JPH03106898A - 蛋白質水溶液、蛋白質水溶液の濃度増大方法および蛋白質製剤 - Google Patents
蛋白質水溶液、蛋白質水溶液の濃度増大方法および蛋白質製剤Info
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- JPH03106898A JPH03106898A JP1243311A JP24331189A JPH03106898A JP H03106898 A JPH03106898 A JP H03106898A JP 1243311 A JP1243311 A JP 1243311A JP 24331189 A JP24331189 A JP 24331189A JP H03106898 A JPH03106898 A JP H03106898A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明は高濃度の蛋白質水溶液、蛋白質水溶液の濃度増
大方法および蛋白質製剤に関する．［従来の技術］ 蛋白質を溶媒に溶解させることは、蛋白質を均一な組戊
物として取り扱う上できわめて重要である．例えば蛋白
質を含む組成物から一定量の蛋白質を分取する場合，あ
るいは蛋白質に関するなんらかの測定を行なう場合、蛋
白質を含む組威物が均一であることが保証されなければ
ならない．また、蛋白質を水に溶解し薬剤、例えば注射
剤として投与する場合、蛋白質は完全に溶解していなけ
ればならない． 水性溶媒中での蛋白質の溶解性は、蛋白質の表面に存花
する親水性あるいは疎水性の残基、及び電荷の影響を強
く受ける． 蛋白質の表面に疎水性の残基が多く存在し蛋白質が溶解
しにくい場合には、界面活性剤を添加することによって
蛋白質の溶解性を向上させることができる． 一方，水性溶媒のｐＨが蛋白質の等電点付近で蛋白質が
等電点沈殿を起こしやすい状態にある場合、水性溶媒中
の塩濃度を高くしイオン強度を上げることによって蛋白
質の溶解性を向上させることができる．この場合、界面
活性剤は蛋白質の溶解性向上に寄与しない．また、水性
溶媒中の９８が蛋白質等電点付近であり、かつ塩濃度が
低い場合には、比較的低濃度にしか蛋白質を溶解させる
ことができない．従って、比較的高濃度に蛋白質を溶解
させようとする場合、等電点付近のｐＨを避けるか、あ
るいは、塩濾度を高めるか、いずれかの方法が一般的に
用いられている． しかし、塩濃度を高めず，かつ等電点付近のｐＨで、蛋
白質を充分な濃度で溶解させる必要か生じる場合がある
．例えば、塩を投与することか好ましくない患者に、等
電点が中性付近にある生理活性蛋白質を中性付近のｐｔ
＋溶液として投与しようとする場合である．このような
場合、蛋白質の濃度を下げるか、あるいはやむを得ず塩
を投与するかしか方法はなく，特に蛋白質製剤の医療に
おける実用化にあたっての大きな問題であった．［発明
が解決しようとする課題］ 本発明の目的は，高濃度の蛋白質水溶液を提供すること
にある．本発明の他の目的は蛋白質を水性溶媒に高濃度
に溶解する方法を提供することにある．本発明のさらに
他の目的は溶解性の優れた蛋白質製剤を提供することに
ある． ［課題を解決するための手段］ 本発明者等はこの問題を解決するために，蛋白質は適当
なｐｔ＋においてイオン交換体と結合すること、蛋白質
とイオン交換体との結合は低塩濃度においておこりやす
いこと、疎水性蛋白質を溶解するために用いられている
界面活性剤の疎水基を陰イオン性の残基に代えることに
よって、同様の原理で蛋白質を溶解させうる可能性があ
ることを見出し本発明を完戊するに到った． 即ち本発明は、ポリアニオンまたはその塩が共存してい
ることを特徴とする蛋白質の水溶液．蛋白質の水溶液中
にポリアニオンまたはその塩を共存させることを特徴と
する蛋白質水溶液の蛋白質濃度の増大方法、およびポリ
アニオンまたはその塩および蛋白質を含んでなる製剤で
ある。
大方法および蛋白質製剤に関する．［従来の技術］ 蛋白質を溶媒に溶解させることは、蛋白質を均一な組戊
物として取り扱う上できわめて重要である．例えば蛋白
質を含む組成物から一定量の蛋白質を分取する場合，あ
るいは蛋白質に関するなんらかの測定を行なう場合、蛋
白質を含む組威物が均一であることが保証されなければ
ならない．また、蛋白質を水に溶解し薬剤、例えば注射
剤として投与する場合、蛋白質は完全に溶解していなけ
ればならない． 水性溶媒中での蛋白質の溶解性は、蛋白質の表面に存花
する親水性あるいは疎水性の残基、及び電荷の影響を強
く受ける． 蛋白質の表面に疎水性の残基が多く存在し蛋白質が溶解
しにくい場合には、界面活性剤を添加することによって
蛋白質の溶解性を向上させることができる． 一方，水性溶媒のｐＨが蛋白質の等電点付近で蛋白質が
等電点沈殿を起こしやすい状態にある場合、水性溶媒中
の塩濃度を高くしイオン強度を上げることによって蛋白
質の溶解性を向上させることができる．この場合、界面
活性剤は蛋白質の溶解性向上に寄与しない．また、水性
溶媒中の９８が蛋白質等電点付近であり、かつ塩濃度が
低い場合には、比較的低濃度にしか蛋白質を溶解させる
ことができない．従って、比較的高濃度に蛋白質を溶解
させようとする場合、等電点付近のｐＨを避けるか、あ
るいは、塩濾度を高めるか、いずれかの方法が一般的に
用いられている． しかし、塩濃度を高めず，かつ等電点付近のｐＨで、蛋
白質を充分な濃度で溶解させる必要か生じる場合がある
．例えば、塩を投与することか好ましくない患者に、等
電点が中性付近にある生理活性蛋白質を中性付近のｐｔ
＋溶液として投与しようとする場合である．このような
場合、蛋白質の濃度を下げるか、あるいはやむを得ず塩
を投与するかしか方法はなく，特に蛋白質製剤の医療に
おける実用化にあたっての大きな問題であった．［発明
が解決しようとする課題］ 本発明の目的は，高濃度の蛋白質水溶液を提供すること
にある．本発明の他の目的は蛋白質を水性溶媒に高濃度
に溶解する方法を提供することにある．本発明のさらに
他の目的は溶解性の優れた蛋白質製剤を提供することに
ある． ［課題を解決するための手段］ 本発明者等はこの問題を解決するために，蛋白質は適当
なｐｔ＋においてイオン交換体と結合すること、蛋白質
とイオン交換体との結合は低塩濃度においておこりやす
いこと、疎水性蛋白質を溶解するために用いられている
界面活性剤の疎水基を陰イオン性の残基に代えることに
よって、同様の原理で蛋白質を溶解させうる可能性があ
ることを見出し本発明を完戊するに到った． 即ち本発明は、ポリアニオンまたはその塩が共存してい
ることを特徴とする蛋白質の水溶液．蛋白質の水溶液中
にポリアニオンまたはその塩を共存させることを特徴と
する蛋白質水溶液の蛋白質濃度の増大方法、およびポリ
アニオンまたはその塩および蛋白質を含んでなる製剤で
ある。
ポリアニオンの一種であるサッカライトのポリサルフェ
ートまたは硫酸化糖とｔ−ＰＡを含有する医薬について
は特開昭６１−２３６７３号公報に開示されている。し
かし同公報の技術はｔ−ＰＡの活性向上を目的としたも
のであり、蛋白質の溶解性の向上を目的とする本発明と
はその技術思想を根本的に異にしている。
ートまたは硫酸化糖とｔ−ＰＡを含有する医薬について
は特開昭６１−２３６７３号公報に開示されている。し
かし同公報の技術はｔ−ＰＡの活性向上を目的としたも
のであり、蛋白質の溶解性の向上を目的とする本発明と
はその技術思想を根本的に異にしている。
本発明において対象となる蛋白質としては、等電点が強
酸性域に存在しない蛋白質であり、好ましくは等電点が
ｐ１１４以上、特に好ましくはｐＨ５以上に存在する蛋
白質である。これらの蛋白質は天然に存在する生物体あ
るいはその一部から抽出特製された蛋白質であってもよ
い。また化学的に合成されたものでもよい。さらに遺伝
子組換えＤＮＡ技術を応用して培養細胞から得られた蛋
白質であってもよい．また、一旦得られた蛋白質を化学
修飾した修飾型の蛋白質であってもよい．このような蛋
白質としては、例えば、イムノグロブリンＡ，Ｇ，Ｅの
ようなγ−グロプリン類、ラクトグロプリン、ウロキナ
ーゼ，ブローウロキナーゼ、組織プラスミノーゲンアク
チベータ−（ｔ−ｐＡ）を例示することができる． 上記の蛋白質は一種のみであってもまた二種以上の混合
物であっても差し支えない． 本発明において用いられるポリアニオンとしては、その
陰イオン性歿基としてカルボキシル基、カルボキシメチ
ル基、硫酸基、リン酸基等を右するものを用いることが
できる．一方，ポリアニ才ンノボリマー骨格としては、
糖アルコール、セルロース、アミロース等の糖類，アミ
ノ酸類、核酸塩基類を挙げることができる．これらの陰
イオン性残基とボリマー骨格とを組み合わせたポリアニ
オンとしては、例えばカルボキシメチルアミロース、カ
ルボキシメチルセルロースのようなカルボキシメチルイ
オン交換体，例えば，アルギン酸のような酸性多糖類，
例えばデキストラン硫酸，コントロイチン硫酸、コンド
ロイチン硫酸Ａ，コントロイチン硫酸Ｂ、コントロイチ
ン硫ｓＣ、コントロイチン硫酸Ｄ、コントロイチン硫酸
Ｅ，ヘバリン、ケラト硫酸、ケラタン硫酸、ヘバリチン
硫酸のような硫酸ムコ多糖類，例えばボリＬ−グルタミ
ン酸のような酸性ポリアミノ酸、核酸を例示できる．ま
た、これらのポリアニオンの塩としては、ナトリウム塩
，カリウム塩、カルシウム塩等を用いることができる． これらのポリアニオンは単独で使用してもまた二種以上
併用してもよい． ポリアニオンあるいはその塩の量は、溶解させるべき蛋
白質との重量比でｌ／４０以上、好ましくは１／１０以
上Ｚｏｏ以下である． 本発明における蛋白質水溶液中の蛋白質の濃度は個々の
蛋白質の溶解性によって規定されるものであり、一概に
は言えないが、特に等電点付近においては従来の蛋白質
水溶液中の濃度に較べて大幅に高められており、通常０
．１ ｍｇ／鵬見以上の水溶液を得ることが可能である
．もちろん、本発明はそれ以下の濃度のものを排除する
ものではない． 本発明の水溶液のｐＨ領域には特に制限はない．しかし
本発明の特徴は、塩濃度を高めずに蛋白質の等電点付近
でその溶解度を向上できることにあり，蛋白質の等電点
は大部分弱酸性からアルカリ性の範囲にあることは鑑み
れば、水溶液のｐｎは弱酸性、中性、弱アルカリ性、ア
ルカリ性領域であるときに特に意義が大きい．即ち，水
溶液のｐＨは好ましくは蛋白質の等電点−２から等電点
＋２の範囲、特に好ましくは蛋白質の等電点一ｌから等
電点＋１の範囲である． 本発明において蛋白質の等電点とは電気泳動法で測定し
た等電点である．なお、蛋白質の場合，電気泳動法で測
定すると等電点が一点に収束されずあるｐＨ範囲の幅を
もって示されることがあるが、そのときはそのｐＨ範囲
を等電点とする．また、等電点を異にする複数の蛋白質
の混合物の場合はそれぞれの蛋白質の等電点がカバーす
る範囲を蛋白質混合物の等電点とする． 本発明の蛋白質とポリアニオンあるいはその塩を含む水
溶液のイオン強度は好ましくは５０ｇ＋一〇１７立以下
、さらに好ましくは２０１ｍｏｌ／！Ｌ以下、特に好ま
しくはｌＯ鳳膳ｏ１／４１以下である．５０■■ｏｒ／
ｌを越えると本発明の効果が低下する傾向にある． またポリアニオンあるいはその塩以外の塩の含有量は蛋
白質１１ｇあたり０．１鳳Ｏｌを越えないことが好まし
い． 次に本発明の溶解方法を実施するには例えば次のような
方法による。まず等電点を避けたｐｏ領域で蛋白質を溶
解しておき、その蛋白質溶液に、ポリアニオン又はその
塩を含みｐＨを蛋白質の等電点付近に調整した溶液を添
加することによって、蛋白質とポリアニオン又はその塩
が共存する水溶液を調製すればよい．また、始めから蛋
白質とポリアニオン又はその塩を含む水溶液を蛋白質の
等電点を避けたｐＨで調製しておき，その後、ＰＨを蛋
白質の等電点付近に調整しなおすという方法でもよい． また別の方法としては蛋白質とポリアニオンを含む製剤
を調製し，その製剤を溶解してもよい．かかる製剤を製
造するには、通常の製造法によればよい．例えば等電点
を避けたｐＨの希薄溶液に蛋白質を溶解しておき，これ
にポリアニオン水溶液を加える， ｐＨを調整後、成形
剤等を添加して、濾過滅菌、バイアル充項し、これを凍
結乾燥して注射用製剤を製造すればよい．あるいは蛋白
質水溶液（ポリアニオンを加えて、蛋白質とポリアニオ
ンの複合体を形威させる．溶液のｐＨを複合体の等電点
に３１整することにより複合体析出させ、これを乾燥し
、製剤化用添加物を加え、バイアルに充填して製剤とし
てもよい． さらに必要に応じて、蛋白質の重合，容器への付着等を
防止する目的で、Ｔｗｅｅｎ ８ ０等の界面活性剤、
金属イオンの蛋白質に対する影響を排除する目的でＥＤ
ＴＡ等のキレート剤、その他生理活性蛋白質の安定化剤
、さらにマンニトール、乳糖等の賦形剤（凍結乾燥製剤
として用いる場合有効である）を、ポリアニオン又はそ
の塩の他に蛋白質溶液あるいは凍結乾燥物にそれぞれ含
有することも何ら差し支えない． ［作用］ 本発明によれば、従来の技術では不可能であった、蛋白
質の等電点付近において塩濃度あるいはイオン強度を上
昇させることなく蛋白質を溶解させるという効果が達成
できる．その理由は必ずしも明らかではないが、蛋白質
の等電点付近のｐｉにおいては、蛋白質単独では極めて
溶解性が低いにもかかわらず、このような状態において
ポリアニオンあるいはその塩を添加し、特にイオン強度
が低い場合、蛋白質とポリアニオンとは相互に作用しあ
い、結果的に溶解性が著しく向上するものと推測される
． ［実施例］ 以下に実施例で本発明を詳細に説明する．実施例ｌ 遺伝子組換え技術により動物培養細胞で発現させ、その
培養液より精製・濃縮して得たヒト由来組織ブラスミノ
ーゲンアクティベータ−（ｔ−ｐＡ）を用いた。本ｔ−
ＰＡは、６０ｍＭリン酸ナトリウム溶液に溶解しており
、そのｐｌ＋からリン酸一水素ナトリウムに相当した。
酸性域に存在しない蛋白質であり、好ましくは等電点が
ｐ１１４以上、特に好ましくはｐＨ５以上に存在する蛋
白質である。これらの蛋白質は天然に存在する生物体あ
るいはその一部から抽出特製された蛋白質であってもよ
い。また化学的に合成されたものでもよい。さらに遺伝
子組換えＤＮＡ技術を応用して培養細胞から得られた蛋
白質であってもよい．また、一旦得られた蛋白質を化学
修飾した修飾型の蛋白質であってもよい．このような蛋
白質としては、例えば、イムノグロブリンＡ，Ｇ，Ｅの
ようなγ−グロプリン類、ラクトグロプリン、ウロキナ
ーゼ，ブローウロキナーゼ、組織プラスミノーゲンアク
チベータ−（ｔ−ｐＡ）を例示することができる． 上記の蛋白質は一種のみであってもまた二種以上の混合
物であっても差し支えない． 本発明において用いられるポリアニオンとしては、その
陰イオン性歿基としてカルボキシル基、カルボキシメチ
ル基、硫酸基、リン酸基等を右するものを用いることが
できる．一方，ポリアニ才ンノボリマー骨格としては、
糖アルコール、セルロース、アミロース等の糖類，アミ
ノ酸類、核酸塩基類を挙げることができる．これらの陰
イオン性残基とボリマー骨格とを組み合わせたポリアニ
オンとしては、例えばカルボキシメチルアミロース、カ
ルボキシメチルセルロースのようなカルボキシメチルイ
オン交換体，例えば，アルギン酸のような酸性多糖類，
例えばデキストラン硫酸，コントロイチン硫酸、コンド
ロイチン硫酸Ａ，コントロイチン硫酸Ｂ、コントロイチ
ン硫ｓＣ、コントロイチン硫酸Ｄ、コントロイチン硫酸
Ｅ，ヘバリン、ケラト硫酸、ケラタン硫酸、ヘバリチン
硫酸のような硫酸ムコ多糖類，例えばボリＬ−グルタミ
ン酸のような酸性ポリアミノ酸、核酸を例示できる．ま
た、これらのポリアニオンの塩としては、ナトリウム塩
，カリウム塩、カルシウム塩等を用いることができる． これらのポリアニオンは単独で使用してもまた二種以上
併用してもよい． ポリアニオンあるいはその塩の量は、溶解させるべき蛋
白質との重量比でｌ／４０以上、好ましくは１／１０以
上Ｚｏｏ以下である． 本発明における蛋白質水溶液中の蛋白質の濃度は個々の
蛋白質の溶解性によって規定されるものであり、一概に
は言えないが、特に等電点付近においては従来の蛋白質
水溶液中の濃度に較べて大幅に高められており、通常０
．１ ｍｇ／鵬見以上の水溶液を得ることが可能である
．もちろん、本発明はそれ以下の濃度のものを排除する
ものではない． 本発明の水溶液のｐＨ領域には特に制限はない．しかし
本発明の特徴は、塩濃度を高めずに蛋白質の等電点付近
でその溶解度を向上できることにあり，蛋白質の等電点
は大部分弱酸性からアルカリ性の範囲にあることは鑑み
れば、水溶液のｐｎは弱酸性、中性、弱アルカリ性、ア
ルカリ性領域であるときに特に意義が大きい．即ち，水
溶液のｐＨは好ましくは蛋白質の等電点−２から等電点
＋２の範囲、特に好ましくは蛋白質の等電点一ｌから等
電点＋１の範囲である． 本発明において蛋白質の等電点とは電気泳動法で測定し
た等電点である．なお、蛋白質の場合，電気泳動法で測
定すると等電点が一点に収束されずあるｐＨ範囲の幅を
もって示されることがあるが、そのときはそのｐＨ範囲
を等電点とする．また、等電点を異にする複数の蛋白質
の混合物の場合はそれぞれの蛋白質の等電点がカバーす
る範囲を蛋白質混合物の等電点とする． 本発明の蛋白質とポリアニオンあるいはその塩を含む水
溶液のイオン強度は好ましくは５０ｇ＋一〇１７立以下
、さらに好ましくは２０１ｍｏｌ／！Ｌ以下、特に好ま
しくはｌＯ鳳膳ｏ１／４１以下である．５０■■ｏｒ／
ｌを越えると本発明の効果が低下する傾向にある． またポリアニオンあるいはその塩以外の塩の含有量は蛋
白質１１ｇあたり０．１鳳Ｏｌを越えないことが好まし
い． 次に本発明の溶解方法を実施するには例えば次のような
方法による。まず等電点を避けたｐｏ領域で蛋白質を溶
解しておき、その蛋白質溶液に、ポリアニオン又はその
塩を含みｐＨを蛋白質の等電点付近に調整した溶液を添
加することによって、蛋白質とポリアニオン又はその塩
が共存する水溶液を調製すればよい．また、始めから蛋
白質とポリアニオン又はその塩を含む水溶液を蛋白質の
等電点を避けたｐＨで調製しておき，その後、ＰＨを蛋
白質の等電点付近に調整しなおすという方法でもよい． また別の方法としては蛋白質とポリアニオンを含む製剤
を調製し，その製剤を溶解してもよい．かかる製剤を製
造するには、通常の製造法によればよい．例えば等電点
を避けたｐＨの希薄溶液に蛋白質を溶解しておき，これ
にポリアニオン水溶液を加える， ｐＨを調整後、成形
剤等を添加して、濾過滅菌、バイアル充項し、これを凍
結乾燥して注射用製剤を製造すればよい．あるいは蛋白
質水溶液（ポリアニオンを加えて、蛋白質とポリアニオ
ンの複合体を形威させる．溶液のｐＨを複合体の等電点
に３１整することにより複合体析出させ、これを乾燥し
、製剤化用添加物を加え、バイアルに充填して製剤とし
てもよい． さらに必要に応じて、蛋白質の重合，容器への付着等を
防止する目的で、Ｔｗｅｅｎ ８ ０等の界面活性剤、
金属イオンの蛋白質に対する影響を排除する目的でＥＤ
ＴＡ等のキレート剤、その他生理活性蛋白質の安定化剤
、さらにマンニトール、乳糖等の賦形剤（凍結乾燥製剤
として用いる場合有効である）を、ポリアニオン又はそ
の塩の他に蛋白質溶液あるいは凍結乾燥物にそれぞれ含
有することも何ら差し支えない． ［作用］ 本発明によれば、従来の技術では不可能であった、蛋白
質の等電点付近において塩濃度あるいはイオン強度を上
昇させることなく蛋白質を溶解させるという効果が達成
できる．その理由は必ずしも明らかではないが、蛋白質
の等電点付近のｐｉにおいては、蛋白質単独では極めて
溶解性が低いにもかかわらず、このような状態において
ポリアニオンあるいはその塩を添加し、特にイオン強度
が低い場合、蛋白質とポリアニオンとは相互に作用しあ
い、結果的に溶解性が著しく向上するものと推測される
． ［実施例］ 以下に実施例で本発明を詳細に説明する．実施例ｌ 遺伝子組換え技術により動物培養細胞で発現させ、その
培養液より精製・濃縮して得たヒト由来組織ブラスミノ
ーゲンアクティベータ−（ｔ−ｐＡ）を用いた。本ｔ−
ＰＡは、６０ｍＭリン酸ナトリウム溶液に溶解しており
、そのｐｌ＋からリン酸一水素ナトリウムに相当した。
セルロース製の透析チューブにｆｍｇのｔ−ＰＡとヘバ
リンのカルシウム塩をＯ〜ＩＢを加え、特製水で１．０
ｍｆｌとした。これを１，０００ ｍｌＺの１＋
＋＋Ｍクエン酸緩衝液に対して３時間透析した。透析チ
ューブ中の液をボリブロピレン製の小試験管に移して、
１５，ＯＯＯｒｐｍで１０分間遠心後、２８０ｎｍの吸
光度を測定してｔ−ＰＡの溶解度を求めた。なおｔ−Ｐ
Ａの等電点は約６．５〜７，５である。結果は第１表の
ようになった。
リンのカルシウム塩をＯ〜ＩＢを加え、特製水で１．０
ｍｆｌとした。これを１，０００ ｍｌＺの１＋
＋＋Ｍクエン酸緩衝液に対して３時間透析した。透析チ
ューブ中の液をボリブロピレン製の小試験管に移して、
１５，ＯＯＯｒｐｍで１０分間遠心後、２８０ｎｍの吸
光度を測定してｔ−ＰＡの溶解度を求めた。なおｔ−Ｐ
Ａの等電点は約６．５〜７，５である。結果は第１表の
ようになった。
第１表よりｔ−ＰＡはヘバリンカルシウムを加えること
により、特に等電点付近で溶解性が向−ヒすることがわ
かる。
により、特に等電点付近で溶解性が向−ヒすることがわ
かる。
第１表
実施例２
ヘバリンのかわりに第２表のポリアニオンまたはボリカ
チオンを０，１〜０．２ ｍｇ用いｐＨを約７とした他
は，実施例ｌと同様にしてｔ−ＰＡの溶解性を調べた．
結果を第２表に示した． ポリアニオンの場合はいずれも大幅にｔ−ＰＡの溶解性
は向上したが，ポリカチオンの場合は溶解性の向上は見
られなかった．また食塩を高濃度に添加しても充分な溶
解性は得られなかった．表中の値はｔ−ＰＡの溶解度（
鵬ｇ／鳳Ｌ；Ｌ）ａ）ｔ−ＰＡ ｌ園ｇ当たりの添加
量ｂ）ｔ−ＰＡの等電点に相当するｌ１Ｅ＋第２表 実施例３ ｐｌ１約７で、ヘパリンのかわりにコンドロイチン硫酸
Ａおよびヘバラン硫酸を第３表に示した量を用いた以外
は実施例１と同様にしてｔ−ＰＡの溶解性を調べた．結
果を第３表に示した．ｔ−ＰＡの溶解性はコンドロイチ
ン硫＃Ａおよびヘパラン硫酸が重量でｔ−ＰＡのｌ／４
０以上のとき特に向上することが判る． 第 ３ 表 実施例４ 溶掖のｐＨを蛋白質の等電点とし、蛋白質のＩ／１０量
のコンドロイチン硫酸ナトリウムの添加の有無による蛋
白質の溶解性の比較を第４表に示した。
チオンを０，１〜０．２ ｍｇ用いｐＨを約７とした他
は，実施例ｌと同様にしてｔ−ＰＡの溶解性を調べた．
結果を第２表に示した． ポリアニオンの場合はいずれも大幅にｔ−ＰＡの溶解性
は向上したが，ポリカチオンの場合は溶解性の向上は見
られなかった．また食塩を高濃度に添加しても充分な溶
解性は得られなかった．表中の値はｔ−ＰＡの溶解度（
鵬ｇ／鳳Ｌ；Ｌ）ａ）ｔ−ＰＡ ｌ園ｇ当たりの添加
量ｂ）ｔ−ＰＡの等電点に相当するｌ１Ｅ＋第２表 実施例３ ｐｌ１約７で、ヘパリンのかわりにコンドロイチン硫酸
Ａおよびヘバラン硫酸を第３表に示した量を用いた以外
は実施例１と同様にしてｔ−ＰＡの溶解性を調べた．結
果を第３表に示した．ｔ−ＰＡの溶解性はコンドロイチ
ン硫＃Ａおよびヘパラン硫酸が重量でｔ−ＰＡのｌ／４
０以上のとき特に向上することが判る． 第 ３ 表 実施例４ 溶掖のｐＨを蛋白質の等電点とし、蛋白質のＩ／１０量
のコンドロイチン硫酸ナトリウムの添加の有無による蛋
白質の溶解性の比較を第４表に示した。
実施例５
ｔ一ＰＡ Ｉ００ｍｇコン
トロイチン硫酸ナトリウム １０ ｍｇ乳＆’ｔ
５００ｍｇ上記の各
成分を、５ｍＭリン酸緩衝液（ｐｔ＋ ７．０）２５ｍ
ｌに溶解し、冫虜，過滅菌して得た溶液を２．５ＴＯＩ
ずつバイアル瓶に充填した。これを凍結乾燥してｔ−Ｐ
Ａ製剤を製造した。このｔ−ＰＡ製剤は、５％ブドウ糖
輪液または注射用蒸留水などで再溶解することができた
。
トロイチン硫酸ナトリウム １０ ｍｇ乳＆’ｔ
５００ｍｇ上記の各
成分を、５ｍＭリン酸緩衝液（ｐｔ＋ ７．０）２５ｍ
ｌに溶解し、冫虜，過滅菌して得た溶液を２．５ＴＯＩ
ずつバイアル瓶に充填した。これを凍結乾燥してｔ−Ｐ
Ａ製剤を製造した。このｔ−ＰＡ製剤は、５％ブドウ糖
輪液または注射用蒸留水などで再溶解することができた
。
実施例６
ｔ ”
１００ｍｇヘパリンナトリウム １
０ ｍｇ乳糖 ５００
ｍｇＬ記の各成分を、５ＩＩＭリン酸Ｂ衝液（ｐｌｌ
７．０）２５ｍｌに溶解し、冫廣過滅菌して得た溶液を
２．５ｍｌずつバイアル瓶に充填した。これを凍結乾燥
してｔ−ＰＡ製剤を製造した。このｔ−ＰＡ製剤は、５
％ブドウ糖輪掖または注射用蒸留水などで再溶解するこ
とができた。
１００ｍｇヘパリンナトリウム １
０ ｍｇ乳糖 ５００
ｍｇＬ記の各成分を、５ＩＩＭリン酸Ｂ衝液（ｐｌｌ
７．０）２５ｍｌに溶解し、冫廣過滅菌して得た溶液を
２．５ｍｌずつバイアル瓶に充填した。これを凍結乾燥
してｔ−ＰＡ製剤を製造した。このｔ−ＰＡ製剤は、５
％ブドウ糖輪掖または注射用蒸留水などで再溶解するこ
とができた。
実施例７
ｔ−ＰＡ １００ｍｇデ
キストリン硫酸（ナトリウム塩） ＩＯＩＩｌｇ乳
糖 ５００ ｍｇ上記
の各成分を、５ＩＩＩＭリン酸Ｍ衝液 （ｐＨ ７．０
）２５ｍｌに溶解し、７慶過滅菌して得た溶液を２．５
ｉｌずつバイアル瓶に充填した。これを凍結乾燥してｔ
−ＰＡ製剤を製造した．このｔ−ＰＡ製剤は、５％ブド
ウ糖輸液または注射用蒸留水などで再溶解することがで
きた． ［発明の効果Ｊ 本発明によれば、従来の技術では達成できなかった、高
濃度の蛋白質水溶液特に蛋白質の等電点付近における低
塩濃度の蛋白質水溶液の実現が達成される． 即ち、従来技術で等電点付近で蛋白質を溶解しようとす
る場合、（１１著しくその蛋白質濃度を下げること、あ
るいは（２）著しくその塩濃度を上げることが必須であ
り、特に塩を投与することが好ましくない患者に、蛋白
質の等電点付近で生理活性蛋白質を投与しようとする場
合、著しい不便を来していた．塩濃度を上げずに蛋白質
を溶解しようとする場合、等電点付近のｐＨを避けるこ
とが必須であり、そのｐＨが薬剤，例えば注射剤として
好ましくないｐＨであっても、使用せざるをえない状況
であった． これに対し、本発明においては、蛋白質の等電点付近に
おいて、塩濃度を上げることなく、蛋白質を溶解させる
ことができ、蛋白質の等電点付近における低塩濃度の蛋
白質水溶液を提供できるという点で、従来の技術を凌駕
している。
キストリン硫酸（ナトリウム塩） ＩＯＩＩｌｇ乳
糖 ５００ ｍｇ上記
の各成分を、５ＩＩＩＭリン酸Ｍ衝液 （ｐＨ ７．０
）２５ｍｌに溶解し、７慶過滅菌して得た溶液を２．５
ｉｌずつバイアル瓶に充填した。これを凍結乾燥してｔ
−ＰＡ製剤を製造した．このｔ−ＰＡ製剤は、５％ブド
ウ糖輸液または注射用蒸留水などで再溶解することがで
きた． ［発明の効果Ｊ 本発明によれば、従来の技術では達成できなかった、高
濃度の蛋白質水溶液特に蛋白質の等電点付近における低
塩濃度の蛋白質水溶液の実現が達成される． 即ち、従来技術で等電点付近で蛋白質を溶解しようとす
る場合、（１１著しくその蛋白質濃度を下げること、あ
るいは（２）著しくその塩濃度を上げることが必須であ
り、特に塩を投与することが好ましくない患者に、蛋白
質の等電点付近で生理活性蛋白質を投与しようとする場
合、著しい不便を来していた．塩濃度を上げずに蛋白質
を溶解しようとする場合、等電点付近のｐＨを避けるこ
とが必須であり、そのｐＨが薬剤，例えば注射剤として
好ましくないｐＨであっても、使用せざるをえない状況
であった． これに対し、本発明においては、蛋白質の等電点付近に
おいて、塩濃度を上げることなく、蛋白質を溶解させる
ことができ、蛋白質の等電点付近における低塩濃度の蛋
白質水溶液を提供できるという点で、従来の技術を凌駕
している。
従って、本発明は特に、等電点が中性付近にある生理活
性蛋白質の低塩濃度注射用製剤に好適である．
性蛋白質の低塩濃度注射用製剤に好適である．
Claims (7)
- （１）ポリアニオンまたはその塩が共存していることを
特徴とする蛋白質の水溶液。 - （２）ポリアニオンまたはその塩は蛋白質に対して重量
比で１／４０以上である請求項１の水溶液。 - （３）ｐＨがその蛋白質の等電点−２〜等電点＋２の範
囲である請求項１の水溶液。 - （４）イオン強度が５０ｍｍｏｌ／ｌ以下である請求項
１の水溶液。 - （５）ポリアニオンは、そのイオン残基がカルボキシル
基、カルボキシルメチル基、硫酸基またはリン酸基より
選ばれた１以上である請求項１の水溶液。 - （６）蛋白質の水溶液中にポリアニオンまたはその塩を
共存させることを特徴とする蛋白質水溶液の蛋白質濃度
の増大方法。 - （７）ポリアニオンまたはその塩および蛋白質を含んで
なる製剤。
Priority Applications (15)
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|---|---|---|---|
| JP1243311A JPH0791318B2 (ja) | 1989-09-21 | 1989-09-21 | 蛋白質水溶液、蛋白質水溶液の濃度増大方法および蛋白質製剤 |
| AU62466/90A AU627621B2 (en) | 1989-09-21 | 1990-09-13 | Protein-containing aqueous solutions |
| CA002025315A CA2025315C (en) | 1989-09-21 | 1990-09-13 | Protein-containing aqueous solutions |
| NZ235297A NZ235297A (en) | 1989-09-21 | 1990-09-13 | Aqueous solution containing a protein and anionic polymer or salt and method of increasing the protein concentration of an aqueous solution |
| FI904618A FI98891C (fi) | 1989-09-21 | 1990-09-19 | Menetelmä vesiliuoksen proteiinipitoisuuden lisäämiseksi |
| DE90310287T DE69003061T2 (de) | 1989-09-21 | 1990-09-20 | Protein enthaltende wässerige Lösungen. |
| BR909004693A BR9004693A (pt) | 1989-09-21 | 1990-09-20 | Solucao aquosa,processo para aumentar a concentracao de proteina de uma proteina em uma solucao aquosa,e composicao farmaceutica |
| NO90904120A NO904120L (no) | 1989-09-21 | 1990-09-20 | Protein-inneholdende vandige loesninger. |
| EP90310287A EP0419251B1 (en) | 1989-09-21 | 1990-09-20 | Protein-containing aqueous solutions |
| ES90310287T ES2060057T3 (es) | 1989-09-21 | 1990-09-20 | Soluciones acuosas conteniendo proteina. |
| AT90310287T ATE93731T1 (de) | 1989-09-21 | 1990-09-20 | Protein enthaltende waesserige loesungen. |
| DK90310287.9T DK0419251T3 (da) | 1989-09-21 | 1990-09-20 | Proteinholdige vandige opløsninger |
| CN90107990A CN1049356C (zh) | 1989-09-21 | 1990-09-21 | 含蛋白质的水质溶液 |
| KR1019900015032A KR930004598B1 (ko) | 1989-09-21 | 1990-09-21 | 단백질 수용액 |
| US08/259,152 US6207151B1 (en) | 1989-09-21 | 1994-06-13 | Aqueous solution of t-PA |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1243311A JPH0791318B2 (ja) | 1989-09-21 | 1989-09-21 | 蛋白質水溶液、蛋白質水溶液の濃度増大方法および蛋白質製剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03106898A true JPH03106898A (ja) | 1991-05-07 |
| JPH0791318B2 JPH0791318B2 (ja) | 1995-10-04 |
Family
ID=17101947
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1243311A Expired - Lifetime JPH0791318B2 (ja) | 1989-09-21 | 1989-09-21 | 蛋白質水溶液、蛋白質水溶液の濃度増大方法および蛋白質製剤 |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0419251B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0791318B2 (ja) |
| KR (1) | KR930004598B1 (ja) |
| CN (1) | CN1049356C (ja) |
| AT (1) | ATE93731T1 (ja) |
| AU (1) | AU627621B2 (ja) |
| BR (1) | BR9004693A (ja) |
| CA (1) | CA2025315C (ja) |
| DE (1) | DE69003061T2 (ja) |
| DK (1) | DK0419251T3 (ja) |
| ES (1) | ES2060057T3 (ja) |
| FI (1) | FI98891C (ja) |
| NO (1) | NO904120L (ja) |
| NZ (1) | NZ235297A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008115176A (ja) * | 1995-06-07 | 2008-05-22 | Chiron Corp | タンパク質の可溶化、精製、および再生の方法 |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20040033228A1 (en) | 2002-08-16 | 2004-02-19 | Hans-Juergen Krause | Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders |
| MY150740A (en) | 2002-10-24 | 2014-02-28 | Abbvie Biotechnology Ltd | Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental |
| CA2681752A1 (en) | 2007-03-29 | 2008-10-09 | Abbott Laboratories | Crystalline anti-human 1l-12 antibodies |
| US8883146B2 (en) | 2007-11-30 | 2014-11-11 | Abbvie Inc. | Protein formulations and methods of making same |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61236730A (ja) * | 1985-04-11 | 1986-10-22 | ベーリングヴエルケ・アクチエンゲゼルシヤフト | プラスミノーゲン・アクチベータを含有する医薬 |
| JPS61289886A (ja) * | 1985-06-19 | 1986-12-19 | Agency Of Ind Science & Technol | 酵素及び／又は微生物含有アルギン酸繊維紙の製造法 |
| JPH02111726A (ja) * | 1988-10-19 | 1990-04-24 | Dainippon Pharmaceut Co Ltd | ヒト インターロイキン１を安定化する方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2107185A (en) * | 1981-10-07 | 1983-04-27 | John Kenneth Mcmullen | Insulin formulations containing surface-active agents |
| DE3584902D1 (de) * | 1984-02-29 | 1992-01-30 | Asahi Chemical Ind | Waessrige loesung eines darin in erhoehter konzentration aufgeloesten gewebe-plasminogen-aktivators und herstellungsverfahren. |
| CA1292686C (en) * | 1986-10-27 | 1991-12-03 | Ze'ev Shaked | Pharmaceutical compositions of recombinant interleukin-2 and formulation process |
| US4857320A (en) * | 1987-02-19 | 1989-08-15 | Monsanto Company | Method of enhancing the solubility of tissue plasminogen activator |
-
1989
- 1989-09-21 JP JP1243311A patent/JPH0791318B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1990
- 1990-09-13 NZ NZ235297A patent/NZ235297A/xx unknown
- 1990-09-13 AU AU62466/90A patent/AU627621B2/en not_active Ceased
- 1990-09-13 CA CA002025315A patent/CA2025315C/en not_active Expired - Fee Related
- 1990-09-19 FI FI904618A patent/FI98891C/fi not_active IP Right Cessation
- 1990-09-20 DE DE90310287T patent/DE69003061T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1990-09-20 DK DK90310287.9T patent/DK0419251T3/da active
- 1990-09-20 NO NO90904120A patent/NO904120L/no unknown
- 1990-09-20 ES ES90310287T patent/ES2060057T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-09-20 BR BR909004693A patent/BR9004693A/pt not_active Application Discontinuation
- 1990-09-20 EP EP90310287A patent/EP0419251B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-09-20 AT AT90310287T patent/ATE93731T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-09-21 KR KR1019900015032A patent/KR930004598B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1990-09-21 CN CN90107990A patent/CN1049356C/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61236730A (ja) * | 1985-04-11 | 1986-10-22 | ベーリングヴエルケ・アクチエンゲゼルシヤフト | プラスミノーゲン・アクチベータを含有する医薬 |
| JPS61289886A (ja) * | 1985-06-19 | 1986-12-19 | Agency Of Ind Science & Technol | 酵素及び／又は微生物含有アルギン酸繊維紙の製造法 |
| JPH02111726A (ja) * | 1988-10-19 | 1990-04-24 | Dainippon Pharmaceut Co Ltd | ヒト インターロイキン１を安定化する方法 |
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|---|---|---|---|---|
| JP2008115176A (ja) * | 1995-06-07 | 2008-05-22 | Chiron Corp | タンパク質の可溶化、精製、および再生の方法 |
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| KR930004598B1 (ko) | 1993-06-01 |
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| AU627621B2 (en) | 1992-08-27 |
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