JPH03147790A - プラスミド - Google Patents
プラスミドInfo
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- JPH03147790A JPH03147790A JP1284836A JP28483689A JPH03147790A JP H03147790 A JPH03147790 A JP H03147790A JP 1284836 A JP1284836 A JP 1284836A JP 28483689 A JP28483689 A JP 28483689A JP H03147790 A JPH03147790 A JP H03147790A
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- Japan
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- dna
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
- C12N15/75—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora for Bacillus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
- C12P19/28—N-glycosides
- C12P19/38—Nucleosides
- C12P19/40—Nucleosides having a condensed ring system containing a six-membered ring having two nitrogen atoms in the same ring, e.g. purine nucleosides
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、オキセタノシン生産菌、バチルメガテリウム
ＮＫ８４−０２１８株（ＦＥＲＭ ＢＰ−９１９）か
ら得られる新規プラスミドに関する。
ＮＫ８４−０２１８株（ＦＥＲＭ ＢＰ−９１９）か
ら得られる新規プラスミドに関する。
オキセタノシン及びその生産菌は特開昭６１−２９３９
９２号により知られている。
９２号により知られている。
しかしその生産菌がプラスミドを保有することは知られ
ていない。
ていない。
染色体外遺伝子であるプラスミドは、インビトロの遺伝
子組換えにおけるベクトルとして、昨今の遺伝子工学に
おいて広く用いられている。一方、抗生物質生産菌にお
いては、その生産菌とプラスミドのと関連が、しばしば
指摘されている。
子組換えにおけるベクトルとして、昨今の遺伝子工学に
おいて広く用いられている。一方、抗生物質生産菌にお
いては、その生産菌とプラスミドのと関連が、しばしば
指摘されている。
従って、オキセタノシン生産菌の保有するプラスミドを
解析する事によって、生産菌における遺伝子操作系の構
築や、生産性の向上といった生産菌の育種に新しい道が
開かれるものと考えられる。
解析する事によって、生産菌における遺伝子操作系の構
築や、生産性の向上といった生産菌の育種に新しい道が
開かれるものと考えられる。
そこで、本発明者らは、オキセタノシン生産菌バチルス
メガテリウムＮＫ８４−０２１８株より、プラスミドを
分離、精製する方法について検討した結果、本発明に到
達した。
メガテリウムＮＫ８４−０２１８株より、プラスミドを
分離、精製する方法について検討した結果、本発明に到
達した。
即ち、本発明の要旨は、オキセタノシン生産菌、バチル
スメガテリウムＮＫ８４−０２１８株から、分離され、
制限酵素ＮｏｔＩ。
スメガテリウムＮＫ８４−０２１８株から、分離され、
制限酵素ＮｏｔＩ。
ＸｈｏＩ及びＳｍａＩで切断されず、制限酵素ＰｓｔＩ
で切断されて、２５キロベース、１１キロベース、９．
５キロベース及び６．０キロベースのＤＮＡ断片を与え
る事で特徴づけられる、約５１．５キロベースの環状プ
ラスミドに関する。
で切断されて、２５キロベース、１１キロベース、９．
５キロベース及び６．０キロベースのＤＮＡ断片を与え
る事で特徴づけられる、約５１．５キロベースの環状プ
ラスミドに関する。
更に、本発明の詳細な説明する。バチルスメガテリウム
ＮＫ８４−０２１８株から、プラスミドを分離するには
、まず、菌体を温和に破壊して、プラスミドＤＮＡを選
択的に、抽出する。これを、エチジウムブロマイド存在
下で、塩化セシウムの密度勾配遠心法にかける。いわゆ
る閉じた環状ＤＮＡであるプラスミドは、染色体断片の
直鎖状ＤＮＡより重いバンドを与えるので、これを分取
する。
ＮＫ８４−０２１８株から、プラスミドを分離するには
、まず、菌体を温和に破壊して、プラスミドＤＮＡを選
択的に、抽出する。これを、エチジウムブロマイド存在
下で、塩化セシウムの密度勾配遠心法にかける。いわゆ
る閉じた環状ＤＮＡであるプラスミドは、染色体断片の
直鎖状ＤＮＡより重いバンドを与えるので、これを分取
する。
具体的には、はぼ、Ｊ、Ｂａｃｔｅ’ｒｉａ１．１２
１４８７〜１４９７に記載の方法に準するが、ただ、密
度は、１、 ５９〜１．６０ ｇ／７ｎｌに合わせる。
１４８７〜１４９７に記載の方法に準するが、ただ、密
度は、１、 ５９〜１．６０ ｇ／７ｎｌに合わせる。
こうして得たＤＮＡを０．８％のアガロースゲル電気泳
動にかけ、分子量が最も大きく、移動度の遅いプラスミ
ドをアガロースより分取する。こうして得られたプラス
ミドは、新規であり、後記実施例で示す様に制限酵素Ｎ
ｏ ｔ １．Ｘｈｏ Ｉ及びＳｍａ Ｉで切断されず、
制限酵素ＰｓｔＩで切断されて、２５キロベース、１１
キロベース、９．５キロベース及び６．０キロベースの
ＤＮＡ断片を与える事で特徴づけられる、約５１．５キ
ロベースの環状プラスミドであり、オキセタノシン生産
に関与していると考えられる。
動にかけ、分子量が最も大きく、移動度の遅いプラスミ
ドをアガロースより分取する。こうして得られたプラス
ミドは、新規であり、後記実施例で示す様に制限酵素Ｎ
ｏ ｔ １．Ｘｈｏ Ｉ及びＳｍａ Ｉで切断されず、
制限酵素ＰｓｔＩで切断されて、２５キロベース、１１
キロベース、９．５キロベース及び６．０キロベースの
ＤＮＡ断片を与える事で特徴づけられる、約５１．５キ
ロベースの環状プラスミドであり、オキセタノシン生産
に関与していると考えられる。
以下、本発明を′実施例に従って説明する。
■ プラスミドの製造法
ｌｌ中に２５ｇのビールインフュージョンブース（デイ
フコ社製）、５ｇの酵母エキス（Ｄｉｆｃｏ社製）及び
１０ｇの乳糖を含む培地（ｐＨ＝７．１） ５０−を５
００１１Ｔｌ容の三角コルベンに仕込み、１２０℃で１
０分間殺菌した。これにＹＳ培地（酵母エキス０．２％
、デキストリン１％、寒天１．５％）上で生育したオキ
タノシン生産菌バチルスメガテリウムＮＫ８４−０２１
８株を一白金耳接種し、ロータリーシェイカー（１８０
ｒｐｍ）を用いて３５℃で培養した。約ｌｌの培養液か
ら遠心沈降（５０００ｒｐｍ、１０分）により菌体を集
め、これを２０−のＧＴＥ溶液（５０ｍＭグルコース、
２５ｍＭ Ｔｒｉｓ （８，０）、１０ｍＭ ＥＤ
ＴＡ）に懸濁後、２０７１１１／ｍ７！のりゾチーム（
シグマ社製）溶液２７Ｉ７！を加え、水中で３０分間イ
ンキヨベーションした。次いで、４０Ｔｄ！の０ 、
２ Ｎ ＮａＯＨ−１％ＳＤＳ溶液を加え、水中で５
分放置後、３０−の３Ｍ酢酸ナトリウム溶液（ｐＨ＝４
．８）を加え、更に、水中で３０分間放置した。
フコ社製）、５ｇの酵母エキス（Ｄｉｆｃｏ社製）及び
１０ｇの乳糖を含む培地（ｐＨ＝７．１） ５０−を５
００１１Ｔｌ容の三角コルベンに仕込み、１２０℃で１
０分間殺菌した。これにＹＳ培地（酵母エキス０．２％
、デキストリン１％、寒天１．５％）上で生育したオキ
タノシン生産菌バチルスメガテリウムＮＫ８４−０２１
８株を一白金耳接種し、ロータリーシェイカー（１８０
ｒｐｍ）を用いて３５℃で培養した。約ｌｌの培養液か
ら遠心沈降（５０００ｒｐｍ、１０分）により菌体を集
め、これを２０−のＧＴＥ溶液（５０ｍＭグルコース、
２５ｍＭ Ｔｒｉｓ （８，０）、１０ｍＭ ＥＤ
ＴＡ）に懸濁後、２０７１１１／ｍ７！のりゾチーム（
シグマ社製）溶液２７Ｉ７！を加え、水中で３０分間イ
ンキヨベーションした。次いで、４０Ｔｄ！の０ 、
２ Ｎ ＮａＯＨ−１％ＳＤＳ溶液を加え、水中で５
分放置後、３０−の３Ｍ酢酸ナトリウム溶液（ｐＨ＝４
．８）を加え、更に、水中で３０分間放置した。
これを、８０００ｒｐｍ、１５分間の遠心沈降にかけ、
得られた上清に、当量のフェノール：クロロホルム（１
： １）液を加え、ゆるやかに１０分間、振盪し、蛋白
を変性させた（フェノール抽出と以下言う。）これを、
遠心分離（１２０００ｒｐｍ、１０分間）し、得られた
上層をとり、これに２倍量のエタノールを加え、−２０
℃で一夜冷却した。これを８００Ｏｒｐｍ、１５分間遠
心沈降し、ＤＮＡを沈澱させ、減圧乾燥後、終濃度１０
０μｇ／−のりボヌクレアーゼＡ（シグマ社製）を含む
ＴＥ温溶液１０ｍＭ Ｔｒ ｉ ｓ（７，０）。
得られた上清に、当量のフェノール：クロロホルム（１
： １）液を加え、ゆるやかに１０分間、振盪し、蛋白
を変性させた（フェノール抽出と以下言う。）これを、
遠心分離（１２０００ｒｐｍ、１０分間）し、得られた
上層をとり、これに２倍量のエタノールを加え、−２０
℃で一夜冷却した。これを８００Ｏｒｐｍ、１５分間遠
心沈降し、ＤＮＡを沈澱させ、減圧乾燥後、終濃度１０
０μｇ／−のりボヌクレアーゼＡ（シグマ社製）を含む
ＴＥ温溶液１０ｍＭ Ｔｒ ｉ ｓ（７，０）。
１ｍＭ ＥＤＴＡ）４−に溶解し、３７°Ｃで３０分
間処理した。前述の方法で、再度、フェノール抽出した
後、得られた上層（水層）にｌ／１０容の３Ｍ酢酸ナト
リウム溶液（ｐＨ・４．８）と２倍量のエタノールを加
え、−２０℃で数置した後、遠心沈降（１２００Ｏｒｐ
ｍ、１０分）により、ＤＮＡを沈澱させた（以下エタノ
ール沈澱という。）。
間処理した。前述の方法で、再度、フェノール抽出した
後、得られた上層（水層）にｌ／１０容の３Ｍ酢酸ナト
リウム溶液（ｐＨ・４．８）と２倍量のエタノールを加
え、−２０℃で数置した後、遠心沈降（１２００Ｏｒｐ
ｍ、１０分）により、ＤＮＡを沈澱させた（以下エタノ
ール沈澱という。）。
これを、４−のＴＥ温溶液溶解し、３７°Ｃで３０分間
保温後、５ｍｇ／−のエチジウムブロマイド溶液２０８
μｌと、塩化セシウム４．２ｇを加え、密度を１．５９
５に合わせた後、５００００ｒｐｍ、１６時間、パーテ
ィカルローターで遠心分離した。染色体ＤＮＡの下に出
現したＤＮＡのバンドを１９ゲージの注射針を用いて、
分取し、イソプロパツールでエチジウムブロマイドを２
回抽出除去した後、１１のＴＥｌ溶液対して透析して、
プラスミドＤＮＡ標品を得た。
保温後、５ｍｇ／−のエチジウムブロマイド溶液２０８
μｌと、塩化セシウム４．２ｇを加え、密度を１．５９
５に合わせた後、５００００ｒｐｍ、１６時間、パーテ
ィカルローターで遠心分離した。染色体ＤＮＡの下に出
現したＤＮＡのバンドを１９ゲージの注射針を用いて、
分取し、イソプロパツールでエチジウムブロマイドを２
回抽出除去した後、１１のＴＥｌ溶液対して透析して、
プラスミドＤＮＡ標品を得た。
この標品を４０ｍＭＴｒｉｓ−酢酸（８，０）１ｍＭ
ＥＤＴＡの泳動バッファーを用いて、０．８％のアガ
ロースゲル電気泳動にかけ、最も移動度の遅いプラスミ
ドのバンドをゲルごとナイフで切りだし、これを、極少
量（２ｃｃ）のバッファーを含む透析チューブ内へ移し
、再び、電気泳動にかけ、ゲルからＤＮＡを溶出した。
ＥＤＴＡの泳動バッファーを用いて、０．８％のアガ
ロースゲル電気泳動にかけ、最も移動度の遅いプラスミ
ドのバンドをゲルごとナイフで切りだし、これを、極少
量（２ｃｃ）のバッファーを含む透析チューブ内へ移し
、再び、電気泳動にかけ、ゲルからＤＮＡを溶出した。
ＤＮＡの溶出液は前述の方法でエタノール沈澱後、約５
０−のＴＥｌ溶液溶解した。この操作により、目的とす
るプラスミドＤＮＡが得られた。
０−のＴＥｌ溶液溶解した。この操作により、目的とす
るプラスミドＤＮＡが得られた。
２）プラスミドの制限酵素切断解析
得られたプラスミドＤＮＡ０．５μｇに、Ｘｈｏ Ｉ、
Ｎｏ ｔ Ｉ、Ｓｍａ Ｉ及びＰｓｔｌ（いずれも蜜酒
造製）を別個にｌＯユニットづつ加え、３７℃、５時間
処理した。反応はＸｈｏＩ及びＰｓｔＩでは、終濃度１
０ｍＭＴｒ ｉ ｓ （７，５） 、７ｍＭ ＭｇＣ
１ｚ、１００ｍＭ ＮａＣ１，１ｍＭ ２−メルカ
トエタノールのバッファー中で、ＮｏｔＩでは、ＮａＣ
１濃度を１５０ｍＭに変えた以外は同一のバッファー中
で、ＳｍａＩでは、ＮａＣ１を２０ｍＭ ＫＣＩに変
えた以外は同一のバッファー中で行った。反応終了後、
これらを０．２％アガロースゲル電気泳動にかけ、エチ
ジウムブロマイドで染色して、切断されたＤＮＡ断片を
検出した。ＤＮＡ断片のサイズは、同時に泳動した標準
ＤＮＡ （ラムダファージＤＮＡ（ＩＩ酒造製）及びラ
ムダファージＤＮＡのＨｉｎｄｌＩＩ切断物及びＡｐａ
Ｉ切断物の移動度との比較で決定した。
Ｎｏ ｔ Ｉ、Ｓｍａ Ｉ及びＰｓｔｌ（いずれも蜜酒
造製）を別個にｌＯユニットづつ加え、３７℃、５時間
処理した。反応はＸｈｏＩ及びＰｓｔＩでは、終濃度１
０ｍＭＴｒ ｉ ｓ （７，５） 、７ｍＭ ＭｇＣ
１ｚ、１００ｍＭ ＮａＣ１，１ｍＭ ２−メルカ
トエタノールのバッファー中で、ＮｏｔＩでは、ＮａＣ
１濃度を１５０ｍＭに変えた以外は同一のバッファー中
で、ＳｍａＩでは、ＮａＣ１を２０ｍＭ ＫＣＩに変
えた以外は同一のバッファー中で行った。反応終了後、
これらを０．２％アガロースゲル電気泳動にかけ、エチ
ジウムブロマイドで染色して、切断されたＤＮＡ断片を
検出した。ＤＮＡ断片のサイズは、同時に泳動した標準
ＤＮＡ （ラムダファージＤＮＡ（ＩＩ酒造製）及びラ
ムダファージＤＮＡのＨｉｎｄｌＩＩ切断物及びＡｐａ
Ｉ切断物の移動度との比較で決定した。
この結果、Ｘｈｏ Ｉ、Ｎｏ ｔ Ｉ及びＳｍａ Ｉで
は、切断されず、ＰｓｔＩでは、２５キロベース、１１
キロベース、９．５キロベース及び６．０キロベースの
ＤＮＡ断片が出現した。これより、このプラスミドのサ
イズは、約５１．５キロベースである事が判明した。
は、切断されず、ＰｓｔＩでは、２５キロベース、１１
キロベース、９．５キロベース及び６．０キロベースの
ＤＮＡ断片が出現した。これより、このプラスミドのサ
イズは、約５１．５キロベースである事が判明した。
本発明のプラスミドは次の実験から明らかなようにオキ
セタノシンの生産に関与していると考えられる。
セタノシンの生産に関与していると考えられる。
実験例
■ プラスミド脱落味の作製
ＴＢＡＢ培地（デイフコ社製）で−晩培養したバチルス
メガテリウムＮＫ８４−０２１８株を５０７ｎｌのペナ
ッセイ培地（デイフコ社製）に０．０．ｓｓａ ＝ ０
．０８となる様に植え、３７°Ｃで培養した。０．Ｄ、
ｅｓ。＝０．４となったところで、低速遠心（５０００
ｒｐｍ、５分）で集菌し、５７ｎｌのＳＭＭＰバッファ
ー（１Ｍショ糖−０，０４Ｍリンゴ酸−０，０４Ｍ
Ｍ ｇ ＣＩ ！ （ｐＨ・６．５）溶液とデイフコ
アンタイバイオチクメディウムＮｏ、 ３ ７０ｇ／
ｌ溶液の等置屋合物）に懸濁し、ゆっくり振盪しながら
３７℃で、リゾチーム処理（２００μｇ／７ｎＩりを２
時間行った。
メガテリウムＮＫ８４−０２１８株を５０７ｎｌのペナ
ッセイ培地（デイフコ社製）に０．０．ｓｓａ ＝ ０
．０８となる様に植え、３７°Ｃで培養した。０．Ｄ、
ｅｓ。＝０．４となったところで、低速遠心（５０００
ｒｐｍ、５分）で集菌し、５７ｎｌのＳＭＭＰバッファ
ー（１Ｍショ糖−０，０４Ｍリンゴ酸−０，０４Ｍ
Ｍ ｇ ＣＩ ！ （ｐＨ・６．５）溶液とデイフコ
アンタイバイオチクメディウムＮｏ、 ３ ７０ｇ／
ｌ溶液の等置屋合物）に懸濁し、ゆっくり振盪しながら
３７℃で、リゾチーム処理（２００μｇ／７ｎＩりを２
時間行った。
低速遠心（３０００ｒ ｐ ｍ、 ２分）で、形成した
プロトプラストを集め、５−のＳＭＭＰバッファーで洗
浄後、再びＳＭＭＰバッファーに懸濁した。これを適当
に希釈して、ＤＭ３平板培地（０，５％グルコース、０
．５％酵母エキス、０．５％カザミノ酸、０．５Ｍコハ
ク酸ナトリウム（ｐＨ＝７．３）、２０ ｍＭ Ｍ
ｇ ＣＩ ！ 、０．３５％Ｋ ２ ＨＰ Ｏ４０，１
５％ＫＨｚＰＯ４０，０１％血清アルブミン、０．８％
寒天）に塗布した。３７℃で２日培養し、出現したコロ
ニーを分離し、実施例１に従って、プラスミドを分離し
た。この結果、親株では、実施例１のようにプラスミド
が得られたのに対し、プロトプラスト再生味では、アガ
ロースゲル電気泳動で、最も移動度の遅いプラスミドの
みが、消失していた。
プロトプラストを集め、５−のＳＭＭＰバッファーで洗
浄後、再びＳＭＭＰバッファーに懸濁した。これを適当
に希釈して、ＤＭ３平板培地（０，５％グルコース、０
．５％酵母エキス、０．５％カザミノ酸、０．５Ｍコハ
ク酸ナトリウム（ｐＨ＝７．３）、２０ ｍＭ Ｍ
ｇ ＣＩ ！ 、０．３５％Ｋ ２ ＨＰ Ｏ４０，１
５％ＫＨｚＰＯ４０，０１％血清アルブミン、０．８％
寒天）に塗布した。３７℃で２日培養し、出現したコロ
ニーを分離し、実施例１に従って、プラスミドを分離し
た。この結果、親株では、実施例１のようにプラスミド
が得られたのに対し、プロトプラスト再生味では、アガ
ロースゲル電気泳動で、最も移動度の遅いプラスミドの
みが、消失していた。
■ プラスミド脱落味のオキセタノシン生産性プラスミ
ド脱落味と、その親株について、実施例１の方法で培養
を行ない、この時のオキセタノシンＡの生産性を調べた
。ブロースの遠心上清（ｌｏｏｏｏｒｐｍ、１０分）に
、１０倍量のメタノールを加えた後、遠心沈降（１００
００ｒｐｍ、１０分）し、得られた上清をＨＰＬＣで分
析した。
ド脱落味と、その親株について、実施例１の方法で培養
を行ない、この時のオキセタノシンＡの生産性を調べた
。ブロースの遠心上清（ｌｏｏｏｏｒｐｍ、１０分）に
、１０倍量のメタノールを加えた後、遠心沈降（１００
００ｒｐｍ、１０分）し、得られた上清をＨＰＬＣで分
析した。
その結果、親株では生産性が認められたのに対しプラス
ミド脱落味では、全く、オキセタノシンの生産が認めら
れなかった。
ミド脱落味では、全く、オキセタノシンの生産が認めら
れなかった。
以上の結果から本発明のプラスミドは、オキセタノシン
生産に強く関与しており、オキセタノシン生産菌の分子
生物学的育種に極めて有用である事が判明した。
生産に強く関与しており、オキセタノシン生産菌の分子
生物学的育種に極めて有用である事が判明した。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 オキセタノシン生産菌バチルスメガテリウ ムＮＫ８４−０２１８株より、分離され、制限酵素Ｎｏ
ｔＩ、ＸｈｏＩ及びＳｍａＩで切断されず、制限酵素Ｐ
ｓｔＩで、切断されて２５キロベース、１１キロベース
、９．５キロベース及び６．０キロベースのＤＮＡ断片
を与える事で特徴づけられる、約５１．５キロベースの
環状プラスミド。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1284836A JPH03147790A (ja) | 1989-11-02 | 1989-11-02 | プラスミド |
| EP90119815A EP0427014A1 (en) | 1989-11-02 | 1990-10-16 | Plasmid |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1284836A JPH03147790A (ja) | 1989-11-02 | 1989-11-02 | プラスミド |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03147790A true JPH03147790A (ja) | 1991-06-24 |
Family
ID=17683643
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1284836A Pending JPH03147790A (ja) | 1989-11-02 | 1989-11-02 | プラスミド |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0427014A1 (ja) |
| JP (1) | JPH03147790A (ja) |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4332898A (en) * | 1980-05-22 | 1982-06-01 | The Upjohn Company | Hybrid plasmid and process of making same |
-
1989
- 1989-11-02 JP JP1284836A patent/JPH03147790A/ja active Pending
-
1990
- 1990-10-16 EP EP90119815A patent/EP0427014A1/en not_active Ceased
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0427014A1 (en) | 1991-05-15 |
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