【発明の詳細な説明】
Ｃ反応性タンパク質断片から誘導されたオリゴペプチド
本発明はＣ反応性タンパク質（本明細書ではＣＲＰ）の断片から誘導されたオ
リゴペプチド、及び免疫調節剤としてのその用途、更に心臓血管系及び炎症性疾
患の治療におけるその用途に関する。
ＣＲＰは、一般にその血中濃度の非常に低いタンパク質であり、この濃度は炎
症の過程により２，０００倍ほどまで上昇する〔J.J．Morley 及びI．Kushner，
Am．N.Y．Acad．Sci.，389，406-418(1989)〕。F.A．Robeyら（J．Biol．Chem.
，262，No．15，7053-7057(1987)）は、タフトシンの配列に非常に類似した３つ
のＣＲＰテトラペプチド配列を開示している。この化学合成されたテトラペプチ
ドは、貧食細胞性白血球とスーパーオキシドの産生を刺激し、タフトシン同様に
単核細胞を誘導してインターロイキン１を産生させる。タフトシンのように、３
つのＣＲＰテトラペプチドは in vivoでプロテアーゼにより迅速に代謝されて不
活化される。
驚くべきことに、このＣＲＰテトラペプチド断片の化学的に修飾されたアナロ
グが、免疫調節活性を有し、かつ心臓血管系及び炎症性疾患の治療、例えば、敗
血症性ショックの治療において有用であることが認められている。
したがって、本発明は、式（Ｉ）：
Ａ1−Ａ2−Ａ3−Ａ4 （Ｉ）
〔式中、Ａ1は、トレオニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、サルコシン、
アラニン、グリシン及び(Ｃ2-6)アシル−グリシンよりなる群から選択されるア
ミノ酸残基であるか、又は存在せず；
Ａ2は、場合により少なくとも１つの(Ｃ1-6)アルキル、ベンジル又は(Ｃ2-6)ア
シル基によりＮα−置換されているロイシン、イソロイシン、
バリン、リシン及びオルニチン、並びにプロリンよりなる群から選択されるアミ
ノ酸残基であるか、あるいは存在せず；
Ａ3は、プロリン、ロイシン、イソロイシン及びバリンよりなる群から選択され
るアミノ酸残基であり；
Ａ4は、場合によりＣ末端位でアミド化されているアルギニン、ロイシン及びグ
ルタミンよりなる群から選択されるアミノ酸残基であるか、又はアグマチン残基
であるか、又は存在しない（但し、Ａ1、Ａ2及びＡ4のただ１つのみが存在しな
いことができ；該化合物は、上記アミノ酸残基及びアグマチン残基の側鎖基が、
場合により(Ｃ1-6)アルキル、ベンジル又は(Ｃ2-6)アシルよりなる群から選択さ
れる１つ以上の基により置換されていてもよいことを更に特徴とし；そして該ア
ミノ酸残基のそれぞれは、Ｃα位でＤ−又はＬ−型であるか、あるいは可能なジ
アステレオマー又はエナンチオマーの１つの型であってもよい）〕で示されるオ
リゴペプチド、及びその薬学的に許容しうる酸又は塩基との塩に関する。
本発明の化合物の好ましい群は、Ａ1が、グリシン、トレオニン、ロイシン、
イソロイシン、バリン、サルコシン、アラニン、(Ｃ2-6)アシル−グリシンより
なる群から選択されるアミノ酸残基であるか、又は存在せず；Ａ2が、(Ｃ1-6)ア
ルキル、ベンジル又は(Ｃ2-6)アシル基によりＮα−置換されているリシンより
なる群から選択されるアミノ酸残基であり；Ａ3が、プロリンであり；Ａ4が、場
合によりＣ末端位でアミド化されているグルタミン、ロイシン、アルギニンであ
るか、又はアグマチン残基であるか、又は存在しない（該化合物は、該アミノ酸
残基及びアグマチン残基の側鎖基が、場合により(Ｃ1-6)アルキル、ベンジル又
は(Ｃ2-6)アシルよりなる群から選択される１つ以上の置換基により置換されて
いてもよいことを更に特徴とし；そして該アミノ酸残基のそれぞれは、Ｃα位
でＤ−又はＬ−型であるか、あるいは可能なジアステレオマー又はエナンチオマ
ーの１つの型であってもよい）、式（Ｉ）の化合物、及びその薬学的に許容しう
る酸又は塩基との塩である。
(Ｃ1-6)アルキルとしては、メチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、ブチ
ル、sec−ブチル、tert−ブチル、ｎ−ペンチル、３−メチル−ペンチル、ｎ−
ヘキシル基及びその関連する位置異性体のような群が意図される。(Ｃ2-6)アシ
ルとしては、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、ペンタノイル、ヘ
キサノイル及びその関連する位置異性体のような群が意図される。
本発明の別の目的は、免疫調節剤としての、及び敗血症性ショックなどの心臓
血管系及び炎症性疾患の治療における式（Ｉ）のオリゴペプチドの用途に関する
。
一般式（Ｉ）の化合物は、当業者に公知の、固相又は溶液中の両方でのペプチ
ド合成法を利用して調製される〔例えば、Merrifield，R.B.，Biochemistry，3
，1385(1964)を参照〕。他に記載がなければ、アミノ酸残基は、Ｃα位のＬ−立
体配置で使用されることが意図される。
好ましくは、本合成は、選択されたアミノ酸から出発して、所望のアミノ酸の
段階的付加によりオリゴペプチドを組み立てながら、溶液中で行う。いずれにせ
よ、予め構成されたジ−又はトリペプチド単位を使用することもできる。オリゴ
ペプチドの合成は、任意のアミノ酸から出発してＮ末端又はＣ末端の両方向に進
められるとしても、Ｎ末端方向で行うのが好ましい。アミノ酸又は必要ならば予
め構成されたジ−もしくはトリペプチドは、そのまま、あるいはカルボキシ基を
例えばtert−ブチル（ｔＢｕ）基でエステル化することにより、又は／及びアミ
ン基を例えばベンジルオキシカルボニル（Ｚ）でアミド化することにより保護さ
れた適切な誘導体
の形で、そして適切には側鎖基を例えば２，２，５，７，８−ペンタメチル−ク
ロマン−６−スルホニル（Ｐｍｃ）、tert−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）
又はトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）で保護された誘導体の形で使用されてよい。こ
れらの保護は、ペプチド化学における当業者には周知の方法により行う。
いずれにせよ、上述の保護された誘導体は、市販もされている。α−アミノ部
分の保護基は、有利には次のアミノ酸との縮合の前に、例えば中程度の強酸（例
えば、トリフルオロ酢酸）による酸分解により、又は脱保護するアミノ酸及び存
在するならば他のものを考慮して選択される気体水素若しくは水素供与体、例え
ば、ギ酸又はその塩、トリエチルシラン、アルカリ中のヒドラジンなどを使用し
た、適切なパラジウム触媒の存在下での接触水素化分解により、脱離される。次
に、次のアミノ酸残基との縮合が行われるが、このような残基では反応に関与し
ない部分が適切に保護されている。
このような縮合は、幾つかの公知方法の１つにより行われてよい。詳細には、
例えばスクシンイミド（Ｓｕ）、フッ化物（Ｆ）のような活性エステル、又はベ
ンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−（ジメチルアミノ）−ホスホニ
ウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）、ブロモ−トリス−ピロリジウム−
ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢｒｏＰ）、ジシクロヘキシル
カルボジイミド（ＤＣＣ）などのような縮合剤を、場合により１−ヒドロキシ−
ベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）、４−ジメチル−アミノ−ピリジン（ＤＭＡＰ
）、トリエチルアミン（ＴＥＡ）、Ｎ−メチル−モルホリン、Ｎ−メチル−イミ
ダゾールなどのような触媒の存在下で使用してよい。
アミノ酸のＮα−アルキル−誘導体は、低温で、選択的還元剤であるシ
アノ水素化ホウ素(acianoborohydride)の存在下で、極性溶媒、好ましくはメタ
ノール中で、適切なアルデヒドでの処理により得られる。
アミドの形でＣ末端位を有する式（Ｉ）のオリゴペプチドを得ようとすれば、
そのような部分を有する市販のアミノ酸を出発物質として使用するか、あるいは
Ｃ末端アミノ酸をＨＯＢＴアンモニウム塩で、又はＡ4がアグマチン残基である
ときにはアグマチン自体でアミド化することができる。
Ａ1及び／又はＡ2がアシル化アミノ酸残基である式（Ｉ）の化合物は、低温で
、ＤＭＡＰのような触媒の存在下で、適切なアシル無水物で処理することにより
得られる。あるいは、市販のＮα−アシル−アミノ酸残基を使用することができ
る。
生じた生成物は、適切な溶媒から結晶化により、又は必要であれば逆相クロマ
トグラフィーやイオン交換クロマトグラフィーのような公知のクロマトグラフィ
ー法により、精製することができる。
以下に、本発明の幾つかの修飾オリゴペプチドの調製例を提供する。
アミノ酸誘導体、保護された断片及び修飾オリゴペプチドのＨＰＬＣ分析は、
下記の実験条件で行った。：
カラム： リクロソルブＲＰ−１８（Lichrosorb RP-18）；
温度： ２５℃（他に記載がなければ）
流速： １．５ml/分
検出装置： ジャスコ８７５−ＵＶ（Jasco 875-UV）（２３０nm）
溶離液Ａ： ９０％水、１０％アセトニトリル、０．１％トリフルオロ酢
酸（ＴＦＡ）
溶離液Ｂ： アセトニトリル、０．１％ＴＦＡ
溶離液Ｃ： 水、０．１％ＴＦＡ
濃度勾配： （Ｉ）： Ａ中０〜４０％Ｂ（２０’）から、Ａ中８０％
Ｂ（１０’）まで
（II）： Ｃ中０〜５０％Ａ（２０’）から、１００％Ａ
（３’）まで、Ａ中４０％Ｂ（２０’）まで
他に記載がなければ、全ての合成工程は室温で行う。
アミノ酸の組成と比は、６M のＨＣｌで１１０℃で２２時間加水分解後、ベッ
クマン．システム・ゴールド(Beckman SYSTEM GOLD)アミノ酸分析機により測定
した。
更に明瞭にするために、以下の実施例に使用する略語の意味を下記にリストす
る：
ＢＤＨＡ−Ｃ１： 塩化ベンジルジメチルヘキサデシルアンモニウム
Ｂｏｃ： tert−ブチルオキシカルボニル
（Ｂｏｃ）２０： ジ−tert−ブチル−ジカルボネート
ＢＯＰ： ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−（ジメチル
アミノ）−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
ＢＳＡ： Ｎ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）−アセトアミド
ＤＣＣ： ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＭＡＰ： ４−ジメチルアミノ−ピリジン
ＤＭＦ： ジメチルホルムアミド
Ｆ： フッ化物
ＨＯＢＴ： １−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール
Ｐｍｃ： ２，２，５，７，８−ペンタメチル−クロマン−６−スルホニ
ル
ＰｙＢｒｏｐ： ブロモ−トリス−ピロリジニウム−ホスホニウムヘキサ
フルオロホスフェート
ｔＢｕ： tert−ブチル
ＴＢＡＦ： テトラブチルアンモニウムフルオリド
ＴＥＡ： トリエチルアミン
ＴＦＡ： トリフルオロ酢酸
Ｓｕ： スクシンイミド
Ｚ： ベンジルオキシカルボニル
実施例１
Ｈ−Ｓａｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＯＨ・２ＡｃＯＨ
Ａ〕 ジクロロエタン６０ml中のＺ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ６．９ｇ（１２
mmol）のスラリーに、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド−ジ−tert−ブチル−アセ
タール８．６４ml（３６mmol）を５０℃で６０分間添加した。添加終了後、この
反応混合物を撹拌しながら５０℃で４０分間維持し、次に５％炭酸水素ナトリウ
ム水溶液２０mlを添加した。ジクロロエタンを真空下で留去して、水相を酢酸エ
チル１００mlで希釈した。有機相を分離し、５％炭酸水素ナトリウム水溶液で洗
浄し、そして中性になるまで塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄した。次に有機相
を脱水して溶媒を真空下で留去し、生じた粗生成物をシリカゲルカラム（溶離液
：酢酸エチル／ｎ−ヘキサン（６：４））で精製した。Ｚ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−
ＯｔＢｕ３．４ｇを得た（ＨＰＬＣ、濃度勾配（Ｉ）：保持時間３２分；純度９
９％）。
Ｂ〕 メタノール８０ml中のＡ〕の化合物３．３８５ｇ（５．３６mmol）の溶
液に水３ml中のギ酸アンモニウム１．４１６ｇ（２１．４４mmol）とＰｄスポン
ジ（約１ｇ）を添加した。この反応混合物を室温で約２時間穏やかに撹拌した。
触媒を濾過後、溶媒を真空下で留去し、残渣を酢酸エチルにとって５％炭酸水素
ナトリウム水溶液で洗浄し、
次いで中性になるまで水で洗浄した。有機相を脱水して溶媒を真空下で留去して
Ｈ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯｔＢｕ・ＨＣＯＯＨ２．８８ｇを得た（ＨＰＬＣ、濃
度勾配（Ｉ）：保持時間２３．４０分；純度９９．３％）。
Ｃ〕 Ｂ〕の化合物をＤＭＦ／塩化メチレン（１：１）３０mlに溶解した。別
にＺ−Ｐｒｏ−ＯＨ １．４０３ｇ（５．６３mmol）をＤＭＦ／塩化メチレン（
１：１）２０mlに溶解して、ＢＯＰ（２．４９ｇ、５．６３mmol）、ＨＯＢＴ（
０．７６ｇ、５．６３mmol）及びＴＥＡ（１．５６ml、１１．２６mmol）を添加
した。この２つの溶液を混合して、生じた反応混合物を１時間撹拌した。次に溶
媒を真空下で留去して、残渣を酢酸エチルにとって５％炭酸水素ナトリウムで洗
浄し、中性になるまで水で洗浄した。有機相を脱水して溶媒を真空下で留去し、
残渣をエチルエーテルで粉砕してＺ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯｔＢｕ３．
７１ｇを得た（ＨＰＬＣ、濃度勾配（Ｉ）：保持時間２９．４９分；純度９９．
６％）。
Ｄ〕 メタノール５０ml中のＣ〕の化合物３．７０９ｇ（５．０８mmol）の溶
液にＰｄ／Ｃ３５０mgを窒素下で添加し、続いて非常にゆっくりトリエチルシラ
ン４ml（２４mmol）を添加した。約２時間後、反応混合物を濾過して溶媒を真空
下で留去して、Ｈ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯｔＢｕ３．０１ｇを得た（Ｈ
ＰＬＣ、濃度勾配（Ｉ）：保持時間２４．２５分；純度９９．５６％）。
Ｅ〕 Ｄ〕の化合物（２．３７５ｇ、４mmol）をＤＭＦ／塩化メチレン（容量
比１：１）２０mlに溶解した。Ｚ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（１．８２６ｇ、４
．８mmol）を同一混合物２０mlに溶解し、次にＢＯＰ（２．１２ｇ、４．８mmol
）、ＨＯＢＴ（０．６４８ｇ、４．８mmol）及
びＴＥＡ（１．３３ml、９．６mmol）を添加した。２つの溶液を混合してこの反
応混合物を撹拌しながら１時間放置し、次にＣ〕に記載されたように処理した。
残渣をエチルエーテルで粉砕してＺ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｍ
ｃ）−ＯｔＢｕ３．６４ｇを得た。
Ｆ〕 メタノール７０ml中のＥ〕の化合物３．６４ｇ（３．８mmol）の溶液に
、水３ml中のギ酸アンモニウム１．３２１ｇ（２０mmol）と新鮮Ｐｄスポンジ約
１ｇを添加した。次にＢ〕に記載された方法により、Ｈ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐ
ｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯｔＢｕ３．２７ｇを得た。
Ｇ〕 Ｚ−Ｓａｒ−ＯＨ（０．１９６g、０．８８mmol）をＤＭＦ／塩化メチ
レン（容量比１：１）４mlに溶解し、順にＢＯＰ（０．３９ｇ、０．８８mmol）
、ＨＯＢＴ（０．１１９ｇ、０．８８mmol）、ＴＥＡ（０．２４ml、１．７６mm
ol）及び同一混合物４mlに溶解したＦ〕の化合物（０．６９４ｇ、０．８mmol）
を添加した。この溶液を撹拌しながら１時間放置した。次に溶媒を真空下で留去
し、残渣を酢酸エチルにとって５％炭酸水素ナトリウム、２．５％硫酸水素カリ
ウムで洗浄して、中性になるまで水で洗浄した。有機相を脱水して溶媒を真空下
で留去して、残渣をエチルエーテルで粉砕してＺ−Ｓａｒ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−
Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯｔＢｕ ０．７４６ｇを得た。
Ｈ〕 Ｇ〕の化合物（０．７４６ｇ、０．７２６mmol）を９５％ＴＦＡ水溶液
１０mlに溶解した。７５分後反応混合物を水で希釈して真空下で溶媒を留去した
。残渣を水にとり、エチルエーテルで洗浄して凍結乾燥した。生じた生成物を逆
相置換クロマトグラフィーにより精製した。生成物をＴＦＡ水溶液（０．１容量
％）３mlに溶解して、予めＴＦＡ（０．１容量％）を含有する水で平衡化したＶ
ＹＤＡＣ−Ｃ１８カラム
（２５０×１０mm）に流速０．５ml/分で充填した。次にカラムを、ＴＦＡ（０
．１容量％）を含有する５０mMのＢＤＨＡ−Ｃ１水溶液で流速０．５ml/分で溶
出した。溶出約１時間後、置換物が溶出するまで０．５mlフラクションを集めた
。このフラクションをＨＰＬＣにより分析して、純粋な生成物を含有するフラク
ションを合わせて凍結乾燥した。Ｚ−Ｓａｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＯＨ
０．２ｇを得た（ＨＰＬＣ、濃度勾配（Ｉ）：保持時間１１．０４分；純度＞９
５％）。
Ｉ〕 Ｈ〕の化合物（０．２ｇ、０．２８mmol）を８５％ギ酸（５ml）に溶解
して新鮮Ｐｄスポンジを添加した。この反応混合物を穏やかに撹拌しながら１０
０分間放置した。触媒を濾過後、反応混合物を水で希釈して凍結乾燥した。生成
物をＳ−セファロースＦ／Ｆカラム（１６×２００mm）のイオン交換クロマトグ
ラフィー（pH５で酢酸アンモニウムの０．０１５M から０．１５M の濃度勾配で
、３００分で３ ml/分で溶出）により精製した。集めたフラクションをＨＰＬＣ
により分析して、純粋な生成物を含有するフラクションを合わせて更に凍結乾燥
して、標題生成物０．１ｇを得た。
ＨＰＬＣ： 濃度勾配（II）保持時間７．３０分、純度＞９９％
ＦＡＢ−ＭＳ： ｍ／ｚ−４７１amu 〔Ｍ＋Ｈ〕＋
1H-NMR (200MHz;DMSO): d(1H;NH-Lys) 8.06; d(1H;NH-Arg) 7.17; m(1H; Cα-
Pro) 4.63; m(1H;Cα-Lys) 4.32÷4.24; q(1H;Cα-Arg)3.79; m(1H;Cδ-Pro) 3.
70; s(2H;Cα-Sar) 3.05; t(3H;Cα-Arg) 3.03; t(2H;Cε-Lys) 2.75; s(3H;CH3
-Sar) 2.24; m(4H;Cβ＋γ-Pro)1.99÷1.85; s(6H;CH3COO-) 1.81; m(10H; Cβ
＋γ-Arg;Cβ＋γ＋δ-Lys) 1.72÷1.29.
実施例２
Ｈ−（Ｄ）Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＯＨ・２ＡｃＯＨ
Ｚ−（Ｄ）Ａｌａ−ＯＨ０．１２２ｇ（０．５５mmol）と実施例１のＦ〕の化
合物０．４３４ｇ（０．５mmol）から出発して、実質的に実施例１のＧ〜Ｉ〕に
記載されたように処理して標題生成物０．０８９ｇを得た。ＨＰＬＣ： 濃度勾
配（II）保持時間９．５９分、純度＞９９％
ＦＡＢ−ＭＳ： ｍ／ｚ−４７１amu 〔Ｍ＋Ｈ〕＋
1H-NMR (200MHz;DMSO): d(1H;NH-Lys) 8.12; d(1H;NH-Arg) 7.17; m(1H; Cα-
Pro) 4.60; m(1H;Cα-Lys) 4.31÷4.25; q(1H;Cα-Arg)3.78; m(2H;Cδ-Pro) 3.
70; q(1H;Cα-Ala) 3.31; t(2H;Cδ-Arg) 3.03; t(2H;Cε-Lys) 2.74; m(14H; C
β＋γ-Arg;Cβ＋γ-Pro;Cβ＋γ＋δ-Lys）2.09÷1.28; s(6H;CH3COO-)1.80; d
(3H;CH3-Ala) 1.12.
実施例３
Ａｃ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＯＨ・ＡｃＯＨ
Ａｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（０．０９g、０．７７mmol）と実施例１のＦ〕の化合物
（０．６０７ｇ、０．７mmol）から出発して、実施例１のＧ〜Ｈ〕に記載された
方法により標題生成物０．１１６ｇを得た。
ＨＰＬＣ： 濃度勾配（II）保持時間１３．０６分、純度＞９９％
ＦＡＢ−ＭＳ： ｍ／ｚ−４９９amu 〔Ｍ＋Ｈ〕＋
1H-NMR (200MHz;DMSO): d(1H;NH-Lys) 8.15; t(1H;NH-Gly) 8.11; d(1H;NH-Ar
g) 7.47; m(1H;Cα-Pro) 4.59÷4.48; m(1H;Cα-Lys)4.33÷4.25;m(5H;Cα-Arg;
Cα-Gly;Cδ-Pro) 3.84÷3.59; t(2H;Cδ-Arg) 3.01; t(2H;Cε-Lys) 2.70; m(1
4H; Cβ＋γ-Arg;Cβ＋γ-Pro;Cβ＋γ＋δ-Lys) 2.03÷1.28; s(3H;CH3COO-) 1
.85; s(3H;CH3-CO-NH) 1.72.
実施例４
Ｈ−Ｇｌｙ−（Ｅｔ）Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＯＨ・２ＡｃＯＨ
Ａ〕 実施例１のＦ〕の化合物（０．９６ｇ、１．１mmol）をメタノール８ml
に溶解して、シアノ水素化ホウ素ナトリウム０．０７１ｇ（１．１２mmol）を添
加した。この反応混合物を−１５℃に冷却してアセトアルデヒド０．０６２ml（
１．１２mmol）を添加した。６０分後反応混合物から溶媒を真空下で留去して、
残渣を水にとってpH３になるまでＨＣｌを添加した。沈殿物を濾過してpH３のＨ
Ｃｌで洗浄した。７０％がＨ−（Ｅｔ）Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐ
ｍｃ）−ＯｔＢｕ、２６％がジアルキル化副生物である白色固体０．８２５ｇを
得た。
Ｂ〕 Ｚ−Ｇｌｙ−ＯＨ（０．９９４g、４．７５mmol）をＤＭＦ／塩化メチ
レン（容量比４：６）３mlに溶解し、順にＰｙＢｒｏｐ（２．２１ｇ、４．７５
mmol）、ジイソプロピルエチルアミン（２．４ml、１４．２５mmol）及び同一混
合物６mlに溶解したＡ〕で得られた固体を添加した。この反応混合物を撹拌しな
がら８０分間放置した。次に溶媒を真空下で留去して、残渣を酢酸エチルにとり
、５％炭酸水素ナトリウム、２．５％硫酸水素カリウムで洗浄し、中性になるま
で水で洗浄した。有機相を脱水して溶媒を真空下で留去した。６０％のＺ−Ｇｌ
ｙ−（Ｅｔ）Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯｔＢｕを含有す
る混合物０．９５ｇを得た。
Ｃ〕 Ｂ〕の化合物０．７５ｇから出発して、実施例１のＨ〕に記載されたよ
うに処理して、Ｚ−Ｇｌｙ−（Ｅｔ）Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＯＨ ０．１２
５ｇを得た。
ＨＰＬＣ： 濃度勾配（Ｉ）保持時間１２分；純度９４％
Ｄ〕 Ｃ〕の化合物を、ＣＭ−セファデックスＣ−２５（CM-Sephadex C-25）
カラム（１６×２００mm）のイオン交換クロマトグラフィー
（pH６で酢酸アンモニウムの０．０２M から０．２M の濃度勾配で、２７０分で
３ ml/分で溶出）により精製した。集めたフラクションをＨＰＬＣにより分析し
て、純粋な生成物を含有するフラクションを合わせて更に凍結乾燥して、Ｚ−Ｇ
ｌｙ−（Ｅｔ）Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＯＨ・２ＡｃＯＨ（ＩＴＦ１９３１）
０．１ｇを得た。
ＨＰＬＣ： 濃度勾配（Ｉ）保持時間１２分；純度９７．５％
ＦＡＢ−ＭＳ： ｍ／ｚ−６１９amu 〔Ｍ＋Ｈ〕＋
1H-NMR (200MHz;DMSO): t(1H;NH-Gly) 7.46; m(5H;CH-アリール) 7.37; d(1H;NH-L
ys) 7.24; m(1H; Cα-Lys) 5.19; s(2H;Cα-Arg) 5.05; m(1H;Cα-Pro) 4.23; m
(2H;Cα-Gly) 3.92; m(1H;Cα-Arg) 3.81; m(2H;Cδ-Pro) 3.58; m(2H;CH2-Et)
3.46; m(2H; Cδ-Arg) 2.99; m(2H;Cε-Lys) 2.65; m(4H;Cβ- 及び Cγ-Pro) 2
.03÷1.76; m(19H; Cβ- 及び Cγ-Lys及び-Arg，及び Cδ-Lys) 1.69÷1.19; s
(6H;CH3COO-) 1.66; t(3H;CH3-Et) 1.04.
Ｅ〕 Ｄ〕の化合物を実施例１のＩ〕に記載されたように処理した。標題生成
物０．０８９ｇを得た。
ＨＰＬＣ： カラム温度：６０℃；濃度勾配（II）保持時間７．３９分、
純度＞９９％
ＦＡＢ−ＭＳ： ｍ／ｚ−４８５amu 〔Ｍ＋Ｈ〕＋
1H-NMR (200MHz;DMSO): d(1H; Nα-Arg) 7.12; m(0.8H;Cα-Pro) 5.24; m(0.2
H;Cα-Pro) 4.43; m(1H;Cα-Lys) 4.28÷4.16; m(1H;Cα-Arg)3.81; m(1H;Cδ-P
ro e CH2-N) 3.70÷3.16; s(2H;Cα-Gly) 3.41; t(2H;Cδ-Arg) 3.03; t(2H;Cε
-Lys) 2.75; m(4H;Cβ＋γ−Pro) 2.12÷1.75; s(6H;CH3COO-) 1.79; m(10H; C
β＋ -Arg; Cβ＋γ＋δ-Lys) 1.70÷1.14; t(2.4H;C*H3-CH2) 0.98; t(0.6H;C*
H3-CH2) 0.89.
実施例５
Ａｃ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＯＨ・ＴＦＡ
Ａ〕 実施例１のＦ〕の化合物（０．３ｇ、０．３４mmol）を塩化メチレン１
mlに溶解した。この溶液を−２０℃に冷却して、ＤＭＡＰ（０．０４８ｇ、０．
３８mmol）と無水酢酸（０．０３５ml、０．３８mmol）を添加した。３０分後こ
の溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液と飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した
。有機相を脱水して溶媒を真空下で留去し、Ａｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−
Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯｔＢｕ ０．２８ｇを得た。
Ｂ〕 Ａ〕の化合物（０．２８ｇ、０．３２４mmol）を実施例１のＨ〕に記載
されたように処理した。標題生成物０．０８５ｇを得た。
ＨＰＬＣ： 濃度勾配（II）保持時間１３．６４分；純度＞９９％
ＦＡＢ−ＭＳ： ｍ／ｚ−４４２amu 〔Ｍ＋Ｈ〕＋
1H-NMR (200MHz;DMSO): d(0.15H;NH-Lys) 8.45; d(0.85H;NH-Lys) 8.21; d(1H
;NH-Arg) 8.09; m(1H;Cα-Pro) 4.55÷4.45; m(1H;Cα-Lys)4.43÷4.33; m(1H;C
α-Arg) 4.21÷4.11; m(2H;Cδ-Pro) 3.77÷3.47; q(2H;Cδ-Arg) 3.13; m(2H;C
ε-Lys) 2.78; m(14H;C β＋γ-Arg;Cβ＋γ-Pro;Cβ＋γ＋δ-Lys) 2.18÷1.28
; s(6H;C*H3COO- 及びC*H3-CO-NH)1.84.
実施例６
Ｈ−Ｇｌｙ−（Ｄ）Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＯＨ・２ＡｃＯＨ
Ａ〕 Ｚ−（Ｄ）Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ ０．５４４ｇ（１．４３mmol）と
実施例１のＤ〕の化合物０．７７２ｇ（１．３mmol）から出発して、実施例１の
Ｇ〕に記載されたように処理して、Ｚ−（Ｄ）Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−Ａｒ
ｇ（Ｐｍｃ）−ＯｔＢｕ １．２ｇを得た。
Ｂ〕 Ａ〕の化合物（１．２ｇ、１．２９mmol）をメタノール３０mlに溶解し
て、この溶液に水０．３ml中のギ酸アンモニウム０．３２５ｇ（５．１６mmol）
と新鮮Ｐｄスポンジ約０．２ｇを添加した。２時間後、触媒を濾過して溶媒を真
空下で留去した。残渣を酢酸エチル５０mlにとり、５％炭酸水素ナトリウム水溶
液で洗浄し、中性になるまで水で洗浄した。有機相を脱水して溶媒を真空下で留
去して、Ｈ−（Ｄ）Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯｔＢｕ・
ＨＣＯＯＨ１．１９ｇを得た。 Ｃ〕 Ｚ−Ｇｌｙ−ＯＨ ０．２２９ｇ（１．
４３mmol）とＢ〕の化合物１．１１９ｇ（１．２９mmol）から出発して、実施例
１のＧ〜Ｉ〕の方法により標題生成物０．２３ｇを得た。
ＨＰＬＣ： 濃度勾配（II）保持時間９．５３分、純度＞９９％
ＦＡＢ−ＭＳ： ｍ／ｚ−４５７amu 〔Ｍ＋Ｈ〕＋
1H-NMR (200MHz;DMSO): d(1H;NH-Lys) 8.12; d(0.6H;NH-Arg) 7.37; d(0.4H;N
H-Arg) 7.27; m(0.6H;Cα-Pro) 4.80; m(0.4H;Cα-Pro)4.61; m(1H;Cα-Lys) 4.
34÷4.15; q(0.6H;Cα-Arg)3.95; t(0.4H;Cα-Arg)3.81; m(2H;Cδ-Pro) 3.58÷
3.35; s(0.4H;Cα-Gly) 3.26; s(0.6H;Cα-Gly) 3.11; t(2H;Cδ-Arg) 3.05; m(
2H;Cε-Lys) 2.71; m(14H; Cβ＋γ-Arg;Cβ＋γ-Pro;Cβ＋γ＋δ-Lys) 2.11÷
1.13; s(6H;CH3COO-) 1.79.
実施例７
Ｈ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＮＨ2・３ＡｃＯＨ
Ａ〕 Ｚ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ（２．８７ｇ、５mmol）をＤＭＦ１５mlに
溶解して、次にＨＯＢＴアンモニウム塩０．８３７ｇ（５．５mmol）を添加し、
この反応混合物を０℃に冷却した。ＤＣＣ １．１３５ｇ（５．５mmol）の添加
後、反応混合物を室温にして撹拌しながら３００
分間維持した。ジシクロヘキシル尿素を濾過後、溶媒を真空下で留去し、残渣を
酢酸エチル２５mlにとり、５％炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、次に中性に
なるまで水で洗浄した。有機相を脱水し、溶媒を真空下で留去し、残渣をエチル
エーテル／ｎ−ヘキサンから結晶化させた。Ｚ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＮＨ2 ２．
８ｇを得た〔ＨＰＬＣ（２０分間でＡ中のＢ２０〜６０％の濃度勾配）：保持時
間１５．７分；純度９８％〕。
Ｂ〕 メタノール５０ml中のＡ〕の化合物１．０４５ｇ（１．８２mmol）の溶
液にＰｄ／Ｃ １５０mgを窒素下で添加し、続いて非常にゆっくりトリエチルシ
ラン２ml（１２mmol）を添加した。１２０分後、反応混合物を濾過して溶媒を真
空下で留去して、Ｈ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＮＨ2 ０．８ｇを得た〔ＨＰＬＣ（
２０分間でＡ中のＢ２０〜６０％の濃度勾配）：保持時間８．６分；純度９８．
５％〕。
Ｃ〕 Ｚ−Ｐｒｏ−ＯＨ（０．４９９ｇ、２mmol）とＢ〕の化合物（０．８ｇ
、１．８２ｍｍｏｌ）から出発して、実質的に実施例１のＧ〕に記載されたよう
に処理して、Ｚ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＮＨ2 １．２ｇを得た。この化
合物をメタノール２５mlに溶解して、１０％Ｐｄ／Ｃ １００mgを添加し、次に
トリエチルシラン１．５２ml（９．１mmol）を非常にゆっくり添加した。１３０
分後反応混合物を濾過して溶媒を真空下で留去し、Ｈ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ
）−ＮＨ2 ０．９５５ｇを得た。
Ｄ〕 Ｚ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ ０．７４５ｇ（１．９６mmol）とＣ〕の
化合物０．９５５ｇ（１．７８mmol）から出発して、Ｃ〕に記載されたように処
理してＨ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＮＨ2 １．１９ｇ
を得た。
Ｅ〕 Ｚ−Ｇｌｙ−ＯＨ ０．３８５ｇ（１．７１mmol）とＤ〕の化合
物１．１９ｇ（１．５５mmol）から出発して、実施例１のＧ〜Ｉ〕に記載された
ように処理して、粗生成物を得て、次にこれを１６×２００mmのＣＭ−５２セル
ロースカラムでのイオン交換クロマトグラフィー（pH７で酢酸アンモニウムの０
．０２５M から０．３０M の濃度勾配で２４０分で２ml/分で溶出）により精製
した。集めたフラクションをＨＰＬＣにより分析して純粋なフラクションを合わ
せて更に凍結乾燥して、標題生成物０．２８３ｇを得た。
ＨＰＬＣ： 濃度勾配（II）保持時間４．７分；純度９９．３％
ＦＡＢ−ＭＳ： ｍ／ｚ−４５６amu 〔Ｍ＋Ｈ〕＋
1H-NMR (200MHz;DMSO): d(0.2H; Nα-Arg) 8.89; m(1.8H;Nα-Lys及びNα-Arg
) 8.16÷8.03; s(0.2H;NH2-Arg) 7.77; s(0.8H;NH2-Arg) 7.76; s(0.8H;NH2-Arg
) 7.07; s(0.2H;NH2-Arg) 7.00; m(1H;Cα-Pro)4.61÷4.50; m(1H;Cα-Lys) 4.4
7÷4.34; m(1H;Cα-Arg)4.26÷4.15; m(2H;Cδ-Pro) 3.77÷3.54; s(2H;Cα-Gly
) 3.13; m(2H;Cδ-Arg) 3.06; t(2H;Cε-Lys) 2.67; m(14H; Cβ＋γ-Arg;Cβ＋
γ-Pro;Cβ＋γ＋δ-Lys) 2.12÷1.26; s(9H;CH3COO-) 1.77.
実施例８
Ｈ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｇｍ・３ＡｃＯＨ
Ａ〕 Ｚ−Ｌｙｓ−ＯＨ（０．８４ｇ、３mmol）を、１M 水酸化ナトリウム３
mlとジオキサン３mlよりなる溶液６mlに溶解して、次にエチル−チオール−トリ
フルオロアセテート０．５７ml（４．５mmol）を添加した。この反応混合物を撹
拌しながら４０℃で約７時間維持し、次に溶媒を真空下で留去し、残渣を５％炭
酸水素ナトリウム４０mlにとった。水相を酢酸エチルで洗浄し、pH２にして酢酸
エチルで抽出した。有機相を脱水して溶媒を真空下で留去して、油状物としてＺ
−Ｌｙｓ（ＴＦＡ）−ＯＨ１ｇを
得た（ＨＰＬＣ、濃度勾配（Ｉ）：保持時間１９．７分；純度９６％）。
Ｂ〕 Ｈ−Ｐｒｏ−ＯｔＢｕ−ＨＣｌ（０．２８３ｇ、１．３６４mmol）をＤ
ＭＦ／塩化メチレン（１：１）９mlに溶解した。Ａ〕の化合物（０．５６５ｇ、
１．５mmol）を同一混合物９mlに溶解し、次にＢＯＰ（０．６６ｇ、１．５mmol
）、ＨＯＢＴ（０．２０２ｇ、１．５mmol）及びＴＥＡ（０．６３ml、４．５mm
ol）を添加した。この２つの溶液を合わせて、生じた混合物を３０分間撹拌し、
次いで実施例１のＧ〕に記載されたように処理して、油状物としてＺ−Ｌｙｓ−
（ＴＦＡ）−Ｐｒｏ−ＯｔＢｕ ０．７２５ｇを得た（ＨＰＬＣ、濃度勾配（Ｉ
）：保持時間２６．１２分；純度９５．５％）。
Ｃ〕 メタノール２０ml中のＢ〕の化合物０．７２５ｇ（１．３６mmol）の溶
液に水０．１mlに溶解したギ酸アンモニウム０．２６ｇ（４．１mmol）と新鮮Ｐ
ｄスポンジ約０．２ｇを添加した。２時間後、触媒を濾過して溶媒を真空下で留
去した。残渣を酢酸エチル４０mlにとり、５％炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄
し、中性になるまで水で洗浄した。有機相を脱水して溶媒を真空下で留去して、
Ｈ−Ｌｙｓ（ＴＦＡ）−Ｐｒｏ−ＯｔＢｕ−ＨＣＯＯＨ ０．５ｇを得た（ＨＰ
ＬＣ、濃度勾配（Ｉ）：保持時間１６．２４分；純度９５％）。
Ｄ〕 Ｃ〕の化合物をＤＭＦ／塩化メチレン（１：１）１０mlに溶解した。Ｚ
−Ｇｌｙ−ＯＨ（０．２９１ｇ、１．４mmol）を同一混合物１０mlに溶解し、次
にＢＯＰ（０．６１５ｇ、１．４mmol）、ＨＯＢＴ（０．１８８ｇ、１．４mmol
）及びＴＥＡ（０．３９ml、２．８mmol）を添加した。この２つの溶液を合わせ
て、生じた混合物を６０分間撹拌し、次いで実質的に実施例１のＧ〕の方法で処
理した。有機相を脱水して溶媒を真空下で留去して油状残渣を得て、これをシリ
カゲルカラムのクロマト
グラフィー（溶離液：酢酸エチル／ｎ−ヘキサン（９：１））に付して、Ｚ−Ｇ
ｌｙ−Ｌｙｓ（ＴＦＡ）−Ｐｒｏ−ＯｔＢｕ ０．５８８ｇを得た（ＨＰＬＣ、
濃度勾配（Ｉ）：保持時間２４．５１分；純度９９．３％）。
Ｅ〕 Ｄ〕の化合物を、予め０℃に冷却した３７％ＨＣｌ １５mlに溶解した
。０℃で８分後、反応混合物を水１５mlで希釈して溶媒を真空下で留去した。残
渣を水にとり、エチルエーテルで洗浄し、凍結乾燥して、Ｚ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（
ＴＦＡ）−Ｐｒｏ−ＯＨ ０．５３１ｇを得た（ＨＰＬＣ、濃度勾配（Ｉ）：保
持時間１７．６９分；純度９５％）。
Ｆ〕 Ｅ〕の化合物（０．５３ｇ、１mmol）を酢酸エチル５mlに溶解して、Ｎ
−ヒドロキシスクシンイミド０．１３８ｇ（１．２mmol）を添加し、反応混合物
を−２０℃に冷却した。次にＤＣＣ ０．２４８ｇ（１．２mmol）を添加した。
反応混合物を室温で９０分間放置し、次に沈殿物を濾過して溶媒を留去した。Ｚ
−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（ＴＦＡ）−Ｐｒｏ−ＯＳｕ ０．６２５ｇを得た。炭酸水素
ナトリウム（０．１１５ｇ、１．０９mmol）を水２２mlに溶解し、続いて硫酸ア
グマチン（０．４９８ｇ、２．１８mmol）とＮ−メチル−イミダゾール（０．０
８７ml、１．０９mmol）を添加した。この溶液にＺ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（ＴＦＡ）
−Ｐｒｏ−ＯＳｕ ０．５７ｇ（０．９１mmol）を添加した。この反応混合物を
撹拌しながら３０分間室温で維持し、次に混合物をpH３にして酢酸エチルで洗浄
した。水相を凍結乾燥した。Ｚ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（ＴＦＡ）−Ｐｒｏ−Ａｇｍ
０．５８ｇを得た。
Ｇ〕 Ｆ〕の化合物を水３５mlに溶解して、pH１２．７になるまで１M水酸化
ナトリウムを添加した。３０分後、１M のＨＣｌによりpHを７にして、水相を凍
結乾燥した。生じた残渣を無水エタノールにとり、この塩を
濾過して、この溶液から溶媒を真空下で留去した。実施例１のＨ〕に記載された
方法で、得られた生成物を逆相置換クロマトグラフィーにより精製した。Ｚ−Ｇ
ｌｙ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｇｍ ０．２５１ｇを得た（ＨＰＬＣ、濃度勾配（Ｉ
）：保持時間１０．７７分、純度９７．５％）。
Ｈ〕 実質的に実施例１のＩ〕に記載されたように、Ｇ〕の化合物を処理した
。標題化合物０．２２９ｇを得た。
ＨＰＬＣ： 濃度勾配（II）保持時間１０．９３分；純度９８．５％
ＦＡＢ−ＭＳ： ｍ／ｚ−４１３amu 〔Ｍ＋Ｈ〕＋
1H-NMR (200MHz;DMSO): t(0.2H; Nα-Agm) 8.54; d(1H;Nα-Lys)8.10; t(0.8H
;Nα-Agm) 7.96; q(0.8H;Cα-Pro) 4.55; q(0.2H;Cα-Pro) 4.41; m(1H;Cα-Lys
) 4.28÷4.22; m(2H;Cδ-Pro) 3.75÷3.34; m(6H;Cα-Gly; C α＋δ-Agm) 3.21
÷2.93; t(2H;Cε-Lys) 2.67; m(14H; Cβ＋γ-Agm;Cβ＋γ-Pro;Cβ＋γ＋δ-L
ys) 2.11÷1.25; s(9H;CH3COO-)1.76.
実施例９
Ｈ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＯＨ・ＡｃＯＨ
Ａ〕 Ｚ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（１．４８７ｇ、３．８mmol）をＤＭＦ／
塩化メチレン（容量比１：１）１５mlに溶解して、順にＢＯＰ（１．７２ｇ、３
．８mmol）、ＨＯＢＴ（０．５２ｇ、３．８mmol）、ＴＥＡ（１．０８ml、７．
８mmol）及び同一混合物１５mlに溶解したＨ−Ｐｒｏ−ＯｔＢｕ（０．６２３ｇ
、３mmol）を添加した。この溶液を撹拌しながら１時間放置した。次に溶媒を真
空下で留去して、残渣を酢酸エチルにとり、５％炭酸水素ナトリウム水溶液、２
．５％硫酸水素カリウム水溶液で洗浄し、中性になるまで水で洗浄した。有機相
を脱水して
溶媒を真空下で留去して、残渣をエチルエーテルで粉砕してＺ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ
）−Ｐｒｏ−ＯｔＢｕ １．６ｇを得た。
Ｂ〕 Ａ〕の化合物（１．５９ｇ、２．９mmol）をメタノール２０mlに溶解し
て、生じた溶液に、水０．６mlに溶解したギ酸アンモニウム（０．７３１ｇ、１
１．６mmol）と新鮮Ｐｄスポンジ（約０．５ｇ）を添加した。２時間後、触媒を
濾過して、溶媒を真空下で留去した。残渣を酢酸エチル５０mlにとり、５％炭酸
水素ナトリウム水溶液で洗浄し、中性になるまで水で洗浄した。有機相を脱水し
て溶媒を真空下で留去して、Ｈ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−ＯｔＢｕ−ＨＣＯ
ＯＨ １．１１９ｇを得た。
Ｃ〕 Ｚ−Ｇｌｙ−ＯＨ（０．７６２ｇ、３．６４mmol）をＤＭＦ／塩化メチ
レン（容量比１：１）１５mlに溶解して、順にＢＯＰ（１．６１ｇ、３．６４mm
ol）、ＨＯＢＴ（０．４９１ｇ、３．６４mmol）、ＴＥＡ（１．０１ml、７．２
８mmol）及び同一混合物１５mlに溶解したＨ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｏｔ
Ｂｕ（１．１１９ｇ、２．８mmol）を添加した。この反応混合物をＡ〕に記載さ
れたように処理した。Ｚ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−ＯｔＢｕ １．
１６ｇを得た。
Ｄ〕 Ｃ〕の化合物（０．７４６ｇ、０．７２６mmol）を９５％ＴＦＡ水溶液
２０mlに溶解した。１時間後、反応混合物を水で希釈して、溶媒を真空下で留去
した。残渣を水にとり、エチルエーテルで洗浄して凍結乾燥した。生じた生成物
を置換逆相クロマトグラフィーにより精製した。この生成物をＴＦＡ（０．１容
量％）を含有する水溶液３mlに溶解して、予めＴＦＡ（０．１容量％）を含有す
る水で平衡化したＶＹＤＡＣ Ｃ１８カラム（２５０×１０mm）に流速０．５ml
/分で充填した。次にこのカラムを０．５ml/分で、ＴＦＡ（０．１容量％）を含
有する５０mMＢＤＨＡ−
Ｃ１水溶液で溶出した。約１時間の溶出後、置換物が溶出するまで０．５mlフラ
クションを集めた。このフラクションをＨＰＬＣにより分析して、純粋な生成物
を含有するフラクションを合わせて凍結乾燥した。Ｚ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ
−ＯＨ０．３２５ｇを得た。
ＨＰＬＣ： 濃度勾配（Ｉ）保持時間１１．４８分；純度ＨＰＬＣ＞９５％
Ｅ〕 Ｄ〕の化合物（０．３２５ｇ、０．５９mmol）を８５％ギ酸５mlに溶解
して、新鮮Ｐｄスポンジを添加した。この反応混合物を穏やかに撹拌しながら約
１時間放置した。触媒を濾過後、ギ酸を水で希釈して凍結乾燥した。この生成物
をＳ−セファロースＦ／Ｆカラム（１６×２００mm）のイオン交換クロマトグラ
フィー（pH５で酢酸アンモニウムの０．０１５M から０．１５M の濃度勾配で５
時間で３ ml/分で溶出）により精製した。集めたフラクションをＨＰＬＣで分析
して、純粋な生成物を含有するフラクションを合わせて更に凍結乾燥して、標題
生成物０．１６５ｇを得た。
ＨＰＬＣ： 濃度勾配（II）保持時間３．９７分；純度：＞９９％
ＦＡＢ−ＭＳ： ｍ／ｚ−３０１amu 〔Ｍ＋Ｈ〕＋
1H-NMR (200MHz;DMSO): d(1H; Nα-Lys) 8.17; m(1H;Cα-Pro) 4.60; m(1H;C
α-Lys) 4.14; m(2H;Cδ-Pro) 3.61; s(2H;Cα-Gly) 3.12; t(2H;Cε-Lys) 2.73
; m(10H; Cβ＋γ＋δ-Lys;Cβ＋γ-Pro)2.62÷1.40; s(3H; CH3COO-) 1.88.
実施例１０
Ｈ−（Ｅｔ）Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＯＨ・２ＡｃＯＨ
Ａ〕 実施例４のＡ〕の化合物０．４ｇを、予めクロロホルム／メタノール（
容量比９／１）で平衡化したローバー・リクロプレップＳｉ６０
（Lobar LiChroprep Si 60）カラム、40〜63μm（３１×２．５cm）のシリカゲ
ルクロマトグラフィーにより精製した。次にこのカラムを流速８ml/分で同一混
合物で溶出した。純粋な生成物を含有するフラクションを合わせて、溶媒を真空
下で留去した。Ｈ−（Ｅｔ）ＬｙＳ（Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｏ
ｔＢｕ ０．２８ｇを得た。
ＨＰＬＣ： 濃度勾配（Ｉ）保持時間２８．５分；純度＞９９％
Ｂ〕 Ａ〕の化合物（０．２８ｇ、０．３３mmol）を９５％ＴＦＡ水溶液６ml
に溶解した。７０分後、反応混合物を水で希釈して、溶媒を真空下で留去した。
残渣を水にとり、エチルエーテルで洗浄して凍結乾燥した。生成物をＣＭ−セフ
ァデックスＣ−２５（CM-Sephadex C-25）カラム（１６×２００mm）のイオン交
換クロマトグラフィー（pH６で酢酸アンモニウムの０．０２M から０．２M の濃
度勾配で２７０分で３ ml/分で溶出）により精製した。集めたフラクションをＨ
ＰＬＣにより分析して、純粋な生成物を含有するフラクションを合わせて更に凍
結乾燥して、標題生成物０．１４ｇを得た。
ＨＰＬＣ： （カラム温度：６０℃）濃度勾配（II）保持時間７．１５
分；純度＞９９％
ＦＡＢ−ＭＳ： ｍ／ｚ−４２８amu 〔Ｍ＋Ｈ〕＋
1H-NMR (200MHz;DMSO): d(1H;NH-Arg) 7.15; m(1H;Cα-Pro) 4.30; q(1H;Cα-
Arg) 3.79; m(2H;Cδ-Pro) 3.64; m(1H;Cα-Lys) 3.41; m(2H; Cδ-Arg) 3.02;
m(2H;Cε-Lys) 2.75; q(2H;CH2-Et) 2.44; m(14H;Cβ-及び Cγ-Pro，Lys 及び
-Arg，Cδ-Lys) 2.11÷1.21; s(6H;CH3COO-)1.80; t(3H;CH3-Et) 0.97,
実施例１１
（Ｅｔ）2Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＯＨ・２ＡｃＯＨ
Ａ〕 実施例４のＡ〕の化合物０．４２５ｇをメタノール７mlに溶解して、シ
アノ水素化ホウ素ナトリウム０．０６３ｇ（１mmol）を添加した。この反応混合
物を−１５℃に冷却して、アセトアルデヒド０．１５５ml（２．５mmol）を添加
した。９０分後、反応混合物から溶媒を真空下で留去して、残渣を水でスラリー
化してＨＣｌを添加してpH３にした。生じた沈殿物を濾過して、塩酸でpH３で洗
浄した。（Ｅｔ）2Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯｔＢｕ
０．４ｇを得た。
ＨＰＬＣ： 濃度勾配（Ｉ）保持時間３０．３分；純度＞９８％
Ｂ〕 Ａ〕の化合物（０．４ｇ、０．４５５mmol）を実施例１０のＢ〕のよう
に処理した。標題生成物０．１４ｇを得た。
ＨＰＬＣ： （カラム温度：６０℃）濃度勾配（II）保持時間１１．０８
分；純度＞９９％
ＦＡＢ−ＭＳ： ｍ／ｚ−４５６amu 〔Ｍ＋Ｈ〕＋
1H-NMR (200MHz;DMSO): d(1H;NH-Arg) 7.08; m(1H;Cα-Pro) 4.21; m(3H;Cα-
Arg及び Cδ-Pro) 3.98÷3.65; m(1H;Cα-Lys) 3.54; m(2H;Cδ-Arg) 3.03; m(2
H;Cε-Lys) 2.75; (2H;CH2-Et) 2.38; m(2H;CH2-Et) 2.36: m(4H; Cβ-及び Cγ
-Pro) 2.18÷1.81; s(6H;CH3COO-) 1.76; m(10H; Cβ-及び Cγ-Lys及び -Arg及
びCδ-Lys）1.74÷1.33; t(6H;CH3-Et) 0.96.
実施例１２
Ｈ−Ｇｌｙ−（Ｅｔ）Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−ＯＨ・ＡｃＯＨ
Ａ〕 実施例９のＡ〕の化合物（５．３３ｇ、１０ｍｍｏｌ）を、Ｐｄ／Ｃの
存在下で無水エタノール１３０mlに溶解した。次に無水エタノール２０mlに溶解
したアセトアルデヒド（０．７４５ml、１２mmol）を３０分で滴下して、続いて
トリエチルシラン（９．５６ml、６０mmol）を６０分で滴
下した。７５分後、触媒を濾過して、溶媒を真空下で留去した。この油状残渣を
無水エチルエーテル５０mlに溶解して、ＨＣｌで飽和した酢酸エチル３mlを添加
した。生じた沈殿物を濾過して、真空下で乾燥した。Ｈ−（Ｅｔ）Ｌｙｓ（Ｂｏ
ｃ）−Ｐｒｏ−ＯｔＢｕ−ＨＣｌ ４．２５ｇを得た。
ＨＰＬＣ： 濃度勾配（Ｉ）保持時間１９．８３分；純度＞９８％
Ｂ〕 Ｚ−Ｇｌｙ−ＯＨ（３．７８ｇ、１８mmol）をＤＭＦ１２mlと塩化メチ
レン６７mlの混合物に溶解した。この溶液を−１５℃に冷却してＤＣＣ（１．８
６ｇ、９．０３mmol）を添加した。１５分後、反応混合物を濾過して、塩化メチ
レン４０mlに溶解したＡ〕の化合物（２．８ｇ、６．０２mmol）に添加した。Ｎ
−メチル−モルホリン（０．６６ml、６．０２mmol）の添加後、反応混合物を３
５℃で６０分間維持した。溶媒を真空下で留去して、残渣を酢酸エチルにとり、
５％炭酸水素ナトリウム水溶液と２．５％硫酸水素カリウム水溶液で洗浄した。
有機相を脱水して溶媒を真空下で留去した。Ｚ−Ｇｌｙ−（Ｅｔ）Ｌｙｓ（Ｂｏ
ｃ）−Ｐｒｏ−ＯｔＢｕ３．７ｇを得た。
ＨＰＬＣ： 濃度勾配（Ｉ）保持時間２８．６０分；純度：９４％
Ｃ〕 Ｂ〕の化合物（３．７ｇ、６mmol）を９５％ＴＦＡ水溶液１５mlに溶解
した。１５分後、反応混合物をエチルエーテル中にゆっくり注ぎ入れ、生じた沈
殿物を濾過して真空下で乾燥した。Ｚ−Ｇｌｙ−（Ｅｔ）Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＯＨ
２．９ｇを得た。
ＨＰＬＣ： 濃度勾配（Ｉ）保持時間１４．９３分；純度：９４％
Ｄ〕 Ｃ〕の化合物（１ｇ、１．７３mmol）をジオキサン／０．５M水酸化ナ
トリウム水溶液（容量比１／１）６．９２mlに溶解した。この溶液を０℃に冷却
して(Ｂｏｃ)2Ｏ（０．４１５ｇ、１．９０３mmol）を添加
した。この反応混合物を室温でpH１２で４５分間維持した。溶媒を真空下で留去
して、残渣を水にとりエチルエーテルで洗浄した。水相をpH３になるまで酸性に
して、酢酸エチル３０mlで抽出した。有機相を脱水して溶媒を真空下で留去した
。Ｚ−Ｇｌｙ（Ｅｔ）Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−ＯＨ ０．９６ｇを得た。
ＨＰＬＣ： 濃度勾配（Ｉ）保持時間２３．０４分；純度９２％
Ｅ〕 Ｄ〕の化合物（０．２８１ｇ、０．５mmol）をＤＭＦ／塩化メチレン（
１：１）４mlに溶解して、ＢＯＰ（０．２２１ｇ、０．５mmol）、ＨＯＢＴ（０
．０６７ｇ、０．５mmol）、ＴＥＡ（０．２１９ml、１．５７mmol）及びＨ−Ｌ
ｅｕ−ＯｔＢｕ・ＨＣｌ（０．１１７ｇ、０．５２５mmol）を添加した。次に実
施例１のＣ〕の方法で処理した。Ｚ−Ｇｌｙ−（Ｅｔ）Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｒ
ｏ−Ｌｅｕ−ＯｔＢｕ ０．３６５ｇを得た。
ＨＰＬＣ： 濃度勾配（Ｉ）保持時間２９．８６分；純度＞９９％
Ｆ〕 Ｅ〕の化合物（０．３６５ｇ、０．５mmol）から出発して、実質的に実
施例１のＨ〜Ｉ〕に記載されたように処理して、標題生成物０．１５５ｇを得た
。
ＨＰＬＣ： 濃度勾配（Ｉ）保持時間６．３分；純度９８％
ＦＡＢ−ＭＳ： ｍ／ｚ−４４２amu 〔Ｍ＋Ｈ〕＋
1H-NMR (20OMHz;DMSO): d(1H;NH-Leu) 6.93; m(1H;Cα-Lys) 5.23; m(1H;Cα-
Pro) 4.15; m(1H;Cα-Leu) 3.84; m(6H;Cα-Gly,Cδ-Pro及び CH2-Et) 3.72÷3.
03; m(2H;Cε-Lys) 2.75; m(4H;Cβ-及び Cγ-Pro)2.17÷1.77; s(3H;CH3COO-)
1.85; m(9H;Cβ-及び Cγ-Lys及び -Leu, Cδ-Lys) 1.68÷1.05; t(3H;CH3-Et)0
.96; d(3H;CH3-Leu)0.88; d(3H;CH3-Leu) 0.86.
実施例１３
Ｈ−Ｇｌｙ−（Ｅｔ）Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｇｍ・３ＡｃＯＨ
Ａ〕 実施例１２のＤ〕の化合物（０．４２５ｇ、０．７５mmol）、Ｎ−ヒド
ロキシスクシンイミド（０．１０３ｇ、０．９mmol）、ＤＣＣ（０．１８６ｇ、
０．９mmol）から出発して、順に炭酸ナトリウム（０．０９５ｇ、０．９mmol）
、硫酸アグマチン（０．４１１ｇ、１．８mmol）及びＮ−メチル−イミダゾール
（０．０７２ml、０．９mmol）を添加して、実質的に実施例８のＦ〕の方法で処
理した。Ｚ−Ｇｌｙ−（Ｅｔ）Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−Ａｇｍ ０．５ｇを
得た。
ＨＰＬＣ： 濃度勾配（Ｉ）保持時間２０．６分；純度８５％
Ｂ〕 Ａ〕の化合物（０．５ｇ、０．７４mmol）から出発して、実施例１のＨ
〜Ｉ〕に記載されたように処理して、標題生成物０．１６９ｇを得た。
ＨＰＬＣ： カラム温度：６０℃；濃度勾配（II）保持時間１３．８７
分；純度＞９９％
ＦＡＢ−ＭＳ： ｍ／ｚ−４４１amu 〔Ｍ＋Ｈ〕＋
1H-NMR (200MHz;DMSO): t(1H;NH-Agm) 7.98; m(1H;Cα-Lys) 5.26; m(1H;Cα-
Pro) 4.15; m(10H; Cα-Gly,Cα-Agm,Cδ-Pro,Cδ-Agm及びCH2-Et) 3.65 ÷2.91
; m(2H;Cε-Lys) 2.66; m(14H; Cβ-及びCγ-Lys,-Pro 及び -Agm,及び Cδ-Lys
) 2.18÷1.16; s(9H;CH3OO-)1.76; t(3H;CH3-Et) 0.99.
実施例１４
Ｈ−Ｇｌｙ−（Ｅｔ）Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＯＨ・２ＡｃＯＨ
実施例１２のＣ〕の化合物（０．２ｇ、０．３４７mmol）から出発して、実施
例１のＩ〕に記載されたように処理して、標題生成物０．０８５
ｇを得た。
ＨＰＬＣ： （カラム温度：６０℃）；濃度勾配（II）保持時間９．３２
分；純度＞９９％
ＦＡＢ−ＭＳ： ｍ／ｚ−３２９amu 〔Ｍ＋Ｈ〕＋
1H-NMR (200MHz;DMSO): m(1H; Cα-Lys) 5.16; m(1H;Cα-Pro) 4.05; m(6H;C
α-Gly及び Cδ-Pro及び CH2-Et)3.87 ÷2.92; m(2H;Cε-Lys)2.67; m(4H;Cβ-
及び Cγ-Pro) 2.10÷l.65; s(6H;CH3COO-) 1.78; m(6H;Cβ＋γ＋δ-Lys) 1.59
÷1.24; t(1.3H;CH3-Et) 1.06; t(1.7H;CH3-Et) 1.02.
実施例１５
Ｈ−Ｌｅｕ−（Ｅｔ）Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＯＨ・２ＡｃＯＨ
Ａ〕 実施例１２のＡ〕の化合物（０．７３２ｇ、１．５mmol）を窒素下でア
セトニトリル８mlに溶解した。次にＢＳＡ ０．７３３ml（３mmol）、Ｚ−Ｌｅ
ｕ−Ｆ (L.A．Carpino，E.M.E．Mansour，D．Sadat-Aalaee，J．Org．Chem.，19
91，56，2611-2614)１．６ｇ（６mmol）及びアセトニトリル２mlに溶解したＴＢ
ＡＦ ０．０９４ｇ（０．３mmol）を添加した。この反応混合物を撹拌しながら
２４０分間室温で維持した。次に溶媒を真空下で留去して、残渣を酢酸エチルに
とり、５％炭酸水素ナトリウムで洗浄し、中性になるまで２．５％硫酸水素カリ
ウムで洗浄した。有機相を脱水して溶媒を真空下で留去し、残渣を、予めヘキサ
ン／酢酸エチル（容量比７／３）で平衡化したローバー・リクロプレップＳｉ６
０（Lobar LiChroprep Si 60）カラム、４０〜６３mm（４４×３．７cm）を使用
するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。このカラムを同一混合物で
１６ml/分で溶出した。純粋な生成物を含有するフラクションを集めて溶媒を真
空下で留去した。Ｚ−Ｌｅｕ−
（Ｅｔ）Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−ＯｔＢｕ ０．５ｇを得た。
ＨＰＬＣ： 濃度勾配（Ｉ）保持時間３１．５分；純度９４％
Ｂ〕 Ａ〕の化合物（０．５ｇ、０．７４mmol）を実施例１２のＣ〜Ｄ〕に記
載されたように処理した。Ｚ−Ｌｅｕ−（Ｅｔ）Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｏ
Ｈ ０．４３ｇを得た。
ＨＰＬＣ： 濃度勾配（Ｉ）保持時間３１．５分；純度＞９８％
Ｃ〕 Ｂ〕の化合物（０．４３ｇ、０．６９５mmol）を１，２−ジメトキシエ
タン９mlに溶解して、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（０．１２８ｇ、１．１１
２mmol）を添加し、−２０℃に冷却後、ＤＣＣ（０．２１５ｇ、１．０４２mmol
）を添加した。１５分後、反応混合物を濾過して、生じた溶液に、ＤＭＦ／０．
１５M のＫＣｌ水溶液（容量比２／１）２１mlに溶解したＨ−Ａｒｇ−ＯＨを添
加した。この反応混合物を撹拌しながら１１０分間室温で維持した。次に溶媒を
真空下で留去して、残渣を更に無水エタノールにとり、濾過した。Ｚ−Ｌｅｕ−
（Ｅｔ）Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＯＨ ０．４５５ｇを得た。
ＨＰＬＣ： 濃度勾配（Ｉ）保持時間２４．３８分；純度８４％
Ｄ〕 Ｃ〕の化合物を実施例１のＨ〕に記載されたように処理して、Ｚ−Ｌｅ
ｕ−（Ｅｔ）Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＯＨ・ＴＦＡ（ＩＴＦ１９２９）を得た
。
ＨＰＬＣ： 濃度勾配（Ｉ）保持時間１７．６３分；純度９８％
ＦＡＢ−ＭＳ： ｍ／ｚ−６７６amu 〔Ｍ＋Ｈ〕＋
1H-NMR (200MHz;DMSO): t(1H;NHε-Arg) 7.77; d(1H;NH-Leu) 7.68; m(5H;CH-アリール
) 7.37; d(1H; NH α-Arg) 7.34; m(1H;Cα-Lys) 5.15; s(2H;CH2-z) 5.03;
m(1H;Cα-Leu) 4.42; m(1H;Cα-Pro) 4.26; m(1H;Cα-Arg) 3.99; m(4H;Cδ-Pr
o及び CH2-Et) 3.68 ÷3.18; m(2H;Cδ-Arg)
3.11; m(2H; CHε-Lys) 2.74; m(17H; Cβ及び Cγ-Leu,-Lys,-Pro及び -Arg,及
び Cδ-Lys) 2.18÷1.19; t(3H;CH3-Et) 1.12; d(6H;CH3-Leu) 0.89.
Ｅ〕 Ｄ〕の化合物（０．３４１ｇ、０．４４mmol）を、実施例１のＩ〕に記
載されたように処理した。標題生成物０．０６ｇを得た。
ＨＰＬＣ： 濃度勾配（II）保持時間２９．１３分；純度９７％
ＦＡＢ−ＭＳ： ｍ／ｚ−５４１amu 〔Ｍ＋Ｈ〕＋
1H-NMR (200MHz;DMSO): d(1H;NH-Arg) 7.10; m(1H;Cα-Lys) 5.20; m(1H;Cα-
Pro) 4.19; m(1H;Cα-Arg) 3.81; m(5H;Cα-Lys,CH2-Et及び Cδ-Pro) 3.66÷3.
10; m(2H;Cδ-Arg) 3.03; m(2H;Cε-Lys) 2.74; m(17H; Cβ及び Cγ-Leu,-Lys,
-Pro及び -Arg,及び Cδ-Lys)2.10÷1.18; s(6H;CH3COO-) 1.77; t(3H;CH3-Et)
1.03; d(3H;CH3-Leu) 0.89; d(3H;CH3-Leu) 0.87.
実施例１６
Ｈ−Ｇｌｙ−（ｉｓｏＢｕ）Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＯＨ・２ＡｃＯＨ
Ａ〕 実施例９のＢ〕の化合物（２．３８ｇ、５．９５mmol）をメタノール３
４mlに溶解して、酢酸２０．４mlを添加した。この反応混合物を−２０℃に冷却
して、イソブチルアルデヒド（１．３６ml、１４．８７mmol）を滴下後、シアノ
水素化ホウ素ナトリウム（０．７４８ｇ、１１．９mmol）を添加した。この反応
混合物を撹拌しながら１００分間室温で維持した。次に溶媒を真空下で留去して
、残渣を酢酸エチルにとり、５％炭酸ナトリウム、pH２．５のＨＣｌで洗浄し、
中性になるまで水で洗浄した。有機相を脱水して溶媒を真空下で留去した。Ｈ−
（ｉｓｏＢｕ）Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−ＯｔＢｕ２．６５ｇを得た。
ＨＰＬＣ： 濃度勾配（Ｉ）保持時間２２．８５分；純度９７％
Ｂ〕 Ａ〕の化合物（２．２ｇ、４．８mmol）とＺ−Ｇｌｙ−Ｆ（４．２ｇ、
２０mmol）から出発して、実質的に実施例１５のＡ〜Ｄ〕に記載されたように操
作して、標題生成物０．２ｇを得た。
ＨＰＬＣ： 濃度勾配（II）保持時間１２．５８分；純度＞９８％
ＦＡＢ−ＭＳ： ｍ／ｚ−５１３amu 〔Ｍ＋Ｈ〕＋
1H-NMR (200MHz;DMSO): d(1H;NH-Arg) 7.09; m(1H;Cα-Lys) 5.25; m(0.3H;C
α-Pro) 4.43; m(0.7H;Cα-Pro) 4.16; m(3H;Cα-Arg及び Cδ-Pro) 3.83÷3.56
; m(2H;Cα-Gly) 3.38; m(4H;CH2-iBu及び Cδ-Arg) 3.09÷2.93; m(2H;Cε-Lys
) 2.75; m(15H; Cβ-及び Cγ-Lys,-Pro 及び -Arg,C δ-Lys及び CH-iBu) 2.13
÷1.16; s(6H;CH3COO-) 1.79; d(2.1H;CH3-iBu) 0.81; d(3H;CH3-iBu) 0.76; d
(0.9H;CH3-iBu) 0.69.
実施例１７
Ｈ−Ｇｌｙ−（ｉｓｏＢｕｔ）Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＯＨ・ＡｃＯＨ
実施例１６のＡ〕で得られた化合物（０．４５５ｇ、１mmol）とフッ化Ｚ−Ｇ
ｌｙ（０．８４ｇ、４mmol）から出発して、実質的に実施例１５のＡ〕と次に実
施例１０のＢ〕に記載されたように操作して、標題生成物０．１７２ｇを得た。
ＨＰＬＣ： （カラム温度：６０℃）、濃度勾配（II）保持時間
２３．４８分；純度＞９８％
ＦＡＢ−ＭＳ： ｍ／ｚ−３５７amu 〔Ｍ＋Ｈ〕＋
1H-NMR (200MHz;DMSO): m(1H; Cα-Lys) 5.13; m(0.3H;Cα-Pro) 4.30; m(0.7
H;Cα-Pro) 4.00; m(4H;Cα-Gly及び Cδ-Pro) 3.68÷3.31; m(2H;CH 2-iBu) 3.
03; m(2H;C-Lys) 2.81 ÷2.61; m(11H; Cβ及び Cγ-Lys及び -Pro，Cδ-Lys及
び CH-iBu) 2.05 ÷1.24; s(3H;CH3COO-)
1.86; d(2.IH;CH3-iBu) 0.82; d(3H;CH3-iBu) 0.77; d(0.9H; CH3-iBu) 0.69.
実施例１８
Ｈ−Ｇｌｙ−（Ｂｚｌ）Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＯＨ・２ＡｃＯＨ
実施例９のＢ〕の化合物（１．３６ｇ、３mmol）とベンズアルデヒド（０．５
４６ml、５．４mmol）から出発して、実質的に実施例１６のＡ〜Ｂ〕の方法によ
り、標題生成物０．３９５ｇを得た。
ＨＰＬＣ： 濃度勾配（II）保持時間２７．８５分；純度＞９９％
ＦＡＢ−ＭＳ： ｍ／ｚ−５４６amu 〔Ｍ＋Ｈ〕＋
1H-NMR (200MHz;DMSO): m(6H;CH-アリール 及び NH-Arg) 7.39 ÷6.97; m(0.7H;C
α-Lys) 5.42; m(0.3H;Cα-Lys) 4.93; m(2H;Cα-Pro及び Cα-Arg) 4.65÷4.42
; m(4H;Cα-Gly及び Cδ-Pro) 4.00÷3.43; m(2H;CH2-アリール) 3.30; m(2H; Cδ-A
rg) 3.03; m(2H;Cε-Lys)2.75; m(14H; Cβ-及び Cγ-Lys,-Pro 及び -Arg,及び
Cδ-Lys) 2.29÷1.14; s(6H;CH3COO-) 1.79.
実施例１９
Ｈ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＯＨ・ＡｃＯＨ
Ａ〕 Ｈ−Ｐｒｏ−ＯｔＢｕ・ＨＣｌ（０．３１５ｇ、１．５mmol）とＺ−Ｐ
ｒｏ−ＯＨ（０．３９７ｇ、１．５９mmol）から出発して、実質的に実施例１の
Ｃ〜Ｄ〕の方法で処理した。Ｈ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−ＯｔＢｕ ０．４ｇを得た。
ＨＰＬＣ： 濃度勾配（Ｉ）保持時間１１．３８分；純度９３％
Ｂ〕 Ｚ−Ｇｌｙ−ＯＨ（０．３３３ｇ、１．５９mmol）とＡ〕の化合物（０
．４ｇ、１．５mmol）から出発して、実質的に実施例１のＧ−Ｈ〕の方法で処理
して、Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−ＯＨ ０．６ｇを得
た。ＨＰＬＣ： 濃度勾配（Ｉ）保持時間１４．８１分；純度＞９８％
Ｃ〕 Ｂ〕の化合物を実質的に実施例１５のＣ〜Ｄ〕に記載されたように処理
した。標題生成物０．０４５ｇを得た。
ＨＰＬＣ： （カラム温度：６０℃）濃度勾配（II）保持時間１２．０６
分；純度＞９８％
ＦＡＢ−ＭＳ： ｍ／ｚ−４２６amu 〔Ｍ＋Ｈ〕＋
1H-NMR (200MHz;DMSO): d(1H;NH-Arg) 7.34; m(0.2H;Cα-Pro) 4.73; m(0.8H;
Cα-Pro) 4.61; m(0.2H;Cα-Pro) 4.39; m(0.8H;Cα-Pro) 4.33; m(7H;Cα-Arg
及び -Gly,及び2Cδ-Pro) 3.83÷3.26; m(2H;Cδ-Arg)3.00; m(12H; Cβ-及び C
γ-Pro及び -Arg) 2.22 ÷1.26; s(3H;CH3COO-) 1.83.
本発明の化合物が、免疫調節、心臓血管及び抗炎症活性を有することが示され
た。特に、これらは敗血症性ショックに対する治療薬として有用であることが示
された。この活性は、下記の薬理学的試験により測定した。
体重２０〜２２ｇのＢＡＬＢ／ｃ系雌性マウスに、生理溶液０．５ml中のＬＰ
Ｓ（リポ多糖・血清型０１２７：Ｂ８、シグマ(Sigma)）１mg/マウスを腹腔内に
接種した。次にマウスを１０匹ずつの群に分けて、ＬＰＳ投与の２０及び１２０
分後、各群に本発明の幾つかの代表化合物６２．５μg/マウスを腹腔内に接種し
た。マウスの１群はＬＰＳのみで処理してこれを対照とした。
少なくとも４日間マウスをモニターした。
結果を下記の表に記載した。
麻酔したラットの左冠動脈の閉鎖により誘導された虚血後の心臓保護作用を評
価することを目的とする試験を、実質的にC．Clarkら、Journ．Exp．Methods，3
，357，1980 に記載されたように行い、本発明の化合物の心臓血管作用を検討し
た。冠動脈の閉鎖は、とりわけ低酸素血症、不整脈を含む心電図のパターンを変
化させる多くの事象を引き起こし、最終的に実験動物の死を引き起こすことは公
知である。
この試験では、１２匹ずつの群に分けたチャールズ・リバー(Charles River)
雄性ラットをネンブタール（６５mg/kg 腹腔内投与）で麻酔して、心電図を連続
的にモニターするため心電計を接続した。次にラットを開胸して、心膜の切開後
、縫合糸を左冠動脈の周りに回して元の所に近付けた。１０分の回復後、心電図
の変化が記録されなければ、ラットに食塩水に溶解又は懸濁した予め決定された
用量の本発明の化合物を静脈内投与した。１群のラット（対照）には食塩水を静
脈内投与した。５分後、左冠動
脈を結紮して結紮を３０分間続けた。
代表的実験において、用量０．４μg/kgでさえ、心室性頻脈（ＶＴ）、心室細
動（ＶＦ）及び死亡率の有意な低下が観察された。特に、実施例４の化合物を３
μg/kgで投与した時、結紮から最初の１８分間における死亡率が、対照に比べて
約８０％低下し、またＶＴとＶＦが約５０％減少した。
本発明の目的はまた、免疫調節剤としての、及び心臓血管系及び炎症性疾患の
治療における新規オリゴペプチドの用途であり、この医薬組成物を含むこの用途
に関連した全ての工業的側面に関する。このような医薬組成物の例は、錠剤、糖
衣錠、フィルムコーティング錠、シロップ剤及びバイアル瓶（経口投与及び筋肉
内又は静脈内投与の両者に適している）である。このような組成物は、活性成分
を単独で、又は一般的な薬学的に許容しうる担体及び賦形剤と組合せて含有する
。
活性成分の用量は、治療上の必要に応じて１日に１回又は数回投与することの
できる使用化合物に応じて、広い範囲で変化しうる。
【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項
【提出日】１９９５年１０月１６日
【補正内容】
明細書
Ｃ反応性タンパク質断片から誘導されたオリゴペプチド
本発明はＣ反応性タンパク質（本明細書ではＣＲＰ）の断片から誘導されたオ
リゴペプチド、及び免疫調節剤としてのその用途、更に心臓血管系及び炎症性疾
患の治療におけるその用途に関する。
ＣＲＰは、一般にその血中濃度の非常に低いタンパク質であり、この濃度は炎
症の過程により２，０００倍ほどまで上昇する〔J.J．Morley 及びI．Kushner，
Am．N.Y．Acad．Sci.，389，406-418(1989)〕。F.A．Robeyら（J．Biol．Chem.
，262，No．15，7053-7057（1987））は、タフトシンの配列に非常に類似した３
つのＣＲＰテトラペプチド配列を開示している。この化学合成されたテトラペプ
チドは、貧食細胞性白血球とスーパーオキシドの産生を刺激し、タフトシン同様
に単核細胞を誘導してインターロイキン１を産生させる。タフトシンのように、
３つのＣＲＰテトラペプチドは in vivoでプロテアーゼにより迅速に代謝されて
不活化される。
驚くべきことに、このＣＲＰテトラペプチド断片の化学的に修飾されたアナロ
グが、免疫調節活性を有し、かつ心臓血管系及び炎症性疾患の治療、例えば、敗
血症性ショックの治療において有用であることが認められている。
したがって、本発明は、式（Ｉ）：
Ａ1−Ａ2−Ａ3−Ａ4 （Ｉ）
〔式中、Ａ1は、トレオニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、サルコシン、
アラニン、グリシン及び(Ｃ2-6)アシル−グリシンよりなる群から選択されるア
ミノ酸残基であるか、又は存在せず；
Ａ2は、少なくとも１つの(Ｃ1-6)アルキル、ベンジル又は(Ｃ2-6)アシル基によ
りＮα−置換されているロイシン、イソロイシン、バリン、リシ
ン、オルニチンよりなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ａ3は、プロリン、ロイシン、イソロイシン及びバリンよりなる群から選択され
るアミノ酸残基であり；
Ａ4は、場合によりＣ末端位でアミド化されているアルギニン、ロイシン及びグ
ルタミンよりなる群から選択されるアミノ酸残基であるか、又はアグマチン残基
であるか、又は存在しない（但し、Ａ1、Ａ2及びＡ4のただ１つのみが存在しな
いことができ；該化合物は、上記アミノ酸残基及びアグマチン残基の側鎖基が、
場合により(Ｃ1-6)アルキル、ベンジル又は(Ｃ2-6)アシルよりなる群から選択さ
れる１つ以上の基により置換されていてもよいことを更に特徴とし；そして該ア
ミノ酸残基のそれぞれは、Ｃα位でＤ−又はＬ−型であるか、あるいは可能なジ
アステレオマー又はエナンチオマーの１つの型であってもよい）〕で示されるオ
リゴペプチド、及びその薬学的に許容しうる酸又は塩基との塩に関する。
本発明の化合物の好ましい群は、Ａ1が、グリシン、トレオニン、ロイシン、
イソロイシン、バリン、サルコシン、アラニン、(Ｃ2-6)アシル−グリシンより
なる群から選択されるアミノ酸残基であるか、又は存在せず；Ａ2が、(Ｃ1-6)ア
ルキル、ベンジル又は(Ｃ2-6)アシル基によりＮα−置換されているリシンより
なる群から選択されるアミノ酸残基であり；Ａ3が、プロリンであり；Ａ4が、場
合によりＣ末端位でアミド化されているグルタミン、ロイシン、アルギニンであ
るか、又はアグマチン残基であるか、又は存在しない（該化合物は、該アミノ酸
残基及びアグマチン残基の側鎖基が、場合により(Ｃ1-6)アルキル、ベンジル又
は(Ｃ2-6)アシルよりなる群から選択される１つ以上の置換基により置換されて
いてもよいことを更に特徴とし；そして該アミノ酸残基のそれぞれは、Ｃα位
請求の範囲
１．式（Ｉ）：
Ａ1−Ａ2−Ａ3−Ａ4
〔式中、Ａ1は、グリシン、トレオニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、サ
ルコシン、アラニン、(Ｃ2-6)アシル−グリシンよりなる群から選択されるアミ
ノ酸残基であるか、又は存在せず；
Ａ2は、少なくとも１つの(Ｃ1-6)アルキル、ベンジル又は(Ｃ2-6)アシル基によ
りＮα−置換されているロイシン、イソロイシン、バリン、リシン、オルニチン
よりなる群から選択されるアミノ酸残基であり；
Ａ3は、プロリン、ロイシン、イソロイシン及びバリンよりなる群から選択され
るアミノ酸残基であり；
Ａ4は、場合によりＣ末端位でアミド化されているアルギニン、ロイシン及びグ
ルタミンよりなる群から選択されるアミノ酸残基であるか、又はアグマチン残基
であるか、又は存在しない（但し、Ａ1、Ａ2及びＡ4のただ１つのみが存在しな
いことができ；該化合物は、該アミノ酸残基及びアグマチン残基の側鎖基が、場
合により(Ｃ1-6)アルキル、ベンジル又は(Ｃ2-6)アシルよりなる群から選択され
る１つ以上の置換基により置換されていてもよいことを更に特徴とし；そして該
アミノ酸残基のそれぞれは、側鎖を有する炭素原子でＤ−又はＬ−型であるか、
あるいは可能なジアステレオマー又はエナンチオマーの１つの型であってもよい
）〕で示されるオリゴペプチド、及びその薬学的に許容しうる酸又は塩基塩。
２．Ａ1が、グリシン、サルコシン、アラニン、(Ｃ2-6)アシル−グリシンよりな
る群から選択されるアミノ酸残基であるか、又は存在せず；Ａ2が、リシン、及
び場合により(Ｃ1-6)アルキル、ベンジル又は(Ｃ2-6)ア
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(51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ
Ａ６１Ｋ 38/16 ＡＥＤ Ａ６１Ｋ 37/04 ＡＢＥ
Ｃ０７Ｋ 5/083 ＡＥＤ
(81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，
ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ
Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ
，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，
ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，
ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，Ｇ
Ｂ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ
，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，
ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，Ｓ
Ｋ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ
(72)発明者 マルクッチ，ファブリッツォ
イタリア国、イ―20099 セスト・エッ
セ・ジオヴァンニ、ヴィア・ジ・カルドゥ
ッシ、125
(72)発明者 グローモ，ジャンニ
イタリア国、イ―20099 セスト・エッ
セ・ジオヴァンニ、ヴィア・ジ・カルドゥ
ッシ、125
(72)発明者 マスカーニ，パオロ
イタリア国、イ―20099 セスト・エッ
セ・ジオヴァンニ、ヴィア・ジ・カルドゥ
ッシ、125
(72)発明者 ビノリ，マッシモ
イタリア国、イ―20099 セスト・エッ
セ・ジオヴァンニ、ヴィア・ジ・カルドゥ
ッシ、125
(72)発明者 カペレッティ，シルヴァーナ
イタリア国、イ―20099 セスト・エッ
セ・ジオヴァンニ、ヴィア・ジ・カルドゥ
ッシ、125