JPH03145496A - オリゴ糖誘導体 - Google Patents
オリゴ糖誘導体Info
- Publication number
- JPH03145496A JPH03145496A JP28278389A JP28278389A JPH03145496A JP H03145496 A JPH03145496 A JP H03145496A JP 28278389 A JP28278389 A JP 28278389A JP 28278389 A JP28278389 A JP 28278389A JP H03145496 A JPH03145496 A JP H03145496A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- oligosaccharide
- formula
- glucanase
- oligosaccharide derivative
- endo
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
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- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は新規なオリゴ糖誘導体を提供するものであり、
さらに本発明はその様な化合物の製造法を提供するもの
である。
さらに本発明はその様な化合物の製造法を提供するもの
である。
（従来の技術）
ラミナリオリゴｍ＜β−１，３位で結合されたグルコー
スの特に２〜１０個の重合度をもった糖化合物）は公知
の化合物で、製法、生理作用などが公知（特開昭６１−
９２５８９号公報、特開昭６２−１６３６８５号公報と
して）である、しかし本発明の硫酸化したオリゴ糖誘導
体はこれまで知られていない新規糖化合物である。
スの特に２〜１０個の重合度をもった糖化合物）は公知
の化合物で、製法、生理作用などが公知（特開昭６１−
９２５８９号公報、特開昭６２−１６３６８５号公報と
して）である、しかし本発明の硫酸化したオリゴ糖誘導
体はこれまで知られていない新規糖化合物である。
（発明が解決しようとする課題）
本発明は生理活性、特に抗ウィルス作用を有した新規糖
化合物であるオリゴ糖誘導体を提供するものである。
化合物であるオリゴ糖誘導体を提供するものである。
（課題を解決するための手段）
一般式（１）（式中のｎは０〜８の整数でありＲはＨま
たは５０３Ｍであり、Ｍはアルカリ金属またはＮＨ４で
ある。〉で表わされるオリゴ糖誘導体はラミナリオリゴ
糖を１ｉｊ！酸化剤によりＩＩＭ化して得られる。
たは５０３Ｍであり、Ｍはアルカリ金属またはＮＨ４で
ある。〉で表わされるオリゴ糖誘導体はラミナリオリゴ
糖を１ｉｊ！酸化剤によりＩＩＭ化して得られる。
（構成）
ラミナリオリゴ糖とはグルコース（Ｇ）を楕戒糖とし、
各々β−１，３位で２〜１０個程度結合した水溶性の糖
である。その具体例としては、ラミナリビオース（Ｇ２
）、ラミナリトリオース（Ｇ ）、ラミナリテトラオー
ス（Ｇ４）、ラミナリペンタオース（Ｇ５）、ラミナリ
ヘキサオース（Ｇｅ）、ラミナリヘブタオース（Ｇ７）
、ラミナリオクタオース（Ｇ８）、ラミナリノナオース
（Ｇ ）、ラミナリデカノース＜Ｇｌｏ）等であり る。 ラミナリオリゴ糖は、β−１，３グリコジル糖化
合物を酵素的に加水分解することにより重合度２以上の
ものが得られる。更にラミナリペンタオースのみを酵素
的に得る方法についても本発明者らにより開示してきた
（特開昭６１−９２５８９号公報）、すなわち、その方
法は、β−１゜３グリコジル糖化合物、例えばカードラ
ン、バキマン、ラミナラン、酵母細胞壁に、β−１，３
グリカナーゼを作用させて重合度２以上のラミナリオリ
ゴ糖を得る方法であり、又ストレプトマイセス属より得
られたβ−１，３グルカナーゼを用いてラミナリオリゴ
糖を得る方法である。
各々β−１，３位で２〜１０個程度結合した水溶性の糖
である。その具体例としては、ラミナリビオース（Ｇ２
）、ラミナリトリオース（Ｇ ）、ラミナリテトラオー
ス（Ｇ４）、ラミナリペンタオース（Ｇ５）、ラミナリ
ヘキサオース（Ｇｅ）、ラミナリヘブタオース（Ｇ７）
、ラミナリオクタオース（Ｇ８）、ラミナリノナオース
（Ｇ ）、ラミナリデカノース＜Ｇｌｏ）等であり る。 ラミナリオリゴ糖は、β−１，３グリコジル糖化
合物を酵素的に加水分解することにより重合度２以上の
ものが得られる。更にラミナリペンタオースのみを酵素
的に得る方法についても本発明者らにより開示してきた
（特開昭６１−９２５８９号公報）、すなわち、その方
法は、β−１゜３グリコジル糖化合物、例えばカードラ
ン、バキマン、ラミナラン、酵母細胞壁に、β−１，３
グリカナーゼを作用させて重合度２以上のラミナリオリ
ゴ糖を得る方法であり、又ストレプトマイセス属より得
られたβ−１，３グルカナーゼを用いてラミナリオリゴ
糖を得る方法である。
又これらラミナリオリゴ糖をＷｌｔ酸化する方法も従来
の技術を応用することにより調製できる（Ｋ。
の技術を応用することにより調製できる（Ｋ。
Ｈａｔａｎａｋａ ｅｔａｌ、Ｊ、Ｍｅｄ、ｃ−ｈｅ
ｍ、１９８７．Ｖｏ １．３０．Ｎｏ、５．８１０−８
１４．特許公告６３−０５４２８２号及び公告６３−０
５４２８３号）、即ちそれらの方法は、ジメチルスルホ
キシド（ＤＭＳＯ）に溶解させた該ラミナリオリゴ糖に
ピペリジン−Ｎ−硫酸を加え、加熱しながら反応させる
ものである。
ｍ、１９８７．Ｖｏ １．３０．Ｎｏ、５．８１０−８
１４．特許公告６３−０５４２８２号及び公告６３−０
５４２８３号）、即ちそれらの方法は、ジメチルスルホ
キシド（ＤＭＳＯ）に溶解させた該ラミナリオリゴ糖に
ピペリジン−Ｎ−硫酸を加え、加熱しながら反応させる
ものである。
又これらの化合物の構造を基本的に有する誘導体も従来
技術や慣用技術を応用して調製することができる。
技術や慣用技術を応用して調製することができる。
（実施例〉
以下実施例により本発明をより具体的に説明する。
実施例１
■エンド型 −ｌ ３グル ナーゼの
ストレプトマイセス・マテンシスＤＩＣ−１０８（微工
研菌寄第６５９３号）を酵母エキス０゜２ ｗ ／ ｖ
％、ポリペプトン０．２ ｗ／ ｖ％、Ｍｇ５Ｏ−７Ｈ
ＯＯ，１ｗ／ｖ％、Ｋ２ＨＰ２ ０４ ０ 、２ ｖｖ ／ ｖ％からなる培地３５リツ
トルに植菌し、同時に別殺菌したカードラン３５０ｇを
加えて７０リツトルジヤーにて３５゛Ｃで４０時間通気
撹拌培養した。得られた培養液２３リツトルを遠心分離
してその上８２液を硫安０．６５飽和で塩析し、エンド
型β−１，３グルカナーゼ活性を有した粗酵素標品を得
た。これを０．０１Ｍ酢酸バッファー（ｐＨ５，０）に
て溶解した（この時タンパク濃度を５ｍｇ／ｍ１以下に
調製する）溶液を栓付三角フラスコに入れトルエン−滴
を加えて、４５℃のウォーターバス中で一昼夜放置した
。熱処理した酵素液中にはエキソ型β−１，３グルカナ
ーゼ活性はまったく見られず、エンド型β−１，３グル
カナーゼが約２５．０００単位得られた。
研菌寄第６５９３号）を酵母エキス０゜２ ｗ ／ ｖ
％、ポリペプトン０．２ ｗ／ ｖ％、Ｍｇ５Ｏ−７Ｈ
ＯＯ，１ｗ／ｖ％、Ｋ２ＨＰ２ ０４ ０ 、２ ｖｖ ／ ｖ％からなる培地３５リツ
トルに植菌し、同時に別殺菌したカードラン３５０ｇを
加えて７０リツトルジヤーにて３５゛Ｃで４０時間通気
撹拌培養した。得られた培養液２３リツトルを遠心分離
してその上８２液を硫安０．６５飽和で塩析し、エンド
型β−１，３グルカナーゼ活性を有した粗酵素標品を得
た。これを０．０１Ｍ酢酸バッファー（ｐＨ５，０）に
て溶解した（この時タンパク濃度を５ｍｇ／ｍ１以下に
調製する）溶液を栓付三角フラスコに入れトルエン−滴
を加えて、４５℃のウォーターバス中で一昼夜放置した
。熱処理した酵素液中にはエキソ型β−１，３グルカナ
ーゼ活性はまったく見られず、エンド型β−１，３グル
カナーゼが約２５．０００単位得られた。
尚ここで言うエンド型β−１，３グルカナーゼ活性の１
単位とは、０．ＯＩＭのリン酸バッファー（ｐＨ６，０
＞にカードラン１重量％を懸濁させそれに適量の酵素を
加えて水で５．０ｍｌとし４５°Ｃで反応させる。この
条件で１時間に１ｍｇのグルコースに相当する還元力を
生成する酵素量をいう。
単位とは、０．ＯＩＭのリン酸バッファー（ｐＨ６，０
＞にカードラン１重量％を懸濁させそれに適量の酵素を
加えて水で５．０ｍｌとし４５°Ｃで反応させる。この
条件で１時間に１ｍｇのグルコースに相当する還元力を
生成する酵素量をいう。
■ラミナリオリゴ枦の調
カートン５０ｇをＯ，０１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ６
，０）１．０リツトルにて懸濁させ、実線円１１の■で
得られたエンド型β−１，３グル力ナーゼ２００単位を
加えて４５℃で２時間分解反応を行った０分解反応後の
組成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて
分析したところ、０１３．７％、ＧＯ，５％、Ｇ４１１
．０％、３ ０４８．９％、Ｇ ２．８％、Ｃ７２，８％、６ その他０．３％のラミナリオリゴ糖組成物が得られた。
，０）１．０リツトルにて懸濁させ、実線円１１の■で
得られたエンド型β−１，３グル力ナーゼ２００単位を
加えて４５℃で２時間分解反応を行った０分解反応後の
組成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて
分析したところ、０１３．７％、ＧＯ，５％、Ｇ４１１
．０％、３ ０４８．９％、Ｇ ２．８％、Ｃ７２，８％、６ その他０．３％のラミナリオリゴ糖組成物が得られた。
尚ＨＰＬＣによるラミーナリオリゴ糖の分離条件は カ
ラム： Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ−ＮＨ５ｍ μ溶媒ニア
セトニトリル：水＝ （６０：４０）流速： １．５
ｍｌ／ｍｉｎ 温度： ３０℃ で行った。（第１図参照） この組成物を活性炭カラムに吸着させ、５％エタノール
で溶出するとグルコースとラミナリビオース（Ｇ２）は
溶出され、０３以上のラミナリオリゴ糖は５０％エタノ
ール溶液で溶出して回収できる。
ラム： Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ−ＮＨ５ｍ μ溶媒ニア
セトニトリル：水＝ （６０：４０）流速： １．５
ｍｌ／ｍｉｎ 温度： ３０℃ で行った。（第１図参照） この組成物を活性炭カラムに吸着させ、５％エタノール
で溶出するとグルコースとラミナリビオース（Ｇ２）は
溶出され、０３以上のラミナリオリゴ糖は５０％エタノ
ール溶液で溶出して回収できる。
実施例２ ラミナリベンタ −スの
実施例１で用いたと同様の菌株を同条件で培養し、その
培養液を６５％硫安飽和として沈澱を回収した。透析後
、０．０１Ｍトリス−ＭＣＩ緩衝液で平衡化したＤＥＡ
Ｅ−セファデックスＡ−２５カラムの未吸着区分を回収
することによりβ−１，３−グルカナーゼＦｉＩを得た
。ついでカードラン（ｎ＝５５０、和光純薬工業株式会
社製）５０ｇを１リツトルのＯ，０１Ｍ酢酸バッファー
に懸濁させ、該酵素液２００単位を添加後、４５℃で２
４時間反応させた０反応液より未反応カードランを濾過
して取り除き、上清液は凍結乾燥を行った。その結果３
４．５ｇの粗うミナリペンタオースを得た。′＃ｉラミ
ナリベンタオースをエタノールを用いて再結晶法より精
製を行い純度９５％以上の精製ラミナリベンタオース２
３．８ｇを得た。
培養液を６５％硫安飽和として沈澱を回収した。透析後
、０．０１Ｍトリス−ＭＣＩ緩衝液で平衡化したＤＥＡ
Ｅ−セファデックスＡ−２５カラムの未吸着区分を回収
することによりβ−１，３−グルカナーゼＦｉＩを得た
。ついでカードラン（ｎ＝５５０、和光純薬工業株式会
社製）５０ｇを１リツトルのＯ，０１Ｍ酢酸バッファー
に懸濁させ、該酵素液２００単位を添加後、４５℃で２
４時間反応させた０反応液より未反応カードランを濾過
して取り除き、上清液は凍結乾燥を行った。その結果３
４．５ｇの粗うミナリペンタオースを得た。′＃ｉラミ
ナリベンタオースをエタノールを用いて再結晶法より精
製を行い純度９５％以上の精製ラミナリベンタオース２
３．８ｇを得た。
実施例２で調製したラミナリベンタオース（以ｆ！ Ｌ
Ｐと略す）０．５ｇをあらかじめ乾燥させたジメチル
スルホキシド（以後ＤＭＳＯと略す）（２０ｍｌ＞に溶
解し、ピペリジン−Ｎ−硫酸（以後ＰＳＡと略す）（２
，３２ｇ＞を加え撹拌し１０％過剰の２．５Ｎ水酸化ナ
トリウム水溶液で中和し、濃縮する。メタノールを加え
て沈澱したオリゴ糖を水に溶解して、イオン交換樹脂に
よる生成、濃縮、凍結乾燥して硫酸化ラミナリペンタオ
ース（ＬＰＳ−１） ０．８１ ｇを得た。このＬＰＳ
−１の物性値は次に示す通りである。
Ｐと略す）０．５ｇをあらかじめ乾燥させたジメチル
スルホキシド（以後ＤＭＳＯと略す）（２０ｍｌ＞に溶
解し、ピペリジン−Ｎ−硫酸（以後ＰＳＡと略す）（２
，３２ｇ＞を加え撹拌し１０％過剰の２．５Ｎ水酸化ナ
トリウム水溶液で中和し、濃縮する。メタノールを加え
て沈澱したオリゴ糖を水に溶解して、イオン交換樹脂に
よる生成、濃縮、凍結乾燥して硫酸化ラミナリペンタオ
ース（ＬＰＳ−１） ０．８１ ｇを得た。このＬＰＳ
−１の物性値は次に示す通りである。
［α］＝＋３．１° （Ｃ１，Ｈ２Ｏ）Ｃ＝１６．３２
％ Ｈ＝２．６５％ ５＝１６．６％
％ Ｈ＝２．６５％ ５＝１６．６％
第１図はエンド型β−１３グルカナーゼで得られたラミ
ナリオリゴ糖のＨＰＬＣチャートである。第２図はβ−
１，３グルカナーゼＦｉＩによりカードランを分解して
得られたラミナリベンタオースのＨＰＬＣチャートであ
り、数字は各々１゜タオース ６．ラミナリオクタオー
スを示す第３図はラミナリペンタオースの２次元Ｎ Ｍ
Ｒのチャートを示す、第４図の上図は硫酸化ラミナリ
ベンタオースの１３０−ＮＭＲのチャートであり下図の
ラミナリベンタオースの１３Ｃ−ＮＭＲのチャートと比
較した。
ナリオリゴ糖のＨＰＬＣチャートである。第２図はβ−
１，３グルカナーゼＦｉＩによりカードランを分解して
得られたラミナリベンタオースのＨＰＬＣチャートであ
り、数字は各々１゜タオース ６．ラミナリオクタオー
スを示す第３図はラミナリペンタオースの２次元Ｎ Ｍ
Ｒのチャートを示す、第４図の上図は硫酸化ラミナリ
ベンタオースの１３０−ＮＭＲのチャートであり下図の
ラミナリベンタオースの１３Ｃ−ＮＭＲのチャートと比
較した。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中のｎは０〜８の整数であり、ＲはＨまたはＳＯ＿
３Ｍであり、その少なくとも１つはＳＯ＿３Ｍであり、
Ｍはアルカリ金属またはＮＨ＿４である。） で表されるオリゴ糖誘導体 ２、一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中のｎは０〜８の整数であり、ＲはＨまたはＳＯ＿
３Ｍであり、その少なくとも１つはＳＯ＿３Ｍであり、
Ｍはアルカリ金属またはＮＨ＿４である。） で表されるオリゴ糖誘導体を製造するに、ラミナリオリ
ゴ糖を硫酸化剤によつて硫酸化するオリゴ糖誘導体の製
造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP28278389A JP2956090B2 (ja) | 1989-10-30 | 1989-10-30 | オリゴ糖誘導体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP28278389A JP2956090B2 (ja) | 1989-10-30 | 1989-10-30 | オリゴ糖誘導体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03145496A true JPH03145496A (ja) | 1991-06-20 |
| JP2956090B2 JP2956090B2 (ja) | 1999-10-04 |
Family
ID=17657025
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP28278389A Expired - Fee Related JP2956090B2 (ja) | 1989-10-30 | 1989-10-30 | オリゴ糖誘導体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2956090B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1992003453A1 (en) * | 1990-08-23 | 1992-03-05 | Dainippon Ink & Chemicals, Inc. | Antiviral agent |
| JPH11504018A (ja) * | 1995-04-28 | 1999-04-06 | ジ・オーストラリアン・ナショナル・ユニバーシティ | 硫酸化オリゴ糖の製造および使用 |
| EP0722326A4 (en) * | 1993-10-07 | 1999-10-06 | Glycomed Inc | HIGHLY SULFATED MALTOOLIGOSSACCHARIDES WITH HEPARIN-LIKE PROPERTIES |
-
1989
- 1989-10-30 JP JP28278389A patent/JP2956090B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1992003453A1 (en) * | 1990-08-23 | 1992-03-05 | Dainippon Ink & Chemicals, Inc. | Antiviral agent |
| EP0722326A4 (en) * | 1993-10-07 | 1999-10-06 | Glycomed Inc | HIGHLY SULFATED MALTOOLIGOSSACCHARIDES WITH HEPARIN-LIKE PROPERTIES |
| JPH11504018A (ja) * | 1995-04-28 | 1999-04-06 | ジ・オーストラリアン・ナショナル・ユニバーシティ | 硫酸化オリゴ糖の製造および使用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2956090B2 (ja) | 1999-10-04 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |