JPH0269499A - 環状ｇｒｆ類似体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明はヒトをはじめとする動物の下垂体の機能に影響
を及ぼすペプチドに関する。特に、本発明は下垂体から
の成長ホルモンの分泌を促進するペプチドに関する。

［従来技術］ 生理学者は、視床下部で産生される特殊な物質が下垂体
ホルモンの分泌を刺激または抑制して下垂体線部の分泌
機能を調節していることを長い間認めていた。１９７２
年に視床下部の抑制性因子が成長ホルモンの分泌を抑制
するソマトスタチンとして同定された。また、１９８２
年には、ヒト膵臓放出因子がヒトの膵臓腫瘍の抽出物か
ら単離され、精製、同定１合成および試験が行われた結
果、下垂体からの成長ホルモンの分泌を促進することが
判明した。これらの下垂体因子はともに全合成により再
生産され、天然構造の類似体が合成された。

ヒト視床下部成長ホルモン放出因子は完全に同一の構造
を有しているため、以下これをｈＧＲＦという。

［発明の概要〕 培養下垂体細胞から成長ホルモンを分泌させる合成ペプ
チドが現在合成されて試験を受けている。

このペプチドは生体内での酵素による分解を受けにくく
実質的効力が極めて高いものである。このような長所を
有しているのは、ペプチドが安定性の高いα−らせん形
をしているためであると考えられる。このペプチドは、
その２５位の残基と２９位の残基との間に環状になるた
めの結合を有しているのが好ましい。そして、その結合
はり、Ｌを問わずシスティン残基同士を結ぶジスルフィ
ド結合であるのが好ましい。あるいは、この結合は各々
の残基のアミノ側鎖とカルボキシル側鎖を結ぶアミド結
合であってもよい。ペプチドの１５位はＡｌａまたはβ
−Ａｌａであり、２７位はＮｌｅであるのが好ましい。

８位は、Ｌ　ｙｓ、　Ａｒｇ、　　Ｓ　ｅｒ、　　Ｇ　
ｌｕまたはＡｓｐのいずれであってもよい。ペプチドの
１位は、Ｔｙｒ、　　Ｄ−Ｔｙｒ、　Ｍｅｔ、　　Ｄ−
Ｍｅｔ、　　Ｐｈｅ、　　Ｄ　−Ｐｈｅ、　ｐＣ，Ｑ　
−Ｐｂｃ、　　Ｌｅｕ、　ＨｉｓまたはＤ−Ｈｉｓの中
の１残基である。１位の残基のα−炭素またはα−アミ
ノ基上にはメチル基が置換されていてもよい。また、α
−アミノ基は除去されていてもよい（ｄｅｓ　Ｎ　Ｈ２
）。さらにα−アミノ基はアシル化されていてもよく、
中でもアセチル（Ａｃ）化かホルミル（Ｆ　ｏｒ）化さ
れているのが好ましい。

ペプチドは２位にＤ−Ａｌａ、ＮＭＡまたはＤ−ＮＭＡ
を有しおよび／またはペプチドは３位にＤ−Ａｓｐを有
しおよび／または１２位にＡｒｇを有しおよび／または
１０位にＰｈｅかＤ−Ｔｙｒを有していてもよい。２７
位のＭｅｔまたはＮｌｅの代わりにＤ−Ｍ　ｅｔ、　Ｎ
　ｖａまたは他の残基を有しおよび／または２８位にＡ
ｓｎを存していてもよい。１３位または２２位はＬｅｕ
、　　Ｉ　ｌｅ、　　ＡｌａおよびＶａｌであってもよ
い。

本発明による医薬組成物は、薬学的にまたは獣医学的に
受容される液体または固体のキャリアーに分散された、
長さ約２９から４４残基の一上記の類似体またはそれら
のいずれ力Ｙの無毒性塩を含有する。

これらの医薬組成物はヒトおよび動物の臨床医学の分野
において使用され、治療または診断目的のために投与さ
れる。さらにまたこれらの医薬組成物は鳥禽を含む温血
動物や養殖の魚、うなぎ等の冷血動物の成長を促進する
のに用いることができる。

［発明の構成コ ペプチドを定義するために用いる命名法はシュレーダー
（Ｓｃｈｒｏｄｅｒ）およびリュプケ（Ｌｕｂｋｅ）の
ザ・ペプチド”アカデミツクプレス（１９６５）に明記
されるものであり、その際慣用的表示に従ってＮ末端の
アミノ基は左に、そしてＣ末端のカルボキシル基は右に
表わされる。天然アミノ酸とは、Ｇｌｙ、　　Ａｌａ、
　　Ｖａｌ、　　Ｌｅｕ、　　Ｉｌｅ、　　Ｓｅｒ、　
　Ｔｈｒ。

Ｌｙｓ、　　　Ａｒｇ、　　Ａｓｐ、　　Ａｓｎ、　　
　Ｇｌｕ、　　　Ｇｌｎ、　　　Ｃｙｓ。

Ｍｅｔ、　　Ｐｈｅ、　　Ｔｙｒ、　　Ｐｒｏ、　　Ｔ
ｒｐおよびＨｉｓからなるタンパク質中に見出される普
通の自然界に存在するアミノ酸のうちの１種を意味する
。Ｎｌｅはノルロイシンを意味し、Ｎｖａはノルバリン
を意味する。アミノ酸残基が異性体を有する場合は、特
に指定しない限り、表示されるアミノ酸のＬ体を意味す
る。Ｄ体およびＬ体のどちらでも良い場合には、小文字
で表記する。即ち、（ＪＳはＤ　−ＣｙｓかＬ　−Ｃｙ
ｓ；ｏｒｎはＤ−またはＬ−オルニチン；　ｄａｂはＤ
−またはＬ−α、γ−ジアミノブタン酸；ｄａｐはＤ−
またはＬ−α、β−ジアミノプロピオン酸：およびａｂ
ｕはα−アミノブタン酸を表す。Ｄ−ＮＭＡはα−アミ
ノ基がメチル基で置換されているアラニンのＤ−異性体
を表し、ＮＭＴも同様にＮ−メチルチロシンを表しＮａ
ＭｅＴｙｒとも表記する。

本発明は概して次のアミノ酸配列（Ｉ）を有する合成ペ
プチドを提供する。

（Ｂ）Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ａｌａ−ＩＩｅ−Ｐｈｅ　−
Ｔｈｒ　−Ｒ８−Ｓ　ｅｒ　−Ｒｌｏ−Ａｒｇ　−Ｒ１
２−Ｒ１３Ｌｅｕ　　Ｒ１５Ｇｌｎ　　Ｌｅｕ　　Ｒｌ
ｓ　　Ａｌａ　　Ａｒｇ−Ａｓｎ　−Ｇ　Ｉｎ　−Ｇ　
Ｉｕ　−Ｒ３８−Ｒ３９−Ｒ２Ｏ−Ａ　ｒｇ　−Ｒ４２
−Ｒ４３−Ｒ４４ （式中、Ｒ１はＴ　ｙｒ、　Ｄ　−Ｔ　ｙｒ、　Ｍｅｔ
、　Ｄ　−Ｍｅｔ。

Ｐｈｅ、　　Ｄ−Ｐｈｅ、　　ｐ（、Ｑ　−Ｐｈｅ、　
　Ｌｅｕ、　　ＨｉｓまたはＤ−Ｈｉｓであり；ＢはＨ
，ＣａＭｅ　、Ｎ　ａＭｅ　。

ｄｅｓ　ＮＨ２，ＡｃまたはＦｏｒであり；Ｒ２はＡｌ
ａ。

Ｄ−Ａｌａ、ＮＭＡまたはＤ−ＮＭＡであり；Ｒ３はＡ
ｓｐまたはＤ−Ａｓｐであり；Ｒ８はＳ　ｅｒ、　　Ａ
　ｓｎ。

Ｌ　ｙｓ、　　Ａ　ｒｇ、　　Ａ　ｓｐまたはＧｌｎで
あり；Ｒｌｏは’ｒｙｒ。

Ｄ−ＴｙｒまたはＰｈｅであり；Ｒ１２はＡｒｇまたは
Ｌｙｓであり；Ｒ１３はＩ　Ｉｅ、　　Ｖａｔ、　　Ｌ
ｅｕまたはＡｌａであり；Ｒ１５はＧ　Ｉｙ、　　Ａ　
ｌａまたはβ−Ａｌａであり；Ｒ１８はＳｅｒまたはＴ
ｙｒであり；Ｒ２１はＬｙｓ、Ｄ−Ｌ　ｙｓ、　　Ａ　
ｒｇまたはＤ　−Ａ　ｒｇであり；Ｒ２２はＬ　ｅｕ。

１１ｅ、ＡｌａまたはＶａｌであり；Ｒ２４はＧｌｎま
たはＨｌｓであり；Ｒ２５はＣｙｓ、　ａｂｕ、　ａｓ
ｐ、　ｇｌｕ、　ｏｒｎ。

Ｉｙｓ、　ｄａｂまたはｄａｐであり；Ｒ２７はＭｅｔ
、Ｄ−Ｍｅｔ、　Ａｌａ、　Ｎｌｅ、　　Ｉ　Ｉｅ、　
Ｌｅｕ、　ＮｖａまたはＶａｌであり；ＲはＡｓｎまた
はＳｅｒであり；Ｒ２９はｃｙｓ、　ａｂｕ、　ａｓｐ
、　ｇｌｕ、　ｏｒｎ、　Ｉｙｓ、　ｄａｂまたはｄａ
ｐであり；ＲはＳｅｒまたはＡｒｇであり；Ｒ３８はＡ
ｒｇまたはＧｉｎであり；Ｒ３９はＧｌｙまたはＡｒｇ
であり；Ｒ４０はＡｌａまたはＳｅｒであり；Ｒ４２は
ＰｈｅまたはＡｌａであり；Ｒ４３はＡｓｎまたはＡｒ
ｇであり；ＲはＬ　ｅｕ、　Ｖ　ａｌ等の天然アミノ酸
であり；Ｒ４４から始まり最長Ｒ２９に至るまでのＣ末
端配列は削除されていてもよい。）Ｒ２５がｃｙｓまた
はａｂｕのときＲもｃｙｓまたはａｂｕであり；Ｒ２５
がａｓｐまたはｇｌｕのときＲ２９はｏｒｎ、　Ｉｙｓ
、　ｄａｂ、またはｄａｐであり；これらは逆に後者が
指定されるとき前者も各々指定される。Ｃ末端のアミノ
酸残基のカルボキシル部分は、−ＣＯＯＲ，−ＣＲＯ。

−ＣＯＮＨＮＨＲ，−ＣＯＮ　（Ｒ）（Ｒ’）または−
ＣＨ２０Ｒ（ここでＲおよびＲ′は低級アルキル、フッ
化低級アルキルまたは水素を表わし；低級アルキルの中
ではメチル基、エチル基およびプロピル基が好ましい）
のいずれかであってもよい。

Ｎ末端から２９位の残基までのフラグメントは下垂体に
よる成長ホルモン分泌に効果を及ぼす生物活性を有して
おり、長さ２９または３２残基のＣ末端がアミドか置換
アミドである生物活性フラグメントであるのが最も好ま
しい。特に好ましいペプチド群は以下の配列を有するも
のである。

（Ｂ）ＲＬ　　Ｒ２Ｒ３Ａｌａ　　Ｉ！ｅ　　Ｐｈｅ−
Ｔｈｒ−３ｅｒ−８ｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｒ
Ｉ３Ｌ　ｅｕ　−Ｒｔ５−　Ｇ　Ｉｎ　−Ｌ　ｅｕ　−
Ｔ　ｙｒ　−Ａ　ｌａ　−Ａ　ｒｇ　−Ｒ２１−Ｒ２２
−Ｌｅｕ　−Ｈｌｓ　−Ｒ２５−Ｉ　ｌｅ　−Ｒ２７Ａ
ｓｎ　−Ｒ２９−Ｎ　Ｒ２ （式中、Ｒ１はＴ　ｙｒ、　Ｄ　−Ｔ　ｙｒ、　Ｍｅｔ
、　Ｄ　−Ｍｅｔ。

Ｐ　ｈｅ、　　Ｄ　−Ｐ　ｈｅ、　　ｐ　ＣΩ−Ｐ　ｈ
ｅ、　　Ｌ　ｅｕ、　　ＨｉｓまたはＤ−Ｈｉｓであり
；ＢはＨ，ＣＭｅ、Ｎ　　Ｍｅ。

ｄｅｓＮＨ２，ＡｃまたはＦｏｒであり；Ｒ２はＡｌａ
。

Ｄ−Ａｌａ、ＮＭＡまたはＤ−ＮＭＡであり；Ｒ３はＡ
ｓｐまたはＤ−ＡＳｐであり；Ｒ１３はＩｌｅ。

Ｖ　ａｔ、　　Ｌ　ｅｕまたはＡｌａであり；Ｒ１５は
Ｇｌｙ、　　Ａｌａまたはβ−Ａｌａであり；Ｒ２１は
Ｌ　ｙｓ、　　Ｄ　−Ｌ　ｙｓ。

ＡｒｇまたはＤ　−Ａ　ｒｇであり：Ｒ２２はＬｅｕ、
　　Ｉｌｅ。

ＡｌａまたはＶａｌであり；Ｒ２５はｃｙｓ、　ａｂｕ
、　ａｓｐ。

ｇｌｕ、　ｏｒｎ、　Ｉｙｓ、　ｄａｂまたはｄａｐで
あり；Ｒ２７はＭｅｔ、　Ｄ−Ｍｅｔ、　Ａｌａ、　Ｎ
ｌｅ、　　Ｉｌｅ、　　Ｌｅｕ、　ＮｖａまたはＶａｔ
であり；そしてＲ２９はｃｙｓ、　ａｂｕ、　ａｓｐ。

ｇｌｕ、　ｏｒｎ、　ｌｙｓ、　ｄａｂまたはｄａｐで
ある。）このペプチドが４０またはそれ以上の残基を有
する場合は、Ｃ末端部分に対する明確な好適性はない。

該ペプチドは、完全な固相法、部分的な固相法フラグメ
ントコンデンセーションあるいは古典的な液相カップリ
ングのような適当な方法により合成される。最近開発さ
れた複製型ＤＮＡ法の実施は、天然型アミノ酸残基のみ
を含有する類似体の一部を産生ずるのに使用されること
が可能であり、該類似体の部分は次に短い末端ペプチド
につなげることができる。例えば、完全な固相合成の技
術はテキスト「固相ペプチド合成（Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａ
ｓｅＰｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ）Ｊ　、スチ
ュワート（Ｓｔｅｗａｒｔ）およびヤング（Ｙｏｕｎｇ
）、　Ｆｒｅｅｍｂｎ　＆　Ｃｏ、、サンフランシスコ
（１９６９）において述べられ、ヴ工−ル（Ｖａｌｅ）
らによる１９７８年８月８日付米国特許第４、ＬＯ５，
６０３号に例示されている。基本的な液相合成法は論文
ｒＭｅｔｈｏｄｅｎ　ｄｅｖ　Ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ
　Ｃｈｅｍｉｅ（Ｉｌｏｒｂｅｎ−Ｗｅｙｌ）：　５ｙ
ｎｔｈｅｓｅ　ｖｏｎ　ＰｅｐｔｉｄｅｎＪ　、　　Ｅ
　。

ブンシュ（Ｖｕｎｓｃｈ）　Ｗ集、ゲオルグ・ティーム
出版、シュトゥットガルト、西独（１９７４）において
詳述される。合成のフラグメント縮合法は、１９７６年
８月３日付米国特許第３．９７２．８５９号に例示され
る。他の適用可能な合成は１９７４年１０月１５日付米
国特許第３，８４２．０６７号および１９７５年１月２
８日付米国特許第３．８６２，９２５号に例示される。

種々のアミノ酸成分の不安定な側鎖基を適当な保護基（
その基が最終的に除去されるまで、その部位で化学反応
が起こるのを防ぐ）で保護することは、この種の合成に
おいて一般的である。また、アミノ酸や断片がカルボキ
シル基の部位で反応する間その物質のα−アミノ基を保
護することも一般的であり、その後α−アミノ保護基を
選択的に除去してその位置で次の反応を行わせる。従っ
て、合成の一段階として、ペプチド鎖中に意図する配列
で位置するアミノ酸残基を含み且つ適当なアミノ酸残基
に側鎖保護基を結合した中間体化合物が生成することは
普通のことである。

従って、このような化学的合成法を使って本発明のペプ
チドを合成する際、以下の配列（ＩＩ）を有する中間体
が生成する： （Ｘ３）−Ａｉａ　−Ｉ　ｌｅ　−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ　（
Ｘ４）　−Ｒ（Ｘ”）−８ｅｔ（Ｘ４）−Ｒ（Ｘ２）−
Ａｒｇ（Ｘ６）−（Ｘ６）−Ｒ２□（Ｘ６またはＸｌ）
　　Ｒ２２Ｌｅｕ−式中、Ｘｌは水素またはα−アミノ
保護基である。Ｘｌに包含されるα−アミノ保護基は、
ポリペプチドの逐次合成の分野において有用であると知
られているものである。Ｘｌとして使用しうるα−アミ
ノ保護基の種類には（１）芳香族ウレタン型保護基、例
えばフルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆ　ｍｏｃ
）、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）　　およびｐ−ク
ロルベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオ
キシカルボニル、ｐ−ブロムベンジルオキシカルボニル
、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニルのような置換
２；（２）脂肪族ウレタン型保護基、例えばｔ−ブチル
オキシカルボニル（ＢＯＣ）　、ジイソプロピルメチル
オキシカルボニル、イソプロピルオキシカルボニル、エ
トキシカルボニル、およびアリルオキシカルボニル；お
よび（３）シクロアルキルウレタン型保護基、例えばシ
クロペンチルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカ
ルボニル、およびシクロヘキシルオキシカルボニル；が
含まれる。

好適なα−アミノ保護基は、たとえＮａＭｅ−置換アミ
ノ酸残基が１位に存在するときでも、ＢＯＣである。も
ちろんＢがｄ　ｅ　ｓ　Ｎ　Ｈ２またはＮＭｅのときＸ
ｌはＨである。

Ｘは水素原子またはＨｉｓのイミダゾール窒素のための
保護基（例えばＴｏｓ）である。

Ｘ２はＴｙｒのフェノール性ヒドロキシル基のための適
当な保護基であり、例えばテトラヒドロピラニル、ｔ−
ブチル、トリチル、Ｂｚｌ、ＣＢＺ。

４Ｂｒ−ＣＢＺおよび２．６−ジクロルベンジル（Ｄ　
ＣＢ）である。また、Ｘ２は水素原子であってもよく、
この場合はその位置のアミノ酸残基に側鎖保護基が存在
しないことを意味する。

Ｘ３は水素原子、もしくはＡｓｐまたはＧｌｕのカルボ
キシル基のための適当なエステル形成保護基、例えばベ
ンジル（ＯＢｚｌ）、２．６−ジクロルベンジル、メチ
ルおよびエチルである。

Ｘ４はＴｈｒまたはＳｅｒのヒドロキシル基のための適
当な保護基であり、例えばアセチル、ベンゾイル、ｔ−
ブチル、トリチル、テトラヒドロピラニル、　　Ｂｚｌ
、　　２．６−ジクロルベンジルおよびＣＢＺである。

好適な保護基はＢｚｌである。Ｘ４はまた水素原子であ
ってもよく、この場合はヒドロキシル基に保護基が存在
しないことを意味する。

Ｘ５は水素原子、もしくはＡｓｎまたはＧｌｎの側鎖ア
ミド基のための適当な保護基である。好ましくはそれは
キサンチル（Ｘ　ａｎ）である。

Ｘ６はＡｒｇのグアニジノ基のための適当な保護基、例
えばニトロ、Ｔｏｓ、ＣＢＺ、アダマンチルオキシカル
ボニルおよびＢＯＣであり、またＸ６は水素原子であり
うる。

Ｘｌは水素原子、もしくはＬｙｓの側鎖アミノ基のため
の適当な保護基である。適当な側鎖アミノ保護基の例は
２−クロルベンジルオキシカルボニル（２−ＣΩ−Ｚ）
、Ｔｏｓ、ｔ−アミルオキシカルボニルおよびＢＯＣで
ある。

Ｘ８はＣｙｓのスルフヒドリル基の保護基であって、ｐ
−メトキシベンジル（ＭｅＯＢｚｌ）　、Ｔ）−メチル
ベンジル、アセトアミドメチル、トリチルまたはＢｚｌ
；または保護基Ｘ７を同時に外すことなく除去すること
ができる、アミノ側鎖の適切な保護基（例えば、ＦＩＩ
ｌｏｃ等のアルカリに不安定な原子団）；または保護基
Ｘ３を同時に外すことなく除去することができる、カル
ボキシル側鎖の適切な原子団（例えば０ＦＩ１１〔フル
オレニルメチルエステル〕等のアルカリに不安定な原子
団）：または環状構造がカルバ（ｃａｒｂａ）またはジ
カルバ（ｄｉｃａｒｂａ）結合によるときには、２５位
と２９位の残基間の直接結合である。

Ｘ９は水素原子、もしくは一般的に先に示した適当な側
鎖保護基である。

Ｍｅｔは任意に酸素原子で保護しうるが、保護しない方
が好ましい。

側鎖アミノ保護基の選択は、一般に合成中のα〜ルアミ
ノ護基の除去の間に除去されないものを選ぶということ
を除いて限定的でない。しかしながら、いくつかのアミ
ノ酸例えばＨｉｓの場合はカップリング完了後に一般に
保護を必要とせず、従ってα−アミノ保護基と側鎖アミ
ノ保護基は同じものでありうる。

ＸＬＯはエステル形成基Ｘ３のようなＣ−末端力ルボキ
シル基に対する適当な保護基あるいは固相合成において
使用される、固体樹脂支持体への連結のためのアンカー
結合あるいはｄｅｓ　−Ｘ１０（この場合、残基はＣ−
末端において先に定義したカルボキシル部分Ｚを有する
）である。固体樹脂支持体が使用される場合、それは−
〇−ＣＨ２−樹脂支持体、−ＮＨ−ベンズヒドラミン（
ＢＨＡ）樹脂支持体または−ＮＨＮパーメチルベンズヒ
ドリラミン（ＭＢＨＡ）樹脂支持体のように当業者に既
知の担体のいずれかでありうる。非置換アミドが望まし
い場合にＢＨＡあるいはＭＢＨＡ樹脂の使用が好適なの
は、切断で直接波アミドを与えるからである。Ｎ−メチ
ルアミドが望ましい場合はＮ−メチルＢＨＡから得られ
うる。他の置換アミドが望ましい場合は米国特許節４．
５８９，９８７号の方法を用いることができる。また、
Ｃ末端として遊離酸以外のなお他の基が望ましい場合は
ホウベン−ウニイル（ｌ１ｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙ　Ｉ　）
の教科書にある基本的な方法を用いてペプチドを合成す
るのが好ましい。

例えば、最終的に得られる式中のＢがアセチルのときは
、１位に種々のアミノ酸のＸ１保護基が用いられるので
これを使用することが可能である。

しかし、ラセミ化が起こることがあるので、このような
保護の仕方は望ましいとは言えない。好ましいのは、樹
脂上でペプチドを反応させる方法である（側鎖官能基は
保護したままα−アミノ基を脱保護した後に行う）。例
えば、ジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）の存
在下で酢酸、好ましくは無水酢酸と反応させるか、ある
いは当業者に知られた他の適切な反応を行わせる方法が
ある。

中間体に対する式においてＸ−基の少なくとも１つは保
護基でありＸＩＯは樹脂支持体を含む。このように本発
明はまた以下のような対象となるペプチド製造の方法を
提供する。

（ａ）　　少なくとも１つの保護基と式（ｎ）を有する
ペプチドを形成し〔ここでｘ、ｘ’、ｘ２゜ｘ　　、ｘ
　　、ｘ　　、ｘ　　、ｘ　　、ｘ　　およびＸ９は各
々水素あるいは保護基であり、ＸＩＯは保護基または樹
脂支持体へのアンカー結合であるか、ｄｅｓ−Ｘ１０（
この場合、該残基はＣ−末端において望ましいカルボキ
シル基を有していてもよい）である〕　； （ｂ）　　式（ｆｆ）のペプチドから保護基またはアン
カー結合を除去し； （ｅ）　　工程（ｂ）の前または後に、Ｒ２５およびＲ
２９の間の結合が存在しない場合は両者を結合し；そし
て （ｄ）　　望ましい場合には、結果としてできるペプチ
ドをその無毒性塩に転化する。

ペプチド合成において使用する個々の側鎖保護基を選択
する場合、次の一般規則に従う。

（ａ）　　保護基はカップリング条件下でその保護特性
を保持して切断されない。

（ｂ）　　保護基は試薬に対して安定であるべきであり
、合成の各段階でα−アミノ保護基の除去のために選ば
れた反応条件下でＸａｎを除いて、安定であるのが好ま
しい。

（Ｃ）　　側鎖保護基は、意図するアミノ酸配列を含む
合成の完了時点に、ペプチド鎖を変性させない反応条件
下で除去できなければならない。

ペプチドが組換えＤＮＡ技法を用いないで製造される場
合、それらは好ましくはメリーフィールド（Ｍｅｒｒｉ
ｆｉｅｌｄ）のＪ、　Ａｍ、　ＣｂｅｒＩＪ、　Ｓｏｃ
、、　８５゜ｐ２１４９　（１９８３）に一般的に記述
されるような固相合成性を用いて製造される。しかし、
先に述べたように当分野で知られた他の同様の化学合成
法も使用しうる。固相合成法は保護したα−アミノ酸を
適当な樹脂にカップリングすることによって、ペプチド
のＣ末端から開始される。このような出発物質はα−ア
ミノ保護アミノ酸をクロルメチル化樹脂またはヒドロキ
シメチル樹脂へエステル結合によって結合するか、ある
いはＢＨＡ樹脂またはＭＢＨＡ樹脂ヘアミド結合するこ
とによって製造しうる。ヒドロキシメチル樹脂の製法は
ボダンスキー（Ｂｏｄａｏｓｋｙ）らのＣｈｅｍ　、　
Ｉ　ｎｄ　、　（ロンドン）３８、１５９７〜１５９８
　（１９６（３）に開示されている。クロルメチル化樹
脂はカリフォルニア州すッチモンドのバイオラッド研究
所（Ｂ１０　Ｒａｄ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）およ
びラブシステムズ社（Ｌａｂ、　Ｓｙｓｔｅｍｓ、　Ｉ
ｎｃ、）から市販されている。この種の樹脂の製法はス
チュワート（Ｓｔｅｗａｒｔ）らの「固相ペプチド合成
（Ｓｏｌｉｄ　Ｐｈａｓｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔ
ｈｅｓｉｓ）Ｊ　（Ｆｒｅｅｍａｎ　＆Ｃｏ、、　　サ
ンフランシスコ、　１９６９）第１章１〜６頁に開示さ
れている。ＢＨＡおよびＭＢＨＡ樹脂支持体は市販され
ており、一般に合成しようとする目的ポリペプチドがそ
のＣ末端に未置換アミド基をもつときにだけ使用される
。

Ｃ末端アミノ酸、例えばＢＯＣおよびＸａｎで保護され
たＡｓｎは先ずに、ホリキらのＣｈｍｉｓｔｒｙＬｅｔ
ｔｅｒｓ、　１６５−１６８　（１９７８）の方法に従
ってクロルメチル化樹脂へカップリングされる。即ち、
例えばラットＧＲＦ　（ｒＧＲＦ）の４３−残基遊離酸
類似体を合成するときには、約６０℃でＤＭＦ中ＫＦを
用いて２４時間撹拌する。樹脂支持体へのＢＯＣ保護ア
ミノ酸のカップリングに続いて、塩化メチレン中トリフ
ルオロ酢酸（Ｔ　Ｆ　Ａ）またはＴＦＡ単独を用いてα
−保護基が除去される。この脱保護は約０℃から室温の
間の温度で行われる。ジオキサン中ＨＣＩのような他の
標準的な切断試薬や特定のα−アミノ保護基の除去条件
は、シュローダ−（Ｓｃｈｒｏｄｅｒ）とりューブク（
Ｌｕｂｋｅ）の「ザ・ペプチド」第１巻７２〜７５頁（
アカデミツクプレス１９６５年）に記述されているよう
に選んでもよい。

α−アミノ保護基の除去後、残りのα−アミノ−および
側鎖−保護アミノ酸を意図する順序で段階的にカップリ
ングさせて、先に定義した中間体化合物を得る。あるい
は各アミノ酸を別個に反応器へ加える代わりに、若干の
アミノ酸を互いにカップリングさせてから固相反応器へ
添加してもよい。適当なカップリング試薬の選択は当分
野の技術の範囲内である。カップリング試薬として特に
適しているものはＮ、Ｎ’−ジシクロへキシルカルボジ
イミド（ＤＣＣ）である。

ペプチドの固相合成に用いられる活性化試薬はペプチド
の分野においてよく知られている。

適当な活性化試薬の例はカルボジイミド類、例えばＮ、
Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミドおよびＮ−エチル
−Ｎ’−（３’−ジメチルアミノプロピル）カルボジイ
ミドである。その他の活性化試薬ならびにペプチドカッ
プリングにおけるそれらの使用はシュレーダー＆リュブ
ケの上記文献第■章およびカブール（Ｋａｐｏｏｒ）の
Ｊ、　Ｐｈａｒ、　Ｓｃｉ、、　５９゜１−２７　（１
９７０）に開示されている。

それぞれの保護アミノ酸またはアミノ酸配列は大体４倍
以上の過剰量で固相反応器へ導入され、カップリング反
応はジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）：　ＣＨ２Ｃｌ　
２　（１：　１）の混合媒体中で、あるいはＤＭＦまた
はＣＨ２Ｃρ２単２単独中われる。不完全なカップリン
グが起った場合は、α−アミノ保護基を除去する前にそ
のカップリング反応を繰り返し、その後次のアミノ酸を
カップリングさせる。合成の各段階でのカップリング反
応の成就は、もしその合成が手動で行われるなら、カイ
ザー（Ｅ、　Ｋａｌｓｅｒ）らのＡｎａｌ。

Ｂ１０ｃｈｅｍ、　３４．５９５　（１９７０）に記載
されるようなニンヒドリン反応で監視するのが好ましい
。

カップリング反応は自動的に、例えばペックマン９９０
自動合成機で、リビエール（Ｒ１ｖ′１ｅｒ）らのＢ１
０ｐｏｌｙｍｅｒｓ、　１９７８．１７．１９２７−１
９３８頁に報告されるようなプログラムを用いて行うこ
とができる。

意図するアミノ酸配列が完了した後、液状フッ化水素の
ような試薬で処理して中間体ペプチドを樹脂支持体から
切り離す。その際液状フッ化水素はペプチドを樹脂から
切り離すばがってなく、残っている全ての側鎖保護基ｘ
、ｘ２　ｘ３ｘ４　、　　Ｘ５　　Ｘ６　　Ｘ７　、　
　ｘ８　、　　ｘ９　　アンカー結合Ｘ１°およびもし
使用するならα−アミノ保護基Ｘ１をも切断して遊離酸
の形でペプチドを得る。

配列中にＭｅｔが存在する場合、ＢＯＣ保護基は潜在的
Ｓ−アルキル化を避けるためにＨＦを用いる樹脂からの
ペプチド切断の前にトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）／エタ
ンジチオールを使用して、好適にまず除去される。切断
のためにフッ化水素を使用する場合、アニソールおよび
メチルエチルスルフィドが反応容器中にスキャベンジャ
−として含有される。

ペプチド樹脂の一部を環化するのと異なり、Ｃｙｓ残基
間を結合することによって鎖状ペプチドを環化するのが
好ましい。かかるジスルフィド結合を形成するために、
ヒドロキシメチル化樹脂またはクロロメチル化樹脂体か
ら当業者に周知のアンモノリシスによって十分に保護し
たペプチドを開裂し、十分に保護したアミノ中間体を得
て、これを適当に環化して脱保護する；あるいは、０°
Ｃにおいでフッ化水素（ＨＦ）による処理を施すことに
よって、ベンズヒドリルアミン樹脂からペプチドの開裂
と脱保護を行うこともできる。幾つのプロトコールを用
いて、Ａ、　Ｍ、フエリックス（Ｐｃｌｉｘ）らのペプ
チド、プロシーデインゲス　オブ　ザ　テシス　アメリ
カン　ペプチド　シンポジウム、（１９８７年５月）４
６５〜４６７頁（１９８８年）に開示されるように、一
部保護したペプチドを樹脂につけたままアミド結合によ
る環化を行ってもよい。Ａｓｐ、　　Ｇｌｕおよび／ま
たはＬｙｓ等の残基の側鎖は保護したまま、所望の２つ
の側鎖間に効果的にアミド結合を形成し環化することが
できる。

ＧＲＦペプチド類似体の環化工程は、２５位と２９位と
の間に形成することが望まれる結合の種類に依存するこ
とは言うまでもない。２５位および２９位がＤ−または
Ｌ−Ｃｙｓ残基であるときは、環化し樹脂から開裂しさ
らにペプチドからすべての保護基を除去するのに比較的
都合がよい。フェリシアン化物溶液を用いた酸化（リビ
ャー（Ｒｉｖｉｅｒ）３８頁に記載されるようにして行
うのが好ましい）、空気酸化またはその他の公知の方法
にしたがって環状ペプチドを得ることができる。

環化は、２５位の側鎖アミノ基と２９位の側鎖カルボキ
シル基との間にアミド結合を形成するか、あるいは逆に
、２５位の側鎖のカルボキシル基と２９位の側鎖のアミ
ノ基との間にアミド結合を形成することによって行う。

好ましいのは、前者の方である。ＭＢＨＡまたはＢＨＡ
上で保護ペプチドを合成し、ペプチドを樹脂に結合した
まま特定の側鎖カルボン酸のベンジルエステルをヒドラ
ジドとして、これを１９８７年４月２８日付米国特許第
４．８６１．４７２号に記載される方法によってアミノ
側鎖を選択的に脱保護する。環化は、アミド結合橋に含
まれることになる残基のカルボキシル側鎖に対するアル
カリに不安定な保護基（ＯＦｍ等）を用いて行うのが好
ましい。あるいは、アミド結合橋に含まれることになる
他の残基のアミノ側鎖の保護基としてＦＩＩｌｏｃを用
いるのが好ましい。１位の残基のα−アミノ保護基（ア
シル化されるされないに拘わらず）および他のすべての
側鎖保護基は、ピペリジン等を用いて２つのアルカリに
不安定な保護基を除去している間も変化しない。かかる
選択的除去の後、実質的に完全なアミド結合を形成する
ようにＢＯＰで処理して環化する。環化後、ペプチドは
完全に脱保護して、ＨＦ等の試薬を使用して樹脂から開
裂する。あるいは、ＴＦＡを使用してまずＢＯＣ保護基
を除去することもできる。

または、かかるアミド結合によるペプチドの環化は、以
下の特許に記載される方法によって行うこともできる。

米国特許第４，１１５．５５４号（１９７８年９月１９
日）；第４．１３３．８０５号（１９７９年１月９日）
；第４．１４０．７６７号（１９７９年２月２０日）；
　第４．１６１，５２１号（１９７９年７月１７日）；
第４，１９１，７５４号（１９８０年３月４日）；第４
，２３８，４８１号（１９８０年１２月９日）；第４，
２４４，９４７号（１９８１年１月１３日）；　第４，
２６１，８８５号（１９８１年４月１４日）。

ジスルフィド結合が−ＣＨ２−結合で置換されている、
２５位と２９位に等量の修飾システィン残基を含むＧＲ
ＦＪＪｆ似体は、ジカルバ（ｄｊｃａｒｂａ）で表され
る。スルフヒドリル基の１つだけがＧＲＦのように表示
される。最終的なペプチドを見ると、Ｃｙｓ残基がある
であろうところに代わってα−アミノブタン酸（αＢｕ
）の残基が含まれている。かかるジカルバまたはカルバ
−８結合を有するペプチドを合成するときには、式Ｈの
中間体においてＸ８が他の残基への直接結合となるよう
に米国特許第４．１６１，５２１号（該特許は本明細書
の一部として引用する）に記載される手順を用いるのが
好ましい。

次の実施例１は固相法によるペプチド合成の好適な方法
を示すものである。これと同じ方法でＣ末端に必要な数
のアミノ酸をつなげさえすれば対応する長いペプチドを
合成しうることは容易に理解されるであろう。Ｎ末端へ
残基をつなげるのは有益とは考えられておらず、現在の
ところ生物活性フラグメントのＮ末端は所定の配列を有
するべきであると感じられる。

実施例　Ｉ 次式： ％式％ で表わされるペプチド［：Ｎ　　ＭｅＴｙｒｌ、　　Ａ
ｌａ１５Ｄ−Ｃｙｓ２５．　Ｎ１ｅ２７．　Ｃｙｓ２９
Ｅ　−ｒＧＲＦ　（１−２９）　−ＮＨ２を、ベール（
Ｖａｌｅ）らの米国特許第４．２９２，３１３号に概要
が記載されるようにベックマン９９０ペプチド合成機を
使って市販のＭＢＨＡ樹脂上で段階的方法により合成し
た。この樹脂へのＢＯＣ−Ｃｙｓ　（ＭｅＯＢｚｌ）の
カップリングは、樹脂１ｇあたりＡｒｇ約０．３５ｍｍ
ｏｌの置換をもたらした。

保護基を除去して中和した後、ペプチド鎖を樹脂上に一
段ずつ付加していった。保護基の除去、中和および各ア
ミノ酸の付加は一般にリビエール（Ｊ、　Ｒｉｖｉｅｒ
）のＪ、　Ａｍｅｒ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、、　９８
．２９８６−２９９２　（１９７４）に詳述される方法
に従って行った。

使用する全ての溶剤は不活性ガス（例えばヘリウムや窒
素）を散布することによって注意してガス抜きしＭｅｔ
残基の硫黄を酸化するおそれのある酸素を確実に除いた
。

保護基の除去はスケジュールＡに従って行った：１．６
０％ＴＰＡ／２％エタンジチオール　　１０２．６０％
ＴＦＡ／２％エタンジチオール　　１５３、　ＩＰＡハ
％　　エタンジチオール　　　０．５４、ＣＨＣｇ　中
のＥｔ３Ｎ（１０％）０．５５、　Ｈｅ’ｌｌ　　　　
　　　　　　　　　　　　Ｏ，５Ｂ、ＣＨＣｇ　中のＥ
ｔ３Ｎ（ｔｏ％）０．５７、　ＭｅＯＨ（２回）０．５ ８、ＣＩ。ＣΩ２　（２回）０．５ カツプリングは好ましくはスケジュールＢ（こＳ己載さ
れるように行った： スケジュールＢ ９、ＤＣＣＩ ｔｏ、　　Ｂｏｃ−アミノ酸　　　　　　　　　　５０
〜９０Ｌ１．ＭｅＯＨ（２回）０．５ １２、ＣＨ２ＣΩ２　（２回）０．５ Ｈ，ＣＨＣｇ　中Ａ　Ｃ２０（３Ｍ）　　　１５．０１
４、ＣＨ２ＣΩ２０，５ １５、　　ＭｅＯＨＯ，５ １８、ＣＨ２ＣΩ２　（２回）０．５ 簡単に述べれば、樹脂１ｇあたり塩化メチレン中のＢＯ
Ｃ−保護アミノ酸１〜２ｍｍｏｌを使用し、塩化メチレ
ン中の１．ｏｍｏｌＤ　ＣＣ１当量加えて２時間実施し
た。Ｂ　ＯＣ−Ａｒｇ　（Ｔｏｓ）がカップリングされ
つつあるとき、５０％ＤＭＦと塩化メチレンの混合物を
使用した。ＳｅｔおよびＴｈｒのヒドロキシル側鎖保護
基としてＢｚｌエーテルを使用した。ＡＳｎやＧｌｎの
アミド基は、存利であるようにＤＣＣカップリングを使
用する場合、Ｘａｎで保護した。ｐ−ニトロフェニルエ
ステル（ＯＮｐ）はＡｓｎやＧｌｎのカルボキシル末端
を活性化するために使用し、例えばＢＯＣ−Ａｓｎ　（
ＯＮｐ）はＤＭＦと塩化メチレンの５０％混合物中のＨ
ＯＢｌ　１当量を用いて一晩カツブリングさせることが
でき、この場合はＤＣＣを加えなかった。２−クロル−
ベンジルオキシカルボニル（２Ｃρ−２）はＬｙｓ側鎖
の保護基として使用した。ＴｏｓはＡｒｇのグアニド基
およびＨｌｓのイミダゾール窒素を保護するために使用
でき、Ａｓｐの側鎖カルボキシル基は０Ｂｚｌで保護し
た。また、Ｃｙｓのスルフヒドリル基はＭｅＯＢｚｌで
保護し、Ｔｙｒのフェノール性ヒドロキシル基は２．６
−ジクロルベンジル（Ｄ　ＣＢ）で保護した。合成終了
時に次の組成の中間体が得られた： ＢＯＣ−Ｎ　　ＭｅＴｙｒ（Ｘ２）−Ａｌａ−Ａｓｐ（
Ｘ　　）　−Ａｌａ　−Ｉ　１ｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ　（
Ｘ４）　−５ｅｒ（Ｘ　　）−８ｅｒ（Ｘ　　）−Ｔｙ
ｒ（Ｘ２）−Ａｒｇ　（Ｘ　）−Ａｒｇ　（Ｘ６）　−
Ｉ　ｌｅ　−Ｌｅｕ−Ａｌａ　−Ｇｉｎ　（Ｘ　）−Ｌ
ｅｕ−Ｔｙｒ　（Ｘ２）　−Ａｌａ−Ａｒｇ（Ｘ　）−
Ｌｙｓ　（Ｘ７）−Ｌｅｕ　−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ　（Ｘ）
Ｄ−Ｃｙｓ　（Ｘ　）　−１１ｅ−Ｎｌｅ−Ａｓｎ　（
Ｘ”　）　−Ｃｙｓ　（Ｘ　　）　−Ｘ１０ 式中、ＸはＴｏｓＳＸ２はＤＣＢ、Ｘ３は０ＢｚＬＸ　
はＢｚｌ、Ｘ　はＸａｎ、Ｘ６はＴｏｓ、Ｘ７は２Ｃρ
−Ｚ、Ｘ８はＭｅＯＢｚｌ、そしてＸＩＯはＮＨ−ＭＢ
ＨＡ−樹脂支持体である。Ｘａｎはα−アミノ保護基を
除去するために用いたＴＦＡ処理によって部分的にまた
は完全に除去できた。

保護ペプチド−樹脂を切り離して保護基を除去するため
に、ペプチド−樹脂１ｇあたりアニソール１．５ｍｌ、
メチルエチルスルフィド０．５ｍｌおよびフッ化水素（
ＨＦ）１５ｍｌを用いて一２０℃で３０分および０℃で
３０分処理した。高真空下でＨＦを除去した後、樹脂−
ペプチド残留物を乾燥ジエチルエーテルおよびクロロホ
ルムで交互に洗い、次いでペプチドをガス抜きした２Ｎ
水性酢酸で抽出し、清遊により樹脂から分離した。

その後、ペプチドを約４℃で約４８時間空気酸化して、
さらに室温に約３日問おく　（あるいは、Ａｒｃｈｉｖ
ｅｓ　Ｂ１０ｃｈｅｍ、　Ｂｌｏｐｈｙｓ、　　８２．
１９５９．　ｐ、７０に記載されるエリ−マン（Ｅｌｌ
ｍａｎ）テストによって試験しながら一３Ｈが完全にな
くなるまでおく）こ、とによって各々の分子中のシステ
ィン残基間にジスルフィド結合を形成した。

その後、得られたペプチドを０〜５％酢酸に溶解し、セ
ファデックスＧ−５０微細ゲルン濾過を含めた精製工程
に付した。

さらにペプチドはリビエールらのＪ、　ｏｆ１０３、３
１７８　（１９８１）に示されるような調製用または半
調製用ＨＰ　Ｌ　、Ｃで精製した。カートリッジを備え
たウォーターズ拳アソシエー゛ソ◆プレプＬＣ−５００
（Ｗａｔｅｒｓ　Ａｓ５ｏｃｉａｔｅｓ　ｐｒｅｐ　Ｌ
Ｃ−５００）はバイダック（Ｖｙｄａｃ）　３００Ａか
らの１５〜２０μのＣ１８シリカを装填した。リビエー
ルのＪ、　Ｌｉｑ、　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｌ
　、　３４３−３６７　（１９７８）に記載されるよう
に、低圧エルデックス（Ｅｌｄｅｘ）勾配製造機を使っ
て、ＴＥＡＰ中のＣＨ３ＣＮの勾配をっ（った。クロマ
トグラフ画分は注意してＨＰＬＣで監視し、実質的純度
を示す画分のみを集めた。それぞれ別個に純度を調べた
精製画分の脱塩は０．１％ＴＦＡ中のＣＨ３ＣＮの勾配
を用いて行った。その後センターカット（ｃｅｎｔｅｒ
　ｃｕｔ）を凍結乾燥して目的とするペプチド（純度９
８％以上でありうる）を得た。

このペプチドは、数種の溶媒で薄層クロマトを行った結
果、均質であることが判明した。孔径３００Ａで５１１
１ｎの０１８シリカを充填した０、２１Ｘ１５ｃｍのカ
ラムを用いた上記のウォーターズＨＰＬＣにより、溶液
１０１００ＯあたりＨ３ＰＯ４１，ｏｍｌおよびトリエ
チルアミン１．ｏｍｌとアセトニトリルを含有するトリ
エチルアンモニウムホスフェート水溶液を緩衝液として
高速液体クロマトグラフィーをとくに行った。測定は室
温で行った。緩衝液Ａは５％ＣＨ３ＣＮを、緩衝液Ｂは
７５％ＣＨ３ＣＮを含有する。流速は０．６ｍｌ／分と
し、最初は２０％緩衝液Ｂでスタートし、以後６０分間
定率で濃度を９５％まで上げた。反応時間は３４．４５
分であった。

生成した精製ペプチドのアミノ酸分析の結果、鎖中の各
々のアミノ酸について以下の値を得た：Ａｓｐ（２，１
３）、　Ｔｈｒ（１，００）、　５ｅｔ（１，７５）、
　Ｇｌｕ（１，０６）。

Ｃｙｓ（１，８３）、　Ａｌａ（４，００）、　　ＣＨ
３Ｔｙｒ（１，１７）。

Ｉ　１ｅ（２，７１）、　Ｌｅｕ（４，３３）、　Ｎ１
ｅ（１，２８）、　Ｔｙｒ（２，１４）。

Ｐｈｅ（０，９４）、　Ｌｙｓ（１，００）、　Ｈｉｓ
（１，０４）、　Ａｒｇ（３，２０）。

旋光度は光電旋光針で測定した：　〔α〕Ｄ＝６２．９
±１　（ｃ＝１．１％酢酸） 実施例　ｌＡ ２５位のＤ−Ｃｙｓの代わりにＬ−Ｃｙｓ、２９位のＬ
−Ｃｙｒの代わりにＤ　−Ｃｙｓを用いて実施例Ｉと同
じ方法で次式： ％式％ のアミデートしたペプチドを合成した。

このペプチドは数種の溶媒で薄層クロマトを行った結果
、均質であることが判明した。孔径３００Ａで５ｕｒｎ
のＣ１８シリカを充填した０、２１Ｘ１５ｃｍのカラム
を用いた上記のウォーターズＨＰＬＣにより、溶液１０
１００ＯあたりＴＦＡｌ、Ｏｍｌとアセトニトリルを含
有する０、１％トリフルオロ酢酸水溶液を緩衝液として
高速液体クロマトグラフィーをとくに行った。測定は３
７°Ｃで行った。緩衝液Ａは５％ＣＨＣＮ、緩衝液Ｂは
８０％ＣＨ３ＣＮを含有する。流速は１．０ｍｌ／分と
し、最初は１０％緩衝液Ｂでスタートし、以後３０分間
定率で濃度を９５％まで上げた。保持時間は２０．６８
分であった。

生成した精製ペプチドのアミノ酸分析の結果、鎖中の各
々のアミノ酸について実質的に整数値であった。旋光度
は光電旋光針で測定した：〔α）　Ｄ＝−７９，２±１
　（ｃ＝１．１％酢酸）実施例　■ 次式： ％式％ （式中、ｘ　　−ｘ７は実施例中で特定したとおりであ
る） の中間体から、実施例工に一般的に記載されるようにＭ
ＢＨＡ樹脂上でべ・ツクマン９９０ペプチド合成機を用
いて段階的方法により次式： ％式％ （Ｌ−４４）−ＮＨ２を合成した。選択的な脱保護基お
よび環化は以下のようにして行った。

保護したペプチジル樹脂（約５１１ｉｅｑのペプチド含
有）４ｇ、ＢＯＰ　［ベンゾトリアゾリル−Ｎ−オキシ
トリス（ジメチルアミノ）ホスフォニウムヘキサフルオ
ロホスフェ−））　２．２０ｇ　（５ｍｅｑ）およびジ
イソプロピルエチルアミンｔｏｍｅｑを懸濁し、室温で
２時間撹拌した。ペプチドレシンをン濾過し、Ｄ　Ｍ　
Ｆ　、　Ｍ　ｅ　ＯＨ，ＣＨＣｌｌ　２およびＭ　ｅ　
ＯＨで洗浄して乾燥した。

保護したペプチドレシンをＣＨ２ＣΩ２中の６０％ＴＦ
Ａで処理しＢＯＣ保護基をはずし、脱除剤として１．５
ｍｌのアニソールの存在下に蒸留ＨＦ１０〜１５ｍ１で
０℃において６０分処理して残りの保護基をはずし、樹
脂からペプチドを分離した。

高真空下でＨＦを除去し、乾燥エチルエーテルでペプチ
ドを沈殿させた。沈殿物を集め、５０ｍＩＣＨＣＮ：Ｈ
２Ｏ（１：　１）中に溶かして親液化した。その後、実
施例ＩのようにＲＰ−ＨＰＬＣを用いて精製した。ペプ
チドはＴＬＣおよびＨＰＬＣで実質的に純粋であること
が判明した。

実施例　■ 次式： ％式％ 〇Ｈをクロロメチル化樹脂上でベックマン９９０ペプチ
ド合成機を用いて段階的方法により合成した。

最初のカップリングは、ケミストリー　レターズ。

同上に記載される方法で行い、その後は実施例■に一般
的に記載される方法で合成した。合成したペプチドはＴ
ＬＣおよびＨＰＬＣを用いて実質的に純粋であることが
判明した。

実施例　■ 次式： ％式％ （１−２９）　−Ｎ　ＨＥ　ｔを米国特許箱４．５６９
．９６７号に記載される方法によって樹脂上でベックマ
ン９９０ペプチド合成機を用いて段階的方法により合成
した。ＨＦで処理することによって鎖状ペプチドを樹脂
から分離し、実施例■に記載した方法によって環化し精
製した。合成した類似体はＴＬＣおよびＨＰＬＣを用い
て実質的に純粋であることが判明した。

実施例　■ 次式： ％式％ で表わされる第１表に示すｒＧＲＦ類似体を上記の固相
法によって合成した。

第 表 ｅｓＮＨ １（ｉｓ −Ｐｈｅ ｙｒ −Ｔｙｒ Ｐｈｅ ｅｔ −Ｍｅｔ ｅｕ ｐＣΩ−Ｐｈｅ Ｄ−［（ｉｓ −Ｔｙｒ ｉｓ Ｐｈｅ ｙｓ Ｂｕ ｓｐ ａＰ ｒｎ ａＢ ｙｓ ｒｎ ａＰ ｌｕ Ｂｕ −ａＢｕ ａＰ −ｄａＢ −Ａｓｐ ｌｕ −Ａｓｐ −Ｃｙｓ ｓｐ −Ｇｌｕ ａＰ ペプチド５および６等のペプチドは米国特許箱４．１６
１．５２１号の一般的な教示に従って合成した。

実施例　■ 次式： ％式％ で表わされる第２表に示すｈＧＲＦ類似体を上記の固相
法によって合成した。

ｓｎ ｅｒ ｒｇ ｓｐ シし 表 ｌａ １ｅ ａｌ ｅｕ ｌａ １ｅ ａｌ ｅｕ ｌａ ａＰ ｒｎ ａＢ −Ｌｙｓ ａＰ ａＢ ｙｓ −Ａｓｐ ｓｐ ｌｕ Ｂｕ ｙｓ ｓｐ ｌｕ ５ｐ Ｄ−Ｇ　ｌ　ｕ ｓｐ −ｄａＰ −ｄ　ａＢ −Ｃｙｓ −ａＢｕ 実施例　■ 次式： ％式％ で表わされる第３表に示すｒＧＲＦ類似体を上記の固相
法によって合成した。

−Ｌｙｓ ｒｇ −Ａ　ｒｇ ｒｇ ｙｓ −Ｌｙｓ −Ａ　ｒｇ 床 表 ｉｓ ｉｎ １ｉｓ ｉｎ −Ａｓｐ ｙｓ ａＰ ｒｎ ｓｐ ｌｕ ａＢ −ｄ　ａＢ ａＰ ｙｓ ａＰ ｙｓ −Ａｓｐ ｓｐ ａＰ ｙｓ −Ｌｙｓ ａＰ ｓｐ ｌｕ −Ｇｌｕ ｓｐ ｙｓ 実施例　■ 次式： ％式％ で表わされる第４表に示すｈＧＲＦ類似体を上記の固相
法によって合成した。

床 表 ４８　　Ｄ−Ａｌａ ４９　　〃 ５０　　　” ５１　　　” ５２　　Ａｌａ ５４　　　　” ５５　　〃 ５８　　ＮＭＡ ５７　　Ｄ−ＮＭＡ ５８　　〃 ５９　　〃 Ｒ Ｄ−Ｃｙｓ　　　Ｎ１ｅ Ａｓｐ　　　　Ｍｅｔ ／／Ｄ−Ｍｅｔ ”　　　　　Ａｌａ Ｄ−Ａｓｐ　　　Ｎ１ｅ Ｄ−Ｇｌｕ　　　Ｉｌｅ ／／　　　　　Ｎｌｅ ノ’　　　　　　　Ｖａｔ Ｄ−Ｇｌｕ　　　Ｌｅｕ Ｇｌｕ　　　　　Ｎｖａ 〃　　　　Ａｌａ Ｃｙｓ ａＢ −ｄａＰ ｒｎ −０ｒｎ ａＢ Ｃｙｓ ａＰ −ｄａＰ −Ｌｙｓ Ｏｒ ｒｇ ｅｒ ｒｇ 実施例　■ 次式： ％式％ で表わされる第５表に示すｒＧＲＦ類似体を上記の固相
法によって合成した。

Ａｓｐ −Ａｓｐ Ａｓｐ −Ａｓｐ 第　　　５ Ｃｙｓ 表 Ｃｙｓ Ｂｕ Ｃｙｓ Ｂｕ −Ｃｙｓ Ｂｕ −ｄ　ａＢ ｒｎ ４４−Ｙ ＮＯ２ Ｖａｌ−ＮＯ３ Ｌｅｕ−ＮＯ３ Ｈ ＮＨＣＩ（２ＣＨ３ ０）１（酢酸塩） ＮｌｌＣＩ１３ Ａ　Ｉ　ａ−Ｎｌ１２ Ｎ（ＣＩ＋３）　２ ＮＩＩＮＩＩ２ 第 Ｒ３Ｒ２５ ７０Ｄ−Ａｓｐ　　　Ａｓｐ ７１〃〃 ７２　　　　　　　　Ｃｙｓ ７３　　　　／／　　　　　／／ ７４　　　Ａｓｐ　　　　　〃 ７５　　　　　　　　Ａｓｐ 表（続き） ａＢ −ｄａＰ Ｃｙｓ −ａＢｕ Ｃｙｓ −ｄａＢ ４４−Ｙ Ｃｔ１３ −ＣＩ＋２０Ｈ ＨＯ ＮＨＣＰＩＩ２ ＮＨＣＦ２ＣＨ３ Ｈ 実施例　Ｘ 次式： ％式％ で表わされる第６表に示すｈＧＲＦ類似体を上記の固相
法によって合成した。

第 表 Ｌ　ｃｕ　−Ｒ１５−Ｇ　Ｉｎ ｅｕ Ｔｙｒ Ａｌａ−Ａｒｇ− Ｂ　　　　Ｒ２２ ７６Ａｃ　　　　　Ｌｅｕ ７７　　Ａｃ　　　　　　／１ ７８　　Ａｃ　　　　　Ａｌａ ７９　　Ａｃ　　　　　　〃 ８０　　ＩＩ　　　　　　Ｖａｌ ８１　　ｄｅｓＮＨ２〃 ８２　　〃　　　　１１ｅ ９３　　Ｆｏｒ　　　　　　〃 ８４　　〃　　　　　〃 ８５　　ＮａＭｅ　　　Ｌｅｕ ８６　　　〃　　　　　〃 ８７　　ＨＡｌａ Ｒ Ａｓｐ　　　　Ａｓｎ ｄａＰ　　　　　　１ｌ Ｄ−Ｃｙｓ　　　５ｅｒ Ｇｌｕ　　　　　　／／ ｄａＰ　　　　　　” “　　　　Ａｓｎ １　ｙ　ｓ　　　　　／／ Ｄ−ｄａＰ　　　　／／ Ｃｙ　ｓ　　　　　／／ “　　　　５ｅｒ ｄａＢ　　　　　　　” 〃　　　　Ａｓｎ −ｄａＰ Ａｓｐ Ｃｙｓ −０ｒｎ Ａｓｐ −Ｇｌｕ −Ａｓｐ Ｂｕ −Ｃｙｓ Ａｓｐ Ｇｌｕ で表わされる第７表のｒＧＲＦ類似体を上記の固相法に
よって合成した。

実施例　刈 次式： ％式％ 次式： Ｈ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ａｌａ　−１１ｅ−Ｐｈ
ｅ　−Ｔｈｒ−Ａｓｎ　−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌ
ｙｓ−Ｒ１３Ｌ　ｅｕ　−Ｇ　ｌｙ　−Ｇ　Ｉｎ　−Ｌ
　ｅｕ　−Ｓ　ｅｒ　−Ａ　Ｉａ　−Ａ　ｒｇ−で表わ
される第８表のｈＧＲＦ類似体を上記の固相法によって
合成した。

１ｅ Ａｌａ １ｅ −Ｌｙｓ Ｃｙｓ Ｂｕ ｄａＰ −ｄａＢ ｄａＰ −０ｒｎ Ａｓｐ Ｇｌｕ Ｃｙｓ Ｂｕ −Ｃｙｓ −ａＢｕ Ｃｙｓ １ｕ Ｄ−Ｇ　ｌ　ｕ ｄａＰ ｙｓ 第　　８　　表（続き） ＲＲＲＲ １１２１１ｅ　　　Ｄ−Ａｒｇ　　Ｇｌｕ　　　Ｄ−ｄ
ａＰ１１３　　　Ｌｅｕ　　　　／／Ｄ−Ｇｌｕ　　Ｌ
ｙｓ１１４　　　Ａｒｇ　　　　′／Ｄ−”０ｒｎ１１
５　　　〃”　　　Ａｓｐ　　　Ｄ−Ｌｙｓ１１６　　
　Ｖａｌ　　　　ｌ”／　　　ｄａＢ１１７　　　〃Ｄ
−Ｌｙｓ　　　ｌ’　　　Ｄ−ｄａＰ１１８　　１１ｅ
　　　　１ｌＤ−Ａｓｐ　　ｄａＰ１１９　　　”　　
　　”　　　Ｃｙｓ　　　ａＢｕ１２０　　　〃Ｌｙｓ
　　　　／／Ｄ−Ｃｙｓ１２１〃〃ｄａＰＡＳｐ １２２　　　Ａｌａ　　　Ａｒｇ　　　　／／／を実施
例で調製した合成ペプチドは、インビトロ検定によって
、合成ｈＧＲＦ　（１−４０）　−０ＨＩ、Ｊｔ。

べて一般に成長ホルモンの分泌に対する影響が大きく本
質的な活性は似ていることが判明した。これらの合成ペ
プチドは全て生物学的に活性であり、下垂体による成長
ホルモンの分泌を効果的に刺激する有用な化合物である
と考えられる。

試験例　１ 本試験例において、成長ホルモンの分泌を促進する代表
的な合成ペプチドの相対効力を決定するインビトロ検定
を行った。

合成ｈＧＲＦ　（１−４０）−ＯＨを標品として用いて
等モル濃度の代表的な本発明合成類似体と並行比較した
。試験の３から５日前に摘出したラット下垂体細胞を含
む培養物を使用した。比較試験のために成長ホルモンの
分泌が最適であると考えられる培養物を、ベールらのＥ
ｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ。

９１、５６２−５７２　（１９７２）に記載され、また
ベールらのＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、　１１２．１
５５３−１５５５　（１９８３）にさらに詳しく記載さ
れる一般的方法により使用した。

試験する物質とのインキュベーションは３から４時間行
い、培地アリコートをとり出して、それらの免疫反応性
成長ホルモン（ｉｒＧＨ）の含有値を周知のラジオイム
ノアッセイで測定するための処理を施した。

等モル濃度の比較試、験の結果、［Ｎ　　ＭｅＴｙｒ１
Ａｌａ１５．　Ｃｙｓ２５．　Ｎ！ｅ２７．　Ｄ−Ｃｙ
ｓ２９〕　−ｒ　Ｇ　ＲＦ　−（Ｌ−２９）−ＮＨ２（
実施例ＩＡで合成したペプチド）はｈＧＲＦ　（１−４
０）−ＯＨの約２倍の生化学的効力を示した。また、　
［ＮａＭｅＴｙｒ’　、　　Ａｌａ１５Ｄ−Ｃｙｓ２５
．　　Ｎ１ｅ２７．　　Ｃｙｓ２９〕−ｒ　ＧＲＦ　（
１−２９）　−本試験例において、本発明の合成ペプチ
ドの生物学的効力をｈＧＲＦ　（１−４０）−ＯＨと比
較するインビボ試験を行った。

本発明の合成ペプチドおよびｈ　Ｇ　ＲＦ　（１−４０
）　−ＯＨを各々１，５および２５μｇを、ウレタンで
麻酔した雄ラットに静脈注射した。注射前、注射後１０
分、４５分および９０分経過後直ちに血液サンプルを採
取して、血液中の成長ホルモンレベルをラジオイムノア
ッセイで測定した。

実施例Ｉで合成したペプチド１μｇおよび実施例ＩＡで
合成したペプチド５μｇ投与後１０分のインビボ反応は
、ｈＧＲＦ　（１−４０）　−０Ｈ２５μｇ投与後１０
分のインビボ反応より大きかった。また、これらの本発
明に係る合成ペプチド投与後４５分の血液中の下垂体成
長ホルモンのレベルは、ｈＧＲＦ（１−４０）　−０Ｈ
の場合より大きかった。以上より、本発明に係る合成ペ
プチドはｈＧＲＦ　（Ｌ−４０）　−ＯＨに比べ、生物
学的効力が大きく、かつ、その効果が長く持続すること
が明らかである。成長ホルモン分泌を促すのに効果的な
上記環状ペプチドの投与示は体重１　ｋｇあたり約４０
０ナノグラムから約５０ナノグラムであると考えられる
。

この種の合成ｈＧＲＦ類似体およびｒＧＲＦ類似体は医
師が成長ホルモン産生を高めることを望むヒトへ適用す
るのに有用であろう。この種の類似体による成長ホルモ
ン分泌の刺激は、内因性ＧＲＦの産生低下に起因する完
全または相対的成長ホルモン欠乏症を有する患者を対象
としている。

さらに、増大した成長ホルモン分泌およびそれに伴う成
長増加は正常の成長ホルモンレベルを有するヒトまたは
動物にも現われるであろう。また、投与は身体の脂肪含
量を変化させ、その他の成長ホルモン依存性の代謝、免
疫および発生過程を変更させるであろう。例えば、これ
らの類似体は火傷を負ったような情況下にあるヒトの同
化過程を刺激する手段として有用でありうる。他の例と
してこれらの類似体は鶏、七面鳥、豚、ヤギ、牛および
羊のような商業用混血動物に、または魚や例えばウミガ
メやウナギのような冷血動物および両生類の養殖に、有
効量の本ペプチドを与えることにより成長をはやめ且つ
タンパク質対脂肪の比を高めるために使用しうる。

ヒトに投与する場合、これらの合成ペプチドは少なくと
も約９３％、好ましくは少なくとも９８％の純度をもつ
べきである。本明細書において純度とは意図するペプチ
ドが存在する全てのペプチドおよびペプチドフラグメン
トの表示重量％を占めることを意味する。この種の合成
ペプチドを商業用または他の動物に成長促進および脂肪
含量低下の目的で投与する場合は、約５％程度の低い純
度、あるいは０．０１％の純度でさえも許容しうるかも
知れない。これらの合成ペプチドまたはその無毒性塩は
、医薬組成物をつくるために薬学的または獣医学的に受
容されるキャリアーと混合されて、ヒトを含めた動物へ
静脈内、皮下、筋肉内、経皮的（例えば鼻腔内）、また
は経口的にさえ°投与することができる。投与は治療し
ようとする受容者がこのような治療上の処置を必要とす
る場合に成長ホルモンの放出を刺激すべく医師により行
われる。

必要な投与量は治療しようとするそれぞれの症状、その
症状の程度、および治療の持続時間により変化するであ
ろう。

この種のペプチドは無毒性塩、例えば酸付加塩または亜
鉛や鉄などとの金属錯体（本明細書においては金属錯体
も塩として考える）の形でしばしば投与される。酸付加
塩の例は塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、マレイン酸塩、酢
酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、コハク酸塩、リンゴ酸
塩、アスコルビン酸塩、酒石酸塩などである。活性成分
を錠剤の形で経口的に投与する場合、錠剤はトラガカン
ト、トウモロコシでんぷんまたはゼラチンのような結合
剤；アルギン酸のような崩壊剤；およびステアリン酸マ
グネシウムのような滑沢剤を含みうる。液体での投与が
望まれる場合は甘味料および／または風味料を使用する
ことができ、また等張塩水やリン酸緩衝液での静脈内投
与を行うこともできる。

本ペプチドは医師の指導のもとてヒトに投与されるべき
であり、医薬組成物は通常薬学的に受容される慣用の固
体または液体キャリアーと共にペプチドを含むだろう。

一般に、非経口投与量は受容者の体重１　ｋｇあたりペ
プチド約０．０１〜約１μｇであるだろう。

本発明を本発明者が認める最もよい方法である好適な実
施態様で説明してきたが、当分野での通常の知識を有す
る者に明らかないろいろな変更および修飾が特許請求の
範囲に記載する本発明の範囲から逸脱することなくされ
うろことを理解すべきである。例えば、ペプチド鎖の修
飾、とりわけペプチドのカルボキシル末端から始まり大
体２９位までの欠失は今までに知られた実験慣習に従っ
て行われ、それによりペプチドの生物学的効力の全てか
まさに本質的部分を保持するペプチドやペプチドフラグ
メントがつくり出され、この種のペプチドも本発明の範
囲内に含まれると考えられる。

さらに、両末端あるいはそのいずれかでの付加も行われ
、かつ／またペプチド化学の分野でよく知られるように
自然界に存在する残基の代わりにほぼ均等の残基を用い
て、タンパク質の加水分解に対して増強された抵抗性を
有し、また本発明の範囲を逸脱しない請求されたポリペ
プチドの効力の少なくとも本質的部分を有する他の類似
体を製造することができる。さらに現在の技術によって
Ｃ末端の好ましいＮＨ２基に対する修飾を行ってもよい
。例えば、Ｃ末端のアミノ酸残基のカルボキシル部分は
−ＣＯＯＲ，−ＣＲＯ。

Ｃ０ＮＨＮＨＲ，−ＣＯＮ　（Ｒ）（Ｒ”）または−Ｃ
Ｈ２０Ｒ（ここでＲおよびＲ′は低級アルキル、フルオ
ロ低級アルキルまたは水素である）とすることができる
。このような修飾を行っても合成ペプチドの効力は変わ
らないことから、かかる修飾も本発明の範囲を逸脱する
ものではない。

本発明の様々な特徴は上述の特許請求の範囲において強
調される。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次のアミノ酸配列を有する合成ペプチド【遺伝子配
   列があります】 （式中、Ｒ＿１はＴｙｒ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｄ−Ｍ
   ｅｔ、Ｐｈｅ、Ｄ−Ｐｈｅ、ｐＣｌ−Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、
   ＨｉｓまたはＤ−Ｈｉｓ；ＢはＨ、Ｃ＾ａＭｅ、Ｎ＾ａ
   Ｍｅ、ｄｅｓＮＨ＿２、ＡｃまたはＦｏｒ；Ｒ＿２はＡ
   ｌａ、Ｄ−Ａｌａ、ＮＭＡまたはＤ−ＮＭＡ；Ｒ＿３は
   ＡｓｐまたはＤ−Ａｓｐ；Ｒ＿８はＳｅｒ、Ａｓｎ、Ｌ
   ｙｓ、Ａｒｇ、ＡｓｐまたはＧｌｎ；Ｒ＿１＿０はＴｙ
   ｒ、Ｄ−ＴｙｒまたはＰｈｅ；Ｒ＿１＿２はＡｒｇまた
   はＬｙｓ；Ｒ＿１＿３はＩｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕまたは
   Ａｌａ；Ｒ＿１＿５はＧｌｙ、Ａｌａまたはβ−Ａｌａ
   ；Ｒ＿１＿８はＳｅｒまたはＴｙｒ；Ｒ＿２＿１はＬｙ
   ｓ、Ｄ−Ｌｙｓ、ＡｒｇまたはＤ−Ａｒｇ；Ｒ＿２＿２
   はＬｅｕ、Ｉｌｅ、ＡｌａまたはＶａｌ；Ｒ＿２＿４は
   ＧｌｎまたはＨｉｓ；Ｒ＿２＿５はｃｙｓ、ａｂｕ、ａ
   ｓｐ、ｇｌｕ、ｏｒｎ、ｌｙｓ、ｄａｂまたはｄａｐ；
   Ｒ＿２＿７はＭｅｔ、Ｄ−Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｎｌｅ、Ｉ
   ｌｅ、Ｌｅｕ、ＮｖａまたはＶａｌ；Ｒ＿２＿８はＡｓ
   ｎまたはＳｅｒ；Ｒ＿２＿９はｃｙｓ、ａｂｕ、ａｓｐ
   、ｇｌｕ、ｏｒｎ、ｌｙｓ、ｄａｂまたはｄａｐ；Ｒ＿
   ３＿４はＳｅｒまたはＡｒｇ；Ｒ＿３＿８はＡｒｇまた
   はＧｌｎ；Ｒ＿３＿９はＧｌｙまたはＡｒｇ；Ｒ＿４＿
   ０はＡｌａまたはＳｅｒ；Ｒ＿４＿２はＰｈｅまたはＡ
   ｌａ；Ｒ＿４＿３はＡｓｎまたはＡｒｇ；Ｒ＿４＿４は
   天然アミノ酸；ただしＲ＿４＿４から始まり最長Ｒ＿２
   ＿９までの残基からなるいずれかのＣ末端配列は除去さ
   れていてもよい）またはその無毒性塩。 ２、Ｒ＿１がＮ＾ａＭｅＴｙｒである請求項１のペプチ
   ド。 ３、Ｒ＿２＿５がＤ−Ｃｙｓである請求項１または２の
   ペプチド。 ４、Ｒ＿２＿９がＣｙｓである請求項３のペプチド。 ５、Ｒ＿２＿５がＡｓｐである請求項１または２のペプ
   チド。 ６、Ｒ＿２＿９がＯｒｎである請求項５のペプチド。 ７、Ｒ＿２＿５がＤ−Ｇｌｕであり、Ｒ＿２＿９がｄａ
   Ｐである請求項１または２のペプチド。 ８、Ｒ＿２＿５がＣｙｓでありＲ＿２＿９がＤ−Ｃｙｓ
   である請求項１または２のペプチド。 ９、Ｒ＿２＿２がＡｌａである請求項１〜８のいずれか
   のペプチド。 １０、Ｒ＿２＿７がＮｌｅである請求項１〜９のいずれ
   かのペプチド。 １１、Ｒ＿１＿５がＡｌａである請求項１〜１０のいず
   れかのペプチド。 １２、Ｒ＿２＿８がＡｓｎである請求項１〜１１のペプ
   チド。 １３、次のアミノ酸配列を有する請求項１〜１１のいず
   れかのペプチド。 【遺伝子配列があります】 で表わされる請求項１のペプチド。 １５、式〔Ｎ＾ａＭｅＴｙｒ＾１、Ｌｙｓ＾８、Ａｌａ
   ＾１＾５、Ｄ−Ｃｙｓ＾２＾５、Ｎｌｅ＾２＾７、Ａｓ
   ｎ＾２＾８、Ｃｙｓ＾２＾９〕−ｈＧＲＦ（１−２９）
   −ＮＨＥｔで表わされる請求項１のペプチド。 １６、式〔Ｎ＾ａＭｅＴｙｒ＾１、Ｄ−Ａｓｐ＾２＾５
   、ｄａＰ＾２＾９〕−ｒＧＲＦ（１−２９）−ＮＨ＿２
   で表わされる請求項１のペプチド。 １７、式〔Ｎ＾ａＭｅＴｙｒ＾１、Ａｌａ＾１＾５、Ｃ
   ｙｓ＾２＾５、Ｎｌｅ＾２＾７、Ｄ−Ｃｙｓ＾２＾９〕
   −ｒＧＲＦ（１−２９）−ＮＨ＿２で表わされる請求項
   １のペプチド。 １８、Ｒ＿２＿５がＤ−Ｃｙｓであり、Ｒ＿２＿７がＮ
   ｌｅであり、Ｒ＿２＿９がＣｙｓでありかつＲ＿３＿０
   〜Ｒ＿４＿４が除去されている請求項１のペプチド。 １９、請求項１から１８のいずれかに記載のペプチドま
   たはその無毒性塩および薬学的または獣医学的に受容さ
   れる液体もしくは固体担体を含有する動物の成長ホルモ
   ンの放出を刺激するための医薬組成物。 ２０、請求項１９の医薬組成物を効果的な量投与するこ
   とからなる哺乳類を治療する方法。