環式ジオン化合物とヌクレオシド類似化合物とを含む抗ウイルス性組成物及びレトロウイルス感染を治療するための方法

Info

Publication number: JPH02504283A
Application number: JP1504326A
Authority: JP
Inventors: メリュエロ，ダニエル; レイビー，ガッド
Original assignee: ニューヨーク　ユニバーシィティ
Priority date: 1988-03-23
Filing date: 1989-03-22
Publication date: 1990-12-06

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】芳香族多環式ジオン化合物とヌクレオシド類似化合物とを含む抗ウイルス性組成物及びレトロウィルス感染を治療するための方法従来技逝この発明は、坑ウィルス効果を示す量の芳香族多環式ジオン化合物が、アジドチミジン、ジデオキシシチジンまたは関連ヌクレオシド類似化合物とともに含有された、哺乳動物のレトロウィルス感染に対する治療に用いる製薬剤及びこの製薬剤の使用方法に関する。

レトロウィルスの病原性の範囲は、緩慢進行性脳炎レンチウィルス、種々の白血病、癌腫及び肉腫を引き起こす腫瘍発生的形質転換（ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ）を起こすレトロウィルス、さらに最近同定されたＨＩＶ　（ヒト免疫不全ウィルス：　ＨｕｍａｎＩｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　Ｖｉｒｕｓ）感染までにわたる。哺乳動物のレトロウィルス感染（特にＨＩＶ）に対して治療力のある治療薬は限られており、それらはウィルス複製周期のある時期を阻害する。

すなわち、宿主の免疫系が、いろいろな種類のレトロウィルスに対して効果的に作用することができないことは、感染力を有するレトロウィルスの遺伝的Ｗａと関連している。例えば、ウィルスは細胞間接触によって直接的に感染することが可能であり、高い組換え活性を有し、そして宿主ゲノムへの統合によって長期間にわたって細胞内に潜伏した状態でいることができる。また、ＨＩＶは、感染した個体のＣＤ＋４７細胞を機能低下させることによって免疫応答抑制を引き起こすことが知られている。

さらに、最近になって、類縁関係にある二つのウィルスがＡＩＤＳ（後天性免疫不全症候群：　Ａｃｑｕｉｒｅｄ　Ｉｍｍｕｎｅ　ＤｅｆｉｃｉｅｎｃｙＳｉｎｄｒｏｍｅ）を引き起こすことが分かり、それらはＨＴＶ−１およびＨＩＶ−２と命名された。ヌクレオチドのレベルでは、ＨｒＶ−１のゲノムとＨＩＶ−２のゲノムとは、約５０％の相同性を示すに過ぎないが、二つのウィルスは、遺伝子の構成が同じであり、これら二つのウィルスがヒトの細胞を攻撃し破壊する機序はほぼ同様と考えられる。　よって、以下の記述においては、これら二つのウィルスをＨＩＶと称す。

今までのなかで最も効果的な抗ウイルス性治療薬はヌクレオシド類似化合物である２°、３°−ジデオキシシチジン及び３°−アジド−３°−デオキシチミジン（ＡＺＴ）である。　これらの二つの物質は、細胞内においてリン酸化され、次いでウィルスの逆転写酵素によってウィルスＤＮＡに取込まれることによって、完全には合成しきれていない段階での相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）の末端化を起こす。　しかし、これらの薬剤は宿主に対する毒性が高いために、使用が制限される。

現在は、ＨＩＶによる免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の治療に対してＡＺＴが使われている。ＡＺＴは免疫機能を増進させ、一部の患者においては」Ｖによる神経系機能不全が少なくとも部分的には改善され、ＡＩＤＳが関連した別の病状も改善されている。

しかし、ＡＺＴの投与量に比例して骨髄機能の抑制が起こることによって、貧血症や白血球減少症が引き起こされることが分かってきた。　このことは、ＡＩＤＳの治療に対するん汀の限界を示すものである。それにもかかわらず、現在のところ、ＡＩＤＳに対して有効な薬剤はＡＺＴのみである。また、ＡＩＤＳの患者に対してジデオキシシチジンが試用されたが、この薬剤はＡＺＴよりも毒性があるということが証明されている。

このようなことから、レトロウィルス感染、特にＨＩＶ感染の治療のためにヌクレオシド類似化合物を用いた製薬剤の開発が必要であり、この製薬剤においてはヌクレオシド類似化合物の毒性が病気で苦しむ患者において検出されない程度のものであること、その化合物の含有量を少なくすることが可能なものであること、かつ（あるいは）抗ウイルス効果が増大されたものであることが求められている。

本発明の目的は哺乳動物に対するレトロウィルス感染の治療のための抗ウイルス性組成物及びレトロウィルス感染を治療するための方法を提供することである。

本発明のもう一つの目的は、ヌクレオシド類似化合物の毒性による影響を最小限度に抑えたかたちで、ＡＺＴのようなヌクレオシド類似化合物を含有し、かつ哺乳動物に対するレトロウィルスの感染に効果を示す抗ウイルス性組成物及びそれを用いた治療法を提供するものである。

発兎９！旨本発明者らは、ＡＺＴなどのヌクレオシドのｒユ化合物と、多環式ジオン化合物のヒベリシン及びプソイド≦ベリシンとが相互作用することにより、より効果的な抗レトロウイルス抑制効果を示すことを偶然に発見した。それゆえに、このような抗ウイルス性薬剤の組み合わせは、それらの薬剤に感受性のあるＡＩＤＳあるいは他のレトロウィルス感染によって苦しむ患者に対して、より有益な効果を与えるものである。　今まで、ＡＺＴ以外にＡＩＤＳ患者の治療に有効な薬剤は発見されていないことから、上記の発見は大変重要な発見である。

本発明は、抗ウイルス性効果を示す量のヌクレオシド類似化合物と、ヒベリシン、プソイドヒベリシン、塩類及びそれらの混合物からなる群から選らばれた化合物とを含有し、かつ生理学的許容塩と希釈液とを含むものを、治療が必要なレトロウィルス感染動物に与えることを特徴とする哺乳動物のレトロウィルス感染を治療するための方法を提供するものである。

また、本発明は、抗ウイルス性効果を示す量のヌクレオシド類似化合物と、ヒベリシン、プソイドヒベリシン、塩類及びそれらの混合物からなる群から選らばれた化合物とを含有し、かつ生理学的許容塩と希釈液とを含むことを特徴とする哺乳動物のレトロウィルス感染を治療するための組成物を提供するものである。

上記した本願発明の特徴は、特許請求の範囲および添付図面を含む本願の記述を従来技術と照らし合わせることによって明らかになるだろう。

■皿二血星ｌ説盟第１図は、種々の濃度のプソイドヒペリシンを投与したフレンド白血病ウィルス感染マウスの生存率を示すグラフである。

第２図は、種々の濃度のヒベリシンを投与したフレンド白血病ウィルス感染マウスの生存率を示すグラフである。

第３図は、種々の濃度のＡＺＴと、種々の濃度のヒベリシンもしくはプソイドヒベリシンとを投与したフレンド白血病ウィルス感染マウスの生存率を示すグラフである。

第４図は、種々の濃度のヒベリシンおよびプソイドヒベリシンを投与したフレンド白血病ウィルス感染マウスの生存率を示すグラフである。

の　　　の−　な雷本発明者らは、ＡＺＴに代表されるヌクレオシド類似化合物と、芳香族多環式ジオン化合物のヒベリシン及びプソイドヒペリシンとが相互に作用し合うことから、ヌクレオシド類似化合物を単独で用いる場合には効果を示さないようなヌクレオシド類似化合物の濃度、すなわち哺乳動物に毒性を示さない濃度範囲内において、ヌクレオシド類似化合物（例えば、ＡＺＴのような薬剤）による効果的な抗レトロウイルス治療を行うことが可能であることを発見した。　この発見は、ＡＺＴを用いる治療法に堪えることが困難なＡＩＤＳ患者や、ＡＺＴの毒性が現われることによってＡＺＴ療法を中止せねばならないＡＩＤＳ患者もいることから大変重要なものである。　　さらに、　二つの抗ウイルス性治療薬を、ＡＩＤＳのようなレトロウィルスに感染した患者の治療に用いることによって、より効果的な抗レトロウイルス治療を行うことが可能となるだろう。

ヌクレオシド類似化合物と多環式ジオン化合物とは、それぞれ異なる機序でレトロウィルスの複製阻害を行なう。上記したように、ＡＺＴおよび関連ヌクレオシド類似化合物は、ウィルスのｃＤＮＡが合成仕切れていない段階で末端化を起こす。

しかし、本発明の多環式ジオン化合物においては、ウィルス複製後期にウィルス複製を阻害する可能性もあり、例えば、感染した細胞からのウィルス粒子放出に対する阻害作用、感染した細胞内におけるウィルス粒子構成要素の集合に対する阻害作用、あるいは直接的なウィルス粒子不活性化が考えられる。

また、１ｎｖｉｔｒｏの系においてウィル複製を阻害するほどの投与量の前記多環式ジオン化合物を用いても、フレンド白血病ウィルスに感染したマウス培養細胞系の全ウィルスｍＲＮＡおよびウルス抗原の発現には何ら変化しなかった（結果未記載）。

さらに、精製された逆転写酵素のみを前記多環式ジオン化合物ともにインキュベートしても、逆転写酵素の活性は影響されなかった（結果未記載）。　しかし、前記多環式ジオン化合物とフレンド白血病ウィルスとを直接インキュベートすると、該ウィルスの感染力が完全に消滅する。なお、Ｐｓ（プソイドヒベリシン）およびＨＹ（ヒベリシン）は直接的にウィルスを不活性化することによって、ウィルス感染の拡大を抑えると考えられる。

本発明者らは、非経口投与量が約０　、１　ｎｇから約３００μｑまでの範囲内のＰＳおよびＨＹを用いて、マウス８００匹以上について試験したが、その試験途中において、投与されたマウスに顕著な毒性は認められず、また動物が苦痛等の不快感に陥るいような状態、すなわち実験を中止すべき状態にも至らなかった。

なお、ここで用いたレトロウィルスという学術用語は、ＲＮＡゲノム及びＲＮＡ依存ＤＮＡポリメラーゼ（逆転写酵素）の酵素活性を有するウィルスを意味するものである。　すべてのレトロウィルスは、共通の形態学的、生化学的および物理的な性質を持つものなので、ウィルス分類学上、一つの族（ｆａｍｉｌｙ）として扱われている。　この性質は下記の第１表に要約されている。

（以下、空白）第１表公知のレトロウィルスの一般的な物理的特性状（＋）−重鎖ＲＮＡ　（６０ｓ　 −７０ｓ）　：　５　’構造（ｍ’Ｇ’ｐｐｐ’ＮｍｐＮｐ）　；ポリアデニル化３′　末端；３′　及び５′末端に反復配列；ゲノム複合体に塩基対合されたｔＲＮＡ　；蛋白質　　　　　６０重量％以上：　ｇａｇ、内部構造蛋白質；ｐｏｌ、逆転写酵素；　ｅｎｖ、エンベロープ蛋白質脂質　　　　　　約３５重量％；細胞膜から抽出炭水化物　　　　約４重量％；エンベロープ蛋白質に結合物理化学的特性　ショ糖における密度１．１６−１．１８９７ｍ１、塩化セシウムにおける密度１、１６−１．２１　ｇ／ｍｌ、脂肪溶剤及び洗浄剤に対する感受性を有す；熱による不活性化（５６・Ｃ１３０分）；紫外線およびＸ線に対する高抵抗性形態学的特性　　エンベロープに囲まれている球状のウィルス粒子（直径８０− １２０　ｎｍ）　　；種々の表面突起（直径８ｎｍ）：　コア殻（核様体）を伴うリボ核蛋白複合体を含む二十面体の一方、ＨＩＶのゲノムには少なくとも五つの異なる蛋白質がコートされており、これらの蛋白質はＴＡＴ、　ＡＲＴ／ＴＲ３，３’−０ＲＦ。

ＳＯＲおよびＲと呼ばれる。他方、ＨＴＬＶ　ＩはｐＸ遺伝子を有し、このｐＸ遺伝子には四つの蛋白質がコードされている。

すべてのレトロウィルスは、はぼ同様な化学的組成を有しており、一般的には蛋白質：　６０〜７０％、脂質＝３０〜４０％、炭水化物：　２〜４％、およびＲＮＡ　：約１％からなる。　レトロウィルス粒子のエンベロープは、細胞表面膜から抽出されれ、ウィルス粒子の殆ど全ての脂質はウィルス粒子の単位膜エンベロープに入っている。　レトロウィルスは、例とえば、フレンド白血病ウィルス（ＦＶ）、放射線白血病ウィルス（ＲａｄＬＶ）、猫白血病ウィルス、烏骨髄芽球症ウィルス、及びヒ）Ｔ細胞リンパ栄養ウィルス族（ＨＴＬＶ　Ｉ、　ＩＩ、　ＩＩＩ、及びｒｖ；　ＨＴＬＶ　ＩＩＩは、ヒト免疫不全ウィルスまたはＨＩＶとしても知られている）を含む。ＨＴＬＶ　Ｉは成人型Ｔ細胞白血病を起こすこと及びＨＴＬＶ　ＩＩＩは毛様細胞性白血病を起こすことが明らかになった。

　ＨＴＬＶ　ＩＶは、猿免疫欠損ウィルスと関係があり、このウィルスがアフリカ原住民のＡＩＤＳ保菌者から発見された。　このウィルスとＨＴＬＶ　ＩＩＩの関係は現在研究中である。

本発明の組成物は芳香族多環式ジオン化合物及びヌクレオシドの類似化合物を含むものであって、ＨＩＶのようなレトロウィルスよって起こる哺乳動物の病気の治療に用いることができる。　ヌクレオシドの類似化合物の用いられている投与量が毒性濃度よりも低いこと及び多環式ジオン化合物の用いられている投与量が細胞毒性を持たないことから、本発明の組成物はこのような病気に対して特に有益な特異的抗ウイルス治療剤である可能性もある。本発明の組成物のレトロウィルス感染に対する治療の有効性は、下記の第２例に示されており、毒性を示さない濃度範囲内のＡＺＴ及び府を含む混合物を用いて治療した場合、フレンド白血病ウィルスに感染したマウスの感染後６５日間経過後の生存率は１００％であった。逆に、同投与量のＡＺＴのみを用いて治療した場合は、感染後６５日の間にすべてマウスが死亡した。

ＨＩＶが脳細胞及び中枢神経系細胞に感染する可能性があり、このことによって、神経系機能不全及び痴呆を起こすことが知られている。ＡＺＴは血液脳関門を通ることができる。すなわちヒトにヒベリシン及びブソイドヒベリシンを前投与した場合に、それらの薬剤が抗機能低下剤として正の効果を示すことから、中枢神経系に作用していることかられかる。それゆえに、ヌクレオシド類似化合物を多環式ジオン化合物と共に用いることは、ＡＩＤＳの神経作用に苦しむ患者に投与した場合、非常に効果的である可能性がある。本発明の組成物のもう一つの利点は、経口投与した場合、多環式ジオン化合物およびヌクレオシド類似化合物が共に効果的であることである。

さらに、フレンド白血病ウィルス感染に対するＰＳもしくはＨＹ治療の効果は第４図に示されており、ＰＳおよびＨＹともにｎｑ量を感染から２４時間後に腹腔内に投与する治療ではウィルスによる牌臓肥大（巨牌症）を阻害した。感染したマウス（Ｂａ１ｂ／ｃ）には、ｐｓ約１　ｎｇもしくはＨＹ約１１００ｎを投与することによって、ＦＶによる牌臓肥大を５０％阻害した。

このような低量のＰＳ及び府は、感染２４時間後に腹腔内に一回投与することによって、驚くべき効果が得られる。

ＨＹ　（ヒベリシン）及びＰＳ（ブソイドヒベリシン）はオトギリソウ属（Ｓｔ、　Ｊｏｈｎ’ｓ　Ｗｏｒｔ）の植物に存在する芳香族多環式ジオン化合物である。　１９８７年８月１０日にり、デービスらによって出願された米国特許（出願番号０８４．０００号）には、ＨＹ及びＰＳがｉｎ　ｖｉｔｒｏ系および１ｎｖｉｖｏ系におけるウィルスの複製に対して強力な阻害剤であることが開示されている。

下記第１例に説明されるように、府及びＰＳは、オトギリソウ属（Ｓｔ、　Ｊｏｈｎ’ｓ　Ｗａｒｔ）植物から抽出することができる。　また、１９５５年５月３日にＨ，プラークマンらによって出願された米国特許（出願番号２．７０７．７０４号）及びＨ，プラークマンによるテトロへドロンレターズ　σ凶コ！■四上以箪９１主：　　１９９１−１９９４．１９７４に記載された方法によって、聞及びＰＳを合成することが可能である。　オトギリソウ属（Ｓｔ、　Ｊｏｈｎ ’ｓ　Ｗｏｒｔ）が世界中型る所にも分布しており、また前及びＰＳの抽出及び精製が比較的簡単で安価なので（以下の例−に示すように）、少量（例えばグラム単位）が必要とされる場合には、抽出することが好ましいが、大量（例えばキログラム単位もしくはそれ以上）生産の場合には、合成することが好ましい。

さらに、本発明の組成物は、抗ウィルス活性を保持するヒベリシン及びプソイドヒベリシンの誘導体もしくは塩類も含んでいる。特に、塩類はアルカリもしくはアミンタイプの基を持つものが本出願に該当するものである。

本発明において、使用可能なヌクレオシド類似化合物は２゛。

３°−ジデオキシシチジン、２°、３−デオキシチミジン、２°、３°−ジデオキシアデノシン、２°、３°−ジデオキシイノシン、さらに好ましくはＡＺＴが挙げられるがそれらに限られたものではない。本発明を実施するためのＡＺＴはバローズウエルカム（ＢｕｒｒｏｕｇｈｓＷｅｌｃｏｍｅ、　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｔｒｉａｎｇｌｅ　Ｐａｒｋ、　ＮＣ）から入手可能であり、また２゛、３− ジデオキシシチジンと２゛、３°−ジデオキシアデノシンはカルバイオケムーベーリング（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ−Ｂｅｈｒｉｎｇ、　ＳａｎＤｉｅｇａ、　ＣＡ）から、２°、３°−キシチミジンは、ファーマシアファインケミカルズ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｆｉｎｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、　Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、　ＮＪ）からそれぞれ入手可能である。

さらに、本発明は、レトロウィルスに感染した哺乳動物を治療するための方法を提供するもので、治療を必要とする哺乳動物に抗ウイルス的効果を示す量の、芳香族多環式ジオン化合物とヌクレオシド類似化合物とを投与するもので、該芳香族多環式ジオン化合物にはヒペリシン、プソイドヒベリシン、塩類及びそれらの混合物からなる群より選択された化合物を用いる。

本発明を用いてレトロウィルスに感染した哺乳類を治療する場合、感染したレトロウィルスに対してもっとも効果的なヌクレオシド類似化合物、多環式ジオン化合物の種類、およびそれらの組成物は、例えば、１ｎｖｉｔｒｏ系でのＨＩＶに関する実施例４または実験動物でのフレンド白血病ウィルスに関する実施例２のような適当な系を用いて日常的に行なわれるような実験によって確認することができる。

ウィルスによって起こる、ＡＩＤＳ１ウィルス血症（血液中にウィルスが存在すること）、またはセプシス（体液中にウィルスが存在すること）のｉｎ　ｖｉｖｏにおける治療を行う場合、本発明の組成物の投与は、経口投与、局所投与、好ましくは非経口投与、より好ましくは静脈投与によって行なわれ、その一般的な投与量は、ヒペリシンを参考にして以下の通りに決められる。

活性成分の一つとして芳香族多環式ジオン化合物を含有する抗レトロウイルス組成物は、−回の治療あたり約０．００１〜１０００００μｇ／ｋｇ体重、好ましくは約２〜５００００μｇ／ｋｇ体重、より好ましくは約２００〜５００００μ ｇ／ｋｇ体重の範囲内の該ジオンを含有する。

活性成分として一つあるいはそれ以上の別の芳香族多環式ジオン化合物を用いる場合、投与量は大体ヒベリシンと同様である。しかしながら、投与された芳香族多環式ジオン化合物もしくはその組成物が、例えばヒペリシンの二倍の活性を有する場合、最小の効果的投与量はヒベリシンの１．５倍である。更に二つ以上の活性抗ウイルス成分（たとえば本発明の芳香族多環式ジオン化合物以外の抗ウィルス剤を含む）が本発明による治療薬もしくは予防薬として用いられる場合、必要とあれば、あるいは適当であれば、芳香族多環式ジオン化合物の最小投与量は減少させても良い。最後に、二つ以上の活性成分が用いられ、芳香族多環式ジオン化合物と他の一つあるいは一つ以上の抗ウイルス成分が相互に作用し合う場合（もしくは、２つあるいはそれ以上の芳香族多環式ジオン化合物とヌクレオシド類似化合物との間において）、最小の効果的投与量はより少なくても良い。

上記のことを説明するために、抗ウィルス活性を持つヌクレオシド類似化合物と共に芳香族多環式ジオン化合物を投与する治療法あるいは予防法について考察する。　（ここで、「共に」とは同時に投与、あるいは続けて投与するという意味であり、それぞれが同法において別々に投与されることではない）。

一つあるいはそれ以上のヌクレオシド類似化合物を本発明の芳香族多環式ジオン化合物と共に投与する場合、−回の治療において約１００〜５ｏｏｏｏμｑ／ｋｑ体重の量を本発明の芳香族多環式ジオン化合物とともに投与する。

病状を改善するのに必要な治療期間または投与期間は治療の対象となる個体によって異なり、病気の程度、期間、各個体の一般的な状態によって決まるもので、さらに組成物の特異的な抗ウィルス活性および毒性により決められるものである。各治療に必要とされる全投与量は、分割投与でも、一括投与でもよい。抗ウイルス治療は、毎日、−日二回以上、もしくは、−週間に一回以上、もしくは、治療対象個体の状態および病気の段階に依存するものである。

また、本発明者らはヒベリシンの抗ウィルス活性が、治療頻度（ｆｒｅｑｕｅｎｃｅｙ　ｏｆ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）に依存するものであることを０発見し“　た。例えば、マウスを用いた研究では、予想通り、１０μｑを一回投与するよりも、１００μｑを一回投与したほうが効果的である。しかし、１０μｑを毎日続けて１０日間投与し続けても、１０μｑ−回投与の効果さえも示されなかった。

これとは対象的に、１０μｑ−回投与よりも１０μ９を一週間に一回投与するほうが効果的であった。このことは、治療頻度がその効果に影響を与えているわけである。それゆえに、本発明の組成物においても、同様のことがいえる。マウスを用いて得た前記知見は、他の哺乳類もしくはヒトには適用できるものではないが、当業者には公知の方法による型通りの実験により決めることができる。例えば、投与量および頻度に関するマトリックスを作成し、そのマトリッスのそれぞれの点に実験個体群を割り当てていけばよい。このような実験計画では、好ましくは本発明の組成物の組織分布特性を考慮する必要がある。

本発明はまた、レトロウィルス感染治療のための、薬学的組成物および製剤を提供するものである。本発明の芳香族多環式ジオン化合物及び／もしくは、ヌクレオシドの類似化合物は、通常の固形および液状（例えば、錠剤、カプセル、カブレット、注射および経口用液体）の形に処方することができる。本発明の製剤は、活性成分として、本発明の芳香族多環式ジオン化合物およびヌクレオシド類似化合物（上記に開示）を有効量含むものである。例えば、非経口治療用組成物は、０．００１〜１０００００μｑの本発明の芳香族多環式ジオン化合物と１００〜５００００μｑの上記ヌクレオシド類似化合物とを含有する、滅菌した等浸透圧塩溶液からなる。各投与形式における投与量に含有される活性成分の単位量は、それ自身で効果的な量である必要はなくい。なぜならば、必要有効量は、錠剤、カプセル、注射、もしくはそれらを組み合わせ、それぞれの一度に投与する量を変えることによって得ることができるからである。

本発明にもとづく製剤は、更に、製薬的に許容な担体、希釈液、充填剤、塩類、および当業者に公知の物質を含有する不活性なものからなり、当業者が通常定めるところにより、有効な投与形式が選択され、特定の目的に利用されるものである。例えば、錠剤は、当業者により公知な、通常の固形担体の製造方法により形成されてもよい。固形担体の例としては、デンプン、砂糖、ベントナイト、シリカ、および他の一般的な担体が用いられる。プロピレングリコール、ベンジルアルコール、インプロパツール、エタノール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルアセタミド、もしくは他の生物学的に許容な有機溶剤、もしくは、水溶液（例えば、ｐＨ７以上、好ましくはｐＨ８）が、本発明の抗レトロウイルス組成物を含有する固体および液体の製薬剤の調整において、担体、希釈液、もしくは溶剤として、用いられるものである。更に、担体及び希釈液の限定されない例として、炭水化物、アルブミンおよび他の血漿蛋白質、例えば低音度リポ蛋白、高密度リポ蛋白およびこれらの血清蛋白質に結合した脂質が含まれている。このような脂質はホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミンおよびトリグリセリドのような中性脂質を含む。他の脂質はトコフェロール、レチノイン酸及びシクロデキストランを含む。公知な半固体製薬剤としては、例えば座薬も含まれるであろう。

好ましい主投与形態は等浸透圧性塩類溶液で、約０．１〜１０００００μｑの範囲内にある本発明の芳香族多環式ジオン化合物及び約１００〜５００００μ９の範囲内の量にあるヌクレオシド類似化合物を含むものである。

本発明に用いるカプセルは、製薬的に許容である物質からなり、例えばゼラチンまたはセルロース誘導体からなる。また、持続的に薬物を送る経口性及び経皮性の投与方式も考えられる。

本発明の組成物を特異的な薬物担体としてのりポゾームに取り込ませてもよい。

このようなりポゾームは他の活性薬物を含むもので、例えばＨＩＶ　ｐ１２０．　ｐ４１及びｐ２４（この蛋白質のグリコシレート誘導体も含まれている）のようなウィルス感染細胞に出現するウィルス蛋白質に対して特異的なａＨＴＶ抗体がある。

本発明は以下の特別な例で説明されるが、これに限ったものではない。

１：　ヒペリシン　びプソイドヒベリシンのオトギリソウ　Ｓｔ、　Ｊｏｈｎ’ ｓ　Ｗｏｒｔの林物からの　出ヒベリシン（ｑｏＨ＋Ａ、分子量５０４．４３、ここでは肝と称す）及びブソイドヒベリシン（ｑＯＨ，６０，、分子ｔ　５２０．４３、ここではＰＳと称す）は以下のようにして得られた。

オトギリソウ（Ｓｔ、　Ｊｏｈｎ’ｓ　Ｗｏｒｔ　Ｐｌａｎｔ）は、開花期（東半球で上刃から子方）に収穫される。この収穫されたオトギリソウを５５ｏＣで乾燥した後、切断、粉砕して抽出用材料とし、アセトン（キログラムあたり約５からｌθリットル）抽出にかける。

すなわち、該材料１キログラムをツクスレー抽出器（Ｋｉｍａｘ製。

Ｆｉｓｈｅｒ　５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、　Ｎｅｗ　Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ、　ＮＪで入手可能）に入れ、抽出溶媒が無色になるまで（約５時間から１０時間）抽出する。芳香族多環式ジオン化合物を含んだ溶液は赤い蛍光色を示し、５ｃｈｅｉｂｅ　５ｃｈｅｎｔａ　、　Ｂｅｒ、　７５：　２０１９．１９４２．　Ｂｒｏｃｋｍａｎｎ、　Ｍ、。

Ｎａｔｕｒｅｗｅｉｓｓ　３８：　４７．１９５１に記載されたような吸収スペクトル及び蛍光スペクトルを有した。

芳香族多環式ジオン化合物を含んだ溶媒を減圧下で蒸発させ、さらに残渣を完全乾燥することによって、９５グラムの乾燥残渣を得た。さらに、この乾燥残渣をシリカゲル６０（０，０６〜０　、２０　ｍｍ、　Ｍａｌｉｎｃｋｒｏｄｔ、　Ａｍｅｒｉｃａｎ　５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、　ＭｃＧａｗＰａｒｋ、　ＩＬ）のカラムクロマトグラフィによって分画した。すなわち、ドライカラム方法を用て、上記乾燥残渣の２５グラムを約５００ミリリツトルのアセトンに溶解し、これに等量のシリカゲル６０を加えて混合物とし、ロータリエバポレータ（Ｂｕｃｈｉ製、　Ａｍｅｒｉｃａｎ　５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）によって、該エバポレータを回転させながら該混合物をホモゲナイズし、かつ該混合物が乾燥するまで溶媒を蒸発させた。ついで、この混合物を１キログラムのシリカゲル６０のカラムの上にのせ、クロロホルムによって溶離させた。該溶離は、クロロホルムがカラムの下に落ちるまで続けた。ついで、クロロホルム−アセトン−メタノール、７５　：　１５　：　１０　　（Ｖｏｌ／Ｖｏｌ／Ｖｏｌ）からなる溶媒テカラムを洗った。上記赤色が、元の濃さの１１５になった時、クロロホルムの濃度が減り、カラムはクロロホルム−アセトン−メタノール、５５：１５：１０からなる溶媒で溶離した。なお、上記カラムクロマトグラフィは約二日間を要した。

二つの主な成分の更なる精製及び分離はＧａＳＣｈｒＯｍａｔＯｒａ　ｈ　。

Ｐｒ１ｎｃｉ　Ｉｅｓ　Ｔｅｃｈｎｉ　ｕｅｓａｎｄＡ　　１ｉｃａｔｉｏｎｓ、　Ａ、Ｂ、Ｌｉｔｔｌｅｗｏｏｄ、ｅｄ、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　１９７０に記載されたようにフラ・クシュクロマトグラフイを二回用いることによっておこなった。

同定した二つの主な成分は、ヒペリシンαＩＹ）、Ｒｆ値０．４５．０．１９ｇ；ブソイドヒベリシン（ＰＳ）Ｒｆ値０．３５，０．７３ｇである。二つの成分のＮＭＲスペクトル分析は、Ｂｒｏｃｋｍａｎｎ、　Ｈ。

ｅｔ　ａｌ、　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ　１　：３７．１９７５　　に記載されたものと一致した。

このようにして得られた化合物は、使用するまで乾燥した暗所か、もしくはエタノール中、４’ｃにおいて保存した。

２：　　Ｈの　　　の　ウィルス哺乳類のフレンド白血病ウィルス（ＦＶ’）感染に対する、本発明の組成物の抗ウイルス効果を調べた。

Ｆｒ１ｅｎｄ、　Ｃ，Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　１０５：　３０７−３２４．１９５７及びＦｒ１ｅｎｄ、　Ｃ，ｅｔ　ａｌ　。

Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ、Ｓ、Ａ、　６８：　３７ｇ−３８３，１９７１及びＦｒ１ｅｎｄ、　Ｃ，ｅｔａｌ、　Ｎａｔ、　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎ５ｔ、　Ｍｏｎｏｇｒ、　２２：５０５−５２２．１９６６に記載されたように、フレンド白血病ウィルス（ＦＶ）は、攻撃的レトロウィルスであり、このウィルスは、マウスの感受性株、例えば、ＢＡＬＢ／ｃ系統やＮＩＨ５ｗ１５５系統のマウスに赤白血病を誘発するものである。この悪性形質転換は、膵臓病巣化ウィルス（ＳｐｌｅｅｎＦｏｃｕｓ　Ｆｏｒｍｉｎｇ；　５ＦＦＶ）及びＥｃｏｔｒｏｐｉｃ　Ｍｕｒｉｎｅ　Ｆｒ１ｅｎｄ　Ｌｅｕｌｅｍｉａ）ｈｌｐｅｒウィルス（Ｆ−ＭｕＬｖ）の双方の活動に起因するものである。

この急性赤白血病は、肝牌腫大（肺臓および肝臓の大きさが極端に大きくなること）および極度な貧血を特徴とするものである。

フレンド白血病ウィルスは、該ウィルスを静脈注射して１０日経過した■感染マウスの肥大膵臓を破砕（ホモゲナイズ）することにより得られた。すなわち、該肺臓を該肺臓の重さの１０倍に等しい容積からなるリン酸緩衝溶液中でホモゲナイズした。ＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ　Ｌａｂｓ、　Ｂａｒ　Ｈａｒｂｏｒ、　ＭＥ）の膵臓肥大に対する、ＨＹ及びＰＳもしくはこれらの混合物およびＡＺＴの効果について調べた。

これらの実験では、ＢＡＬＢ／ｃマウスにウィルス（１０６フオーカス形式ユニットＦＦＵ）を、静脈接種し、その２４時間後に本発明の抗レトロウイルス組成物の指摘投与量を、該マウスの腹腔内に投与した。その１０日後に前記マウスを致死させ、その肺臓の重量を測定した。

ウィルス接種時に、静脈内にＰＳ及び府の混合物を一回投与（ウィルスと混合して）した場合の長期的効果について調べ、かつＡＺＴの効果と比較した。ＡＺＴの高毒性を阻害するために、また米国特許（出願番号０８４．０００号、１９８７年８月１０日付け）に記載の多環式ジオン化合物についての使用方法を利用するために、ＡＺＴをウィルス接種の２時間、５時間、１６時間後に、それぞれ− 回づつ腹腔内投与をおこなった。マウス（ｌグループ５個体）の各グループに、ＡＺＴ（３回の腹腔内注射）と、ＰＳまたはＨＹ（１回の静脈注射）のみと、それらの組み合わせたものとを投与した結果、動物の生存率は以下の通りであった。結果は第２表に示し、そのグラフは第１−３図に示した。

（以下、余白）第２表１０Ｐｇ　ＰＳ　　　　　　　４０５０μｇ　ＰＳ　　　　　　　８０１５０μｇ　ＰＳ　　　　　　　１００１０μｇ　ＨＹ　　　　　　　１１００５０１ｚ　ＢＹ　　　　　　　８０１５０μｇ　ＨＹ　　　　　　　１０００．２μｇ　ＡＺＴ　　　　　　　０２μｇ　ＡＺＴ　　　　　　　０Ｏ２０１Ｌ　ＡＺＴ　　　　　　　４００．２μｇ　ＡＺＴ　＋　５０　ＰＳ　　１００２μｇ　ＡＺＴ　＋　５０　ＰＳ　　１００２０μｇ　ＡＺＴ　＋　５０　ＰＳ　　１０００．２μｇ　ＡＺＴ　＋　５０　ＨＹ　　１００２μｇ　ＡＺＴ　＋　５０　ＢＹ　　１００２０μｇ　ＡＺＴ　＋　５０　ＨＹ　　１００第１図および第２表に示すように、ウィルス接種３０日後までに治療剤を何も投与されなかった■感染マウスが全て死亡したにもかかわらず、ＰＳを投与されたマウスのウィルス接種６５日後における生存率は、マウス１個体当たり１０μｑの場合が４０％、５０μｑの場合が８０％、そして１５０μ９の場合が１００％であった。更に、第２図および第２表に示すように、府を投与したマウスのウィルス接種６５日後における生存率はマウス−個体あたり５０μｑ投与の場合は１００％、１０μｑもしくは５０μｑの聞を投与の場合は８０％であった。これに反して、マウス−個体あたり０．２μｑから２０μｑまでの範囲の量のＡＺＴを投与したマウスでは、■を接種したマウスの生存率が少しだけ増加した。ＡＺＴが最小投与量の場合においても、ＡＺＴ　ｈ　ＨＹもしくはＰＳとの混合物は相互作用した（第３図および第２表）。例えば、マウス−個体あたり０．２μ９のＡＺＴを投与されたマウスでは、■接種マウスの１００％が接種後３０日までに死亡し、またマウス−個体あたり５０μｑのＰＳでは■接種マウスの２０％が接種後３０日までに死亡したが、マウス−個体あたり０．２μｑのＡＺＴ及び５０ μｑのｎを投与したマウスでは■接種マウスは接種後６５日経過後も生存した。

さらに、注目すべきことに、ＡＺＴに前もしくはＰＳを混合しない場合、ん］の投与量にかかわらず■接種マウスは接種後６５日までにすべて死亡した。

以上のことから、ＡＺＴと槍゛またはＰＳとを組み合わせた治療では、ＡＺＴの投与回数及び投与量を減少させることが可能であリ、またＡＺＴの効果を損、なわず副作用を減少させることが可能であることがわかった。

３　：　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｙ、での」■　　にＳするｐｓの夕ＥＶに感染したＨＵＴ−７８細胞におけるＨＴＶ複製に対するＰｓの効果について調べ、かつその効果とＡＺＴの場合における同様な効果との比較をおこなった。■Ｖ全全体たいする抗血清（ＨＩＶ保菌者もしくはＡＩＤＳ患者から得た不活性血清）またはウサギから精製されたウィルス成分を用いた間接蛍光抗体法によって、感染を観察した。

細胞の■Ｖ感染に対するプソイドヒペリシンの効果は、種々の強さのプソイドヒベリシンと同時に■Ｖウィルス及び未感染細胞とを混合し、これらを熱によって不活性化された１０％子牛脂児血清を添加したＲＰＭＩ−１６４０培地（ＧＩＥＣＯ製、ＧｒａｎｄＩｓｌａｎｄ、　ＮＹ）中において２４．４８．７２及び１４４時間インキュベートして観察した。インキュベート後、細胞を洗浄し、固定し、さらにフルオレセイン標識された抗免疫グロブリンとインキュベートした後、抗ＨＩＶ抗体とインキュベートして感染した細胞の割合を求めた。ヒベリシン及びプソイドヒベリシンはエタノールに溶解して使用なくてはならないが、最終アルコール濃度は１−２％を超えず、また対象群は細胞に対するウィルスの割合が前記アルコール薬剤の溶解に用いたアルコールの濃度と同濃度にした。なぜなら、アルコールかに■に感染する細胞の割合を増加させることが知られているからである。

ＨＩＶ感染の広がりは、１％の感染した細胞と９９％の感染していない細胞とを、適当な濃度のブソイドヒベリシン存在下で培養することによって観察した。該培養からサンプルを実験開始後２４．４８．７２及び１４４時間経過後に採取して、サンプルを用いて上記の蛍光抗体間接法により感染した細胞の割合が計算された。この結果は以下の第３表に示した。

（以下、余白）第３表！ＬＬＩＪ！　　　　　　　　　　　　劇姐よ皿剰凄冷Ｍ　　　　　　　　　　ｌ！ＩＩ！ｌ　　ａ　１０１皿対照例　　　　　　　　　　　　　２．７　　　２６．７　　６２．９対照例＋エタノール　　　　　　　２．９　　　３０．９　　７６．８１！、ＬＭＡＺＴ　　　　　　　１．８　　０．７５　０．６１０ μＭＡＺＴ　　　　　　　１　　　　０．４　　０．３２μｇｐｓ　　　　　　　　　　３　　　　５２．８　　７７．９１０μｇ　ＰＳ　　　　　　　　３．３　　３８　　９０．１ｓｏｐｇｐｓ　　　　　　　　Ｏ，２１，２１８，８Ｍ２Ｍ＆　　　　　　　　　　　μ姐よ丘■１冷標本　　　　　　　　　Ｌ４ＭＡ　ＡＵＭＡ　１１片固対照例　　　　　　　　　　　　　２．７　　　２６　　　　６８１μＭ　ＡＺＴ　　　　　　　２　　　　３　　　３２０μＭＡＺＴ　　　　　　　　２　　　　２２　　　５８４０μ９ＰＳ　　　　　　　　　　２　　　　２４　　　４７８０μｇｐｓ　　　　　　　　　　２　　　　　５　　　２９上記の実験から、ＰＳは培養液中のＨＵＴ−７８細胞においてＩ（ＩＶ感染が広がることを阻止する効果があることが分かる。一方、１μＭ及び１０μＭ濃度のＡＺＴは、感染していない細胞へのＨＩＶ感染の拡大を９５％以上阻止しく第３表）、そして５０μｑ濃度のＰＳは、感染後１４４時間においてＨＩＶ感染の拡大が約８０％減少しく第３表、第１実験）、また８０μｑ濃度のｐｓは、ＨＩＶ感染の拡大を約７０％減少させた（第３表、第２実験）。

１４：　　　ａの　　　によるＨ’ｌＶウィルスのヒト免疫不全症候群（ＨＩＶ）に対する、ヒベリシン、プソイドヒペリシン、塩類またはそれらの混合物と、２°、３−ジデオキシシチジンまたはＡＺＴとを合わせた場合の活性は、以下のような方法で研究することができる。■Ｖ感染した０ＫＴ４＋リンパ芽球細胞は、例えばＨ９クローン　（Ｐｏｐｏｖｉｃ、　Ｍ、、他、５ｃｉｅｎｃｅ　２２４：　４９７−５００．１９８４）またはＨＵＴ　７８細胞（Ｇａｚｄａｒ、　Ａ、Ｆ、、他、Ｂｌｏｏｄ　５５：　４０９．１９８０）またはＭｏ１ｔ−７８細胞（ＡＴＣＣＣＲＬ　１５８２として％　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ、　Ｒｏｃｋｖｉｕｅ、　ＭＤから入手可能）を、２０％子牛脂児血清（Ｆｌｏｗ　Ｌｉｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、　Ｉｎｇｌｅｗｏｏｄ。

ＣＡ）含有ＲＰＭＩ−１６４０培地（ＧＩＢＣＯ製、Ｇｒａｎｄ　ｌ５ｌａｎｄ、　ＮＹ）中において維持する。約４ｘｌＯ５／ｍｌ細胞の濃度の細胞を接種した培地を３つ用意し、それらをポリブレン（約２μｇ／ｍｌ、Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、、　Ｓｔ、　Ｌｏｕｉｓ、　ＭＯ）にさらし、４ｘｌＯ’ の細胞あたり２ｘｌＯ’のＨＴＶウィルス粒子を感染させ、上記第２例で示したようにして本発明の組成物存在下及び本発明の組成物非存在下で培養する。

本発明の組成物の抗ウィルス活性は、５ａｒｉｎ、　Ｐ、Ｓ、、他、Ｊ、　Ｎａｔ。

Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎ５ｔ、　７８：　６６３−６６５．１９８７に記載された方法、すなわち逆転写酵素活性及び、ＨＩＶ蛋白質ｐ２４及びｐ１７の発現を観察することによって決定する。

ＨＴｖａ　　白　２４　　び１７のの　　を、１する　゛ＨＵＴ７８細胞、Ｍｏ１ｔ−７８細胞または殿細胞（２ｘ　１０’　）のそれぞれについてＨＩＶに未感染のものとまたは感染したものとを用意し、それらの細胞を５μｇ／ｍｌから１００μｇ／ｍｌまでの範囲の種々の濃度のＰＳ、　　ＨＶ又はそれらの混合物と、０．２　μｇ／ｍ　１から２０μｇ／ｍｌまでの範囲の種々の濃度の２°、３°−ジデオキシシチジンまたはＡＺＴとを合わせたものに４日間連続してさらす。そして、■Ｖ蛋白質ｐ２４及びｐ１７ｇａｇの発現率を、ＨＩＶ蛋白質ｐ２４及びｐ１７　ｇａｇに対するマウスのモノクローナル抗体（Ａｂｂｏｔ　Ｌａｂｓ、　Ｎｏｒｔｈ　Ｃｈｉｃａｇｏ、　ＩＬ、　Ｄｕｐｏｎｔ、　Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、　ＤＥ。

社製ＨＩＶ血清抗原検知セットなど）をもちいて、間接蛍光抗体顕微鏡法によって決定する。陽性を示す細胞はフルオレセインで標識したヒツジ抗マウスＩｇＧ　（ＣａｐｐｅｌｌＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｃｏｃｈｒａｎｖｉｌｌｅ、　ＰＡ　）によって可視化される。この実験では、同様の実験を同時に行ない、かつ少なくとも３回繰り返した。

逆版Ｗ荀對おへ夫定上記のように、■Ｖに感染したＨ９細胞、ＨＵＴ７８細胞またはＭＯＬＴ−７８細胞（５００ウィルス粒子／細胞）を、種々の濃度のＰＳ、　ＨＶと、それらの混合物に２°、３−ジデオキシシチジンまたはＡＺ１′を加えたものとにさらす。４日目に培地上澄液を採取し、ポリエチレングリコールと共にウィルス粒子を共沈させ、ついで例２に示すように、遠心にってウィルス粒子を得る。このようにして得られたウィルス体を、５０ｍＭのトリス塩酸（ｐＨ７，５）　、５ｍＭのジチオトレイトール、２５０ｍＭの塩化カリウム、及び０．２５％のトリトンＸ−１００を含む緩衝液に３００μｑ懸濁する。ついで、これらの試料の逆転写酵素活性は、５０ｍＭのトリス塩酸（ｐＨ７，５）　、５ｍＭのジチオトレイトール、１００ｍＭの塩化カリウム、０．０１％のトリトンＸ−１００、テンプレートプライマーとしての１０　μｉ、のｄＴ、、ｒＡ。

、１０ｍＭの塩化マグネシウム、１５μｇの［３Ｈ］　ｄＴｒＰ　（ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ、　Ｂｏｓｔｏｎ、　ＭＡ）　、及び１０μｌの粉砕されたウィルス懸濁液を含む５０叶の反応混合物中で分析する。３７°Ｃ１１時間のインキュベーション後、５０μｑの酵母ｔＲＮＡ　（ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌ、　Ｓｔ、　Ｌｏｕｉｓ、　ＭＯ）の添加して、冷トリクロロ酢酸不溶分画への取り込みを調べた。この実験では、同様の実験を同時に行ない、かつ少なくとも３回繰り返した。

５：　　血「ウィルスの　りに・番る　　　の　ム　の効果猫白血病ウィルス（ＦｅＬＶ）血症陽性の猫に、５　ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇ　までの範囲の投与量のＰＳもしくは府を接種する。

他の猫には一投与のＰＳ／ＨＹと、４−４０投与量のん］または２°、３°−ジデオキシシチジン（１ｍｇ／　ｋｇ）とからなる混合治療を、種々の時間間隔を置いて、１日２回行う。血清中のＦｅＬＶレベルを追求し、これにもとづいて、もう１回同様の治療法を行なうか、あるいはウィルス血症阻害の程度に合わせた治療法を行なう　（本実験の対照群の猫には、同様の濃度のデオキシヌクレオシド類似化合物のみを投与する）。血清中のＦｅＬＶレベルの追求継続時間は、実験条件に基づいて決められ、少なくとも６月間の追求が行われる。

口口　　　　　　　　　　　　　生　存　寒　　−＊ｆｆｌξ大阻嘗％９　　　ｏ　　ロ　　　ｐｐｐｐｏ。

Ｏ−〜　　　ω　　　ト　　　φ　　　Φ　　　−■　　　ψ　　　−補正書の写しく翻訳文）提出書（特許法第１８４条の７第１項）！０国際出願番号　　　ＰＣＴ／ＵＳ　　８９１０１２１１、発明の名称　　芳香族多環式ジオン化合物とヌクレオシド類似化合物とを含む抗ウイルス性組成物及びレトロウィルス感染を治療するための方法３、特許出願人住　所　　アメリカ合衆国　二ニーヨーク　１００１２　　ニューヨークワシントン　スフウェア　サウス　７０名称　　　ニューヨーク　ユニバーシイティ代表者　　追完国　籍　　アメリカ合衆国　− ４、代理人住　所　　東京都中央区八重洲２丁目１番５号６、添付書類の目録笠肚旧丞０虹皿（１）レトロウィルスによって病気になった哺乳動物を治療するための方法で、該治療に必要な抗ウイルス効果を示す量の、ヌクレオシド類似化合物とヒベリシン、プソイドヒベリシン、塩類及びそれらの混合物からなるグループから選択きれた多環式ジオン化合物とが、哺乳動物に投与されることからなることを特徴とするレトロウィルス感染に対する治療方法。

（２）前記ヌクレオシドの類似化合物を２°、３°−ジデオキシシチジン、２° 、３°−ジデオキシアデノシン、２°、３゛−ジデオキシチミジン、２゛、３° −ジデオキシグアノシン及び３°−アジド−３°−デオキシチミジンからなる群から選択することを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の治療方法。

（３）前記効果的な量を経口投与することを特徴する特許請求の範囲第１項に記載の治療方法。

（４）前記効果的な量を非経口投与することを特徴する特許請求の範囲第１項に記載の治療方法。

（５）前記効果的な量を静脈投与することを特徴する特許請求の範囲第１項に記載の治療方法。

（６）前記多環式ジオン化合物がヒベリシンからなることを特徴する特許請求の範囲第１項に記載の治療方法。

（７）前記多環式ジオン化合物がプソイドヒペリシンからなることを特徴する特許請求の範囲第１項に記載の治療方法。

（８）前記多環式ジオン化合物がヒペリシンとブソイドヒペリシンとの混合物からなることを特徴する特許請求の範囲第１項に記載の治療方法。

（９）前記効果的な量が、前記哺乳動物の体重１ｋｇ、あたり約１０００μ９から５ｏｏｏｏμ９の範囲の前記ヌクレオシドの類似化合物および前記哺乳動物の体重１　ｋｇ、あたり約０．００１μｑから１０００００μｑの範囲の前記多環式ジオン化合物からなることを特徴する特許請求の範囲第１項に記載の治療方法。

（１０）レトロウィルス感染した哺乳動物の治療のための製薬剤において、ヌクレオシドの類似化合物と、ヒベリシン、プソイドヒベリシン、塩類及びそれらの混合物からなる群より選択された多環式ジオン化合物とが、哺乳動物におけるウィルス感染の治療に効果を示す置台まれていることを特徴とするレトロウィルス感染に対する製薬剤。

（１１）前記ヌクレオシド類似化合物は２°、３°−ジデオキシシチジン、２° 、３゛−ジデオキシアデノシン、２°、３°−ジデオキシチミジン、２’、　３ ’−ジデオキシグアノシン及び３゛−アジド−３°−デオキシチミジンからなる群より選択されることを特徴する特許請求の範囲第１Ｏ項に記載の製薬剤。

（１２）前記多環式ジオン化合物がヒベリシンからなることを特徴する特許請求の範囲第１０項に記載の製薬剤。

（１３）前記多環式ジオン化合物がプソイドヒベリシンからなることを特徴する特許請求の範囲第１０項に記載の製薬剤。

（１４）前記多環式ジオン化合物がヒペリシン及びブソイドヒペリシンの混合物からなることを特徴する特許請求の範囲第１Ｏ項に記載の製薬剤。

（１５）非経口投与形式であることを特徴する特許請求の範囲第１０項に記載の製薬剤。

（１６）錠剤及びカプセルからなる群より選択された経口投与形式であることを特徴する特許請求の範囲第１０項に記載の製薬剤。

（１７）前記効果的な量が、約１０００μｑから５ｏｏｏｏ１．Ｌｇの範囲の前記ヌクレオシド類似化合物と約０．００１μｑから１０００００μｑの範囲の前記多環式ジオン化合物とからなることを特徴する特許請求の範囲第１０項に記載の製薬剤。

（１８）製薬的に許容な担体もしくは希釈液からなることを特徴する特許請求の範囲第９項に記載の製薬剤。

（１９）注射可能な溶液からなることを特徴する特許請求の範囲第９項に記載の製薬剤。

（２０）前記レトロウィルスがヒト免疫不全症ウィルスからなることを特徴する特許請求の範囲第１項に記載の治療方法。

（２１）前記レトロウィルスがフレンド白血病ウィルスからなることを特徴する特許請求の範囲第１項に記載の治療方法。

（２２）前記レトロウィルスが猫白血病ウィルスからなることを特徴する特許請求の範囲第１項に記載の治療方法。

（２３）レトロウィルスの成長および複製を阻害するのに効果的な量の、ヒベリシン、プソイドヒペリシン、塩類およびそれらの混合物からなる群から選択された化合物に、前記レトロウィルスを接触させることを特徴とするレトロウィルスの成長と複製とを阻害する方法。

国際調査報告

Claims

【特許請求の範囲】

（１）レトロウイルスによって病気になった哺乳動物を治療するための方法で、該治療に必要な抗ウイルス効果を示す量の、ヌクレオシド類似化合物とヒペリシン、プソイドヒペリシン、塩類及びそれらの混合物からなるグループから選択された多環式ジオン化合物とが、哺乳動物に投与されることからなることを特徴とするレトロウイルス感染に対する治療方法。
（２）前記ヌクレオシドの類似化合物を２′，３′−ジデオキシシチジン、２′ ，３′−ジデオキシアデノシン、２′，３′−ジデオキシチミジン、２′，３′ −ジデオキシグアノシン及び３′−アジド−３′−デオキシチミジンからなる群から選択することを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の治療方法。
（３）前記効果的な量を経口投与することを特徴する特許請求の範囲第１項に記載の治療方法。
（４）前記効果的な量を非経口投与することを特徴する特許請求の範囲第１項に記載の治療方法。
（５）前記効果的な量を静脈投与することを特徴する特許請求の範囲第１項に記載の治療方法。
（６）前記多環式ジオン化合物がヒペリシンからなることを特徴する特許請求の範囲第１項に記載の治療方法。
（７）前記多環式ジオン化合物がプソイドヒペリシンからなることを特徴する特許請求の範囲第１項に記載の治療方法。
（８）前記多環式ジオン化合物がヒペリシンとプソイドヒペリシンとの混合物からなることを特徴する特許請求の範囲第１項に記載の治療方法。
（９）前記効果的な量が、前記哺乳動物の体重１ｋｇ．あたり約１０００μｇから５００００μｇの範囲の前記ヌクレオシドの類似化合物および前記哺乳動物の体重１ｋｇ．あたり約０．００１μｇから１０００００μｇの範囲の前記多環式ジオン化合物からなることを特徴する特許請求の範囲第１項に記載の治療方法。
（１０）レトロウイルス感染した哺乳動物の治療のための製薬剤において、ヌクレオシドの類似化合物と、ヒペリシン、プソイドヒペリシン、塩類及びそれらの混合物からなる群より選択された多環式ジオン化合物とが、哺乳動物におけるウイルス感染の治療に効果を示す量含まれていることを特徴とするレトロウイルス感染に対する製薬剤。
（１１）前記ヌクレオシド類似化合物は２′，３′−ジデオキシシチジン、２′ ，３′−ジデオキシアデノシン、２′，３′−ジデオキシチミジン、２′，３′ −ジデオキシグアノシン及び３′−アジド−３′−デオキシチミジンからなる群より選択されることを特徴する特許請求の範囲第１０項に記載の製薬剤。
（１２）前記多環式ジオン化合物がヒペリシンからなることを特徴する特許請求の範囲第１０項に記載の製薬剤。
（１３）前記多環式ジオン化合物がプソイドヒペリシンからなることを特徴する特許請求の範囲第１０項に記載の製薬剤。
（１４）前記多環式ジオン化合物がヒペリシン及びプソイドヒペリシンの混合物からなることを特徴する特許請求の範囲第１０項に記載の製薬剤。
（１５）非経口投与形式であることを特徴する特許請求の範囲第１０項に記載の製薬剤。
（１６）錠剤及びカプセルからなる群より選択された経口投与形式であることを特徴する特許請求の範囲第１０項に記載の製薬剤。
（１７）前記効果的な量が、約１０００μｇから５００００μｇの範囲の前記ヌクレオシド類似化合物と約０．００１μｇから１０００００μｇの範囲の前記多環式ジオン化合物とからなることを特徴する特許請求の範囲第１０項に記載の製薬剤。
（１８）製薬的に許容な担体もしくは希釈液からなることを特徴する特許請求の範囲第９項に記載の製薬剤。
（１９）注射可能な溶液からなることを特徴する特許請求の範囲第９項に記載の製薬剤。
（２０）前記レトロウイルスがヒト免疫不全症ウイルスからなることを特徴する特許請求の範囲第１項に記載の治療方法。
（２１）前記レトロウイルスがフレンド白血病ウイルスからなることを特徴する特許請求の範囲第１項に記載の治療方法。
（２２）前記レトロウイルスが猫白血病ウイルスからなることを特徴する特許請求の範囲第１項に記載の治療方法。