JPH0278630A

JPH0278630A - 抗腫瘍剤

Info

Publication number: JPH0278630A
Application number: JP63228848A
Authority: JP
Inventors: Taku Mizuno; 卓水野; Hitoshi Ito; 均伊藤; Keishiro Shimura; 志村　圭志郎; Toshimitsu Sumitani; 隅谷　利光; Hirokazu Kawagishi; 洋和河岸; Toshihiko Hagiwara; 俊彦萩原; Takuji Nakamura; 卓二中村
Original assignee: Nichirei Corp; Iwade Research Institute of Mycology Co Ltd
Current assignee: Nichirei Corp; Iwade Research Institute of Mycology Co Ltd
Priority date: 1988-09-14
Filing date: 1988-09-14
Publication date: 1990-03-19

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〈産業上の利用分野〉本発明は、ハラタケ属（Ａｇａｒｌｃｕｓ）のキノコで
あるカワリハラタケ（通称ヒメマツタケ）（Ａｇａｒｉ
ｃｕｓ−ｂｌａｚｅｉ）の子実体中に存在１−１抗腫瘍
活性を持つ新規な蛋白多糖体に関する。

〈従来の技術〉カワリハラタケ自体は民間でこれまで糖尿病や高血圧の
治療および抗腫瘍剤の一種として利用されてきた。　ま
た、カワリハラタケｒ実体より抗腫瘍作用を有する水溶
性の蛋白多糖体の製法については、特開昭５５−７４７
９７号に記載されている。

〈発明が解決しようとしている問題点〉カワリハラタケ
子実体の熱水抽出物中には、抗腫瘍作用を持つ多糖体や
、核酸成分が分離されている。しかしながら、熱水抽出
残渣から抗腫瘍性物質の分離は行われていない。

本発明はカワリハラタケ熱水抽出残渣から抗腫瘍性物質
を分離し、抗腫瘍剤として応用しようとするものである
。

〈問題点を解決するための手段〉本発明者等はカワリハラタケ子実体の熱水抽出残渣をア
ルカリ抽出し、抽出物の抗腫瘍性を検討した結果、著し
い抗腫瘍性を示すことを見い出した。さらにその本体の
構造は、従来の抗腫瘍多糖の構造とは異なるβ（１−６
）−Ｄ−グルカンと蛋白質の複合体と判明し、本発明の
完成に至った。

カワリハラタケ子実体からこの発明の抗腫瘍性物質を抽
出、分離するには例えば次のような方法で得ることがで
きる。まず生の子実体、乾燥した子実体を使用し、生の
子実体の場合は千切りにし、乾燥品の場合には粉砕する
。千切りあるいは粉砕した子実体は低級脂肪族アルコー
ルあるいは２０％以下の水を含有する低級脂肪族アルコ
ールによって抽出前処理することにより低分子成分を除
去する。次に、残渣を熱水で抽出し、水溶性成分を除去
する。この・抽出残渣を風乾し、シュウ酸アンモニウム
で抽出を行う。さらに、その抽出残渣に５％水酸化ナト
リウム水溶液を加え３０℃で抽出を行う。この抽出液を
酢酸で中和し、ｐＨ５〜６に調整し、生じた沈澱を除去
する。次にゲルが過によって、蛋白質・多糖体画分を分
離する。そしてこれを透析し、その他の公知の精製手段
に上り脱塩精製し、精製液を濃縮した後、常法によって
凍結乾燥すると灰白色粉末体を得ることができる。

このようにして得られた物質は、以下に説明する理化学
的性質を有し、後述する動物試験の結果から抗腫瘍剤と
して有効な物質と認められる。

（＋）理化学的性質（イ）元素分析の結果Ｃ４１，８７％、Ｈ７，１５％、
Ｎ６．８８％であり、フェノール・硫酸法による糖含１
（グルコース換算）４３４％、Ｌｏｗｒｙ法による蛋白
質（牛アルブミン換算）５０．２％を含有する蛋白多糖
体である。構成糖はアルジトール・アセテートのガスク
ロマトグラフィーで大部分はグルコースから成り微量の
キシロース、ガラクトース、マルトースを含有する。

箱守法によるメチル化分析及びＩＨ，′３ＣＮＭＲ分析
によりグルコースのβ１→６結合を認める。

（ロ）ゲルが過によって求めた分子量は約１〜５万であ
る。

（ハ）比旋光度〔Ｕ〕ｏ’＝　　２３，０°（ｃ　＝１
．０　、５％Ｎａ０Ｈ）で左旋性を示す。

（ニ）赤外線吸収スペクトルをＫＢｒ錠剤法で測定し、
これを第１図に示す。

（ホ）核磁気共鳴スペクトル（”Ｃ−Ｎ　Ｍ　Ｒ）を、
０．３Ｍ　Ｎａ０Ｄに溶解し、測定し、これを第２図に
示す。

（へ）１〜１０％水酸化ナトリウム等のアルカリに可溶
であり、水、酸およびＤＭＳＯ（ジメチルスルフオキシ
ド）にやや溶解し、有機溶媒たとえばエタノール、アセ
トン、エーテル、クロロホルム等には不溶である。

（ト）アンスロン硫酸試薬、ニンヒドリン反応試薬に対
して陽性である。

（ヂ）凍結乾燥によって得られた粉末は灰白色を呈する
。

（す）アミノ酸組成（モル％）　　６Ｍ塩酸と１１０’
Ｃ，２０時間加水分解したものを、日立８３５型アミノ
酸分析計によって測定した結果Ａｓｐ　１０．７゜Ｔｈ
ｒ　５．２．　Ｓｅｒ　５．３．　Ｇｌｕ　１１．１．
　Ｇｌｙ　９Ｊ、　ＡＩａｌｌ、９．　Ｍａｌ　４．９
．　Ｍｅｔ　１．１．　Ｉｌｅ　３Ｊ、　Ｌｅｕ　１０
゜８、　Ｔｙｒ　２．４．　Ｐｈｅ　４．５．　Ｌｙｓ
　５Ｊ、　Ｈｉｓ　２．１゜Ａｒｇ５．２．　Ｐｒｏ　
６．９を示す。

〈作用〉次に本発明の抗腫瘍剤の急性毒性および薬理作用につい
て述べる。

（１）急性毒性ＩＣＲマウス（雌、５週令）の腹腔内または経口１回投
与による急性毒性試験（１週間観察）において、本発明
抗腫瘍剤は５００ｍｇ／ｋｇで死亡率はともに０７７で
あるマウスにおける重大な体重変化は見られなかった。

（２）薬理作用ａ）試験例Ｉ　（腹腔内投与法）サルコーマ１８０固形癌に対する効果 ■ＣＲＣウマウス腋窩下で継代されているサルコーマ１
８０の固形癌細胞（直径３ｍｍ）をトロツカールでＩＣ
Ｒマウス（雌４迎合）の腋窩部皮下に移植し、移植２４
時間後より、本発明の抗腫瘍剤を腹腔内に投与した。投
与回数は１日１回ＩＯ日間とし、移植３週間後に腫瘍直
径を測定し、それを対照群と比較してｌＩｔ瘍抑制率を
算出した。また６週間後には、腫瘍完全消失率と死亡率
を調べた。その結果を第１表に示す。

〈実施例〉乾燥したカワリハラタケ子実体１００ｇに２１２の８５
％エタノールを加え、８０℃で加熱還流抽出を３回行っ
た。抽出残渣に２夕の１％ンユウ酸アンモニウムを加え
１００℃で抽出を行い冷却後、が別した。

その抽出残渣をさらに５％水酸化ナトリウムＩＬ３０℃
で抽出した。得られた抽出液を酢酸で中和し、生じた不
溶物を除去し、最終濃度が８０％になるようにエタノー
ルを加えた。この時相じた沈澱物を遠心分離によって回
収した。沈澱物は０．３Ｍ水酸化ナトリウムに溶解し、
トヨパールＨＷ−５５Ｓカラム（４Ｘ　５０ｃｍ）を用
いてゲルが過を行った。フェノール硫酸法による４８５
ｎｍに吸収のあるフラクションを集め、透析、凍結乾燥
することにより抗腫瘍物質を７．５ｇ得た。

【図面の簡単な説明】

第１図は赤外線吸収スペクトルを示す。第２図は核磁気
共鳴スペクトルを示す。特許出願人　代表者株式会社ニチレイ

Claims

【特許請求の範囲】

（１）下記の理化学的性質を有するカワリハラタケ子実
体由来の蛋白多糖体からなる抗腫瘍剤（イ）元素分析：Ｃ４１．８７％　Ｈ７．１５％Ｎ６．
８８％　糖含量５０．２％　タンパク質含量４３．３％（ロ）分子量：１〜５万（ハ）比旋光度：〔α〕＾２＾５＿Ｄ＝−２３．０゜（
ｃ＝１．０、５％ＮａＯＨ）（ニ）赤外線吸収スペクトル：第１図に示す。（ホ）核磁気共鳴スペクトル：第２図に示す。（ヘ）溶解性：アルカリに可溶、水、ＤＭＳＯ（ジメチ
ルスルフォキシド）にやや溶解、有機溶媒に不溶（ト）呈色反応：フェノール硫酸およびニンヒドリン反
応に陽性（チ）色：灰白色（リ）アミノ酸組成（モル％）：Ａｓｐ１０．７、Ｔｈ
ｒ５．２、Ｓｅｒ５．３、Ｇｌｕ１１．１、Ｇｌｙ９．
３、Ａｌａ１１．９、Ｖａｌ４．９、Ｍｅｔ１．１、Ｉ
ｌｅ３．３、Ｌｅｕ１０．８、Ｔｙｒ２．４、Ｐｈｅ４
．５、Ｌｙｓ５．３、Ｈｉｓ２．１、Ａｒｇ５．２、Ｐ
ｒｏ６．９、合計１００％。