JPH0295261A - 解糖阻止剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、血中の解糖による血糖の低下を速効的に阻止
し、かつその初期値を長時間維持し得、さらにグリコヘ
モグロビンＡＩ、特にグリコヘモグロビンＡ＋Ｃの測定
が可能な解糖阻止剤に関する。

（従来の技術） 血中のグルツース（血糖）の測定および赤血球中に存在
するグリコヘモグロビンＡＩ、特にグリコヘモグロビン
Ａ１ｃ　（健常人においては、総ヘモグロビン中に４．
５〜５．５％の割合で存在する）の測定は、糖尿病検査
において重要な測定項目である。

一般に、血液成分の検査を行う場合には、採血から測定
まである程度の時間を要する。特に、大病院や検査セン
ターなどでは、多数の検体を扱うため、検査業務の流れ
からいっても採血後少くとも室温下で数時間保存される
ことけ避けられないし、場合によっては集配されてきた
検体にいたっては、更に長時間保存されることがある。

血糖検査の場合、採血後保存期間中に解糖により血糖値
が低下し易いので、その抑制を目的として解糖阻止剤が
加えられる。従来、解糖阻止剤としてフッ化塩、モノハ
ロゲン化酢酸金属塩、クエン酸およびＤ−マンノースな
どが知られている。しかし、これらの公知の解糖阻止剤
には以下のような問題点かあっ六。

フッ化塩とモノハロゲン化酢酸金属塩は、それぞれエノ
ラーゼ、グリセルアルデヒ）”−ｓ−リン酸脱水素酵素
の作用を阻害することにより解糖阻止効果を有するが、
これらの酵素は解糖系の下位の酵素であるため、阻止効
果発現までに時間が力無かり、その間に血糖が少し低下
するので速効性に乏しいという問題点があった。しかし
、阻止効果が１度発現すると、それ以後は持続的に血糖
は維持される。

クエン酸は、ホスホフルクトキナーゼという解糖系の上
位の酵素を阻害するので、速効的な解糖阻止効果を示す
。しかし、クエン酸は、強酸性（ｐＨ１〜２）なので、
血液と混合されると血液のｐＨが酸性（ｐＨ４〜５）と
なり、赤血球が変性し溶血が激しくおこる。溶血すると
、検体を取扱う検査技師に不安感を与えるばかりでなく
、比色法を用いた血糖測定法では誤差を与えるという問
題点があった。また、グリコヘモグロビンＡ１ｃの測定
においては、このような低いｐＨにおいてヘモグロビン
が変性をおこし誤差を与えるとｈう問題点があった。

Ｄ−マンノースは、グルコースと同様にヘキソキナーゼ
の基質となるので、ヘキソキナーゼのグルコースの解糖
作用において、グルコースに競合する。このことにより
、解糖を阻止するため、速効性があるが％Ｄ−マンノー
スの全てが消費されてしまうと、それ以後は再び解糖に
よる血糖の低下がおこるので、長時間解糖阻止効果を維
持し得ないという問題点があった。この間Ｍ点の解決の
ため、Ｄ−マンノースに７フ化塩やモノハロダン化酢酸
金属塩を併用して持続性を得ることが、提案されている
（特開昭６３−１０６５６３号公報）。しかし、この場
合においても、Ｄ−マンノース使用系には、次のような
問題点が戊っている。血糖測定法のうちで、最近多く使
用されているグルコース説水素酵素を用いる方法では、
基質特異性の低い酵素が使われている場合、グルコース
だけでなく、異性体のＤ−マンノースも分解される。そ
のため、正の誤差の原因となる。例えば、グルコースデ
ヒドロゲナーゼの基質特異性が低い場合、グルコース測
定値が５００〜１０００１ｎｇ／ｄ／という値となり、
正常値の５〜１０倍の正の誤差となる。さらに、Ｄ−マ
ンノースは、ヘモグロビン、Ａｓｃの測定用検体に使用
されると、Ｄ−マンノ−ストへ−１−クロビンが結合し
走ヘキノヘ−１１−り。

ビンＡ１ｃが生成し、それがグリコヘモグロビンＡＩＣ
測定値に加算され、正の誤差を与えるという問題点もあ
った。

（発明が解決しようとする課題） 本発Ｆ！Ａは、上記従来の問題点を解決するものであり
、その目的とするところは、血中の解糖による血糖の低
下を速効的に阻止し、かつその初期値を長時間維持し得
、さらにグリコヘモグロビンＡ１特にグリコヘモグロビ
ンＡＩｃの測定が可能な解糖阻止剤を提供することにあ
る。

（課題を解決するための手段） 本発明の解糖阻止剤は、２−デオキシ−〇　−グルコー
スまたけその誘導体と、フッ化塩またはモノハロゲン化
酢酸金属塩とを含有することを特徴とし、そのことによ
り上記目的が達成される。

本発明の２−デオキシ−Ｄ−グルコ−ｘ　ＪＩ　４体と
は、２−アミノ−２−デオキシ−Ｄ−グルコース（以下
、Ｄ−グルコサミン）、またけ２−アセトアミド−２−
ダオキシーＤ−グルコースなどを云う。

フッ化塩としては、フッ化水素のアルカリ金属塩または
アンモニクム塩などが好ましく、例えばフッ化ナトリク
ム、フッ化カリタム、フッ化すチクム、フッ化アンモニ
クム々どが用いられる。

モノハロゲン化酢酸金属塩としては、ハロゲンとしては
、塩素、臭素又はヨウ素が、金属としてはアルカリ金属
が好ましく、例えばモノクロル酢酸ナトリクム、モツプ
ロム酢酸ナトリクム、モツプロム酢酸カリタム、モノヨ
ード酢酸ナトリクム、モノヨード酢酸カリタムなどが用
かられる。

これらの薬剤の使用量は、全血１　ｍｌあたり、２−デ
オキシ−Ｄ−グルコースまたはその誘導体が、２．５〜
１５１１１９、好ましくは５〜１０　ｍｇである。２．
５■より少ないときけ、速効的な解糖阻止効果が不完全
であり、１５Ｗ１ｇより多すぎると血液の浸透圧に異常
をきたし溶血をおこすことがある。フッ化塩またはモノ
ハロゲン化酢酸金属塩の使用景は、血液１　ｄあたり各
成分単独又は両成分の和が１〜２ｍダである。１１ｎｇ
より少ないときは、血糖の低下を長時間維持できず、２
■より多いときは、溶血などの副作用がおこり島くなる
。

また、本発明の解糖阻止剤に、更にヘパリン塩、エチレ
ンジアミンテトラアセティツクアシッド（以下、ＥＤＴ
Ａ）の塩のような血液抗凝固剤、またけシリカ、トロン
ビンのような血液凝固促進剤を加えることは任意である
。

この解糖阻止剤は、粉末、顆粒、錠剤または水溶液など
の形態で試料血液に直接加えてもよく、また、解糖阻止
剤の粉末、顆粒、錠剤または水溶液をガラスや合成樹脂
製の採血管に予め加えておき、これに試料血液を加えて
もよい。

あるいは、解糖阻止剤の粉末または顆粒を適当な溶媒に
分散させたものを、ガラスや合成樹脂製のベレットやビ
ーズにコーティングし、このベレットやビーズを採血管
に加えておき、これに試料血液を加えてもよい。また上
記の溶媒に分散したものを採血管壁にコーティングして
おき、これに試料血液を加えてもよい。

これらの場合に使用される採血管としては、常圧または
真空採血管のいずれでもよく、その内部に血ＩｊＩｔま
たは血清分離剤を収容しておくことは任意である。

（作　用） 解糖阻止剤に含有される２−デオキシ−Ｄ−グルコース
またはその誘導体は解糖系のへキソキナーセにヨルクル
コース→グルコースー６−リン酸の反応において、Ｄ−
グルコースと競合する。そのため、グルコース−６−リ
ン酸の生成が阻害され、赤血球膜中へ入るグルコース−
６−リン酸の量が極端に減少する。つまり赤血球膜の糖
輸送機構が阻害される。このように、解糖系が初期の段
階で阻害されるため解糖阻止の速効性を有する。

解糖阻止剤中の２−デオキシ−Ｄ−グルコースまたけそ
の誘導体がヘキソキナーゼの基質として消費されると、
再び血糖が低下するおそれが生ずる。しかし、フッ化塩
またはモノハロゲン化酢酸金属塩が存在していることに
より、それぞれエノラーゼ、グリセルアルデヒド−３−
リン酸脱水素酵素という解糖系の下位の酵素の作用を阻
害するので、解糖阻止効果を持続させることができる。

異性の低いグルコース脱水素酵素の基質にならないので
、グルコース測定値に正の誤差を与えることがない。

また、２−デオキシ−〇−グルコースまたはその誘導体
は、デオキシヘキソースであるので、ヘモグロビンと反
応してヘキソヘモグロビンＡｒｃを生成しないので、グ
リコヘモグロビン、Ａｔｅの測定値に正の誤差を与える
ことがない。

（＊施例） 以下に本発明の実施例につき説明する。

実施例１ ｐ　−９”　ｔレフサミン１０．ＯＷＩｇ、フッ化ナト
リタム３．０〜および血液凝固剤としてＥＤＴＡ２カリ
クム塩４．０■を、市販の２　ｍｌ用ガラス採血管に収
容したものを複数本用意した。これらに、健常人の新鮮
面２　ｍｌを採取し、転倒混和した。

この混和したものをｓ　３０００　ｒｐｍで５分間遠心
分離し、血漿分画を取り血糖を測定した。

また前記の混和したものの全血を使用して、グリコヘモ
グロビンＡ＋およびＡｌｃを測定した。

更に、前記の混和したものを、混和後３６および２４時
間室温下に放置したものつき、同様にして血糖を測定し
た。また、前記の混和したものを、混和後２４および４
８時間室温下に放置したものの全血を使用してグリコヘ
モクロビンＡ＋およびＡｌｃを測定した。

血糖は、協和メデックス社製のグルコース定量試薬「デ
タミナ−ＧＬ−ＲＪを用いて、グルコースデヒドロゲナ
ーゼ法によって測定した。原理は以下の通りである。

β−Ｄ−グルコース　　　　　　　　　　　　　　　　
　　Ｄ−グルコノ−δ−ラクトン上記の酵素反応で生じ
るＮＡＤＰｌ、を、反応速１１　（Ｌ／　−トアッセイ
）法により３４０　ｎｍで測定した。

グリコヘモグロビンんおよびんＣの測定は、■京都第−
科学製のＨｉ−Ａｕｔｏ　Ａ、ｃ　ＨＡ−８１２０を用
い適切条件を選択して測定した。このＨＡ−８１２０は
高速液゛体りロマトグラフィーによるグリコヘモグロビ
ン測定専用装置であり陽イオン交換１こより各ヘモグロ
ビン成分を４分間で分離して溶出する。溶出用緩衝液は
専用の溶離液（リン酸緩衝液）が用いられる。

この装置を用いたヘモグロビンの溶出ノ曵り−ンは一般
番と第１図に示される。第１図においてｓ　ＰＩおよび
ｈはグリコヘモグロビンＡ、ａおよびＡ、ｂ成分に起因
するピークでありｓ　ＰＩおよびＰ。

はグリコヘモグロビンんＣ成分に起因するピークである
。Ｐ６は他のヘモグロビンに起因するピークである。こ
こで、グリコヘモグロビンＡ、およびＡ、ｃは次式で算
出される。

なお、この液体クロマトグラフィー測定に供される試料
としては、前記の全血の３μｔを、α００５Ｍリン酸緩
衝液１００Ｗ１１とＴｒ　ｉ　ｔ　ｏｎｘ。

−１００（和光紬薬製）　０．１　ｍｌからなる溶血試
薬（ｐＨ６，３）の４５０μｔと混合し、室温で１１０
分間放置して溶血させたものを使用した。

実施例２ Ｄ−グルコサミン１５．０１１１９．フッ化ナトリクム
Ｌ５１ｎ９、モノヨード酢酸ナトリタムＬｓＩｎ？およ
びＥＤＴＡ２カリクム塩４．０■を収容した採血管を使
用した以外は、実施例１と同様にして血糖を測定した。

実施例３ Ｄグルコサミン／２０．０雫、モノヨード酸ｅす）　’
Ｊクタム、　Ｏｍ９、およびＥＤＴＡ２カリクム塩４．
０号を収容した採血管を使用した以外は、実施例１と同
時にして血糖を測定した。

比較例Ｉ Ｄ−グルコサミン４．０〜、フッ化ナトリクＡ　１５　
ｍｌ、モノヨード酢酸ナトリタム１５〜およびＥＤＴＡ
Ｚカリクム塩４タム■を収容した採血管を使用した以外
は、実施例１と同時１こして血糖を測定した。

比較例２ Ｄ−グルコサミン４．０１ｎ９．フッ化ナトリクＡＬＧ
”＆、モノヨード酢酸ナトリクタムｏダおよびＥＤＴＡ
−２カリクム塩ｔｏｑを収容した採血管を使用した以外
は、実施例１と同様にして血糖を測定した。

比較例３ フッ化ナトリタム＆０■およびＥＤＴＡ２カリクム塩４
．０■を収容した採血管を使用した以外は、実施例１と
同様にして血糖とグリコヘモグロビンＡ、とグリコヘモ
グロビンＡ、Ｃを測定した。

比較例４ Ｄ−マンノース１＆ｏｒｎ９，フッ化ナトリクＡ３．０
１”ｆｉ’詔よびＥＤＴＡ２カリクム塩４．　Ｑ　ｒｎ
９を収容した採血管を使用した以外は、実施例１と同様
にして血糖とグリコヘモグロビンＡ１とグリコヘモグロ
ビンＡｔｃを測定した。

比較例５ クエン酸１５、ＯｑおよびＥＤＴＡ２カリクム塩４．０
１ｎ９を収容した採血管を使用した以外は、実施例１と
同様にして、血糖とグリコへそグロビンＡｔとグリコへ
モグロビンんＣを測定した。

比較例６ Ｄ−グルコサミン１５．０〜およびＥＤＴＡｚカリクム
塩４タム■を収容した採血管を使用した以外は、実施例
１と同様にして血糖を測定した。

斜上の各実施例および比較例における血糖測定値並び憂
ζグリコへモグロビンＡ１およびグリコヘモグロビンＡ
、ｃの測定値を第１表および第２表に示す。

（以下余白） 第１表より、実施例１〜３は室温下２４時間放置しても
初期血糖値が維持されることが分かる。比較例１は、Ｄ
−グルコサミン員が少ないので、血糖値が放置時間と共
に、減少している。比較例２は、血糖値においては問題
ないが、Ｄ−グルコサミン量が多いので、溶血がおこっ
た。比較例３は、Ｄ−グルコサミンが含まれないので、
速効的な解糖阻止効果がみられない。比較例４は、基質
特異性の低いグルコースデヒドロゲナーゼが異性体であ
るＤ−マンノースをも脱水素する為、異常高値となった
。比較例５は血糖値については、問題はないが、クエン
酸の影響でだ血が激しかった。比較例６はＤ−グルコサ
ミンのみであるので、初期血糖値を長時間維持できない
ことがわかる。

第２表より、実施例１および比較例３は、室温下４８時
間放置でも、グリコヘモグロビンんおよびＡ、ｃの初期
値が維持されているのが分かる。比較例４は、Ｄ−マン
ノースにょうてヘキソヘモグロビンＡ、およびＡ、Ｃが
生成し、そのため測定値が高くなったことを示してｌ、
Ｎる。比較例５ばクエン酸の影響でＰＩ（が低くなった
ため、ヘモグロビンが変性し、高値となった。

（発明の効果） 本発明は、２−デオキシ−Ｄ−グルコースまたはその誘
導体と７フ化塩またはモノノ・ロゲン化酢酸金属塩とを
含有した解糖阻止剤なので、解糖による血糖の低下を速
効的に阻止し、かつその初期値を長時間維持することが
できる。そのため、採血徒長時間室温下で保存されるお
それのある集配検体についても、正確な血糖値がの低い
グルコース脱水素酵素の基質にならな１＋１ので、グル
コース脱水素酵素を使用する血糖測定法にも利用するこ
とができる。

また、ヘモグロビンと反応してヘキソヘモグロビンＡ１
およびＡｓＣを生成しないので、グリコへモグロビンん
およびＡ、ｃの測定値に誤差を与えることもなく、正確
に測定できる。

【図面の簡単な説明】

第１図は、血中のグリコヘモグロビンを液体クロマトグ
ラフィーで測定して得られる溶出ノ曵ターンである。 以　　上

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）２−デオキシ−Ｄ−グルコースまたはその誘導体
   と、フッ化塩またはモノハロゲン化酢酸金属塩とを含有
   することを特徴とする解糖阻止剤。