JPH0144719B2

JPH0144719B2 -

Info

Publication number: JPH0144719B2
Application number: JP55057424A
Authority: JP
Inventors: Susumu Mihashi; Muneaki Takase; Akisuke Yasui; Ichiro Washisawa; Kimitomo Yoshioka
Original assignee: Zenyaku Kogyo KK
Current assignee: Zenyaku Kogyo KK
Priority date: 1980-04-30
Filing date: 1980-04-30
Publication date: 1989-09-29
Also published as: JPS56156219A; BE888635A

Description

【発明の詳細な説明】本発明は、メギ科イカリソウ属
（Epimediumsp.）植物の全草から得られた抽出
物及びその製造方法並びに抽出物を有効成分とす
る免疫作用増強剤に関する。イカリソウ属と称される植物としては、イカリ
ソウ（Epimedium macranthum，M.et.D，var.
violaceum，Fr.）、ホザキノイカリソウ
（Epimedium sagittatum，Bak.）、シロバナイカ
リソウ（Epimedium macranthum，M.et.D.）、
キバナイカリソウ（Epimedium koreanum，
Nak.）等が知られている。これらのイカリソウ
属植物は、日本、中国、朝鮮等に自生する多年草
であり、その茎葉根は漢方では淫羊〓と命名さ
れ、全草を煎じて強壮、強精の目的に用いられて
いる。なお、これらのイカリソウ属植物は、種の
違いによつてもその効果には大差なく、生薬とし
て市販されているものは、これらの単独種または
混合物種をイカリソウと称している。このイカリ
ソウの成分研究は古くから行われており、例えば
赤井等〔薬学雑誌55537，705，719，788，1139
（1935）〕富田等〔薬学雑誌77114，212（1957）〕な
どの報告があり、地上部からイカリイン、地下部
からデス―Ｏ―メチルイカリイン、マグノフロリ
ンなる物質が見出され、夫々化学構造が決定され
ている。また薬理学的研究については、前田〔東
京医事新誌2133，2795（1932）〕、三宅〔岡山医学
会雑誌4944，2043（1937）〕、平嶋等〔基礎と臨床
４139（1970）〕などにより、その抽出エキススに
精液分泌促進作用、血圧降下作用、制糖作用のあ
ることが報告されている。しかし、その詳細につ
いては依然不明な点が多い。本発明者らは、先に特願昭55―21152号にてイ
カリソウ属植物より免疫作用増強剤を見出した
が、免疫増強作用、毒性面から更に研究の結果、
水に混和する有機溶媒と水との混合溶媒または水
のいずれかでイカリソウ属植物より抽出し、得ら
れた水性抽出液に水と任意に混和する有機溶媒を
加えて沈殿生成させた抽出物に優れた免疫増強作
用があることを発見し、本発明を完成した。以下に本発明を詳細に説明する。まずイカリソウ属植物を水に混和する有機溶媒
と水との混合溶媒または水のいずれかで抽出し、
得られた抽出液を減圧下濃縮する。この際、水に
混和する有機溶媒としてはメタノール、エタノー
ル、イソプロパノール等の低級アルコール類、ア
セトン等のケトン類、ジオキサン等のエーテル類
等を用いる。またこれらの混合溶媒を用いてもよ
い。また抽出溶媒として、１規定以下の濃度の酢
酸等の低級脂肪酸類、１モル以下の濃度のエタノ
ールアミン等の水と混和する低級アミン類、１規
定以下の濃度の水酸化ナトリウム等の水に易溶且
つアルカリ性を示す水酸化物も用いることができ
る。水と有機溶媒の比率は、実質的に水が存在す
る範囲であればすべて可能であるが、有機溶媒の
容量が50％以下の方が好ましい。なお水性抽出液
を得るこの操作は、濃縮操作のことを考えると、
水に混和する有機溶媒と水との混合溶媒を用いる
方が好ましい。また本発明に使用するイカリソウ
は、市販の全草をそのまま用いてもよいが、細切
を用いる方が好ましい。以下に、抽出操作の一具体例を示すと、まずイ
カリソウを室温下数時間〜数十時間静置にて抽出
する。次いで濾過して濾液を得る。残渣は同様な
抽出濾過操作をくり返し、得られたすべての濾液
を合わせ、減圧下濃縮し、水性抽出液を得る。上
記のような場合、一般的には冷浸抽出で行われて
いるが、抽出時間を短縮するため、加温抽出を行
つてもよい。加温抽出は還流冷却器を付し、水浴
上で４〜６時間、水浴温度35〜55℃で行うのが好
ましい。また、パーコレーシヨン法によつてもよ
い。溶媒使用量はイカリソウ属植物の５〜15倍量
（Ｖ／Ｗ）である。抽出残渣は最初の溶媒使用量
の0.4〜0.6倍量（Ｖ／Ｖ）ずつで３回以上くり返
し抽出するのが好ましい。分離は濾紙濾過、遠心
分離等で行つもよいが、市販の濾過助剤、例えば
ラジオライト（昭和化学工業(株)社製）、セライト
（和光純薬(株)社製）、フアイブラセル（ジヨンス・
マンビル社製）等使用して吸引濾過を行うと更に
良い結果が得られる。減圧は通常の方法、例えば
アスピレーター、真空ポンプ等を用いて行う。抽
出容器は内面をグラスライニングしたもの、ホー
ロー引きしたもの又はステンレス製のものを用い
る。次に、こうして得た水性抽出液を脱脂する。こ
の操作は省略することができるが、製剤上の面を
考慮すると行う方が好ましい。脱脂操作は、水性抽出液に酢酸エチル等の低級
脂肪酸エステル類、クロロホルム等のハロゲン化
炭化水素類、ジエチルエーテル等の水に混和しに
くいエーテル類、ｎ―ヘキサン等の脂肪族炭化水
素類等の有機溶媒の１種または２種以上の混合溶
媒を加え、激しく振盪した後、水層のみ分取す
る。得られた水層は同様の操作を行つた後、水浴
上で加温してわずかに残つている有機溶媒を除
き、濾過することにより脱脂した抽出液となる。
この際使用する溶媒量は、水性抽出液に対して
0.5〜1.5倍量（Ｖ／Ｖ）ずつを用い、３〜５回く
り返し操作するのが好ましい。なお最初に脱脂操
作を行つた後、水に混和する有機溶媒と水との混
合溶媒または水のいずれかで抽出してもよい。この脱脂した水性抽出液に室温下、等量（Ｖ／
Ｖ）以上の水と任意に混和する有機溶媒を加え、
沈殿を析出させる。生じた沈殿を濾取し、５〜20
倍量（Ｖ／Ｗ）の水と任意に混和する有機溶媒に
て洗浄する。洗浄した沈殿は、沈殿に対して20〜
50倍量（Ｖ／Ｗ）の水の中に注ぎ、水性懸濁液と
する。この懸濁液に３倍量（Ｖ／Ｖ）以上の水と
任意に混和する有機溶媒を加え、再度沈殿を析出
させる。生じた沈殿を濾取し、減圧下乾燥させる
と目的とする抽出物が得られる。この際、水と任
意に混和する有機溶媒としては、メタノール、エ
タノール等の低級アルコール類もしくはアセトン
等のケトン類を用いる。またこれらの混合溶媒を
用いてもよい。こうして得られた抽出物は、水で
再度抽出して精製してもよい。即ち、室温下、抽
出物に対して20倍量（Ｖ／Ｗ）以上の水を加え、
十分撹拌後、濾過する。この濾液を減圧下、濃縮
乾固することにより精製できる。この操作におい
て沈殿と濾液との分離はいずれも濾過濾過または
遠心分離で行う。かくして得られた本発明抽出物は次の特性を有
する。 (1) 性状 (a) 茶褐色粉末 (b) PH6.5前後（抽出物100mgを水50mlに溶解す
るとき） (2) 溶解性 (a) 可溶…水 (b) 不溶…低級アルコール類（メタノール、エ
タノール等）、ケトン類（アセトン等）、低
級脂肪酸エステル類（酢酸エチル等）、エ
ーテル類（ジエチルエーテル等）。 (3) 呈色反応次の諸反応に陽性を示す。 (a) アンスロン硫酸反応 (b) 塩化第二鉄反応 (c) モーリツシユ反応 (d) スカトール反応しかし、次の諸反応には陰性を示す。 (a) ニンヒドリン反応 (b) ２，４―DNP反応 (c) ゼリヴアノフ反応 (d) ナフトレゾルシン反応 (4) 紫外吸収スペクトル λ^H2O _nax（nm）280，（325（shoulder）前記抽出物の有用性を確認するため、以下に示
すような試験を行つた。 (1) マクロフアージ機能試験黄色ブドウ球菌に対する貧食能試験７〜10週令のICR／JCL系雌マウス（体重27±
３ｇ）を実験に供した。試料投与はいずれも32μ
ｇ／0.1ml〔リン酸塩緩衝生理的食塩水PH7.0（以
降PBSとする）〕／マウス背部皮下注射とし、１
群10匹とした。試料投与２日後に試料投与群及び
試料非投与（0.1mlPBS投与）群の各マウスの腹
腔内をRPMI―1640倍地〔G.E.ムーア（Moore）
著ザ・ジヤーナル・オブ・ザ・アメリカン・メデ
イカル・アソシエーシヨン（The J.of the
Amerrican Medical Association）第199巻、
519〜524頁（1967年）記載〕（日水製薬社製）で
洗い、腹腔細胞を採取し、各群ごとにプールし
た。RPMI―1640培地で１回遠心洗浄（100rpm5
分）した後、10％EBS―RPMI―1640培地（非動
化した胎牛血清を10％RPMI―1640培地（非動化
した胎牛血清を10％RPMI―1640培地に添加して
調製された培地）に懸濁し、チユルク液を用いた
核教計測により１×10⁶個／mlの腹腔細胞液に調
整した。調整液２mlをカバーグラス４枚を貼りつ
けたTD―15瓶に入れ、37℃、５％CO₂インキユ
ベーターで60分間培養し、その後黄色ブドウ球菌
（209P株）４×10⁸個／ml懸濁液を0.1ml加えて更
に20分間培養し、食菌させた。培養後ハンクス液
〔J.H.ハンクス（Hanks），R.E.ワレス
（Wallace）共著プロシーデイングス・オブ・
ザ・ソサイテイ・フオア・エクスペリメンタル・
バイオロジイ・アンド・メデイシン
（Proceeding′s of the Society for
Experimental Biology and Medicine 第71巻、
196頁（1949年）記載〕（日本製薬社製）で３回洗
浄し、マクロフアージの付着したカバーグラスを
メタノール固定し、ギムザ染色により食菌計測用
標本を作成した。油浸鏡検（1000〜2000倍）で
各々のカバーグラスのマクロフアージ200個を数
え、食菌率ならびに平均食菌数（食菌数）を算
出した。更に、食菌マクロフアージ100個の食菌
数を数え、平均食菌数（食菌数）を算出した。食菌率＝貧食細胞数／200（マクロフアージ）×100（％
）食菌数＝食菌菌数／200マクロフアージ）食菌数＝貧食菌数／100（貧食マクロフアージ）活性化指数＝試料投与群の各計測値（Ｍ／―）／試料非
投与群の各計測値（Ｍ）上記式による算出結果を第１表に示す。サルモネラ（腸炎）菌に対する貧食能試験前記に準じて測定した。但し、試験菌として
サルモネラ・エンテリイテイデイス
（Salmonella enteritidis）116―45株を用い、菌
液添加後の培養時間は60分間とした。と同様に
算出を行つた結果を第１表に示す。【表】【表】本発明抽出物投与により、非投与に比べて貧食
したマクロフアージ１個当りの貧食する菌数（食
菌数）の増加は著明ではないが、貧食マクロフ
アージの数（食菌数）が大幅に増加することが
判明した。網内系機能試験（その１）７週令のICR／JCL系雄マウス（体重30±２ｇ
に）、試料を65μｇ／0.1ml（PBS）／個体／日、
連日５日間腹腔内投与した。１群を12匹とし、網
内系の食作用活性に対する影響をみるため、試料
の最終投与３時間後に、試料投与群及び試料非投
与群の各マウスの尾静脈より、コロイド性炭素
〔Pelikan acting carbon C₁₁／1431a、ギユン
タ・バーグナー（Gu¨nther Wagner）社、西独を
注入し、血中からのクリアランスを調べた。即
ち、コロイド性炭素を３％―ゼラチン生理食塩水
で２倍稀釈した液を、10ml／Kg体重となるよう尾
静脈から注入し、眼窩穿刺法により、ヘパリン処
理したマイクロピペツトで血液0.010mlを採取し、
直ちに0.1％Na₂CO₃2mlに移入して溶血させ、日
立ダブルビーム124型（日立製作所製）を用い
650nmにおける吸光度を測定した。食作用係数は
コロイド性炭素稀釈液を静脈内注射して、２分後
及び20分後に採血し、その炭素濃度を下式に挿入
して算出した。結果を第２表に示す。なお、式中C₁はカーボン注入後一定時間（t₁）
経過時の血中のカーボン濃度、C₂はt₁時から更に
一定時間（t₂）経過時の血中のカーボン濃度を示
す。食作用係数：K²⁰ ₂＝（logC₁）―（logC₂）／t₂−t₁ 血中半減期：T1／２＝0.301／K²⁰／₂ 【表】のを用いた。
本発明の抽出物を投与すると食作用係数は1.6
倍も増加し、血中半減期は2/3に短縮された。即
ち、網内系のコロイド性炭素取り込み能が増強し
ていることが判明した。網内系機能試験（その２） ICR／JCL系雄マウスの腹腔内で移植継代され
た７日令のザルコーマ180細胞を採取し、PBSで
２回遠心洗浄した。洗浄細胞を１ml当り１×10⁷
となるように調製し、７週令のICR／JCL系雄マ
ウス（体重30±２ｇ）にマウスス当り0.2mlを背
部皮下に注入した。試料投与はいずれも163μ
ｇ／0.2ml（PBS）／個体／日とし、ザルコーマ
180接種当日から５日間腹腔内連続投与した。１
群12匹を用いた。網内系の食作用活性に対する影
響をみるため、試料の最終投与24時間後に、試料
投与群、試料非投与群（対照）、試料非投与・ザ
ルコーマ180非注入群（絶対対照）の各マウスの
尾静脈よりコロイド性炭素を注入し、血中からの
クリアランスを調べた。即ち、前記網内系機能試験（その１）と全く
同様にして食作用係数（K²⁰ ₂）、血中半減期（Ｔ
１／２）を算出した。結果を第３表に示す。【表】のを用いた。
本発明抽出物を投与すると、正常マウスだけで
なく、ザルコーマ180担ガンマウスでも網内系の
コロイド性炭素取り込み能が増強していることが
判明した。走化能（Chemotaxisis）試験７週令のICR／JCL系雌マウス（体重27±２
ｇ）を実験に供した。本発明抽出物（実施例１）をPBS（0.2ml）に溶
解し、１日１回５日間連日皮下注射した。１群は
５匹とした。対照群にはPBSを投与した。６日目に腹腔細胞を取り出し、10％FBS・
RPMI―1640培地にて１×10⁶個／mlに調製した。
走化能をボイデンチエンバー法〔ジヤーナル・オ
ブ・エクスペリメンタル・メデイシン（Journal
of experimental medicine）115453（1962）記
載〕にて測定した。即ち、10％の正常ヒト血清を添加したRPMI―
1640培地0.2mlを下室に、調製した腹腔細胞懸濁
液0.2mlを上室に入れ、５％CO₂インキユベータ
ーで37℃、90分間インキユベートした。フイルターをとり出し、メタノール固定、ギム
ザ染色した後400倍で検鏡計数した。５視野の合
計細胞数を測定し平均値を求めた。結果を第４表に示す。【表】本発明抽出物投与により、走化する細胞数が増
加した。即ち、本発明抽出物は、マクロフアージの走化
能を増強させる効果を示した。マクロフアージには、遊走型と固定型があり、
遊走型の細胞は、骨髄中、血中、腹腔内、肺胞内
に、また固定型の細胞は主として脾リンパ節、肝
に存在する。前記の黄色ブドウ球菌に対する貧
食能試験、のサルモネラ菌に対する貧食能試験
及びの走化能試験は、遊走型に、また，の
網内系機能試験は固定型に該当する。本発明抽出物の投与により、遊走型、固定型と
もマクロフアージが貧食する菌または異物の数が
増加したことが判明した。 (2) 細胞性免疫試験細胞障害性（Cytotoxity）試験 ○イ７〜10週令のBALB／ｃ系雌マウス（体
重22±２ｇ）を実験に供した。試料投与はい
ずれも32μｇ／0.1ml（PBS）／マウスの背部
皮下注射とし、１群10匹とした。同日、試料
投与群及び試料非投与（0.1mlPBS投与）群
にあらかじめ準備したBC―47細胞（ACI系
ラツト膀胱癌由来、試験管内継代培養株）を
１×10⁷個／マウスの割合で腹腔内に免疫し、
免疫７日後、正常マウス群も加え各マウスよ
りRPMI―1640培地で腹腔内を洗い腹腔細胞
を採取した。各群ごとにプールし、RPMI―
1640培地で２回、20％FBS・RPMI―1640培
地で１回遠心洗浄した後、同培地に懸濁し
た。トリパンブルーを用いた細胞計測により
各群共腹腔細胞として3.2×10⁵個／mlに調整
した。 ○ロ試験管内で培養したBC―47細胞を20％
FBS・RPMI―1640培地に懸濁し生細胞とし
て８×10⁴個／mlに調整した。 ○ハ細胞培養用平底型マイクロ・プレート（Ｎ
―1480型、96穴（ウエル）、NUNC社製）に
１穴当り、腹腔細胞液0.1ml（細胞数3.2×10⁴
個）と試験管内培養BC―47細胞液0.1ml（細
胞数８×10³個）を混合培養して37℃、５％
CO₂インキユベーター中で24時間培養後、各
穴に0.05マイクロキユーリー（μCi）の¹⁴C化
チミジンを加えて更に24時間同条件で培養し
た。 ○ニ培養終了後、各穴をPBSで洗浄し、次い
で穴底面に付着発育しているBC―47細胞を
セルハーベスター（ミニ・マツシユ型、ダイ
ナテツク社製）により各々濾紙上に捕集し、
各穴のBC―47細胞内に取り込まれた¹⁴C量
（毎分の崩壊数：dpm）を液体シンチレー
ト・カウンター（LSC―673型、アロカ社製）
を用いて測定した。増殖阻止率を【表】で算出した。また、活性化指数を〔免疫＋試料投与マウスの増殖阻止率（Ｍ／
―）／免疫マウス（試料非投与）の増殖阻止率（Ｍ）〕
で算出した。結果を第５表に示す。【表】本発明抽出物の投与により、マウスに対する
BC―47細胞の増殖阻止、即ちBC―47細胞に対す
る細胞性免疫を増強させる効果を示した。幼若化（Blast化）試験 (i) 正常マウスの免疫機能増強試験 ○イ８週令のICR／JCL系雌マウス（体重28±
２ｇ）を実験に供した。本発明抽出物（実施例１）をPBS（0.2ml）
に溶解し、マウスに背部皮下注射した。１群
は５匹とした。１日１回５日間連日投与後、６日目に腸リ
ンパ節をRPMI―1640培地中でほぐし、しば
らく静置後、上清部を採取し、1200rpmで５
分間遠心分離した。沈渣を分取後、20％
FBS・RPMI―1640培地に懸濁した。トリパ
ンブルーを用いた細胞計測により生細胞とし
て２×10⁶個／mlに調製した。対照群には
PBSを背部皮下注射した。 ○ロ細胞培養用平底型マイクロ・プレートに１
穴当り、細胞懸濁液0.1mlと試料液10μを加
え、37℃、５％CO₂インキユベーター中で24
時間培養後、各穴に0.1μCiの³H化チミジン
を加えて更に24時間同条件で培養した。 ○ハ培養終了後、各穴をPBSで洗浄し、次い
で穴底面に付着している細胞をセルハーベス
ターにより各々濾紙上に捕集し、各穴の細胞
内に取り込まれた³H量（dpm）を液体シン
チレーシヨンカウンターを用いて測定した。
結果を第６表に示す。【表】 (ii) 免疫低下マウスの免疫機能増強試験 ○イ８週令のICR／JCL系雌マウス（体重28±
２ｇ）を実験に供し、１群３匹とした。サイクロホスフアミド31.3mgをマウスに腹
腔内注射した。同日より本発明抽出物を４日間連日背部皮
下注射した。５日目に腸間リンパ節をRPMI―1640培地
中でほぐし、しばらく静置後、上清部を採取
し、12000rpmで５分間遠心分離した。沈渣を分取後、20％FBS・RPMI―1640培
地に懸濁した。トリパンブルーを用いた細胞計測により生
細胞として２×10⁶個／mlに調製した。対照群にはPBSを背部皮下注射した。以降(i)正常マウスの免疫機能増強試験○ロ，○ハと
全く同様なる方法にて³H量（dpm）を測定した。
結果を第７表に示す。【表】投与した群。即ち、免疫能を
低下させなかつたマウス群。
本発明抽出物投与により、(i)正常マウスでは
³H取込量が増加すること、(ii)免疫低下マウスで
は³H取込量が正常マウス群と同等またはそれ以
上の³H取込量まで回復することが判明した。即ち、本発明抽出物投与により、リンパ球幼若
化物質（mitogen）による細胞の幻若化が促進さ
れ、細胞性免疫が増強することが判明した。 PNP（プリンヌクレオシドホスホリラーゼ）
試験 ○イ７週令のICR／JCL系雌マウス（体重26±
２ｇ）を実験に供した。本発明抽出物を５日間連日マウス背部皮下注射
とし、１群４匹とした。翌日（６日目）に脾臓を摘出し、RPMI―1640
培地中で十分にほぐした。しばらく静置後、上清部を採取し、1200rpmで
５分間遠心分離した。沈渣を分取し、RPMI―1640培地に懸濁させた
後、赤血球除去用トリス緩衝液〔免疫実験操作法
A450ページ（日本免疫学会編）1976年記載〕を
加え、遠心分離し赤血球を除去した。この操作を
２〜３回行ない赤血球を完全に除去した後、
RPMI―1640培地に懸濁させ、チユルク液を用い
た核数計測にて一定数の細胞数を分取した。この
一定数の細胞懸濁液を再度遠心分離し、生じた沈
渣を分取し、PBSを加えて１×10⁷個／mlの細胞
懸濁液に調製した。この調製した細胞懸濁液を超
音波破砕器〔ソニフアイヤーモデル200、ブラン
ソンソニツク社製（米国）〕にかけ、20KHで30
秒間破砕し、粗酵素液とした。対照群には、PBSを背部皮下注射した。 ○ロイノシン溶液（２mg／ml）0.1ml、キサン
チンオキシダーゼ（10mg／ml）10μ、○イで
調製した粗酵素液0.5mlおよびPBS2.5mlを混
合し、25℃、30分間インキユベートした。そ
の後、293nmの吸光度を測定した。 ○ハイノシン溶液のかわりにPBSを用い、○ロ
と同様の測定をした。 ○ニ本発明抽出物投与群、対照群のΔOD（○ロの
吸光度―○ハの吸光度）を求め、次式により
PNP活性、活性化指数を求めた。 PNP活性＝反応液量（ml）×ΔOD×10⁴／12×時間（分）
×粗酵素液量（ml）×細胞数（10^-6／ml）〔単位（Ｕ）／１×10⁷細胞／分〕活性化指数＝本発明抽出物投与群のPNP活性値／対照群
のPNP活性値本試験は、次のように表わすことができる。即ち、イノシンのどのくらいが尿酸まで、
PNPにより分解されたかを産生された尿酸を定
量することにより求めたものである。結果を第８
表に示す。【表】本発明抽出物投与により、PNP活性が上昇す
ることが判明した。即ち、本発明抽出物投与によりマウス脾リンパ
球の酵素活性が賦活され、免疫能が増強すること
が判明した。 (3) 急性毒性試験リツチフイールド―ウイルコクソン法〔J.
Pharm.exp.Ther.9699（1949）記載〕で行つたと
ころICR／JCL系雄マウスLD₅₀（mg／Kg）は、腹
腔経路で2050（1667〜2522）であつた。以上のことから、本発明の抽出物は、免疫能の
低下している患者又は高齢者、例えば、癌患者に
抗癌剤を併用させる、感染症の予防と阻止、重症
の細菌感染症患者に化学療法剤と併用させる、等
に用いたり、あるいは肝機能が低下して異物（例
えば薬剤）の排出困難な患者に投与して、その機
能を亢進させる等の用途が期待できる。本発明の抽出物を人体に投与するに当つては経
口投与、注射（皮下、筋肉）その他の方法が用い
られる。経口投与の際、固形製剤として用いる場合は錠
剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等にすることがで
き、製剤上一般に使用される糖類、セルロース調
合物のような賦形剤、でんぷんペースト、メチル
セルロースのような結合剤、増量剤、崩壊剤等の
添加物を包含してもよい。また経口用液体製剤と
して用いる場合は、内用水剤、懸濁液剤、乳剤、
シロツプ剤などの形態であつても良く、また使用
する前に再溶解させる乾燥生成物の形態であつて
もよい。本発明の抽出物を成人に経口投与する場合は１
日３〜20mg／Kgの範囲で用いることができる。こ
の際、用量は症状、年令、剤型等により適宜増減
される。注射の場合は、水溶液、懸濁剤、油性又は水溶
性乳剤の形態であつても良いが、通常滅菌水又は
生理食塩液など水性液体媒体に溶解又は懸濁する
ことにより調整される。必要に応じて一般に使用
される溶解剤、安定化剤、保存剤、等張化剤など
を加えてもよい。このようにして得られた注射液剤は筋肉注射、
皮下注射等適当な方法で投与される。成人に非経
口投与する場合は１日0.1mg／Kg〜５mg／Kgの範
囲で用いることができる。この際の用量は、症
状、年令、剤型、投与方法等により適宜増減され
る。次に、本発明の実施例を示して更に詳細に説明
するが、本発明はこれに限定されるものではな
い。実施例１ ―50％エタノール（Ｖ／Ｖ）温浸― 市販のイカリソウ細切１Kgに50％エタノール
（Ｖ／Ｖ）10を加え、還流冷却器を付し、水浴
上50℃で６時間加温抽出した。抽出後、温時濾過
し、残渣は新たに50％エタノール（Ｖ／Ｖ）５
ずつで同様な抽出、濾過操作を３回行つた。全濾
液を合わせ、減圧下45℃で濃縮し、水性抽出液
4.5を得た。この抽出液を分液ロートに入れ、
酢酸エチル4.5を加えて激しく振盪し、水層の
み分取した。この水層は新たに、酢酸エチル4.5
ずつで同様な抽出を３回行つた。水層を減圧下
濃縮し、残存する酢酸エチルを留去した後、濾過
した。濾液にエタノール13.5を添加、撹拌後、
一夜静置し、析出する沈殿を濾取した。沈殿をエ
タノール100mlで洗浄した後、水400mlに懸濁させ
エタノール1.6を添加した後沈殿を濾取した。
分取した沈殿を減圧下乾燥し抽出物10ｇを得た。
この抽出物を水500mlにて抽出後、濾過し、濾液
を減圧下濃縮乾燥し精製した茶褐色粉末状の本発
明抽出物８ｇを得た。この抽出物(a)アンスロン硫酸反応、(b)塩化第二
鉄反応、(c)モーリツシユ反応、(d)スカトール反応
の諸呈色反応に陽性を示した。(a)ニンヒドリン反
応、(b)２，４―DNP反応、(c)セリヴアノフ反応、
(d)ナフトレゾルシン反応の諸呈色反応に陰性を示
した。紫外吸収スペクトルはλ^H2O _nax（nm）280，325
（shoulder）であつた。赤外吸収スペクトルは第
１図のとおりであつた。実施例２ ―温水浸― 市販のイカリソウ細切１Kgに水10を加え、還
流冷却器を付し、水浴上50℃で６時間加温抽出し
た。抽出後、温時濾過し、残渣は新たに水５ず
つで同様な抽出、濾過操作を３回行つた。全濾液
を合わせ、減圧下45℃で濃縮し、水性抽出液4.5
を得た。以下、実施例１と全く同様にして、抽
出物17.5ｇ、精製した本発明の抽出物14.0ｇを得
た。この抽出物の諸呈色反応はいずれも実施例１と
全く同様であつた。紫外吸収スペクトルはλ^H2O _nax
（nm）280，325（shoulder）であつた。赤外吸収
スペクトルは第２図のとおりであつた。実施例３〜10 実施例１と同様にして、市販のイカリソウ細切
１Kgを用い、浸出方法、脱脂溶媒、沈殿化溶媒を
変更して、次の実施例３〜10を行つた。【表】これらの抽出物の諸呈色反応は実施例１と全く
同様であつた。実施例３〜10の紫外吸収ススペク
トルはいずれもλ^H2O _nax（nm）280，325（shoulder）
であつた。赤外吸収スペクトルは夫々第３図〜第
１０図のとおりであつた。実施例11 ―50％エタノール（Ｖ／Ｖ）冷浸― 市販のイカリソウ細切１Kgに50％エタノール
（Ｖ／Ｖ）10を加え、室温下、一夜静置した。
ついで濾過し、残渣は新たに50％エタノール
（Ｖ／Ｖ）５ずつで同様な抽出、濾過操作を３
回行なつた。全濾液を合わせ、減圧下45℃で濃縮
し、水性抽出液4.5を得た。以下、実施例１と
全く同様にして抽出物8.8ｇ、精製した本発明の
抽出物７ｇを得た。この抽出物の諸呈色反応は実
施例１と全く同様であつた。紫外吸収スペクトル
はλ^H2O _nax（nm）280，325（shoulder）であつた。赤
外吸収スペクトルは第１１図のとおりであつた。実施例12 ―冷水浸― 市販のイカリソウ細切１Kgに水10を加え、室
温下、一夜静置した。ついで、濾過し、残渣は新
たに水５ずつで同様な抽出、濾過操作を３回行
なつた。全濾液を合わせ、減圧下45℃で濃縮し、
水性抽出液4.5を得た。以下、実施例１と全く
同様にして、抽出物10.5ｇ、精製した抽出物7.5
ｇを得た。これらの抽出物の諸呈色反応は、実施
例１と全く同様であつた。紫外吸収スペクトルは
λ^H2O _nax（nm）280，325（shoulder）であつた。赤外
吸収スペクトルは第１２図のとおりであつた。実施例13 ―50％エタノール（Ｖ／Ｖ）温浸、脱
脂操作省略― 市販のイカリソウ細切１Kgに50％エタノール
（Ｖ／Ｖ）10を加え、還流冷却器を付し、水浴
上50℃で６時間加温抽出した。抽出後、温時濾過
し、残渣は新たに50％エタノール（Ｖ／Ｖ）５
ずつで同様な抽出、濾過操作を３回行なつた。全
濾液を合わせ、減圧下45℃で濃縮し、水性抽出液
4.5を得た。この濾液に３倍量のエタノールを
添加、撹拌後、一夜静置し、析出する沈殿を濾取
した。沈殿をエタノール100mlで洗浄した後、水
400mlに懸濁させ、４倍量のエタノールを添加し
た後、沈殿を濾取した。分取した沈殿を減圧下乾
燥し抽出物９ｇを得た。この抽出物を水500mlに
て水抽出した後、濾過し、濾液を減圧下濃縮乾燥
し、精製した本発明の抽出物７ｇを得た。この抽
出物の諸呈色反応は実施例１と同様であつた。紫
外吸収スペクトルはλ^H2O _nax（nm）280，325
（shoulder）であつた。赤外吸収スペクトルは第
１３図のとおりであつた。実施例14 ―脱脂操作、50％エタノール（Ｖ／
Ｖ）温浸― 市販のイカリソウ細切１Kgに酢酸エチル８を
加え、還流冷却器を付し、水浴上50℃で６時間加
温抽出した。抽出後、温時濾過し、残渣は新たに
酢酸エチル８ずつで同様な抽出、濾過操作を２
回行なつた。酢酸エチル可溶部を除去した残渣を
風乾した後、水８を加え、還流冷却器を付し、
水浴上50℃で６時間加温抽出した。抽出後、温時
濾過し、残渣は新たに水８ずつで同様な抽出、
濾過操作を２回行つた。全濾液を合わせ、減圧下
45℃で濃縮、濾過し水性抽出液4.5を得た。濾
液に３倍量のエタノールを添加、撹拌後、一夜静
置し析出する沈殿を濾取した。沈殿をエタノール
100mlで洗浄した後、水400mlに懸濁させ、４倍量
のエタノールを添加した後、沈殿を濾取した。分
取した沈殿を減圧下乾燥し本発明の抽出物9.3ｇ
を得た。この抽出物を水500mlで水抽出後、濾過
した。濾液を減圧下濃縮乾固し、精製した本発明
の抽出物7.5ｇを得た。この抽出物の諸呈色反応
は実施例１と同様であつた。紫外吸収スペクトル
はλ^H2O _nax（nm）280，325（shoulder）であつた。赤
外吸収スペクトルは第１４図のとおりであつた。

【図面の簡単な説明】

第１図〜第１４図は実施例１〜14の夫々で得た
抽出物の赤外吸収スペクトルを示すグラフであ
る。

Claims

【特許請求の範囲】１水に混和する有機溶媒と水との混合溶媒又は
水のいずれかにてイカリソウ属植物より抽出さ
れ、且つ得られた水性抽出液に水と任意に混和す
る有機溶媒を混合することにより沈殿として得ら
れる以下の理化学的性質を有する抽出物 (1) 性状 (a) 茶褐色粉末 (b) PH6.5前後（抽出物100mgを水50mlに溶解す
るとき） (2) 溶解性 (a) 可溶…水 (b) 不溶…低級アルコール類、ケトン類、低級
脂肪酸エステル類、エーテル類 (3) 呈色反応 (a) 陽性…アンスロン硫酸反応、塩化第二鉄反
応、モーリツシユ反応、スカトール反応 (b) 陰性…ニンヒドリン反応、２，４―DNP
反応、セリヴアノフ反応、ナフトレゾルシ
ン反応 (4) 紫外吸収スペクトル λ^H2O _nax280，325（shoulder）。２水に混和する有機溶媒が低級アルコール類、
ケトン類またはエーテル類、水と任意に混和する
有機溶媒が低級アルコール類またはケトン類のい
ずれかである特許請求の範囲第１項記載の抽出
物。３イカリソウ属植物に水に混和する有機溶媒と
水との混合溶媒または水のいずれかを加えて水性
抽出液を得、得られた水性抽出液に水と任意に混
和する有機溶媒を混合することにより沈殿として
得られる以下の理化学的性質を有する抽出物の製
造方法。 (1) 性状 (a) 茶褐色粉末 (b) PH6.5前後（抽出物100mgを水50mlに溶解す
るとき） (2) 溶解性 (a) 可溶…水 (b) 不溶…低級アルコール類、ケトン類、低級
脂肪酸エステル類、エーテル類 (3) 呈色反応 (a) 陽性…アンスロン硫酸反応、塩化第二鉄反
応、モーリツシユ反応、スカトール反応 (b) 陰性…ニンヒドリン反応、２，４―DNP
反応、セリヴアノフ反応、ナフトレゾルシ
ン反応 (4) 紫外吸収スペクトル λ^H2O _nax280，325（shoulder）。４水に混和する有機溶媒が低級アルコール類、
ケトン類またはエーテル類、水と任意に混和する
有機溶媒が低級アルコール類またはケトン類のい
ずれかである特許請求の範囲第３項記載の抽出物
の製造方法。５水に混和する有機溶媒と水との混合溶媒又は
水のいずれかにてイカリソウ属植物より抽出さ
れ、且つ得られた水性抽出液に水と任意に混和す
る有機溶媒を混合することにより沈殿として得ら
れる以下の理化学的性質を有する抽出物を有効成
分とする免疫作用増強剤 (1) 性状 (a) 茶褐色粉末 (b) PH6.5前後（抽出物100mgを水50mlに溶解す
るとき） (2) 溶解性 (a) 可溶…水 (b) 不溶…低級アルコール類、ケトン類、低級
脂肪酸エステル類、エーテル類 (3) 呈色反応 (a) 陽性…アンスロン硫酸反応、塩化第二鉄反
応、モーリツシユ反応、スカトール反応 (b) 陰性…ニンヒドリン反応、２，４―DNP
反応、セリヴアノフ反応、ナフトレゾルシ
ン反応 (4) 紫外吸収スペクトル λ^H2O _nax280，325（shoulder）。６水に混和する有機溶媒が低級アルコール類、
ケトン類またはエーテル類、水と任意に混和する
有機溶媒が低級アルコール類またはケトン類のい
ずれかである特許請求の範囲第５項記載の抽出物
を有効成分とする免疫作用増強剤。