JPH0257523B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

産業上の利用分野 アジリジンがその構造及び性質から、癌化学療
法に大きな役割を持つアルキル化作用化合物、例
えばシクロホスフアミド及びＮ−ロスト化合物に
属することは公知である。しかしアルキル化反応
は癌細胞の生成位置に選択的に生起せず、従つて
同化合物は正常な細胞にも癌発生作用を有し得
る。ところでアジリジン環の２位でCH基と置換
すると、アルキル化性又従つて毒性も失われるこ
とが示された。 従来技術 東ドイツ国経済特許明細書第110492号には１−
カルバモイル−２−シアンアジリジンをラツトに
静脈内投与すると、白血球及びリンパ球が著しく
増し、他方赤血球の数は殆ど不変であることが記
述されている。更に抗体を形成する脾臓細胞の著
しい増加が認められる。従つてこの生成物は細菌
−及びウイルス感染における免疫刺戟性治療剤と
して使用可能である（西ドイツ国特許出願
P2528460.0号）。しかし同物質の溶液中での僅少
な安定性及び経口投与の際の完全な無効力はこの
治療剤の重要な欠点として立証されている。 発明が解決しようとする問題点 本発明の課題は、効力が同等か又はより高く、
より僅かな突然変異誘発性で証明されるように毒
性が僅少で、認められる程の他の副作用を示さ
ず、より安定でかつ、有利に経口で、より簡単に
投与出来る免疫刺戟性治療剤を見出すことであつ
た。 問題点を解決するための手段 環窒素原子の位置で、置換された低級アルキル
基又は炭素環式基又はヘテロ環式基により置換さ
れていてよい２−シアンアジリジン誘導体の一連
のものがこの課題を解決することが見出された。 本発明の課題は一般式： ［式中、Ｒは、 テトラヒドロピラニル基、テトラヒドロフル
フリル基、アダマンチル基又はノルボルニル
基、シクロプロピル基又はカルブエトキシ基に
より置換されていてよいシクロヘキセニル基を
表わすか、又は (a) ハロゲン、メチルチオ基、メチルスルホニ
ル基、C₁〜C₂−カルブアルコキシ基又はフ
エノキシ基により、又は (b) C₅〜C₆−シクロアルキル基又はシクロヘ
キセニル基により、又は (c) ヒドロキシ基、メチル基、メチルチオ基、
メトキシ基、ニトロ基、ハロゲン、C₁〜C₂
−カルブアルコキシ基又はトリフルオルメチ
ル基１個以上により置換されていてよいフエ
ニル基により、又は (d) ヒドロキシ基、メチル基、メトキシ基又は
カルブメトキシ基１個以上で置換されていて
よいチエニル基、フリル基、ピリジル基又は
ピリミジニル基により、１回以上置換されて
いてよいC₁〜C₄−アルキル基を表わすか、
又は ホルミル基、C₁〜C₂−カルブアルコキシ基、
ニトリル基又はフエニル基１個以上で置換され
ていてよい、直鎖又は分枝鎖の、一又は多不飽
和C₂〜C₅−アルキル基を表わす］のＮ−置換
２−シアンアジリジンを含有する免疫刺戟作用
を有する薬剤である。 一又は多不飽和アルキル基は不飽和鎖の任意の
位置で二重結合又は三重結合が存在し得る炭素原
子数２〜５の基である。特にビニル基、アリル
基、メチルアリル基、クロチル基、２−メチルプ
ロペニル基、プロパルギル基、２−ブチニル基、
３−ブチニル基及び３−ペンテニル基が該当す
る。ハロゲンは弗素、塩素及び臭素である。フエ
ニル基もしくはヘタリール基はすべての場合にお
いて上記の置換分１又は多置換されていてよい。 アルキル基が置換されていないＮ−アルキル−
２−シアンアジリジン、１−ベンジル−２−シア
ン−アジリジン等は“シエーミツシエ・ベリヒテ
（Chem.Ber.）”第105巻312〜315頁（グンダーマ
ン（Gundermann）等）に記載されている。他の
化合物は西ドイツ国特許公開第2530960号公報に
記述されている。すべて公知の化合物は中間生成
物として記述されているが、薬学的効力について
の記述はない。 一般式の化合物は特願昭54−98780号に記載
されている。 その免疫刺戟性は以下の事実により立証され
た： １ 上記物質の経口及び静脈内投与後の白血球及
びリンパ球の増加 ２ 上記物質で培養した後人リンパ球中に放射性
トレーサー、チミジンを導入することにより測
定したリンパ球変異の増加（K.レツシユ
（Resch）、“プラクシス デル イミユノロギ
ー（Praxis der Immunologie）”1976年、出
版者：K.O.フオアレンダー（Vorlaender）、テ
イーメ−フエヤラーク（Thieme−Verlag）、
シユトウツトガルト） ３ 動物実験でマウスに感染させ、公知の静菌作
用の化学治療剤、例えばクロラムフエニコール
に加え付加的に上記物質を投与すると、静菌化
学治療剤例えばクロラムフエニコールの単独投
与よりも明白な治療効果が得られた事実。 本発明の更なる目的は、一般式の化合物及び
適当な担体物質に加えて付加的に化学治療剤を含
有する薬剤である。その場合化学治療剤というの
は通例殺菌作用を有する物質、例えばペニシリ
ン、セフアロホスホリンのグループからのもので
あるが、ニトロフランのグループからの化合物も
該当する。相乗効果は例えば一般式の化合物の
グループからの免疫刺戟剤と静菌作用を有する化
学治療剤クロラムフエニコールとを含有する配合
薬剤において示される。 本発明の目的は又免疫刺戟剤としての、例えば
不斉炭素原子又はシス−トランス−異性によつて
生ずる、一般式の全立体異性化合物である。こ
の場合立体異性体の分割は自体公知の方法により
行われる。 免疫刺戟作用を有する薬剤を製造するために一
般式の化合物を自体公知の方法で適当な薬物用
担体物質と混合し、例えば錠剤又は糖衣錠剤とし
て成形するか、又は相当する助剤を添加して水、
油（例えばオリーブ油）中に懸濁又は溶解し、カ
プセルに充填することも出来る。 本発明による作用物質は酸不安定性であるの
で、上記調製物はアルカリ性の小腸域中ではじめ
て溶解する被覆を備えるか、又は相応する担体物
質、例えば高級脂肪酸又はカルボキシメチルセル
ロースが添加される。固体担体物質とは例えばデ
ンプン、乳糖、マンニツト、メチルセルロース、
タルク、高分散性珪酸、高分子脂肪酸（例えばス
テアリン酸）、ゼラチン、寒天、燐酸カルシウム、
ステアリン酸マグネシウム、動物性及び植物性脂
肪及び固体高分子ポリマー（例えば、ポリエチレ
ングリコール）であり、経口投与に好適な調製物
は所望の場合には調味剤及び甘味剤を含有する。 注射剤媒体としては有利に水を使用し、この水
は注射溶剤において常用の添加物、例えば安定化
剤、溶解助剤又は僅かにアルカリ性の緩衝剤を含
有する。この種の添加剤は、例えばジメチルスル
ホキシド、ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピ
ロリドン、燐酸塩緩衝剤又は炭酸塩緩衝剤、エタ
ノール、錯化剤（例えば、エチレンジアミン四酢
酸及びその非毒性塩）、粘度調節のための高分子
ポリマー（例えば液体ポリエチレンオキシド）で
ある。 一般式の化合物と共に化学治療剤も含有する
薬剤配合物に対しても一般に上に挙げたのと同様
の調製薬形が該当する。両作用物質、すなわち免
疫刺戟剤と化学治療剤とは調製薬剤中で通例10：
１〜１：10に比率で存在し、その場合両成分の等
モル量の比率が有利であることが立証された。 ある適当な調製物は化学治療剤としてのクロラ
ムフエニコール100mg及び１−アリル−２−シア
ンアジリジン33.3mg並びに適当な担体物質例えば
澱粉からなり、通例１日に２回経口投与される
250mgの錠剤形に形成される。 免疫刺戟作用の証明のためには一方では−記述
した様に−マウスに大腸菌（エシエリヒア コ
リ、108）で急性感染させ、一般式の化合物の
系列からの免疫刺戟剤（例えば１−アリル−２−
シアンアジリジン(B)）並びに同時に治療用量以下
のクロラムフエニコール(A)を投与してその影響を
調査する。 実 験 成長した雌のNMRIマウス（25〜30ｇ）20匹
ずつに０日に1.0×10⁷病原体／動物（エシエリヒ
ア コリ、108）を腹腔内感染させた。上記作用
剤の投与の仕方は以下の様であつた。 第一グループ：40mg／KgＡ、経口、0.5％のメチ
ルセルロースに溶解 第二グループ：13.4mg／KgＢ、経口、0.5％のメ
チルセルロースに溶解 第三グループ：40mg／KgＡ＋13.4mg／KgＢ、経
口、0.5％のメチルセルロースに溶解 第四グループ：10mg／KgＡ、経口0.5％のメチル
セルロースに溶解 第五グループ：3.3mg／KgＢ、経口、0.5％のメチ
ルセルロースに溶解 第六グループ：10mg／KgＡ＋3.3mg／KgＢ、経口、
0.5％のメチルセルロースに溶解 第七グループ：対照物質、メチルセルロース 結 果

【表】 他方白血球増多症−予検において一般式の化
合物を経口投与した後の白血球増加を調べた。 実 験 成長した雌のSprgue−Dawleyラツト10匹ずつ
を絶食させた後でその眼窩後静脈叢から血液を採
取し、クールター（Coulter）計数管を用いて白
血球を数えた。引続いて調査される化合物を200
mg／Kgの投与量で、0.5％のメチルセルロース中
の溶液又は懸濁液の形で経口投与した。４日後再
び１晩絶食させた後で眼窩後静脈叢から血液を採
取し、クールター計数管を使用して公知法で白血
球を数え、平均値を−平均値からの標準偏差を付
して−計算した。 結 果化合物 第０日 第４日 Ｂ 8.5 17.1 Ｃ 6.7 16.2 Ｄ 7.55 10.4 Ｅ 6.5 9.6 Ｆ 8.9 12.0 Ｇ 7.1 11.3 Ｈ 7.1 12.3 Ｉ 6.6 10.6 Ｋ 6.3 11.9 Ｌ 7.9 12.3 Ｍ 7.5 13.5 Ｎ 7.0 13.2 Ｏ 5.8 11.9 Ｐ 6.7 9.8 Ｑ 6.4 8.9 Ｒ 7.1 9.9 Ｓ 8.93 12.84 Ｔ 8.0 13.5 Ｕ 8.0 14.3 Ｖ 6.7 9.3 Ｗ 6.9 8.8 Ｘ 6.5 8.3 Ｂ＝１−アリル−２−シアンアジリジン Ｃ＝３−（２−シアンアジリジン−１−イル）−ア
クロレイン Ｄ＝３−（２−シアンアジリジン−１−イル）−ア
クリル酸エチルエステル Ｅ＝２−シアン−１−（２−チエニル）−アジリジ
ン Ｆ＝２−シアン−１−（２−メチルアリル）−アジ
リジン Ｇ＝１−（２−クロルエチル）−２−シアン−アジ
リジン Ｈ＝２−シアン−１−（３−トリフルオルメチル
ベンジル）−アジリジン Ｉ＝２−シアン−１−（２，２−ジクロルエチル）
−アジリジン Ｋ＝１−（ブテ−２−エニル）−２−シアンアジリ
ジン Ｌ＝２−シアン−１−（５−メチル−２−ニトロ
ベンジル）−アジリジン Ｍ＝１−（２−クロルベンジル）−２−シアンアジ
リジン Ｎ＝２−シアン−１−（５−メチルピリミジン−
４−イルメチル）−アジリジン Ｏ＝２−シアン−１−（ピリミジン−１−イルメ
チル）−アジリジン Ｐ＝２−シアン−１−［（２−メトキシ−６−メチ
ルピリジン−３−イル）−メチル］−アジリジ
ン Ｅ＝２−シアン−１−（５−メトキシカルボニル
−２−フルフリル）−アジリジン Ｒ＝２−シアン−１−［（２，５−ジメチル−ピリ
ミジン−４−イル）−メチル］−アジリジン Ｓ＝２−シアン−１−メチルアジリジン Ｔ＝２−シアン−１−プロピルアジリジン Ｕ＝１−ベンジル−２−シアンアジリジン Ｖ＝２−シアン−１−テトラヒドロフルフリル−
アジリジン Ｗ＝２−シアン−１−（ノルボルン−２−イル）−
アジリジン Ｘ＝１−（２−シアン−アジリジン−１−イル）−
２−カルブエトキシ−シクロヘキセ−１−エ
ン 本発明の代表的な化合物のいくつかについてア
メス（Ames）−テスト（Mutation Research.第
31巻、1975年、第347〜364頁参照）により変異誘
発性を試験し、公知のアジリジン−２−カルボキ
サミド、２−シアンアジリジン及び２−〔２−シ
アンアジリジニル−(1)〕−２−〔カルバモイルアジ
リジニル−(1)〕−プロパンと比較する。この実験
は、本発明による化合物が公知の化合物にくらべ
て全く変異誘発性を示さないということを示して
いる。 いくつかの物質に関してアメス（Ames）−テ
スト（文献、B.N.Ames等著：Handbook of
mutagenicity Test、Elsevier Scientific
Publishing Company出版、アムステルダム−ニ
ユーヨーク−オツクスフオード1977年、第１〜17
頁）により変異誘発性を調べた。 このアメステストとは逆突然変異を利用した効
力検定系である。このアメステストで使用される
検定菌株はヒスチジンの生合成に必要な酵素の欠
失という共通の性質を示す。すなわちヒスチジン
が外界から供給されないならば、これらのバクテ
リアは成長することも、繁殖することもできな
い。 又多くの薬剤は代謝工程において不活性となる
か、又は代謝酸素により不活性の状態から遺伝子
に対して活性の代謝物質になる。従つて、アメス
テストにおいては検定有機体、試験物質及び外因
代謝システムが包含される。 Ｓ−９代謝システムはフエノバルビタールと３
−メチルコールアンスレンとの組合せ又はポリ塩
化ビフエニル混合物〔アロクロール（Aroclor）
1254〕で誘発されたラツトの肝臓均質化物（9000
ｇ荷重、上澄）から得られる。 突然変異はヒスチジン栄養素要求特性を有する
菌株を阻止する媒体上に生じるコロニーの数によ
り示される。 実験操作 実験化合物の溶液を使用直前にジメチルスルホ
キシド（DMSO）中に調製した。溶剤PMSOを
負のコントロールのために使用した。DMSO（分
光学用）はメルク社から得られた。 S9肝臓均質物： 体重160〜200mgの雄のスプラーク・ドーリー・
ラツト（Spraque Dawley rat）を使用した。こ
の動物に３−メチルコールアンスレン80mg／Kgを
５日間連続腹腔内投与した。平行して、飲料水中
に濃度0.1％で溶かしたフエノバルビタールナト
リウムを投与した。 ５日後頚部脱臼により殺し、肝臓を摘出した。
この肝臓を０〜４℃の間の温度で無菌条件下に更
に処理した。 肝臓の無菌のハサミで細く切り刻み、0.15M
KCl3ml／ｇで均質化した。 この均質物を9000ｇで10分間遠心分離し、上澄
（S9）を傾斜し、供給した。 S9−混合調剤の組成 0.80ml S9フラクシヨン 8.55ml 0.2M Na₂HPO₄ 0.20ml 0.4M MgCl＋1.65M KCl 0.40ml 0.1M NADP 0.05ml 1.0Mグルコース−６−ホスフエート
溶液 S9 16％を含有するS9混合調剤の場合は
Na₂HPO₄の量を7.75mlに下げた。 変異誘発性テストのためにはサルモネラ・チフ
イムリウス（Salmonella Typhimurium）の菌
株TA98、TA100、TA1535、TA1537及び
TA1538が使用された。該菌株をヒスチジン要
求、rfa−特製、Ｒ−フアクター及びuvrB−欠失
に関して慣用手段でチエツクした。 １夜経過したバクテリア培地0.1ml、試験化合
物溶液0.1ml及び緩衝液又はS9−混合物0.5mlを解
けた上面寒天２mlに加え、フオーゲル・ボンナー
（Vogel−Bonner）固体培地を有するペトリシヤ
ーレ中に注いだ。 上面寒天はヒスチジン60mg／μを含有した。 このプレートを37℃で72時間恒温保持した。 各投与量を三回試験し、負のコントロールのた
めには５プレートを使用した。 物質を、代謝活性化せずに、プレートあたり
1.0、10.0、100.0、1000.0及び5000.0μｇの濃度で
試験した。 この効果検定をもう１度繰り返し、S9（８％の
かわりに）16％を含有するS9−混合調剤を第２
の試験の活性化部分に使用した。 恒温保持の３日後、復帰突然変異体コロニーの
数をかぞえ、プレートを完全な背景菌叢の存在に
関してチエツクした。 次に結果を表にして記載する。

【表】

【表】

【表】 ＊ 物質はこの濃度で静菌的に作用する
Ames−テストにおいて、復帰突然変異数がコ
ントロールの２倍より多い物質を変異誘発性作用
がある物質といえる。従つて前記表から化合物
Ｂ、Ｍ、Ｎ、Ｏ、Ｐ、Ｒ及びＳは変異誘発性では
ないということが判明する。 本発明において、有利に次の化合物を免疫刺戟
作用を有する薬剤製造のために使用することがで
きる。 ２−シアン−１−（３−メチルメルカプトプロピ
ル）−アジリジン 沸点0.05＝110℃ ２−シアン−１−（２−メチルスルホニルエチル）
−アジリジン 油状物質 １−（３−クロルプロピル）−２−シアンアジリジ
ン ２−シアン−１−シンナミル−アジリジン
沸点0.05＝138〜140℃ ２−シアン−１−（プロピ−２−イニル）−アジリ
ジン 沸点0.1＝48℃ ２−シアン−１−（ブチ−２−イニル）−アジリジ
ン ２−シアン−１−（ブチ−３−イニル）−アジリジ
ン 沸点0.1＝70〜71℃ ２−シアン−１−（４−ヒドロキシ−３−メトキ
シベンジル）−アジリジン １−（ノルボルン−２−イル）−２−シアンアジリ
ジン 沸点0.05＝84〜85℃ ２−シアン−（２−クロルベンジル）−アジリジン
融点＝55〜57℃ （イソプロパノール） ２−シアン−１−（ピリミジン−２−イルメチル）
−アジリジン 融点＝72〜76℃ （イソプロパノール） ２−シアン−１−テトラヒドロフルフリル−アジ
リジン 沸点0.1＝95℃ ２−シアン−１−（２，２，２−トリクロルエチ
ル）−アジリジン ２−シアン−１−（３−トリフルオルメチルベン
ジル）−アジリジン 沸点0.15＝92℃ ２−シアン−（５−メチル−２−ニトロベンジル）
−アジリジン 融点＝95〜96℃ （イソプロパノール） ２−シアン−１−（２，２，２−トリフルオルエ
チル）−アジリジン ２−シアン−１−（ペンテ−３−エニル）−アジリ
ジン ２−シアン−１−（３，４，５−トリメトキシベ
ンジル）−アジリジン ２−シアン−１−フエネチル−アジリジン
沸点0.05＝124℃ ２−シアン−１−（２−フエノキンエテル）−アジ
リジン 沸点0.05＝115℃ ２−シアン−１−（プロプ−１−エニル）−アジリ
ジン ２−シアン−１−（テトラヒドロピラン−４−イ
ル）−アジリジン 融点74〜76℃ ２−シアン−１−（３−カルブエトキシ−２−メ
チルベンジル）−アジリジン 融点40〜43℃ 沸点0.01＝168〜170℃ ２−シアン−１−（２−クロルエチル）−アジリジ
ン 沸点0.1＝74℃ ２−シアン−１−メチルアジリジン
沸点11：53〜54℃ ２−シアン−１−ｎ−プロピルアジリジン
沸点15：80〜82℃ ２−シアン−１−イソプロピルアジリジン
沸点15：53〜55℃ ２−シアン−１−ｎ−ペンチルアジリジン
沸点0.3：50〜52℃ １−ベンジル−２−シアンアジリジン
沸点0.05：103〜105℃ ２−シアン−１−（４−ヒドロキシベンジル）−ア
ジリジン 融点：112〜114℃ Ｓ−２−「（＋）−２−シアン−１−アジリジン」−
プロピオン酸メチルエステル 融点88〜91℃ ２−シアン−１−（シクロヘキセ−１−エニルメ
チル）−アジリジン 沸点0.01：103〜105℃ ２−シアン−１−（２−テニル）−アジリジン
沸点0.1：90〜92℃ ２−シアン−１−（２−フリルメチル）−アジリジ
ン 沸点0.1：100〜101℃ ２−シアン−１−（２−メチルアリル）−アジリジ
ン 沸点0.1：36〜38℃ １−（１−アダマンチル）−２−シアンアジリジン
融点：62〜64℃ １−tert−ブチル−２−シアンアジリジン
融点：53〜56℃ 沸点0.2：52〜54℃ ２−シアン−１−アジリジン−酢酸エチルエステ
ル 沸点0.1：88〜90℃ １−アリル−２−シアンアジリジン
沸点0.2：53〜55℃ ３−（２−シアンアジリジン−１−イル）−アクロ
レイン 融点：57〜58℃ １−フエニル−１−（２−シアンアジリジン−１
−イル）−２−シアンエチレン 融点：95℃ ３−（２−シアンアジリジン−１−イル）−フマル
酸−ジメチルエステル 融点：127〜128℃ ３−（２−シアンアジリジン−１−イル）−アクリ
ル酸−エチルエステル １−（２−シアン−アジリジン−１−イル）−２−
カルブエトキシ−シクロヘキセ−１−エン
融点：101〜104℃ ２−シアン−１−（２−メチルメルカプトベンジ
ル）−アジリジン 油状生成物 ２−シアン−１−（３，４−ジメトキシベンジル）
−アジリジン 油状生成物 ２−シアン−１−（４−メチルベンジル）−アジリ
ジン 沸点0.05：113〜115℃ ２−シアン−１−シクロプロピル−アジリジン
沸点1.5：70℃ ３−シアン（２−シアンアジリジン−１−イル）
−プロピオン酸−エチルエステル
沸点0.15＝115℃

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 一般式： ［式中、Ｒは、 テトラヒドロピラニル基、テトラヒドロフル
   フリル基、アダマンチル基又はノルボルニル
   基、シクロプロピル基又はカルブエトキシ基に
   より置換されていてよいシクロヘキセニル基を
   表わすか、又は (a) ハロゲン、メチルチオ基、メチルスルホニ
   ル基、C₁〜C₂−カルブアルコキシ基又はフ
   エノキシ基により、又は (b) C₅〜C₆−シクロアルキル基又はシクロヘ
   キセニル基により、又は (c) ヒドロキシ基、メチル基、メチルチオ基、
   メトキシ基、ニトロ基、ハロゲン、C₁〜C₂
   −カルブアルコキシ基又はトリフルオルメチ
   ル基１個以上により置換されていてよいフエ
   ニル基により、又は (d) ヒドロキシ基、メチル基、メトキシ基又は
   カルブメトキシ基１個以上で置換されていて
   よいチエニル基、フリル基、ピリジル基又は
   ピリミジニル基により、１回以上置換されて
   いてよいC₁〜C₄−アルキル基を表わすか、
   又は ホルミル基、C₁〜C₂−カルブアルコキシ基、
   ニトリル基又はフエニル基１個以上で置換され
   ていてよい、直鎖又は分枝鎖の、一又は多不飽
   和C₂〜C₅−アルキル基を表わす］のＮ−置換
   ２−シアンアジリジン及びその薬理学的に認容
   性の塩を常用の担体及び助剤と共に含有する免
   疫刺戟性薬剤。 ２ １−アリル−２−シアンアジリジンを含有す
   る特許請求の範囲第１項記載の薬剤。 ３ １−（２−クロルベンジル）−２−シアンアジ
   リジンを含有する特許請求の範囲第１項記載の薬
   剤。 ４ ２−シアン−１−（ピリミジン−２−イルメ
   チル）−アジリジンを含有する特許請求の範囲第
   １項記載の薬剤。 ５ ２−シアン−１−（２−メトキシ−６−メチ
   ルピリジン−３−イル）−メチル−アジリジンを
   含有する特許請求の範囲第１項記載の薬剤。 ６ ２−シアン−１−（２，５−ジメチル−ピリ
   ミジン−４−イル）−メチル−アジリジンを含有
   する特許請求の範囲第１項記載の薬剤。 ７ ２−シアン−１−メチル−アジリジンを含有
   する特許請求の範囲第１項記載の薬剤。