JPH0253726A - コレステロール低下剤および新規リン脂質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明はコレステロール低下剤に関し、詳しくは特定の
リン脂質を有効成分とし、少量で効果があり副作用のな
い優れたコレステロール低下剤、およびビス−ホモ−γ
−リノレン酸を含有する新規リン脂質に関する。

［従来の技術及び発明が解決しようとする課題］コレス
テロールは年令と共に増加する傾向にあり、本来は体内
で重要な役割をするが、多量に蓄積すると動脈硬化の原
因となる。特に、近年、日本人の食事が欧米化するにつ
れてコレステロールが高くなりつつある。

従来、γ−リノレン酸およびビス−ホモ−γ−リノレン
酸にコレステロール低下作用があり、その活性はリノー
ル酸より優れていること　（菅野ら、Ａｎｎ、　Ｎｕｔ
ｒ、　Ｍｅｔａｂｏｌ、　３０．２８９．１９８６）、
大豆リン脂質はコレステロール低下作用があること（今
泉ら、Ｊ、　Ｎｕｔｒ、　Ｓｃｉ、　Ｖｉｔａｍｉｎｏ
ｌ、　２８．２８１〜２９４、１９８２）が知られてい
る。現在、リン脂質をコレステロール低下剤として使用
したものもあるが、大豆や卵黄から抽出したリン脂質を
使用しており、該リン脂質に含まれる脂肪酸がパルミチ
ン酸、オレイン酸、リノール酸などであり、これらが雑
多に含まれているため、コレステロール低下の効果は弱
いものであった。また、フェニルエチル酢酸やトリパラ
ノールなどの合成剤も、コレステロール低下剤として知
られているが、これらは長期間にわたって使用すると、
副作用が生じる等の問題があワた。

［課題を解決するための手段］ そこで、本発明者らは少量で効果があり、副作用のない
コレステロール低下剤を得るべく鋭意研究を重ねた結果
、γ−リノレン酸（以下、ＧＬＡと称す。）あるいはビ
ス−ホモ−γ−リノレン酸（以下、ＤＧＬＡと称す。）
を含有するリン脂質を有効成分として用いれば、ＧＬＡ
またはＤＧＬＡとリン脂質の有するそれぞれのコレステ
ロール低下作用が相乗効果を示すこと、またＧＬＡやＤ
ＧＬＡは人間にとって必須脂肪酸であり、リン脂質は細
胞膜の重要な構成成分であるので副作用の心配がないこ
とを見出し、本発明を完成させた。

すなわち、本発明はγ−リノレン酸含有リン脂質および
／またはビス−ホモ−γ−リノレン酸含有リン脂質を有
効成分とするコレステロール低下剤を提供すると共に、
ビス−ホモ−γ−リノレン酸を含有するリン脂質をも提
供するものである。

本発明でいうＧＬＡＬ有リン脂質とは、構成脂肪酸とし
てＧＬＡを含むリン脂質をいい、ＤＧＬＡ含有りン脂質
とは構成脂肪酸としてＤＧＬＡを含むリン脂質をいう。

本発明で用いる上記ＧＬ八金含有リン脂質たはＤＧＬＡ
含有リン脂質は、例えばムコール属またはコニディオボ
ラス属に属し、ＧＬＡＬ有リン脂質またはＤＧＬＡ含有
リン脂質生産能を有する微生物を、炭素源を含む培地に
培養し、培養物からＧＬＡＬ有リン脂質またはＤＧＬＡ
含有リン脂質を採取することにより製造することができ
る。この際に用いる微生物としては、具体的にはムコー
ル属微生物としてはムコール・ヒエマリシス（Ｍｕｃｏ
ｒ　ｈｉｅｍａｌｉｓ）ＩＦＯ５３０５，ムコール・シ
ルシネロイデス（Ｍｕｃｏｒｃｉｒｃｉｎｅｌｌｏｉｄ
ｅｓ）　ＨＩＩＴ　１１２１　（ＦＥＲＭ　Ｐ−９３５
９）、ムコール・ジャバニクス（Ｍｕｃｏｒ　Ｊａｖａ
ｎｉｃｕｓ）　ＨＵＴ１１６２　（ＦＥＲＭ　Ｐ−９３
６０）などが挙げられ、コニディオボラス属微生物とし
てはコニディオボラス・ヘテロスポラス（Ｃｏｎｉｄｉ
ｏｂｏｌｕｓ　ｈｅｔｅｒｏｓｐｏｒｕｓ）　ＡＴＣＣ
１２９４１、コニディオボラス・グロプリフェラス（Ｃ
ｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ　ｇｌｏｂｕｌｉｆｅｒｏｕｓ
）　ＣＢＳ　２１８７５４゜ｎａｎｏｄｅｓ）　ＣＢ５
１８３７６２などが挙げられる。

さらに、上記微生物のほか、これらから８導される変異
株であって上記のようにＧＬＡＬ有リン脂質またはＤＧ
ＬＡ含有リン脂質を生産する能力を有するもの等も等し
く使用することができる。

上記微生物を培養するための培地は、該微生物が良く生
育して目的とするリン脂質を生産しつるものであればよ
く、炭素源、窒素源、無機塩類および必要により微生物
の生育に好適なアミノ酸等の成分を含むものが用いられ
る。炭素源としてはグルコース、でんぷん、廃糖蜜等の
糖類や酢酸ソーダなどが使用でき、特にグルコース等の
糖類が好適である。さらに、ムコール属の場合にはリノ
ール酸高含有油脂であるサフラワー油、ヒマワリ油など
を、コニディオボラス属の場合にはγ−リノレン酸含有
油脂である月見草油、ムコール属や千ルティエレラ属に
属する糸状菌から抽出された微生物油脂、特に炭素数１
８以上の不飽和脂肪酸含有油脂等を必要に応じて加える
と、目的とするリン脂質の生産量を増大させることがで
きる。

また、窒素源としてはアンモニウム塩１酵母エキス、コ
ーン・ステイープ・リカー　ペプトンなどがあり、無機
塩類としてはマグネシウム塩、カルシウム塩、リン酸塩
、鉄塩、銅塩などがある。

培養にあたり、炭素源は培地に最初から全二を加えても
よいが、培養開始後適当な時期に追加することによって
ＧＬＡＬ有リン脂質またはＤＧＬＡ含有リン脂質の生産
量を増大させることができる。

グルコース等の炭素源を培地に最初から加える場合、初
発添加量が多過ぎると、微生物の生育に悪影響を及ぼす
ことがあるので、通常はｌＯ〜２５０ｇ／βとする。ま
た、炭素源を培養中に追加する場合、その時期１回数な
どは適宜決定すればよい。たとえば、グルコース等の炭
素源の初発濃度を１００〜２００ｇ／Ｒとして培養を行
い、炭素源の大部分が消費されたときに５０−ｔｏｏｇ
／ｐ程度の炭素源を追加（１回もしくは数回に分けて）
することにより菌体の増殖を高め、結果的にＧＬＡまた
はＤＧＬＡ高含量のリン脂質の生産量を増すことができ
る。

その他の培養条件、たとえば温度９時間等は使用する微
生物の性質等を考えて目的とするリン脂質の生産量が高
くなるような条件を設定すればよい。通常は２０〜３２
℃、好ましくは２５〜３０ｔ、ｐ）１３〜７、好ましく
は３．５〜６１．：て６ｏ〜１２ｏ時間、好ましくは７
０〜１００時間行えばよい。

ＧＬＡまたはＤＧＬＡを含有するリン脂質は通常、微生
物菌体中、特に細胞膜に蓄積されるので、遠心分離法等
の常法により培養液を固・液分離し、該リン脂質を含む
菌体を得る。このようにして得られたリン脂質中のＧＬ
ＡまたはＤＧＬＡ含量は５〜５６％である。さらに、こ
の菌体を必要に応じ洗浄、乾燥することもできる。

また、必要により菌体をメタノール、エタノール、ジク
ロロメタン、クロロホルムなどの極性および非極性の有
機溶剤の任意の割合の混合物を用いてリン脂質の抽出を
行ない、分離・精製することもできる。菌体を予めボー
ルミルで粉砕したのちリン脂質を抽出したり、有機溶媒
中で粉砕してリン脂質を抽出することができる。抽出物
を脱溶剤した後、アセトン分画を行い、アセトンに不溶
な物質を集めれば、リン脂質の粗分側物が得られる。さ
らに、得られたすべての画分をシリカゲルカラムクロマ
トグラフィーで再分画するとＧＬＡまたはＤＧＬＡ高含
量のリン脂質組成物が得られる。

上記以外のＧＬＡ含有リン脂質またはＤＧＬＡ含有リン
脂質の製造法としては、大豆リン脂質をＧＬＡまたはＤ
ＧＬＡと常法によりエステル交換する方法等があげられ
るが、ＧＬＡまたはＤＧＬＡ高含量のリン脂質組成物が
得られる方法であれば任意に適用できる。

このようにして得られたリン脂質のうちＤＧＬＡ含有リ
ン脂質は今までに全く知られていなかった新規なリン脂
質であり、コレステロール低下に有効な各種脂肪酸を高
含量に有している（後記第２表および第３表参照）。

上記の方法により得られるＧＬＡ含有リン脂質またはＤ
ＧＬＡ含有リン脂質は、目的に応じ常法により精製して
ＧＬＡまたはＤ　Ｇ　ｌ？’−有量をより高めることが
できる。ＧＬＡおよびＤＧＬＡにコレステロール低下作
用があることを考えると、リン脂質中のＧＬＡまたはＤ
ＧＬＡの含有量は１００％が望ましいが、精製コストと
コレステロール低下作用を合わせ考え、リン脂質中のＧ
ＬＡまたはＤＧＬＡが５〜５６％、好ましくは１０〜５
６％となるように精製すればよい。

本発明のコレステロール低下剤は、上記方法により得ら
れるＧＬＡ含有リン脂質またはＤＧＬＡ含有リン脂質を
有効成分とするものであり、ＧＬＡ含有リン脂質とＤＧ
ＬＡ含有リン脂質はそれぞれ単独で用いても併用しても
よく、さらに大豆リン脂質や各種リン脂質から分取した
成分等を配合してもよい。

本発明では、ＧＬＡ含有リン脂質および／またはＤＧＬ
Ａ含有リン脂質をそのままサラダ油、牛乳、バターなど
の油性食品に０．１〜５％添加して動脈硬化予防用の健
康食品または機能性食品とすることができる。また、Ｇ
ＬＡ含有リン脂質および／またはＤＧＬＡ含有リン脂質
を含む各種製剤とすることもできる。製剤化するにあた
って、ＧＬＡ含有リン脂質および／またはＤＧＬＡ含有
リン脂質の配合量は目的や用途により異なるが、コレス
テロール低下効果が得られる量とすればよく、通常は製
剤中における上記リン脂質含量が２〜５０重量％となる
ように用いる。経口用固形剤を製造する場合には、ＧＬ
Ａ含有リン脂質および／またはＤＧＬＡ含有リン脂質に
賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑剤などを加え、常法により
錠剤、顆粒剤、カプセル剤等とすることができる。また
、非経口的製剤を製造する場合には、上記リン脂質を安
定剤、緩衝剤等と共に溶剤に加え、常法により皮下注射
剤、静脈内注射剤とすることができる。さらに、動物飼
料用とする場合は、ＧＬＡ含有リン脂質および／または
ＤＧＬ＾ＧＬＡン脂質を含む菌体をそのまま他の飼料成
分と配合して利用することができる。

［実施例］ 次に、本発明を実施例により説明する。

製造例１ 第１表に示したムコール用培地（ｐＨ４）６Ｊ２を１０
１容のジャーファーメンタ−に入れ、この培地にムコー
ル・ヒエマリシス　ＩＦｏ　５３０３を接種し、３０℃
で３日間通気攪拌培養を行なった。

弔 １表 ムコール 用培地 コニディオボラス 用培地 グルコース　　　　１５０　　ｇ／Ｒ３０ｇ／ｌ硫酸ア
ンモニウム　１９．８　ｇ／Ｒ 酵母エキス　　　　０．６　ｇｈ　　　　５　　ｇｈＭ
ｇ５０４１．Ｏｇ／ｊ　　　　１　　ｇ／ＲＦｅ５０４
４０　　ｍｇ／Ｒ０，０１ｇ／ｊ！ペプトン　　　　　
　　　　　　１０　　ｇｉｌｌＫＨ２ｐｏ４９．Ｏｇ／
Ｉ！３　　ｇ＃培養終了後、培養液をン濾過して菌体を
回収し、湿菌体を得た。この湿菌体７ｋｇをメタノール
２ｉと共に破砕抽出した。得られた抽出液をエバポレー
ターで約５００ｍ１＋まで濃縮し、ジクロロメタン３０
０ｍ１’を加えて二層分離した。次いで、ジクロロメタ
ン層を回収し、濃縮して約５０ｍｊ！の濃縮液を得た。

これにアセトンを４００ｍ１）加え、沈澱物を清適した
。沈澱物は２回アセトンで洗浄し、約２０ｇの白色結晶
を得た。このものの脂肪酸組成を第３表に示す。このう
ち２ｇをクロロホルムに溶解し、シリカゲルカラムクロ
マトグラフィー（カラム；ワコーゲル、和光純薬製）に
注入した。展開溶媒はクロロホルム／メタノール＝（Ｉ
）４：１゜（ＩＩ）　３　：　２．　　（ＩＩＩ）　１
　：　４と分けて行なった。

この結果、（１）からはホスファチジルエタノールアミ
ンが（Ｉりからはホスファチジルコリンが、（ＩＩＩ　
）からはその他のリン脂質が分画された。リン脂質の組
成を第２表に示す。

なお、脂肪酸組成の分析は以下の方法により行なった。

リン脂！２０〜３０Ｂに対して０．５　Ｎ　　Ｎａ１ｌ
（Ｉ　ＩＩＩＲを加え、８０℃で１５分間ケン化した後
、７％ＢＦ３メタノール１　ｍＲを加え、８０℃で５分
間メチルエステル化した。次いで、水２ｍｌ＋とヘキサ
ン５ｍｐを加え、よく攪拌してヘキサンで脂肪酸メチル
エステルを抽出し、このヘキサン層をそのままガスクロ
マトグラフ（島津Ｇｆ；−９八、カラム：ガスクロ工業
製、ユニリール３０００　、カラム温度＝２００℃；注
入口温度２５０℃）にかけ、分析した。また、リン脂質
組成は高速液体クロマトグラフィー（）ＩＰＬｃ）を用
いて固定相シリカゲル、８動相アセトニトリル：メタノ
ール：硫酸＝１００　　：　３　：　０．０５．流速１
　ｍｆ！／ｍｉｎ、検出波長２０２ｎｍで分析した。

製造例２ 第１表に示したコニディオボラス用培地にγ−リノレン
酸含有油（モルテイエレラ属菌体からの抽出油脂；オレ
イン酸４３％、リノール酸１１％。

γ−リノレン酸８％）を培地に対して３　ｖｏＲ％とな
るように加えた培地を作製した。この培地にコニデイオ
ボラス・ヘテロスポラスＡＴＣＣ１２９４１を接種し、
３０℃で２日間振どう培養した。

培養終了後、遠心分離により菌体を集菌し、湿菌体を得
た。この湿菌体から、製造例１と同様の方法でリン脂質
を抽出した。このもののリン脂質組成を第２表に示し、
脂肪酸組成を第３表に示す。なお、リン脂質組成および
脂肪酸組成の分析は、製造例１と同様の方法で行なった
。

第　　２　　表 第　　３ 表 第２表および第３表より、製造例１で得られたリン脂質
はＧＬ＾含有リン脂質であり、製造例２で得られたリン
脂質はＤＧＬ＾含有リン脂質であることが判った。

実施例１ ４週間飼育したスプラグ−ドレイ雄ラット６匹を使用し
、以下に示す方法で動物実験を行なった。

室温２０〜２３℃の飼育室で、飼料（組成：カゼイン２
０．０重量％、ミネラル混合物３．５重量％、ビタミン
混合物１．０重量％、塩化コリン０．２重量％。

ろ紙粉束５．０重量％、　ＤＬ−メチオニン０．３重量
％、コレステロール１．０重量％、コール酸ソーダ０．
２５重量％、コーンスターチ１５．０重量％、ショ糖５
ｉ、７５重量％）に製造例１で得られたＧＬＡ含有リン
脂質２．０重量％を添加したものを上記ラットに投与し
、１９日間飼育した。飼育中、飼料と水は自由に摂取さ
せた。実験終了後、ラットの体重を測定し、採血および
開腹を行ない、常法により血漿コレステロールおよび肝
臓コレステロールを測定した。この結果を第４表に示す
。

実施例２ 実施例１において、ＧＬＡ含有リン脂質の代わりに製造
例２で得られたＤＧＬ＾含有リン脂質２．０重量％添加
した飼料を用いたこと以外は実施例１と同様の操作を行
なった。この結果を第４表に示す。

比較例１ 実施例１において、ＧＬＡ含有リン脂質の代わりに大豆
リン脂質２．０重量％添加した飼料を用いたこと以外は
実施例１と同様の操作を行なった。この結果を第４表に
示す。なお、用いた大豆リン脂質の組成および脂肪酸組
成は以下に示す通りである。

リン脂　組成（％） ホスファチジルコリン ホスファチジルエタノールアミン ホスファチジルイノシトール ホスファチジン酸 リゾホスファチジルコリン そ　　の　　他 ２８．１ ２８、Ｏ １９，８ １８，６ ５，５ 脂肪酸組　（％） パルミチン酸 パルミトオレイン酸 ステアリン酸 オレイン酸 リノール酸 α−リノレン酸 γ−リノレン酸 ビス−ホモ−γ−リノレン酸 そ　　の　　他 １３．６ ２．３ １３．０ ６０．５ １０．６ 比較例２ 実施例１において、ＧＬＡ含有リン脂質の代わりにＧＬ
Ａ含有油脂である月見草２．０重量％を添加した飼料を
用いたこと以外は実施例１と同様の操作を行なった。こ
の結果を第４表に示す。なお、用いた月見草の脂肪酸組
成は以下に示す通りである。

脂肪酸組成（％） パルミチン酸 パルミトオレイン酸 ステアリン酸 オレイン酸 リノール酸 α−リノレン酸 γ−リノレン酸 ビス−ホモ−γ−リノレン酸 そ　　の　　他 ６．０ ０．１ １．１！ ８．０ ７２．４ ０．３ １０．５ ０．９ 比較例３ 比較例２において、飼料中のショ糖を４９．７５重量％
とし、大豆リン脂質２．０重量％を加えたこと以外は比
較例２と同様の操作を行なフた。この結果を第４表に示
す。

第　　４　　表 提供され、さらに該ＤＧＬＡ含有リン脂質および／また
はＧＬＡ含有リン脂質を有効成分とするコレステロール
低下剤が提供される。このコレステロール低下剤は少量
で効果があり、しかも副作用がない。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）γ−リノレン酸含有リン脂質および／またはビス
   −ホモ−γ−リノレン酸含有リン脂質を有効成分とする
   コレステロール低下剤。
2. （２）ビス−ホモ−γ−リノレン酸を含有するリン脂質
   。