JPH0253799A - 新規ペプチド及び抗菌剤 - Google Patents
新規ペプチド及び抗菌剤Info
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- JPH0253799A JPH0253799A JP63203724A JP20372488A JPH0253799A JP H0253799 A JPH0253799 A JP H0253799A JP 63203724 A JP63203724 A JP 63203724A JP 20372488 A JP20372488 A JP 20372488A JP H0253799 A JPH0253799 A JP H0253799A
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- JP
- Japan
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- peptide
- formula
- eluted
- arginine
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野］
本発明は、北米産カブトガニ（Ｌｉｍｕｌｕｓ 匹打餅
ｅｍｕｓ）から抽出、単離した抗菌作用を有する新規ペ
プチド及びその塩、並びにこれらを含有して成る抗菌剤
に関するものである。
ｅｍｕｓ）から抽出、単離した抗菌作用を有する新規ペ
プチド及びその塩、並びにこれらを含有して成る抗菌剤
に関するものである。
［従来の技術］
近年、有用な生理活性物質としてペプチド類が注目され
ている。プロティンエンジニアリングの発展に伴って、
従来の天然型のペプチド類のみならず、合成タイプのペ
プチド類の開発研究も積極的に進められており、有用な
ペプチド類の開発は、これまで医薬の分野を中心にかな
りの実績をあげている。
ている。プロティンエンジニアリングの発展に伴って、
従来の天然型のペプチド類のみならず、合成タイプのペ
プチド類の開発研究も積極的に進められており、有用な
ペプチド類の開発は、これまで医薬の分野を中心にかな
りの実績をあげている。
抗菌作用を有するペプチド類の開発も、従来かなり積極
的に行われており、これまで、比較的低分子のオリゴペ
プチド類を中心として数多くの報告がなされている。例
えば、ダラム陽性菌及びダラム陰性菌に対して抗菌作用
を有するホスホノトリペプチド類（特開昭５７−１０６
６８９）、ホスホノジペプチド誘導体（特開昭５８−１
３５９４） 、環状ペプチド誘導体（特開昭５８−２１
３７４４）、抗菌剤及び抗ウィルス剤として有用な１０
個のアミノ酸配列から成る新規ペプチド（特開昭５９−
５１２４７）、酵母類に対する抗菌剤として有用なポリ
ペプチド（特開昭６Ｏ−１３０５９９）、ダラム陽性菌
に対する抗菌剤として有用な糖ペプチド誘導体（特開昭
６０−１７２９９８） 、新規グリコペプチド誘導体（
特開昭６１−２５１６９９ 、特開昭６３−４４５９８
）、ダラム陽性菌に対して有用なオリゴペプチド（特開
昭６２−２２７９８） 、ペプチド系抗生物質（特開昭
６２５１６９７、特開昭６３−１７８９７）等、多数報
告されている。
的に行われており、これまで、比較的低分子のオリゴペ
プチド類を中心として数多くの報告がなされている。例
えば、ダラム陽性菌及びダラム陰性菌に対して抗菌作用
を有するホスホノトリペプチド類（特開昭５７−１０６
６８９）、ホスホノジペプチド誘導体（特開昭５８−１
３５９４） 、環状ペプチド誘導体（特開昭５８−２１
３７４４）、抗菌剤及び抗ウィルス剤として有用な１０
個のアミノ酸配列から成る新規ペプチド（特開昭５９−
５１２４７）、酵母類に対する抗菌剤として有用なポリ
ペプチド（特開昭６Ｏ−１３０５９９）、ダラム陽性菌
に対する抗菌剤として有用な糖ペプチド誘導体（特開昭
６０−１７２９９８） 、新規グリコペプチド誘導体（
特開昭６１−２５１６９９ 、特開昭６３−４４５９８
）、ダラム陽性菌に対して有用なオリゴペプチド（特開
昭６２−２２７９８） 、ペプチド系抗生物質（特開昭
６２５１６９７、特開昭６３−１７８９７）等、多数報
告されている。
しかしながら、従来技術の中には、必ずしも実用化に到
らず、基礎研究の域を出ないものも少なからず散見され
、ペプチド系の抗菌剤の開発がいまだ発展途上にあるこ
とが理解されるが、いずれにしても、優れた抗菌作用を
有し、抗菌剤として実用化し得る新規ペプチド類を開発
することは、ペプチド類の新しい応用領域を確立する上
できわめて重要なことと思われる。
らず、基礎研究の域を出ないものも少なからず散見され
、ペプチド系の抗菌剤の開発がいまだ発展途上にあるこ
とが理解されるが、いずれにしても、優れた抗菌作用を
有し、抗菌剤として実用化し得る新規ペプチド類を開発
することは、ペプチド類の新しい応用領域を確立する上
できわめて重要なことと思われる。
〔課題を解決するための手段］
このような見地から、本発明者らは、有用な新規ペプチ
ド類を種々探索した結果、北米産カブトガニ（Ｌ ｉ
ｍ ｕ ｌ ｕ ｓ 匹廿仙且旦）の血球中より抽出、
単離したペプチドが、強力な抗菌作用を有することを見
い出して本発明を完成するに至った。
ド類を種々探索した結果、北米産カブトガニ（Ｌ ｉ
ｍ ｕ ｌ ｕ ｓ 匹廿仙且旦）の血球中より抽出、
単離したペプチドが、強力な抗菌作用を有することを見
い出して本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、以下の（１） −’ （２）に記
載する技術的事項を含有するものとして認識される。
載する技術的事項を含有するものとして認識される。
１）次の構造式（１）
（式中、■と■、■と■は、それぞれ直接に結合してい
る。Ａｒｇ ＮｌＩ２は、アルギニンのカルボキシル
基がアミドであることを示す。）で表されるペプチド、
及びその塩。
る。Ａｒｇ ＮｌＩ２は、アルギニンのカルボキシル
基がアミドであることを示す。）で表されるペプチド、
及びその塩。
２）次の構造式（Ｉ）
（式中、■と■、■と■は、それぞれ直接に結合してい
る。八ｒｇ−ＮＩＩ２は、アルギニンのカルボキシル基
がアミドであることを示す。）で表されるペプチド、及
びその塩を有効成分とする抗菌剤。
る。八ｒｇ−ＮＩＩ２は、アルギニンのカルボキシル基
がアミドであることを示す。）で表されるペプチド、及
びその塩を有効成分とする抗菌剤。
このように、本発明は、強力な抗菌作用を有する新規ペ
プチド、及びその塩を提供すると共に、それらを有効成
分とする抗菌剤を提供することを目的とするものである
。
プチド、及びその塩を提供すると共に、それらを有効成
分とする抗菌剤を提供することを目的とするものである
。
なお、この明細書においてこの新規ペプチドをポリフェ
ムシンＩ （Ｐｏｌｙｐｈｅｍｕｓｉｎ Ｉ ）と称す
る。また、この明細書において、アミノ酸につき、ＩＵ
ＰＡＣＩＵＢ ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ ｏｎ Ｂｉｏｌ
ｏｇｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅに基づく略号
で表示する場合があるが、それらを例示すると次の通り
である。
ムシンＩ （Ｐｏｌｙｐｈｅｍｕｓｉｎ Ｉ ）と称す
る。また、この明細書において、アミノ酸につき、ＩＵ
ＰＡＣＩＵＢ ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ ｏｎ Ｂｉｏｌ
ｏｇｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅに基づく略号
で表示する場合があるが、それらを例示すると次の通り
である。
Ａｒｇ：アルギニン、Ｔｒｐ： ）リプトファン、Ｃｙ
ｓ：１／２シスチン、Ｐｈｅ：フェニルアラニン、Ｖａ
ｌ：バリン、Ｔｙｒ：チロシン、Ｇｌｙニゲリシン、Ｌ
ｙｓ ：リジン本発明の新規ポリフエムシン■は、１８
個のアミノ酸より構成され、その第４位と第１７位、及
び第８位と第１３位に存在する各システィン分子対間“
のジスルフィド結合により架橋された二環構造を有する
。また、Ｃ末端に存在するアルギニンは、そのカルボキ
シル基がアミド化（−ＣＯＮＩＩ２）され、アルギニン
アミドとして存在している。本発明のポリフエムシンＩ
は、塩の形をとることができ、例えば、アルカリ金属塩
、アルカリ土類金属塩アンモニウム塩、有機アミン塩等
の無機塩基、有機塩基との塩、及び、トリフルオロ酢酸
、メタンスルホン酸、塩酸、硫酸、硝酸、燐酸等の有機
酸又は無機酸の付加塩が含まれる。
ｓ：１／２シスチン、Ｐｈｅ：フェニルアラニン、Ｖａ
ｌ：バリン、Ｔｙｒ：チロシン、Ｇｌｙニゲリシン、Ｌ
ｙｓ ：リジン本発明の新規ポリフエムシン■は、１８
個のアミノ酸より構成され、その第４位と第１７位、及
び第８位と第１３位に存在する各システィン分子対間“
のジスルフィド結合により架橋された二環構造を有する
。また、Ｃ末端に存在するアルギニンは、そのカルボキ
シル基がアミド化（−ＣＯＮＩＩ２）され、アルギニン
アミドとして存在している。本発明のポリフエムシンＩ
は、塩の形をとることができ、例えば、アルカリ金属塩
、アルカリ土類金属塩アンモニウム塩、有機アミン塩等
の無機塩基、有機塩基との塩、及び、トリフルオロ酢酸
、メタンスルホン酸、塩酸、硫酸、硝酸、燐酸等の有機
酸又は無機酸の付加塩が含まれる。
本発明の新規ポリフェムシン■及びその塩は、以下の方
法によって製造することができる。
法によって製造することができる。
すなわち、北米産カブトガニ（Ｌｉｍｕｌｕｓ匹往餅堕
旦）の血球に、塩化ナトリウム及びベンズアミジン塩酸
塩を含むトリス塩酸緩衝液を加え粉砕し、これを遠心し
て沈澱物を得る。これに塩酸溶液を加え粉砕し、遠心し
て上澄を得る。これを５ｌｈａｄｅｘ＠Ｇ−５０に添加
して、塩酸溶液で溶出する。２８０ｎｍにおける吸光度
を測定して集めた溶出区分を、コスモシール［Ｆ］５０
１８に添加しアセトニトリルの濃度を変化させたトリフ
ルオロ酢酸溶液で溶出することにより、目的のポリフェ
ムシンＩ両分を得る。
旦）の血球に、塩化ナトリウム及びベンズアミジン塩酸
塩を含むトリス塩酸緩衝液を加え粉砕し、これを遠心し
て沈澱物を得る。これに塩酸溶液を加え粉砕し、遠心し
て上澄を得る。これを５ｌｈａｄｅｘ＠Ｇ−５０に添加
して、塩酸溶液で溶出する。２８０ｎｍにおける吸光度
を測定して集めた溶出区分を、コスモシール［Ｆ］５０
１８に添加しアセトニトリルの濃度を変化させたトリフ
ルオロ酢酸溶液で溶出することにより、目的のポリフェ
ムシンＩ両分を得る。
また、本発明のポリフェムシンＩは、固相法による合成
も可能である。この方法を本発明に適用する場合、α−
アミノ基はいずれのアミノ酸についてもｔｅｒｔ−ブチ
ルオキシカルボニル基（Ｂｏｃｉ）で保護し、チロシン
の水酸基は、２．６−ジクロロベンジルｊＪ（Ｃ１ｚ−
Ｂｚｌ基）で、アルギニンのグアニジノ基はトシル基（
Ｔｏｓ基）で、それぞれ保護するのが好適である。まず
、Ｃ末端アミノ酸のアルギニンの保護誘導体をクロロメ
チル樹脂に導入し、以後順次アミノ酸鎖を延長し、保護
ペプチド樹脂を合成し、これをフッ化水素で処理するこ
とにより保護ペプチドを樹脂から切断し、同時に脱保護
し、これを還元し、以下、常法に従って合成ペプチドを
得る。得られた粗合成ペプチドは、ゲル濾過、逆相ＨＰ
ＬＣ等ペプチドの精製に常用される手段により精製し高
純度のポリフエムシンＩを得る。
も可能である。この方法を本発明に適用する場合、α−
アミノ基はいずれのアミノ酸についてもｔｅｒｔ−ブチ
ルオキシカルボニル基（Ｂｏｃｉ）で保護し、チロシン
の水酸基は、２．６−ジクロロベンジルｊＪ（Ｃ１ｚ−
Ｂｚｌ基）で、アルギニンのグアニジノ基はトシル基（
Ｔｏｓ基）で、それぞれ保護するのが好適である。まず
、Ｃ末端アミノ酸のアルギニンの保護誘導体をクロロメ
チル樹脂に導入し、以後順次アミノ酸鎖を延長し、保護
ペプチド樹脂を合成し、これをフッ化水素で処理するこ
とにより保護ペプチドを樹脂から切断し、同時に脱保護
し、これを還元し、以下、常法に従って合成ペプチドを
得る。得られた粗合成ペプチドは、ゲル濾過、逆相ＨＰ
ＬＣ等ペプチドの精製に常用される手段により精製し高
純度のポリフエムシンＩを得る。
なお、ペプチド合成に常用される固相法については、例
えば、日本生化学会場、「生化学実験講座（■）」蛋白
質の化学、４巻、２０８〜４９５頁、（ｌ＠東京化学同
人発行（１９７７）、及び、泉屋信夫ほか著、「ペプチ
ド合成」丸善■発行（１９７５）に記載されているメリ
フィールド（Ｍｅｒｒｉｆ １ｅｌｄ）等の方法に準じ
て行うことができる。
えば、日本生化学会場、「生化学実験講座（■）」蛋白
質の化学、４巻、２０８〜４９５頁、（ｌ＠東京化学同
人発行（１９７７）、及び、泉屋信夫ほか著、「ペプチ
ド合成」丸善■発行（１９７５）に記載されているメリ
フィールド（Ｍｅｒｒｉｆ １ｅｌｄ）等の方法に準じ
て行うことができる。
本発明のポリフエムシンＩの毒性は、極めて低いか又は
非毒性である。このポリフェムシンＩを医療用抗菌剤と
して投与する場合は経口投与法又は非経口的投与方法、
すなわち静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与等が好まし
い。そして、１投与単位当りのポリフェムシン■の使用
量は１００〜１０００■程度である。更に、本発明のポ
リフエムシンＩは医療用抗菌剤以外に防腐剤、抗生物質
、塗料用防腐剤として有効に使用することができる。
非毒性である。このポリフェムシンＩを医療用抗菌剤と
して投与する場合は経口投与法又は非経口的投与方法、
すなわち静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与等が好まし
い。そして、１投与単位当りのポリフェムシン■の使用
量は１００〜１０００■程度である。更に、本発明のポ
リフエムシンＩは医療用抗菌剤以外に防腐剤、抗生物質
、塗料用防腐剤として有効に使用することができる。
［発明の効果］
本発明のポリフエムシンＩは、後記参考例に示すように
、例えば、グラム陽性細菌、ダラム陰性細菌及び真菌類
に対して強い抗菌作用を示し、これら細菌の抑制剤とし
て有用である。具体的には、医療用抗菌剤、防腐剤、抗
生物質、塗料用防腐剤等、広汎な分野で利用することが
可能であり、これらは、いずれも本発明の抗菌剤の範囲
に包含されることはいうまでもない。
、例えば、グラム陽性細菌、ダラム陰性細菌及び真菌類
に対して強い抗菌作用を示し、これら細菌の抑制剤とし
て有用である。具体的には、医療用抗菌剤、防腐剤、抗
生物質、塗料用防腐剤等、広汎な分野で利用することが
可能であり、これらは、いずれも本発明の抗菌剤の範囲
に包含されることはいうまでもない。
（実施例］
以下、本発明の実施例を記載して、さらに本発明の詳細
な説明する。
な説明する。
実施例１
（１）ポリフエムシンＩの製造
北米産カブトガニ（Ｌｉｍｕｌｕｓ匹旦餅弘且）血ｈｉ
３７ ｇに５０ｍＭ塩化ナトリウム及び５ｍＭベンズ
アミジン塩酸塩を含む２０ＩＩＩＭトリス塩酸緩衝液（
ｐｌ！８．０）１００ｍｌを加え粉砕し、４°Ｃで遠心
（７５００ｒｐｍ。
３７ ｇに５０ｍＭ塩化ナトリウム及び５ｍＭベンズ
アミジン塩酸塩を含む２０ＩＩＩＭトリス塩酸緩衝液（
ｐｌ！８．０）１００ｍｌを加え粉砕し、４°Ｃで遠心
（７５００ｒｐｍ。
４０分）して沈澱を得た。さらにこの操作を２回くりか
えし沈澱を得た。得られた沈澱に２０ｍＭ塩酸溶液１０
０ｄを加え粉砕する。４°Ｃで遠心（７５００ｒｐｍ
４０分）して上澄を得た。沈澱には２０ｒｔＭ塩酸溶液
１００ｄを加え再度粉砕し、４°ｃで遠心（７５００ｒ
ｐｍ ４０分）して上澄を得た。さらに２回同様の操作
を行い上澄を得た。得られた上澄は集め凍結乾燥した。
えし沈澱を得た。得られた沈澱に２０ｍＭ塩酸溶液１０
０ｄを加え粉砕する。４°Ｃで遠心（７５００ｒｐｍ
４０分）して上澄を得た。沈澱には２０ｒｔＭ塩酸溶液
１００ｄを加え再度粉砕し、４°ｃで遠心（７５００ｒ
ｐｍ ４０分）して上澄を得た。さらに２回同様の操作
を行い上澄を得た。得られた上澄は集め凍結乾燥した。
上記の凍結乾燥物を２０ｍＭ塩酸溶液に溶解し、４°Ｃ
で遠心（１２，００Ｏｒｐｍ １５分）して上澄を得た
。
で遠心（１２，００Ｏｒｐｍ １５分）して上澄を得た
。
これを５ｅｐｈａｄｅｘ ＠ Ｇ−５０（ファルマシア
社製）カラム（３Ｘ８５ｃｍ）に添加し、２０ｍＭ塩酸
溶液で溶出した。これを１０ ｍｌづつ分画しながら同
時に２８０ｎｍにおける吸光度を測り、分画番号６６−
８７の両分を集め、これを凍結乾燥した。（第１図参照
）。
社製）カラム（３Ｘ８５ｃｍ）に添加し、２０ｍＭ塩酸
溶液で溶出した。これを１０ ｍｌづつ分画しながら同
時に２８０ｎｍにおける吸光度を測り、分画番号６６−
８７の両分を集め、これを凍結乾燥した。（第１図参照
）。
この凍結乾燥物を２０ｍＭ塩酸溶液１０ｍ１に溶解しコ
スモシール０５Ｃ＋ｅ（牛丼化学薬品社製）カラム（１
０Ｘ ２５０ｍｍ）に添加し、アセトニトリルの濃度を
２２〜３０２に変化させた０、１χトリフルオロ酢酸溶
液で溶出した。この溶出曲線を第２図に示す。このカラ
１、庖２８〜３０χアセトニトリル°で？容出し、得ら
れる溶出区分を集め凍結乾燥することにより本発明のポ
リフィムシンＩを得た。収量は２０ｍｇであった。
スモシール０５Ｃ＋ｅ（牛丼化学薬品社製）カラム（１
０Ｘ ２５０ｍｍ）に添加し、アセトニトリルの濃度を
２２〜３０２に変化させた０、１χトリフルオロ酢酸溶
液で溶出した。この溶出曲線を第２図に示す。このカラ
１、庖２８〜３０χアセトニトリル°で？容出し、得ら
れる溶出区分を集め凍結乾燥することにより本発明のポ
リフィムシンＩを得た。収量は２０ｍｇであった。
このポリフェムシンＩの赤外線吸収スペクトルは第３図
の通りであり、３，３００．１６５０．１５４０．１４
２０．１２４０、及び７４０ ｃｍ−’に吸収がある。
の通りであり、３，３００．１６５０．１５４０．１４
２０．１２４０、及び７４０ ｃｍ−’に吸収がある。
また、紫外吸収スペクトルは第４図の通りである。この
ポリフェムシンＩのアミノ酸組成は第１表の通りである
。
ポリフェムシンＩのアミノ酸組成は第１表の通りである
。
第 １ 表
（２）構造決定
本物質の構造は以下の如くして決定された。
即ち、ジチオトレイトールを用いジスルフィド結合を切
断し、４−ビニルピリジンでピリジルエチル化したサン
プルを６Ｎ塩酸を用い加水分解しアミノ酸組成を決定し
た。また、このサンプルを気相シークエンサーを用いて
１７回のエドマン分解に附し、Ｎ末端のアルギニンから
１７番目のシスティンに至るアミノ酸の種類と結合の順
序を決定した。また、アミノエチル化したサンプルをリ
シルエンドペプチダーゼ処理してＣ末端残基を遊離させ
て得られた生成物のフェニルチオカルバミル誘導体の逆
相高速液体クロマトグラフィー上での溶出時間は、別に
合成したフェニルチオカルバミルアルギニンアミドのそ
れと一致した。さらに質量分析結果もＣ末端をアルギニ
ンアミドとした質量数を示したのでＣ末端はアルギニン
アミドであると決定した。
断し、４−ビニルピリジンでピリジルエチル化したサン
プルを６Ｎ塩酸を用い加水分解しアミノ酸組成を決定し
た。また、このサンプルを気相シークエンサーを用いて
１７回のエドマン分解に附し、Ｎ末端のアルギニンから
１７番目のシスティンに至るアミノ酸の種類と結合の順
序を決定した。また、アミノエチル化したサンプルをリ
シルエンドペプチダーゼ処理してＣ末端残基を遊離させ
て得られた生成物のフェニルチオカルバミル誘導体の逆
相高速液体クロマトグラフィー上での溶出時間は、別に
合成したフェニルチオカルバミルアルギニンアミドのそ
れと一致した。さらに質量分析結果もＣ末端をアルギニ
ンアミドとした質量数を示したのでＣ末端はアルギニン
アミドであると決定した。
実施例２
ポリフェムシンＩの製剤化
本発明のポリフェムシン■活性成分を含む経口又は非経
口投与用の製剤例を以下に示す。
口投与用の製剤例を以下に示す。
（１） ２００ｍｇ錠剤
ポリフェムシンＩ ２００ｍｇコーンスタ
ーチ ４０＋ｎｇラクトース
９８ｍｇステアリン酸マグネシウム
８ ｍｇタルク ４■（２）
１００ｍｇ注射用アンプル（ｑ、ｓ、ｐアンプル）ポ
リフェムシンＩ １００ｍｇ注射用蕉留
水 適量 （３） ５００ｍｇカプセル ポリフェムシン１ ５００ｍｇラクトース
５０■ステアリン酸マグネシウム
５ ｍｇ（４） ５００ｍｇ錠剤 ポリフェムシンＩ ５００ｍｇコーンスタ
ーチ １０ｍｚポリビニルピロリドン
３５ｍｇラクトース ７
４ｍｇステアリン酸マグネシウム １４ｍｇタルク
７ｍｇ以下に、本発明のベプ
チドボリフエムシンＩの抗菌活性について検討した結果
を参考例として示す。
ーチ ４０＋ｎｇラクトース
９８ｍｇステアリン酸マグネシウム
８ ｍｇタルク ４■（２）
１００ｍｇ注射用アンプル（ｑ、ｓ、ｐアンプル）ポ
リフェムシンＩ １００ｍｇ注射用蕉留
水 適量 （３） ５００ｍｇカプセル ポリフェムシン１ ５００ｍｇラクトース
５０■ステアリン酸マグネシウム
５ ｍｇ（４） ５００ｍｇ錠剤 ポリフェムシンＩ ５００ｍｇコーンスタ
ーチ １０ｍｚポリビニルピロリドン
３５ｍｇラクトース ７
４ｍｇステアリン酸マグネシウム １４ｍｇタルク
７ｍｇ以下に、本発明のベプ
チドボリフエムシンＩの抗菌活性について検討した結果
を参考例として示す。
参考例
（＋）グラム陽性細菌、ダラム陰性細菌に対する抗菌性
試験 ■実験材料 Ｓｔａ ｈ １ｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ＡＴ
ＣＣ２５Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓ ＩＡ
Ｍ １０６９培地 ：牛心臓侵出液 ２５０ｇ カザミノ酸 １５ｇ Ｉ、−トリプトファン ０．０５ｇ 精製水 １０１００Ｏ ■実験方法 害菌をＮｕｔｒｉｅｎｔ ＢｒｏｔｈＯ（Ｄ汀ｉｃｏ社
製）培地で２０時間振とう培養後、菌の濃度を６６０ｎ
ｍの吸光度が約０．３になるように調整し、その０．１
ｍρを上記培地に加えたものを供試菌液とした。本物質
凍結乾燥品３００μｇを精製水１２ｍ２に溶解し２５０
μｇ／ｄの溶液を得る。これを原液として２倍階段希
釈を行い１２．５．６．２５．３．１３．１．５６μｇ
／ｍｌの試料液を得た。
試験 ■実験材料 Ｓｔａ ｈ １ｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ＡＴ
ＣＣ２５Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓ ＩＡ
Ｍ １０６９培地 ：牛心臓侵出液 ２５０ｇ カザミノ酸 １５ｇ Ｉ、−トリプトファン ０．０５ｇ 精製水 １０１００Ｏ ■実験方法 害菌をＮｕｔｒｉｅｎｔ ＢｒｏｔｈＯ（Ｄ汀ｉｃｏ社
製）培地で２０時間振とう培養後、菌の濃度を６６０ｎ
ｍの吸光度が約０．３になるように調整し、その０．１
ｍρを上記培地に加えたものを供試菌液とした。本物質
凍結乾燥品３００μｇを精製水１２ｍ２に溶解し２５０
μｇ／ｄの溶液を得る。これを原液として２倍階段希
釈を行い１２．５．６．２５．３．１３．１．５６μｇ
／ｍｌの試料液を得た。
滅菌した試験管に各濃度の試料液を１ ｍｌずつ分注し
これに各菌液１戒ずつを加え混合し３７°Ｃで２０時間
培養し、６６０ｎｍの吸光度を測定した。対照は試料液
のかわりに精製水を用い、本物質の各画に対する最小化
成育阻害濃度を決定した。その結果を第２表に示す。
これに各菌液１戒ずつを加え混合し３７°Ｃで２０時間
培養し、６６０ｎｍの吸光度を測定した。対照は試料液
のかわりに精製水を用い、本物質の各画に対する最小化
成育阻害濃度を決定した。その結果を第２表に示す。
（木頁以下余白）
第２表
Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｂ工ｌμ扛暉」鉦妊均１ｏｃｏ
ｃｃｕｓ ａｎｒｅｕｓ ＡＴＣＣ２５９２３３，１３ ６，２５ （２）真菌類に対する抗菌性試験 ■実験材料 供試菌：顛近」山比隠 Ｐｓｎｉｃｉｌｌｉｕｍ 培地 ：ポリペプトン 麦芽エキス ブドウ糖 寒天 精製水 １１匹 ｆｕｎｉｃｕｌｏｓｕｍ １ｇ ０ｇ ０ｇ ０ｇ ０００ｍ１ ■実験方法 本物質の凍結乾燥品５００１１ｇを２ ｍｌの精製水に
溶き２５０ μｇ／ｄの試料液を得た。これを二倍階段
希釈し１２５．６２．５．３１．３ｕｇ／ｍｌの試料液
を作成した。
ｃｃｕｓ ａｎｒｅｕｓ ＡＴＣＣ２５９２３３，１３ ６，２５ （２）真菌類に対する抗菌性試験 ■実験材料 供試菌：顛近」山比隠 Ｐｓｎｉｃｉｌｌｉｕｍ 培地 ：ポリペプトン 麦芽エキス ブドウ糖 寒天 精製水 １１匹 ｆｕｎｉｃｕｌｏｓｕｍ １ｇ ０ｇ ０ｇ ０ｇ ０００ｍ１ ■実験方法 本物質の凍結乾燥品５００１１ｇを２ ｍｌの精製水に
溶き２５０ μｇ／ｄの試料液を得た。これを二倍階段
希釈し１２５．６２．５．３１．３ｕｇ／ｍｌの試料液
を作成した。
上記培地９雁に各濃度の試料液を１ ｍｉずつ加え、こ
れを５ ｒｒｒｌずつ滅菌した試験管に分注し斜面培地
を作成した。この斜面培地上に上記菌の分生子を付着さ
せた白金耳で直線をひき、３０’Ｃで４８時間培養し、
その生育を調べた。その結果を第２表に示す。
れを５ ｒｒｒｌずつ滅菌した試験管に分注し斜面培地
を作成した。この斜面培地上に上記菌の分生子を付着さ
せた白金耳で直線をひき、３０’Ｃで４８時間培養し、
その生育を調べた。その結果を第２表に示す。
酸溶液抽出物の溶出曲線を示す図、第２図はコスモシー
ル■５ＣＩｌｌカラムにおける０、１％トリフルオロ酢
酸溶液の溶出曲線を示す図、第３図はポリフェムシンＩ
の赤外吸収スペクトルの図、第４図はポリフェムシンＩ
の紫外吸収スペクトルを示す図である。
ル■５ＣＩｌｌカラムにおける０、１％トリフルオロ酢
酸溶液の溶出曲線を示す図、第３図はポリフェムシンＩ
の赤外吸収スペクトルの図、第４図はポリフェムシンＩ
の紫外吸収スペクトルを示す図である。
第３表
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）次の構造式（ I ） 【遺伝子配列があります】 （式中、［１］と［２］、［３］と［４］は、それぞれ
直接に結合している。Ａｒｇ−ＮＨ＿２は、アルギニン
のカルボキシル基がアミドであることを示す。） で表されるペプチド及びその塩。 ２）次の構造式（ I ） 【遺伝子配列があります】 （式中、［１］と［２］、［３］と［４］は、それぞれ
直接に結合している。Ａｒｇ−ＮＨ＿２は、アルギニン
のカルボキシル基がアミドであることを示す。） で表されるペプチド又はその塩を有効成分とする抗菌剤
。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63203724A JP2641742B2 (ja) | 1988-08-18 | 1988-08-18 | 新規ペプチド及び抗菌剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63203724A JP2641742B2 (ja) | 1988-08-18 | 1988-08-18 | 新規ペプチド及び抗菌剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0253799A true JPH0253799A (ja) | 1990-02-22 |
| JP2641742B2 JP2641742B2 (ja) | 1997-08-20 |
Family
ID=16478801
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63203724A Expired - Lifetime JP2641742B2 (ja) | 1988-08-18 | 1988-08-18 | 新規ペプチド及び抗菌剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2641742B2 (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH03261717A (ja) * | 1990-03-09 | 1991-11-21 | Sunstar Inc | 口腔用組成物 |
| US5571892A (en) * | 1990-09-11 | 1996-11-05 | Seikagaku Kogyo Co., Ltd. | Polypeptide and anti-HIV drug prepared therefrom |
| US5571683A (en) * | 1991-12-25 | 1996-11-05 | Maruha Corporation | β-glucans detection reagents and methods of detecting β-glucans |
| US5776899A (en) * | 1993-10-14 | 1998-07-07 | Seikagaku Corporation | Polypeptide and anti-HIV agent prepared therefrom |
| US6589937B1 (en) * | 1996-04-15 | 2003-07-08 | Kabushiki Kaisha Yakult Honsha | Peptides and nootropic agent |
-
1988
- 1988-08-18 JP JP63203724A patent/JP2641742B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH03261717A (ja) * | 1990-03-09 | 1991-11-21 | Sunstar Inc | 口腔用組成物 |
| US5571892A (en) * | 1990-09-11 | 1996-11-05 | Seikagaku Kogyo Co., Ltd. | Polypeptide and anti-HIV drug prepared therefrom |
| US5571683A (en) * | 1991-12-25 | 1996-11-05 | Maruha Corporation | β-glucans detection reagents and methods of detecting β-glucans |
| US5776899A (en) * | 1993-10-14 | 1998-07-07 | Seikagaku Corporation | Polypeptide and anti-HIV agent prepared therefrom |
| US6589937B1 (en) * | 1996-04-15 | 2003-07-08 | Kabushiki Kaisha Yakult Honsha | Peptides and nootropic agent |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2641742B2 (ja) | 1997-08-20 |
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