JPH03136640A - 内皮細胞の取得、沈積キット及び内皮細胞の取得、沈積方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 自己の静脈は移植が可能であるが、最近の症状の進んだ
血管の病気と従来の外科的介入では自己移植の可能性に
限界があった。交換が不可能な時には、人工移植組織の
使用は、虚血性部分への血液流を回復させる手段を提供
する。

市販されている移植組織は生来の血栓形成により理想的
とはいえない。血管移植組織の表面に並んだ機能的内皮
細胞の移植は開通度を増加させ、動物モデルの流れ表面
の血栓形成を減少させることを証明した。

過去および現在の研究の焦点は静脈断片からの大血管内
皮細胞の分離そしてそのあとのこれら細胞を移植ａｍ管
腔表面に接種することにある。組織培養の進歩はまた人
工血管上に高密度で接種する多数の内皮細胞の発生を可
能にした。

これらの技術は臨床で定着するには多くの欠点を有して
いる。

内皮細胞化は、低密度接種技術が適用された時に徐々に
起きる。培養した内皮細胞を使用した高密度接種は不確
定な媒質を使用することが必要となるが、それは安易に
臨床に定着させることはできない。

大血管内皮細胞を人工の移植組織に接種する場合の問題
を克服するために、自己の脂肪組織から微小血管内皮細
胞を分離し、ついで人工血管の高密度接種をおこなう方
法が開発された。

微小血管内皮細胞は血液接触表面の内皮化が可能なよう
に見えるが、準備、された手術室でこれらの細胞の取得
と沈積はかなり難しい。最近使用された方法は標準的設
備、すなわちビーカー　フラスコ、遠心分離チューブ、
振とう浴、ピペット、注射器、無菌フード等を用いてい
る。例えば、ウィリアム（Ｗｉｌｌｉａｍ）とジャレル
（Ｊａｒｒｅｌｌ）の特許節４．８２０，６２６号と関
連技術、移植組織表面を内皮゛細胞で処理する方法が開
示されている。これらの方法によれば皮下の脂肪組織は
カニユーレを介して吸引され、真空により粘液トラップ
に運ばれる。そしてトラップは次の工程のために無菌フ
ードに移される。脂肪組織は無菌ビーカ中におかれた漏
斗内のふるいへ移される。そして洗浄溶液は赤血球およ
び溶解した脂肪を除去するために組織に注がれる。組織
は手作業で、コラゲナーゼ溶液を含んだ無菌エルレンマ
イヤーフラスコに注がれ、３７℃で２０分間攪拌した。

コラゲナーゼスラリーは手作業で、無菌円錐遠心分離チ
ューブに注がれ７００ｘＧで７分間回転される。その後
内皮細胞はピペットでチューブから取り出される。移植
組織は雄のルーア−（ｌｕｅｒ）延長部分に縛り付けら
れチューブ内に固着された。細胞は血清蛋白培養液に再
び懸濁され、注射器に入れられる。針と注射器を使用し
て細胞は移植組織の管腔に押し込まれる。移植組織は手
で２時間回転される。このような進歩にかかわらず、準
備された手術室において、移植組織上に内皮細胞コーテ
ィングを製造する簡単で信頼性のある方法が必要とされ
る。

本発明は、その移植組織を受ける患者から採取した微小
血管内皮細胞を使用して内皮移植組織組織を製造する簡
単で信頼性のあるキットを提供するものである。このキ
ットは、キットのコンポーネント内ですべて、しかもそ
れが維持された状態で、ヒトの脂肪から内皮細胞を分離
し、その脂肪に細胞沈積生成物を生成するように処理し
、その生成物を移植組織の表面に沈積させるよう設計さ
れている。キットはコンタミネーションの可能性を少な
くし仕事量を少なくし使用者のエラーを少なくするため
に閉鎖システムとなっている。　従って、本発明の第１
の目的はヒトに移植するための内皮移植組織を生成する
ためのキットの提供である。

本発明の他の目的は、移植可能な内皮血管移植組織を生
成するために要求される処理工程の間、採取された自己
の内皮細胞の無菌状態を確立し維持するシステムの提供
である。

本発明のこれらの及び他の目的は、以下のさらに詳細な
記載および添付図面中の特定の実施例で明らかになるで
あろう。

本発明の好適方法によると、変更された脂肪吸引テクニ
ックを用いて皮下脂肪は患者から取り除かれ、脂肪が必
要とされるまで、脂肪を一時保存するための独立した閉
鎖装置へ移される。

脂肪は無菌的に消化装置に運ばれる。そこでは初め自動
的に洗浄して赤血球と他の汚物が取り除かれ、続いて制
御されたコラゲナーゼ消化が３７℃で２０分間なされる
。

そして脂肪スラリーは再び、内皮細胞分離装置に運ばれ
、そこで内皮組繊細胞が分離装置内で沈積し、自動的に
分離内皮細胞の回復をする。そして細胞懸濁液は、、細
胞が移植組織表面上に迅速に濾過される処理ユニットに
無菌的に運ばれる。

ここで記載のキットを完全に使用するには内皮細胞分離
と沈積工程に約４０分だけ必要である。インキュベーシ
ョン期６１１に続いて移植組織は患者に移植準備可能と
なる。キットとすでに行われている方法を比較するため
に、分離内皮細胞の数と移植組織表面への細胞の沈積に
ついて同等性と再生可能性が観察された。システムは、
その後の高密度接種（脂肪５０ｃｃｓ当たり５．１４Ｘ
１０６から４．２４Ｘ１０’細胞の範囲）と移植組織表
面への付着を可能とする。十分な数の内皮細胞生成物を
与える。キットは細胞を一貫して移植組織の全長と直径
に沿って付着する。

変動の分析により比較した結果細胞濃度にたいした重要
な違いはなかった。キットの重要な利点は１）閉鎖され
た、無菌液路、２）最小限度の利用者入力、３）手術室
環境の適合性、４）患者から患者へ高再生可能な工程に
対する条件の最適性である。

システムは５つの主要なサブシステムからなっている。

１）脂肪収集ユニット（第１図を参照）２）消化ユニッ
ト（第２図を参照）３）内皮細胞分離ユニット（第３図
を参照）４）血管移植工程ユニット（第４図をり照）５
）内皮細胞沈積ユニット（第４図を参照）。

脂肪収集ユニット（第１図）は患者から皮下の脂肪組織
サンプルを収集する。コンポーネントは、流入チューブ
（１２）、脂肪収集装置（１４）、真空チューブ（１５
）、吸引カニユーレ（１ｏ）及び吸引ポンプ（１８）を
含む。吸引ポンプ（１８）は患者からの皮下脂肪組織を
カニユーレ（１０）と流入チューブ（１２）を通して脂
肪収集装置（１４）に吸引するのに用いる。

脂肪収集装置は第５図に示されている。頂部にある２つ
の真空ラインポート（５９と６１）を有する円筒形のチ
ャンバー（５４）と２方向止栓（６２）に底部が連結さ
れた出口ポート（６ｏ）からなる。プランジャーロッド
（５７）はチャンバーの頂部を通って、注射器様ストッ
パー（５６）に連結されている。ストッパーは２つのホ
ールを付しており、真空ラインポート（５９と６１）が
そのホールを通っている。プランジャーが「下」の位置
にある時はフレキシブルゴム製の隔膜（５８）はストッ
パーの底部とホールをカバーする。プランジャーがｒ上
」の位置にある時はゴム製の隔膜（５８）はストッパー
の底から真空ラインポート（５９と６１）により押し上
げられる、このようにしてチャンバー内部と真空ライン
（１２と１５）との間を連通させる。装置を使用するた
めには、それをエルボ−コネクター（６３と６５）を使
用して脂肪吸引システムの真空ラインに置かなければな
らない。加えてプランジャーロッドはｒ上」の位置にな
ければならない。脂肪吸引の間、装置は脂肪組織の捕獲
トラップとして働く。適当量の脂肪が集まった後、真空
ライン肘型コネクター（６３と６５）は連結が解かれ、
プランジャーロッド（５７）は引き下げられる。ゴム製
の隔膜（５８）は脂肪組織を出口ポートの外に押し出す
時ストラバーの底をカバーしシールするオリジナル位置
にある。この装置は２つの機能がある。、脂肪を集め、
容易に消化ユニットに運ぶ。　消化ユニット（第２図）
は脂肪組織サンプルを洗浄液で洗浄し、それを酵素コラ
ゲナーゼで消化する。コンポーネントは、消化装置（１
６）、廃物入れ（３２）、内皮細胞分離装置（３０）、
消化スタンド（１７）、コラゲナーゼ溶液■バッグ／セ
ット（２０と２２）、洗浄溶液■バッグ／セット（２１
と２４）、温度と流体移送をコントロールするためのコ
ントロールボックス（２７）およびチューブコネクター
、エアーフィルター、バルブに分類されるシステム真空
源を含む。

含む。

脂肪組織は手動で密閉ラインを通って脂肪収集装置（１
４）から消化装置（１６）に運ばれる。脂肪組織はそこ
で洗浄溶液■バッグ／セット（２１と２４）からチャン
バーに導入された洗浄液で洗浄される。洗浄液は洗浄が
終了した後チャンバーから廃液入れ（３２）に排出され
る。ついで、コラゲナーゼ溶液はコラゲナーゼ溶液■バ
ッグ／セット（２０と２２）から消化装置（１６）に運
ばれる。コラゲナーゼ溶液による脂肪組織の消化は、混
合物が濾過空気で攪拌され３７℃に加熱される間に起こ
る。消化された脂肪組織とコラゲナーゼ溶液との混合物
は次の工程のために真空輸送で内皮細胞分離装置（３０
）に運ばれる・消化装置は第６図に示されている。それ
は頂部に数個の入口ポート（６６，６７，６８，６９，
７０）を何するチャンバー（６４）からなり、その内の
１つはフィルターを含み、それはチャンノく−の底部付
近で終わるチューブ（７２）に接続している。一連の「
フィンガーＪ　　（７４）はチューブの頂部に放射状に
結合されている。チャンノ（−の底には円錐形のメツシ
ュフィルター（７６）、その下には２つの出口ポート（
８０と８２）及び温度プローブシース（７８）がある。

使用の間、収集された脂肪組織は、頂部入口ポート（６
６）の１つを通りチャンバー（６４）に導入され、つい
で洗浄液（（メディア（Ｍｅｄ　ｉ　ａ）１９９Ｅ。

ハンクス（Ｈａｎｋｓ）、サリン（ｓａｌｉｎｅ）ピー
ビーニス（Ｐ　Ｂ　Ｓ）または生理的ノ（・ソファ−溶
液）が他の入口ポート（６７）を通って導かれる。他の
入口ポート（６８）に連結している真空ラインは濾過空
気を中央口ポート（６９）とチューブ（７２）を通って
入れ、そこでは脂肪混合物を掻き回すように空気の泡が
出ている。「フィンガーＪ　　（７４）は、均一な攪拌
となるように気泡を分布させ、脂肪を容易に破壊する摩
擦表面を提供するのに役立つ。次に洗浄液はメツシュの
底を通って、血液に比較的フリーな脂肪組織を後に残し
て出口ポー）　（８０）の１つを通って出される。消化
酵素溶液（コラゲナーゼ、ディスバーゼ（ｄｉｓｐａｓ
ｅ）、）リブシンまたは他の組織分離酵素）は他の頂部
の入口ポー）（７０）を通って導かれ、ついで、気泡に
よって攪拌される。

この工程を通して、プローブシース（７８）の中の温度
プローブ（７９）は工程の温度をモニターし、コントロ
ールボックス（２７）内の外部熱コントローラーにフィ
ードバックする。消化が完了した時、微小血管内皮細胞
に富んだ消化した脂肪溶液は底のメツシュを通り、次の
処理のために出口ポート（８２）を通して出される。メ
ツシュ（７６）は未消化組織物質および装置に捨てられ
た大きな繊維状物質を捕らえる。この装置は密閉系であ
りコンタミネーションの可能性を減らし、労働力と使用
者のエラーを減少する。

内皮細胞分離ユニット（第３図参照）は消化された脂肪
組織サンプルから内皮組繊細胞を分離し隔離する。コン
ポーネントは遠心分離機（３３）、遠心分離機シールド
（３１）、内皮細胞分離装置（３０）を含んでいる。内
皮細胞分離装置（３０）は遠心分離シールドに入れられ
、その両方ともが遠心分離機（３３）に入れられる。遠
心分離機は内皮細胞を分離する。そして内皮細胞分離装
置（３０）は血管移植工程ユニットのラインに置かれ、
内皮細胞沈積ユニットに搭載される。

内皮細胞分離装置は第７図に示される。それは第２のチ
ャンバーの方言い換えれば入り口と出口ポート（９２と
９４）を有したアンプル（９０）の方に先が細くなって
いる第１のチャンバー（８８）からなっている。両方の
ポート（９２と９４）を有したラインには２位置バルブ
（９１と９３）がある。第１の位置は第１と第２のチャ
ンバーの間を連絡する。第２の位置は第２のチャンバー
と外側のポートの間を連絡する。それぞれのバルブ（９
１と９３）は最初節１の位置に回される。消化された脂
肪組織は頂部ポート（８４）を通って導かれる。そして
装置は遠心分離機に入れられ、回転される。遠心分離は
、アンプル（９ｏ）中に内皮細胞を分離する。その分画
は内皮細胞のｒペレットＪを最適に２つのポート間で分
離するために最適化される。バルブは次に前記第１のチ
ャンバー（８８）から「ベレット」を分離する第２の位
置に回され、以下の赤血球が充填される。

内皮細胞「ベレット」は、入口ポート（９２）への高圧
ラインの接触または出口ポート（９４）への真空ライン
の接触によってフラッシングされる。

この装置は無菌状態を維持し労働と使用者のエラーを減
少させる密閉システムである。

第４図に示される血管移植組織工程ユニットは無菌状態
を守り、維持して、処理し、あらかじめ濡らしおよび細
胞沈積している間、移植の処理を容易にする。コンポー
ネントは内側と外側のチューブ（４６）を含むプロセス
チューブアセンブリ、移植組織、真空ライン／トラップ
アセンブリ（４４）　、渦巻き／メツシュアセンブリ（
３４）、自己の血清／培養溶液■バッグ／セット（３６
と３８）を含む。プロセスチューブアセンブリの内側チ
ューブ内に移植組織が置かれる。外側チューブの目的は
内側チューブの無菌状態を維持することにある。移植組
織は■バックからの自己の血清／培養溶液を塗布するこ
とにより細胞沈積の前に予め濡らされる。■バックから
の自己の血清／培養溶液は、すべての空気がプロセスチ
ューブのアセンブリの内側チューブから浄化されるまで
、渦巻き／メツシュアセンブリを通り、移植組織の管腔
内に入り、移植組織壁をとおって外にでるように引かれ
る。移植組織プロセスユニットは次に内皮細胞沈積ユニ
ットに運ばれる。

十分に組み立てられたプロセスチューブは第８図に示さ
れている。２つの大きなアセンブリからなる：内側プロ
セス製造チューブ（１００）と外側プロセスチューブ（
１１２）（第９図参照）。

第１０図に示すように内側プロセスチューブは以下のサ
ブアセンブリからなる：ベントキャップ（１０４）、ハ
ンドルキャップ（１０８）、内側プロセスチューブ本体
（１０２）　　トネラー（ｔｕｎｎｅｌｅｒ）（１１０
）、）ネラーティツブ（ｔｕｎｎｅｌｅｒ　　ｔｉｐ）
（１０６）。

移植組織はトネラー（１１０）の管腔を通され、組み立
てる前にハンドルキャップ（１０８）に付着される。第
１１図に示すように、外側プロセスチューブは以下のサ
ブアセンブリからなる：外側プロセスチューブ本体（１
１３）、流入エンドキャップ（１１６）、流出エンドキ
ャップ（１１４）。全アセンブリ形においてプロセスチ
ューブアセンブリは以下の機能を持つ二手術室における
輸送、処置の間、それは収納し、保護し、移植組織の無
菌状態を維持する。それは移植組織を支持し、内皮化の
間、流体が移植組織管腔に近づくのを許す。；それはサ
ブアセンブリにわけることができ、これは内皮ライニン
グを保護する一方、移植を容易にする。内皮化の間、流
入エンドキャップ（１１６）は内皮細胞懸濁液のコンテ
ナーに接続されており、そして、流出エンドキャッブ（
１１４）は、コントロールボックス（２７）の真空源に
接続されている。ホールの多い移植組織に対する外部の
負圧は内皮細胞懸濁液を移植組織管腔内へ流入させ、壁
を通って流出させ、それによって移植組織内壁上で内皮
細胞を濾過している。濾過した溶液はトネラー壁（１１
０）のホール（１１１）を通って絶え間なく流れ、ベン
トキャップ（１０４）から外へ出る。この操作の間、回
転継手を外側プロセスチューブのエンドキャ・ツブの所
に加えることにより、装置はその中心軸のまわりを回転
される。内皮細胞化が終了した後、内側プロセスチュー
ブ（１００）は外側プロセスチューブ（１１２）から取
り除かれ、ノ１ンドルキャップ（１０８）／トネラー（
１１０）／ティップ（１０６）アセンブリは内側プロセ
スチューブ本体（１０２）から除かれる。移植組織は例
えば、移植組織に接触したり乱すことなく、好ましい移
植配置となるように患者の足の組織に突き刺す。

−度位置決めされるとハンドルキャップ（１０８）はト
ネラー（１１０）から離され、トネラー（１１０）は、
末梢吻合のための移植組織を残して外される。外科での
配置の間は、自己の血清培養を含む■ラインは、移植管
腔の湿り気を維持するために、ハンドルキャップ（１０
８）に連結しても良い。末梢吻合が終了した時、移植組
織は近位の端を切られ、ハンドルキャップ（１０８）か
ら緩められ、近位の端の吻合のためにそれを準備する。

第４図に示されている内皮細胞沈積ユニットは、移植組
織管腔に内皮細胞の沈積を促進させる。コンポーネント
は以下のものを含んでいる。：プロセスチューブ回転取
り付は具（４８）、絶縁されたトラフ（５０）　、加熱
パッド（５２）、ウォーターサーキュレータ−／ヒータ
ー（５３）。プロセスチューブアセンブリ（４６）は絶
縁されたトラフ内の回転取り付は以上に位置しウォータ
ーサーキュレータ−により加熱される加熱パッドに包み
こまれている。細胞沈積手順は、自己の血清／培養溶液
と内皮細胞分離装置（３０）からの分離された内皮細胞
とを真空で引く方法により開始される。内皮細胞と自己
の血清／培養溶液は、内皮細胞ベレットを破壊し荒い粒
子をフィルターで取る渦巻き／メツシュアセンブリを通
る。溶液で再び懸濁された内皮細胞は移植組織の管腔に
圧入される。移植組織は管腔壁に内皮細胞を残して溶液
を濾過する。圧入されている間、および次の細胞−移植
組織結合の間、移植組織は一定割合で３７℃で中心軸の
まわりを回転される。

補助部品は次のものを含む：血液収集と血清分離に使用
されるべき抗凝血剤を用いていない血液収集バッグと輸
液バッグ、自己の血清／培養溶液および自己の血清／培
養溶液で満たされた追加溶液■を作るために使用される
血清ならびに移植の間、細胞を維持するのに使用される
管理セット。

実施例１ キットと本発明方法を使用して、微小血管内皮細胞は分
離され、４＋ｎＸ８０ｃ＋ｎの大きさの、海綿状ポリテ
トラフルオロエチレン（ｅＰＴＦＥ）移植組織上に沈積
された。２時間回転後、移植組織は培養液で洗浄され８
セクシヨンにカットされる。

Ｐｌは細胞が導かれる所であり、Ｐ８は反対側端である
。移植組織片はヘマトキシリンで染色され、自動イメー
ジ分析システムを使用して細胞がカウントされた。第１
２図はゴーテックス（Ｇｏｒｅ−Ｔｅｘ、）管状移植組
織についてセクションごとに測った平均細胞密度を示し
たものである。

実施例２ キットを使用して内皮細胞生成物が調整されｅＰＴＦＥ
移植組織上に沈積された。移植組織上に沈積した微小血
管内皮細胞の走査型電子顕微鏡図が第１３図に示されて
いる。細胞濃度に大きな変化なしに移植組織の全長にわ
たり内皮細胞生成物が確実に沈積された。

以上より微小血管内皮細胞を使用して簡単で信頼のある
内皮化移植組織製造キットが提供される。

これらの細胞は移植を受ける患者から取得され、すべて
、しかもそれが維持されたキットのコンポーネント内で
、細胞沈積生成物を製造するために、それらの細胞を分
離し、その生成物を移植組織表面上に沈積するためのキ
ットを使用することにより処理される。

以上の記述は本発明の最適実施例のキットについて述べ
ているが、この分野における当業者は本発明の特許請求
の範囲において特に規定した本発明の物と製造方法の範
囲を逸脱することなく、種々の変更がなされることを認
識できるであろう。

【図面の簡単な説明】

第１図は、最後に収集装置に集められる微小血管内皮細
胞を含む脂肪を、移植を受ける患者から収集するために
用いられる脂肪収集ユニットの概略図である。 第２図は第１図の脂肪収集ユニットの脂肪収集装置と連
結して示され、第２図で示す内皮細胞分離装置に運ばれ
る消化物を生成する消化ユニットの概略図である。 第３図は内皮細胞分離ユニットの図である。 第４図は、内皮細胞生成物を生成し、その生成物を血管
移植組織に沈積させるために運ばれるコンポーネントと
して図示されている血管移植組織処理ユニットおよび内
皮細胞沈漬ユニットのしである。 第５図は、第１図の脂肪収集装置の拡大断面図である。 第６（ａ）図は第２図の消化装置の拡大縦断面図である
。 第６（ｂ）図は第２図の消化装置の拡大底面図である。 第６（Ｃ）図は第２図の消化装置頂端を示す拡大図であ
る。 第７（ａ）図は第２図の内皮細胞分離装置の拡大正面図
である。 第７（ｂ）図は第２図の内皮細胞分離装置の拡大側面図
である。 第８図は内皮細胞沈積ユニットの中にあって、内皮細胞
生成物を移植組織管腔の内部表面に導入するための第４
図のプロセスチューブアセンブリの断面図である。 第９図は第８図に示す血管移植組織処理ユニットの内側
及び外側プロセスチューブの拡大断面図である。 第１０図は第９図の内側プロセスチューブのコンポーネ
ントの拡大側面図である。 第１１図は第９図の外側プロセスチューブのコンポーネ
ントの拡大側面図である。 第１２図は本発明の最適キットおよび従来方法技術を使
用して処理された移植組織について、処理され移植組織
のセクションごとに測った平均内皮細胞密度を示す棒グ
ラフである。 第１３図は本発明の好適キットを使用して処理した移植
組織の走査電子顕微鏡図である。 図面のにコ（内容に変更なし）

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. （１）無菌状態に維持されたキットのコンポーネント内
   で、患者から脂肪を収集し、収集した脂肪を処理して内
   皮細胞沈積物を生成し、内皮細胞沈積物を移植組織表面
   に沈積させる内皮細胞取得、沈積キットにおいて、 患者から脂肪を収集する脂肪収集手段と、 脂肪収集手段に接続可能であり、脂肪を受けている間は
   無菌状態に維持され、脂肪を無菌状態に維持したまま脂
   肪の洗浄及び消化を行って消化物を生成する消化手段と
   、 消化手段に接続可能であり、消化物の供給を受けている
   間は無菌状態に維持され、微小血管内皮細胞を消化物か
   ら分離しこれを隔離して内皮細胞生成物を生成する内皮
   細胞分離手段と、 内皮細胞分離手段に接続可能であり、内皮細胞生成物の
   供給を受けている間は無菌状態に維持され、患者に移植
   される移植組織の表面に内皮細胞を沈積させて患者への
   内皮移植を促進させる内皮細胞沈積手段とを有すること
   を特徴とする内皮細胞の取得、沈積キット。
2. （２）脂肪収集手段には、脂肪収集手段に接続可能で、
   脂肪収集手段が収集した脂肪を受けて、必要になるまで
   無菌状態で脂肪を保存する脂肪受領手段が更に設けられ
   ていることを特徴とする請求項１記載のキット。
3. （３）脂肪受領手段は、頂部及び底部を有するチャンバ
   と、このチャンバに実質的に密封状態で係合してチャン
   バと共に上下に摺動可能なストッパ手段と、脂肪収集手
   段に接続可能で、ストッパ手段を通ってチャンバ内に延
   びる入口チューブ手段と、ストッパ手段を通ってチャン
   バ内に延びる真空入口チューブ手段と、ストッパ手段に
   接続し、ストッパ手段を上下動させるプランジャー手段
   と、ストッパ手段に設けられていて、脂肪の移動中にチ
   ャンバを密閉し、ストッパ手段が上昇位置にあるときに
   、入口チューブ手段及び真空入口チューブ手段によりた
   わみ、ストッパ手段が降下位置にあるときに、両入口手
   段を塞いで、チャンバからの脂肪の移動を促進させる隔
   膜手段と、チャンバの底部に設けられていて、チャンバ
   からの脂肪の移動を調節するバルブ手段を含む出口手段
   とをさらに具備することを特徴とする請求項２記載のキ
   ット。
4. （４）消化手段は、頂部及び底部を有するチャンバと、
   このチャンバの頂部に設けられていて、脂肪収集手段に
   接続可能で、脂肪収集手段が収集した脂肪を消化手段チ
   ャンバに導入するための第１の入口ポートと、チャンバ
   の頂部に設けられていて、消化手段チャンバに水洗溶液
   を導入するための第２の入口ポートと、チャンバの頂部
   に設けられていて、消化手段チャンバに消化溶液を導入
   するための第３の入口ポートと、チャンバの頂部に設け
   られていて、真空源に接続可能な第４の入口ポートと、
   チャンバの頂部に設けられていて、ろ過された大気を消
   化手段チャンバに導入するための第５の入口ポートと、
   チャンバ内の中央で同チャンバの長手方向の軸と平行に
   配置され、頂部及び底部を有し、頂部端が第５の入口ポ
   ートに接続され、底部端が攪拌手段に接続されていて、
   ろ過された大気をチャンバに導入し得るチューブと、こ
   の中央のチューブの底部端に接続された攪拌手段と、攪
   拌手段の下に接続可能で未消化のデブリを保持する濾過
   手段と、チャンバの底部に接続可能で、チャンバ内の反
   応を監視する監視手段と、チャンバの底部に設けられて
   、洗浄溶液及び消化デブリを除去するための第１の出口
   と、内皮細胞分離手段に接続可能のようにチャンバの底
   部に設けられて、消化物を内皮細胞分離手段に移動する
   ための第２の出口とを有することを特徴とする請求項１
   ないし３のいずれかに記載のキット。
5. （５）内皮細胞分離手段は、消化物を受けるために消化
   手段に接続可能で、頂部と底部とを有した第１のチャン
   バと、この第１のチャンバの頂部に設けられて消化手段
   に接続可能な第１の入口ポートと、第１のチャンバの底
   部に接続され内皮細胞生成物を分離する第２のチャンバ
   と、この第２のチャンバに設けられて、かつ第１位置で
   は第１及び第２のチャンバを連通し、第２位置では第２
   のチャンバと入口ポートとを連通し内皮細胞生成物を分
   離する２位置バルブを有する第２の入口ポートと、第２
   のチャンバに設けられ、第２の２位置バルブを有する出
   口ポートとを有し、この第２の２位置バルブは、第２の
   閉じた位置にあるとき、分離された内皮細胞生成物を充
   填赤血球から分離するために第２の２位置バルブより上
   の第２のチャンバ部分と第２の２位置バルブより下の第
   ２のチャンバ部分とを連通して、それにより消化物を含
   有する内皮細胞分離手段が遠心分離機にかけられると、
   両方の２位置バルブが第２の閉じた位置にあるとき、内
   皮細胞が第２のチャンバ内で消化物から分離されるよう
   にしたことを特徴とする請求項１ないし４のいずれかに
   記載のキット。
6. （６）細胞沈積手段は、無菌状態で内皮細胞生成物が移
   植組織に沈積する際に移植皮組織を支持する内側プロセ
   スチューブと、この内側プロセスチューブを収容して、
   細胞沈積段階の間無菌状態に維持する外側プロセスチュ
   ーブとを有していることを特徴とする請求項１ないし５
   のいずれかに記載のキット。
7. （７）外側プロセスチューブは、さらにチューブ本体と
   、このチューブ本体に接続可能であって、内皮細胞分離
   手段に接続可能な入口手段、及び内側プロセスチューブ
   の入口手段に接続可能な連通出口手段を有するエンドキ
   ャップと、チューブ本体に接続可能で内側プロセスチュ
   ーブの出口手段に接続可能な連通入口手段、及び連通出
   口手段を有するエンドキャップと、両エンドキャップに
   接続可能で、装置を中心軸の周囲で回転させる回転継手
   とを有していることを特徴とする請求項６に記載のキッ
   ト。
8. （８）内側プロセスチューブは、チューブ本体と、チュ
   ーブ本体に接続可能でかつ内皮細胞分離手段に接続可能
   な端部で外側プロセスチューブに接続可能なトネラーア
   センブリと、チューブ本体に接続可能で、外側プロセス
   チューブエンドキャップに接続可能な出口手段を有する
   ベントキャップとを具備し、圧力下により導入される細
   胞生成物がトネラーアセンブリ内に収容されている移植
   組織を通って流れ、移植組織の上に細胞生成物を沈積さ
   せるようにしたことを特徴とする請求項６又は７に記載
   のキット。
9. （９）内皮細胞の取得及び患者に移植される移植組織上
   への内皮細胞の沈積を無菌状態で行う方法であって、患
   者から脂肪を収集する脂肪収集手段と、消化物を生成す
   る消化手段と、内皮細胞生成物を生成する内皮細胞手段
   と、内皮細胞生成物を移植組織に沈積させる細胞沈積手
   段とを含み、無菌状態のコンポーネントの内で、患者か
   ら脂肪を収集し、収集した脂肪を処理して内皮細胞沈積
   物を生成し、沈積物を移植組織の表面上に沈積させるキ
   ットを提供する工程と、患者からの脂肪を無菌脂肪収集
   手段に収集する工程と、収集した脂肪を無菌消化手段に
   無菌状態で移送する工程と、消化手段の中で脂肪を洗浄
   消化して消化物を生成する工程と、消化物を無菌分離手
   段に無菌状態で移送する工程と、分離手段の中で内皮細
   胞を消化物から分離して内皮細胞生成物を生成する工程
   と、内皮細胞生成物を無菌細胞沈積手段に無菌状態で移
   送する工程と、患者に移植される移植組織の表面上に内
   皮細胞生成物を無菌状態で沈積させる工程とを有するこ
   とを特徴とする内皮細胞の取得沈積方法。