JPH03123797A - オリゴペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は生理学的に活性を有する次式（１）：％式％（
） または下記式（ＩＩ）　ニ ー　−−（ＩＩ） で示されるオリゴペプチドであるサラホトキシンｓ６ｂ
　、　ｓ６ｃより誘導されるサラホトキシン誘導体を提
供することに係り、さらに本発明においてはサラホトキ
シン誘導体あるいはその医薬上許容される塩を有効成分
として含有することを特徴とする血圧調整薬を提供する
ことにも関する。

［従来の技術およびその問題点コ サラホトキシンはＡｔｒａｃｔａｓｐｉｓ　ｅｎｇａｄ
ｄｅｎｓｉｓの毒腺より単離抽出される蛇毒であり、本
発明者の一人高崎により全−次構造が解明され次式（Ｉ
ＩＩＩ：Ｃｙｓ−Ａ−Ｃｙｓ−Ｂ−Ａｓｐ−Ｍｅｔ−Ｃ
−Ａｓｐ−Ｄ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−Ｅ−で示され
るアミノ酸２１個よりなるオリゴペプチドで、式（ＩＩ
ＩＩ中、ＡＢ（１：ＤＥがそれぞれＳｅｒ、　Ｌｙｓ。

Ｔｈｒ／Ｓｅｒ、　Ｌｙｓ、　Ａｓｎであるサラホトキ
シンｓ６ａ＋ｘＳｅｒ、　Ｌｙｓ、　Ｔｈｒ、　Ｇｌｕ
、　Ｐｈｅであるサラホトキシンｓ６ｂ　、さらにまた
Ｔｈｒ、　Ａｓｎ、　Ｔｈｒ、　Ｇｌｕ、　Ｐｈｅであ
るサラホトキシンｓ６ｃ　、以上３種類のペプチド混合
物であることが判明している（Ｔｏｘｉｃｏｎ、第２６
巻、５４３頁、１９８８年） また、サラホトキシンの構造に関する更に詳しい検討に
より、１位、１５位のＣｙｓ、また同時に３位、１１位
のＣｙｓがＳＳ架橋することによりループを形成し、第
１ループは親水性を示し、ティル部分は強い疎水性を示
すことが明らかになった。

上記サラホトキシンは異常血圧、すなわち高血圧、低血
圧を正常値に回復させるという特異な作用を有し、その
作用点も中枢神経系によるものではなく、血管平滑筋に
対して直接作用することが本発明者らの検討により明ら
かにされている。

サラホトキシンはその特異な薬理作用のために、従来の
ものとは異なる全く新しいタイプの血圧調整薬としての
応用が期待され、本発明者らにより特許出願が完了して
いる（特願昭６３−３２８０１号出願明細書参照）。

上記出願明細書にも明らかにされている通り、サラホト
キシンの薬理活性は極微量で十分に発揮されるという優
れた特徴を有するものではある。

ところが反面、致死量と有効量との幅、すなわち、有効
量／致死量で示される安全域が比較的狭いということが
明らかになった。

そこで今回本発明者らは種々のサラホトキシン誘導体を
合成し、その構造活性相関について検討したところ、次
式（Ｉ）： Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｃ：ｙｓ−Ｈｉｓ−
Ｇｉｎ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−１１ｅ−Ｔｒｐ−−＋　−（
１） で示されるオリゴペプチド（サラホトキシンｓ６ｂ　）
中、６位のＮｅｔがホモセリンで置換されたサラホトキ
シン誘導体（以下’Ｈｓｅ−ｓ６ｂと記すこともある）
、式（Ｉ）中３位のＴｙｒがモノ−またはジ−ヨウ素置
換されたサラホトキシン誘導体（以下Ｉｏｄ−ｓ６ｂと
記すこともある）　式（Ｉ）中Ｎ末端Ｃｙｓ　、４位、
９位のＬｙｓのアミノ基のうち少なくとも１つ以上がア
セチル化されたサラホトキシン誘導体（以下Ａｃ−５６
ｂと記すこともある）、また次式（ＩＩ）　： Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ａｓｐ−Ｍｅｔ−Ｔ
ｈｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｓ
ｎ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｈｉ　５−Ｇｉｎ−Ａｓｐ−Ｖａ
−１−Ｉ　ｌ　ｅ−Ｔｒ　ｐ−−−（ＩＩ） で示されるオリゴペプチド（サラホトシンｓ６ｃ　）中
、６位のＭｅｔがホモセリンで置換されたサラホトキシ
ン誘導体（以下’Ｈｓｅ−ｓｅｃと記すこともある）、
式（ＩＩ）中Ｎ末端Ｃｙｓのアミノ基がアセチル化され
たサラホトキシン誘導体（以下Ａｃ−５６ｃと記すこと
もある）、以上５種類の誘導体は天然品と比較した時に
低毒性であり、また薬理作用も天然品と遜色ないもので
あることが確認され、これら誘導体を医薬品としたとし
た時に天然品より、より有効なものとなることが判明し
、本発明を完成するに至った。

［問題を解決するための手段］ しかして本発明は次式（１）： ％式％（） で示されるオリゴペプチドにおいて、６位のＮｅｔがホ
モセリンで置換されたサラホトキシン誘導体’Ｈｓｅ−
ｓ６ｂ、式（Ｉｌ中Ｎ末端Ｃｙｓ、４位、９位のアミノ
基がアセチル化されたサラホトキシン誘導体Ａｃ−５６
ｂ、あるいは次式（ＩＩ）ニ ー　−−（ＩＩ） で示されるオリゴペプチドにおいて、６位のＭｅｔがホ
モセリンで置換されたサラホトキシン誘導体’Ｈｓｅ−
ｓ６ｃ、式（ＩＩｌ中Ｎ末端Ｃｙｓのアミノ基がアセチ
ル化されたサラホトキシン誘導体Ａｃ−５６ｃ、あるい
はこれら化合物の医薬上許容される塩を有効成分として
含有することを特徴とする血圧調整薬に関する。

上記サラホトキシン誘導体は各々ペプチド化学分野にお
いて知られる方法で合成することができ、その代表的な
合成方法を後記実施例２〜８として示した。

後記実施例において示す方法等により得られるサラホト
キシン誘導体は以下に記すように医薬品組成物とするこ
とができる。

すなわち、サラホトキシン誘導体あるいはその医薬上許
容される塩は医薬上汎用されている無機もしくは有機の
固体または液体の製剤用担体または希釈剤、例えば、澱
粉、乳糖、白糖、結晶セルロース、リン酸水素カルシウ
ム等の賦形剤ニアカシア、ヒドロキシプロピルセルロー
ス、アルギン酸、ゼラチン、ポリビニルピロリドン等の
結合剤；ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ス
テアリン酸カルシウム、タルク、水添植物油等の滑沢剤
；加工澱粉、カルシウムカルボキシメチルセルロース、
低置換ヒドロキシプロピルセルロース等の崩壊剤；非イ
オン性界面活性剤、アニオン化することができる。経口
投与に適した剤形としては錠剤、コーティング剤、カプ
セル剤、トローチ剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、ドライシ
ロップ剤等の固体製剤、あるいはシロップ剤等の液体製
剤が挙げられ、非経口投与に適した剤型としては例えば
注射剤、点滴剤、坐剤等が包含される。また、局所投与
に適した剤型には軟膏、チンキ、クノーム、ゲル、エア
ゾール等が挙げられる。これらの製剤は製剤学の分野で
それ自体周知の方法で調整することができる。また、注
射剤以外の′投与形態にあってはタンパク分解酵素阻害
剤等の安定化剤も必要に応じて適宜配合することができ
る。

かくして本発明のサラホトキシン誘導体を有効成分とし
て含有する製剤を得ることが出来る。本発明から更に提
供されるこの薬剤組成物は、人間を始めとするすべての
哨乳動物に投与することができる。その投与量は処置す
べき患者の年齢、体重、症状、薬剤の投与形態、医師の
診断等に応じて広い範囲にわたり変えることができるが
、−Ｍにサラホトキシン誘導体として０．１０〜１００
ｍｇの範囲内の用量が標準的であり、通常これを１日１
回または数回に分けて投与することができる。

以下に本発明により提供されるサラホトキシン誘導体を
実施例にてさらに詳しい説明を加える。

なお、本明細書で用いるペプチド分野の略号は以下のと
おりである。Ｃｙｓ　；シスチン、Ｌｙｓ　；リジン、
Ａｓｐ　：アスパラギン酸、Ｍｅｔ　：メチオニン、Ｔ
ｈｒ　；スレオニン、Ｇｌｕ　：グルタミン酸、Ｌｅｕ
：ロイシン、Ｔｙｒ　；チロシン、Ｐｈｅ　；フェニル
アラニン、Ｈｉｓ　；ヒスチジン、Ａｓｎ　；アスパラ
ギン、Ｖａｌ　；バリン、Ｉｌｅ；イソロイシン、Ｔｒ
ｐ；トリプトファン、Ｇｉｎ　：グルタミン、Ｈｓｅ；
ホモセリン。

実」１例」２：薬理活性試験 １．５０％　　　　　拭馬 後記実施例２〜８にて得られたサラホトキシンｓ６ｂの
誘導体である’Ｈｓｅ−ｓ６ｂ、Ｉｏｄ−ｓ６ｂ、　Ａ
ｃ−５６ｂ　、およびサラホトキシンｓ６ｃの誘導体で
ある’Ｈｓｅ−ｓ６ｃ、　Ａｃ−５６ｃをＡｔｒａｃｔ
ａｓｐｉｓ　ｅｎｇａｄｄｅｎ−ｓｉｓより抽出した天
然品ｓ６ｂ　、　ｓ６ｃと毒性の比較検討を行った。

く方法〉 雄性マウス（体重２０ｇ）を１群３匹とし、サラホトキ
シン誘導体の生理食塩溶液を尾静脈から投与し、Ｒｅｅ
ｄらの方法（Ｒｅｅｄ　　Ｌ、　　Ｊ、ａｎｄＭｕｅｎ
ｃｈ　　Ｈ，（１９３８）　　Ａｍ、　　Ｊ、　　Ｈｙ
ｇ、　　２７．　４９３−４９７　　）により５０％致
死量（ＬＤ、。）を求めた。

〈結果〉 第１表 ２、血圧に　する　　　ｉｎ　ｖｉｖ。

血圧に対するサラホトキシン誘導体の薬理作用を検討し
た。

く方法〉 高血圧自然発症ラットの静脈内にサラホトキシン誘導体
をｌｎｍｏｌ／ｋｇ投与し、大腿動脈血圧を測定し、降
圧作用、昇圧作用について各誘導体と天然品の比較検討
を行なった。

く結果〉 結果を第２表に示す。

第２表 Ｎ、Ｄ、：測定せず 第１表の結果より明らかな如く、各サラホトキシン誘導
体は天然品よりもＬＤ、、値が高（、毒性が軽減してい
ることがわかる。

２）疋冨皿圧と最高血圧との幅を表わす第２表からも明
らかな如く、各誘導体とも薬理活性は保持されているこ
とがわかる。

以上１．２の薬理活性試験から理解される様に、サラホ
トキシンは本発明の誘導体とすることにより毒性が軽減
され、また薬理活性も十分保持されることにより、天然
品に比較したときにより臨床的に優れた薬剤となること
が予想される。

１五里ユニサラホトキシンｓ６ｂの合成Ｃｙｓ−３ｅｒ
−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｍｅｔ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−
Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｃ
ｙｓ−Ｈｉ　５−Ｇｌ　ｎ−Ａｓｐ−Ｖａｌ　−Ｉ　１
　ｅ−Ｔｒｐ−−−（ｓ６ｂ） １位、１５位のＣｙｓの保護基としてメチルベンジル基
を３位、１１位のＣｙｓの保護基としてアセトアミドメ
チル基を用い、常法により固相法ペプチド合成機を用い
てＣ末端より順次合成を行なった。

合成終了後肝を用いて樹脂よりペプチドを切り離し、同
時にメチルベンジル基を除去し、空気酸化することによ
り１位−１５位のＳＳ架橋を形成させた後１（ＰＬＣ，
により精製を行なった。次いでヨウ素酸化によりアセト
アミドメチル基を除去し、３位−１１位のＳＳ架橋を形
成させサラホトキシンｓ６ｂを得た。

！五奥ユニサラホトキシンｓ６ｃの合成Ｃｙｓ−Ｔｙｒ
−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ａｓｐ−Ｍｅｔ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−
Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｃ
ｙｓ−Ｈｉ　５−Ｇｉｎ−Ａｓｐ−Ｖａｌ　−Ｉ　１ｅ
−Ｔｒｐ−一−（ｓ６ｃ） １位、１５位のＣｙｓの保護基としてメチルベンジル基
を、３位、１１位のＣｙｓの保護基としてアミドメチル
基を用い、実施例２と同様に操作を行ない、サラホトキ
シンｓ６ｃを得た。

７　：　’Ｈ８ｅ−８６ｂの合成 Ｃｙｓ−３ｅｒ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｍｅｔ−Ｔ
ｈｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙ
ｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｈｉ　５−Ｇｌ　ｎ−Ａｓｐ−Ｖ
ａｌ　−Ｉ　ｌ　ｅ−Ｔｒｐ−−−（ｓ６ｂ） ↓ Ｃｙｓ−３ｅｒ−（：ｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｈｓｅ−
Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔ
ｙｒ−Ｐｈｅ−Ｃ：ｙｓ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｖ
ａｌ−Ｉ　１ｅ−Ｔｒｐ−一（’Ｈｓｅ−ｓ６ｂ） 実施例１にて得られたサラホトキシンｓ６ｂ　０．１ｍ
ｇ　（４０ｎｍｏｌ）を７０％ギ酸０．２ｍｌに溶解し
、臭化シアン１．３ｍｇを溶解した７０％ギ酸溶液を５
０μｍ加え密栓して暗所に３０℃で１６時間放置する。

次いで蒸留水２　ｍｌを加え凍結乾燥し、１Ｍギ酸１．
０ｍｌに溶解し再度凍結乾燥して過剰の臭化シアンを除
去する。

次いでＨＰＬＣにて精製を行ない６Ｈｓｅ−ｓ６ｂを得
た。

１立１ｊ１５４　：　Ｉｏｄ−ｓ６ｂの合成−−−（ｓ
６ｂ） ↓ −−一（Ｉｏｄ−ｓ６ｂ） 実施例１にて得られたサラホトキシンｓ６ｂ　Ｏ，１１
ｍｇ　（４０ｎｍｏｌ）を０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
７，５）１００　ｕ　１に溶解し、氷冷下ＮａＩ−Ｉｚ
溶液（０，ＩＭ　ＮａＩ　２ｍｌ、　０．４ＭＨ２ＳＯ
，０，２ｍ１．０．６％Ｈ２（ｈ　Ｏ，２ｍｌを混和後
水冷下に３０分間放置したもの）１４μｍを加え、水冷
下に３０分間放置する。

次いで５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ−１５カラムにて脱塩し、
更にＨＰＬＣにて精製し、モノ−ヨウ素化体（ｒｏｄ−
ｓ６ｂｌ　を得た。

１皿型ヱ：　Ａｃ−５６ｂの合成 ↓ Ａｃ−Ｃｙｓ−５ｅｒ−Ｃｙｓ−Ａｃ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ
−Ｈｓｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ａｃ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｃ
ｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｉ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｈｉｓ−
Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−１１ｅ−Ｔｒｐ　　−−−（
Ａｃ−ｓ６ｂ）実施例１にて得られたサラホトキシンｓ
６ｂ　３００μｇ　（１２０ｎｍｏｌ）を５０％飽和酢
酸ナトリウム溶液０、３ｍｌに溶解し水冷下撹拌しなが
ら無水酢酸２．５ＬＬ１を１５分間隔で計４回加える（
この間５Ｍ　ＮａＯＨにてｐＨ７〜９に保つ）。反応終
了後室温に戻してＨＰＬＣにて精製し、Ａｃ−５６ｂを
得た。

Ｗユニ　’Ｈｓｅ−ｓ６ｃの合成 Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ａｓｐ−Ｍｅｔ−Ｔ
ｈｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−ＧｌｕＣｙｓＦＬｅｕ−Ａｓ　
ｎ　−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｈｉ　５−Ｇｌ　ｎ−Ａｓｐ−
Ｖａｌ　−Ｉ　１　ｅ−Ｔｒ　ｐ−−−（ｓ６ｃｌ Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ａｓｐ−１（ｓｅ−
Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−−−−（’Ｈｓｅ−
ｓ６ｃ） 実施例２にて得られたサラホトキシンｓ６ｃ　Ｏ，１ｍ
ｇを用い、実施例１と同様に処理を行ない’Ｈｓｅ−ｓ
６ｃを得た。

見立型上：　Ａｃ−５６ｃの合成 −−−（ｓ６ｃ） −−一（Ａｃ−ｓ６ｃ） 実施例２にて得られたサラホトキシンｓ６ｃ　３００μ
ｇを用い、実施例３と同様に処理を行ないＡｃ−５６ｃ
を得た。

１１里ユニ注射用製剤 実施例４により得られた’１（ｓｅ−ｓ６ｂの粉末０．
２　ｍｇをマンニトール２０ｍｇの水溶液１　ｍｌに溶
解する。該溶液を滅菌条件下でろ過して２　ｍｌアンプ
ルに入れ凍結乾燥する。

支１鳳豆：注射用製剤 実施例６により得られたＡｃ−５６ｂの粉末５ｍｇを実
施例９と同様に調整して、凍結乾燥品を得る。

支１匠旦：注射用製剤 実施例７により得られた’Ｈｓｅ−ｓ６ｃの粉末５　ｍ
ｇを実施例９と同様に調整して、凍結乾燥品を得る。

１１且旦：注射用製剤 実施例８により得られたＡｃ−５６ｃの粉末５　ｍｇを
実施例９と同様に調整して、凍結乾燥品を得る。

１直且旦：注射用製剤 実施例５により得られたＩｏｄ−ｓ６ｂの粉末０．０６
ｍｇをマンニトール２０　ｍｇの水溶液１．５　ｍｌに
溶解する。該溶液を滅菌条件下でろ過して２　ｍｌアン
プルに入れ、凍結乾燥品を得る。

１皿皿旦：経鼻腔投与組成物 実施例１３等により得られるＩｏｄ−ｓ６ｂの微粉末０
．０６ｍｇをベンジルアルコール７５　ｍｇおよび市販
の高級脂肪酸の半合成トリグリセリドの混合物などの懸
濁剤１．３９５ｇの混合物中に混濁させる。該混濁液を
計量バルブを有する１０　ｍｌエアゾール容器に入れ、
エアゾール噴射剤を充填する。

［効果］ サラホトキシンは、その特異な薬理活性により、新しい
タイプの血圧調整剤となることが期待されている。サラ
ホトキシンの薬理活性は微量で十分発揮されるところも
特徴の１つであるが、薬剤としての安全域は比較的狭い
ものであった。

今回本発明者らにより提供されるサラホトキシン誘導体
はこの点を解決し、薬理活性を充分保持させつつも毒性
の低減を図ることに成功した。今回提供されるサラホト
キシン誘導体は、天然品と比較した時により臨床的に使
用しやすい血圧調整薬となることが期待される。

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. （１）次式（ I ）： Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｍｅｔ−Ｔ
   ｈｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙ
   ｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｖａｌ
   −Ｉｌｅ−Ｔｒｐ−−−（ I ） で示されるオリゴペプチドにおいて、６位のＭｅｔがホ
   モセリンで置換されたサラホトキシン誘導体、または医
   薬上許容される塩。
2. （２）請求項１記載の式（ I ）中、１３位のＴｙｒが
   モノ−またはジ−ヨウ素置換されたサラホトキシン誘導
   体、またはその医薬上許容される塩。
3. （３）請求項１記載の式（ I ）中、Ｎ末端Ｃｙｓ、４
   位、９位、のＬｙｓいずれか１つ以上のアミノ基がアセ
   チル化されたサラホトキシン誘導体、またはその医薬上
   許容される塩。
4. （４）次式（II）： Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ａｓｐ−Ｍｅｔ−Ｔ
   ｈｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−Ａｓ
   ｎ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｖａｌ
   −Ｉｌｅ−Ｔｒｐ−−−（II） で示されるオリゴペプチドにおいて、６位のＭｅｔがホ
   モセリンで置換されたサラホトキシン誘導体、または医
   薬上許容される塩。
5. （５）請求項４記載の式（II）中、Ｎ末端Ｃｙｓのアミ
   ノ基がアセチル化されたサラホトキシン誘導体、または
   その医薬上許容される塩。
6. （６）請求項１ないし５記載のサラホトキシン誘導体い
   ずれか１種あるいは２種以上を有効成分として含有する
   ことを特徴とする血圧調整薬。
7. （７）非経口投与に適した形態にある請求項６記載の血
   圧調整薬。
8. （８）経口投与に適した形態にある請求項６記載の血圧
   調整薬。
9. （９）局所投与に適した形態にある請求項６記載の血圧
   調整薬。