JPH03140867A - 検体粒子の洗浄方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は血球粒子の免疫学的凝集反応を生じさせる過程
における検体粒子の洗浄方法に関するものであり、特に
、交差適合試験を行う際の血球粒子の洗浄に適した検体
粒子の洗浄方法に関するものである。

〔従来の技術］ 交差適合試験には、一般に生理食塩水法、酸素処理法、
クームス法の３つが知られている。第４図は、クームス
法による交差適合試験の順次の過程を示す図である。交
差適合試験は主試験と副試験とを平行して検査して行わ
れるのが普通である。

すなわち、第３図（ａ）に示すとおり、まず、受血者の
血清２１と供血者の２％血球浮遊液２４をそれぞれ５０
μづつ主試験管２５に分注し、次に受血者の２％血球浮
遊液２２と供血者の血清２３とをそれぞれ５０μづつ副
試験管２６に分注した後、主試験管２５及び副試験管２
６を適当な時間静置し、第１の反応を行わせる。

第１の反応終了後に、主副両試験管２５．２６を血球粒
子の洗浄過程に移す。洗浄過程では、試験管２５．２６
に生理食塩水２７を適当量注入し、次いで、試験管２５
．２６を遠心機２８にかけ、約１１００Ｏｒｐの回転速
度で５分間程度遠心分離を行う。遠心分離が終了した後
に、試験管２５．２６にできた上澄み液を例えばスポイ
ト　２９で吸引除去する。以上の洗浄動作を３〜５回繰
り返して血球粒子の洗浄を行う。

上述の洗浄過程を経て最終的に試験管２５．２６内の上
澄み液を除去した後、試験管２５．２６底部に残留した
血清に抗グロブリン血清３０を５０μづつ加える。この
後、試験管２５．２６を遠心機２８にかけ、２０００〜
３０００ｒｐｍの回転速度でで約１５秒間遠心分離した
後、試験管２５．２６を取り出して静かに振盪させるか
、回転させるかしながら凝集の有無を確認する。

上述のクームス法による交差適合試験を、本出願人によ
る特公昭５９−３３８５６号公報に開示されている反応
容器を使って行う場合もある。この反応容器３１．３２
は第５図かられかるとおり、反応容器の側面に球面状の
凹部３１ａ、３２ａを有するものであり、第１の反応過
程・洗浄過程は上述の通常の反応容器を使った場合と同
様に行う。

第２の反応過程では遠心機を使用せず、反応容器を自転
させることにより、反応液中の粒子を凹部内に集合させ
るようにしている。約１１００００ｒｐの回転速度で約
１分間反応容器を自転させた後、反応管を取り出して、
静かに振盪させるか回転させるかしながら凝集の有無を
確認する。この場合、反応容器側面に球面状の凹部３１
ａ、３２ａが形成されているため、反応容器を自転させ
ることにより、反応容液中の粒子を凹部３１ａ。

３２ａ内に集合させて凝集反応を促進することができる
。

［発明が解決しようとする課題］ 上述したように、交差適合試験においては、第１の反応
が終了した後、第２の反応に移る前に粒子の洗浄操作が
必要である。しかしながら、この洗浄操作は非常に繁雑
であり手間がかかるものであるため洗浄操作の自動化が
困難であり、この洗浄操作が交差適合試験等の輸血検査
を自動化する際のネックとなっていた。また、洗浄過程
において反応管２５．２６を遠心［２８にかげる際に反
応管２５．２６の移動を余儀なくされるため、反応管の
入れ間違い等の人的ミスが生じ易いという欠点があった
。免疫学的凝集反応の測定結果は人間の生命に関わるも
のであるため、このようなミスは絶対に避けなければな
らない。本発明は、これらの欠点を除去し、検体粒子を
収容した反応容器を移動させることなく、検体粒子の洗
浄を自動的に行い得るようにした検体粒子の洗浄方法を
提供せんとするものである。

［課題を解決するための手段及び作用］上記課題を解決
するために、本発明は免疫学的凝集反応を生じさせる過
程において検体粒子を洗浄するに当たり、内壁に少なく
とも１つの滑らかな凹部を形成した粒子凝集反応容器内
に反応液及び洗浄液を収容して、前記反応容器を２段階
に分けて自転させ、第１段階においては検体粒子を前記
反応容器内壁に形成した四部に集め洗浄液は前記反応容
器外へ飛散しない程度の回転速度で前記反応容器を自転
させ、第２段階においては検体粒子を前記反応容器内壁
に形成した凹部に残して洗浄液を前記反応容器の外に飛
散させる程度の回転速度で前記反応容器を自転させ、第
２段階において前記反応容器の外に飛散した洗浄液を捕
獲、排出することを特徴とするものである。

本発明によると、反応容器として、内壁に少なくとも一
つの滑らかな凹部を有する粒子反応容器を使用し、反応
液の洗浄過程においては、反応容器を第１段階と第２段
階に分けて自転させ、この自転による遠心力を利用して
、第１段階の自転で、血球及び洗浄液を前記凹部におい
て分離し、第２段階の自転で反応容器内の洗浄液のみが
反応容器の内壁に沿って上昇し反応容器から飛散する現
象を利用して、洗浄液を反応容器の外に排出し、更に反
応容器から飛散する洗浄液を捕捉・排出するようにして
いる。従って、本発明によると、反応容器内への洗浄液
の注入、反応容器の自転、反応容器から飛散する洗浄液
の捕捉、排出を自動的に繰り返して行うことができる。

また、本発明では、反応容器を自転させて洗浄液と検体
粒子とを分離して洗浄操作を行っているため、遠心機を
使う必要が無く、従って反応容器を移動することなく検
体粒子の洗浄を行うことができる。

［実施例］ 第１図は本発明の検体粒子の洗浄方法を取り入れた粒子
凝集反応システムの全体を示す線図である。中央に主副
２本の反応管１−１、■−２を設置し、それぞれの反応
管底部は、反応管を自転させる回転機構２に取り付けら
れている。反応管の近傍に試験管ラック３を設置し、こ
のラック３内には受血者血清を入れた試験管４、受血者
の２％の血球浮遊液を入れた試験管５、供血者血清を入
れた試験管６、供血者の２％の血球浮遊液を入れた試験
管７、及び抗グロブリン液を入れた試験管８がセットさ
れている。左右方向に分注ノズル１０を駆動する機構を
有するアーム２０ａに分注ノズル１０を取り付け、更に
アーム２０ａを前後方向に駆動可能なアーム駆動機構２
０ｂに取り付けて、分注ノズル１０をラック３及び主副
反応容器１−１．１−２の上方を前後左右に移動可能な
ものとする。分注ノズル１０は定量ポンプ９に接続し試
験管４〜８に収容された試料および試薬を反応管１−１
．１−２内に必要量分注するものである。更に、分注ノ
ズル洗浄装置１１を試験管ラック３の近傍に設置し、必
要に応じて分注ノズル１０の洗浄を行う。反応管１−１
．１−２を挟んでラック３の反対側に、前後左右に移動
可能な洗浄液受け１２−１．１２−２を設置する。洗浄
液受け１２−１．１２−２は洗浄工程において、反応管
１−１．１−２の上方に適当な駆動機構（図示せず）に
よって移動させ、反応管１−１．１２に覆いかぶさって
、反応管の開口部から飛散する洗浄液を捕獲する。洗浄
液受け１２−１．１２−２は排液チューブ１３を経て陰
圧した排液タンク１４に接続している。排液タンク１４
には真空ポンプ１５が取り付けられており、この真空ポ
ンプ１５を駆動させて洗浄液受け１２−１．１２２内に
捕獲された洗浄液を排液チューブ１３を通じて排液タン
ク１４内に吸引排出する。

洗浄液受け１２−１．１２−２中心には、洗浄ノズル１
６−１．１６−２をそれぞれ貫通させ、これらの洗浄ノ
ズル１６−１．１６−２に洗浄ポンプ１７を接続し、こ
の洗浄ポンプ１７を駆動させて洗浄液タンク１８内に収
容されている生理食塩水を反応管１−１．１−２内に注
入する。

分注ノズル１０の駆動アーム２０ａには、分注ノズル１
０の反対側に更に凝集判定部１９を左右方向移動可能に
取り付ける。アーム２０ａとアーム駆動機構２０ｂを駆
動させて、第２の反応過程終了後に、凝集判定部１９を
反応管１−１．１２の上方に順次移動させ、反応管の底
部に形成された凝集、非凝集のパターンを判定するよう
にしている。

第２図（ａ）、（ｂ）はそれぞれ本発明の洗浄方法に使
用するのに適した反応管の一例を示す平面図及び断面図
である。第２図に示すとおり、本発明の洗浄方法に使用
する反応管１は、はぼ円筒状をなし、その底部１ａは球
面状とし、底部１ａから適当な高さの側面にに、内壁面
の円周に沿ってリング状に凹部１ｂが形成されており、
該凹部１ｂの一部は更に深い凹状部分ＩＣが形成されて
いる。

このような形状の反応容器は、反応容器１を自転させて
その内壁面に形成された凹部にて血球と洗浄液を分離す
る際に、血球の方が洗浄液より比重が大きいため、反応
容器１の自転による遠心力により血球はより深い凹部１
ｃに押しつけられることとなり分離を容易に行うことが
できる。

第１図にしたがって、クームス法による交差適合試験を
例にとり、本発明の洗浄方法を詳細に説明する。反応管
の回転機構２の上に２本の主副側反応管１−１．１−２
をセットしておく。分注ノズル１０を駆動して受血者血
清を入れた試験管４上に移動させ、定量ポンプ９を吸引
作動させて５０μの受血者血清を分注ノズル１０内に吸
引する。次に、分注ノズル１０を主反応管１−１上に移
動させ、定量ポンプ９を吐出作動させて分注ノ０ グル１０内の受血者血清を主反応管１−１内に吐出させ
る。次に、分注ノズル１０をノズル洗浄部１１まで移動
し、分注ノズル１０の洗浄を行う。

更に、上記と同様の動作を、２％供血者血球浮遊液を入
れた試験管７について行い主反応管１−１に５０μの２
％供血者血球浮遊液を分注する。再度分注ノズルｌＯを
ノズル洗浄部１１にて洗浄した後、同様の動作を２％受
血者血球浮遊液を入れた試験管５について行い、副反応
管１−２に５０μの２％受血者血清浮遊液を分注した後
、分注ノズル１０を洗浄し、更に供血者血清試験管６か
ら５０μの供血者血清を副反応管１−２に分注する。

このようにして分注が終了した主副反応管１−１．１−
２を一定時間静置し、第１の反応を行わせる。

第１の反応終了後に、第１及び第２の洗浄液受け１２−
Ｌおよび１２−２を反応管ｔ−ｉ、ｉ−２の上に移動さ
せ、各洗浄液受けを各反応管に覆いかぶせるようにする
。第３図は洗浄液受け１２を反応管１上に移動させた状
態を示す側面図である。これ以後、洗浄工程における動
作は主副反応管１−１１−２、及び第１、第２の洗浄液
受け１２−１．１２−２において共通であるので、反応
管１、洗浄液受け１２で代表して説明する。洗浄液受け
１２は、第３図に示すように、側部にリング状の洗浄液
溜１２ａを有しており、後に説明するとおり、反応管１
の開口部１ｄから飛散する洗浄液を捕獲し、この洗浄液
溜１２ａに収容する。

洗浄液受け１２は、反応管１の上方に移動した後、洗浄
液受け１２の傾斜壁部１２ｂの内壁と反応管の上側開口
部１ｄとの間に若干の隙間ができる程度の位置まで下降
させる。反応管ｌが設置されている回転機構２において
は反応管１の自転数を自在に制御することが可能である
。

洗浄ポンプ１７を作動させて洗浄液受け１２の中心に貫
通させた洗浄ノズル１６から洗浄液タンク１８内に収納
した生理食塩水を第１の反応が終了した反応管１の中に
吐出する。生理食塩水の量は、反応管１１に設けたリン
グ状凹部１ｂと反応官邸面１ａとの中間程度まで入れる
のが好ましい。

この後、回転機構２を駆動させて、反応管１を自転させ
る。このときの回転速度は、反応容器１内の生理食塩水
と混和した血清及び血球が反応容器１の自転による遠心
力で生理食塩水と共に反応管１の内壁を上昇し、反応管
１の内壁に形成されたリング状凹部１ｂにいたる程度と
する。この第１の自転によってリング状凹部に至った血
球は遠心力によりさらに深く形成されている凹部１ｃに
集まる。血球がより深い凹部１ｃに集まったとき、反応
管の回転数を更に上げるようにする。このとき、より深
い凹部ＩＣに集まった血球は生理食塩水よりも比重が重
いため、より深い凹部１ｃにますます押し付けられるこ
ととなるが、反応管１内の余分な生理食塩水及びそれと
混和した血清はさらに反応管の内壁にそって、上昇し、
反応管１の上側開口部１ｄから反応管１の外側周辺に飛
散する。この飛散した液は洗浄液受け１２の傾斜壁部１
２ｂに当たって跳ね返り、反応管上側開口部１ｄと傾斜
壁部１２ｂとの間の隙間を通って、洗浄液溜１２ａに受
は止められる。この反応管の第２の自転動作に連動させ
て、真空ポンプ１５を駆動させ、洗浄液溜１２ａに受は
止められた排液を排液チューブ１３を経て排液タンク１
４内に排出する。反応管１１のリング状凹部１ｂに残っ
た生理食塩水以外のすべての生理食塩水が反応管１から
排出された後、反応管１の自転を止め、より深いリング
状凹部ＩＣに集まった血球とリング状凹部１ｂに残った
若干の生理食塩水及びこれに交ざった血清が反応管１の
底部１ｂに落下させる。上述の洗浄過程を３〜５回繰り
返し、血球の洗浄を完全に行う。

血球の洗浄終了後、洗浄液受け１２−１，１２２を元の
位置に戻した後、分注ノズル１０を抗グロブリン血清を
入れた試験管８の上に移動させ、定量ポンプ９を駆動さ
せて１００μの抗グロブリン血清を吸引する。次に、分
注ノズル１０を主反応管１−１上に移動させて主反応管
１−１の中に５０μの抗グロブリン血清を分注した後、
分注ノズル１０を副反応管１−２上に移動させ、残りの
５０μの抗グロブリン血清を副反応管１−２内に分注す
る。次に、回転機構２により、主副反応管３ ４ １−１．１２を自転させる。この時の回転数は、最初は
主副各反応管１−１．１−２内の血球及び抗グロブリン
血清が反応管の自転により生じる遠心力で反応管内壁を
上昇し、リング状凹部１１ｂに至る程度の回転数に制御
する。血球と抗グロブリン血清がリング状凹部１ｂに至
り、更により深い凹部１ｃ集まったときに、回転数を更
に約１１０００Ｏｒｐに上げて約１分間程自転させるこ
とにより、第２の反応が完了する。第２の反応が完了し
た後、回転を止めると、より深い凹部ｌＣに集まった血
球及び抗グロブリン血清が正副反応管１−１．１−２の
底部１１ｃに流れ落ちてきて、凝集、非凝集のパターン
を反応管底部１ａに形成する。

凝集像判定部１９を正副反応管１−Ｌ　Ｌ−２の上に順
次移動させ反応管の底部に形成された血球の凝集、非凝
集パターンを判定する。凝集像判定部には例えばＣＣＤ
撮像素子を用いた画像処理方式などを利用することがで
きる。

本実施例では、はぼ円筒形状の反応管１を使用している
が、反応管を側面から見て底部１ａから上側開口部１ｄ
にむけて僅かに広がった形状のものを使用するようにし
ても良い。また、反応管１、排液受は部２の数を増やせ
ば、複数の供血者血液との交差適合試験を同時に行うこ
とも可能である。

［発明の効果］ 本発明の検体粒子の洗浄方法によると、反応容器の位置
を固定したままで検体粒子を自動的に洗浄することがで
きるため、従来の交差適合試験における血球の洗浄等の
ような複雑な洗浄操作を自動化して行うことが可能であ
り、従って本発明の洗浄方法を取り入れて、輸血検査を
自動化することが可能となる。また、反応容器を−か所
に固定したままで洗浄を行うことができるため、試験中
に反応容器を移動させて遠心機に出し入れする必要がな
いので、検査中に反応容器を入れ間違えると言った危険
がなく、正確に検査を行うことが可能である。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明の洗浄方法を取り入れた粒子凝集反応
システムの全体を示す線図、 第２図は、本発明の洗浄方法に使用するのに好適な反応
容器の一例を示す平面図及び断面図、第３図は、本発明
の洗浄方法を説明するための図、 第４図及び第５図はクームス法による交差適合試験法を
説明するための図である。 １・・・反応容器　　　　　　１ａ・・・反応容器底部
ｉｂ・・・凹部　　　　　　　１ｃ・・・より深い凹部
１ｄ・・・開口部　　　　　　２・・・回転機構３・・
・ラック　　　　　　　４〜８・・・試験管９・・・定
量ポンプ　　　　　１０・・・分注ノズル１１・・・洗
浄装置　　　　　１２−１・・・正反応管１２−２・・
・副反応管　　　１３・・・排液チューブ１４・・・排
液タンク　　　　１５・・・真空ポンプ１６・・・洗浄
ノズル　　　　１７・・・洗浄ポンプ１８・・・洗浄液
　　　　　　１９・・・凝集像判定部７ 手 続 補 正 奎 目

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １、免疫学的凝集反応を生じさせる過程において検体粒
   子を洗浄するに当たり、内壁に少なくとも１つの滑らか
   な凹部を形成した粒子凝集反応容器内に反応液及び洗浄
   液を収容して、前記反応容器を２段階に分けて自転させ
   、第１段階においては検体粒子を前記反応容器内壁に形
   成した凹部に集め洗浄液は前記反応容器外へ飛散しない
   程度の回転速度で前記反応容器を自転させ、第２段階に
   おいては検体粒子を前記反応容器内壁に形成した凹部に
   残して洗浄液を前記反応容器の外に飛散させる程度の回
   転速度で前記反応容器を自転させ、第２段階において前
   記反応容器の外に飛散した洗浄液を捕獲、排出すること
   を特徴とした検体粒子の洗浄方法。