JPH0276898A - 多形核白血球が内皮及びフィブリノーゲンに結合することを抑制する方法及び製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、内皮に及びフィブリノーゲンに多形核白血球
（ＰＭＮ）の結合を抑制する方法及び組成物に関し、前
記方法は、このような治療が必要な患者に対し下記式： ％式％ （式中（Ｃｈ）及び（Ｃ×）はそれぞれ独立した０−８
ＷＡの天然産出アミノ酸の連鎖であり、Ｂｔ＋Ｂ２　、
Ｘ２　、Ｘ２　、Ｘ３及び×４は、天然産出アミノ酸の
群から独立して選ばれる）のペプチドを有効量投与する
ことを含む。

発明の背景 斧形核（ＰＭＮ）白血球は血液中を循環し、内皮（血管
等の管の内面をおおう細胞）に結合することはない。微
生物その他の炎症物質が近くの組織に入り込むと、ＰＨ
Ｎは内皮に結合するようになり、次いで組織中に移動す
る。ＰＨＮは多くの微生物を認識して殺滅するため、こ
れは防西機構である。

しかしながら多くの病的症状の場合、ＰＨＮは過大で有
害な挙動を示す。例えば血流を閉塞するほどに活発に内
皮に結合する場合がある。−旦組織中に入り込むと、プ
ロテアーゼ、反応性酸素媒体、或いは微生物を死滅さけ
るだけでなく、同時に大きな組ｍ損傷を与えるような有
毒分子を分泌する。

更に、ＰＨＮは血管の状態や浸透性に影響を与える炎症
媒介物を分泌し、また余分の食ｍ胞をこの部位に送り、
かくして炎症を永久的にする。

内皮への結合を媒介するＰＨＩ４表面の分子は最近定義
されている。、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８と定義されるこの
分子は、付着を媒介すると考えられている。これは、（
ａ　）　ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に対するモノクローナル
抗体が、試験管内内皮に対するＰ１４Ｎの結合を抑制す
る、（ｂ）ウサギにＣＤ１１ｂ／ＣＤｌ８に対するモノ
クローナル抗体を注射すると、炎症刺激に応じるＰＭＨ
の通常の遊山を抑制する、（ｃ　）　ＣＤ１１ｂ／ＣＤ
１８及び関係する分子であるＣＤ１１ａ／ＣＤ１８及び
ＣＤ１１／ＣＤ１８の発現に遺伝的な欠陥を有する患者
からのＰＨＮは、試験管内における内皮細胞に結合する
ことができない、（ｄ）この分子が欠乏する患者はＰＨ
Ｎを感染部位に送ることができない、などのためである
。

ＣＤＩ　ｌｂ／ＣＤ１８は、以前は、第三成分Ｃ３ｂ１
のレセプタ（受容体）であると述べられていた（Ｗｒｌ
ｇｈｔほか、Ｐｒ０Ｃ，Ｎａｔｌ、八ｃａｄ、ｓｃｉ、
ＵｓＡ、　８０号、　５６９９−５７０３ページ、１９
８３年）。単一のレセプタが二つの能力、即ち多形核白
血球を内皮細胞、またＣ３ｂ被覆細胞に結合するように
媒介する能力を有するようである。

以前の研究によれば、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８により認識
されるＣ３ｂ１のアミノ酸系列もまた決定されている（
　Ｗｒｉｇｈｔほか、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、へｃａｄ、
ｓｃｉ、ｔｌｓＡ１８４号、１９６５−１９６８ページ
、１９８７年）。ＣＤ１１／ＣＤ１８は、Ｌｙｓ−Ｔｙ
ｒ−＾ｒｇ−Ｇｌｙ−＾ｓｙ系列（ヒトＣ３ｂｉ）或い
はＬｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＡｓＤ　　（ネズ
ミＣ３ｂｉ）を含むＣ３ｂ１の系列に結合する。このこ
とは、まったく予想外というわけではなかった。なぜな
らフィブロネクチンレセプタのような、ＣＤ１１ｂ／Ｃ
Ｄ１８に関係するレセプタは、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−へｓｐ
系列を含む蛋白質を認識部位の一部として認識するから
である。

（Ｗｒｉｇｈｔ　　ほか、Ｊ、Ｅｘｐ、Ｈｅｄ、、　１
６２号、７６２−７６７ページ、１９８５年；　Ｒｕｏ
ｓｌａｈｔｉほか、Ｃｅ１ｌ、４４号、５１７−５１８
ページ、１９８６年）。ＣＤ１１ｂ／ＣＤＩ＆と他のレ
セプタ、例えばＡｒ１Ｊ−Ｇｌ’／−へｓｐを認識Ｊる
フィブロネクチンレセプタとの間には重要な違いがある
。

Ａｒ（７−ＧＩｙ−Ａｓｐぞれ自体は、ＣＤ１１　ｂ／
ＣＤ１８によりｚ　１１されないのである。従って側部
アミノ酸の同定は、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８による認識の
ためには重要であり、Ａｒｇは、適当な側部アミノ酸が
存在する場合には非電荷（ｕｎｃｈａｒｇｅｄ　）アミ
ノ酸により買換されるかもしれない。

本発明の目的 本発明の目的は、従って、ある種のペプチド及びそのよ
うなペプチドを含む組成物を用いて、多形核白血球（Ｐ
ＭＮ）が内皮及びフィブリノーゲンに結合することを抑
制する方法を提供でることである。

本発明の更に別の目的は、患者に前記ペプチド、或いは
このペプチドを含有する組成物の有効量を投与すること
により、多形核白血球（ＰＭＮ）が内皮及びフィブリノ
ーゲンと結合する結果生じる組織ｎｉを防ぎ或いは緩和
することができる治療方法を提供することである。

本発明の川に別の目的は、抑制ωのペプチドをヒトの面
清アルブミン或いは高分子量のデキストンなどの担体と
組合わせ、血流中における存在時間を長引かせるように
して治療効果を高めることである。

本発明の説明 本発明は、内皮及びフィブリノーゲンに多形核白血球（
ＰＭＮ）が結合することを抑制する方法及び組成物に関
し、治療が必要な患者に対し、下記式二Ｈ２Ｎ　−（Ｃ
ｈ）　　Ｘ＋　−Ｘ２−Ｘ３−８１−Ｘ４−Ｂｚ　−Ｇ
ｌｙ　−Ａｓｐ　−（Ｃｘ）　−Ｈ（Ｉ　）（式中Ｃｈ
及びＣｘはそれぞれ独立したＯ−８個のアミ／！連鎖、
Ｂ＋　、Ｂ２　、Ｘ＋　、Ｘ２　、Ｘ３　、及びＸ４は
アミノ酸群から独立して選ばれる。但し生成するペプチ
ドは少くとも１０個のアミノ酸を含まなければならない
）、 のペプチドを有効Ｍ投与することを含む。

上記のアミノ酸は、そのり、ＤもしくはＯＬ立体化学構
成が天然産出アミノ酸である。明ｍａ全体を通じこれら
アミノ酸は、便宜のため、慣習的なＩＵＰＡＣ三文字略
号で示す。

式■のペプチドのうち、特定の組合せのものが好ましい
。式Ｉによる好ましいペプチドは、×１がグリシン（Ｇ
ｌｙ）でありＢ１がリシン（Ｌｙｓ）であるものであっ
て、従って好ましいベブブードｔよ下記のように示すこ
とができる： Ｈ２Ｎ　　（Ｃｈ）　−ｃｌｙ　　Ｘ２　　Ｘ３　　Ｌ
ＶＳ−Ｘ＜　　８２−Ｇｌｙ−＾ＳＥＩ　−（Ｃｘ＞　
−１−１（式中ｃｈ及びＣｘはそれぞれ独立したＯ−８
個のアミノＷ１連鎖、Ｂ２　、Ｘ＋　、Ｘ２　、Ｘ３　
、及Ｕ　Ｘ　４はアミノ酸群から独立して選ばれる）。

更に、式Ｉの好ましいペプチドの一つの群は、アミノ酸
のＣｈ連鎖が、基本的なアミノ酸、叩ちりシン（Ｌｙｓ
）、アルギニン（Ａｒｇｈ）及びヒスチジン（Ｈｉｓ）
からなる群より選ばれるＯ−５個のアミン酸を含むもの
である。

また、好ましいペプチドの群の別の例は、式Ｉにおいて
８２が基本的なアミノ酸、即ちりシン（Ｌｙｓ）、アル
ギニン（Ａｒｇ）及びヒスチジン（ｌＩｉｓ）からなる
群より選ばれるものである。

本発明に利用することができる別の好ましい式１のペプ
チド群は、Ｘ＋　、Ｘ２　、Ｘ３　、及びＸ４のアミノ
酸の一つもしくはそれ以上がグリシン（Ｇｌｙ）である
ものである。

本発明に利用することのできる極めて好ましい式Ｉのペ
プチド群の別の例は、Ｘ４　８２　　ＧＩＶ−Ａｓｐ　
−（Ｃｘ）が−ＬｙＳ−Ｇｌｎ−＾１ａ−Ｇｌｙ−Ａｓ
ｐ−Ｖａｌ−群であり、他方でＸ４−８２−ｃｌｙ　−
ＡｐＳ　　（Ｃｘ）が−Ｇｌｙ−Ａｒａ−Ｇｌｙ−＾５
ｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−（Ｃｘ−１）群であるものである
。

上記においてＣｘ−１なる語は、アミノ酸群から夫々独
立に選ばれた１−７個のアミノ酸連鎖を表わす。

かくして本発明方法および組成物に使用することのでき
る好ましいペプチドは下記式で表わされる： Ｈ２Ｎ　−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−へＩａ−Ｌｙｓ−
Ｇｌｎ−へＩａ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｈ；　　　
　　ト１　２　　　Ｎ　　−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−
１１ｉｓ−Ｈｉｓ−Ｌｃｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−
Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｈ
：及びＨ２Ｎ−＾ｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｃｕ−Ｐｒｏ−Ｇｌ
ｙ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｎｙ−Ｇｉｎ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ
−Ｇｌｙ−へｓｐ−へＩａ−Ｖａｔ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−
Ｇｌｕ−Δｒｇ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−＠ 本発明のペプチドのある種のものは新規物質である。こ
れらペプチドは一種もしくは数種のＤ構造アミノ酸、或
いはフィブリノーゲンの天然産出ガンマ連鎖に由来する
系列、即ちこのペプチド系列のアミノ酸の一種もしくは
数種がヒトフィブリノーゲンのガンマ連鎖のアミノ酸系
列と異なる系列、を含む。本発明に利用することができ
る他のペプチドのいくつかは、天然産出蛋白質に含まれ
る系列を含むけれども新規物質である。何故なら、前記
天然産出蛋白質１よ別として、従来製造されなかったも
のであるからである例えば、−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ
、−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ
−Ｇｌｙ−＾ｒｇ−Ｇｌｙ−＾ｓｐ−Ａｌａ−Ｖａｔ−
Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ、の
式で表わされるペプチドｐｅｐ６３はラインマニアプロ
マスティボートの表面グリコプロティン（Ｊｐ６３に由
来するものである。しかしながら精製された形のＰｅｐ
６３それ自体はこれまで知られておらず、治療薬剤とし
て利用されなかったものである。

本発明方法及び組成物に利用することのできるペプチド
は内皮に対するＰＭＨの結合を抑制することにより、ま
た凝固蛋白であるフィブリノーゲンに対するＰＨＨの結
合を抑制することで、その有用性が発揮される。かくし
て式ＩのペプチドがヒトＰ−）４Ｎで培養されると、標
準的なアッセイ方により検出されるように、ＰＨＮが内
皮及びフィブリノーゲンの双方に結合することが抑制さ
れる。式Ｉのこれらペプチドは、内皮及び／もしくはフ
ィブリノーゲンにＰＨＮが結合したことにより生ずる損
傷による治療が必要な患者の治療に利用づることができ
る。ＰＨＮが内皮或いはフィブリノーゲンに結合する結
果、組織の損壊が発作中或いは発作模、心臓病、髄膜炎
、肺炎球菌性肺炎、中耳炎、成人呼吸困難症、痛風、ぜ
ん息、乾負Ｔ１ライター症、白斑性脈管炎、発汗症、ｍ
Ｎ性脈管炎、結節性紅斑、壊痘性膿皮症、開基性障害、
移植器官の急性拒絶反応、敗血症性ショック、等の間に
生ずるため、これら症状の患者は式Ｉのペプチドを利用
する方法及び組成物による治療の対象者である。

これらペプチドは、好ましくは、例えばＨｅｒｒｉ−ｆ
ｉｅｌｄにより述べられているように（Ｊ、Ａｍ、Ｃｈ
ｅｍ。

Ｓａｃ、　、　８５号、２１４９ページ、１９６４年）
、固体相合成法により調製するが、当業者により知られ
ている他の均等な化学的合成法、例えばｌ１ｏｕｔｈｔ
ｅｎの合成法（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　
Ｓｃｉ、、　８２号、５１３２ページ、１９８５年）を
使用することもできる。固体相合成法は、Ｒｉｖｉｅｒ
ほかに付与された１９８２年１月２１日発行の米国特許
用４，２４４，９４６号に一般的に記載されているよう
に、適当な樹脂に保護されたアミノ酸を反応させること
により得られる。このような−殻内な合成法の例は、米
国特許用４．３０５、Ｂ７２号及び４．３１６，８９１
号に記載されている。４１−残香ボリベプチドの固体相
合成法についての議論は、Ｖａｌｅほかによる論文（Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ、　２１３号、１３９４−１３９７べ一ジ
、１９８１年９月）になされており、この論文ではより
詳細な合成法（Ｈａｒｋｅほか、Ｊ、　Ａｍ、Ｃｈｅｍ
。

Ｓｏｃ、　、　１０３号３１７８ページ、１９８１年）
に言及している。

ポリペプチドの合成にｄ３いて、アルファーアミノ基が
適当に保護されているバリンもしくはせリン（セリンの
場合、そのヒト［−１キシメチル側鎖が保護されている
）をクロロメチレートポリスチレン樹脂等とカップリン
グさせる。塩化メチレンに溶かしたトリフルオロ酢酸な
どを利用してアルファーアミノ保護基を除去した後、次
の合成段階を進行させる。文献に記載されているような
他の標準的な試薬及び条件を、特定アミノ保護基の除去
のために採用してもよい。

残ったアルファーアミノ−及び側鎖保護アミノ酸を、樹
脂と結合する中間化合物を得るため、所望の方法で段階
的にカップリングさせてもよい。

合成のため、夫々のアミノ酸を別々に添加する方法とし
て、これらアミノ酸のいくつかを、固体相連鎖成長のた
めの添加の前に、相互にカップリングさＵてもよい。適
当なカップリング剤の選択は、当業者には明らかである
。

ペプチドの化学的合成に共通することは、適当な保護基
を有づる種々アミノ酸部分の不安定側鎖基を、連鎖が完
全に出来上がった後、基が最終的に除去されるまで、保
護することである。同様に共通することは、アミノ酸或
いはその断片上のアルファーアミノ基を保護し、化合物
がカルボキシル基で反応し、次いでアルファーアミノ基
が選択的に除去され、以後の反応が除去された位置で生
ずるようにするこ件である。従って、合成中の一つの工
程として、中間化合物を生じさせる必要があり、中間化
合物は、ペプチドの所望系列中にアミノ酸残香のそれぞ
れを含み、これら残香は側鎖保：ｌＩ基を有するように
しなｔプればならない。これら保護基は、普通、実質的
に同時に除去され、所望する最終生成物が清浄化後前ら
れるようにする。

式（Ｉ）のペプチドの繰り返し単位からなるペプチドは
、同じ手順により調製される。

所望アミノ酸系列が完成した後、中間ペプチドは例えば
液体ＩＦなどの試薬で処理することにより樹脂支持体か
ら除去される。試薬はペプチドを樹脂から離脱させるだ
けでなく、残る側鎖保ｒ！！！基のすべてを離脱させる
。かくして得られるポリペプチドはゲル浸透法及び続い
てＩＩＰＬＣにより清浄化する（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：　
５ｔｒｕｃｔｕｒｅ　ａｎｄ　ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＦ
ｕｎｃｔｉｏｎ、　１２５−１２８ページ、１９７９年
、参照）。少くとも純度９３％或いはこれ以上（存在す
るペプチド全量を基準として）が通常得られ、これを臨
床試験及び／或いは使用に供することが望ましい。

純度９８％が実際的であるが、試験管適用に供する場合
には、より低い純度であっても許容できる。

従って、このような適用のためには、ペプチド全量を基
準として、少くとも約５０重量％であることを意味する
実質的に純粋なものであれば有効と考えられる。

本発明ペプチドは、治療、診断或いはその他の使用のた
めの薬剤組成物とすることができる。静脈内投与用製剤
をａ製するためには、組成物を塩化ナトリウム（例えば
０．１−２．０Ｈ）、グリシン等の生理学的に適合性の
ある物質であって、生理学的に適当なＭ　衝ｐＨを有す
る物質を含む水に溶解する。

投与口は、投与される特定化合物の活性に依存し、この
損は、当業者には容易に決定できよう。

更に、本発明ペプチドの治療効果を延長させるために、
ペプチドをヒト血清アルブミン或いは高分子ｈ１デギス
トラン等の担体分子と共役結合させることができる。こ
のことにより、より大きい分子が得られ、それにより患
者の血液から迅速に逃散することはない。共役結合後、
ペプチドは、治療が必要な患者に対し投与しつる適当な
組成物に調製することができる。

実施例 以下の例は本発明の製剤及び方法を示す。これらの例に
おいて１べてのペプチドは標準的＜【自動化法（八ｐｐ
ｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）により合成され、標
準的な方法による高圧液クロマトグラフィにより清浄化
された。親液化処理後、ペプチドは秤量され、生理的食
塩水に溶解され、ｐＨは水酸化ナトリウム添加により中
性となるよう調整された。

Ｌ この例は本発明方法が、フィブリノーゲン被覆面に刺激
されたＰＨＮが結合することを抑制するために使用され
ることを示す。第１図は、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に対す
るモノクローナル抗体、及びペプチド１１０と部属（イ
ンキュベージコン）することによる結合抑制レベルを示
し、第２図は投与間に依存する抑制効果を示す。

実験の詳細は以下の通りである。清浄化ヒトＰＨＭを１
５分間、フオルボルジブチレート３００Ｉ！１ｇ／ｌ！
を用いて刺激した。この刺激はＰＮＮを結合するように
するために必要であり、炎症部位におけるＰＨＮの刺ゐ
をまねるものである。フィブリノーゲン及びヒト血清ア
ルブミンの１１４Ｆ　／　ｘｌを培養面に１時間、２０
℃で部属することにより培養溜め表面をこれら蛋白質で
被覆した。ＰＨＮを次に洗浄し、１０μｇ／１１の種々
のモノクローナル抗体或いは２ｍｙ　／　ｙｆの合成ペ
プチドの存在下で、フィブリノーゲンをコートした培養
溜めに添加した。ＰＨＮを培養溜め表面に２０分間、０
℃で沈着させ、次いで３０分間、３７℃に温めた。表面
を次いで洗浄し、付着した細胞の数を相コントラスト顕
微鏡検査により数えた。

第１図は、ヒト血清アルブミン＜ｌｌ５Ａ）で被覆した
表面にはＰＨＮはあまり結合しないが、フィブリノーゲ
ンで被覆した表面には強く結合することを示１゜フィブ
リノーゲンに対するＰＨＨの結合はＣＤ１１ｂ／ＣＤ１
８により媒介される。なぜならモノクローナル抗体θＫ
Ｈ１０（ＣＤ１１ｂに対する抗体）及びｌ８４（ＣＤ１
８に対する抗体）は結合を阻止する一方、無関係の蛋白
質（３Ｇ８．ＦＣレセプタに対する抗体）に対するモノ
クローナル抗体は何等効果がないからである。これらデ
ータは更にペプチドＬＩＯＬｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａ
ｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｉｎ−八Ｉａ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｖａ
ｔがフィブリノーゲンに対するＰＨＨの結合を強く抑制
することを示している。抑制が特定されていることは、
ペプチドＧｌｙ−＾ｒｇ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−３ｅｒ−Ｐ
ｒｏ、がフィブリノーゲンに対する結合を抑制しないこ
と、またペプチドＡＣＬ１０におけるような［１０中の
Ｃｙｓ基のアセチル化が抑ｆ！ＩＩＪ能力の減少をもた
らすこと、かられかる（Ｃｙｓ基のアセチル化は、Ｊ、
Ｂ１０１．ＣＭｌ。

２６２号、９４７−９５０ページ、１９８７年、に記載
されているように、［１０を無水酸酸でｍｌすることに
より行われる）。

第２図は、Ｌｌｏによるフィブリノーゲンに対するＰＨ
Ｈの結合の抑制効果が投与ωに依存覆ることを示す。

第１図及び２図は、かくしてフィブリノーゲンに対する
ＰＭＨの付着が本発明方法により抑制されるであろうこ
とを示す。

男２ この例は、刺激されたＰＨＩがヒト内皮［ｌ胞に結合す
ることを抑制するために、本発明方法を使用することが
できることを示す。第３図は、ペプチドＰｅｐ６３によ
る抑制が投与量に依存することを示し、また第４図は、
ペプチドＧ１５による抑制が投与量に依存することを示
す。

実論は以下のように行われた。清浄化されたヒトＰＨＮ
が１５分間、３００Ｒｇ／ｙｆの７オルボルジプチレー
トを用いて刺激された。この刺激はＰＭＨに結合を起さ
せるために必要であり、炎症部位におけるＰＭＨの刺激
を真似るものである。内皮細胞が標準的な方法（Ｐａｗ
ｌｏｗｓｋｉほか、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、＾ｃａｄ。

Ｓｃｉ、、　８２号、８２０２ページ、１９８５年）に
よりヒトへそ帯から分離され、フィブロネクヂン被覆組
織培養表面で合流するまで培養された。この内皮細胞は
自然的な内皮の形態学的特徴を示す。ＰＨＮは洗浄され
、Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−
Ｌｅｕ−Ｇｎｙ−Ｇｌｎ−ＧＩｙ−ＡｒＯ−ＧＩｙ−＾
ｓＥｌ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ａ
ｒｇ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｐｅｐ６３）の、第３図に示づ
投与量と組合わせるか、或いはＧｌｙ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ
−Ｈｉｓ−１１ｉｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｌａ
−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−八５Ｄ−Ｖａｌ（
Ｇ１５）の第４図に示す投与量と組合わせた。このｌ１
ｌｌａを次に内皮に添４加し、３７℃で１５分間温部属
た。着合しなかったＰＨＮを次いで洗い流し、結合数を
顕微鏡検査で数えた。

第３図及び４図は、本発明方法が、刺激されたＰＨＮが
内皮に着合することを阻止するために有効であることを
示している。

本発明は、本発明の特許請求の範囲から逸脱することな
く他の方法でも具体化することができる。

従って明ｍａの説明は内容の理解のための説明と考えら
れるべきであり、本発明がこれにより限定されるものと
考えられるべきでなく、様々の変更が特許請求の範囲内
においてなされうる、と理解されるべきである。

【図面の簡単な説明】

第１図は、フィブリノーゲンで被覆された表面に刺激さ
れたＰＨＮが結合することが抑制されることを示す。Ｃ
Ｄ１１ｂ／ＣＤ１８（Ｏに旧０及びＩＢ４）に対するモ
ノクローナル抗体が比較物質であるヒト血清アルブミン
（ＩＩｓＡ）で被膜された面に対する結合レベルにまで
、結合を減少させ、従ってフィブリノーゲンとＰＨＨの
相互作用におけるＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８の役割を示す。 合成ペプチドである。 Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ａ
ｌａ−Ｇｌｙ−＾５ｐ−Ｖａ　１（Ｌｌｏ）も２　ｊｌ
ｓＦ　／　１１で、フィブリノーゲンに対する結合を強
く抑制する。抑ｉｌｌの特異性は、このペプチドＬＹＳ
残香がアセチル化によりペプチドＡｃＬ１０における場
合のように変異した時には、抑制効果がないことから観
察される。 第２図は、１１０による、フィブリノーゲンに対するＰ
ＨＮ結合抑制が投与量に依存することを示す。 第３図は、Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−
Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ａｒｏ−ＧＩＶ−八
ｓｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ａｒ
ｇ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ　（Ｐｅｐ６３　）による、内皮細
胞に対するＰＨＮ結合抑制が投与ｍに依存することを示
す。 第４図は、Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｈｉｓ−１１ｉｓ
−Ｌｃｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−
＾１ａ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｖａｌ（Ｇ１５）による、内
皮細胞に対するＰＨＮ結合抑制が投与量に依存すること
を示す。 特　許　出　願　人　　　＋ｆ　　ロックフェラーユニ
バーシティ ＬＤＭ　２ Ｐｅｐ　６Ｊ　（ｍｇ／ｍｌ） バーｊ３ ＧＴ５（ｍｇ／ｍＬ） １、事件の表示 平成１年特　許　願第６７４０１号 ２、発明の名称 多形核白血球が内皮及びフィブリノーゲンに結合するこ
とを抑制する方法及び製剤 ３、補正をする名 事件との関係　　　　　特　許　出　願　人氏名（名称
）　　ブ　ロックフエラー　ユニパーシティ４、代理人 ５、補正命令の日付（自発補正） 昭和　　年　　月　　日 ７、補正の内容 （１）別紙の通り （２）別紙の通り （３）明細内の浄Ｉ！（内容に変更なし）（４）別紙の
通り １、事件の表示 平成１　年　特許願　第６７４０１号 ２、発明の名称 多形核白血球が内皮及びフィブリノーゲンに結合するこ
とを抑υ１する方法及び製剤 氏名（名称）　　ザ　ロツクフエラー　ユニバーシティ
昭和　　年　　月　　日 明１１１ｔｌｊの特許請求の範囲中、請求項３３〜ｖＡ
求項４９を削除し、請求項５０を請求項３３として別紙
の如く補正する。 特許請求の範囲 １、多形核白血球（ＰＭＮ）が内皮及びフィブリノーゲ
ンに結合することを抑制する方法ぐあって、式（Ｉ）の
ベブチド： ト１２　　　Ｎ　　−（Ｃｈ）　　　−ＸＩ　　　−Ｘ
２　　−Ｘ３　　−Ｂｌ　　　−−Ｘ４−Ｂ２　　ＧＩ
Ｖ−＾５ｐ−（Ｃｘ）−ｌ−１（Ｉ）（式中Ｃｈ及びＣ
ｘはそれぞれ独立したＯ−８個のアミノ酸の連鎖であり
、Ｂ＋　、Ｂ２　、ＸＩ　、Ｘ２　。 ×３及び×４はそれぞれ独立にアミノ酸群から選ばれる
。但しこのペプチドは少くとも１０個のアミノ酸を含む
）の右効けを、治療の必要な患者に投与することを含む
方法。 ２、×１がグリシン（Ｇｌｙ）であり、Ｂ１がリシン（
Ｌｙｓ）である請求項１記載の方法。 ３、Ｂ２がリシン（Ｌｙｓ）、アルギニン（Ａｒｇ）及
びヒスデシン（旧Ｓ）のうちから選ばれる請求項１記載
の方法。 ４、Ｃｈアミノ酸がリシン（Ｌｙｓ）、アルギニン（Ａ
ｒｇ）及びヒスチジン（Ｈｉｓ）から選ばれる請求項１
記載の方法。 ５、ＸＩ　、Ｘ２　、Ｘ３及びＸＩ（７）−ｐ以上がグ
リシン（Ｇｌｙ）である請求項１記載の方法。 ６、ペプチドが、Ｈｚ　Ｎ　−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ
−＾１ａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−
Ｖａｌ−Ｈ，である請求項１記載の方法。 ７、ペプチドが１１２Ｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−１
１ｉｓ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−＾１ａ−Ｌ
ｙｓ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｓｏ−Ｖａｌ−Ｈ。 である請求項１記載の方法。 ８、ペプチドが下記式： ％式％ −Ｃｙｓ−Ｈ、を有する請求項１記載の方法。 ９、ペプチドがアミノ酸の下記組ニ ーＬｙｓ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−＾５ｐ−Ｖａｔ−
を有する請求項１記載の方法。 １０、ペプチドがアミノ酸の下記組ニ ーＧｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−ＡｓＤ−Ａｌａ−Ｖａｌ−
をｆＪする請求項１記載の方法。 １１、ペプチドが担体分子に移植されている請求項１記
叙の方法。 １２、ペプチドが担体分子に移植されている請求項２記
載の方法。 １３、担体分子がヒ１へ血清アルブミンである請求項１
記載の方法。 １４、前記担体分子がヒト血清アルブミンである請求項
２記載の方法。 １５、前記担体分子が高分子７Ｂデキストランぐある請
求Ｊｆｉ　１記載の方法。 １６、前記担体分子が高分子量デキストランである請求
項１記載の方法。 １７、多形核白血球（ＰＭＮ）が内皮及びフィブリノー
ゲンに結合づることを抑制リ−る製剤ぐあっｒ前記式の
ペプチド： １−１２　Ｎ　−（Ｃｈ）　−ＸＩ　−Ｘ２−Ｘ３−ｔ
３＋　−Ｘ４　　　　　Ｂ２　−　ＧＩＶ　　−ΔＳｔ
）　　−（Ｃｘ）−Ｈ（’Ｉ　　）（式中ｃｈ及びＣｘ
はそれぞれ独立にＯ−８個のアミノ酸の連鎖であり、Ｂ
＋　、Ｂ２　、ＸＩ　、Ｘ２　。 ×３及び×４はそれぞれ独立にアミンＦＨＴから選ばれ
る。、（Ｌ１シこのペプチドは少くとし１０個のアミノ
酸を含む）を含む製剤。 １８、ＸＩが’Ｉ　’Ｊ　シ＞　（Ｇｌｙ）ｒあり、Ｂ
１がリシン（Ｌｙｓ）である請求項１７記載の製剤。 １９、Ｂ２がリシン（Ｌｙｓ）、　フルギニン（Ａｒｇ
）及びヒスチジン（Ｈｉｓ）から選ばれる請求項１１記
載の製剤。 ２０、　Ｃｈアミノ酸がリシン（ｃｙｓｔ、アルギニン
（八ｒｇ）及びヒスチージン（Ｈｉｓ）のうちから選ば
れる請求項１７記載の製剤。 ２１、ＸＩ　、Ｘ２　、Ｘ３　、　及びＸＩ　（Ｂ７ミ
、／Ｍ（１）一つ以上がグリシン（Ｇｌｙ）である請求
項１７記載の製剤。 ２２４ベブヂドがＨ２Ｎ　−Ｌｃｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−
Ａｌａ−１−ｙｓ−Ｇｌｎ−＾１ａ−Ｇｌｙ−Ａｓｌ）
−Ｖａｌ−ト１．テある請求ＪＵ７記載の製剤。 ２３、ペプチドが、Ｈ２Ｎ　−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ
−１１ｉｓ−旧５−Ｌｃｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−八１ａ−
１−ｙｓ−Ｇｉｎ−＾１ａ−Ｇｌｙ−八５ｐ−Ｖａｔ−
ト１　。 である請求項１７記載の製剤。 ２４、ペプチドが下記式： ％式％ −Ｃｙｓ−Ｈ，を有する請求項１７記載の製剤。 ２５、ペプチドがアミノ酸の下記組ニ ーＬｙｓ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−八５ｐ−Ｖａ　ｌ
−を有する請求項１７記載の製剤。 ２６、ペプチドがアミノ酸の下記組ニ ーＧｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−＾１ａ−Ｖａｔ−
をＰｉ　ＩＪる請求項１７記載の製剤。 ２７、ペプチドが担体分子に移植されている請求項１７
記載の製剤。 ２８、ペプチドが担体分子に移植されている請求項１８
記載の製剤。 ２９、担体分子がヒト血清アルブミンである請求項１７
記載の製剤。 ３０、担体分子がヒト血清アルブミンである請求項１８
記載の製剤。 ３１、担体分子が高分子１７キストランである請求項１
７記載の製剤。 ３２、担体分子が高分子はデキストランである請求項１
８記載の製剤。 ３３、下記式： ％式％ （Ｐｅｐ６３）で表わされる精製ペプチド。 （特許庁審査官　　　　　　　　　　　　　　殿）１．
事件の表示 平成１　年　特許願　第６７４０１号 ２、発明の名称 多形核白血球が内皮及びフィブリノーゲンに結合するこ
とを抑制する方法及び製剤 ３、補正をする者 事件との関係　　　　　　特　許　出　願　人氏名（名
称）　　　ザ　ロックフェラー　ユニバーシティ５、補
正命令の日付（発送口） 平成１年７月４日 ６、補正の対象 図面（第１〜４図） ＦＩＧ、Ｉ ＬＩＯｆｍｑ　／ｍ１ｌ ＦＩＧ、２

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、多形核白血球（ＰＭＮ）が内皮及びフィブリノーゲ
   ンに結合することを抑制する方法であって、式（ I ）
   のペプチド： 【アミノ酸配列があります】（ I ） （式中Ｃｈ及びＣｘはそれぞれ独立した０−８個のアミ
   ノ酸の連鎖であり、Ｂ＿１、Ｂ＿２、Ｘ＿１、Ｘ＿２、
   Ｘ＿３及びＸ＿４はそれぞれ独立にアミノ酸群から選ば
   れる。但しこのペプチドは少くとも１０個のアミノ酸を
   含む）の有効量を、治療の必要な患者に投与することを
   含む方法。 ２、Ｘ＿１がグリシン（Ｇｌｙ）であり、Ｂ＿１がリシ
   ン（Ｌｙｓ）である請求項１記載の方法。 ３、Ｂ＿２がリシン（Ｌｙｓ）、アルギニン（Ａｒｇ）
   及びヒスチジン（Ｈｉｓ）のうちから選ばれる請求項１
   記載の方法。 ４、Ｃｈアミノ酸がリシン（Ｌｙｓ）、アルギニン（Ａ
   ｒｇ）及びヒスチジン（Ｈｉｓ）から選ばれる請求項１
   記載の方法。 ５、Ｘ＿１、Ｘ＿２、Ｘ＿３及びＸ＿４の一つ以上がグ
   リシン（Ｇｌｙ）である請求項１記載の方法。 ６、ペプチドが、【アミノ酸配列があります】である請
   求項１記載 の方法。 ７、ペプチドが【アミノ酸配列があります】である請求
   項１記載の方法。 ８、ペプチドが下記式： 【アミノ酸配列があります】 を有する請求項１記載の方法。 ９、ペプチドがアミノ酸の下記組： 【アミノ酸配列があります】を有する請求項１記載の方
   法。 １０、ペプチドがアミノ酸の下記組： 【アミノ酸配列があります】を有する請求項１記載の方
   法。 １１、ペプチドが担体分子に移植されている請求項１記
   載の方法。 １２、ペプチドが担体分子に移植されている請求項２記
   載の方法。 １３、担体分子がヒト血清アルブミンである請求項１記
   載の方法。 １４、前記担体分子がヒト血清アルブミンである請求項
   ２記載の方法。 １５、前記担体分子が高分子量デキストランである請求
   項１記載の方法。 １６、前記担体分子が高分子量デキストランである請求
   項１記載の方法。 １７、多形核白血球（ＰＭＮ）が内皮及びフィブリノー
   ゲンに結合することを抑制する製剤であつて下記式のペ
   プチド： 【アミノ酸配列があります】（ I ） （式中Ｃｈ及びＣｘはそれぞれ独立に０−８個のアミノ
   酸の連鎖であり、Ｂ＿１、Ｂ＿２、Ｘ＿１、Ｘ＿２、Ｘ
   ＿３及びＸ＿４はそれぞれ独立にアミノ酸群から選ばれ
   る。但しこのペプチドは少くとも１０個のアミノ酸を含
   む）を含む製剤。 １８、Ｘ＿１がグリシン（Ｇｌｙ）であり、Ｂ＿１がリ
   シン（Ｌｙｓ）である請求項１７記載の製剤。 １９、Ｂ＿２がリシン（Ｌｙｓ）、アルギニン（Ａｒｇ
   ）及びヒスチジン（Ｈｉｓ）から選ばれる請求項１７記
   載の製剤。 ２０、Ｃｈアミノ酸がリシン（Ｌｙｓ）、アルギニン（
   Ａｒｇ）及びヒスチジン（Ｈｉｓ）のうちから選ばれる
   請求項１７記載の製剤。 ２１、Ｘ＿１、Ｘ＿２、Ｘ＿３、及びＸ＿４のアミノ酸
   の一つ以上がグリシン（Ｇｌｙ）である請求項１７記載
   の製剤。 ２２、ペプチドが【アミノ酸配列があります】である請
   求項１７記載 の製剤。 ２３、ペプチドが【アミノ酸配列があります】である請
   求項１７記載の製剤。 ２４、ペプチドが下記式： 【アミノ酸配列があります】 を有する請求項１７記載の製剤。 ２５、ペプチドがアミノ酸の下記組： 【アミノ酸配列があります】を有する請求項１７記載の
   製剤。 ２６、ペプチドがアミノ酸の下記組： 【アミノ酸配列があります】を有する請求項１７記載の
   製剤。 ２７、ペプチドが担体分子に移植されている請求項１７
   記載の製剤。 ２８、ペプチドが担体分子に移植されている請求項１８
   記載の製剤。 ２９、担体分子がヒト血清アルブミンである請求項１７
   記載の製剤。 ３０、担体分子がヒト血清アルブミンである請求項１８
   記載の製剤。 ３１、担体分子が高分子量デキストランである請求項１
   ７記載の製剤。 ３２、担体分子が高分子量デキストランである請求項１
   ８記載の製剤。 ３３、請求項１７−３３のいずれか１項記載の製剤及び
   製薬学的に受入れられる担体を含む、多形核白血球（Ｐ
   ＭＮ）が内皮及びフィブリノーゲンに結合することを抑
   制する薬剤組成物。 ３４、治療が必要な患者における多形核白血球（ＰＭＮ
   ）が内皮及びフィブリノーゲンに結合することを抑制す
   るために有用な組成物の製造のための、下記式のペプチ
   ド： 【アミノ酸配列があります】（ I ） （式中Ｃｈ及びＣｘはそれぞれ独立した０−８個のアミ
   ノ酸の連鎖であり、Ｂ＿１、Ｂ＿２、Ｘ＿１、Ｘ＿２、
   Ｘ＿３及びＸ＿４はそれぞれ独立にアミノ酸群から選ば
   れる。但しこのペプチドは少くとも１０個のアミノ酸を
   含む）を含む製剤の使用。 ３５、Ｘ＿１がグリシン（Ｇｌｙ）でありＢ＿１がリシ
   ン（Ｌｙｓ）である請求項３４記載の使用。 ３６、Ｂ＿２がリシン（Ｌｙｓ）、アルギニン（Ａｒｇ
   ）及びヒスチジン（Ｈｉｓ）から選ばれる請求項３４記
   載の使用。 ３７、Ｃｈアミノ酸がリシン（Ｌｙｓ）、アルギニン（
   Ａｒｇ）及びヒスチジン（Ｈｉｓ）から選ばれる請求項
   ３４記載の使用。 ３８、Ｘ＿１、Ｘ＿２、Ｘ＿３及びＸ＿４のアミノ酸の
   一つ以上がグリシン（Ｇｌｙ）である請求項３４記載の
   使用。 ３９、ペプチドが【アミノ酸配列があります】である請
   求項３４記載 の使用。 ４０、ペプチドが【アミノ酸配列があります】である請
   求項３４記載の使用。 ４１、ペプチドが、式： 【アミノ酸配列があります】 を有する請求項３４記載の使用。 ４２、ペプチドがアミノ酸の組： 【アミノ酸配列があります】を有する請求項３４記載の
   使用。 ４３、ペプチドがアミノ酸の組： 【アミノ酸配列があります】を有する請求項３４記載の
   使用。 ４４、ペプチドが担体分子に移植されている請求項３４
   記載の使用。 ４５、ペプチドが担体分子に移植されている請求項３５
   記載の使用。 ４６、担体分子がヒト血清アルブミンである請求項３４
   記載の使用。 ４７、担体分子がヒト血清アルブミンである請求項３５
   記載の使用。 ４８、担体分子が高分子量デキストランである請求項３
   ４記載の使用。 ４９、担体分子が高分子量デキストランである請求項３
   ５記載の使用。 ５０、下記式： 【アミノ酸配列があります】 で表わされる精製ペプチド。