JPH026514B2 - - Google Patents
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- JPH026514B2 JPH026514B2 JP15106186A JP15106186A JPH026514B2 JP H026514 B2 JPH026514 B2 JP H026514B2 JP 15106186 A JP15106186 A JP 15106186A JP 15106186 A JP15106186 A JP 15106186A JP H026514 B2 JPH026514 B2 JP H026514B2
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Landscapes
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Description
産業上の利用分野
本発明は、固定化β−グルコシダーゼの製造法
に関する。 従来の技術及びその問題点 近年、エネルギー問題、環境汚染、未利用資源
の有効利用などの観点から、セルロース性物質の
糖化方法についての研究が盛んに行なわれてお
り、なかでも、装置及び操作が簡単であつて、し
かも温和な条件下に行なうことができ、その上生
成する糖がグルコース等の単糖である酵素糖化法
が有効な方法として注目されている。 セルロース性物質を糖化するセルラーゼ類（セ
ルラーゼ及び／又はヘミセルラーゼ）は、主とし
てβ−グルコシダーゼと他の２種の成分とから成
り立つている。セルラーセ類を用いてセルロース
性物質を糖化するに際しては、まずβ−グルコシ
ダーゼ以外の２成分がセルロース性物質に作用し
て２量体を生成し、次いでβ−グルコシダーゼが
この２量体をグルコースに分解する。該２量体
は、セルロース性物質から該２量体までの分解を
阻害するため、β−グルコシダーゼ活性が充分で
ないと、セルロース性物質の糖化を効率的に行な
うことができない。ところが、現在使用されてい
るセルラーゼ類のβ−グルコシダーゼ活性は充分
なものとは言えない。そのため、コストの著るし
い増加を招くにもかかわらず、β−グルコシダー
ゼを含有する他の酵素を添加しなければならな
い。 そこでβ−グルコシダーゼを固定化し、繰り返
し使用する試みがなされてきた。しかしながら、
化学反応を利用した従来の固定化方法では、(1)担
持されるβ−グルコシダーゼ活性が低い、(2)担体
の堅牢度が不充分である、(3)固定化に要するコス
トが極めて大きい、等の問題点があり好ましくな
い。 問題点を解決するための手段 本発明者は、上記問題点に鑑み鋭意研究を重ね
た結果、セルラーゼ類を用いてセルロース性物質
を糖化し、グルコース等の可溶性成分を分離した
後に残留し、従来難分解物質として廃棄されてき
た未分解固形物に、セルラーゼ類が物理的吸着及
び化学的結合によつて多量に固定化されているこ
と、更にはこのセルラーゼ類が固定化された未分
解固形物を適当な溶媒で洗浄して乾燥し、一定期
間エージングすることにより、高いβ−グルコシ
ダーゼ活性を有する固定化β−グルコシダーゼを
安価に得られることを見出し本発明を完成した。 即ち本発明は、セルロース性物質にセルラーゼ
類を作用させて生成する可溶性成分を分離した後
の未分解固形物を、有機溶媒で洗浄後エージング
することを特徴とする固定化β−グルコシダーゼ
の製造法に係る。 本発明に於てセルロース性物質としては、通常
の全ての木質を使用することができ、例えば、針
葉樹や広葉樹、南洋材や北洋材等から得られる木
屑、のこぎり屑、樹皮、廃木材等を挙げることが
できる。また、農業廃棄物として廃棄するために
経費を必要とする稲ワラやサトウキビ、トウモロ
コシ等の廃棄物、あるいは新聞紙、段ボールのよ
うな紙類及びセルロース等も使用できる。 本発明において使用するセルラーゼ類として
は、例えば、アスペルギルス属の菌体、トリコデ
ルマ属の菌体等から生産されるセルラーゼ若しく
はセルラーゼとヘミセルラーゼとを含む酵素等を
挙げることができる。本発明では、これらの酵素
を単独で用いてもよく、或いは起源の異なるもの
の２種以上を同時に使用してもよい。また酵素源
として、これらの酵素を含む菌体抽出液や菌培養
液を用いることもできる。セルラーゼ類を高単位
に担持させたい時には、アスペルギルス属及びト
リコデルマ属のセルラーゼ類を混合して使用すれ
ばよい。 セルロース性物質のセルラーゼ類による糖化反
応は、常法に従い、水溶液又はPH緩衝液中で行な
われる。PH緩衝液はセルラーゼ及びヘミセルラー
ゼの安定性を増すために用いられる。その種類は
特に制限されないが、PHが3.0〜8.0程度のものが
好ましい。反応温度は通常５〜60℃程度である
が、反応時間の短縮及び酵素の安定性を勘案する
と30〜50℃程度とするのが良い。セルラーゼとヘ
ミセルラーゼ並びにセルロース性物質の濃度は、
目的とする固定化β−グルコシダーゼの活性の高
さによつて適宜選択すればよい。一般に、セルロ
ース性物質の量を一定とした場合、セルラーゼ及
び／又はヘミセルラーゼの濃度が高い程、活性の
高い固定化β−グルコシダーゼを短時間のうちに
得ることができる。 上記の如くしてセルロース性物質を糖化した
後、生成するグルコース等の可溶性成分を過、
遠心分離等の通常の分離方法で分離し、残留する
未分解固形物をセルラーゼ類の固定化用担体とし
て使用する。 かくして得られる未分解固形物には、すでにセ
ルラーゼ類が吸着又は結合している。この未分解
固形物を適当な有機溶媒で洗浄し、乾燥し、次い
でエージングすると、強いβ−グルコシダーゼ活
性を示し、セルラーゼ中のβ−グルコシダーゼ以
外の２成分の活性を殆んど有さない固定化β−グ
ルコシダーゼが得られる。 未分解固型物の洗浄に使用される溶媒として
は、例えば、アセトン等のケトン類、エタノール
等のアルコール類、前記アルコール類と石油エー
テル等のエーテル類との混合溶媒等を挙げること
ができる。 未分解固形物のエージングは、室温にて数ケ月
〜数年、好ましくは６ケ月〜５年程度行えばよ
い。 発明の効果 本発明固定化酵素は、以下の如き優れた効果を
示す。 (1) 本発明固定化酵素は、従来の固定化β−グル
コシダーゼに比べ、極めて高いβ−グルコシダ
ーゼ活性を示す。 (2) 本発明固定化酵素は、繰返し使用が可能であ
り、その上繰返し使用してもその活性が低下し
ない。 (3) 従来難分解性であるため廃棄されてきたセル
ロース性物質中の未分解固形物を担体として使
用するため、担体の堅牢性も充分である。 (4) 固定化方法が簡便であるため、コストが著し
く低減される。 実施例 以下に実施例を挙げ、本発明を更に詳しく説明
する。 実施例 １ リン酸塩緩衝液（PH4.6）に、ボールミル粉砕
したカラマツ木粉１ｇを入れ、45℃に予熱した
後、精製セルラーゼの混合物の１％水溶液５mlを
加え、同温度で48時間振盪し、カラマツ木粉を糖
化した。尚精製セルラーゼとしては、市販のトリ
コデルマ・ビリデ起源のセルラーゼ（セルラー
ゼ・オノヅカＲ−10）と市販のアスペルギルス・
ニゲル起源のセルラーゼ（セルロシンAP）とを、
夫々限外過して分子量１万以下をカツトし凍結
乾燥したものを１：１の割合で混合して使用し
た。木粉の35％が分解した。別した未分解固形
物をメタノール10mlで洗浄して乾燥し、室温で１
年間保存して本発明固定化酵素を得た。 得られた本発明固定化酵素２mgを４mlのPH4.5
の酢酸緩衝液に加え、40℃で15分予熱し、１mlの
0.15％ｐ−ニトロフエニル−β−Ｄ−グルコシド
水溶液を加えて10分間反応させた。反応後、反応
液0.5mlをとり0.1M炭酸ナトリウム水溶液4.5mlを
添加して生成したｐ−ニトフエノールをフエノレ
ート化し、400nｍの吸光度を測定して生成した
グルコース量を算出した。使用した本発明固定化
酵素を水で洗浄して繰り返し使用し、その都度生
成グルコース量を測定した。結果を第１表に示
す。
に関する。 従来の技術及びその問題点 近年、エネルギー問題、環境汚染、未利用資源
の有効利用などの観点から、セルロース性物質の
糖化方法についての研究が盛んに行なわれてお
り、なかでも、装置及び操作が簡単であつて、し
かも温和な条件下に行なうことができ、その上生
成する糖がグルコース等の単糖である酵素糖化法
が有効な方法として注目されている。 セルロース性物質を糖化するセルラーゼ類（セ
ルラーゼ及び／又はヘミセルラーゼ）は、主とし
てβ−グルコシダーゼと他の２種の成分とから成
り立つている。セルラーセ類を用いてセルロース
性物質を糖化するに際しては、まずβ−グルコシ
ダーゼ以外の２成分がセルロース性物質に作用し
て２量体を生成し、次いでβ−グルコシダーゼが
この２量体をグルコースに分解する。該２量体
は、セルロース性物質から該２量体までの分解を
阻害するため、β−グルコシダーゼ活性が充分で
ないと、セルロース性物質の糖化を効率的に行な
うことができない。ところが、現在使用されてい
るセルラーゼ類のβ−グルコシダーゼ活性は充分
なものとは言えない。そのため、コストの著るし
い増加を招くにもかかわらず、β−グルコシダー
ゼを含有する他の酵素を添加しなければならな
い。 そこでβ−グルコシダーゼを固定化し、繰り返
し使用する試みがなされてきた。しかしながら、
化学反応を利用した従来の固定化方法では、(1)担
持されるβ−グルコシダーゼ活性が低い、(2)担体
の堅牢度が不充分である、(3)固定化に要するコス
トが極めて大きい、等の問題点があり好ましくな
い。 問題点を解決するための手段 本発明者は、上記問題点に鑑み鋭意研究を重ね
た結果、セルラーゼ類を用いてセルロース性物質
を糖化し、グルコース等の可溶性成分を分離した
後に残留し、従来難分解物質として廃棄されてき
た未分解固形物に、セルラーゼ類が物理的吸着及
び化学的結合によつて多量に固定化されているこ
と、更にはこのセルラーゼ類が固定化された未分
解固形物を適当な溶媒で洗浄して乾燥し、一定期
間エージングすることにより、高いβ−グルコシ
ダーゼ活性を有する固定化β−グルコシダーゼを
安価に得られることを見出し本発明を完成した。 即ち本発明は、セルロース性物質にセルラーゼ
類を作用させて生成する可溶性成分を分離した後
の未分解固形物を、有機溶媒で洗浄後エージング
することを特徴とする固定化β−グルコシダーゼ
の製造法に係る。 本発明に於てセルロース性物質としては、通常
の全ての木質を使用することができ、例えば、針
葉樹や広葉樹、南洋材や北洋材等から得られる木
屑、のこぎり屑、樹皮、廃木材等を挙げることが
できる。また、農業廃棄物として廃棄するために
経費を必要とする稲ワラやサトウキビ、トウモロ
コシ等の廃棄物、あるいは新聞紙、段ボールのよ
うな紙類及びセルロース等も使用できる。 本発明において使用するセルラーゼ類として
は、例えば、アスペルギルス属の菌体、トリコデ
ルマ属の菌体等から生産されるセルラーゼ若しく
はセルラーゼとヘミセルラーゼとを含む酵素等を
挙げることができる。本発明では、これらの酵素
を単独で用いてもよく、或いは起源の異なるもの
の２種以上を同時に使用してもよい。また酵素源
として、これらの酵素を含む菌体抽出液や菌培養
液を用いることもできる。セルラーゼ類を高単位
に担持させたい時には、アスペルギルス属及びト
リコデルマ属のセルラーゼ類を混合して使用すれ
ばよい。 セルロース性物質のセルラーゼ類による糖化反
応は、常法に従い、水溶液又はPH緩衝液中で行な
われる。PH緩衝液はセルラーゼ及びヘミセルラー
ゼの安定性を増すために用いられる。その種類は
特に制限されないが、PHが3.0〜8.0程度のものが
好ましい。反応温度は通常５〜60℃程度である
が、反応時間の短縮及び酵素の安定性を勘案する
と30〜50℃程度とするのが良い。セルラーゼとヘ
ミセルラーゼ並びにセルロース性物質の濃度は、
目的とする固定化β−グルコシダーゼの活性の高
さによつて適宜選択すればよい。一般に、セルロ
ース性物質の量を一定とした場合、セルラーゼ及
び／又はヘミセルラーゼの濃度が高い程、活性の
高い固定化β−グルコシダーゼを短時間のうちに
得ることができる。 上記の如くしてセルロース性物質を糖化した
後、生成するグルコース等の可溶性成分を過、
遠心分離等の通常の分離方法で分離し、残留する
未分解固形物をセルラーゼ類の固定化用担体とし
て使用する。 かくして得られる未分解固形物には、すでにセ
ルラーゼ類が吸着又は結合している。この未分解
固形物を適当な有機溶媒で洗浄し、乾燥し、次い
でエージングすると、強いβ−グルコシダーゼ活
性を示し、セルラーゼ中のβ−グルコシダーゼ以
外の２成分の活性を殆んど有さない固定化β−グ
ルコシダーゼが得られる。 未分解固型物の洗浄に使用される溶媒として
は、例えば、アセトン等のケトン類、エタノール
等のアルコール類、前記アルコール類と石油エー
テル等のエーテル類との混合溶媒等を挙げること
ができる。 未分解固形物のエージングは、室温にて数ケ月
〜数年、好ましくは６ケ月〜５年程度行えばよ
い。 発明の効果 本発明固定化酵素は、以下の如き優れた効果を
示す。 (1) 本発明固定化酵素は、従来の固定化β−グル
コシダーゼに比べ、極めて高いβ−グルコシダ
ーゼ活性を示す。 (2) 本発明固定化酵素は、繰返し使用が可能であ
り、その上繰返し使用してもその活性が低下し
ない。 (3) 従来難分解性であるため廃棄されてきたセル
ロース性物質中の未分解固形物を担体として使
用するため、担体の堅牢性も充分である。 (4) 固定化方法が簡便であるため、コストが著し
く低減される。 実施例 以下に実施例を挙げ、本発明を更に詳しく説明
する。 実施例 １ リン酸塩緩衝液（PH4.6）に、ボールミル粉砕
したカラマツ木粉１ｇを入れ、45℃に予熱した
後、精製セルラーゼの混合物の１％水溶液５mlを
加え、同温度で48時間振盪し、カラマツ木粉を糖
化した。尚精製セルラーゼとしては、市販のトリ
コデルマ・ビリデ起源のセルラーゼ（セルラー
ゼ・オノヅカＲ−10）と市販のアスペルギルス・
ニゲル起源のセルラーゼ（セルロシンAP）とを、
夫々限外過して分子量１万以下をカツトし凍結
乾燥したものを１：１の割合で混合して使用し
た。木粉の35％が分解した。別した未分解固形
物をメタノール10mlで洗浄して乾燥し、室温で１
年間保存して本発明固定化酵素を得た。 得られた本発明固定化酵素２mgを４mlのPH4.5
の酢酸緩衝液に加え、40℃で15分予熱し、１mlの
0.15％ｐ−ニトロフエニル−β−Ｄ−グルコシド
水溶液を加えて10分間反応させた。反応後、反応
液0.5mlをとり0.1M炭酸ナトリウム水溶液4.5mlを
添加して生成したｐ−ニトフエノールをフエノレ
ート化し、400nｍの吸光度を測定して生成した
グルコース量を算出した。使用した本発明固定化
酵素を水で洗浄して繰り返し使用し、その都度生
成グルコース量を測定した。結果を第１表に示
す。
【表】
本発明固定化酵素には、当初用いた酵素のβ−
グルコシダーゼが88％の高率で固定化されてお
り、７回繰り返し使用した場合も、当初に用いた
酵素活性の60％が固定化されていた。 実施例 ２ 酢酸緩衝液（PH4.0）80mlに、ボールミル粉砕
したアカマツ木粉４ｇを入れ、更にセルラーゼ・
オノヅカＲ−10を限外過（アミコンPM10）に
より分子量１万以下をカツトし凍結乾燥したもの
の１％上記緩衝液溶液20mlを加え、40℃で48時間
振盪してアカマツ木粉を糖化した。糖化後、溶液
と未分解固形物とを別した。溶液から2.84ｇの
グルコースが得られ、また1.16ｇの未分解固形物
が得られた。得られた未分解固形物をアセトン５
mlで２回洗浄して風乾し、これを室温で６ケ月保
存し、本発明固定化酵素を得た。 得られた本発明固定化酵素を使用し、実施例１
に示したのと同様の方法でβ−グルコシダーゼ活
性の指標となるグルコースの生成量を測定した。
グルコース生成量は、0.0061μmole Glc／mg・
minであつた。β−グルコシダーゼ活性の測定に
使用した本発明固定化酵素を洗浄し、上記と同様
の方法で再びβ−グルコシダーゼ活性を測定し
た。グルコース生成量は0.0060μmole Glc／mg・
minであつた。 本発明固定化酵素のカルボキシメチルセルラー
ゼ（以下CMCaseとする）活性並びにアビセラー
ゼ活性は、共に痕跡程度であつた。尚、この２種
の酵素は、β−グルコシダーゼとともにセルラー
ゼの主成分となるものである。 実施例 ３ 500ml容フラスコに、炭素源として適量のセル
ロース粉末を加えた水溶性栄養培地100mlを入れ、
これにトリコデルマ・ビリデQM414を接種した
後、30℃で好気条件下６日間培養した。培養液の
PHは常に5.4に調節した。別の100ml容フラスコ
に、ボールミル粉砕したブナ木粉２ｇを入れ、こ
れに前記培養液50mlを加え、40℃で48時間振盪し
た。 未分解固形物を別し、液中に含まれる還元
糖をネルソン−ソモジ（Nelson−Somogyi）法
で定量したところ、糖生成率は68％であつた。 得られた未分解固形物を、エタノール５mlで２
回洗浄して減圧乾燥し、１年間保存して本発明固
定化酵素を得た。 得られた本発明固定化酵素640mgのβ−グルコ
シダーゼ活性を、実施例１と同様にして測定し
た。グルコースの生成量は0.005μmole Glc／
mg・minであつた。CMCase活性並びにアビセラ
ーゼ活性は、ほとんど検出されなかつた。 実施例 ４ クエン酸塩緩衝液（PH4.5）80mlに、ボールミ
ル粉砕したブナ木粉４ｇを入れ、40℃に予熱した
後、酵素の1.5％上記緩衝液溶液20mlを加え、同
温度で48時間振盪し、ブナ木粉を糖化した。酵素
としては、実施例１と同様のものを使用した。木
粉の68％が分解した。別した未分解固形物を、
エタノール10mlで洗浄ついで石油エーテル５mlで
洗浄して乾燥し、６ケ月室温で保存して本発明固
定化酵素を得た。 得られた本発明固定化酵素１ｇをガラスカラム
に充填し、その周囲を温水で40℃に保温した。脱
リグニン処理をしたレツドラワン２ｇにセルラー
ゼ・オノヅカＲ−10の0.2％酢酸緩衝液（PH4.5）
溶液40mlを加えて45℃で６時間振盪して得られた
レツドラワン糖化溶液を、上記カラムに５ml／ｈ
の流速で流し、カラムへ流す前後のレツドラワン
糖化溶液中のグルコース量を比較した。カラム通
過後のグルコース量は、通過前に比べ、５mg
Glu／mlに増加していた。 実施例 ５ 50ml容フラスコに、ボールミル粉砕したセルロ
ース１ｇと酢酸塩緩衝液（PH4.8）20mlとを入れ、
20分間予熱した。これに、セルラーゼ・オノヅカ
Ｒ−10とセルロシンAPとの１；１混合物の３％
上記緩衝液溶液５mlを加え、40℃で48時間振盪
し、セルロースを糖化した。溶液と未分解固形物
とを別し、得られた未分解固形物0.15ｇを、エ
タノール５ml次いでエーテル３mlで洗浄して風乾
し、６ケ月室温で放置して本発明固定化酵素を得
た。 得られた本発明固定化酵素10mgを三角フラスコ
に入れ、これにセロビオースの0.05％酢酸塩緩衝
液（PH4.5）溶液10mlを加え、40℃でグルコース
生成量を測定したところ、0.027μmole Glc／
mg・minであつた。 実施例 ６ 乾燥し、一辺３cmの正方形片とした新聞紙２ｇ
を50mlの水に懸濁し、これにセルロシンAP150mg
を加え、45℃で24時間振盪して新聞紙を糖化し
た。遠心分離して未分解固形物を分離し、得られ
た未分解固形物をアセトン15mlに懸濁し、次いで
過して減圧乾燥した。これを室温で８ケ月保存
し、本発明固定化酵素を得た。 得られた本発明固定化酵素40mgのβ−グルコシ
ダーゼ活性を、実施例１と同様にして測定した。
グルコース生成量は、0.0021μmole Glc／mg・
minであつた。 以上に挙げた実施例１〜６より、本発明固定化
酵素が優れたβ−グルコシダーゼ活性を有し、繰
り返し使用が可能であり、その上繰り返し使用し
てもその活性が低下しないことが判る。
グルコシダーゼが88％の高率で固定化されてお
り、７回繰り返し使用した場合も、当初に用いた
酵素活性の60％が固定化されていた。 実施例 ２ 酢酸緩衝液（PH4.0）80mlに、ボールミル粉砕
したアカマツ木粉４ｇを入れ、更にセルラーゼ・
オノヅカＲ−10を限外過（アミコンPM10）に
より分子量１万以下をカツトし凍結乾燥したもの
の１％上記緩衝液溶液20mlを加え、40℃で48時間
振盪してアカマツ木粉を糖化した。糖化後、溶液
と未分解固形物とを別した。溶液から2.84ｇの
グルコースが得られ、また1.16ｇの未分解固形物
が得られた。得られた未分解固形物をアセトン５
mlで２回洗浄して風乾し、これを室温で６ケ月保
存し、本発明固定化酵素を得た。 得られた本発明固定化酵素を使用し、実施例１
に示したのと同様の方法でβ−グルコシダーゼ活
性の指標となるグルコースの生成量を測定した。
グルコース生成量は、0.0061μmole Glc／mg・
minであつた。β−グルコシダーゼ活性の測定に
使用した本発明固定化酵素を洗浄し、上記と同様
の方法で再びβ−グルコシダーゼ活性を測定し
た。グルコース生成量は0.0060μmole Glc／mg・
minであつた。 本発明固定化酵素のカルボキシメチルセルラー
ゼ（以下CMCaseとする）活性並びにアビセラー
ゼ活性は、共に痕跡程度であつた。尚、この２種
の酵素は、β−グルコシダーゼとともにセルラー
ゼの主成分となるものである。 実施例 ３ 500ml容フラスコに、炭素源として適量のセル
ロース粉末を加えた水溶性栄養培地100mlを入れ、
これにトリコデルマ・ビリデQM414を接種した
後、30℃で好気条件下６日間培養した。培養液の
PHは常に5.4に調節した。別の100ml容フラスコ
に、ボールミル粉砕したブナ木粉２ｇを入れ、こ
れに前記培養液50mlを加え、40℃で48時間振盪し
た。 未分解固形物を別し、液中に含まれる還元
糖をネルソン−ソモジ（Nelson−Somogyi）法
で定量したところ、糖生成率は68％であつた。 得られた未分解固形物を、エタノール５mlで２
回洗浄して減圧乾燥し、１年間保存して本発明固
定化酵素を得た。 得られた本発明固定化酵素640mgのβ−グルコ
シダーゼ活性を、実施例１と同様にして測定し
た。グルコースの生成量は0.005μmole Glc／
mg・minであつた。CMCase活性並びにアビセラ
ーゼ活性は、ほとんど検出されなかつた。 実施例 ４ クエン酸塩緩衝液（PH4.5）80mlに、ボールミ
ル粉砕したブナ木粉４ｇを入れ、40℃に予熱した
後、酵素の1.5％上記緩衝液溶液20mlを加え、同
温度で48時間振盪し、ブナ木粉を糖化した。酵素
としては、実施例１と同様のものを使用した。木
粉の68％が分解した。別した未分解固形物を、
エタノール10mlで洗浄ついで石油エーテル５mlで
洗浄して乾燥し、６ケ月室温で保存して本発明固
定化酵素を得た。 得られた本発明固定化酵素１ｇをガラスカラム
に充填し、その周囲を温水で40℃に保温した。脱
リグニン処理をしたレツドラワン２ｇにセルラー
ゼ・オノヅカＲ−10の0.2％酢酸緩衝液（PH4.5）
溶液40mlを加えて45℃で６時間振盪して得られた
レツドラワン糖化溶液を、上記カラムに５ml／ｈ
の流速で流し、カラムへ流す前後のレツドラワン
糖化溶液中のグルコース量を比較した。カラム通
過後のグルコース量は、通過前に比べ、５mg
Glu／mlに増加していた。 実施例 ５ 50ml容フラスコに、ボールミル粉砕したセルロ
ース１ｇと酢酸塩緩衝液（PH4.8）20mlとを入れ、
20分間予熱した。これに、セルラーゼ・オノヅカ
Ｒ−10とセルロシンAPとの１；１混合物の３％
上記緩衝液溶液５mlを加え、40℃で48時間振盪
し、セルロースを糖化した。溶液と未分解固形物
とを別し、得られた未分解固形物0.15ｇを、エ
タノール５ml次いでエーテル３mlで洗浄して風乾
し、６ケ月室温で放置して本発明固定化酵素を得
た。 得られた本発明固定化酵素10mgを三角フラスコ
に入れ、これにセロビオースの0.05％酢酸塩緩衝
液（PH4.5）溶液10mlを加え、40℃でグルコース
生成量を測定したところ、0.027μmole Glc／
mg・minであつた。 実施例 ６ 乾燥し、一辺３cmの正方形片とした新聞紙２ｇ
を50mlの水に懸濁し、これにセルロシンAP150mg
を加え、45℃で24時間振盪して新聞紙を糖化し
た。遠心分離して未分解固形物を分離し、得られ
た未分解固形物をアセトン15mlに懸濁し、次いで
過して減圧乾燥した。これを室温で８ケ月保存
し、本発明固定化酵素を得た。 得られた本発明固定化酵素40mgのβ−グルコシ
ダーゼ活性を、実施例１と同様にして測定した。
グルコース生成量は、0.0021μmole Glc／mg・
minであつた。 以上に挙げた実施例１〜６より、本発明固定化
酵素が優れたβ−グルコシダーゼ活性を有し、繰
り返し使用が可能であり、その上繰り返し使用し
てもその活性が低下しないことが判る。
Claims (1)
- １ セルロース性物質にセルラーゼ類を作用させ
て生成する可溶性成分を分離した後の未分解固形
物を、有機溶媒で洗浄後エージングすることを特
徴とする固定化β−グルコシダーゼの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15106186A JPS637787A (ja) | 1986-06-26 | 1986-06-26 | 固定化β−グルコシダ−ゼの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15106186A JPS637787A (ja) | 1986-06-26 | 1986-06-26 | 固定化β−グルコシダ−ゼの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS637787A JPS637787A (ja) | 1988-01-13 |
| JPH026514B2 true JPH026514B2 (ja) | 1990-02-09 |
Family
ID=15510444
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15106186A Granted JPS637787A (ja) | 1986-06-26 | 1986-06-26 | 固定化β−グルコシダ−ゼの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS637787A (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100375161B1 (ko) * | 2000-06-27 | 2003-03-08 | 박대원 | 고정화 β-글루코시다제를 이용한 알킬글루코시드의제조방법 |
| KR100449170B1 (ko) * | 2002-01-21 | 2004-09-16 | 학교법인고려중앙학원 | 셀룰라아제(Cellulase)와 자일란아제(xylanase)를 생산하는 아스퍼질러스 나이거(Aspergillus niger) KK2 균주와 이에 의해 제조된 효소 및 고체 배양물 |
-
1986
- 1986-06-26 JP JP15106186A patent/JPS637787A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS637787A (ja) | 1988-01-13 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |