JPH0261481B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、メギ科イカリソウ属
（Epimediumsp.）植物の全草から得られる多糖
体（PS―Ａと命名）に関する。 イカリソウ属と称される植物としては、イカリ
ソウ（Epimedium macranthum，M.et.D.var.
violaceum，Fr.）、ホザキノイカリソウ
（Epimedium sagittatum，Bak.）、シロバナイカ
リソウ（Epimedium macranthum，M.et.D.）、
キバナイカリソウ（Epimedium Koreanum，
Nak.）等が知られている。これらのイカリソウ
属植物は、日本、中国、朝鮮等に自生する多年草
であり、その茎葉根は漢方では淫羊〓と命名さ
れ、全草を煎じて強壮、強精の目的に用いられて
いる。なお、これらのイカリソウ属植物は、種の
違いによつてもその効果には大差なく、生薬とし
て市販されているものは、これらの単独種または
混合物種をイカリソウと称している。このイカリ
ソウの成分研究は古くから行われており、例えば
赤井等〔薬学雑誌55 537，705，719，788，
1139，（1935）〕、富田等〔薬学雑誌77 114，212，
（1957）〕などの報告があり、地上部からイカリイ
ン、地下部からデス―Ｏ―メチルイカリイン、マ
グノフロリンなる物質が見出され、夫々化学構造
が決定されている。また薬理学的研究について
は、前田〔東京医事新誌2133，2795（1932）〕、三
宅〔岡山医学会雑誌49 44，2043（1937）〕、平嶋
等〔基礎と臨床４ 139（1970）〕などにより、そ
の抽出エキスい精液分沁促進作用、血圧降下作
用、制糖作用のあることが報告されている。しか
し、その詳細については依然不明な点が多い。 本発明者らは先に特願昭55―21152号（特開昭
56―118017号公報）、特願昭55―57424号（特開昭
56―156219号公報）、特願昭55―73873号にて、イ
カリソウ属植物より免疫増強作用を有する抽出物
を見出したが、更に研究の結果免疫増強作用を有
する多糖体PS―Ａの抽出、単離に成功し本発明
を完成した。 以下、本発明を詳細に説明する。 まず、本発明の多糖体PS―Ａの理化学的性質
は次のとおりである。 １ 元素分析：Ｃ：40.92 Ｈ：6.17 灰分：微量 ２ 分子量：75000±25000（平均分子量） ３ 物質の性状：白色〜微かつ色不定形粉末 ４ 分解点：205℃ ５ 紫外線吸収スペクトル：240〜400nmに極大
吸収は認められない。 ６ 赤外部吸収スペクトル：第１図のスペクトル
を示す。ν^KBr _nax（cm^-1）3400、2900、1620、
1400、1230、1060 ７ PH：7.0（PS―A100mgを水50mlに溶解すると
き） ８ 溶解性：(a)可溶…水 (b)不溶…メタノール、エタノール、
アセトン、酢酸エチル、ジエチル
エーテル、ヘキサン、クロロホル
ム。 ９ 比旋光度：〔α〕¹⁹ _D＝−23.6゜（H₂O中、Ｃ＝
0.527％） 10 呈色反応： 次の諸反応に陽性を示す。 (a)アンスロン硫酸反応 (b)モーリツシユ反応
(c)スカトール反応 (d)ビアル反応 次の諸反応に陰性を示す (a)ニンヒドリン反応 (b)２，４―DNP反応
(c)セリヴアノフ反応 (d)ナフトレゾルシン反
応 (e)カルバゾール硫酸反応 11 構成糖： 多糖体PS―A20mgに１規定硫酸５mlを加え、
２時間100℃で加熱、還流する。冷後、水酸化
バリウムで中和し、沈殿を濾別し、得られた濾
液をペーパークロマトグラフイーにかけるとア
ラビノースとガラクトースの存在が確認され
る。 12 均一性： (a) 超遠心 平衡密度勾配遠心（120000ｇ×72時間．
CaCl₂）で単一 (b) 電気泳動 酢酸セルロース膜（20〜25V／cm、２時
間）で単一 (c) ゲル濾過 セフアデツクスG100で単一 次に、本発明の多糖体PS―Ａの抽出、単離、
精製方法について述べる。 第１工程 イカリソウ属植物を水に混和する有機溶媒と水
との混合溶媒または水のいずれかで抽出し、得ら
れた抽出液を減圧下濃縮する。この際、水に混和
する有機溶媒としてはメタノール、エタノール、
イソプロパノール等の低級アルコール類、アセト
ン等のケトン類、ジオキサン等の水に混和するエ
ーテル類等を用いる。またこれらの混合有機溶媒
を用いてもよい。また抽出溶媒として、１規定以
下の濃度の酢酸等の低級脂肪酸類、１モル以下の
濃度のエタノールアミン等の水と混和する低級ア
ミン類、１規定以下の濃度の水酸化ナトリウム等
の水に易溶且つアルカリ性を示す水酸化物も用い
ることができる。水性抽出液を得るこの操作は、
濃縮操作のことを考えると、水に混和する有機溶
媒と水との混合溶媒を用い有機溶媒の容量が50％
以下の方が好ましい。また本発明に使用するイカ
リソウは、市販の全草をそのまま用いてもよい
が、細切を用いる方が好ましい。 第２工程 こうして得た水性抽出液を脱脂する。この操作
は省略することができるが、製剤上の面を考慮す
ると行う方が好ましい。 脱脂操作は、水性抽出液に酢酸エチル等の低級
脂肪酸エステル、クロロホルム等のハロゲン化炭
化水素類、ジエチルエーテル等の水に混和しにく
いエーテル類、ｎ―ヘキサン等の脂肪炭化水素類
等の有機溶媒の１種または２種以上の混合溶媒を
加え、激しく振盪した後、水層のみ分取する。得
られた水層は同様の操作を３〜５回行つた後、水
浴上で加温してわずかに残つている有機溶媒を除
き、濾過することにより脱脂した抽出液となる。
なお最初に脱脂操作を行つた後、水に混和する有
機溶媒と水との混合溶媒または水のいずれかで抽
出してもよい。 第３工程 この脱脂した水性抽出液に水と任意に混和する
有機溶媒を加え、沈殿を析出させる。生じた沈殿
を濾取後、水と任意に混和する有機溶媒にて洗浄
する。次いで、この沈殿を水の中に注いだ後、水
と任意に混和する有機溶媒を加え、再度沈殿を析
出させる。生じた沈殿を濾取し、減圧下乾燥させ
ると抽出物が得られる。この際、水と任意に混和
する有機溶媒としては、メタノール、エタノール
等の低級アルコール類もしくはアセトン等のケト
ン類を用いる。またこれらの混合溶媒を用いても
よい。こうして得られた抽出物は、水で再度抽出
し精製してもよい。即ち、室温下、水を加え、十
分撹拌後、濾過する。この濾液を減圧下、濃縮乾
固することにより精製できる。 第４工程 第３工程で得られた抽出物に長鎖を有する第４
級アンモニウム塩を加え、生じた複合体を除去す
る。 以下に、操作の一具体例を示す。 第３工程で得られた抽出物を50〜80倍量（Ｖ／
Ｗ）の無機塩水溶液に溶解させる。無機塩水溶液
としては0.01〜0.05モルの硫酸ナトリウム又は塩
化ナトリウム水溶液が好ましい。次に、第３工程
で得られた抽出物に対して0.5〜３倍量（Ｗ／Ｗ）
のセチルトリメチルアンモニウム塩、セチルピリ
ジニウム塩等の長鎖を有する第４級アンモニウム
塩を加え、生じた沈殿を濾過又は、遠心分離で除
去する。濾液を分取し、３倍量（Ｖ／Ｖ）以上の
水と任意に混和する有機溶媒を加え、生じた沈殿
を濾取する。 第５工程 第４工程で得られた沈殿に対して300〜400倍量
（Ｖ／Ｗ）の水を加え、35〜45℃加温下、十分に
撹拌し溶解させる。この溶液を限外濾過し、濾過
膜を通過する物質を除去する。膜上に捕捉された
濃縮液に５〜10倍量（Ｖ／Ｖ）の水を加え、十分
に撹拌、希釈し再び限外濾過する。数回、この操
作を行い膜を通過する物質を完全に除去する。膜
上に捕捉された濃縮液を分取し、２〜５倍量
（Ｖ／Ｖ）の水を加え、希釈し、４倍量（Ｖ／Ｖ）
以上の水と任意に混和する。有機溶媒を加え、沈
殿として抽出物Ａが得られる。この抽出物Ａそれ
自体も免疫増強作用を有する。 第６工程 抽出物Ａを水に溶解後、ゲル濾過等の分子ふる
い効果を有する担体を用いたクロマトグラフイー
に付し、添付図面第３図のFr―１に該当する画
分を分取することにより、本発明多糖体PS―Ａ
が得られる。 前記多糖体PS―Ａの有用性を確認するため、
以下に示す試験を行つた。 (1) マクロフアージ機能試験 網内系機能試験 ７週令のICR／JCL系雄マウス（体重30±
２ｇ）に、試料を連日５日間腹腔内投与し
た。 網内系の食作用活性に対する影響をみるた
め、試料の最終投与24時間後に、試料投与群
及び試料非投与群の各マウスの尾静脈より、
コロイド性炭素〔Pelikan Drawing
Ink17Black、ギユンタ・バーグナー
（Gu¨nther Wagner）社、西独〕を注入し、
血中からのクリアランスを調べた。即ち、コ
ロイド性炭素を３％―ゼラチン生理食塩水で
２倍希釈した液を、10ml／Kg体重となるよう
尾静脈から注入し、眼窩穿刺法により、ヘパ
リン処理したマイクロピペツトで血液0.010
mlを採取し、直ちに0.1％Na₂CO₃2mlに移入
して溶血させ、日立ダブルビーム124型（日
立製作所製）を用い650nmにおける吸光度を
測定した。食作用係数はコロイド性炭素希釈
液を静脈内注射して、２分後（t₁）及び20分
後（t₂）に採血し、その炭素濃度（２分後
C₁、20分後C₂）を下式に挿入して算出した。 結果を第１表に示す。 食作用係数：K²⁰ ₂＝（logC₁）−（logC₂）／t₂−t₁ 血中半減期：Ｔ1/2＝0.301／K²⁰／₂

【表】

【表】 本発明多糖体を投与すると食作用係数は
2.1倍も増加し、血中半減期は1/2に短縮され
た。即ち、網内系のコロイド性炭素取り込み
能が増強していることが判明した。 黄色ブドウ球菌に対する貧食能試験 ７〜８週令のICR／JCL系雌マウス（体重
27±２ｇ１群５匹）を実験に供した。 本発明多糖体を１日１回５日間連日背部皮
下注射した。 翌日（６日目）に各群の各マウスの腹腔内
をRPMI―1640培地〔G.E.ムーア（Moore）
著ザ・ジヤーナル・オブ・ザ・アメリカン．
メデイカル・アソシエーシヨン（The J.of
the American Medical Association）第
199巻、519〜524頁（1967年）記載〕（日水製
薬社製）で洗い、腹腔細胞を採取し、各群ご
とにプールした。RPMI―1640培地で１回遠
心洗浄（1000rpm5分）した後、10％EBS・
RPMI―1640培地（非動化した胎牛血清を10
％RPMI―1640培地に添加して調製された培
地）に懸濁し、チユルク液を用いた核数計測
により１×10⁶個／mlの腹腔細胞液に調製し
た。調整液２mlをカバーグラス４枚を貼りつ
けたTD―15瓶に入れ、37℃、５％CO₂イン
キユベーターで60分間培養し、その後黄色ブ
ドウ球菌（209P株）４×10⁸個／ml懸濁液を
0.1ml加えて更に20分間培養し、食菌させた。
培養後ハンクス液〔J.H.ハンクス（Hanks）、
R.E.ワレス（Wallace）共著プロシーデイン
グス・オブ・ザ・ソサイテイ・フオア・エク
スペリメンタル・バイオロジイ・アンド・メ
デイシン（Proceeding′s of the Society
for Experimental Biology and Medicine）
第71巻、196頁（1949年）記載〕（日水製薬社
製）で３回洗浄し、マクロフアージの付着し
たカバーグラスをメタノール固定し、ギムザ
染色により食菌計測用標本を作成した。油浸
鏡検（1000〜2000倍）で各々のカバーグラス
のマクロフアージ200個を数え、食菌率を算
出した。 食菌率＝貧食細胞数／200（マクロフアージ）×100％ 活性化指数＝
本発明多糖体投与群の食菌率／対照群の食菌率 上記式による算出結果を第２表に示す。

【表】 (注) 食菌率は平均値±標準偏差値を示す。
本発明多糖体投与により、食菌率が向上し
た。 即ち、本発明多糖体により、マクロフアー
ジ貧食能が増強することが判明した。 走化能（Chemotaxisis）試験 ７週令のICR／JCL系雌マウス（体重27±
２ｇ）を実験に供した。 本発明多糖体を１日１回５日間連日皮下注
射した。１群は５匹とした。対照群には
PBSを投与した。 ６日目に腹腔細胞を取り出し、10％
FBS・RPMI―1640培地にて２×10⁶個／ml
に調製した。走化能をボイデンチエンバー法
〔ジヤーナル・オブ・エクスペリメンタル・
メデイシン（Journal of experimental
medicine）115 453（1962）記載〕にて測定
した。 即ち、10％の正常ヒト血清を添加した
RPMI―1640培地0.2mlを上室に、調製した
腹腔細胞懸濁液0.2mlを下室に入れ、５％
CO₂インキユベーターで37℃、90分間インキ
ユベートした。 フイルターをとり出し、メタノール固定、
ギムザ染色した後400倍で検鏡計数した。５
視野の合計細胞数を測定し平均値を求めた。
結果を第３表に示す。

【表】 対照群の走化細胞数
2.走化細胞数は、平均値±標準偏差
値を示す。
本発明多糖体投与により、走化する細胞数
が増加した。 即ち、本発明多糖体は、マクロフアージの
走化能を増強させる効果を示した。 (2) 細胞性免疫試験 細胞障害（Cytotoxity）試験 (i) BC―47細胞 ○イ ８週令のBALB／ｃ系雌マウス（体
重22±２ｇ）を実験に供した。 本発明多糖体0.04mg／Kg体重を１日１
回３日間連日背部皮下注射とし、１群５
匹とした。本発明多糖体投与開始日に、
あらかじめ準備したBC―47細胞（ACI
系ラツト膀胱癌由来、試験管内継代培養
株）を１×10⁷個／マウスの割合で腹腔
内に免疫し、免疫12日後に本発明多糖体
投与群、対照群及び正常マウス群も加え
各マウスの腹腔内をRPMI―1640培地で
洗い腹腔細胞を採取した。各群ごとにプ
ールし、RPMI―1640培地で２回、20％
FBS・RPMI―1640培地で１回遠心洗浄
した後、同培地に懸濁した。トリパンブ
ルーを用いた細胞計測により各群共腹腔
細胞として1.6×10⁵個／ml、3.2×10⁵
個／ml、6.4×10⁵個／mlに調整した。 ○ロ 試験管内で培養したBC―47細胞を20
％FBS・RPMI―1640培地に懸濁し生細
胞として８×10⁴個／mlに調整した。 ○ハ 細胞培養用平底型マイクロ・プレート
（Ｎ―1480型、96穴（ウエル）、NUNC
社製）に１穴あたり腹腔細胞液0.1ml
（細胞数1.6×10⁴個、3.2×10⁴個、6.4×
10⁴個）と試験管内培養BC―47細胞液
0.1ml（細胞数８×10⁸個）を混合培養し
て37℃、５％CO₂インキユベーター中で
24時間培養後、各穴に0.1マイクロキユ
ーリー（μCi）の ³H化ミジンを加えて
更に24時間同条件で培養した。 ○ニ 培養終了後、各穴をPBSで洗浄し、
次いで穴底面に付着発育しているBC―
47細胞をトリプシン処理した後、セルハ
ーベスター（ミニ・マツシユ型、ダイナ
テツク社製）により各々濾紙上に捕集
し、各穴のBC―47細胞内に取り込まれ
た ³H量（毎分の崩壊数：dpm）を液体
シンチレート・カウンター（LSC―673
型、アロカ社製）を用いて測定した。 増殖阻止率を

【表】 で算出した。 また、活性化指数を 〔免疫＋試料投与マウスの増殖阻止率（Ｍ／―）／免疫
マウス（試料非投与）の増殖阻止率（Ｍ）〕 で算出した。結果を第４表に示す。

【表】

【表】 数値は平均値±標準偏差値を示す。
(ii) P815細胞 (i)と同様なる方法でP815細胞（DBA系
マウス・マストサイトーマ由来DBA腹腔
内継代培養株）を５×10⁶個／マウスの割
合で腹腔内に免疫し、免疫７日後に、脾臓
細胞をとり出し2.5×10⁶個／ml、5.0×10⁶
個／mlに調製した。P815生細胞は2.0×10⁵
個／mlに調製した。 ³H取込量を液体シン
チレーシヨン・カウンターで測定した。
³H取込量、増殖阻止率、活性化指数を第
５表に示す。なお、本発明多糖体は0.2
mg／Kg体重を１日１回３日間連日背部皮下
投与した。

【表】 本発明多糖体は、マウスエフエクター細
胞(i)BC―47細胞、(ii)P815細胞の増殖を阻
止する効果を増強した。即ち、細胞性免疫
が増強することが判明した。 幼若化（Blast化）試験 (i) 正常マウスの免疫機能増強試験 ○イ ８週令のICR／JCL系雌マウス（体重
28±２ｇ）を実験に供した。 本発明多糖体をマウスの背部皮下注射
とし、１群５匹とした。１日１回５日間
連日投与後、６日目に腸間リンパ節を
RPMI―1640培地中でほぐし、しばらく
静置後、上清部を採取し、1200rpmで５
分間遠心分離した。沈渣を分取後、20％
FBS・RPMI―1640培地に懸濁した。ト
リパンブルーを用いた細胞計測により生
細胞として２×10⁶個／mlに調整した。
対照群にはPBSを背部皮下注射した。 ○ロ 細胞培養平底型マイクロ・プレートに
１穴当り、細胞懸濁液0.1mlと試料液10μ
を加え、37℃、５％CO₂インキユベー
ター中で24時間培養後、各穴に0.1μCiの
³H化チミジンを加えて更に24時間同条
件で培養した。 ○ハ 培養終了後、各穴をPBSで洗浄し、
次いで穴底面に付着している細胞をセル
ハーベスターにより各々濾紙上に捕集
し、各穴の細胞内に取り込まれた ³H量
（dpm）を液体シンチレーシヨンカウン
ターを用いて測定した。結果を第６表に
示す。

【表】

【表】 (ii) 免疫低下マウスの免疫機能増強試験 ○イ ８週令のICR／JCL系雌マウス（体重
28±２ｇ）を実験に供し、１群３匹とし
た。サイクロホスフアミド31.3mgをマウ
スに腹腔内注射した。同日より本発明多
糖体を４日間連日背部皮下注射した。５
日目に腸間リンパ節をRPMI―1640培地
中でほぐし、しばらく静置後、上清部を
採取し、12000rpmで５分間遠心分離し
た。沈渣を分取後、20％FBS・RPMI―
1640培地に懸濁した。トリパンブルーを
用いた細胞計測により生細胞として２×
10⁶個／mlに調製した。対照群にはPBS
を背部皮下注射した。以降(i)正常マウス
の免疫機能増強試験(ロ)(ハ)と全く同様なる
方法にて ³H量（dpm）を測定した。結
果を第７表に示す。

【表】 与した群。
即ち、免疫能を低下させなか
つた群。
本発明抽出物投与により(i)正常マウス
では ³H取込量が増加すること、(ii)免疫
低下マウスでは ³H取込量が正常マウス
群と同等またはそれ以上の ³H取込量ま
で回復することが判明した。 即ち、本発明抽出物投与により、リン
パ球幼若化物質（mitogen）による細胞
の幼若化が促進され、細胞性免疫が増強
することが判明した。 PNP（プリンヌクレオシドホスホリラー
ゼ）試験 ○イ ７週令のICR／JCL系雌マウス（体重
26±２ｇ）を実験に供した。本発明多糖
体を５日間連日マウス背部皮下注射と
し、１群４匹とした。翌日（６日目）に
脾臓を摘出し、RPMI―1640培地で十分
にほぐした。しばらく静置後、上清部を
採取し、1200rpmで５分間遠心分離し
た。沈渣を分取し、RPMI―1640培地に
懸濁させた後、赤血球除去用トリス緩衝
液〔免疫実験操作法A450ページ（日本
免疫学会編）1976年記載〕を加え、遠心
分離し赤血球を除去した。この操作を２
〜３回行ない赤血球を完全に除去した
後、RPMI―1640培地に懸濁させ、チユ
ルク液を用いた核数計測にて一定数の細
胞数を分取した。この一定数の細胞懸濁
液を再度遠心分離し、生じた沈渣を分取
し、PBSを加えて１×10⁷個／mlの細胞
懸濁液に調製した。この調製した細胞懸
濁液と超音波破壊器〔ソニフアイヤーモ
デル200、ブランソンソニツク社製（米
国）〕にかけ、20KHで30分間破壊し、
粗酵素液とした。対照群には、PBSを
背部皮下注射した。 ○ロ イノシン溶液（２mg／ml）0.1ml、キ
サンチンオキシダーゼ（10mg／ml）10μ
、○イで調製した粗酵素液0.5mlおよび
PBS2.5mlを混合し、25℃、30分間イン
キユベートした。その後、293nmの吸光
度を測定した。 ○ハ イノシン溶液のかわりにPBSを用い、
○ロと同様の測定をした。 ○ニ 本発明抽出物投与群、対照群のΔOD
（○ロの吸光度−○ハの吸光度）を求め、次
式によりPNP活性、活性化指数を求め
た。 PNP活性＝反応液量（ml）×ΔOD×10⁴／12×時間（分）
×粗酵素液量（ml）×細胞数（10^-6／ml） 〔単位（Ｕ）／１×10⁷細胞／分〕 活性化指数＝本発明抽出物投与群のPNP活性値／対照群
のPNP活性値 本試験は、次のように表わすことがで
きる。 イノシンPNP ―――→ ヒポキサンチンキサンチンオキシダーゼ ――――――――――――→ キサンチン キサンチンオキシターゼ ――――――――――――→ 尿酸 即ち、イノシンのどのくらいが尿酸ま
で、PNPにより分解されたかを産生さ
れた尿酸を定量することにより求めたも
のである。結果を第８表に示す。

【表】 本発明多糖体投与により、PNP活性
が上昇することが判明した。 即ち、本発明多糖体は、マウス脾リン
パ球の酵素活性を賦活し、免疫能を増強
させる効果を示した。 (3) 急性毒性試験 リツチフイールド―ウイルコクソン法〔J.
Pharm.exp.Ther.96 99（1949）記載〕で行つ
たところICR／JCL系雄マウスを用いた後記実
施例３で製造した多糖体PS―Ａ、実施例２で
製造した抽出物ＡのLD₅₀（mg／Kg）はともに静
脈経路で400以上であつた。 以上のことから、本発明多糖体PS―Ａは、免
疫能の低下している患者又は高齢者、例えば、癌
患者に抗癌剤と併用させる。感染症の予防と阻
止、重症の細菌感染症患者に化学療法剤と併用さ
せる、等に用いたり、あるいは肝機能が低下して
異物（例えば薬剤）の排出困難な患者に投与し
て、その機能を亢進させる等の用途が期待でき
る。 本発明多糖体PS―Ａを人体に投与するに当つ
ては経口投与、注射（皮下、筋肉、静脈）その他
の方法が用いられる。 経口投与の際、固型製剤として用いる場合は錠
剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等にすることがで
き、製剤上一般に使用される糖類、セルロース調
合物のような賦形剤、でんぷんペースト、メチル
セルロースのような結合剤、増量剤、崩壊剤等の
添加物を包含してもよい。また経口用液体製剤と
して用いる場合は、内用水剤、懸濁液剤、乳剤、
シロツプ剤などの形態であつても良く、また使用
する前に再溶解させる乾燥生成物の形態であつて
もよい。 本発明多糖体PS―Ａを成人に経口投与する場
合は１日0.1〜２mg／Kgの範囲で用いることがで
きる。この際、用量は症状、年令、剤型等により
適宜増減される。 注射の場合は、水溶液、懸濁剤、油性又は水溶
性乳剤の形態であつても良いが、通常滅菌水又は
生理食塩液など水性液体媒体に溶解又は懸濁する
ことにより調整される。必要に応じて一般に使用
される溶解剤、安定化剤、保存剤、等張化剤など
を加ても良い。 このようにして得られた注射液剤は筋肉注射、
皮下注射等適当な方法で投与される。成人に非経
口投与する場合は１日0.005mg／Kg〜0.5mg／Kgの
範囲で用いることができる。この際の用量は、症
状、年令、剤型、投与方法等により適宜増減され
る。 次に、本発明の実施例を示して更に詳細に説明
するが、本発明はこれに限定されるものではな
い。 実施例 １ 市販のイカリソウ（キバナイカリソウ、韓国
産）細切２Kgに50％エタノール（Ｖ／Ｖ）15を
加え、還流冷却器を付し、水浴上50℃で６時間加
温抽出した。抽出後、温時濾過し、残渣は新たに
50％エタノール（Ｖ／Ｖ）15ずつで同様な抽
出、濾過操作を３回行つた。全濾液を合わせ、減
圧下45℃で濃縮し、水性抽出液10を得た。この
抽出液を分液ロートに入れ、酢酸エチル５を加
えて激しく振盪し、水層のみ分取した。この水層
は新たに、酢酸エチル５ずつで同様な抽出を３
回行つた。水層を減圧下濃縮し、残存する酢酸エ
チルを留去した後、濾過した。濾液にエタノール
30を添加、撹拌後、一夜静置し、析出する沈殿
を濾取した。沈殿をエタノール200mlで洗浄した
後、水２に注ぎ、次いでエタノール８を添加
した後沈殿を濾取した。分取した沈殿を減圧下乾
燥し抽出物20ｇを得た。この抽出物を水１にて
抽出後、濾過し、濾液を減圧下濃縮乾燥し茶褐色
粉末状の抽出物16ｇを得た。 実施例 ２ 実施例１で得た抽出物16ｇに0.02モル硫酸ナト
リウム水溶液１を加え、40℃で加温撹拌後、温
時濾過した。30〜40℃加温下、この濾液に10％―
セチルトリメチルアンモニウムブロマイド水溶液
100mlを加え、一夜37℃にて保温、静置後、遠心
分離（3000r.p.m、10分間）し、上澄液１を得
た。この上澄液に３のエタノールを加え生じた
沈殿（3.0ｇ）を濾取した。この沈殿（3.0ｇ）に
水１を加え、40℃で加温、撹拌後、温時濾過し
た。この濾液は更にミリポアフイルターAP20（径
142mm、日本ミリポアリミツテツド社製）、ミリポ
アメンブランフイルターHA型（径142mm、孔径
0.45μｍ、日本ミリポアリミツテツド社製）を用
いて濾過した。この濾液をミリポアペリコン限外
濾過膜PSAC（公称分子量限外値1000、日本ミリ
ポアリミツテツド社製）を用いて限外濾過し、膜
通過部を除去した。次に、膜不通過部に水500ml
を加え、希釈後、再度限外濾過した。この操作を
３回行つた後、膜不通過部を分取した。そして、
膜不通過部を水にて250mlに希釈しエタノール１
を加えると沈殿として抽出物A2.0ｇを得た。 抽出物Ａは次の理化学的性質を示した。 １ 物質の性状：茶褐色粉末 ２ 紫外部吸収スペクトル：240〜400nmに極大
吸収は認められない。 ３ 赤外部吸収スペクトル：第２図のスペクトル
を示す。 ４ PH：7.0（抽出物A100mgを水50mlに溶解する
とき） ５ 溶解性：可溶…水 不溶…メタノール、エタノール、ア
セトン、酢酸エチル、ジエチルエーテル、
ヘキサン、クロロホルム ６ 呈色反応： 次の諸反応に陽性を示した。 (a)アンスロン硫酸反応 (b)モーリツシユ反応
(c)スカトール反応 (d)ビアル反応 次の諸反応に陰性を示した。 (a)ニンヒドリン反応 (b)２，４―DNP反応
(c)セリヴアノフ反応 (d)ナフトレゾルシン反
応 (e)カルバゾール硫酸反応 ７ 構成糖： 抽出物A20mgに１規定硫酸５mlを加え、２時
間100℃で還流した。冷後、水酸化バリウムで
中和し、沈殿を濾別し、得られた濾液をペーパ
ークロマトグラフイーにかけるとアラビノース
とガラクトースの存在が確認された。 実施例 ３ 抽出物A2.0ｇを水20mlに溶解後、セフアデツ
クスＧ―150カラム（径50mm×長さ600mm、フアル
マシアフアインケミカル社製）に付し、水10mlず
つで溶出し150の画分を得た。各々の溶出画分の
一部（２ml程度）を順次フエノール硫酸法にて発
色させ、490nmの吸光度（OD）を測定した。第
３図のFr―１に該当する画分（溶出画分番号30
〜53）を選択、集収し、減圧濃縮ついで凍結乾燥
することにより本発明多糖体PS―A600mgを得
た。その理化学的性質は前述のとおりであつた。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明PS―Ａの赤外部吸収スペクト
ル、第２図は実施例２で得た抽出物Ａの赤外部吸
収スペクトル、第３図は抽出物Ａのカラムクロマ
トグラムを示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ イカリソウ属植物に、水に混和する有機溶媒
   と水との混合溶媒または水のいずれかを加え水性
   抽出液を得、脱脂後、水性抽出液に水と任意に混
   和する有機溶媒を加え、沈殿を生成させ、この沈
   殿を水に溶解させ、長鎖を有する第４級アンモニ
   ウム塩を加え、生じた複合体を除去し得られる濾
   液からさらに低分子化合物のみ除去した後、分子
   ふるい効果を有するクロマトグラフイーに付すこ
   とにより得られる下記の理化学的性質を有する多
   糖体PS―Ａ １ 元素分析：Ｃ：40.92 Ｈ：6.17 灰分：微量 ２ 分子量：75000±25000（平均分子量） ３ 物質の性状：白色〜微かつ色不定形粉末 ４ 分解点：205℃ ５ 紫外部吸収スペクトル：240〜400nmに極大
   吸収は認められない ６ 赤外部吸収スペクトル：ν^KBr _nax（cm^-1）3400、
   2900、1620、1400、1230、1060 ７ PH：7.0（PS―A100mgを水50mlに溶解すると
   き） ８ 溶解性：可溶…水 不溶…メタノール、エタノール、ア
   セトン、酢酸エチル、ジエチルエ
   ーテル、ヘキサン、クロロホルム ９ 比旋光度：［α］¹⁹ _D＝−23.6゜（H₂O中、Ｃ＝
   0.527％） 10 呈色反応： 次の諸反応に陽性を示す (a)アンスロン硫酸反応 (b)モーリツシユ反応
   (c)スカトール反応 (d)ビアル反応 次の諸反応に陰性を示す (a)ニンヒドリン反応 (b)２，４―DNP反応
   (c)セリヴアノフ反応 (d)ナフトレゾルシン反応
   (e)カルバゾール硫酸反応 11 構成糖： アラビノースとガラクトース 12 均一性： (a) 超遠心 平衡密度勾配遠心（120000ｇ×72時間．
   CaCl₂）で単一 (b) 電気泳動 酢酸セルロース膜（20〜25V／cm、２時
   間）で単一 (c) ゲル濾過 セフアデツクスG100で単一。 ２ 水に混和する有機溶媒として低級アルコール
   類またはケトン類または水に混和するエーテル
   類、水と任意に混和する有機溶媒として低級アル
   コール類またはケトン類、長鎖を有する第４級ア
   ンモニウム塩として、セチルトリメチルアンモニ
   ウム塩またはセチルピリジニウム塩、分子の大き
   さに基づく分離法としてゲル濾過法を用いる特許
   請求の範囲第１項記載の多糖体PS―Ａ。