JPH0276890A

JPH0276890A - ホスファチジルコリン誘導体の製造方法

Info

Publication number: JPH0276890A
Application number: JP1134865A
Authority: JP
Inventors: Masami Ishihara; 正巳石原; Hiromi Nawa; 名和　裕美; Tsutomu Miyagawa; 力宮川
Original assignee: Wako Pure Chemical Industries Ltd
Current assignee: Fujifilm Wako Pure Chemical Corp
Priority date: 1988-06-02
Filing date: 1989-05-29
Publication date: 1990-03-16
Anticipated expiration: 2010-05-17
Also published as: EP0344711A3; US5000880A; DE68924499D1; DE68924499T2; ATE128981T1; JPH0745507B2; EP0344711A2; EP0344711B1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、薬物送達システム（ＤＤＳ）や臨床診断薬等
の分野に於て用いられるリポソーム類の素材等として有
用なホスファチジルコリン誘導体の新規な製造方法に関
するものである。

〔発明の背景〕

ノアシルホスファチジルコリン類（以下、ＤＡＰＣ’類
と略記する。）の製造方法としては、グリセロホスファ
チ・ノルコリン（以下、Ｃ）ＰＣと略記する。）をアシ
ル化する方法が一般的であり、従来より広く行われてい
るが、これらは大別すると次の４通りの方法に分けられ
る。

■　脂肪酸塩化物でアシル化する。ＣＣａｎ、　Ｊ。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｐｈｙｓｉｏｌ、、　３７　＋　９
５３　（１９５９）等〕■　１−アシルイミダゾールで
アシル化する。

（特開昭５１−９１２１３号公報等） ■　脂肪酸無水物を用い無溶媒でアシル化する。

（Ｂｉｏｃｈｉｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ａｃｔａ、、
　１８７　、５２０　（１９６９）等〕■　Ｎ、Ｎ−ツ
メチル−４−アミノピリジン、Ｎ、Ｎ−ピロリジノピリ
ジン等のエステル化触媒を用い脂肪酸無水物でアシル化
する。（特公昭６２−９５９９号公報等）しかしながら、これらの方法はいずれも以下に述べるよ
うに夫々問題点を有している。即ち、■の脂肪酸塩化物
を用いてアシル化する方法では、ピリジン等の塩基を用
いなければ反応は充分に進行しないが、そのような塩基
性触媒を用いた場合には反応後残存する該触媒をイオン
交換樹脂等により除去しなければならず、操作が煩雑で
ある。

■の脂肪酸をイミダゾール誘導体としてアシル基を活性
化させ、アシル化する方法では、反応に長時間を要し低
収率の上に、アシル化試剤がイミダゾールを遊離するの
で■と同様にその分離除去操作が煩雑であり、且つアシ
ル化試剤も高価である。

■の脂肪酸無水物を用いて無溶媒でアシル化する方法は
、反応液の粘性が高（作業性が悪い上に反応に長時間を
要し側底企業化し得ない。また、■の塩基性触媒を用い
脂肪酸無水物でアシル化する方法は、■の場合と同様、
反応後残存する塩基性触媒の除去にイオン交換樹脂等を
用いなければならず、工程数が増え操作が煩雑である。

〔発明の目的〕

本発明は、上記した如き状況に鑑みなされたもので、作
業性が良く、煩雑な操作を要さず、比較的短時間で高純
度のＤＡＰＣ類が収率良く得られる、企業化容易なりＡ
ＰＣ類の製造方法を提供することを目的とする。

〔発明の構成〕

本発明は１式で示されるグリセロホスファチジルコリン（ＧＰＣ）を
高級脂肪酸金属塩に担持させ、 ■　炭素原子上に活性水素原子を有し、且つそれ自身ア
シル化される虞れのない有機溶媒中、若しくは、 ■　炭素原子上に活性水素原子を有し、且つそれ自身ア
シル化される虞れのない有機溶媒の共存下、該グリセロ
ホスファチジルコリンのアシル化反応を阻害せず、且つ
それ自身アシル化される虞れのない有機溶媒中、無触媒下に、一般式（ＲＣＯ）２０　（式中、Ｒは飽和
又は不飽和の直鎖状又は分枝状炭化水素残基な表わす。

）で示される高級脂肪酸無水物でアシル化することを特
徴とする、一般式％式％（式中、Ｒは前記と同じ。）で示されるホスファチジル
コリン誘導体の製造方法の発明である。

従来、高級脂肪酸金属塩に担持させたＧＰＣの、高級脂
肪酸無水物によるアシル化は、有機溶媒中、塩基性触媒
の存在下に行われるか、又は無触媒下、無溶媒で行われ
るかのどちらかであり、有機溶媒中、無触媒下でアシル
化反応を行っている例はこれまでに皆無であった。その
理由は、有機溶媒中の反応では、塩基性触媒を用いなけ
れば反応速度が極めそ遅く、側底実用化し得ないと考え
られていたからである。

本発明者らは、ＤＡ、ＰＣ類のより効果的な製法を求め
て鋭意研究の途上、高級脂肪酸金属塩に担持させたＧＰ
Ｃの高級脂肪酸無水物によるアシル化反応に於ては、特
定の有機溶媒中、即ち炭素原子上に活性水素原子を有す
る有機溶媒中（若しくは該有機溶媒と他の有機溶媒との
混合溶媒中）で反応を行えば反応速度は意外にもむしろ
速くなり、触媒存在下有機溶媒中での反応や、無触媒上
熱溶媒での反応よりも遥かに短い時間でアシル化反応が
進行し、目的のノアシル化物が高収率、高品質で得られ
ることを見出し、本発明を完成するに到った。

本発明に於て、アシル化剤として用いられる高級脂肪酸
無水物としては、例えば炭素数１０〜２４の脂肪酸の無
水物が挙げられ、その具体例としては例えばデカン酸、
ラウリン酸、ミリスチン酸。

パルミチン酸、ステアリン酸、エイコサン酸、トコサン
酸、テトラコサン酸、２−ブチルドデカン酸、４−ペン
チルウンデカン酸等の直鎖状又は分枝状高級飽和脂肪酸
の無水物、例えばオレイン酸。

リノール酸、リルン酸、２−へキシル−２−デセン酸等
の直鎖状又は分枝状高級不飽和脂肪酸の無水物等が挙げ
られ、その使用量については、特に制約はないが、通常
Ｃ）ＰＣ１モルに対して約２〜５モルの量が好ましく用
いられる。

本発明に於て、原料として用いられるＧＰＣは、例えば
卵黄レシチン、大豆レシチン等の天然レシチンを加水分
解又はアルコリシスすることにより容易に得ることがで
きる。これを常法、例えば特公昭６２−９５９９号公報
、Ｂｉｏｃｈｉｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ａｃｔａ、　
。

１８７　、５２０　（１９６９）等に記載の方法に従い
高級脂肪酸金属塩に担持させる。（）ＰＣを担持させる
高級脂肪酸金属塩は、アシル化剤として用いる高級脂肪
酸無水物の高級脂肪酸残基と同じ種類の高級脂肪酸残基
な持つものが好ましく、通常はそのような高級脂肪酸残
基な持つアルカリ金属塩やアルカリ土類金属塩が好まし
く用いられる。

高級脂肪酸金属塩は通常（）ＰＣに対し約２倍モル乃至
その前後の適当量が用いられる。

尚、本発明の場合、ＧＰＣを担持させる担体は高級脂肪
酸金属塩であることが必須であり、他のもの例えばシリ
カゲル、アルミナ、珪藻土等を担体として用いても本発
明の反応は満足に進行しない。

本発明に於て用いられる炭素原子上に活性水素原子を有
１．、且つそれ伺身アシル化される虞れのない有機溶媒
としては、例えばアセトニトリル。

７’　ｏ　ヒオニトリル、ブチロニトリル、バレロニト
リル、ヘキサンニトリル等の炭素数１〜乙のアルカンニ
トリル類、例えばマロン酸ジメチル、マロン酸ジエチル
、マロン酸ジプロピル等のマロン酸ジエステル類或はク
ロロホルム等が挙げられる。

本発明に於て、炭素原子上に活性水素原子を有し、且つ
それ自身アシル化される虞れのない有機溶媒の共存下に
用いられる有機溶媒としては、（）ＰＣのアシル化反応
を阻害せず、且つそれ自身アシル化される虞れのない有
機溶媒であればいずれ建ても良く、例えばメチルクロロ
ホルム、塩化エチレン、塩化メチレン、四塩化炭素等の
ハロゲン化炭化水素、例えばｎ−ペンタン、ｎ−ヘキサ
ン、ｎ−へブタン、ｎ−オクタン、シクロベニ／タン、
シクロヘキサン、シクロヘプタン、シクロオクタン等の
飽和炭化水素、例えばベンゼン、トルエン。

キシレン等の芳香族炭化水素、例えば酢酸メチル。

酢酸エチル、酢酸プロピル、ブローオン酸メチル。

ゾロピオン酸エチル、プロピオン酸プロぎル等のエステ
ル類、例えばジエチルエーテル１．）イングロビルエー
テル、テトラヒＰロフラン等のエーテル類、ジメチルス
ルホキシＰ、ジメチルホルムアミド等が挙げられるが、
特にこれらに限定されるものではない。これら反応溶媒
の使用量については特に制約はないが、通常はＯＰＣ担
持担持体１−量し総溶媒量として約５〜１ｏ容量倍程度
又はその前後の適当量が好ましく用いられる。また、炭
素原子上に活性水素原子を有する有機溶媒と他の有機溶
媒との混合割合は、通常５〜１００　：　９５〜０であ
り、用いる溶媒の組合せに応じて好ましい割合を適宜選
択すれば良い。

反応溶媒を用い無触媒下に、高級脂肪酸金属塩に担持さ
せたＧＰＣを高級脂肪酸無水物でアシル化反応させる反
応温度としては、本発明の効果を損なわない限り特に制
限は無いが、通常は約４０〜１００℃、好ましくは５０
〜９０℃の範囲から適当な反応温度が選ばれる。この場
合、反応時間は通常約１０〜２０時間程度又はその前後
の適当な反応時間でよい。尚、反応は窒素ガス等の不活
性ガスの導通下に行なわれるのが好ましい。

反応終了後は、常法に従って後処理すれば良く、要すれ
ばカラムクロマトグラフィー等により精製する等は任意
である。即ち、例えば、反応液を冷却して、反応液中の
高級脂肪酸と高級脂肪酸金属塩を析出せしめ、これを炉
去した後、炉液をカラムクロマトグラフィーにより精製
して、過剰の高級脂肪酸無水物や少量の副生物（リン酸
基の転位体、モノアシル体等）を取り除く。

本発明の方法では、塩基性触媒を用いる必要が無いので
、これを用いる方法よりもコスト的に有利であるばかり
ではな（、これを取り除（ために陽イオン交換樹脂等を
用いて処理する等の煩雑な操作を必要としない。また、
リン酸基の転位体やモノアシル体等副生物の生成も少な
く、反応後の後処理も極めて容易である。

以下に実験例及び実施例を示すが、本発明はこれら実験
例、実施例によって何等の制約を受けるものではない。

〔実施例〕

実験例１．（アシル化反応溶媒の検討−１）（１）　Ｃ
）ＰＣ−Ａルミチン酸カリ担持物の調製ＧＰＣ２５，７
ｙ、メタノール２００ｍ／！、パルミチン酸５２．２９
及び水酸化カリウム１１．１’を混合し、４０℃で溶解
させた後、濃縮乾固（−１Ｃ）ＰＣ−・ξルミチン酸カ
リ担持物８５．７１を得た。

（２）アシル化反応上で得た担持物８．５７　Ｓ’　（Ｃ）ＰＣ１０ｍ　ｍ
ｏｌ相当）及びパルミチン酸無水物１８．４１’　１．
８６ｘＴｈ）に溶媒６５ＷＩＪを加え、窒素ガス導通下
、６０℃で１５時間反応させた。反応後、メタノールを
加え（反応溶媒がクロロホルムの場合には不要）、２０
℃で不溶物を炉去した後、Ｆｉを濃縮乾固して粗ノパル
ミトイルホスファチジルコリンを得た。これをシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィーにより精製し、ジパルミト
イルホスファチジルコリン（以下、ＤＰＰＣと略記する
。）を含むフラクションを得、これを濃縮乾固して目的
物を得た。結果を表１に示す。

表　　１＊反応温度６８℃ 本本品質確認のために行ったＴＬＣの展開溶媒は以下の
通り。

クロロホルム：メタノール：水＝６５　二２５　：　４
（容ｆｆｉ比）表１より明らかな如く、炭素原子上に活
性水素原子を有し、且つそれ自身アシル化される虞れの
ないクロロホルムやプロピオニトリル等ヲアシル化の反
応溶媒として用いた場合には収率、品質共に極めて良好
な結果が得られる。一方、炭素原子上に活性水素原子を
有するもののそれ自身アシル化され得る溶媒であるメチ
ルエチルケトンの場合には見掛は上の収率は良いが、品
質的にはリゾ体（モノアシル体）を多く含み、しかも着
色しているため実用性に乏しい。またそれ以外の溶媒で
はいずれも収率が低く、更に四塩化炭素及びｎ−へキサ
ンの場合には品質的にも問題がある。

実験例２．（アシル化反応溶媒の検討−２）実験例１の
（１）と全く同様にして調製したＣ）ＰＣ−Ａ　Ａ／ミ
チン酸カリ担持物８．５７１（ＧＰＣ１０ｍ　ｍｏｌ相
当）を夫々原料とし、表２に記載の各混合溶媒を用いて
実験例１の（２）と全く同様にしてアシル化及び後処理
を行ってＤＰＰＣを得た。結果を表２に示す。

表　　２表２より明らかな如（、アシル化溶媒として単独で用い
た場合には収率、品質等の面で問題のあったものでも炭
素原子上に活性水素原子を有する、アセトニトリル、プ
ロピオニトリル、クロロホルム等を共存させてアシル化
反応を行った場合には収率、品質共に著しく向上する。

実施例１゜Ｃ）ＰＣ５，１４９、メタノール３５（１１ｍｌ５．ｏ
ルミチン酸１０．４４ｇ′及び水酸化カリウム２．２８
７を混合し、４０℃で溶解させた後、濃縮乾固し、ｏｐ
ｃ−パルミチ２及びノミルミチン酸無水物５５．６９に
クロロホルム１２０ｍｅを加え、窒素ガス導通下、５７
〜５９℃で１５時間還流反応させた。反応後、反応液を
冷却し、析出したパルミチン酸及びパルミチン酸カリウ
ムを２去した後、Ｐ液を濃縮して得た残渣６５７をシリ
カゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、精製Ｄ
ＰＰＣ１３，８５’を得た（収率９４．０％）。

ｍｐ　２５５℃。〔α）　２２　＝＝＝　＋　６．７°
（ＣＨＣＬ３　　、　Ｃ＝２．０）。

ＴＬＣ１５ｐｏｔ　ｏＨＰＬＣ含量９９．６％。

脂肪酸組成（ＧＣ）バルミチン酸９９４％０実施例２゜ＧＰＣ５，１４？、メタノール６５０Ｍ、ステアリン酸
１１．５８５’及び水酸化すｌ・リウムｔ　６５　ｒを
混合し、５０℃で溶解させた後、濃縮乾固し、ＧＰＣ−
ステアリン酸ナトリウム担持体ｉｓ、ｓｙを得た。

上で得たＧＰＣ−ステアリン酸ナトリウム担持体１８．
３グ及びステアリン酸無水物６９６６グにクロロホルム
１２０コを加え、窒素ガス導通下、１５時間還流反応さ
せた。反応後、反応液を冷却し、析出したステアリン酸
及びステアリン酸ナトリウムを戸去した後、ｐ液を濃縮
して得た残渣３７２を実施例１と同様シリカゲルカラム
クロマトグラフィーにより精製し、精製・ジステアロイ
ルホスファチノルコリン１４゜５ｆを得た（収率９１．
８％）。

ｍ９２３３℃。〔α際＝＋　６．１°（ｃＨｃｔ３．　
Ｃ＝２．０）。

ＴＬＣ１５ｐｏｔ　、　　ＨＰＬＣ含量９９１％　。

脂肪酸組成（ＧＣ）ステアリン酸９９１％。

実施例３゜（）ＰＣ５，１４？、メタノ−ｋ　３５０　ｒｔｔｌ　
、、パルミチン酸１０．４４５’及び水酸化カリウム２
．２ＥＨ’を混合し、４０℃で溶解させた後、濃縮乾固
し、ｏｐｃ　−Ａルミチン酸カリウム担持体１７．１１
’を得た。

土で得たＧＰＣ−パルミチン酸カリウム担持体１７．１
４ｆ及びパルミチン酸無水物５５．６７にゾロビオニト
リル１４０ｎｔｌを加え、窒素ガス導入下、２０時間還
流反応させた。反応液を冷却し、析出した・ぐルミチン
酸及びパルミチン酸カリウムなＦ去後、テ液を濃縮して
得た残＃ｉ３１？をシリカゲルカラムクロマトグラフィ
ーにより精製し、精製ＤＰＰＣ／１６．１７を得た（収
率８９６％）。

ｍｐ　２６５℃。〔α〕２３＝＋７．１°（ＣＨＣＬ３
　、　Ｃ＝２．０　）。

ＴＬＣ１ｓｐａも。　ＨＰＬＣ含量　９９６％　。

脂肪酸組成（ＯＣ）パルミチン酸　９９５％。

〔発明の効果〕

本発明はジアシルホスファチジルコリン（ＤＡＰＣ）類
の新規な製造方法を提供するものであり、本発明の方法
は作業性が良く、比較的短時間で高純度のＤＡＰＣ類が
収率良く得られ、しかも塩基性触媒等を使用しないので
これを除く為の煩雑な操作等も必要なく、企業化が容易
な点に顕著な効果を奏するものである。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示されるグリセロホスファチジルコリンを高級脂肪酸
金属塩に担持させ、［１］炭素原子上に活性水素原子を有し、且つそれ自身
アシル化される虞れのない有機溶媒中、若しくは、［２］炭素原子上に活性水素原子を有し、且つそれ自身
アシル化される虞れのない有機溶媒の共存下、該グリセ
ロホスファチジルコリンのアシル化反応を阻害せず、且
つそれ自身アシル化される虞れのない有機溶媒中、無触媒下に、一般式（ＲＣＯ）＿２Ｏ（式中、Ｒは飽和
又は不飽和の直鎖状又は分枝状炭化水素残基を表わす。）で示される高級脂肪酸無水物でアシル化することを特
徴とする、一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒは前記と同じ。）で示されるホスファチジル
コリン誘導体の製造方法。
（２）一般式（ＲＣＯ＿２）Ｏ（式中、Ｒは前記と同じ
。）で示される高級脂肪酸無水物が、炭素数１０〜２４
の高級脂肪酸の無水物である請求項１に記載の製造方法
。
（３）炭素原子上に活性水素原子を有し、且つそれ自身
アシル化される虞れのない有機溶媒がクロロホルムであ
る請求項１又は２に記載の製造方法。