JPH03123713A - 殺虫剤の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （イ）発明の目的 〔産業上の利用分野〕 本発明は、バチルス・チューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌ
ｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ　：以下ＢＴ菌と
いう）の、各種菌株の培養によって産出される結晶様殺
虫性蛋白質毒素（以下結晶毒素という）と芽胞等との混
在物から、結晶毒素の殺虫活性を保持しながら、芽胞お
よび生栄養細胞を殺滅して、生きた芽胞および生栄養細
胞による二次的災害発生の惧れのない殺虫剤（以下ＢＴ
農薬という）を製造する方法に関するもので、農薬業界
及び農業の分野で広く利用されるものである。

〔従来の技術〕

ＢＴ菌の各種菌株は、芽胞形成に伴って、夏型、サイコ
ロ状、また不定形立方体などの、蛋白質からなる結晶毒
素を産生し、そのあるものは鱗翅目昆虫の幼虫に対する
選択的食前であり、また別のものはヤブカ・アカイエカ
に代表される双翅目の幼虫に対して高い殺虫活性を示し
、あるいはコロラドボテドビートルに代表される鞘翅目
昆虫のみに選択的毒性を示すものなどが知られている。

上記のように結晶毒素の選択性が著しく、対象種と種目
を異にする昆虫には作用せず、もちろん、人畜、魚介、
鳥類に無害であることから、選択的殺虫剤としての利用
が追求されてきた。

一方、同じく培養によって産出される自己再生のための
生命体である胞子、すなわち芽胞は休眠細胞であって、
強固な耐久性構造を持ち、一般の生物にとって不利な環
境条件（乾燥条件を含む）にも耐え、長期間生きつづけ
るものである。したがって、これを含むものを殺虫剤と
して圃場など野外に散布を繰り返す時には、土壌への蓄
積と風雨による転流拡散が懸念され、これが養蚕業の行
われる地域に侵入した場合、いわゆるカイコの卒倒病に
つながる可能性があり、厳重な警戒がなされている。

さらに、この芽胞が発芽して栄養細胞となり、それは対
数増殖の過程で水溶性の蛋白質毒素を分泌し、これは、
食中毒を発症するセレウス毒素と免疫化学的に強く反応
しく品用邦汎、臨床検査■、Ｐ、　１５５９〜Ｐ、１５
６３　（１９８Ｂ））、よって芽胞が付着した食物の調
理ならびに保存過程において、食中毒の生ずる可能性が
懸念されている。

これらの懸念は、生芽胞と結晶毒素とを分離して生芽胞
を含まない製品を製造すれば消失するわけであるが、芽
胞と結晶毒素は、いずれもその大きさが数μｍ程度で、
微細な上、表面の荷電状態も似かよっており、物理化学
ならびに電気化学的に両者を分離することは極めて困難
な作業であり、且つ、その作業は工業的実用性に乏しい
ものである。一方、芽胞を死滅せしめた殺虫剤を製造す
ることによっても、上記懸念を、払拭できるが、芽胞は
先にも触れたように、耐久性構造のもので、通常の殺滅
のために行われる加熱、乾燥、薬品処理などの物理的、
または化学的殺菌処理に対して生物の中で、最も強固な
抵抗性を有す。よって、芽胞を完全に殺滅するためには
、厳しい殺菌条件が必要であり、例えば加熱ならば１０
０°Ｃを越える高い温度が必要となる。

しかし、このような厳しい条件で処理した場合には、殺
虫有効成分である結晶毒素の変性（蛋白質の熱変性）を
招き、殺虫効力の喪失を生じ、有効な製品が得られない
。

この課題を解決するために、結晶毒素を含有するＢＴ菌
の培養液内の細菌細胞・芽胞に対して、該結晶毒素の殺
虫能を喪失せしめることのない緩徐な化学的殺菌処理と
、同じく緩徐な物理的殺菌処理を組合わせ、それらを同
時に行ない細菌細胞・芽胞を殺滅することを特徴とする
殺虫剤の製造法が堤案されている（特公昭５１−５０４
７号公報）。

〔発明が解決しようとする問題点〕

上記の方法は、細菌細胞・芽胞の殺滅方法としては優れ
ているものであり、実用化されている方法であるが、該
方法で得られた結晶毒素は、殺菌処理により、実用的な
濃度（ＢＴ農薬は一般にコナガに対して１．０００ない
し２．０００倍の製剤水懸濁液として用いられる）にお
ける残存殺虫活性が低下したものとなり易く、細菌細胞
・芽胞の殺滅を完全に行なう場合、時によってはこれを
かなりの高濃度で使用しなければ、充分な殺虫性能を示
さない殺虫剤しか得られない事があるという問題点を有
する方法でもある。

本発明者等は、上記方法における細菌細胞・芽胞の殺滅
の効率を向上させ、品質の優れた製品が得られる製造方
法を確立すべく鋭意検討を行なった。

（ロ）発明の構成 〔課題を解決するための手段〕 本発明者等は、前記問題点を解消するための検討過程に
おいて、殺菌処理を施す培養液の培養期間に応じて、殺
菌処理後の残存殺虫活性が変化すること、培養液中に存
在する水溶性成分が栄養細胞・芽胞の殺菌効率を低下さ
せ、ひいては結晶毒素の殺虫活性を低下させること、及
び殺菌処理を施す培養液のｐＨの変動に応じても、殺菌
処理後の結晶毒素の残存殺虫活性が変化することを見出
し、特定時間培養した培養液から水溶性成分を除去する
とともにｐＨを調整することによって、実用に供し得る
殺虫剤を製造するに足る殺虫活性を有する結晶毒素が一
定して得られるのみならず、殺虫活性の飛躍的に向上し
た結晶毒素が得られることを見出して本発明を完成した
。

すなわち、本発明はバチルス・チューリンゲンシス（Ｂ
ａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）の培養
液中に存在する生芽胞および生栄養細胞の殺滅を培養に
より芽胞の９０％が放出された後で、かつ該放出後２４
時間以内の培養液に、水溶性成分の除去分離工程を施し
、かつｐＨを４〜７に調整した後に実施することを特徴
とする殺虫剤の製造方法に関するものである。

○ＢＴ菌の培養液 本発明に用いられる培養液としては、バチルス・チュー
リンゲンシス・バラエティ・クルスタキ、バチルス・チ
ューリンゲンシス・バラエティ・イスラエレンシス等の
結晶毒素を産生ずるＢＴ菌株を、通常公知の培養方法及
び条件で、培養して得られる一般的な培養液があげられ
る。

例えば、肉エキス、ペプトンなどよりなる培養用溶液を
用い、バチルス・チューリンゲンシスを通常の方法及び
条件で培養し、芽胞及び結晶毒素が形成され、所定の培
養期間中にある培養終了液、或いは該培養液を部分精製
または濃縮して得られた結晶毒素と芽胞を含有する水懸
濁液、さらにはそれらを水で稀釈した懸濁液が使用され
る。

培養について、さらに具体的に説明すると窒素源、炭素
源、ミネラルおよびビタミンに冨む天然培地で培養する
。結晶毒素ならびに菌体の産生は、通気撹拌条件に太き
（左右され、充分な好気的条件で培養した場合に、両者
の産生量が増す。培養温度は、約２５〜３０°Ｃがよい
。炭素源としては、例えば、蔗糖、麦芽糖、グルコース
、フラクトース、稠密が利用され、窒素源としては、例
えば、コーンスチープリカー、硫酸アンモニウム、塩化
アンモニウム、綿実粉、酵母エキス、大豆粉、カゼイン
氷解物などが挙げられる。また、ミネラルおよびビタミ
ンは、稠密、コーンスチープリカー酵母エキスで代用す
ることができ、必要に応じては、無機塩類、ビタミン類
をさらに添加してもよい。特に、大量生産を行う場合、
深部通気撹拌培養が望ましい。

Ｏ培養期間の設定 芽胞が細胞外に放出され始めてから、芽胞の９０％が細
胞外に放出されるまでの経過は、無菌的に経時採取した
培養液を位相差光学顕微鏡を用いて鏡検することにより
、容易に追跡できる。芽胞の放出とは、細胞内に形成さ
れた結晶毒素と芽胞が、培養の進行に拌ってＢＴ菌の細
胞壁が自己消化した結果、細胞外にそれらが放出され、
培養液中に浮遊した状態を言う。

芽胞は短軸１〜３μ×長軸２〜６μの楕円状物体で、光
屈折性を有するため、位相差光学顕微鏡の視野内では、
青白い光を放つことから、他の顆粒と識別できる。また
、公知の染色法によっても、結晶毒素と芽胞は区別でき
る（Ｆａｄｅｌ　Ａ、５ｈａｒｉｆｅｔ　ａｌ、、Ｊ、
Ｉｎｄ、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、、３＋　２２７〜２２９
（１９８８））。

さらに、芽胞の９０％が細胞外に放出されたことは、顕
微鏡視野内の全菌数（結晶毒素・芽胞を内在する細胞と
遊離芽胞の総数）に対する遊離芽胞の割合が当該範囲に
あることで確認できる。なお、培養条件によって、ある
程度の差はあるものの、芽胞が細胞外に放出され始めて
から、上記の状態に達するまで８〜２４時間を必要とす
る。本発明においては、この様にして芽胞の９０％が細
胞外に放出された培養液に対して２４時間以内に殺菌処
理を施こすのである。

上記範囲外で殺菌処理を行なうと、結晶毒素の殺虫活性
が損なわれ、実用的濃度で有効な殺虫剤を定常的に製造
することが不可能となり、また残存殺虫活性が飛躍的に
は向上しない。

Ｏ水溶性成分の除去分離 上記の様にして培養した培養液中には、培地に起因する
成分、ＢＴ菌が菌体外に排出した代謝物あるいは菌体内
に含有され、自己融解後に培養液中に放出された代謝産
物等の水溶性成分も存在し、本発明者等は、これらのう
ちのどの成分であるかについては解明していないが、こ
れらの水溶性成分の存在により殺菌の効率が低下し、こ
のまま、すなわち水溶性成分の存在下に完全に殺菌する
ためには殺菌条件をかなり厳しいものとせざるを得す、
ひいては結晶毒素の殺虫活性を低下させることになるこ
とを見出したのである。

そして殺菌前に水溶性成分を除去することにより、実用
的濃度で有効的な殺虫剤を製造することが可能になった
ばかりでなく、水溶性成分の除去の程度によっては、今
まで予測することも出来なかった程の殺虫活性を有する
殺虫剤の製造を可能にするものである。

芽胞及び結晶毒素が形成された培養終了液中の水溶性成
分を除く方法としては、通常の遠心分離法、濾過法、沈
降法などを利用して水溶液を除去する方法があげられる
。特に、大量に処理する場合には、遠心分離機あるいは
膜濾過材を使用する方法が好ましい。また、水溶性成分
の除去量は、前者の場合、遠心力（重力加速度）、通液
インターバル、洗浄インターバル等の操作条件により、
後者の場合、膜の孔径、圧力、通液速度等の操作条件に
より異なるが、除去量が多すぎて芽胞及び結晶毒素の分
散性が阻害される様になることは避けるのが好ましく、
もし分散性が阻害されるような状況に至った場合は、蒸
留水特に界面活性剤を添加しあるいは超音波処理を施し
て分散性を調節するのが好ましい。

分散性の悪いものをそのまま殺菌すると殺菌剤との接触
または伝熱不良に起因すると思われるが殺菌効率が一定
せず、特に完全な殺菌を目的とする場合、殺菌条件をか
なり厳しいものとせざるを得す、ひいては結晶毒素の殺
虫活性を低下させる恐れが生じる。

用いられる界面活性剤としては、分散させる粒子すなわ
ち栄養細胞、芽胞および結晶毒素の粒子表面が負に帯電
していることから、アニオン系又はノニオン系界面活性
剤が好ましく、アニオン系界面活性剤としては、ポリア
クリン酸ソーダ系、例えばアロンＡ−２０ｐｘ（東亜合
成化学工業■製）、ドデシルベンゼンスルホン酸ソーダ
系、例えばペレックスＮα６（花王■製）、レベノール
ＷＺ（花王■製）、ラウリル硫酸ソーダ系、例えばエマ
ール２Ｆ（花王■製）、ジオクチルスルホサクシネート
系、例えばペレックスＯＴＰ　（花王■製）などがあげ
られ、ノニオン系界面活性剤としてはポリオキシエチレ
ンエーテル系、例えばエマルゲン９１０（花王■製）な
どがあげられる。なお使用量としては殺菌を施こす培養
液に対して０゜０１〜０．５０重量％の範囲が好ましく
、特に好ましくは０．０５〜０．２０重量％であり、具
体的には通液速度等の操作条件等に応じて設定すること
が好ましい。

ＯｐＨ調整方法 本発明においては、ＢＴ菌の培養液の殺菌をｐＨ４〜７
、好ましくはｐＨ５〜７、特に好ましくはｐＨ５〜５．
５の範囲内で行うことが必要であり、前記培養液は一般
的にｐＨ８〜９程度であるので、硫酸等の酸によりその
ｐＨを４〜７に調整してから殺菌処理を行なう。また、
殺菌処理中に、処理に伴ないｐＨが変動し上記範囲外に
逸脱する恐れがあるときも、その変動に応じて酸やアル
カリを添加し、ｐＨを上記範囲内に維持することが必要
である。

上記範囲外で殺菌処理を行なうと、結晶毒素の殺虫活性
が損なわれ、実用的濃度で有効な殺虫剤を定常的に製造
することが不可能となり、また残存殺虫活性が飛躍的に
は向上しない。

この効果は、遠心分離により、培養液上清部を取り去っ
て水に再懸濁したものにおいても、同様に示される。

Ｏ殺菌 本発明における殺菌は、栄養細胞・芽胞を殺滅するため
に行われるものであって、下記のような化学的殺菌処理
及び物理的殺菌処理方法があり、前掲の特公昭５１−５
０４７号公報に開示されているように、単に一種類の殺
菌処理のみでは結晶毒素の殺虫能力を保持させながら、
栄養細胞・芽胞を完全に死滅させることは困難であるか
ら、本発明においても緩徐な化学的殺菌処理と物理的殺
菌処理とを組合せて、それらを同時に行うことが好まし
く、その方法により容易に栄養細胞・芽胞を完全に死滅
させることができ、殺虫能の優れた産業上極めて有用な
殺虫剤を得ることができる。

○化学的殺菌処理 化学的殺菌処理方法は、ホルマリン、パラトルエンスル
ホンクロルアミドナトリウム、パラトルエンスルホン酸
ジクロルアミド、ベンゼンスルホン酸クロルアミドナト
リウム、アゾビスクロロホルムアミジン、アクリフラビ
ン、メチレンブルー塩化ベンザルコニウム、塩化セチル
ピリジニウム、次亜塩素酸ナトリウム、Ｎ−クロルコハ
ク酸イミド、Ｎ〜ブロムコハク酸イミド、Ｎ−クロルグ
ルタール酸イミド、Ｎ−クロル安息香酸イミドなどの脂
肪族、芳香族のジカルボン酸イミドのＮ−ハロゲン化物
等のＮ−ハロゲンジカルボン酸イミドなどの薬剤を上述
の水性培養液等に適量加え殺菌する方法である。

薬剤の培養液への添加量は、予備試験を行うことにより
容易に定められる。

Ｏ物理的殺菌処理 物理的殺菌処理方法は、加熱、超音波、放射線などによ
り、上述の水性培養液等を殺菌する方法である。

工業的に有利な加熱方式は、反応槽内で撹拌しながら加
熱するバッチ加熱方式、あるいは長い反応管内に一方の
端から流入し、途中で加熱昇温しつつ、他端から排出す
る流管連続加熱方式などであり、特に後者は工業的実施
に当って有用である。

○製剤方法 殺菌処理の終った培養液は、そのまま、或いは必要に応
じて、固液分離、濃縮、精製を行ない、適宜の助剤を添
加或いは添加せずに、結晶毒素と死滅した芽胞を含有す
る懸濁液状の殺虫剤とすることが出来る。かかる殺虫剤
は、好ましくは、噴霧乾燥や流動乾燥等の公知の方法で
、水和剤粉末、ないしは顆粒状製品に製剤化され、さら
には溶剤に懸濁させて製剤化される。

そして、その有効成分量は、対象昆虫によって異なるが
、通常公知の範囲で用いられ、また他の殺虫剤と併用す
ることも可能である。

○殺虫活性の測定法 結晶毒素の殺虫活性を定量的に把握する方法としては、
生虫を用いた殺虫試験により半数致死濃度を求め、残存
殺虫活性を定量的に測定するという方法を採用した。す
なわち、適当にＩ稀釈した試料法人々に対する検定供試
昆虫の死亡率を測定し、試料液の濃度と死亡率との関係
から半数致死濃度を求め、殺虫活性の高低を比較する方
法である。

〔作用〕

本発明の殺菌処理が、なぜ殺菌効率を向上させ、結晶毒
素の殺虫活性を維持することに有効であるのか不明であ
るが、本発明方法によれば、殺菌処理をより緩徐（例え
ば、化学殺菌剤の使用量が軽減する）にすることが可能
で、結晶毒素の殺虫活性の低下を防止できるばかりでな
（、品質の一定した殺虫剤を定常的に供与でき、かつ従
来のものからは予測出来ないほど殺虫活性を飛躍的に高
めることができるという作用を奏するのである。

〔実施例〕

次に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する。

実施例１ 肉エキス１％、ペプトン１％、ＮａＣｊ！０．５％、ｐ
Ｈ７，０の培養原料液を１１０°Ｃにて１０分間加熱殺
菌し、これにバチルス・チューリンゲンシス・バラエテ
ィ・クルスタキＨＤ−１菌株（アメリカ農務省ブランズ
ビル研究所保管菌株）を肉エキス・ペプトン寒天斜面に
３０°Ｃ１４８時間静置培養した種菌を接種し、３０°
Ｃにて、５日間振盪培養を行なった。培養２日日以降、
約５０％の細胞内に結晶毒素と芽胞の形成が認められ、
３日目から、細胞外に放出され、４８５日目には、芽胞
の放出率（下記の方法）は９０％となった。同培養液は
芽胞の９０％が細胞から放出されてから、１５時間後に
相当した。この培養で培養液のｐＨは８程度となってい
る。この培養液を単位重量中に同量含み、かつｐＨ１，
３，５，５，５，６，６，５，７，７，５，９，１１と
なるような１０種の殺菌処理を施す培養液を夫々適当な
濃度のＴ”Ｉ２ｓ　Ｏ４、あるいは、ＮａＯＨ溶液及び
無菌水で調製する。この培養液を卓上型遠心分離機（１
４，００Ｏｒｐｍ、　４°Ｃ１１Ｏ分間）を用いて遠心
分離し、上澄部分をデカンテーションにより、回収する
。本上澄液の１０％を水で置換したものを遠心管中の残
渣にもどし、再分散させる。

この液に界面活性剤であるペレックスＯＴＰ希釈液を数
滴、滴下し、液中の濃度が０．０２％となるようにし、
固液を５ｄずつ試験管に分注し、これに殺菌剤５ｒｎＩ
ｌを添加することにより、下記の条件となるように薬液
を予じめ調合したものを同試験管にすばやく加え、所定
の加熱処理を施した後、室温に冷却し、１５．００　Ｏ
ｒｐｍにおいて、１０分間遠心分離操作に付し、上清液
を捨てて、沈降物に５ｄの無菌水を加えて懸濁する操作
を２回繰り返し、殺菌剤と菌体外可溶性毒素物質を除去
した。

（以下余白） このようにして得られた夫々の試料液の生残細胞・芽胞
数（ケ／ｄ）と残存殺虫活性を以下の方法に準じて測定
した結果を表１に示す。ｐＨ１，９および１１に於ては
、いずれの殺菌剤を用いた場合も、試料液を希釈しない
状態でコナガに投与しても、死亡が観察されず、半数致
死濃度は測定不能となった。塩素系ならびに酸素系殺菌
剤に対しては、殺菌処理を施す培養液のｐＨを４ないし
、７に調整する、また好ましくは、ｐＨ５〜５．５の範
囲内に調整することで高い残存殺虫活性が得られる。

芽ｍ灯旧４皿足 培養の種々の過程で培養液を適宜、無菌採取し、位相差
光学顕微鏡（倍率１，５００倍、油浸法）下で培養状況
を観察する。培養液−試料あたり、任意に視野を５箇所
選び、芽胞の放出率を個々に求め、その平均値をもって
、各培養過程における芽胞の放出率とした。

なお、芽胞の放出率は、視野に存在する全芽胞数（結晶
毒素ならびに芽胞を自己体内に含む細胞と培養液中に遊
離する芽胞の総数）に対する遊潴芽胞数の割合（％）で
表示することとする。

・　　　　　　Ｘｌ 試料液１戚を採り、無菌水にて適宜希釈し、肉エキス・
ペプトン寒天平板上に流し、３０゛Ｃにて４８時間培養
し、発生する集落を数えて、これより試料中の生残細胞
・芽胞数（ケ／ｄ）を計算する。

（以下余白） 残存ＪｕＢ１ジ肚定 試料液を適当に水で希釈した一連の５ないし６濃度段階
の被検定液を作製し、この一連の被検定液５０成に２０
０ｄのキャベツ生葉を１分間浸漬する。キャベツ生葉を
風乾後、大型シャーレに敷き、各区３０頭のコナガ３令
幼虫を放飼し、７２時間後に死出数を数え死亡率（％）
を算出する。

この結果をフィニ−（Ｆｉｎｎｅｙ）の図解法（Ｆｉｎ
ｎｅｙ。

ＤＪ、（１９４７）Ｐｒｏｂｉｔ　Ａｎａｌｙｓｉｓ、
Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ　Ｕｎｉｖ。

Ｐｒｅｓｓ、　Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、　３１８ＰＰ）に
より解析し、半数致死濃度（被検定液中の試料液の濃度
；　ｐｐｍ）を求める。

実施例２ バチルス・チューリンゲンシス・バラエティ・イスラエ
レンシスＨＤ−５２２菌株〔アメリカ農務省ブランズ・
ビル研究所保管菌株〕を肉エキス１％、ペプトン０．５
％、酵母エキス０．５％、ｐＨ７，０の加熱殺菌済培養
原料液１０！に接種し、３０°Ｃに保って、毎分５！の
無気空気で通気撹拌培養した。培養の種々の過程で培養
液を適宜、無菌採取し、位相差光学顕微鏡により培養状
況を観察したところ、培養４５時間後に芽胞の放出率が
９０％に達した。

６０時間で培養を終了し、最終ｐＨは、８．５であった
。この培養終了液について、表２に示すようなｐＨに調
整し、実施例１と同様の操作で殺菌処理を施し、それぞ
れについて生残細胞・芽胞数を測定した。

殺虫力測定は、各殺菌終了液を蒸留水で希釈し、段階濃
度希釈液をつくり、その各２戚をアカイエカ（Ｃｕｌｅ
ｘ　ｐｉｐｉｅｎｓ）の３令幼虫３０頭を浮遊した２０
０ｄの飼育液中に加え、２７°Ｃに保って２日後、死亡
虫数を測定し、半数致死濃度を求め、培養終了液につい
ての値と対比して、活性保持率（％）を算出した。結果
を表２に示す。

実施例１と同様に、殺菌すべき培養液のｐＨを４ないし
７に調整する、また好ましくは、ｐＨ５〜５．５の範囲
内に調整することで高い残存殺虫活性が得られることが
わかる。

（以下余白） 実施例３ バチルス・チューリンゲンシス・バラエティ・クルスタ
キＨＤ−１菌株を坂ロフラスコ中のＣ墳地（クルコース
１％、コーンスチープリ力−１％、Ｍｎ、ｌｐｐｍ：ｐ
Ｈ７，０）５０ｍに接種し、３０°Ｃ１３日間振盪培養
する。実施例１．２と同様に、芽胞の放出率を追跡した
ところ、培養２．５日後に、芽胞の９０％が放出するに
至った。この培養液のｐＨを５．５に調整した後、同法
０．８！を日立連続遠心分離用ローター（容量１ｆｆｉ
）に入れ、回転数を種々変えて（重力加速度：１，００
０Ｘｇ〜７，０００Ｘｇ）、回分遠心分離を行う。遠心
終了後、沈澱部をまき込まないように注意深く、上清部
分をとり除き、水溶性成分の除去割合（濃縮比率：×１
、×５、×１０）の異なる濃縮された培養液を得る。同
法に界面活性剤であるエマルケン９１０希釈液を数滴、
滴下し、液中の濃度が０．２５％となるように添加混合
した液５ｄずつを試験管に分注し、実施例１に用いた殺
菌剤を適宜希釈したものを５成ずつ添加し、所定の条件
で加熱処理を施した後、実施例１と同様に操作して、薬
剤を除去した沈降物を集め、無菌水に懸濁し、これにつ
いて生残細胞・芽胞数及び残存殺虫活性を測定した。生
残芽胞数が０ケ／Ｉｄとなる混合液中の薬剤の最小値と
同法の残存殺虫活性を表３に示す。

表３から明らかなように、培養液からの水溶性成分の除
去割合の増大化に応じて、培養固形分換算の薬剤使用量
（混合液中の薬剤濃度／混合液中の培養固形分濃度）を
軽減できるとともに、培養固形分あたりの残存殺虫活性
を飛躍的に高めることが可能となった。

（以下余白） 実施例４ 肉エキス０．５％、ペプトン０．５％、Ｃ３Ｌ２％、グ
ルコース１％の培養原料液を加熱殺菌し、これにバチル
ス・チューリンゲンシス・バラエティ。

クルスタキＨＤ−１株を、予め７時間、前培養した種菌
液を接種し、３０°Ｃで通気撹拌培養する。

培養前期から中期にかけて、アンモニア水を注加するこ
とにより、培養液のｐＨを６．７５±０．２５の範囲に
調節し、中期以降はｐＨ上昇にまかせ、５４時間にて培
養を終了する。実施例３と同様に、芽胞の放出率を追跡
したところ、培養３８時間後に、芽胞の９０％が放出す
るに至った。終了時のｐＨは８．８に達していた。

これに硫酸を添加し、ｐＨを５．５とし、８０００ｒｐ
ｍで連続遠心沈降機に通して、濃縮泥（×５）を取得す
る。これにドテシルベンゼンスルホン酸ソーダを０．１
５％となるように添加した後に、パラトルエンスルホン
クロルアミドナトリウムを０゜１５％添加し、６０゛Ｃ
に昇温し、１０分間保持した。

生残細胞・芽胞数は０ケ／ｄであり、下記の殺虫力測定
により求めた殺虫活性保持率は６０％であった。

殺土方皿定 展着剤ダイン（武田薬品工業■）を０．０３％添加した
水道水で殺菌処理液を順次希釈し、段階濃度、希釈液列
を整える。

直径８ｃｍの円形に打ち抜いたキャベツの葉片を希釈液
中に浸漬し、風乾する。この葉片の上にコナガ３令幼虫
１０頭を載せ、３日後の死虫数を廁定する。１水準３連
で半数致死濃度を求め、培養終了液についての値と対比
して、活性保持率（％）を算出する。

実施例５ 実施例４と同様にして得たｐＨ５，５の遠心沈降濃縮泥
にエマルゲン９１０を０．１２％となるように添加した
後に、次亜塩素酸ソーダを０．０９％（有効塩素として
）添加し、二重管のガラス内管の一端から連続的に送入
し、外管に５５°Ｃの温湯を並流で流入して、ピストン
流で５０℃に昇温し、その温度に１０分保持してから、
連続的に流出せしめる。

生残細胞・芽胞数Ｏケ／ｄ、および殺虫活性保持率６３
％を得た。

実施例６ バチルス・チューリンゲンシス・バラエティ・イスラエ
レンシス）ＩＤ−５２２株を２ｘＣ培地（グルコース２
％、コーンスチープリ力−２％、Ｍｎ２ｐｐｍ　：　ｐ
Ｈ７，０）に接種し、６０時間通気撹拌培養した。

培養終了ｐＨは８．９に達していた。これに塩酸を注加
し、ｐＨを５．５とした後、１０．０００ｒｐ１ｍで遠
心沈降により上澄液を去り、結晶毒素と生芽胞混在沈泥
（×１０濃縮）を得、実施例５と同様に界面活性剤処理
をする。

ついで、次亜塩素酸ソーダを０．１０％（有効塩素とし
て）添加し、５０°Ｃに昇温し、１０分間保持した。実
施例２に準じて、生残細胞・芽胞数およびアカイエカ幼
虫に対する殺虫力を測定したところ、生残細胞・芽胞数
Ｏケ／Ｉｄおよび殺虫活性保持率６２％の結果であった
。

（ハ）発明の効果 本発明は、コナガ、モンシロチョウ、ヨトウガ、イチモ
ンジセセリ、などの鱗翅目昆虫の幼虫に対して有効で、
かつ生菌体および胞子による二次増殖がない殺虫剤の製
造法に関し、結晶毒素を含有するＢＴ菌の培養液に、特
定の処理を施した後に、殺菌処理を施すことで、化学薬
品の使用量を大幅に削減したより緩徐な殺菌を可能とし
、しかも、殺菌処理後の残存殺虫活性を飛躍的に高めら
れるという優れた効果を有し、当該殺虫剤の生産性向上
ならびに品質向上に大きく寄与し、生菌体による二次的
災害生起のない安全で高い薬効のＢＴ農薬を、工業的に
安全に製造し、提供出来るため、農薬業界及び農業の分
野に広く貢献できるものである。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １、バチルス・チューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
   ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）の培養液中に存在する生
   芽胞および生栄養細胞の殺滅を培養により芽胞の９０％
   が放出された後で、かつ該放出後２４時間以内の培養液
   に、水溶性成分の除去分離工程を施し、かつｐＨを４〜
   ７に調整した後に実施することを特徴とする殺虫剤の製
   造方法。