JPH0314523A - ヒトインターフエロン―βからなる医薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、赤血球への先祖血球（　ｐｒｏｏｅｎｉｔｏ
ｒｂｌｏｏｄ　ｃｅｌｌ）の成熟の欠乏により特徴づけ
られる障害における赤血球産生の刺激のためのヒトーイ
ンターフェロン−ベータ−（ＩＮＦ一β）からなる医薬
組成物に関する。

すべての末梢血球は、多能性の造血性幹細胞として知ら
れている共通の先祖細胞から生じる。幹細胞の重要な性
質は、固体の生涯を通して連続的供給を確実にする自己
再生性である。必要なとき、多能性細胞は分化を開始し
、そして連続的分割でそれは自己再生能力を失ない、そ
してその子孫は特定の発現系に関与するようになる。そ
れら先祖は、ついで機能的目的をなしうるすべての血球
を生じる。

或熱血球の形或は、各血統からの特異的に関与する先祖
細胞の増殖および或熟からなる過程の最後に生じる。多
能性細胞はかくして、多数の赤血球、顆粒球、血小板お
よびリンパ球からなるク口−ンを、それらの中間体先祖
細胞と一緒で産生じつる。

通常の情況下で、骨髄は特定の型の細胞についての増加
する要求に急速に応答しつる。いかにしてそうするかは
、多くの現存の研究の主題である。

先祖細胞の増殖および分化の過程は、造血ホルモン、た
とえばエリスロボイエチンとして知られるいくつかの生
長刺激剤およびいくつかのコロニー　＄１１１激因子の
制御下にあることが知られている。

赤血球産生は、インターロイキン−３（ＩＬ−３）によ
り主に支配される初ＩＪＢＦＵ−Ｅ（破裂形成単位一赤
血球系の最も初期の赤血球前駆体〉形成、そして引続＜
ＣＦＵ−Ｆ　（１口二一一形成単位一赤血球系）へのさ
らに成熟、およびエリス口ボイエチンによる正常芽ｌｌ
Ｉ胞の段階で開始する過程からなる。

循環の年齢および骨髄先祖細胞において差異のありうる
ことが知られている。３つの型のインターフェロン−ア
ルファ、ベーターおよびガンマのすべての効果が、数グ
ループにより、正常惰髄先祖細胞に対し研究されている
。３つのインターフェロンのすべては、正常骨髄からの
コロニー−形成細胞の生長に対し抑制効果を発揮するこ
とが認められた［ブロキシメイヤ−（　Ｂｒｏｘｙｍｅ
ｙｅｒ１１ａｌＥ．）等（１９８３）、ヒト多能性、赤
血球系および顆粒球−マクロファージ先祖細胞に対する
ヒトガンマ、アルファおよびベーターインターフェロン
の影費の比較分析（　ｃｏｍｐａｒａＮｖｅａｎａｌＶ
ｓｉｓ　ｏｒ　ｔｈｅ　ｉｎｒｌｕｅｎｃｅｓ　ｏｒ　
ｈｕｍａｎ　（ｌａｍｆｆｌａａｌｐｈｅ　ａｎｄ　ｂ
ｅｔａ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ　ｏｆ　ｈｕｍａｎｍ
ｕｌ℃ｉｐｏｔｅｎｔｉａｌ　（　Ｄ　Ｆ　ｔＪ　−　
Ｇ　Ｅ　ＭＭ　）、ｃｒｙｔｈｒｏｉｄ　　（　Ｂ　Ｆ
　Ｕ　−　Ｅ　）　ａｎｄ　ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ−
ｍａｃｒｏｐｈａａｅ　（　Ｇ　Ｆ　Ｌｌ　−　Ｇ　Ｍ
　）　ｐｒｏｏｅｎｉｔｏｒ　ｃｅｌｌｓ）、ジェイ・
イミュノル（Ｊ．　ｌｍｍｕｎｏｌ．　）　１　３　１
　：　１３００〜１３０５］。かくして、それらはヒト
およびマウスの多能性（ＣＦＵ−ＧＥＭＭ＝コロニー一
形成単位一顆粒球、赤血球系、マクロファージ、巨核芽
球〉、赤血球系（ＣＦＵ−Ｅ）および顆粒球一マクロフ
？−ジ（ＣＦＵ−ＧＭ）先祖細胞によるインビト口コロ
ニー形成の抑制に関係している。［参照：ニューマン（
　ＮｅｔｌｌｌａｎｎＨ．　Ａ．　）およびファウザー
（Ｆａｕｓｃｒ　Ａ．　Ａ、）（１９８２）ヒト骨髄に
由来する多能性の造血性先祖に対するインターフェロン
の効果（ＥｒｆｅＣｔ　ｏｒ；ｎｔｅｒｒｅｒｏｎ　ｏ
ｎ　ｐｌＬｌｒｉｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｈｅｍｏｐｏｔ
ｅｔｔｃｐｒｏａｅｎｉｔｏｒｓ　　（ＣＦＩＪ−ＧＥ
ＭＭ）　ｄｅｒｉｖｅｄ　ｆｒｏｍｈｕｍａｎ　ｂｏｎ
ｅ　ｌａｒｒＯＷ　）　、エキセブ、ヘマトール（Ｅｘ
ｐ．　ｌｌｅｍａｔｏｌ，）、工０：５８７：ジダリ（
　Ｇｉｄａｌｉ，　Ｊ．　）等（１９８１）ボリＩ：Ｃ
に対するインターフェロンによるネズミの多能性の造血
性幹細胞の増殖阻害（　Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　
ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆ　ｍｕｒｉｎｅ　ｐｌｕｒｉ
ｐｏｔｅｎｔ　ｈａｅｍｏｐｏｉｅｔｉｃ　ｓｔｅｍｃ
ｅｌｌ　ｂｙ　ｉｎｔｅｒｒｅｒｏｎ　ｏｎ　ｐｏｌｙ
　Ｉ　：　ｃ　＞　、セル、ティッシュ、カイネット（
Ｃｅｌｌ　Ｔｉｓｓｕｅ　Ｋｉｎｅｔ．）１４：１；バ
ント、フル（Ｖａｎｔ　Ｈｕｌｌ，　Ｅ．　）等（１９
７８）ヒトおよびマウスの骨髄細胞のインビト口におけ
る増殖能力に対するインターフェロン製剤の影９３　（
Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｐｒ
ｅｐａｒａｔｉｏｎｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｒｅ
ｒａｔｉｖｅ　ｃｏｐａｃｉｔｙｏｆ　ｈｕｍａｎ　ａ
ｎｄ　ｆｆｉｏｕｓｅ　ｂｏｎｅ　ｍａｒｒｏｗ　ｃｅ
ｌｌｓ　ｉｎｖｉｔｒｏ）、キャンサー、レス（Ｃａｎ
ｃｅｒ　Ｒｅｓ．　　）　３　８　：９１１：ガリエン
ーラー？−ｒギュ（　ｃａｔ　ｌ　ｉｅｎ−Ｌｅｒｔｉ
ａｕｅ，　０．）等（１９８０）ネズミの赤血球系前駆
体に対するインターフェロンの抗増殖作用の種依存性（
Ｓｔｒａｉｎ　ｄｅｌ）ｅｎｄｅｎＣｅ　ｏｆ　ｔｈｅ
ａｎｔｉｐｒｏｌｉｒｅｒａｔｉｖｅ　ａｃｔｔｏｎ　
ｏｆ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　ｏｎｌｕｒｉｎｅ　ｅｒ
ｙｔｈｒｏｉｄ　ｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓ　）　、サイエ
ンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ　）　２０９　：　２９　２　：
マツクネイル（ＨｃＮｅｉｌｌ，　Ｔ．　Ａ．）および
−ノレミング（１４．ＡＦｌｅｍｉｎａ　）、（１９７
１）インビト口における血清インターフェロンとマウス
造血性コロニーの阻害剤との間の関係（Ｔｈｅ　ｒｅｌ
ａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎＳｅｒＬＩＩｌｌ
　ｉｎｔｅｒｒＱｒｏｎ　ａｎｄ　ａｎ　ｉｎｈｉｂｉ
ｔＯｎ　ｏｒ　ｌｌｌｏｕ３ｅｈａｅｌＯｐｏｉｅｔｉ
ｃ　ｃｏｌｏｎｉｅｓ　ｉｎ　ＶｉｔｒＯ）　、イミュ
ノロジ−（　Ｉｍｉｕｎｏｌｏａｙ）　２ユ：７６１；
フレくング（　ＦｌｅｌｉｎＱ，Ｗ．＾．）等、（１９
７２）顆粒球−マクロファージコロニーのインビトＯ生
長に対１る阻害因子（インターフェロン）の効果（　Ｔ
ｈｅｅｌｅｃｔ　ｏｆ　ａｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｎａ　
ｆａｃｔｏｒ　（　ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ）ｏｎ　ｔｈ
ｅ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｇｒｏｗｔｈ　゛ｏｆ　ｇｒａ
ｎｕｌｏｃｙｔｅ−ｎａｃｒｏｐｈａｇｅ　ｃｏｌｏｎ
ｉｅｓ　）　、イミュノロジー（　ｒｌｌｕｎ０１０ａ
ｙ）　２　３　：　４　２　９　：グリーン　バーグ（
Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ，　Ｐ．　ｌ．）およびモスニ−（
Ｓ．Ａ．＋ＯＳｎｙ　）　　（１９７７）顆粒球性先祖
１ｓ胞に対する、インビトロにおけるインターフェロン
の細胞毒性効果（Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　ｅｆｆｅｃｔｓ
　ｏｆ　Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　ｉｎｖ＋ｔｒｏ　ｏｎ
　ｇｒａｎＬｌｌＯＣＶｔｉＣ　ＤｒＯＱ（ｎｉｔｏｒ
　ＣｅｌｌＳ）、キャンサー、レス（Ｃａｎｃｅｒ　Ｒ
ｅｓ．　　）　３ユ：１７９４］。

インターフェロンは、毛様細胞自血病（ＨＣＬ）におい
て循環する多而統リンバー骨髄幹細胞のインビトロ分化
を規制することが示された［ミ、カレビツツ（Ｈｉｃｈ
ａｌｅｖｉｃｚ，　Ｒ．　）およびレベル（ＨＲｅｖｅ
ｌ）　　（１９８７）、インターフェ口ンは、毛様ｌＩ
ＩｌＩ１白血病において、多血統リンバー骨ｕ９？細胞
のインピト口分化を規制する（　　ＩｎｔｅｒｆｅｒＯ
ｎＳｒｅｇｕｌａｔｅ　ｔｈｅ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｄ
ｔｒｒｅｒｅｎｔ；ａｔｔｏｎ　ｏｆｍｕｌｔｉｌｉｎ
ｅａｇｅ　ｌｙｍｐｈｏ−ｍｙｅｌｏｉｄ　ｓｔｅｍ　
ｃｅｌｌｓ　ｉｎｉ１ａｉｒｙ　ｃｅｌｌ　ｌｅｕｋｅ
ｍｉａ　）　、ブロス、ナツノレ、アカド、サイ、ユー
、エス、エイ（　Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ，
Ｓｃｉ．　Ｕ．Ｓ．Ａ．　）　８４，　２３０７　〜２
３　１　１頁］。

インターフェロンの調節的効果を通して、幹細胞は刺激
されて、特に若干の子孫（１）ｒＯｃｌｌＶ　）のより
高い形成を導くことなしに、より多くの子孫への破裂を
生じる。

今や、初期の知見と反対に、ＩＮＦ−β（またＩＮＦ−
β１として知られる）は、赤血球の非常に低い産生を有
するいくつかの疾病にかかっている個体からの先祖細胞
の生長に対する赤血球産生効果を有することが見出され
た。ＩＮＦ一βは破裂形成を増加し、そし−Ｃまた正常
芽球および後期網状赤血球へさえものより急速な或熟を
促進することがまた見出された。これは、リンパ球産生
および他の血統の減少を導き、かくして汎血球減少症お
よび骨髄中における毛様１Ｂ胞（前血漿性細胞）の蓄積
を生じる幹細胞の悪性変形である毛様細胞白血病に対す
る上記研究からは推論しえない。

従って、本発明の目的は、赤血球への先祖血球の成熟の
欠乏により特徴づけられる障害において、赤血球産生の
刺激のための活性成分としてＩＦＮ一βからなる医薬組
成物を提供することにある。

本発明の組成物において使用されるＩＦＮ−βは、誘導
された線維芽細胞により産生きれる天然ＩＦＮ−β、ま
たは遺伝ｆ工学技術により産生される組換えＩＦＮ−β
（ｒ　Ｉ　ＦＮ一β）でありうる。ｒ　Ｉ　Ｆ　Ｎ−β
は、原核生物、たとえばイー・コリ（Ｅ．　ｃｏｌｉ　
）細胞、または真核生物、たとえばチャイニーズ、ハム
スター卵巣（ＣＨＯ）ＩＩＩ胞により産生じつる。好ま
しくは、ＣＩＩＯＩＩＩ胞により産生されたｒｌＦＮ−
βが、本発明に従い使用される。

本発明の組成物は、ＩＦＮ−βの生物活性の有効性を妨
害じず、そしてそれが段与される宿主に対し毒性でない
任意の担体を包含する医薬的に受容しうる担体と一絹で
のＩＦＮ−βからなる。

本組成物は、非経口径路で、たとえば皮下または特に筋
肉内に投与しつる。この目的に適当な注躬溶液は、医薬
の技術分野において知られている任意の通常の手段によ
り製造され、そしてヒトインターフェロン投与と相容性
である。たとえば、注躬溶液は、滅菌等張塩、防腐剤た
とえばメチルバラベンまたはプロビルパラベン、安定剤
たとえばヒト血清アルブミン、ｐ｝−１ｉＪ節剤、パツ
ファ−等を含右しうる。広範の適当な非経口担休が、教
本“レミントンズ、ファーマシューチカノレ、サイエン
セズ（　ＲｅＮｎｇｔｏｎ’ｓ　ＰｈａｒｌｉａＣｅｕ
ｔｉＣａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ　）　”　（　１　７　Ｆ
ｋ、１９８５）中に示されている。

本発明の１態様として、組成物はヒト血清アルブ互ンで
安定化された天然ＩＦＮ一βのものである。この目的に
は、フロン（Ｆｒｏｎｃ　）　（登録商標）［インター
−ラブ（Ｉｎｔｅｒ−Ｌａｂ　）　、イスラエルおよび
ｌ：７［１ノ（ｓｅｔｏｎｏ＞　、イタリー１、ヒト２
倍体包皮細胞の再誘導培養物から得られヒトＩ　Ｎ　Ｆ
　−βの製品を、蛋自■当り１０７単位に精製し、つい
でＩＮＦ−β１０６１Ｕ　（ＩＭｔＪ）を含有するバイ
ヤル中でヒト血消アルブミンと凍結乾燥する。

好ましい態様において、ＣＩ−１０細胞中で産生きれた
組換えＩＦＮ−βを均一までｖｉｌ１し、そして適当な
担体および安定剤、たとえばヒト血清アルブミン、マン
ニトールおよびバツファ一、たとえばアセテートバッフ
ァ−と一緒で、注躬形に調合される。

本発明の組成物は、好ましくは低用量において投与され
る。“′低用量″なる．ＩＲは、体重約６０Ｎｇの患者
について、１日１から３ＭＵ　（自万単位）、好まし＜
ｕ２ＭＵを使用することを意味する。比較のために、急
性のウイルス性疾病にかかつている患者を１日、休重κ
９当り５００，０００　　１ＪのＩＦＮ−αまたはＩＦ
Ｎ−β（３０ＭｔＪ／６０Ｎｇ）で治療し、そして慢性
のウイルス性疾病にかかつている患者を３〜１０ＭＬＪ
６０Ｋｙ体重で治療した。

１日当り１〜２ＭｔＪの低用績が数ケ月使用でき、ある
いはもしも患老の状態が１ケ月後に改善されるならば、
１〜２ＭｔＪの用吊が週２またｔよ３（９）、史に３ケ
月またはそれ以上投与されうる。

本発明の組成物を使用する治療において、用頃は疾病の
重篤度および患者の状態に依存する。本組成１ｌｌ５は
筋肉内または皮下に注躬しつる。

本発明の他のｎ様においては、ＩＦＮ一βは、患者がイ
ンターロイキンー３欠損であるとき、インターロイキン
−３（ＩＬ−３）と共に投与ざれる。Ｉ　Ｌ−３は、Ｉ
ＦＮ一βの投与に先立ち、一緒にまたは後に投与しうる
。Ｉ　Ｌ−３の１日用量は、患者の状態に依存し、たと
えば体重Ｋｇ当り５０μもである。それは注入により投
与しつる。

本発明の組戊物は、赤血球への先祖血球の成熟の欠乏が
ある障害に４３ける使用のためのものであり、かくして
ＩＮＦ一βはアジュバント赤血球産生性或熟因子として
作用する。ＩＦＮ−βでの治療に応答しつる障害は、育
髄形或異常症候群、慢性の骨髄単核球性白血病（ＣＭＭ
Ｌ）、慢性の骨髄性白血病（ＣＭＬ）、および慢性ＷＪ
古たとえば慢性の感染性障害、リウマチ性関節炎等によ
り生じるすべての貧血を包含する。

本発明の組成物は、脊髄形成異常症候群の治療において
使用しつる。この飴は、貧血、一般に大赤血球性の末梢
赤血球、巨大赤芽球性または非赤血球産生性（　ｄｉｓ
ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｃ　）の赤血球産生および
（または）環状の（ｒｉｎｇｅｄ）担鉄赤芽球（担鉄赤
芽球性貧血）、および異常巨核芽球産生および（または
）ＩＩ害された顆粒球産生を包含する１組の疾病からな
る。

脊髄形成異常症候群は、５つの型に区分しうる：難冶性
貧血［　ｒ＋Ｊｒａｃｔｏｒｙ　ａｎｅｎ＋ｉａ　　（
　Ｒ　Ａ　）　］　、１．１状の担鉄赤芽球を有する難
治性貧血（ＲＡＲＳ）、慢性の骨髄単核球性〔］血病（
ＣＭＭＬ）、過剰の芽細胞を有する鯉治性貧血（ＲＡＥ
Ｂ）および変形におけるＲ　Ａピｌ３。

それら症候群の若干において、患者は無症状でありえ、
モして極く僅かの［ｊ大赤血球性貧血が正確な診断に導
く。他においては、汎血球減少症ａ３よび輸血の必要性
は主鰭な医療問題を構成しえ、あるいは重い汎血球減少
症は白血病に進展しつる。

多くの場合において、脊髄形成異常症候群の患者は、不
完全な造血の診断に引続く多年間（１０年以上）、急性
白血病を決して発現しない。

いくつかの研究は、この群の血液学的具常が幹細胞に影
胃する障害を示すことを実証した。一般に、先祖細胞の
劣った培養物生長は患者を特徴づＣプる。矛盾する報告
も存在するが、培養技術における均一性の欠除に多分基
くちのであろう。それらの患者からのコロニー一形或細
胞（先祖細胞）がコロニー刺激因子（ＣＳＦＳ）に感受
性であることがまた示唆されている。

記載した症候群の特異有効治療法はないので、保技療法
が血液学者の主要な課業を構或する。輸血は重い貧血に
基く症状の軽減を助けるが、鉄道ｆ！４荷および血色素
症、その他に輸血に塁くウイルス感染および逆の反応の
ような他の合併症の危険を担っている。血小板および顆
粒球輸血はまれに有効であり、そして予防療法は役に立
たない。コルヂコステロイドに対するまれな応答および
アンド口ゲンに対するよりまれな応答が記載ざれている
。細胞毒性化学療法は、良性層の間には指示されておら
ず、そしてその投割は白血病が発現しているとき確かで
ない。化学療法からの予想された副作用と一緒での比較
的高年齢群は、この接近を魅力的でないものとする。別
途に、低用量のシトシンアラビノシドが最近使用されて
おり、そして若干の研究において若干の応答が得られた
［フリツシコ（Ｆｒｉｓｃｈ，　Ｂ．）およびバーツル
（Ｂ．　Ｂａｒｎ）　　（　１　９　８　６　）脊髄形
成異常症候群における骨髄組織学（Ｂｏｎｅ　Ｉａｒｒ
ＯＷ　ｈｔｓｔｏ＋ｏｇｙ　ｉｎｌＶｃｌＩｏｄＶｓＤ
ｌａｓｔｉｃ　ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ　）　、スカン、ジ
エイ、ヘマトール（Ｓｃａｎ．　Ｊ．　ｌｌｅｍａｔｏ
ｌ．　）　３　６、サブ（　ｓｕｐｐ．　）±５：２１
　〜３７：ミカレビッツ（Ｈｉｃｈａｌｅｖｉｃｚ，　
Ｒ．　）等（１９８４）ヒト骨髄性白血病における低用
壜のシトシンアラビノシドの細胞分化および治療効果（
Ｃｅｌｌ　ｄｉＨｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｎｄ　ｔｈ
ｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｒ　ｌｏｗ　ｄ
ｏｓｅｓ　ｏｒＣｙｔＯＳｉｎｅｌ　ａｒａｂｉｎｏｓ
ｉｄｅ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｇ＋ｙｅｌｏｉｄｌｅｕｋ
ａｅｍｉａ　）　、リューク、レス（Ｌｅｕｋ．　Ｒｅ
ｓ．）旦：７８３〜７９０］が、若干の場合重い汎血球
減少症が生じた［ウィッシュ（ｌ４ｉｓｃｈ，　Ｊ．　
Ｓ．）等（１９８３〉低用量シトシンアラビノシドの連
続注入に対する前白血病症候群の応答（　Ｒｅｓｔ）Ｏ
ｎｃｅ　ｏｆｐｒｅｌｅｕｋａｅｍｉｃ　ｓｙｎｄｒｏ
ｍｅ　ｔｏ　ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ　ｉｎｒｕｓ＋ｏｎ
ｏｆ　ｌｏｗ　ｄｏｓｅ　ｃｙｔｏｓｌｎｅ　ａｒａｂ
ｉｎｏｓｉｄｅ）　、エヌ、インク、ジエイ、メド（Ｎ
．　Ｅｎａ．　Ｊ．　Ｗｅｄ．　）　３　０旦：　　１
　５９９〜１６０２］　。

他の研究的接近が過去において試みられており、そして
便宜な効果を有しなかったビタミンＤ３（１．２５−ジ
ヒドロキシビタミンＤ３〉およびレチノイック酸（１３
−シス）での開放試技が包含されている［メータ（Ｈｅ
ｈｔａ　）等、（１９８４）アルファ力リドールでの進
行性脊髄形成異常症候群の治療（Ｔｒｅａｔｓ＋ｅｎｔ
　ｏｒ　ａｄｖａｎｃｅｄｍｙｃｌｏｄｙｓｏｌａｓｔ
ｉｃ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ　ｗｉｔｈ　ａｌｒａｃａｌｉ
ｄｏｌ　）、ランセット（Ｌａｎｃｅｔ）　２　：　７
　６　１　］　．脊髄形或異常症候群に焦点をおいた最
近の０１究は、組換えヒト顆粒球一マクロファージ」ロ
ニ一一刺激因子が短期間の観察において血液学的改善を
促進しうることを示した［バドハン、ラジュ（Ｖａｄｈ
ａｎ　ｌｌａｊＳ．）等（１９８７）脊髄形或異常症候
群の患省における組換えヒト顆粒球−マクロファージコ
ロニー刺激因子の効果（ＥＨｅｃｔｓ　ｏｆ　ｒｅｃｏ
ｍｂｉｎａｎｔｈｕｌａｎ　ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ−
ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ　ｃｏｌｏｎｙｓｔｉｍｕｌａＮ
ｎｇ　ｆａｃｔｏｒ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔ
ｈｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ　ｓｙｎｄｒｏｍ’
ｅｓ　）　、エヌ、イング、ジエイ、メド（Ｍ．　Ｅｎ
ｇ．　Ｊ．　Ｈｅｄ、）３１７：１５４５〜１　５５２
］。しかしながら、他の群は逆の観察を報告し、そして
前白血病患者の群にＧＭ−ＣＳＦを投与するとき、白血
病性芽細胞はＧＭ−ＣＳＦの存在において生長を刺激さ
れつるので、また用心すべきである［ペレンガ（Ｖｅｌ
ｌｅｎｏａ，　Ｅ．）等（１９８７）急性骨髄芽球性白
血病におけるクローン形成細胞の生長を刺激するＧＭ−
ＣＳＦおよびＧ−ＣＳＦの効果（Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ
ｓ　ｏｆ　　ＧＭ　−ＣＳＦ　ａｎｄ　　Ｇ−ＣＳＦ　
　ｉｎｐｒｏｍｏＮｎｇｇｒｏｗｔｈｏｆ　ｃｌｏｎｏ
ｇｅｎｉｃ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　　ａｃｕｔｅ　ｍｙｅ
ｌｏｂｌａｓｔｉｃｌｅｕｋｅｍｉａ）　，プラッド（
Ｂｆｏｏｄ　）、６９：１７７１〜１７７６］。　本発
明の組成物はまた、特発性骨髄線維症の治療において使
用されうる。この疾病は、多能性の血液産生性先祖細胞
のクローン性拡張に関連する慢性の骨髄増殖性陣書であ
り、そして副次的骨髄線維症と結合している。決定的な
治療は、この状態のために未だ工夫されていない。臨床
的重ｍ度および生存において、顕著な可変性がある。脊
髄形或異常症候群と同様に、そして真正赤血球増加症お
よび慢性の骨髄性白血病と同様に、骨髄線維症は多能性
幹細胞に影響する疾病である。この疾病は、正常幹ＩＩ
ｉ！Ｉ１の更に過剰の増殖、幹細胞成熟における欠陥を
示す。貧血および大きな牌臓は、通常この疾病の固定し
た特徴である。

骨髄線維症の患者からのコロニー形或細胞の生長に対す
る単独およびＩＦＮ−ガンマーとのＩＦＮ−αの効果を
インビト口で研究し、そして抑制効果が得られたようで
ある［カルローステラ（Ｃａｒｌｏ−Ｓｔｅｌｌａ，　
Ｃ．　Ｅ、）等（１９８７）、骨髄異形成を有する骨髄
線維症の患者からの循環する血液産生性先祖細胞（ＣＦ
Ｕ−ＧＥＭＭ，ＣＦＵ−ＭＫ，ＢＦＬＩ−ＥおよびＣＦ
Ｕ−ＧＭ）のインビト口生艮に対する組換えアルファお
よびガンマーインターフェロンの効果（Ｅｆｆｅｃｔｓ
　ｏｒｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ａｌｐｈａ　ａｎｄ　
ｇａｍｍａ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ　ｏｎｔｈｅ　ｉ
ｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｒｏｗｔｈ　ｏｒ　ｃｉｒｃｕｌａ
ｔｉｎｇｈｅｍａｔｏｏｏｉｅｔｉｃ　ｐｒｏｇｅｎｉ
ｔｏｒ　ｃｅｌ　Ｉｓ　（　Ｃ　Ｆ　ｔＪ　−ＧＥＭＭ
，ＣＦｔＪ−ＭＫＪ８ＦＵ−Ｅａｎｄ　ＣＦＬＪ−　Ｇ
　Ｍ　）ｆｒｏａ＋　　ｐａｒｅｎｔｓ　　ｗｉｔｈ　
　ｍｙｅｌｏｒｉｂｒｏｓｉｓ１１１１ｔｔｌ　ｌｙｅ
ｌｏｉｄ　ｍｅｔａＤ＋ａｓ＋ａ）　、ブラッド（Ｂｌ
ｏｏｄ　）Ｌ旦：１０１４〜１０１９１。この群の患者
において、コロニー一形成細胞（ＣＦＵ−ＧＭＳＣＦＵ
−１ｙｌｉｘ、ｔ３ＦＵ−Ｅ）の数における増加がある
ので、患者は先祖細胞の数の減少から利益を受けつるら
しい。ＩＦＮ一αでの固体例または小ざな群のいずれか
のインビボ治療が報告されており、そして結果は非常に
元気づけるものではなかった一牌臓の大きさにおける無
応答または若干の減少があるが、骨髄抑制がＩＳＪ察さ
れた［ウィックラマシンゲ（１４ｉｃｋｒａａ＋ａｓｉ
ｎａｈｅ，　Ｓ．　Ｎ．　）等（１９８７）第１次特発
性骨Ｉ％！ｉＩ！維症におけるアルファーインターフェ
ロン（ＡＩＤｈａ　ｉｎｔｅｒ４ｃｒｏｎ　ｉｎ　ｐｒ
ｉｍａｒｙｄｉｏｐａｔｈｉｃ　ｍｙｅｌｏｒｉｂｒｏ
ｓｉｓ）　、ランセット（　Ｌａｎｃｅｔ）　、１　５
　２　４頁；ガッスル（Ｇａｓｔｌ，　Ｇ．　　）等（
１９８８）特発性骨髄線維症についてのインターフェロ
ン−アルフｐ　（　ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ａｌｐｈａ
ｆｏｒｉｅｉｏｐａｔｈｉｃ　ｍｙｅｌｏｆｉｂｒｏｓ
ｉｓ　）　、ランセット（Ｌａｎｃｅｔ）　、７　６　
５〜７　６　６頁］。

一般的に血液産生効果、そして特定的に赤血球産生効果
が血液産生を含む若干の疾病状態に特有であるかどうか
、あるいはそれが普遍的な赤血球産生活性を示すもので
あるかどうかをよりよく決定するために、ＩＦＮ一βの
効果を循環するそして骨髄の先祖細胞で調査した。非枯
渇および単核細胞枯渇検体の両方を試験した。幹ｍ胞そ
れ自体中かまたは異った環境［帰還（ｈｏｍｉｎｏ）　
１に填くかのいずれかにおける骨髄先祖に対する循環先
祖の間に生じつるであろう差に注目した。

本発明に従えば、ＩＦＮ−βは、特に低用量において、
担鉄赤芽球性および難治性貧血ならびに骨ｌｌｌｌｉＩ
！維症の患者から得た先祖細胞の生長に対し赤血球産生
効果を有することが実証された。これは、先に述べた如
く、インターフェロン類が数人の著者により、正常な血
液産生をインごトロにおいて抑制することを示されてい
るので、普遍的な観察である。

インビト口における赤血球先祖の生長に対するγＩＦＮ
−βの効果を、゛コ〇二一形或検定を使用して試験した
。検定は、細胞を半固体媒質（メチルセルロース）中で
２週間生長させることからなる。この検定においては、
赤血球先祖を生長させるために、フィトヘムアグルチニ
ンー処理リンパ球（　Ｐ　Ｈ　Ａ　−　Ｌ　Ｃ　Ｍ　）
からなる調整された媒質を、血液産生生長因子の給源と
して使用される。

γ｛　Ｌ−３を使用するとき、赤血球生長に対するＰＨ
Ａ−ＬＣＭの効果は、ほぼ完全に誼換されうる。ホルモ
ンエリスロボイエチンは成熟赤血球先祖の生長に必イ１
であり、従ってこの朗究においてすべての培養に使用し
たことを強調しなければならない。

ＢＦｔＪ−Ｅ　（破裂形成単位赤血球）と称する赤血球
前駆体の生長は、逆相（　ｉｎｖｅｒｔｅｄ）　＃１ｍ
鏡下に同定および計数することにより、そしてまた、必
要な時と場合にはコロニーを取出しそして適当な染色を
することにより追跡した。混合されたコロニーの数は、
初期先祖細胞（赤血球、そしてまた１種もしくはそれ以
上の他の血統細胞を含有する）の数を示し、そして顆粒
球／？クロファージコロニーをまた、培養物中において
評価した。

本発明を、今や次の実施例により説明する：血液産生先
祖のためのコロニー一形或培養細胞を、基本的に次の方
法により培養した：末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）を、
ヘパリン添加血液から、フィコル／ハイパック（　Ｆｉ
ｃｏｌ　Ｉ／ＨＶＩ）ａＱｕｅ）［ファルマシア（Ｐｈ
ａｒａ＋ａｃｉａ　）　］遠心分離により分離し、そし
て洗滌した。２時間後にプラスチック皿に粘着しなかっ
た細胞を、２０％（容黴／容靖）新鮮ヒト血漿（単一供
血者）、０．９％メチノレセノレ【】−ス、２０μＭ２
−メノレカブトエタノール、０．５ｔＪ／ｄにおけるエ
リスロボイエチン［ステップ■、コンノート、ラボラト
リース（Ｃｏｎｎａｕｇｈｔ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅ
ｓ）　、ウイロウデール（Ｗｉｌｌｏｗｄａｌｅ）　、
Ｏ　Ｎ　］　、および多コロニー一刺激生艮因子の給源
として７．５％（容ｆｊ！ｉ／容檜）フィトアグルチニ
ンー刺激白血球調整媒質Ｐ｝−ＩＡ−ＬＣＭ［健康な供
血者からの、ＩＭＤＭおよび１０％（容量／Ｉ量）ウシ
胎児血清中の１％フィトアグルヂニンと一当り１０６細
胞における培養の７日後の上澄液］により補強された１
０％（容潰／容Ｗ！）ウシ胎児血清を右するイスコーブ
氏改変ダルベツコ氏媒質（　Ｉｓｃｏｖｃ’ｓ　Ｍｏｄ
ｉｆｉｅｄＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　ｍｅｄｉｕｍ　）　
　［　Ｉ　Ｍ　Ｏ　Ｍギ，７−１　（Ｇｉｂｃｏ　）中
に、一当り４×１０５細胞（単核球を枯渇させた）で入
れた。コロニーの形或は、加湿５％Ｃ０２７９５％空気
中、３７℃で１４日間行った。

指示した場合、各種ＩＦＮをＯ日に加えた。組換え（ｙ
）ＩＦＮ−α−Ｃは、イー、コリ（Ｅ．　ＣＯＩ＋　）
中で産生させ、そして均一（１０９国際単位／Ｒｇ＞ま
で精製した。γＩＦＮ−βおよびγ−ＩＦＮ一ノＪンマ
は共にＣＨＯＩＩ［ｌ胞中で産生され、そして均一まで
精製した．Ｔ−細胞枯渇は、Ｅロゼット技術およびフィ
コル再遠心分離を使用することにより行った。残留単核
球および（または）Ｔ枯渇ｍ胞は、均一性につき調査し
、そして９５％以上の純度が達或された。

コロニーの分析 コロニーは、ＣＦＵ−ＧＥＭＭ　（コロニー一形或単位
一顆粒球／赤血球／マクロファージ／巳核芽球）または
ＣＦＵ−Ｍ　ｉ　ｘ，　ＣＦＵ−ＧＭ　（１口二一一形
或単位一顆粒球／マクロファージ〉およびＢＦｔＪ−ヒ
（破裂一形成単位一赤血球）として分類される。混合コ
ロニーは、１種もしくはそれ以上の血統、そして必要と
いうのではないがすべての型を含有しつる。

必要なときには、多血統＋１１１１折コ〇二一を、同定
のために微小マイクロビベットで取出し、スライド上に
拡げ、そしてライトーギムザ組織化学（ｗｒｉｇｈｔ−
Ｇｉｅｍｓａ，　ｃｙｔｏｃｈｃｍｉｓｔｒｙ）または
モノクロナール抗体で、適当に染色した。単略には、バ
ラホルムアルデヒドでの固定の後、特異モノクロナール
抗体を３０分間で加え、モしてＰＢＳで３回の洗滌の後
、第２の閥抗体（ＦＩＴＣ）を適当に加えた。細胞をつ
いで、ツアイス（Ｚｅｉｓｓ　）免疫蛍光顕微鏡を使用
して計数した。

糖蛋白質ＩＩｂ／Ｉｌ［ａのモノクロナール抗体を、巨
核芽球同定のために使用した。貯蔵コ〇二一を洗滌し、
そしてモノクロナール抗休Ｂ１　［ＣＤ２０１クールタ
ー（ＣｏｕＨｅｒ　）　］で生染色し、または固定しそ
してレフスキー（Ｅ．　Ｌ．　ＲａｅｆＳｋＶ　）等＜
１９８５）によりジェイ、イ箋ユノル（ＪＩｍｓｕｎｏ
ｌ．　）　１３５　：　２５０７　〜２５１　２に記載
された如く、ＲＦＢ７モノクロナール抗体（ＣＤ２０μ
）およびフルオレッセイン結合ヤギ抗マウスＩｑＧまた
はＩｇＭＦａｂで染色した。使用した他の抗体は、ロイ
ヤル、フリー病院（　ＲＯＩ／ａＦｒｅｅ　ｌｌｏｓｐ
ｉｔａｌ　）からのＲ　Ｆ　Ｔ−　２　（ＣＤ　７ｒ２
）抗体およびザ、ナシコナル、インスチチュート、オブ
、ヘルス（ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｎｓｔｉｔｕ
ｔｅ　ｏｆ　Ｈｅａｔｈ）からの抗−’ｒ　Ａ　Ｃモノ
クロナール抗体であった。タートレートー抵抗性酸ホス
ファターゼのための染色は、トロクーストーブ（　Ｂ．
　ｒｏｒｏｋ−Ｓｔｏｒｂ）等（１９８７）により、ブ
ラッド（Ｂｆｏｏｄ　）　６　９　：６２９〜６３３に
記載された如くであった。

担鉄赤芽球性貧血の患者５名、初期白血病のどのような
証拠もない難治性患者５名、骨髄線維症の患者８名、お
よび正常対照（骨髄および末梢血液）を含むいく人かの
患者からの血液検体および骨髄吸引物を分析した。

インターフェロン類による、各種疾病における血正常固
体、ならびにリンパ腫、慢性骨髄白血病（ＣＭＬ）およ
び毛様細胞白血病（目ＣＬ）の患者の末梢血液単核細胞
を、上記の如くインビト口で１４日間培養した。インタ
ーフェロンをＯ日に加え、そしてそれら実験に使用した
用最はアルファ、ベーターおよびガンマーＩＦＮにつき
１００Ｕ／Ｉｌ１！であった。若干の実験はまた５００
Ｕ／ｄインターフェロンで行った。結果を表Ｉに示す。

１００Ｕ／一においてさえ、ＩＦＮ−βは、ＩＦＮ−α
Ｃの如き血液産生を抑制せず、そしてＣＭＩおよび口Ｃ
Ｌの鉤方に対し、ＢＦＵ−Ｅ生長の促進効果（それぞれ
５　０　４３よび２５％）があった。かくしてＩＦＮ−
βは、１００ｔＪ／ｄを使用したときでさえも、［ＦＮ
α〜Ｃに比しより低い血液産生に対する抑制効果を有す
る。

かっこ内はコロニーの総数。

結果は、生長のバーセントを示す。正常、リンパ腫、Ｃ
ＭＬおよび目ＣＬ末梢血液からの５例が表中に示されて
いる。

正常血液産生に対するインター−ノエロン類の分化効果 正常血液産生に対するインターフェロン類の分化効果を
研究したとき、１０Ｕ／ｔｅにおいてＩＦＮ−βは血液
産生を抑制せず、そして若干の例では骨ｕ　（ＢＭ）か
らのＢＦｔＪ−ピの増７Ｊ［ｌがあることが見出された
。ＢＭ細胞生長の結果を表Ｉ［ａに示し、そして正常末
梢血液（ＰＢ）先祖細胞生長の結果を表ｎｂに示す。赤
血球生長における増加は、単核球一枯渇骨髄に対しより
顕著であった（表■〉。

表［ａ 圧常血液産生に対するインターフェロン類の分化効果正
常 ８Ｈ ｇａｍｍａ Ｊ常 ８８ ｇａｍ＋ｍａ 正常 ８Ｈ ｇａｓａ Δ１旦 正常 ＰＢ １７ ８６ ５３ ７ 正常 ＰＢ ２４ １１３ ６７ １９ Ｗ常 Ｐ８ １０ ９２ ４７ １５ 正常 ＰＢ ３１ １２２ ７３ ２６ 表■ 正常骨髄 −ＬＣＨ ２Ｕ　ｅｐｏ　＋ＬＣＨ Ｃｏｎｔｒｏ ＋ＬＣＨ　＋　ＩＩ’Ｎ−β ２Ｕ　ｅｐｏ　＋ＬＣＨ　　＋　ＩＦＮ−β＋ＬＣＨ　
＋　ｉＬ−３ ＋ＬＣＨ　＋　　ＩＦＮ　−β　＋　１Ｆ−３１ＦＮ−
β １１一３ ＩＦＮ−β（１０単位） ＩＬ−３　　（１０単位） メチノレセル臼−ス中、ＰＩ−１Δ−ＬＣＭで１４日間
培養 表■に示す実験において、エリスロボイエチン（ｅｐｏ
）の増加は、ｔ３ＦＵ−ピの増加を導かないことをまた
示した。Ｉ　Ｌ−３の効果を正常骨髄に対してまた分析
し、そしてＩＦＮ−βで得られたものおよび両者の組合
せと比較した。培養物をＰＨＡ−ＬＣＭの存在において
生艮させたとき、γ−ＩＦＮ−β（１０Ｕ／ａｅ）およ
びＩ　Ｌ−３＜１０Ｕ＃！）の添加ｉよ赤血球先祖生艮
の３倍増加を誘導した。しかしながら、培養物をＰＩ−
｛ＡＬＣＭ（多くの因子を含有づる）の不存在に４３い
て生長させるとき、ＩＦＮ−β単独は効果がなく、一方
ＩＬ−３およびＩＦＮ−βの両方の添加は、ＩＬ−３単
独と比較してＢＦＵ−Ｅ生長の２から３倍の増加を導い
た。

担鉄赤芽球性　血に　する赤血 担畝赤芽球性貧血の患者５名の末梢血液先祖細胞を研究
した。結果を表ＩＶに示す。ＩＯＵ／ｄにおけるγＩＦ
Ｎ−βは、ＢＦＵ−ＥおよびＣＦＬｊ−Ｍｉｘに対し著
しい生長促進効果を右した。ＢＦＵ−Ｅにおける増加は
６倍の大きさのものであり、そしてＣＦｔＪ−ｍｉｘに
おいて１よもつと大きかった。より低い刺激効果がＣＦ
Ｕ−ＧＭにつき観察された。我々はついで、１　０　Ｕ
　／−におけるＩＦＮ−βおよび１０Ｕ／Ｉｄ．におけ
るｌし３、ならびに両方の組合せの効果をω１究した。

表■は、両方の因子が一緒に存在するとき、増加がＢＦ
Ｕ−Ｅ生艮に対して生じることを示す。

及塁 担鉄赤芽球性貧血における末梢血液先祖細胞生長く５例
） ＨＩＸ　　　　　　ＧＨ　　　　ＢＦＵ−ＥＰＩ｛＾−
ＬＣＨ　　　　　　　　　　　　　Ｓ±　２　３２±１
０　　３±　１＋ＩＦＮ−β　　ＩＯＵ　　　　　　　
６２＋　　６　　４８＋　　６　　１８±　３＋ＩＬ−
３　　　　１０　　０　　　　　　　１８＋　　２　　
４０＋　　８　　２０＋　　５＋ＩＦＮ−β１０　Ｕ　
　　　　２６＋：　４　　６０＋　４　　３５＋　８＋
ＩＬ−３　　　　１０Ｕ 結果は、ＰＨＡ−ＬＣＭの存在において生長させた二重
複製培養物プレートのものである。ＩＦＮ一βおよびＩ
　Ｌ−３は、Ｏ日に加える。

難治性貧血に対する赤血球産生効果 芽細胞の！拠または前白血病の徴候のない難治性貧血の
患者５名の末梢血液先祖細胞を碩究した（表Ｖ）。ＰＢ
先祖細胞は、担鉄赤芽球性群における如くに生長させた
。得られた結果は、ＩＦＮ−βを１０１Ｊ／ｄに加える
とき、混合したコロ二一およびＢ　Ｆ　Ｕ　−　Ｅに対
する促進Ｚｌ長効果をまた示した。

また、殆んど添加効果が、培養物中の１シ−３およびＩ
ＦＮ一βの両者で認められた。この患者の群において、
ＢＦＬＪ−Ｈにおける増加は、担鉄赤芽球性貧血の場合
に比しより低い程度であった（６倍対２倍）。ＣＦ（Ｊ
−ＧＭの数におけるより低い増加が観察された。これは
、効果が、主に赤血球産生に関係するものでありそして
“幹細胞”に対するものではない先祖１ｌＩＩ１１の成
熟状態に対しより多い。ＣＦＬＪ−Ｍｉｘに対する増加
は、それらコロニー中に存在する赤血球成分に基く６の
であろう。

表Ｖ ガ治性貧血における末梢血液先祖細胞牛良く５例〉 ＭＩＸ　　　　　　ＧＨ　　　　ＢＦＵ−ＥＰＨＡ−Ｌ
ＣＨ　　　　　　　　　　　　　　３±　１　　１６±
　５　　６±　３＋　ＩＦＮ−β　　１０Ｕ　　　　　
　　　５＋　　２　　１８±　５　　１１＋　　３＋Ｉ
Ｌ−３　　　　１００　　　　　　　　５±　１　　　
１７＋　　４　　１２＋　　４＋ＩＦＮ−β　　ＩＯＵ
　　　　　　　　８＋　　２　　２１＋　　３　　２６
＋　　５＋ＩＬ−３　　　　１０１Ｊ （著しくではない〉の生長促進効果がしＣＭの存在にお
いて観察され、一方ＬＣＭの不存在においてＩＦＮ−β
およびＩＩ−−３の配合物での明らかな増強効果がある
。

結果は、平均値士ＳＥＭ二重複製プレートである。

すべての培養物は、Ｐ目Δ一ＬＣＭで生謄ざせる。

骨髄線　症に　する赤血球産生　果 骨髄ｌｉｌＮ症の患者８名の末梢血球を研究した。

ＬＣＭとおよびＬＣＭなしでの培養物を比較し、そして
ＩＦＮ−β、Ｉ　Ｌ−３およびそれらの配合物を研究し
た。結果（表■）は、１００ｔＪ／ｄにおけるＩＦＮ−
βが末梢血液から得られる８ＦＵ一Ｅの生長に対し抑制
的でないことを示す。僅か１，２５−ジヒドロキシビタ
ミンＤ３は骨髄線雑症の病因に関連しており、そして若
干の臨床例が若干の改善を示したので、ビタミンＤ３を
コロニー形成により測定される血液産生応答の評価に使
用した。表■は、同じ事例において等しい条件を使用し
、ＩＦＮ−βおよびビタミンＤ３を使用して得られた結
果を示す。

及１ 骨髄線維症１における末梢血液からのＢＦＵ−Ｅに対す
るＩＦＮ−βおよびビタミンＤ３の効果１３ＦＵ−ヒ（
１０５細胞当りのコロニー）因　子　　　　　　　ＬＣ
Ｍとで　ＬＣＭなしで０ １ＦＭ−β（１００） −９ ＶＩＴ　　Ｄ３（１０　　Ｍ） ０ Ｏ １２ ０ ５０ ２１ ４重い骨Ｕ線維症および貧血（ヘモグ口ビン６ｈ／ｄｌ
）および多数回輸血が必要である慢性肺疾病の患者の血
液。因子は、方法において記載した如くに加えた。結果
は二重複製培養の平均である。

混合コロニーはまたＩＦＮ一βにより増加したが、この
効果はＰ　１ｌＡ　−　Ｌ　Ｃ　Ｍの不存在においての
み明らかであった。ＩＦＮ−βの生長促進効果がここで
ＬＣＭの不存在において主にみられた理由は明らかでは
ないが、骨髄線雑症患者における袖助１ｌｌ胞による阻
害剤の産生の存在、または補助細胞およびＬＣＭにより
共に提供される過剰の因子のいずれかを指示することが
推測しうる。

混合コ目二−は顆粒球性マクロファージ先祖細胞に比し
より初期の細胞を示し、そしてまた点数をつけた。ＬＣ
Ｍを除去した培養物にＩＦＮ−βを加えたとき、混合コ
ロニーの生長を６倍促進した（表■）。

表■ 骨髄線維症における混合コロニー形成に対するｆＦＮ−
βの効果 因　　子 ＣＦＵ−ＭＩＸ ＬＣＭとで　ＬＣＭなしで ０ ２８ ３０ ＩＦＮ−β（１００） 一〇 ＶＩＴ　　Ｄ３（１０ Ｈ〉 ２Ｉ ３６ １１８ Ｎ１ 細胞は、一当り１０５細）抱で入れた。コロニーを同定
し、そして計数した。混合コロニーを微小バスツールビ
ベットで取出し、そして染色した。結果は、二重複製の
平均である。

患者の治療 臨床指標、身体的知見たとえば骨髄線維症における拡大
した牌臓、ならびに末梢血液塗沫標本および計数におけ
る典型的知見により診断される担鉄赤芽球性貧血、難治
性貧血、慢性のＰｒｕ性白血病または骨髄線維症の患者
を治療のために選択し、診断は骨生検によりそれら障害
において通遇する典型的特徴によって常に確認した。鉄
蓄積および環状の担鉄赤芽球のための染色を、定常的に
遂行する。

担鉄赤芽球性および難治性貧血、または骨髄線維症の患
者について、明白な白血病の不存在、Ｂ１２の不存在ま
たは菓ｌ塩欠乏、および過去６ケ月における細胞毒性治
療なしは、治療に含めるために要求され、そして診断方
向の１部分を形或する。重い糖尿病またはある大きざの
知られた高感受性の患者は除外される。品質証明（ｈａ
ｌｌｅ＋ａｒｋｓ　）は、効果のない血液産生、末梢血
液血球減少症および細胞過多骨髄を包含する。

治療の期間は、予備スケジュールとして、最初の月は毎
日、ついで１週に２回で、２白万甲位（２ＭＵ）の用量
において、少くとも３〜４ケ月の筋肉内ＩＦＮ−β注射
である。治療の継続は、患者の応答に依存する。治療の
間に著しい実験的異常を発現する患者は継続しない。

患者の完全な歴史および身体的試験を包含する予備治療
評価を遂行する。データーは、１日の生活を送る彼等の
能力、病気の期間、悪化の時間、輸血の必及性、輸血間
の遅延時間（　ｌａａ　ｔｉｍｅ）、化学療法およびア
ンドロゲンに対する応答（貧血の改善のために投与）、
出血傾向および感染を包含づる。

治療の間、最初の週は１日間隔で、その後４ケ月間は１
遍間毎に行われた血液計数および分化計数；骨髄吸引物
の血液塗抹標本、治療開始時および４ケ月後におけるト
レフイン（　ｔｒｅｐｈｉｎｃ）骨生検；１週間毎に行
われる腎Ｊ３よびＩｎ機能を評価する生化学的拭験、こ
の期間を通して臨床的に必要でなければ、治療前および
４ケ月後の肺機能およびＸ線を包含するいくつかの実験
室試験が行われる。牌臓の大きさはスキャンニングによ
り確認し、そして２ケ月毎に行う。

疾病の重さは、輸血の必要性の頻度およびヘモグロビン
水準により等級分けする。心臓および肺の能力（ＥＫＧ
および肺機能）を治療開始前および第１週の間に追跡す
る（心臓不整詠について追跡）．， 患者は担当の医師による再調査のために、第１週入院し
、そして彼等の心ＲＲ能そしてまた可能な逆反応を追跡
する。網状赤血球数を最初の４週間毎日チＩツクし、そ
してまた上記の血液試験を第１週の間毎日、その後最初
の４′ｉＡ間は１週間毎に、ついで１ケ月毎に行う。

治療に先立ち、そＬ・て２ケ月後に、血液および骨髄を
上記になした如く、インごトロ研究においてＩｊｉ究し
、即ちＩＦＮ一βに対する応答を包含する血液産ｌＩＥ
インビトロ機能を評価し、そして結果は統計的分析［マ
ン、ホイットニーＵ試験（　ＨａｎｎＷｈｔｔｎｅｙ　
Ｌｌ　ｔｅｓｔ　）　］により、予報における真正性の
ために補正する。

治療は、身体領域に依存し、Ｉ＋：ｘ−β、２メガ単位
の筋肉内洋銅を包含し、治療の最初の月は毎日投与され
、ついで川黴は１週間２回に減少される。

副作用は、もしもあれば登録ざれ、そして治療は、治療
に帰因する主要な副作用が認められるならば停止される
。もしも主襞な副作用がないならば、治療の継続または
停止の決定は、治療の４ケ月後になされる。輸血は、も
しも必要ならば、臨床判定、即ち低ヘモグロビン水準に
起因する呼吸困難および不快に基き与えられる。血圧お
よび詠拍は自動的に追跡される。

治療の有効性は、次の基準により評価される：１−ヘモ
グロビン水準、赤血球数および網状赤血球数、そしてま
た白血球および血小板数２一輸血の必要性における減少 ３一輸血の中断期間の短縮化 ４一臨床的総体症状の主観的改善、弱さの減少、よりよ
い遂行性 ５一治療の前後に行われる骨生検により評価される血液
産生の比較。ｍ胞充実性および前駆体の型は、赤血球産
生と共に追跡される。

事例１ ６年間ヒドレア（　ｈｙｄｒｅａ　）　　（ヒドロキシ
尿素〉およびマイレラン（ｍｙｌｅｒａｎ　）　　［ブ
スルファン（Ｂｕｓｓｕｌｒａｎ　）　］を包含する通
常の化学療法により制御された慢性層における慢性骨髄
性白血病（ＣＭＬ）の５７才の男性患者が、この治療に
難治性となり、そしてチオグアニンおよびサイトサール
（ＣＶｔＯＳａｒ　）のような他の化学療法剤に応答し
なかった。白血病性芽細胞の出現を有する、知られてい
る遷移性侵襲層の発現、および巨大牌臓に起因する歩行
不能を有する増加した不快、および輸血を必要とする燻
い貧血の故に、患者はついで、赤血球産生応答を示す実
験室試験に基きｒＦＮ−ベーター［インターファーム、
ラボラトリーズ、リミテッド（　Ｉｎｔｅｒ　Ｐｈａｒ
ｍ　ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓＬｔｄ．）、イスラエル
］で治療した。彼の臨床応答は、白球数の減少、末梢血
液からの白血病性芽細胞の消失、１０〜１１ｇ／ｄｌへ
のヘモグロビンの増加、輸血をもはや必要としないこと
および牌臓の大きざの顕著な減少を有して素晴しいもの
であった。患者は間もなく彼の通常の活性に戻り、そし
て数ケ月間単一治療として２ＭＵＩＦＮ−べ一ターを１
週間５日供与され続けた。

治療に先立つ実験室試験は、次の結果を示した：ヘモグ
ロビン７９／旧、ＷＢＣ　　８１０００、芽細胞８〜１
０％、未或熟骨髄１１１Ｊ）ｌ；前骨髄球３％、骨髄球
１０％、後ｎ髄球１４％、分節４０％、穿刺（ｓｔａｂ
ｓ　）　１　０％、好酸球２％、好塩基球８％、単核球
２％、リンパ球４％。血小板数は、７００．０００／＃
ｌ３に達した。彼の臨床状態は劣化し、患者は部分的に
すい弱の故に、部分的に貧血および巨大牌臓の両方に起
因する増加した呼吸困難の故に、歩くことができなくな
った。

患者は、ＩＦＮ−ベータ−［病院のヘルシンキ委員会（
ｔｈｅ　Ｈｅｌｓｉｎｋｉ　Ｃｏｍｉｔｔｅｅ　）およ
びザ、ミニストリー、オブ、ヘルス（ｔｈｅ　Ｍｉｎｉ
ｓｔｒｙ　ｏｆＨｅａｌｔｈ）の認可後］を１日当り２
６万単位（２ＭＵ）の用量で１週間に６日、およびマイ
レラン（ブスルファン）２■／日経口を供与され始めた
。２ケ月後に、彼の一般的な感じは改善し、彼は歩くこ
とおよび彼の１日の活動を行うことが可能となり、輸血
のめ聾性は消失し、そして毒性の徴候は全くなかった。

観察された唯一の副作用は、インターフェロンγｈ療に
酋通の非常に緩和な流感様症候群であり、それは２週間
のビタミンＣおよびバラセタモールで制御された。実験
全試験は１１．４９／旧まで前進的に生じるヘモグロビ
ンの増加、１０，０００／ｓｒ３への白血球の減少、正
常血小板数１　６０．０００／馴３、および分化白血球
数中の芽細胞なしを示した。分化数は典型的な慢性？ｌ
ＣＭＬに留まり、そして好塩基球は観察されなかった。

身体的試験で最も穎著な知見は、３ｃｍ（以前：２７ｃ
ｍ）への牌臓、そして３ｃｍ（以前：１４ｃｍ）への肝
臓の減少であった。

事例２ ６６才の女性患者が、ヒドロキシ尿素に対し難治性の巨
大芽球性変形（極めてまれな事例である〉を有する肝臓
における骨髄性異形成〈巨大な肝肥大〉の牌摘出後骨Ｗ
Ａ線維症８年の極めて普通でない経歴を示し、重いすい
弱および呼吸困難でほぼ１週間毎の輸血を必要とした。

１臼ａ３きてのノ［常に低用量のマイレラン（プスルフ
ァン〉２■と一緒での１日当りＩＦＮ−ベーター筋肉内
２自万単位の組合せでの治療は、彼女の一般的状態を改
善し、披女の肝拡大を緩和に減少し、そしで巨核芽球の
消失を促した。３％から８％への網状赤血球数の増加は
、若干の赤血球成熟が生じたことを示した（　Ｌ　［）
　ＩＩ水準が減少し、モして溶血の徴候が存在しなかっ
たので〉。改善は明らかであり、そして治療を継続した
。

本発明の実施における多数の辺形および変化が、この技
術分野において熟練している者に思い浮ぶことが期待さ
れる。ここに記載された態様は説明のためのちのであり
、そして限定の意味におけるものではないと解釈される
べきである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）赤血球への先祖血球の成熟の欠乏により特徴づけ
   られる障害における赤血球産生の刺激のための活性成分
   として、ヒトインターフェロン−βからなる医薬組成物
   。 （２）脊髄形成異常症候群の治療のための、請求項１記
   載の医薬組成物。 （３）貧血の治療のための、請求項１記載の医薬組成物
   。 （４）担鉄赤芽細胞性貧血の治療のための、請求項１記
   載の医薬組成物。 （５）難治性貧血の治療のための、請求項１記載の医薬
   組成物。 （６）骨髄線維症の治療のための、請求項１記載の医薬
   組成物。 （７）慢性骨髄単核細胞性白血病の治療のための、請求
   項１記載の医薬組成物。 （８）慢性骨髄性白血病の治療のための、請求項１記載
   の医薬組成物。 （９）慢性の感染性障害により生じる貧血の治療のため
   の、請求項１記載の医薬組成物。（１０）リウマチ性関
   節炎により生じる貧血の治療のための、請求項１記載の
   医薬組成物。 （１１）ヒト天然インターフェロン−βを含有する、上
   記請求項のいずれかに記載の医薬組成物。 （１２）組換えインターフェロン−βを含有する、請求
   項１から１０までに記載の医薬組成物。 （１３）組換えインターフェロン−βがチャイニーズハ
   ムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞により産生される、請求項
   １２記載の医薬組成物。 （１４）低用量において使用される、上記請求項のいず
   れかに記載の医薬組成物。 （１５）用量が１から３ＭＵインターフエロン−βであ
   る、請求項１４記載の医薬組成物。 （１６）用量が２ＭＵである、請求項１５記載の医薬組
   成物。 （１７）インターロイキン−３をまた含有する、上記請
   求項のいずれかに記載の医薬組成物。