JPH0260599A - 酵素分解方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、カブ］・プリルなどの医薬的活性化合物の製
造のための中間体として有用な式０式％ ［１］ １式中、Ｒ５およびＲ２は互いに独立してアルキル、シ
クロアルキル、アラルキルもしくはアリール、およびｎ
は１または２である］ で示される化合物を、酵素分解法を用いて製造する方法
に関する。

従来技術と発明が解決しようとする課題式： ％式％ ［１］ ［式中、Ｒ３、Ｒ２およびｎは前記に同じ」で示される
光学的活性なカルボン酸は、例えば様々な医薬的活性物
質の合成のための中間体として有用である。例えば、式
： ％式％ ：１１１ ［］ ［式中、Ｒ１は前記に同じ］ で示される化合物は、式： て示される１−［（２Ｓ）−３−メルカプト−２＝メチ
ルプロピオニル］−Ｌ−プロリン（カプトプリル）の合
成において重要な中間体であり、カプトプリルの有効活
性はメルカプトアルカノイル部分の配列によるものであ
り、Ｓ配列の化合物はＲエナンチオマーの約１００倍有
効活性かある。

カプトプリルの製造において先行技術の方法には、化学
的および酵素的分解手段が利用されている。たとえば、
式［＋］のカルボン酸は、ラセミ混合物として製造され
、化学的分解剤を用いてＲおよびＳ−エナンチオマー型
に分離することかできる。そのようにして得られたＳ中
間体か、次に所望生成物の製造に使用できる。しかし、
化学的分解技術にはカプトプリルを製造するために高価
な分解剤か大量に必要であるという明らかな欠点かある
。さらに、その工程自身か煩雑であり、収率も比較的少
ない。

別法として、式： ％式％ ［］ ［式中、Ｒ８、Ｒ２およびｎは前記に同じ］のラセミ化
合物を１７−プロリンと直接結合して、一般式： 加水分解することができる酵素にさらし、式［１］［Ｖ
］ ［式中、Ｒ１，Ｒ２およびｎは前記に同じコで示される
ジアステレオマーを製造することができる。化合物［Ｖ
］のＳＳ−ジアステレオマーは単離できる。次にアシル
基Ｒ，−Ｃ−を脱離して所望生成物をうる。しかし、こ
の方法の欠点は、化６物［Ｖ］のＲ８−ジアステレオマ
ーが同量形成され、それを廃棄しなければならないこと
である。

これはＩ７−プロリンの費用の点から非常に好ましくな
い。

米国特許第４６２９７０１号では、式：％式％ ［］ 「式中、ＲＩＳＲｔおよびｎは前記に同じ、Ｒ３はエス
テル残基を意味するＪ のエステルを、このようなエステルを非対称的にのカル
ボン酸の所望の分解形状を提供している。

○ （、−０Ｒ３部分か加水分解されて酸形状となると同時
に、ラセミエステルもまた分解されてＳまたはＲ配列と
なり、これは化学的分解技術よりもある程度収率が多く
なり、低費用であることがわかった。しかし、これらの
出発物質エステルを製造するにあたっては、まだかなり
の損失があり、さらに活性の高い生成物のために、より
一層高い光学的純度か望まれている。従って、先行技術
へ付は加えるべきことは、損失がより少なく、収率がよ
り多く、光学的純度かより高いものを提供する方法であ
る。

発明の構成と効果 本発明に従って、式 ％式％ ［１］ ［式中、Ｒ５およびＲ２は互いに独立してアルキル、シ
クロアルキル、アラルキルもしくはアリール、およびｎ
はＩまたは２であるコで示されるＳ−エナンチオマーを
製造する新規な方法を以下に詳述する。該方法は、化合
物［Ｉ］のラセミ混合物を、溶媒中、チオエステル鎖を
非対称的に加水分解する能力がある酵素または微生物で
処理することからなる。

本発明において使用する語句の定義は、以下の通りであ
る。

「アルキル」とは、炭素数１〜２０、好ましくは１〜６
の直鎖もしくは分技蹟基を相称する。

「シクロアルキル」とは、炭素数５〜７の飽和環式基を
相称する。

「アリール」とは、フェニル、ナフチル、および芳香環
上の置換基としてニトロ、ハロゲン、メチル、またはア
ルコキシ基を含有する置換フェニルもしくはナフチルな
どの環部分が炭素数６〜１０のモノまたはジ環式芳香族
基を相称する。

本発明の酵素分解方法は、式［ビ］の所望Ｓエナンチオ
マーを光学的純度９５％以上および収率２０％以上で提
供できるという利点をもつ。

さらに本発明方法は、先行技術の酵素分解方法において
用いられたカルボン酸エステルの代わりに、式［１コの
ラセミカルホン酸を出発物質として用いるので、費用が
より少ない。これらその他の特徴により、式 ％式％ ［］ ［式中、Ｒ，は前記に同じ１ のＳ−エナンチオマーなどの、カプトグリルの製造に有
用な光学活性化合物［１’ｌの製造において、本発明方
法は非常に（重用しやすいものである。

上述のように、先行技術の酵素利用方法は、たとえば前
記［ＩＶ］中の一〇−０Ｒ３部分を加水分解して一〇−
○Ｈとするなどのカルボキシエステルの加水分解によっ
て機能するものである。

本発明方法においては、ラセミ化合物［１］が出発物質
である。この物質はカルボキシエステルを含まないので
、選択して使用する酵素または微生物は、ラセミ化合物
［Ｉ］の一つのエナンチオマーのチオエステル結合の加
水分解に際して触媒として作用し、高い光学的純度の化
合物［ｒ″］の分解形状を得る。

式： ％式％ ［１］ ［式中、Ｒ１およびＲ３は前記に同じ］のラセミ出発物
質を得る方法は公知である。

たとえば、式： ％式％ ［ Ｕ式中、Ｒ１は前記に同じコ の化合物を式； ％式％ ［ ［式中、Ｒ２は前記に同じ］ の化合物と、へ牛サン、ヘプタン、またはインプロパツ
ールなどの適当な溶媒の存在あるいは非存在下、このよ
うな付加反応を行う通常の条件のもとに結合させること
かできる。

本発明方法は水性溶媒または有機溶媒あるいはそれらの
混合溶媒中で行える。本発明方法に適した主な溶媒とし
ては、１．．１．２−トリクロロ−１゜１２−トリフル
オロエタン、トルエン、シクロへ牛サン、ベンゼン、脱
イオン水、適当な水性緩衝溶液、およびこれらの水性お
よび有機溶媒の混合物が挙げられるが、これらに限定さ
れるものではない。

本発明方法に用いる酵素または微生物は、一般式［＋］
のチオエステルを非対称的に加水分解する能力をもつも
のならば何でもよい。本発明方法に適した酵素としては
、起源や純度にかかわらず種々の酵素、たとえばエステ
ラーゼ、リパーゼ１、プロテアーゼなとか挙げられる。

酵素は、動物酵素および植物酵素の混合物、微生物の細
胞、破砕細胞あるいは細胞抽出液の形状で使用できる。

加水分解酵素源として適当な主な微生物は、ムコール（
Ｍ　ｕ　ｃ　ｏ　ｒ　）、エシェリヒア（Ｅｓｃｈｅｒ
ｉｃｈｉａ）、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏ
ｃｏｃｃｕｓ）、アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃ
ｔｅｒｉｕｍ）、リゾプス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）、アス
ペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、ノカルジア（
Ｎ。

ｃａｒｄｉａ）、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍ
ｙｃｅｓ）、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）
、カンシタ（Ｃａｎｄ　１ｄａ）、ロドトルラ（Ｒｈｏ
ｄｏｔｏｒｕｌａ）、トルロプシス（Ｔｏｒｕｌ。

ｐｓｉｓ）、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、アルカリ
ゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）、シュードモナス（
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、プレベバクテリウム（Ｂｒ
ｅｖｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、エンテロバクタ−（Ｅｎ
ｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、クロモバクテリウム（Ｃｈｒ
ｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、アースロバフタ−（Ａｒ
ｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）、ミクロバクテリウム（Ｍｉｃ
ｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ミコバクテリウム（Ｍｙｃ
ｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、サツカロミセス（Ｓａｃｃａ
ｒｏｍｙｃｅｓ）、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉ
ｕｍ）、ボツリチス（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）、カエトミウ
ム（Ｃｈａｅｔｏｍ　ｉｕｍ）、オフィオボルス（Ｏｐ
ｈｉｏｂｏｌｕｓ）、クラドスポリウム（Ｃｌａｄｏｓ
ｐｏｒｉｕｍ）およびその伸開種類のものである。

本発明に使用するのに適した商業上入手しうる酵素とし
ては、Ａｍａｎｏ　　ＡＹ−３０［カンシタ・シリンド
ラセア（Ｃａｎｄｉｄａ　ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ）　
］、Ａｍａｎｏ　　Ｐ　　［ンユードモナス・フルオレ
センス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅ
ｎｓ）　］　、Ａｍ　ａ　ｎ　。

Ｎ［リゾプス・ニベウス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ　ｎ１ｖｅ
ｕｓ）コ、Ａｍａｎｏ　　Ｒ（ペニシリウム属）、Ａｍ
ａｎ。

ＦＡＰ　［リゾプス・オリザエ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ　ｏ
ｒｙｚａｅ）］、Ａｍａｎｏ　　ＡＰ−１２［アスペル
ギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ
）］　、Ａｍ　ａ　ｎ　ｏ　ＭＡ１］　［ムコール・メ
イヘイ（Ｍｕｃｏｒ　ｍｅｉｈｅｉ）］　、Ａｍａｎｏ
ＧＣ−４［ゲオトリクム・カンジダム（Ｇｅｏｔｒｉｃ
ｈｕｍ　ｃａｎｄｉｄｕｍ）　］　、Ｓ　ｉ　ｇｍａ　
　Ｌ−０３８２（豚膵臓）、Ｓｉｇｍａ　　Ｌ−３００
１（小麦胚芽）、Ｓｉｇｍａ　　Ｌ−１７５４（カンジ
ダ・シリンドラセア）、Ｓｉｇｍａ　　Ｌ−０７６３［
クロモバクテリウム・ビスコスム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃ
ｔｅｒｉｕｍ　ｖｉｓｃｏｓｕｍ）　］およびＡｍａｎ
ｏ　　Ｋ−３０（アスペルギルス・ニガー）などのリパ
ーゼが挙げられる。さらに、動物組織から取り出す酵素
としては、豚肝臓エステラーゼ、α−キモトリプシンお
よび膵臓バンクレアチンが挙げられる。

本発明方法に使用するのに適した特別な微生物としては
、ンユードモナス・フルオレセンス、シュードモナス・
ブチタ　（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｐｕｔｉｄａ）　
、シュードモナス０オハリス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
　ｏｖａｌｉｓ）、エシェリヒア・コリ　（Ｅｓｃｈｅ
ｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ）　、スタフィロコッカス・ア
ウレウス（Ｓｔｅｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕ
ｓ）　、アルカリケ不ス・ファエカリス（Ａｌｃａｌｉ
ｇｅｎｅｓ　ｆａｅｃａｌｉｓ）　、ストレプトミセス
・グリセウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｇｒｉｓｅ
ｕｓ）　、ストレプトミセス・クラブリゲルス（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｃｌａｖｕｌｉｇｅｒｕＳ）　、
ノカルシア・エルスロポリス（Ｎｏｃａｒｄｉａ　ｅｒ
ｔｂｒｏｐｏｌｉｓ）　、／カルンア・アステライデス
（Ｎｏｃａｒｄｉａ　ａｓｔｅｒａｉｄｅｓ）　、ミコ
バクテリウム・フレイ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　
ｐｈｌｅｉ）　、アグロバクテリウム・う／オバクター
（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｒａｄｉｏｂａｃｔｅ
ｒ）、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕ
ｓ　ｎｉｇｅｒ）、リゾプス・オリザエおよびその曲回
種類のものか挙げられる。

酵素とラセミ出発物質を所望の溶媒に加えて、本発明方
法を実行する。通常、酵素は適当な担体、たとえば珪藻
上（多孔性ライト・ハイフロ・スーパーセル）またはそ
の曲回種類のものに成行させておく。この操作は、酵素
を有機溶媒中で用いるときに酵素粒子の大きさをコント
ロールし、酵素粒子か集合するのを防止する効果、すな
わち酵素を固定する目的で行われる。これは、たとえば
酵素の水溶液にセライト・ハイフロ・スーパーセルの存
在下、冷アセトンを加えて沈澱させ、次いて貞空乾燥す
ると完成する。反応溶液には、通常溶媒１匁Ｑあたり約
５〜２００ｚｙのラセミ出発物質か劇まれるか、約１５
〜．５０　ｗｑ／７？（ｌか好ましい。反し６溶液に加
えた酵素は、溶媒ＩＴ１（！あたり約５〜４０７ｇの、
・Ｉ、′！！度てｉ’ｊ’：在してよい。酵素の使用量
は少ｔいはとよいか、必要な酵素の量は使用する酵素に
特イｆな活性によって変化する。

反応を有機溶媒中で行うとき、少量の水を反応混合物中
に加えてもよい。反応／ＩＰ６物中に加える水は、溶媒
、または水で飽和した溶媒１ａ０あたり０２〜１００ｚ
ｙの濃度範囲、好ましくは０．８〜５　ｍ９／　ｍρて
び在してよい。反応溶媒として水性緩衝液または脱イオ
ン水を用いるとき、反応溶液のｐｌ−１を適当な物質を
添加することにより、約３〜１０、好ましくは約５〜８
に維持するのがよい。

反応溶液を４〜６０°Ｃ１好ましくは３０°Ｃにてイン
キュへ−１・する。反応時間は使用する酵素の量および
それに特有な活性により適当に変化してよい。９０％以
上の光学的純度をうるために反応時間は、少なくとも約
５時間必要であり、より多くの転化とより高い光学的純
度、たとえば９５％以上を得るためには５０時間まで延
長することかできる。光学的活性な［Ｉ゛］は、抽出、
蒸留、結晶化、カラムクロマトグラフィーおよびその池
の公知の方法で反応混合物から単離し精製することかで
きる。

先行技術から明らかなように、本発明方法は、一般式［
＋］のチオエステルを非対称的に加水分解する能力をも
つ酵素を含有する微生物細胞を用いても行うことかでき
る。微生物を用いて分解を進めるとき、本発明方法では
、細胞とラセミ出発物質を所望の溶媒に加えることによ
り簡便に行うことかできる。ｌ−１旧泡は完全な細胞、
凍結乾燥、噴霧乾燥または加熱乾燥などをした乾燥細胞
、固定細胞あるいはアセトンやトルエンなどの有機溶媒
で処理したＴ■胞を用いてよい。破裂細胞または細胞抽
出物なとの処理されたＩＩＩ胞材料の形状の細胞も用い
てよい。

次の実帷例でも本発明方法を説明するか、不発明方、す
；はこれらに限定されるものではない。

実海例１ １．１．２−トリクロロ−１，１，２−トリフルオｏｘ
タノ（ＣＦＣ−１］　３）２５’７ｒ２中の３−アセチ
ルチオ−２−メチルプロパン酸（４，０５ｕｙ）のラセ
ミ溶液に、ンユートモナス・フルオレセンスからのリバ
ーセ（ＡｍａｎｏリパーゼＰ−３０）１．ＯＬｉおよび
脱イオン水９０ｍｑを加える。反応混合物を旋回回転式
振とう代にて３０°Ｃ１２８Ｏｒｐｍで振とうする。転
化の度合いは、反応混合物の１１碩１りをクロマトグラ
フィーに付して知ることかできる。

１６時間後、最明にＵ在したラセミ物質の８４％か転化
する。残りの反応しない基質であるエナンチオマー組成
物（収率１６％）は、３−アセチルチオ−２−メチルプ
ロパン酸のＳ−エナンチオマー９７．８％およびＲ−エ
ナンチオマー２２％からなる（エナンチオマー過剰９５
６％）。この実施例および以下の実施例において、３−
アセチルチオ−２−メチルプロパン酸の反応しない部分
であるエナンチオマー組成物は、キャピラリーガスクロ
マトグラフィーに付し、次いで塩化チオニルの誘導体と
し、さらに得られる酸クロリドを（Ｓ）　＝（−１−）
　−２−オクタツールでエステル化してキャピラリーカ
スクロマトグラフィーにより分ｊ雅できる／アステレオ
マーエステルの形状にするこ七により定■迂できる。

実施例２ ンユードモナス・フルオレセンスからのリパーゼ（Ａｍ
ａｎｏリパーゼｐ−３０）ｌｏ、ｏｙを脱イオン水ｓｏ
ｚｇに加え、混合物を１０００ｘＧで１０分間遠心分離
する。上澄み１ｆｆ１４０２＆を脱イオン水で２００　
、ＷＣに希釈し、次いでこの酵素溶液にセライト・ハイ
フロ・スーパーセル（マンビル・コーポレイション製の
珪藻土）４０ｇを加える。

混合物を２８°Ｃで３時間インキュベートする。次いで
、混合物に水冷アセトン３００ｍＲを撹拌しなからゆっ
くりと加え、酵素をハイフロ・スーパーセル上に沈澱さ
せる。混合物を焼結ガラス真空フィルター」―て濾過し
、濾過ケーキを水冷アセトン３００ｍ０．で洗浄する。

生成物を５０°Ｃで１８時間真空乾燥して水分含１ｊ１
０．４５重量％（カール・フィノ／ヤー水分定呈法によ
る）の酵素固定調製物を得る。

上記酵素固定１週製物２９を１．］、］２−トリクロロ
ー１．１．２−トリフルオロエタンＣＦ　Ｃ−１１３）
２５．ｓ（中の３−アセチルチオ−２−メチルフロパン
酸（４０５−＋ｙ）のラセミ溶液にυ目える。混合物に
脱イオン水６０ｍ９を加え、反応混合物を旋回回転式系
とう機にて３０°Ｃ２２８Ｏｒｐｍで振とうする。転化
の度合いは、反応混合物の濾液を高速液体クロマトグラ
フィー（Ｈｉ）ＬＣ）に付して知ることかできる。１２
時間後、最初に存在したラセミ基質の８４％が転化する
。残りの反応しない基質であるエナンチオマー９７署物
（収率２２％）は、３〜アセチルチオ−２−メチルプロ
パン酸のＳ−エナンチオマー９７署％およびＲ−エナン
チオマー２．９％（エナンチオマー過剰９４２％）から
なることが、キャピラリーガスクロマトグラフィーおよ
び誘導化に付して定量できる。

実施例３ 実施例２の酵素固定調製物２９をトルエン２５、Ｔｏ、
中の３−アセチルチオ−２−メチルプロパン酸（４０５
ｚｙ）のラセミ溶液に加える。混合物に脱イオン水６０
ｚｙを加え、反応混合物を旋回回転式系とう代にて２８
°Ｃ，２８Ｏｒｐｍで振とうする。２８時間後、最初に
存在したラセミ基質の７９％か転化する（トＩ　Ｐ　Ｌ
　Ｃ分析）。残りの反応しない基質であるエナンチオマ
ー組成物（収率２Ｉ％）は、３−アセチルチオ−２−メ
チルプロパン酸の８エナンチオマー９７．５％およびＲ
〜エナンチオマー２．５％（エナンチオマー過剰９５％
）からなる。

実施例４ ラセミ３−アセチルチオ−２−メチルプロパン酸４０５
乃を脱イオン水１５ｍ夕に溶解し、ＩＮ水酸化ナトリウ
ムでＴ）　Ｈ５に調整し、次いで溶液を脱イオン水２５
＋？Ｃで希釈する。この溶液を磁気撹拌下一定ｐ＋（の
容器に４０°Ｃにて、０．５Ｎ水酸化ナトリウムを加え
てｐ　Ｈ５に維持しながら入れる。この溶液に／ニード
モナス・フルオレセンスからのリパーゼ（Ａｍａｎｏリ
パーセＩ”−３０）１０ｇを加え、次いてｌｌ１Ｅ化度
をＨＰ　Ｌ　Ｃで測定する。

・１０時間後、最初に存在したラセミ基質の７６％か転
化する。残りの反応しない基質であるエナンチオマー組
成物（収率２４％）は、３−アセチルチオ−２−メチル
プロパン酸のＳ−エナンチオマー８５７％およびＲ−エ
ナンチオマ−１４３％（エナンチオマー過剰７１．４％
）からなることか、キャピラリーカスクロマトグラフィ
ーおよび誘導化に付して定量できる。

実施例５ １．１．２−　　トリクロロ−１，１２−１リフルオロ
エタン（ＣＦＣＩ　１３）２５ｆｆ＆中の３−アセチル
ナオー２−メチルプロパン酸（４０５ａＬｊ）のラセミ
溶液に、リゾプス・オリザエ（ＡＴＣＣ２４５６３）の
乾燥ミセリア１．０５９および脱イオン水７５１９を加
える。混合物に脱イオン水６０ｍｇを加え、反応混合物
を旋回回転式振とう機にて２８°Ｃ１２８Ｏｒｐｍで振
とうする。６９時間後、最初に存在したラセミ基質の７
３％か転化する（ＨＰ　Ｌ　Ｃ分析）。残りの反応しな
い基質であるエナンチオマー組成物（収率２７％）は、
３−アセチルチ第２−メチルプロパン酸のＳ−エナンチ
オマー９５９％およびＲ−エナンチオマー４１％（エナ
ンチオマー過剰９１．８％）からなる。

特許出願人　イー・アール・スクイブ・アンド・サンズ
・インコーボレイテノド

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒ＿１およびＲ＿２は互いに独立してアルキル
   、シクロアルキル、アラルキルおよびアリールから選ば
   れ、およびｎは１または２である］ で示される化合物のラセミ混合物を、溶媒の存在下、式
   中のチオエステルを非対称的に加水分解する能力をもつ
   酵素あるいは該酵素を含有する微生物で処理することか
   らなる該化合物の特定のエナンチオマーの選択的製造方
   法。 ２、酵素が、リパーゼ、エステラーゼ、α−キモトリプ
   シおよびパンクレアチンから選ばれる前記請求項１に記
   載の方法。 ３、微生物が、シュードモナス・フルオレセンス、シュ
   ードモナス・プチダ、シュードモナス・オバリス、エシ
   ェリヒア・コリ、スタフィロコッカス・アウレウス、ア
   ルカリゲネス・ファエカリス、ストレプトミセス・グリ
   セウス、ストレプトミセス・クラブリゲルス、ノカルジ
   ア・エルスロポリス、ノカルジア・アステライデス、ミ
   コバクテリウム・フレイ、アグロバクテリウム・ラジオ
   バクター、アスペルギルス・ニガー、リゾプス・オリザ
   エおよびその他同種類のものから選ばれる前記請求項１
   に記載の方法。 ４、溶媒が、水性溶媒または有機溶媒あるいはそれらの
   混合物から選ばれる前記請求項１に記載の方法。 ５、式： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒ＿１、Ｒ＿２およびｎは後記に同じ］の化合
   物を、溶媒の存在下、式中のチオエステルを非対称的に
   加水分解する能力をもつ酵素あるいは該酵素を含有する
   微生物で処理することからなる式： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒ＿１およびＲ＿２は互いに独立してアルキル
   、シクロアルキル、アラルキルおよびアリールから選ば
   れ、およびｎは１または２である］ で示されるＳ−エナンチオマーの製造方法。 ６、酵素が、リパーゼ、エステラーゼ、α−キモトリプ
   シおよびパンクレアチンから選ばれる前記請求項５に記
   載の方法。 ７、微生物が、シュードモナス・フルオレセンス、シュ
   ードモナス・プチダ、シュードモナス・オバリス、エシ
   ェリヒア・コリ、スタフィロコッカス・アウレウス、ア
   ルカリゲネス・ファエカリス、ストレプトミセス・グリ
   セウス、ストレプトミセス・クラブリゲルス、ノカルジ
   ア・エルスロポリス、ノカルジア・アステライデス、ミ
   コバクテリウム・フレイ、アグロバクテリウム・ラジオ
   バクター、アスペルギルス・ニガー、リゾプス・オリザ
   エおよびその他同種類のものから選ばれる前記請求項５
   に記載の方法。 ８、溶媒が、水性溶媒または有機溶媒あるいはそれらの
   混合物から選ばれる前記請求項５に記載の方法。