JPH025859A - 動物およびヒト細胞用血清不含培地および培養方法 - Google Patents
動物およびヒト細胞用血清不含培地および培養方法Info
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- JPH025859A JPH025859A JP1008450A JP845089A JPH025859A JP H025859 A JPH025859 A JP H025859A JP 1008450 A JP1008450 A JP 1008450A JP 845089 A JP845089 A JP 845089A JP H025859 A JPH025859 A JP H025859A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は、動物およびヒト細胞用血清不含培地および該
培地を使用する培養方法に関する。
培地を使用する培養方法に関する。
従来の技術
特に細胞生成物、例えば蛋白質を組換えＤＮＡにより製
造するための動物およびヒト細胞の培養が次第に重要に
なっている。このような細胞培養を工業的規模で行う場
合には、多量の培地が必要になる。
造するための動物およびヒト細胞の培養が次第に重要に
なっている。このような細胞培養を工業的規模で行う場
合には、多量の培地が必要になる。
従来、培地としては極めて多種の培地、例えばＩ）ＭＥ
Ｍ培地（Ｍｏｒｔｏｎ 、 Ｈ，Ｊ、 （１９７０）
ＩｎＶｉｔｒｏ ６ 、８９ ）、Ｆ１２培地［Ｈａｍ
、 Ｒ，Ｃ）。
Ｍ培地（Ｍｏｒｔｏｎ 、 Ｈ，Ｊ、 （１９７０）
ＩｎＶｉｔｒｏ ６ 、８９ ）、Ｆ１２培地［Ｈａｍ
、 Ｒ，Ｃ）。
（ｔ ９６５ ） Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ
、 Ｓｃｉ、 ＵＳＡ５３゜２８８〕およびＲＰＭＩ
１６４０培地［（）ｏｄｊｎｇｒＪ、Ｗ、（１９８０）
Ｊ、Ｉｍｍｎｎｏｌ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ３９ 。
、 Ｓｃｉ、 ＵＳＡ５３゜２８８〕およびＲＰＭＩ
１６４０培地［（）ｏｄｊｎｇｒＪ、Ｗ、（１９８０）
Ｊ、Ｉｍｍｎｎｏｌ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ３９ 。
２８５、ＪＡＭＡ１９９（１９５７） ５１９］が
使用されている。しかしこれらの培地はすべて、細胞（
非粘着性固定独立細胞）を懸濁液中で培養しようとする
場合には、血清を加えなければならない。このために一
般にはウシの胎児血清、ウマ血清またはヒト血清を１〜
１５チ、普通は５％の濃度で使用する。しかしこれらの
血清は高価であって、多量に入手することは殆ど不可能
である。培地中の血清濃度の減少は従来は達成すること
かで＠なかった。それというのも血清濃度の減少によっ
て細胞が次第に強く凝集するからである。この細胞の凝
集は、細胞が血清なしに培養さ扛る場合には惚めて顕著
である。このように凝集された細胞は急速に死滅するの
で、所望の細胞生成物の収量が著しく微少する。
使用されている。しかしこれらの培地はすべて、細胞（
非粘着性固定独立細胞）を懸濁液中で培養しようとする
場合には、血清を加えなければならない。このために一
般にはウシの胎児血清、ウマ血清またはヒト血清を１〜
１５チ、普通は５％の濃度で使用する。しかしこれらの
血清は高価であって、多量に入手することは殆ど不可能
である。培地中の血清濃度の減少は従来は達成すること
かで＠なかった。それというのも血清濃度の減少によっ
て細胞が次第に強く凝集するからである。この細胞の凝
集は、細胞が血清なしに培養さ扛る場合には惚めて顕著
である。このように凝集された細胞は急速に死滅するの
で、所望の細胞生成物の収量が著しく微少する。
このような理由から、非粘着細胞がその中で凝集されず
に培養されつる血清不含培地に対して多大な関心が生じ
た。すなわち例えばＩｎＶｉｔｒｏ Ｃｅ１１．
Ｄｅｖ、 Ｂｊｏｌ、 ２ １ （１
９８５）５８８〜５９２には、Ｃ’ＨＯ細胞の培養に適
しておりかつハム（Ｈａｍ ）のＦ１２培地とＤＭＥＭ
培地との１〜１混合物を含有する血清不含培地であって
、これにトランスフェリン、インシュリンおよび亜セレ
ン酸塩の添加されたものが記載されている。他の公知培
地は、基礎培地の他に生物学的ポリアミン（Ｊ、 Ｂｉ
ｏｌ、 Ｃｈｅｍ、 ２６１（１９８６）９５０２〜９
５０８）もしくはバクテロペプトンおよびインシュリン
（Ｂｊｏｔｅｃｈ−ｎｏｌ、 Ｂｊｏｅｎｇ、 １８
（１９７６） ３６３〜６８２〕もしくはオルニテ／お
よび／またはポリアミン（Ｍｏ１． ｃｅｘｌ、
Ｂｉｏｘ、 ４ （１９８４） ９ １
５ 〜９２２〕全含有している。
に培養されつる血清不含培地に対して多大な関心が生じ
た。すなわち例えばＩｎＶｉｔｒｏ Ｃｅ１１．
Ｄｅｖ、 Ｂｊｏｌ、 ２ １ （１
９８５）５８８〜５９２には、Ｃ’ＨＯ細胞の培養に適
しておりかつハム（Ｈａｍ ）のＦ１２培地とＤＭＥＭ
培地との１〜１混合物を含有する血清不含培地であって
、これにトランスフェリン、インシュリンおよび亜セレ
ン酸塩の添加されたものが記載されている。他の公知培
地は、基礎培地の他に生物学的ポリアミン（Ｊ、 Ｂｉ
ｏｌ、 Ｃｈｅｍ、 ２６１（１９８６）９５０２〜９
５０８）もしくはバクテロペプトンおよびインシュリン
（Ｂｊｏｔｅｃｈ−ｎｏｌ、 Ｂｊｏｅｎｇ、 １８
（１９７６） ３６３〜６８２〕もしくはオルニテ／お
よび／またはポリアミン（Ｍｏ１． ｃｅｘｌ、
Ｂｉｏｘ、 ４ （１９８４） ９ １
５ 〜９２２〕全含有している。
しかしこれらの公知の血清不含培地は欠点を３有する。
すなわち、細胞の培養の間に若干の時間間隔でウシの胎
児血清をしばしば追加する必要がある。同様に通常血清
含有培地中で保持される基本培養物を血清不含培地に移
すことも徐々の適応によってのみ可能である。
児血清をしばしば追加する必要がある。同様に通常血清
含有培地中で保持される基本培養物を血清不含培地に移
すことも徐々の適応によってのみ可能である。
発明が解決しようとする問題点
従って本発明は、非情生細胞の発育に適していて、容易
に取扱うことができかつ安価である血清不含培地を提供
するという課題が基礎になっている。
に取扱うことができかつ安価である血清不含培地を提供
するという課題が基礎になっている。
問題点ヲ屏決するための手段
前記課題は、本発明により、基礎培地、トランスフェリ
ン、インシュリンオヨヒ亜セレン酸塩を含有する動物お
よびヒト細胞、特に非粘着細胞の血清不含培地において
、該培地が、トランスフェリン ２〜１０ｍ９／ｌ インシユリン ２〜１０ｍ９／ｌ ペプトン １〜１０ｇ／を 燐酸基、カルボキシ基および／または硫酸基で置換され
たβ−Ｄ−キシロピラノース １０〜５００■／１゜ 亜セレン酸塩 ０．１〜０．５ｍ９／ｌお工び生物学的
ポリアミン ０．１〜２ｍ９／ｌを含有するかまたはこ
れらの成分から構成されていることを特徴とする前記血
清不含培地によって解決される。
ン、インシュリンオヨヒ亜セレン酸塩を含有する動物お
よびヒト細胞、特に非粘着細胞の血清不含培地において
、該培地が、トランスフェリン ２〜１０ｍ９／ｌ インシユリン ２〜１０ｍ９／ｌ ペプトン １〜１０ｇ／を 燐酸基、カルボキシ基および／または硫酸基で置換され
たβ−Ｄ−キシロピラノース １０〜５００■／１゜ 亜セレン酸塩 ０．１〜０．５ｍ９／ｌお工び生物学的
ポリアミン ０．１〜２ｍ９／ｌを含有するかまたはこ
れらの成分から構成されていることを特徴とする前記血
清不含培地によって解決される。
本発明は、動物およびヒト細胞用血清不含培地が、燐酸
基、カルボキシ基および／または硫酸基で置換されたβ
−Ｄ−キシロピラノースの特定量を含有する場合には、
従来公知の培地の欠点を有しない前記血清不含培地が得
られるという意外な発見に基いている。このようなβ−
Ｄ−キシロピラノースは公知であって、商業的に入手で
き、例えばベントサンポリスルフェート（Ｐｅｎｔｏｓ
ａｎｐｏｌｙｓｕｌｆａｔ ）、キシランヒドロデンス
ルフェー） （Ｘｙｌ、ａｎｈｙｄｒｏｇｅｎ ５ｕｌ
ｆａｔ ） 。
基、カルボキシ基および／または硫酸基で置換されたβ
−Ｄ−キシロピラノースの特定量を含有する場合には、
従来公知の培地の欠点を有しない前記血清不含培地が得
られるという意外な発見に基いている。このようなβ−
Ｄ−キシロピラノースは公知であって、商業的に入手で
き、例えばベントサンポリスルフェート（Ｐｅｎｔｏｓ
ａｎｐｏｌｙｓｕｌｆａｔ ）、キシランヒドロデンス
ルフェー） （Ｘｙｌ、ａｎｈｙｄｒｏｇｅｎ ５ｕｌ
ｆａｔ ） 。
キシランポリスルフェート（Ｘｙｌａｎｐｏｌｙｓｕｌ
ｆａｔｌＣＢ８０６１、フィブラーゼ（Ｆｉｂｒａｓｅ
）、ヘモフラール（Ｈｅｍｏｋｌａｒ ）、５ｐ５４
（ナトリウム塩）ドロンボッイツト（Ｔｈｒｏｍｂｏｚ
ｉｔ ） （ナトリウム塩）の名称下で得られる。
ｆａｔｌＣＢ８０６１、フィブラーゼ（Ｆｉｂｒａｓｅ
）、ヘモフラール（Ｈｅｍｏｋｌａｒ ）、５ｐ５４
（ナトリウム塩）ドロンボッイツト（Ｔｈｒｏｍｂｏｚ
ｉｔ ） （ナトリウム塩）の名称下で得られる。
キシロピラノースはキシロースから誘導される環状糖で
ある。
ある。
有ｆｉｔ Ｋ ハ、分子量１，０００〜１０，０００
タルトン、特に４，０００〜６．０００ダルトンを有す
るβ−Ｄ−キシロピラノースを使用する。極めて有利に
はベントサンポリスリフエートを使用スル。β−Ｄ−キ
シロピラノースの濃度は有利には５０〜２ＤＯｍ９／ｌ
、極めて有利には８０〜１２０ｍり／ｌである。
タルトン、特に４，０００〜６．０００ダルトンを有す
るβ−Ｄ−キシロピラノースを使用する。極めて有利に
はベントサンポリスリフエートを使用スル。β−Ｄ−キ
シロピラノースの濃度は有利には５０〜２ＤＯｍ９／ｌ
、極めて有利には８０〜１２０ｍり／ｌである。
基礎培地としては、細胞培養のためのすべての公知培地
、例えばＤＭＥＭ培地、Ｆ１２培地およびＲＰＭＩ １
６４０培地であり１．これらの培地は上記名称でＢｏｅ
ｈｒｊｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ ＧｍｂＨまたはＧ
ｉｂｃｏ ＢＲＬ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
（ＵＳＡ ）によって販売されている。しかしＤＭＥＭ
／ Ｆ １２の培地混合物（１：１）が有利である。
、例えばＤＭＥＭ培地、Ｆ１２培地およびＲＰＭＩ １
６４０培地であり１．これらの培地は上記名称でＢｏｅ
ｈｒｊｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ ＧｍｂＨまたはＧ
ｉｂｃｏ ＢＲＬ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
（ＵＳＡ ）によって販売されている。しかしＤＭＥＭ
／ Ｆ １２の培地混合物（１：１）が有利である。
トランスフェリンは、２〜ｉ ｏｍ９／ｌ、 有利には
４〜６ｒｎ９／ｌの濃度で培地に加える。インシュリン
の濃度は２〜１０η７ｔ、有利には４〜６ｍ９／ｌであ
る。ペプトンとしては有利には植物性ペプトン、特に有
利には大豆産ペプトンを、１〜１ｏｉｉｔ、有利には１
〜４ｇ／Ｌの濃度で使用する。
４〜６ｒｎ９／ｌの濃度で培地に加える。インシュリン
の濃度は２〜１０η７ｔ、有利には４〜６ｍ９／ｌであ
る。ペプトンとしては有利には植物性ペプトン、特に有
利には大豆産ペプトンを、１〜１ｏｉｉｔ、有利には１
〜４ｇ／Ｌの濃度で使用する。
適当な生物学的ポリアミンとしては、例えばフ０トレツ
シン、スペルミジン、スペルミンまたはオルニチンであ
る。ポリアミンの濃度は０．１〜２ｍ９／ｌ、有利には
０．５〜１．５ｍ９／ｌである。
シン、スペルミジン、スペルミンまたはオルニチンであ
る。ポリアミンの濃度は０．１〜２ｍ９／ｌ、有利には
０．５〜１．５ｍ９／ｌである。
亜セレン酸塩は０．１〜０．５ｍり／１．有利には０．
１〜０．６ｍ９／ｌの濃度で加える。耐性遺伝子を有す
るベクトル全含有するトランスフェクションされた細胞
を培養しようとする場合には、プラスミドトランスフェ
クションの安定性を保つために該培地にさらにベクトル
中に含有された耐性遺伝子に相応する選択剤を加える。
１〜０．６ｍ９／ｌの濃度で加える。耐性遺伝子を有す
るベクトル全含有するトランスフェクションされた細胞
を培養しようとする場合には、プラスミドトランスフェ
クションの安定性を保つために該培地にさらにベクトル
中に含有された耐性遺伝子に相応する選択剤を加える。
適当な選択剤は当業者には周知であって、例えばネオマ
イシン、ヒグロマイシン、マイコフエノル酸、ピポキサ
ンチン、キサンチン、アミノゾテリンまたはメトトレキ
セイトおよび誘導体である。
イシン、ヒグロマイシン、マイコフエノル酸、ピポキサ
ンチン、キサンチン、アミノゾテリンまたはメトトレキ
セイトおよび誘導体である。
ヒトおよび動物細胞（粘着および懸濁細胞）は、本発明
による培地を用いて血清なしに培養することができる。
による培地を用いて血清なしに培養することができる。
このためには特に次の細胞が適当である：
パウス骨髄腫（Ｂｏｗｅｓ Ｍｅｌａｎｏｍａ ）細胞
ＣＢｉｏｃｈｅｍ、 Ｊ、 ３３６ （１９３５）
６３１〜６３６〕、ヒト内皮細Ｐ ＣＪ、 Ｌａｂ、
Ｃｌ１ｎ、 Ｍｅｄ。
ＣＢｉｏｃｈｅｍ、 Ｊ、 ３３６ （１９３５）
６３１〜６３６〕、ヒト内皮細Ｐ ＣＪ、 Ｌａｂ、
Ｃｌ１ｎ、 Ｍｅｄ。
１０９（１９８７） ９７〜１０４〕、セルトーり細
胞（ラット） ［Ｂｉｏｌ、 Ｒｅｎｒｏｄ、 ３４（
ＩＱ８６） ８９５〜９０４］、角膜細胞（イルカ）
（Ｄｅｖ、 Ｂｉｏｌ、 ５ｔａｎｄ、 ６０ （１
９８５）４６９〜４４６〕上皮細胞（ヒト、雌ウシ、ウ
サ￥） ＣＥｘｐ、 Ｅｙｅ Ｒｅｓ、 ４２ （１９
８６）４１７〜４３１〕、癌細胞（クル力） ＣＣａｎ
ｃｅｒＲｅｓ、４３（１９８３） １７８３〜１７８
９玉ＣＨＯ細胞ＣＪ、 Ｍｏ１． Ｂコｏ１．１５９
（１９８２）６０１〜６２１〕およびマウスおよびヒト
のノ・イブリドーマ細胞。
胞（ラット） ［Ｂｉｏｌ、 Ｒｅｎｒｏｄ、 ３４（
ＩＱ８６） ８９５〜９０４］、角膜細胞（イルカ）
（Ｄｅｖ、 Ｂｉｏｌ、 ５ｔａｎｄ、 ６０ （１
９８５）４６９〜４４６〕上皮細胞（ヒト、雌ウシ、ウ
サ￥） ＣＥｘｐ、 Ｅｙｅ Ｒｅｓ、 ４２ （１９
８６）４１７〜４３１〕、癌細胞（クル力） ＣＣａｎ
ｃｅｒＲｅｓ、４３（１９８３） １７８３〜１７８
９玉ＣＨＯ細胞ＣＪ、 Ｍｏ１． Ｂコｏ１．１５９
（１９８２）６０１〜６２１〕およびマウスおよびヒト
のノ・イブリドーマ細胞。
次に実施例により本発明を詳述する二
側１：
ａ）細胞培養
ＣＨＯ細胞（ＡＴＣＣＣＣＬ６１ 、 ＣＨＯＫｌ ）
を血清不含懸濁培地で培養した。培地（ＤＭＥＭ培地と
・・ムスのＦ１２培地との１：１混合物）はさらにトラ
ンスフェリン５η／ｌ、インシュリン５ｍｇ／ｌ、−ｊ
’トレツシン１ｍＱ／１（Ｉｆ！、セレン酸塩０．２ｍ
Ｑ／ｌ、大豆産ペプトン２ｇ／ｌおよびベントサンポリ
スルフェート１００ｍ９／Ｌｋ含有している。
を血清不含懸濁培地で培養した。培地（ＤＭＥＭ培地と
・・ムスのＦ１２培地との１：１混合物）はさらにトラ
ンスフェリン５η／ｌ、インシュリン５ｍｇ／ｌ、−ｊ
’トレツシン１ｍＱ／１（Ｉｆ！、セレン酸塩０．２ｍ
Ｑ／ｌ、大豆産ペプトン２ｇ／ｌおよびベントサンポリ
スルフェート１００ｍ９／Ｌｋ含有している。
培地１ｍｌ当！１１１０５個の細胞を植え、ローンｆｉ
Ｖ （Ｒｏｌｌｅｒ ） ’ｊたはスピネル（５ｐｉｎ
ｎｅｒ ）ビンに入れ、最大細胞密度（１２０時間後に
１０６細胞）に達するまで培養する。
Ｖ （Ｒｏｌｌｅｒ ） ’ｊたはスピネル（５ｐｉｎ
ｎｅｒ ）ビンに入れ、最大細胞密度（１２０時間後に
１０６細胞）に達するまで培養する。
ｂ） ベントサンポリスルフェートｖ含有する雅胞培
養物およびベントサンポリスルフェートを含有しない細
胞培養物における生細胞数および乳酸塩デヒドロケゞナ
ーゼ（ＬＤＨ）活性の測定 例１と同様に培養し、ＬＤＨｉ失う死滅細胞の量の尺度
として細胞数およびＬＤＨ活性全種々の時間に測定する
。表１から結果がわかる：表 １ ベントサンポリスルフェート全含有するおよび含有しな
い細胞培養物における生細胞数およびＬＤＨの測定 日数 細胞数 ×１０５ ２．５ ５．７ ４．５ ２．５ ２．８ ３．２ ＬＤＨ（ｕ／１） 細胞数 ×１０５ １．５ ２．２ ４．６ ６．５ ８．７ ＬＤＨ（１１／１ ） ベントサンポリスルフェート全含有する場合には細胞数
が多く、細胞の死滅が少ない（ＬＤＨ活性が小さい）こ
とが認められる。任意のＣＨＯ細胞系を用いても同様な
結果が得られる。
養物およびベントサンポリスルフェートを含有しない細
胞培養物における生細胞数および乳酸塩デヒドロケゞナ
ーゼ（ＬＤＨ）活性の測定 例１と同様に培養し、ＬＤＨｉ失う死滅細胞の量の尺度
として細胞数およびＬＤＨ活性全種々の時間に測定する
。表１から結果がわかる：表 １ ベントサンポリスルフェート全含有するおよび含有しな
い細胞培養物における生細胞数およびＬＤＨの測定 日数 細胞数 ×１０５ ２．５ ５．７ ４．５ ２．５ ２．８ ３．２ ＬＤＨ（ｕ／１） 細胞数 ×１０５ １．５ ２．２ ４．６ ６．５ ８．７ ＬＤＨ（１１／１ ） ベントサンポリスルフェート全含有する場合には細胞数
が多く、細胞の死滅が少ない（ＬＤＨ活性が小さい）こ
とが認められる。任意のＣＨＯ細胞系を用いても同様な
結果が得られる。
例 ２
マウスのハイブリドーマ細胞（ＥＣＡＣＣ８４１２２０
０２、ＤＥ ３５０７８４９．９）を、血清不含ＲＰ
ＭＩ １６４０培地で培養する。
０２、ＤＥ ３５０７８４９．９）を、血清不含ＲＰ
ＭＩ １６４０培地で培養する。
この培地はさらにトランスフェリン５ｍ９／ｌ。
インシュリン５ｍ９／ｌ、プトレッシン１ｍ９／ｌ。
亜セレン酸塩０．２１ｎ９／Ｌ、大豆産ペプトン２ｇ／
ｌおよびベントサンポリスルフェート１００ｍ９／を全
含有している。
ｌおよびベントサンポリスルフェート１００ｍ９／を全
含有している。
例１で記載したようにして細胞を植え、形成されたＦＳ
Ｈ抗体の童ｉ ＥＬＩＳＡ試験を介して測定する。
Ｈ抗体の童ｉ ＥＬＩＳＡ試験を介して測定する。
表２は細胞の成長お工ひ抗体生産を示す。
日数 細胞数 抗 体
（×１０５）（Ｉｎｑ／ｌ）
０．９５ ９．８
２．４ １４．０
５．２ ２６．［］４
９．８ ４１．０７ ５．
９ ４６．０例 ６ ＬＭＴＫ ａ胞（ＡＴＣＣＣＣＬｌ、３ ） ｋ血清不
含培地で培養する。培地は例１で記載した培地と同じで
ある。培地１成当り１０５細胞を植え、最大細胞密度（
１２０時間後１０６＃Ｉ胞／ｍｔ；）に達するまで培養
する。
９．８ ４１．０７ ５．
９ ４６．０例 ６ ＬＭＴＫ ａ胞（ＡＴＣＣＣＣＬｌ、３ ） ｋ血清不
含培地で培養する。培地は例１で記載した培地と同じで
ある。培地１成当り１０５細胞を植え、最大細胞密度（
１２０時間後１０６＃Ｉ胞／ｍｔ；）に達するまで培養
する。
ベントサンポリスルフェートを用いると細胞数がより多
くなり、細胞の死滅はより少なくなる（ ＬＤＨ活性に
より小さくなる）のが認められる。
くなり、細胞の死滅はより少なくなる（ ＬＤＨ活性に
より小さくなる）のが認められる。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、基礎培地、トランスフエリン、インシュリンおよび
亜セレン酸塩を含有する動物およびヒト細胞用血清不含
培地において、該培地が、トランスフエリン２〜１０ｍ
ｇ／ｌ、 インシュリン２〜１０ｍｇ／ｌ、 ペプトン１〜１０ｇ／ｌ、 燐酸基、カルボキシ基および／または硫酸基で置換され
たβ−Ｄ−キシロピラノース １０〜５００ｍｇ／ｌ、 亜セレン酸塩０．１〜０．５ｍｇ／ｌおよび生物学的ポ
リアミン０．１〜２ｍｇ／ｌ を含有するかまたはこれらの成分から構成されているこ
とを特徴とする動物およびヒト細胞用血清不含培地。 ２、β−Ｄ−キシロピラノースがペントサンポリスルフ
エートである請求項１記載の培地。 ３、請求項１記載の培地を使用して、バウス骨髄腫細胞
、ヒトの内皮細胞、セルトーリ細胞、角膜細胞、上皮細
胞、癌細胞、ハイブリドーマ細胞およびＣＨＯ細胞の群
から選択される細胞を培養する方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
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