JPH0265867A - ポリマー表面への内皮細胞付着方法及びその方法による物品 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、表面に細胞を付着させる方法に関する。さら
に詳細には本発明は、ポリマー表面に内皮細胞の層を付
着させる方法及びこのようにして作製された表面に関す
る。

（従来の技術） 体液に対して生物学的及び化学的に安定な物質を見出す
ため、長年にわたって多くの検討がなされている０本研
究分野は、血液と接触する可能性のある種々の物品（例
えば、人工臓器、脈管移植片、消息子、カニユーレ、及
びカテーテル等）が開発されるにつれ、益々重要となっ
てきている。

このような物品に対する好ましい物質として、合成プラ
スチック類が広く使用されている。しかしながら、これ
らの物質はトロンボゲンを形成するという大きな欠点を
存する。殆どのプラスチック類に比べて血液との適合性
が良いポリテトラフルオロエチレンやシリコーンゴムの
ようなプラスチックでも、トロンボゲンを形成する傾向
がある。

従来、ヘパリンのような抗ａ血物質を使用することによ
って、トロンポゲンの形成が防止されている。ヘパリン
で凝血防止する代表的な方法が、ウィリアムズらによる
米国特許第４，６１３，５１７号及びソロモンらによる
米国特許第４　、５２１　、５６４号明細書に開示され
ている。

過去３０年間にわたって、虚血の部分に血液の流れを回
復させるために、血液透析患者に血液の流れを与えるた
めに、そして動脈層の治療のために人工移植片が使用さ
れている。これらの方法は、一般に初めはうまくいくけ
れども、こうした移植片を受は入れた患者に対する長期
にわたる予後にはすすめられない、なぜなら、移植片物
質がトロンボゲンを形成しやすいために、フィブリンの
付着や細胞の付着が起こることによって、小さな直径の
移植片（４ｍｍ以下）は長時間たつと閉塞をきたすから
である。

理想的な血液−表面界面は自然に生成する内皮細胞であ
ると長い間考えられており、最近の研究では内皮化方法
に重点が置かれている。メイドリ（Ｍａｄｒｉ）らはジ
ャー　ル・オブ・セルバイオロジー　Ｊｏｕｒｎａｌ　
ｏｆ　Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏｌｏ　　９７１５３（１９８３
）において、介在性コラーゲン上に細胞が成長すると、
これらの細胞は増殖を起こし、連続的な細胞層を形成す
ると報告している。ウィリアムズらは２ｊ−ル・オブ・
サージカル・１サーチ（Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ　Ｓｕｒ　
１ｃａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）　３８＋　６１８（１９
６５）において、人工器官の移植片物質をフィブロネク
チン、コラーゲン、又は血漿で前処理することについて
説明しており、処理していない移植片物質に対しては本
質的に付着力が生じないが、蛋白￥を被覆したポリエス
テル移植片の場合には付着力が大幅に増大する、と報告
している。ジャーレル（Ｊａｒｒｅｌ）らによる類似の
研究によれば〔アヌルズ・オブ・サージエ’　−Ａｎｎ
ａｌｓ　ｏｆ　Ｓｕｒ　ｅｒ　）　２０３．６７１（１
９８６）　）、１０分経過すると血小板の多い血漿で被
覆したポリエステルに、３０分経過すると羊膜／コラー
ゲン被覆したポリエステルに、そして２時間経過すると
何も被覆していないポリエステルに、内皮細胞が高い割
合で強固に付着するが、移植片が完全に覆われだのは羊
膜／コラーゲン被覆した表面だけである。

近年、小さな直径の脈管移植片を使用すると一般に良く
ない結果が得られるという点が注目されている。ヴアン
・ワケム（νａｎ　Ｗａｃｈｅｍ）らはＲ−（ｔマー１
アルズ（Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａ！ｓ　　６．４０３（１
９８５）において、４１以上のポリマー移植片を使用し
た場合には臨床的に良い結果が得られるが、４ｍｍ未満
の移植片を使用すると、すぐに閉塞を起こすために一般
には満足できるような臨床結果が得られない、と報告し
ている。同様にベイカー（Ｂａｋｅｒ）　　らはヱメｌ
カン・ジ　−　ル・オブ・サージヱ１−Ａｍｅｒｉｃａ
ｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｕｒ　ｅｒ　）　１５０
．１９７（１９８５）において、直径の大きな脈管移植
片の長期間にわたる開存性は比較的許容しうるが、直径
の小さな（４ｍｍ未満）移植片は長期間にわたって開存
している割合が低い、と述べている。

ベルダン（Ｂｅｌｄｅｎ）らはＴｒａｎｓ、　Ａｍ　　
Ｓｏｃ　　Ａｒｔｉｆ。

旦圏皿、紅■旦、　２８．１７３（１９８２）において
、内径４■のポリエステル脈管移植片への内皮細胞の接
種、及び大に移植した後の開存性について報告している
。

ある特定の結果を得るために、ポリマー表面を種々のプ
ラズマで処理して変性することがよく知られている。例
えば、表面湿潤性、静電特性、付着性ポリマー物質の層
が表面に付着する際の表面の受理性などについて報告さ
れている。リー・ｈ。

スミス（Ｌｅｅ　Ｍ、　Ｓｍ１ｔｈ）による博士論文″
支持体の表面特性によって影響される細胞付着”　〔ユ
タ大学材料科学・材料工学科、　１９７８．　ｐ、６７
）によれば、細胞の付着が表面の炭素／酸素比の関数で
あるとされている。ヴアン・ワケムらは前記文献におい
て、ガラス又はグロー放電処理したポリスチレン上で内
皮細胞を培養できることを説明している。

ダン（Ｄｕｎｎ）らによる米国特許筒４，４５２，６７
９号明細書は、ポリマー表面をプラズマで処理する（こ
のとき、プラズマの中性、陽性又は陰性の化学種の少な
くとも１種が表面に接触しないようにする）ことによっ
て特定の化学基を導入してポリマー表面を変性する方法
を開示している。

さらに出願者らは、処理されていないダクロン（Ｄａｃ
ｒｏｎ）　”ポリエステルの表面に対しては、内皮細胞
は部分的に付着するが、集密的には付着しないこと；２
４時間経過すると集密的に表面が覆われること；そして
血小板含量の多い血漿のような蛋白質で前処理したダク
ロンＴ＋″表面の場合には直ちに集密的な被覆がなされ
ること、などについて知見を得ている。本明細書におい
ては、“集密的″。

という用語は、あらゆる方向において連続的に存在して
いる細胞で実質的に覆われた表面を表すのに使用する。

（発明が解決しようとする課題） 抗トロンボゲンの人工器官用器具に関する広範な研究に
もかかわらず、トロンボダン形成の問題（特に直径の小
さい移植片に関して）は未だ十分に解決されてはいない
０本発明は、こうした問題の解決を目的としている。

（課題を解決するための手段） 本発明の１つのＢ様は、内皮細胞の集密的な層を有する
表面を作製する方法である。窒素を含んだ物質から生成
されるプラズマに、支持体を暴露する。プラズマ処理す
ると、アミノ基が支持体に結合する。アミノ基を含有し
た支持体に、支持体に付着する内皮細胞を接触させる。

接触媒体における細胞の密度は、細胞の増殖を起こさせ
る必要なく、付着している細胞が支持体上に集密的な層
を形成するのに十分な密度とする。好ましい支持体はポ
リマーである。

本発明の他の７ＩＪｌ様は、付着した内皮細胞の集密的
な層を有するプラズマ処理した支持体からなる抗トロン
ボゲン物品である０本物品はポリマーであるのが好まし
く、いかなる形状のものであってもよい、好ましい物品
は、内径が０　、５ｍｍ以上の導管である。ある１つの
好ましい実施態様は、内径が約２〜６ｍｇ＋の導管であ
る。これらの導管の管腔壁は、プラズマ処理され、そし
て内皮化されている。

プラズマは、イオン化することのできるいかなる窒素源
からも生成させることができる。好ましいプラズマはア
ンモニアから生成させたプラズマであり、低濃度の酸素
を含有したアンモニアから生成させたプラズマが最も好
ましい。

例えば緩衝塩水のような適切な媒体中で、好ましくは培
養条件下にて、プラズマ処理した支持体に内皮細胞を接
触させて、支持体上に細胞の付着した集密的な層を形成
させることができる。

従って本発明によれば、物品の表面をプラズマで前処理
してアミノ基を多く含んだ表面にする工程；及びこの表
面に内皮細胞を施す工程；を含む２工程からなる方法に
よって、プラズマ処理したポリマー表面及び付着性上皮
細胞の集密的な層を有する物品を作製することができる
。内皮化の前にプラズマ処理した表面は極めて安定であ
り、従って保存寿命が長い、細胞は速やかに付着し、細
胞増殖なしで集密的となるので、本発明のプラズマ処理
した表面を有する人工器官用器具は、在庫品から取り出
し、内皮化し、そして十分な細胞が用意されたらその数
分以内に移植に供することができる０手術を受ける患者
にとって、迅速に処置できることの利点は明らかである
。

本発明は多くの異なった形の実施態様によって達成され
るけれども、本明細書では本発明の好ましい実施態様に
ついて詳細に説明する。但し、本開示内容は本発明の原
理の代表的なものを示しており、本発明はこれらの実施
態様によって限定されるものではないことは言うまでも
ない。本発明の範囲は、特許請求の範囲とそれらの等個
物によって判断される。

本発明の１つのＢ様は、有機支持体や無機支持体の表面
を不可逆的に変性する方法である。さらに詳細には、本
発明によれば、細胞の付着と密着を容易にするために、
−ｉｒ機支持体及び無機支持体の表面に気化物質のプラ
ズマを接触させることにより当該支持体の表面上に官能
基をもつ特定の化学種を結合させることによって、有機
・無機支持体の表面が不可逆的に変性される。

本発明は、天然高分子及び合成による付加重合体や縮合
重合体も含めた固体ポリマー物質の表面を変性するのに
利用することができる。このようなポリマー物質として
は（但し以下に記載のものに限定されない）、ポリエチ
レン、ポリプロピレン、ポリイソブチレン、及びエチレ
ン−α−オレフィンコポリマー等のポリオレフィン；ポ
リアクリレート、ポリメチルメタクリレート、及びポリ
エチルアクリレート等のアクリルポリマーやアクリルコ
ポリマー；ポリ塩化ビニル等のビニルハロゲン化物ポリ
マーやコポリマー：ポリビニルメチルエーテル等のポリ
ビニルエーテル；ポリフッ化ビニリデンやポリ塩化ビニ
リデン等のポリハロゲン化ビニリデン：ポリアクリロニ
トリル；ポリビニルケトン；ポリスチレン等のポリビニ
ル芳香族化合物；ポリ酢酸ビニル等のポリビニルエステ
ル；エチレンーメククリル酸メチルコポリマー、アクリ
ロニトリル−スチレンコポリマー　ＡＢＳ樹脂、及ヒエ
チレンー酢酸ビニルコポリマー等のビニルモノマー同士
又はビニルモノマーとオレフィンのコポリマー；ブタジ
ェン−スチレンコポリマーポリイソプレン、合成ポリイ
ソプレン、ポリブタジェン、ブタジェン−アクリロニト
リルコポリマ、ポリクロロプレンゴム、ポリイソブチレ
ンゴム、エチレン−プロピレンジエンゴム、イソブチレ
ン−イソプレンコポリマー、及びポリウレタンゴム等も
含めた、天然ゴム及び合成ゴム；ナイロン６６やポリカ
プロラクタム等のポリアミド；ポリエチレンテレフタレ
ートやアルキド樹脂等のポリエステル：フェノール−ホ
ルムアルデヒド樹脂ユリアーホルムアルデヒド樹脂；メ
ラミン−ホルムアルデヒド樹脂；ポリカーボネート；ポ
リオキシメチレン；ポリイミド；ポリエーテル；エポキ
シ樹脂；ポリウレタン；羊毛；綿；絹；レーヨン；レー
ヨン−トリアセテート；セルロース；酢酸セルロース；
酪酸セルロース：酢酪酸セルロース；セロファン；硝酸
セルロース；プロピオン酸セルロース；セルロースエー
テル；並びにカルボキシメチルセルロースなどがある。

本発明に従ってその表面を変性することのできる無機物
質としては（但し以下に記載のものに限定されない）、
グラファイト等の非金属；鉄、アルミニウム、錫、銅、
及びニッケル等の金属；酸化マグネシウム、シリカ、ア
ルミナ、及びチタニア等の金属元素や他の元素の酸化物
；クレー、黄鉄鉱、及びアスベスト等の鉱物；塩化ナト
リウムや炭酸カルシウム等の塩；並びにガラスや耐火物
のような合成組成物などがある。

支持体（有機物・無機物いずれの場合も）は、比較的平
ら又は湾曲したいかなる形状でもよく、また連続状又は
粒状であっても、多孔質又は不透質であっても、そして
大きくても又は小さくても、いかなる構成であってもよ
い０本発明は、結晶、粉末、プレート、ストリップ、フ
ィルム、シート、ワイヤ、繊維、布帛、フィラメント、
チェーブ、及び注型品・押出品・又は圧縮成形品等の表
面を変性するのに利用することができる。

本発明に従ったほとんどのプラズマ処理に対しては、従
来のプラズマ発生器を使用することができる。このよう
な発生器としては、内部及び外部の容量結合、電磁結合
、抵抗結合、並びに導波管法を利用した、熱プラズマ発
生器、無線周波プラズマ発生器、直流プラズマ発生器、
可聴周波プラズマ発生器、及びマイクロ波プラズマ発生
器などがある。内部主桟、又は可聴周波数から無線周波
数をへてマイクロ波周波数までのより高い周波数？ｆａ
を備えた電磁手段もしくは容量手段を使用したカップリ
ングによって発生されるＤＣ又は低周波ＡＣグロー放電
により、電気的励起が与えられる。

さらにマイクロ波導波管法も使用することができる。適
切なプラズマ発生器の代表的なものとしては、ブランソ
ン（Ｂｒａｎｓｏｎ）　／ＩＰＣ製のプラズマ反応！及
びプラズマ・サイエンス・Ｉｎｃ、製のプラズマ表面処
理システムなどがある。

小さな直径の導管をプラズマで処理する本発明の好まし
い実施態様の場合、本明細書と共に同じ日付で提出して
いる同時係属中の特許出願に開示の装置を使用するのが
好ましい。この同時係属中の特許出願（本発明と共通の
譲受人）を参照の形でここに引用する。

本発明に従ったプラズマはいかなるガス又はガス状混合
物からも生成させることができ、移植されるガスからの
反応性官能基を表面に与える。好適なガスとしては、例
えば、酸素、窒素、及びメタノール、アセトニトリル、
又はシアン化水素のような、酸素もしくは窒素の低分子
量有機・無機化合物などがある。好ましいガスは、窒素
、１〜６個の炭素原子を有する脂肪族アミノ、ヒドラジ
ン、アンモニア、又はこれらの混合物等の窒素含有化合
物である。ガス混合物中には、水素、ノ＼ロゲン、並び
にヘリウム、ネオン、クリプトン、及びキセノン等の不
゛活性ガスのような他の成分が存在してもよい。

細胞付着の調製における表面変性のための好ましいプラ
ズマは、低濃度の酸素を含有したアンモニアから生成さ
れる。酸素とアンモニアの比は約０．００５〜０．８、
好ましくは０．０１〜０．１である。所望の比は、従来
のポンプダウンの後に、適当量のガスを反応チャンバー
中に供給することによって達成することができる。しか
しながら、本発明に従った表面処理の場合では、ポンプ
ダウン後の真空チャンバー中に十分な量の酸素が残存し
ていて、これにより所望の比が得られることが多い、チ
ャンバー中に残存している酸素の量が、排気されたチャ
ンバーのポンプダウン圧力に関係していることは明らか
である。従って、適切なトータルガス圧力範囲内での所
望の酸素／窒素比は、チャンバーを所定の圧力にまで排
気し、そして必要量のアンモニアを供給することによっ
て達成される。

般には、単にポンプダウン時間を調節することによって
、所望の酸素濃度にかなり近い濃度が得られる。

本発明に従った表面変性を行うだめのプラズマ生成は、
広範囲のエネルギー設定、無線周波数、暴露時間、温度
、及びガス圧力の下で行われる。

これらのパラメーターに関して有利な結果をもたらす範
囲は、ｏ、ｏｏｉ〜４００Ｗ／ｃ♂のレベルのＤＣ又は
ＡＣ出力密度、最大１００メガヘルツまでの振動周波数
、２秒〜１２時間の暴露時間、０〜２００°Ｃの温度、
及び０．０１〜１００トルのガス圧力である。これらの
パラメーターに対する好ましい範囲は、０．Ｏ１〜２０
〇−／ｃｉ３．５〜３０メガヘルツ、５秒〜１２０分、
１０−５０°Ｃ１及び０．０１〜２０トルである。ガス
の流量は、流れない状態から１秒当たりチャンバー容積
に相当する量が数回分置き換わる程度まで変えることが
できる。

酸素の濃度を制御するポンプダウン圧力は約０．１〜１
００　ミリトル、好ましくは約５〜５０ミリトルである
。ポンプの能力に応し、これらのポンプダウン圧力は約
１分〜７２時間で到達する。

アンモニア−酸素混合物から生成されるプラズマに暴露
することによって変性した本発明のポリマー表面は、そ
の表面に結合した形のアミノ基を含む。さらに表面と反
応性の酸素化学種との反応の結果として、カルボニル基
、カルボキシル基、ヒドロキシル基、エーテル基、及び
ペルオキシド基等の酸素含有基も存在する。

以下の例においては、酸素−アンモニア混合物から生成
されるプラズマにポリマー支持体がさらされる。プラズ
マ処理した支持体表面は、従来の化学分析電子分光法（
ＥＳＣＡ）により検討して結合エネルギーシフトを測定
し、そしてその結果から表面に対する官能基の特性を明
らかにすることができる０本発明のプラズマ処理した表
面と未処理の表面に対するＥＳＣＡ比較データを第１表
に示す。

プラズマによって支持体表面上にアミノ基及び酸素含有
基が導入されたことによって、支持体表面は細胞の付着
及び密着に対してなじみ易くなっている０本発明の方法
の第２工程においては、いかなるタイプの細胞も本発明
のプラズマ処理した表面に施すことができる。一般に、
適切な細胞のタイプは上皮タイプのものである。プラズ
マ処理した表面に施すための最も好ましい細胞は内皮細
胞である。種々の供給源から内皮細胞を単離して精製す
る方法はよく知られており、本発明のプラズマ処理した
支持体表面に密着させるための細胞の供給は本発明の一
部を構成してはいない。

プラズマ処理した支持体表面と媒体中にｇ４させた十分
な量の細胞とを接触させて、細胞の増殖を起こさせる必
要なく、密着した集密的な層を形成させることによって
、内皮化を行うことができる０本発明に従い、この方法
及び懸濁用媒体をそれぞれ被覆法（ｓｏｄｄｉｎｇ）及
び被覆用媒体（ｓｏｄｄｉｎｇｍｅｄｉｕｍ）と呼ぶ。

細胞に対して有害でなければいかなる被覆用媒体も使用
することができる。好ましい被覆用媒体は、例えば緩衝
塩水のような緩衝液である。細胞は、一般に約１分〜６
０分経過すると集密的に密着する。必要であれば、被覆
した表面を約１０〜５０゛Ｃ（好ましくは３７°Ｃ）の
温度で培養することによって密着を促進してもよい。

プラズマ処理した表面を被覆するのに必要な細胞の数は
、ポリマーの種類及びプラズマ処理後の表面化学に従っ
て幾分変わる。一般に、被覆すべき表面１ｃ１１”当た
り約１０５個の細胞があれば十分であるが、さらに高い
濃度で使用してもよい。細胞数の決定及び被覆用媒体中
の細胞の濃度（これは重要なポイントではない）につい
ては、当接術者には公知である。同様に、染色後に走査
電子顕微鏡又は光学顕微鏡によって細胞の付着性や集密
性を調べることも、従来通りに行えばよい。

本発明の他の態様においては、プラズマ処理した表面及
びこのプラズマ処理した表面に直接付着した集密性の内
皮細胞府を存する抗トロンボゲンの物品が提供される。

本発明の範囲内に入る代表的な物品は血液と接触する人
工器官用器具であり、人工心臓、人工心臓弁、ビン、及
び好ましくは脈管移植片などがある（但し、これらに限
定されない）０本発明の最も好ましい物品は、プラズマ
処理して内皮化した管腔壁を存する内径が６ｍｍ以下の
導管のような、小さな直径の脈管移植片である。

災施■土 フラットなポリウレタンフィルムのサンプルをＲＦプラ
ズマ放電システムで変性した。３コへインチ離して配置
した一対の８インチ直径のアルミニウム雪掻を、直径１
２インチで高さ２２インチの真空チャンバー内に使用し
た。　ＲＦエネルギーを可変周波数発振器／増幅器の対
から“Ｔ”マツチングネットワークに、そしてシールさ
れたフィードスルーヲ使用してバラン変圧器を通して真
空チャンバー中に供給し、次いで平衡となったラインを
相対する側の水平電極と接続した。フィルムサンプルを
低いほうの電極の頂部に配置した。

チャンバーをポンプダウンし、６分間で６０ミリトルに
した。ポンプダウンを続けながら、正確な計量弁を通し
て、２００ミリトルの圧力を保持するのに十分な割合で
乾燥アンモニアガスをチャンバ中に供給した。本システ
ムを１分間パージした後、１０．５ＭＨｚ　２５ワツト
のＲＦプラズマを２分間生成させてフィルムを処理した
。処理終了後、本システムを大気に通気してサンプルを
取り出した。

ＥＳＣＡを使用してサンプルの表面化学を測定した。

処理したサンプルと処理していないサンプルに対して得
られた元素組成を第１表に示す。

実施例■ 直径の小さなポリスチレン導管の プラズマ処理 前記同時係属中の出願に記載のプラズマ発生器にて生成
させたプラズマに、長さ１５ｃｍ、内径２．５ｍｍのポ
リスチレンチューブ断片の内壁を暴露した。

１１．４ＭＩＩｚ　７５ワツトのＲＦプラズマを使用し
たこと、及びアンモニアガスの圧力を１４トルに保持し
たこと以外は、実施例Ｉの場合と類似のプラズマ処理条
件を適用した。処理時間は２５秒であった。

実施例■ 直径の小さなポリウレタン導管の プラズマ処理 長さ１００ｃｍ、内径３．５ｎ＋ｍのポリウレタン導管
断片の内壁を、実施例Ｈにて記載したようにプラズマ変
性した。

実施例■ 内皮細胞をポリマー表面に付着 させるための−船釣な手順 プラズマ処理したポリマーフィルムを２ｃｍ”の面積の
ディスクにカントし、得られたディスクをファルコン（
ＦＡＬＣＯＮ）　ＴＩ″２４−ウェル（ｗｅｌｌ）組織
培養プレートのウェル中に配置した。１　ｍｌの１％ゼ
ラチンを６個のウェルそれぞれに、そして１　ｍｌの０
．９％塩水を他の６個のウェルに加えることによって、
一連の実験用対照標準を調製した。プラズマ処理したポ
リマーディスクを含有した各ウェルに、１ｍの０．９％
塩水を加えた。両方の２４−ウェルプレートをパラフィ
ルムで被覆し、４°Ｃで２４時間保持して、試験表面及
び対照標準表面に十分に水和が起こるようにした。

ゼラチンと塩水からなる溶液を吸引によって除去し、１
ｍｆｌ当たり２．５Ｘ１０Ｓ個の内皮細胞を含有した０
　、　８　ｍｌのストックＱｔａン夜をウェルにカロえ
た。

この内皮細胞を５％二酸化炭素の雰囲気中３７°Ｃで１
時間培養し、緩衝液で洗浄し、そしてトリプシンを使用
してデカントした。試験表面と対照標準を再び洗浄し、
密着した細胞をヘマトキシリンで染色した。標準的な光
学顕微鏡法を使用して、密着した細胞の数を求めた。

本実験の結果を、密着した内皮細胞の個体群密度（種々
のプラズマ処理したポリマー組成物に関してｌｃｎ＋”
当たりの細胞の数）として第■表に示す。

ポリエチレンテレフタレート サンプルＰＥＴ−１ サンプルＰＵＴ−２ ポリスチレン サンプルＰＳ−１ サンプルＰＳ−２ ポリウレタン サンプルＰＵ−１ サンプルＰＵ−２ サンプルＰＵ−３ サンプルＰＩ−４ サンプルＰＵ−５ ポリオレフィン サンプルＰＯ−１ サンプルＰＯ−２ サンプルＰＯ−３ サンプルＰＯ−４ ＋４２００ 実施例Ｖ −次性内皮細胞の密着性に対するプ ラズマ処理の影響 実施例■に記載したポリマー表面へ内皮細胞を付着させ
るための一般的手順を実施した後、プラズマ処理したポ
リウレタンのディスクサンプル及びプラズマ処理してい
ないポリウレタンのディスクサンプルに人間の一次性内
皮細胞の移植片を施した。２つのタイプのポリウレタン
について検討した。細胞の付着性の結果を第■表に示す
。−成性の内皮細胞は、ポリマー表面への付着に関して
、培養した内皮細胞と同じ傾向を示さないけれども、プ
ラズマ処理したポリマー表面に対する親和性のほうが未
処理のポリマー表面に対する親和性より相対的に高い。

未処理品 ７００５±５３０１ 実施例■ プラズマ処理した小直径ポリウレタン 導管の内壁への細胞の付着 実施例■と■に記載の条件を使用して、内径が３．５開
の実施例■のポリウレタン導管をプラズマ処理した。ポ
リマー表面積１ｃｍ”当たり２Ｘ１０’個の内皮細胞と
いう植えつけ密度にて（導管の管腔に対して算出）、実
施例■に記載の緩衝液中に一次性内皮細胞の個体群を懸
濁させた。

接続ポートの付いた支持用ガラスチューブ内に各チュー
ブを入れ、このガラスチューブ中に細胞９？ｆｉ液と緩
衝液を導入した。チューブを２つのグループに分けて培
養した。グループｒを１背当たり３６０回転の定速で軸
方向に回転させ、グループ■を１５分毎に９０回転とい
う増分にて軸方向に回転させた。５％二酸化炭素の雰囲
気において、３７°Ｃで１時間、両方のグループを培養
した。実施例■に記載の手順に従って、ゼラチンによる
対照標準も調製した。

細胞の密着性の結果を第Ｎ表に示す、どちらの培養方法
も内皮細胞の密着を起こさせることができるが、一定の
割合で回転させるとより均一な層が得られる。

（定速回転） （増分回転） サンプル４　　　　　　２１０１７ ゼラチン対照標準−１４６５２

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、（ａ）窒素を含んだガス状物質から生成されるプラ
   ズマをポリマー表面に接触させ、これによって前記ポリ
   マー表面が表面アミノ基を含有するよう変性される工程
   ；及び （ｂ）前記変性表面に十分な量の内皮細胞を施して、細
   胞の増殖を起こさせる必要なく、前記アミノ基含有表面
   に集密的細胞層を形成させる工程； を含む、ポリマー表面を内皮化する方法。 ２、前記ガス状物質が、水素、ハロゲン、アルゴン、ネ
   オン、クリプトン及びキセノン、酸素、並びに酸素化合
   物からなる群から選ばれる別の物質をさらに含む、請求
   項１記載の方法。 ３、（ａ）ガスから生成されるプラズマを表面に接触さ
   せ、これによって前記表面が前記ガスからの反応性官能
   基を含有するよう変性される工程；及び （ｂ）前記変性表面に十分な量の細胞を施して、細胞の
   増殖を起こさせる必要なく、前記官能基を含有した前記
   表面に集密的細胞層を形成させる工程； を含む、表面に細胞を施す方法。 ４、（ａ）ガスから生成されるプラズマでポリマー導管
   の管腔壁を処理する工程、このとき前記プラズマにより
   、前記ガスからの反応性官能基が前記管腔壁に結合され
   る；及び （ｂ）前記反応性官能基を含有した前記管腔壁を十分な
   量の内皮細胞でおおって、細胞の増殖を起こさせる必要
   なく、前記管腔壁に付着した集密的細胞層を形成させる
   工程； を含む方法。 ５、処理される前記管腔壁が４ｍｍ以下の内径を有する
   、請求項４記載の方法。 ６、（ａ）アミノ基を表面に結合した形で有するプラズ
   マ処理されたポリマー表面；及び（ｂ）アミノ基を有す
   る前記表面に付着した集密的内皮細胞層； を含む、トロンボゲンを形成しない物品。 ７、プレート、ストリップ、フィルム、シート、繊維、
   布帛、導管、及びキャストからなる群から選ばれる、請
   求項６記載の物品。 ８、（ａ）反応性官能基を表面に結合した形で有するプ
   ラズマ処理された表面；及び （ｂ）反応性官能基を有する前記表面に付着した集密的
   上皮細胞層； を含む、トロンボゲンを形成しない物品。 ９、前記官能基が、アミノ基及び酸素を含有した基から
   なる群から選ばれる、請求項８記載の物品。 １０、プラズマ処理された管腔壁を含んだ、内径が約６
   ｍｍ未満のポリマー導管であって、このとき前記管腔壁
   が当該管腔壁に結合したアミノ基、及び前記管腔壁に付
   着した集密的内皮細胞層を有していて、これにより前記
   導管がトロンボゲンを形成しないようになっている、前
   記ポリマー導管。