JPH0255407B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は大腸菌（Escherichia coli）の次の菌
株： −NCTC：8603，8621，8622，8623，9026，
9111，9119，9707，9708. −Ｉ−081，Ｉ−082，Ｉ−083，Ｉ−084，Ｉ
−085，Ｉ−0866， Ｉ−087，Ｉ−088，Ｉ−089 の少くとも１種から誘導されるバクテリア溶解質
を有効成分として含有する泌尿管系の伝染病経口
治療薬に関するものである。 溶解質は上記すべての菌株から誘導するのが好
ましい。 NCTC菌株はナシヨナル・コレクシヨン・オ
ブ・タイプ・カルチヤーズ，ロンドにより表に記
入されており、一般に入手することができ、菌株
Ｉは1979年３月７日本出願人がコレクシオン・ナ
シオナール・ドウ・クルチユール・ドウ・ミクロ
―オルガニズム，インスチチユート・パスツー
ル，パリにおいて寄託された。 バクテリアの培養は現在の細菌学の技術により
微生物の増殖に最も適する条件で行われる。 溶解質を得るための培養の処理は水１当り肉
抽出物22.5ｇ、酵母抽出物7.5ｇ、塩化ナトリウ
ム2.5ｇ、酢酸ナトリウム0.5ｇ、燐酸一水素ナト
リウム2.0ｇ、乳酸ナトリウム70％Ｐ／P2.0ml、
乳酸アンモニウム50％Ｐ／P2.0ml、チアミン3.0
ml、ニコチン酸3.0mg、グルコース3.0ｇ（但しこ
れ等の成分の分量は±５％の範囲で変えることが
できる）を含有する培地、または固化するために
更に水１当りゼラチン2.0ｇおよびアガール・
アガール24.0ｇを含有する培地で、培養器の場合
は35〜37℃で８〜14時間またはルー瓶の場合は33
〜37℃で24〜48時間で実施するのが好ましい。固
体培地が好ましい場合は、後者の培地を使用する
ことができる。 培地は普通の方法に従つて採取する。このよう
にして得たバクテリアの懸濁液は菌株ごとに計算
し20゜〜40℃の範囲の温度で、就中苛性ソーダ、
苛性カリ、第一、第二および第三アミンを用いて
漸進的なアルカル分解を受けさせる。分解は顕微
鏡で制御し乍ら１〜５日間行う。 各菌株のバクテリアからの最終濃度における溶
解質の容量を、計量の結果の関数として計算す
る。 自己分解により溶解質を得るための培養処理
は、水１当り肉抽出物25.0ｇ、塩化ナトリウム
5.0ｇ、燐酸一水素ナトリウム1.0ｇ（但しこれ等
の分量は±５％の範囲で変えることができる）を
含有する液体培地で行うのが好ましい。接種した
培地を37℃で３ケ月間培養する。これ等の培地の
濾過した上澄み液は溶解質を構成する。 バクテリア濃厚物の調製 固体および／または液体の培地で得たバクテリ
アの各菌株の溶解質を適当な割合で混合して泌尿
管系の伝染病に対する治療薬を得る。関連して使
用する菌株からの微生物の分量は成人の一日量に
対する一定の制限： 10〜500億の微生物の範囲で変えることができ
る。 溶解質の混合物は自然の濃厚液を構成し、これ
を遠心分離および濾過により徹底的に浄化する。
浄化した濃厚液は、膜による濾過により殺菌し、
バクテリア溶解質濃厚液を構成しこれは種々の生
薬形の調剤のベースとして役立つ。 生薬の形態 溶解質を含有する一回の分量のアンプル、舐剤
または球薬の形態で経口投与するために溶解質を
凍結乾燥した形態でまたは水溶液中に含有される
錠剤、カプセル剤、丸薬または小丸薬の形態で経
口投与するのが好ましい。成人に対する一目量、
好ましくは一回で投与する一日量は、10〜500億
の微生物相当量の溶解質に含有させることができ
る。子供に対する投与量は成人に対する投与量の
半分である。 薬理学上の研究 免疫状態の実験研究を行つた。この研究は
Ba1b／ｃマウスを使い本発明において大腸菌の
前記菌株の少くとも１種から誘導したバクテリア
溶解質により経口的に刺激した後行つた。この研
究は体液の仲介および細胞の仲介に対する特定の
および普通の免疫性の範囲にわたるものである。 保護試験 マウスに150mg／Kgの割合で５日間経口投与し
処置した。処置を開始した後大腸菌を腹腔内に10
日および30日注射することによるかまたは処置を
開始した後30日経腸によりネズミチフス菌を投与
することにより、感染に関して統計的に重要な保
護力を有することがわかつた。 「血小板形成性細胞」試験 この技術は、150mg／Kgの溶解質を用いて５日
間経口投与して処置したマウスにおける分解血小
板をつくる脾臓の細胞数の増加を時間の関数とし
て示す。試験を処置開始後14日間行つた。 コロイド炭素を用いる生体内食作用試験 マウスに注射したコロイドカーボンをクツペル
細胞により脈管系から排除した。この結果コロイ
ド除去の動力学は網内系の活動度を示す。マウス
を150mg／Kgの溶解質で５日間経口投与して処置
した。試験を処置開始後10日および30日実施し
た。食作用指数は統計的に重要な経路で増加し
た。 マクロフアージの活動度の研究 マウスに溶解質を150mg／Kgの割合で５日間経
口投与して処置した。腹腔内マクロフアージを処
置開始後10日および30日に取出した。 マクロフアージの生体（白色カンデイア）内に
おける被着および食作用性能の研究によると使用
した溶解質は細胞レベルで免疫刺激作用を有する
ことがわかつた。また、恐らく過活性細胞の消耗
によるこれ等のマクロフアージの酵素活性におけ
る特徴ある低下が表われた。伝送電子顕微鏡使用
法により行つた試験によりこの仮説を確かめ；活
性化したマクロフアージは大空胞形成を表わす。 慢性毒性の研究 溶解質をラツトに人間の治療投与量の100倍お
よび1000倍の投与量で並びに犬に20倍および2000
倍の投与量で経口的に13週間投与した。機能およ
び生物体の変化は処置中には検出されなかつた。 臨床試験 慢性泌尿器感染に苦しむ17人の患者に溶解質を
１投与量／日の割合で且つ10〜15日／月の割合で
治療した。再発は全体で14人の場合にはなく、３
人の場合には広い間隔ておきた。 次に本発明の治療薬の薬効例を示す。 (イ) 再発性泌尿管感染症（recurrent urinary
tract infection）の治療：経口投与した生物学
的応答モデイフアイヤーの効果。 再発性泌尿管感染症にかかつた64人の外来患者
を、二重盲検法の条件下で生物学的応答モデイフ
アイヤーOM−8930（大腸菌から抽出した免疫刺
激性画分）６mgを含有するゼラチンカブセル又は
プラシーボ（偽薬）のいずれかを毎日１カプセル
用いて３ケ月治療し、次いだ３ケ月間観察した。
排尿障害、細菌尿症、白血球尿症および抗生物質
又は化学療法薬の消費はプラシーボに比較して
OM−8930の下で著しく低減したことを示した。 耐性に関しては、首におけるアレルギー性発疹
がOM−8930グループにおいて１件観察された。
急性発症における治療効果と更に再発するのを防
止する硬着効果とは、プラシーボと比較してOM
−8930は著しく優れた効果を示した。 OM−8930の免疫防衛機構における作用には、
主としてマクロフアージ、Ｔ及びＢリンパ球、分
泌型免疫グロブリンの刺激がある。 (ロ) 慢性泌尿管感染症をわずらう対麻痺患者の経
口免疫治療：二重盲検法プラシーボ制御試験。 再発性泌尿管感染症をわずらう70人の対麻痺患
者を、OM−8930又はプラシーボのいずれかを毎
日１カプセルを用いてランダム化二重盲検条件下
で３ケ月間治療し、次いで次の３ケ月間洗い落と
す（Wash−out）ことなく逆に処理を行つた。
第１の３ケ月間において、細菌はプラシーボに比
してOM−8930下で著しく退行し、このことは、
OM−8930で処置した患者のうち46％の者の尿が
少なくとも１ケ月間無菌状態のままであるという
理由から該46％の患者の薬剤投与を中止すること
ができたが、プラシーボにおいては15％の患者の
みであつた。第２の３ケ月間において、先にOM
−8930処置の繰越し効果を示す細菌の一層の退行
が、その時プラシーボのグループで観察され、一
方、その時のOM−8930のグループでも顕著な減
少が起こつた。各処置期間の最初においてOM−
8930又はプラシーボに加えて処方した抗生物質を
用いる治療の数は、プラシーボに比較してOM−
8930の下では著しく少ない。 良好な耐性に加えて、OM−8930の治療効果
が、危険性の高い泌尿管感染症のこの特に虚弱な
集団の患者において明確に示された。 再発性泌尿管感染症の免疫生物学的治療OM−
8930の二重盲検多中心研究 再発性泌尿管感染症をわずらい研究開始の際に
急性症候性状態（少なくとも10⁵菌／ml中流尿）
にある患者120人を、免疫生物学的治療性OM−
8930又はプラシーボを毎日１カプセル用いて二重
盲検法条件下で３ケ月間治療し、次いで治療する
ことなく更に３ケ月間観察した。試験の間、再発
回数はプラシーボグループにおけるよりOM−
8930グループにおいて著しく少なかつた。全菌数
はプラシーボ並びに排尿障害及び亜硝酸塩尿症の
場合の数に比較してOM−8930の下で著しく減少
した。合併型抗生物質治療の平均期間は双方のグ
ループで減少したが、一層顕著にはOM−8930の
下では、OM−8930下の６ケ月目の月で完全に処
置する必要がなくなるまで減少した。抗生物質及
び化学治療物質の全消費量は、OM−8930の下で
著しく少なかつた。これら客観的な効果は、試験
製品の治療効果の臨床による総括的な評価により
表わされ、プラシーボに対するOM−8930の著し
い優越性を示した。双方の製品は、OM−8930下
の場合の5.4％及びプラシーボ下の場合の2.6％に
おいてかなりの副作用の言及に対して耐性が良好
であつた。57人（27人はOM−8930治療の後、30
人はプラシーの後）の患者による試験の終了後24
週間更に観察したところ、予め免疫生物学的治療
を行つた患者がプラシーボの場合より著しく少な
い再発を被ることを示し、このことは二重盲検法
研究結果を一層確かなものとした。 (ハ) バクテリア性抽出物のヒトの細胞及び体液免
疫応答における効果。 動物、植物又は細菌から抽出した種々の物質
は、免疫系の種々の成分に作用することができ
る。これら免疫モジユレータの最も研究されてお
り、また多分最も効果的なものはバクテリア及び
その生成物である。これらのうち、大腸菌からの
凍結乾燥した抽出物（コード名OM−89）は興味
ある免疫薬特性を示した。OM−89はカプセル形
態で得られ、１カプセルには60mgの凍結乾燥物が
含まれる。動物研究においては、OM−89がマク
ロフアージとその食作用活性、NK細胞及びＢリ
ンパ球並びに分泌免疫グロブリンの生合成を刺激
することが示された。ヒトにおける薬理試験で
は、自己リンパ球に対するマクロフアージの抗原
提示能におけるOM−89の増強作用及び免疫イン
ターフエロンの生合成が示された。 目的：健康な被験者の免疫系の細胞及び体液成
分におけるOM−89の作用を調査することにあ
る。 材料および方法： 材 料 OM−89（１カプセルには60mgの凍結乾燥物が
含まれる）。 分裂促進剤（mitogen）は、コンカナバリンＡ
（ConA，Pharmacia，ウプサラ，スウエーデン
国）．フイトヘマグルチニンＰ（PHA，Difco
Laforatories，デトロイト，アメリカ合衆国）及
びポークウイード マイトジエン（PWM，Gibco，Laforatories，
グランドアイランド，アメリカ合衆国）である。 被験者 種々のアツセイに使用する末稍静脈ヘパリン化
血液を、空の胃に午前中１カプセルのOM−89を
14日間与え他の調剤を与えていない10人の健康な
被験者（６人の女性と４人の男性、平均年令42
才、23才〜71才の範囲）から静脈穿刺することに
より収集した。別のパイロツト研究を、６人の未
処置無感作供血者からの血液試料を用いてインビ
トロで行つた。 実験室的及び臨床試験 臨床及び実験室的試験は、０日、14日及び28日
目、そして５人の被験者に対して56日目に行つ
た。臨床試験は従来の一般的検査であるが、実験
室的試験には（下記の耐容性の分析を除き）次の
免疫学的アツセイが含まれる。 −ヒトリンパ球細胞の計数 種々のリンパ球集団の絶対及び相対数は、０，
14及び28日目において10人の健康な被験者から収
集した静脈血液試料により鑑別血球計算法に従い
測定した。Ｔ細胞はヒツジ赤血球細胞を用いる自
然ロゼツト形成アツセイ（spontaneous rosette
formation assay）により、またＢ細胞は表面免
疫グロブリンを表示する従来の蛍光抵抗体法によ
り測定したが、いわゆるヌル細胞はヒツジ赤血球
細胞でロゼツトを形成せず表面免疫グロブリンを
表示することもない。Ｔリンパ球の活性水準の尺
度を示す活性Ｔリンパ球の集団は、Felsfurgらに
より発表されている迅速ロゼツト法（early
rosette method）及びこれを若干改変した方法
に従つて測定した。 −分裂促進剤を刺激するリンパ球 微小リンパ球培地を、ヘパリン化静脈血液試料
から調製した。培地に添加する分裂促進剤の濃度
は、125μｇ／mlConA，0.5μｇ／mlPHA及び100μ
ｇ／mlPHA及び100μｇ／mlPWMであり、全て
予備試験での最適のものを確実にした。培地を95
％の空気と５％のCO₂から成る潤滑雰囲気中37℃
の温度で48時間培養し、次いで3H−チミジンの
有するパルスに24時間さらし、次いで特定の濾紙
上で細胞収穫用装置を用いて収集した。³H−チミ
ジンの混入はβ−計数器を用いカウントパーミニ
ツト（cpm）で測定した。刺激指数（SI）は、刺
激した培地のcpm及び無刺激（０日目）の培地か
ら算出した。 −体液免疫パラメータ 血清免疫グロブリンIgG，IgA及びIgMの水準
は市場で入手し得るキツト（Bo¨hringer，
Mannheim，RFG）を用い免疫拡散法により測
定し、自己抗体（リウマトイド因子、抗核因子及
び他の細胞要素に対する抗体）は従来法（ラテツ
クス結合反応試験、感作ヒツジ細胞凝集アツセ
イ、蛍光抗体法）により測定し、循環性免疫複合
物は白血球食細胞法により測定した。 −付加的パイロツト研究 微小リンパ球培地を、未処理被験者から収集し
たヘパリン化静脈血液試料から上述の方法に従つ
て調製した。OM−89を濃度を増加しながら
（0.003〜３mgOM−89／ml培地）培地に添加した
が、対照培地はOM−89を含有しない。刺激指数
（SI）は試験培地及び対照培地のcpmから算出し
た。第２の実験において、分裂促進剤ConAを
62.5μｇ／ml又は125μｇ／ml（予備実験で夫々ほ
ぼ最適、最適濃度として特定された。）並びに
OM−89を0.3mg／ml培地にて添加した。この刺
激指数は上述の如く測定した。 耐容性 −臨床耐容性：０，14及び28日目における健康
診断は、体重制御を含む臨床状態及び自覚耐容性
を考慮する質疑を包含した。 −血液学的、生化学的及び泌尿器科学的耐容性： 沈降速度、赤血球数、血小板数及び白血球数、
鑑別血球図（differential blood picture）、ヘモ
グロビン、アルカリホスフアターゼ、SGOT，
SGPT，ピリルビン、尿素、クレアチニン及び沈
澱を含む全尿状態を、０，14及び28日目に検査し
た。 結 果 OM−89の経口投与のヒト白血球細胞に対する作
用 OM−89の14日間の投与期間では、Ｔ，Ｂ又は
ネルリンパ球集団の絶対数（第１表）又は相対数
（第１図）は研究を通して変化しなかつた。 活性Ｔ細胞副集団のみが絶対数並びに相対数に
おいて実質的な増加を示し、28日目における相対
数の増加は統計的有意性に到達した（ｐ＜0.05、
スチユーデントのｔ検定、第１図参照図面中＊
印）。 OM−89の経口投与の分裂促進剤で刺激したリン
パ球に対する作用 第２図は、種々の分裂促進剤及び薬剤投与の前
後の種々の時間による刺激試験の結果を示し、
個々の刺激指数は夫々の初期値に対するものであ
る。OM−89は、Ｔ細胞分裂促進剤ConA及び
PHAに対して有意なリンパ球応答を誘発し、
ConAでは既に14日目でそしてさらに28日目まで
増加し、PHAでは28日目に著しく増加している。
（ｐ＜0.05、スチユーデントのｔ検定、図面中＊
印）。Ｔ及びＢ細胞分裂促進剤PWMに対する応
答は、OM−89の経口投与によつては有意に変化
しなかつた。 また、処置した10人の被験者のうち５人におい
ては、ConA刺激を56日目まで測定した（第２
表）。増大した分裂促進剤応答はOM−89処置の
14日以内で発現し、更に何ら薬剤投与することな
く28日目まで連続的に増大し、次いで56日目、即
ち最後の薬剤投与から６週間後には初期値に戻る
と考えることができる。 OM−89の経口投与の体液免疫パラメータに対す
る作用 IgG，IgM又はIgAの血清の水準の有意な変化
は、研究の間に見出せなかつた。更に、OM−89
を投与しても何ら自己抗体又は循環性免疫複合物
の発生の原因とならなかつた。

【表】

【表】 臨床及び実験室的耐容性 被験者の全員は優れた自覚耐容性を報告した。
研究中で観察された客観的な実験室的及び臨床デ
ータは、実際に変化しないままであつた。 インビトロでの白血球の刺激による付加的なパイ
ロツト研究 未処置被験者から導いた細胞培地に種々の濃度
のOM−89を添加したところ、各個々の試験の刺
激指数およびそれ等の平均値が実際に一定であつ
たので、試験管内のリンパ球の増殖速度は変わら
なかつた。更に未処置被験者から導いたConA−
刺激したリンンパ球培地へのOM−89の添加は試
験管内で最適またはそれに次ぐConA濃度で分裂
促進剤の応答を増進または抑圧しなかつた。 以上、大腸菌からの凍結乾燥抽出物（OM−
89）をヒトにおける免疫モジユレート化
（immunomodulating）特性及び耐容性について
研究した。該抽出物の健康な被験者への経口投与
は、他のリンパ球集団を変化させることなく活性
Ｔ細胞集団を選択的に増大させた。コンカナバリ
ンＡ及びフイトヘマグルチニン（植物凝集素）に
対する増殖性応答の著しく増大が記録されたが、
ポークウイードマイトジエンに対しては記録され
なかつた。血清水準のIgG，IgA及びIgMにおい
ては著しい変化は観察されなかつた。OM−89の
臨床及び生物学的耐容性は優れており、何ら有害
な副作用又は循環性（circulating）免疫複合物
若しくは自己抗体を産生せず、一方インビトロ研
究ではOM−89が分裂促進剤（マイトジエン）で
ないことが示された。従つて、健康な被験者にお
いて、OM−89は主として細胞性免疫応答に作用
すると考えられる。

【図面の簡単な説明】

第１図はOM−89の経口投与の相対的リンパ球
計数に対する作用を示すグラフ、第２図はOM−
89の経口投与後分裂促進剤によるリンパ球刺激試
験の結果を示すグラフである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 大腸菌の次の菌株 −NCTC：8603，8621，8622，8623，9026，
   9111，9119，9707，9708. −Ｉ−081，Ｉ−082，Ｉ−083，Ｉ−084，Ｉ
   −085， Ｉ−086，Ｉ−087，Ｉ−088，Ｉ−089 の少くとも１種からアルカリ分解および自己分解
   により得られるバクテリア溶解質を有効成分とし
   て含有することを特徴とする泌尿管系の伝染病経
   口治療薬。 ２ 上記有効成分が上記すべての菌株の溶解質の
   混合物により構成された特許請求の範囲第１項記
   載の泌尿管係の伝染病経口治療薬。