JPH0315760A - 免疫学的測定法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 く産業上の利用分野〉 本発明は免疫学的測定法に関する。更に詳細には、臨床
検査等の分野で使用され、抗原又は抗体が固定化された
不溶性担体を用いて検体中の微量成分を測定する免疫学
的測定法に関する。

く従来の技術及び発明が解決しようどする課題〉免疫学
的測定法は、抗原抗体反応の特異性を利用して、生体成
分（例えば、抗原、抗体、ハプテン、ホルモン等）、薬
剤等の微量成分を測定する方法であり、信頼性及び測定
精度が高いうえ、種々の抗原に対する抗体が容易に取得
し得ること等から、微量生体成分等の測定（定ｊｌ）法
として広く用いられている。このような免疫学的測定広
としては、使用される標識物質の差異により、放射免疫
測定法（Ｒ　Ｉ　Ａ法）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ法）
、螢光免疫測定法（ＦＩＡ法）等が知られている。

免疫学測定法には、その測定様式の差異により、抗原抗
体反応物と非反応物との分Ｍ操作（いわゆるＢ／Ｆ分離
）を必要とする方法と、Ｂ／Ｆ分離を必要としない方法
がある。Ｂ／Ｆ分離を必要としない方法は測定操作が簡
便ではあるが、検体中の測定対象物質が極微量の場合に
は測定精度が劣り、適切な方法とはいえない。かかる問
題から、Ｂ／Ｆ分離を行う方法が汎用されるが、この方
法の一種として、抗原又は抗体を固定化した不溶性担体
を用いてＢ／Ｆ分離を行う固相法が知られている。固相
法は、抗原抗体反応を固相上で行い、標識物質を含む抗
原抗体反応物を固相上に結合させる方法、抗原抗体反応
を液相で行い、標識物質を含む抗原抗体反応物を生成さ
せ、次いで該反応生成物を固相上に結合させる方法等に
より行われる。標識物質を含む抗原抗体反応物は固相上
に固定化されているので、反応終了後、担体を水洗する
方法、遠心分離法等により、容易にＢ／Ｆ分離を行うこ
とができ、操作が簡便であると共に測定精度の向上が図
れる。

かかる固相法で用いられる不溶性担体としては、プラス
チック（例えば、ボリスチレン等）やガラス等の材質か
らなり、板状、粒状、チューブ状などの形状のものが汎
用され、これらの担体に抗原又は抗体を結合させること
が行われている。

しかし、このような不溶性担体は、比表面積が小さく、
担体に結合できる抗原又は抗体の量や濃度が限られてお
り、十分量の抗原又は抗体を固定化するには多量の不溶
性担体を必要とする。その結果、検体と反応させる際に
、担体全体に検体が接触できるように検体を希釈して液
量を増やすことが必要となる。そのため抗原抗体反応が
緩慢に進行し、長時間の反応時間（通常、数時間〜１日
程度）を要するという問題がある。

このような問題を解決するため、従来よりセファロース
、アガロース、セルロース、濾紙等を不溶性担体に用い
て、抗原又は抗体を比較的多量に固定化する方法が知ら
れている。しかしながら、この場合、担体上への非特異
的結合に起因するブランクの測定値の上昇、いわゆるバ
ックグランドの上昇が認められ、その結果、Ｓ／Ｎ比が
低くなり、測定感度が低下するという問題がある。

本発明は上記の従来技術の欠点を解消するために創案さ
れたもので、本発明者らが種々の検討を重ねた結果、不
溶性担体を改良することにより、反応時間を短縮し得る
と共にＢ／Ｆ分離を効率的に行うことができ、更にバッ
クグランドが低下し、測定感度を向上させ得ることを見
出して完成したもので、本発明の目的は測定精度及び感
度に優れると共に迅速測定を可能にする免疫学的測定法
を提供することにある。

く課題を解決するための手段〉 上記の課題を解決すべくなされた、本発明の免疫学的測
定法は、抗原又は抗体（以下、便宜上、免疫反応性物質
という）が固定化された不溶性担体を用いる免疫学的測
定法であって、該免疫反応性物質が固定化された不溶性
担体がプロッキング剤で処理されていると共に不溶性担
体が多孔性プラスチックからなることを特徴とするもの
である。

上記構成からなる本発明の免疫学的測定法には、免疫反
応性物質が固定化された不溶性担体を用いる方法であれ
ばいずれの測定法（例えば、放射免疫測定法、酵素免疫
測定法、螢光免疫測定法等）も包含される。また、上記
各測定法において、測定様式として、例えば、競合法、
サンドイッチ法、固定化第二抗体を用いる方法などの様
々な方法が知られているが、これらのいずれの方法も包
含される。これらの免疫学的測定法及びその実施方法に
ついては、石川ら編「酵素免疫測定法」（１９７８年医
学書院刊行）、入江編「ラジオイムノアッセイＪ　　（
１９７４年講談社刊行）等に詳細に記載されている。不
溶性担体上に固定化される免疫反応性物質（すなわち、
抗原又は抗体）としては、検体中の測定対象物質が抗原
、ハブテン等の場合にはその抗体が、また測定対象物質
が抗体の場合にはその抗原が固定化される。

また、本発明においては、不溶性担体として多孔性プラ
スチックが用いられており、使用される多孔性プラスチ
ックとしては、水性溶媒に対して不溶性且つ非膨潤性を
示す材質であればいずれのものも使用することができ、
孔径としては０．１〜２００μｍのものがよい。また、
多孔性プラスチックは、その表面にアミノ基、スルホ基
、カルボキシ基、チオール基等の官能基が導入されてい
てもよく、これらの官能基の導入は慣用の方法にて行う
ことができる。更に、多孔性プラスチックは相互に連絡
した空隙構造を有する通水性材料であることが好ましい
。かかる通水性の多孔性プラスチックを用いることによ
り、担体の洗浄をフロ一方式にて行うことができ、バッ
チ方式による担体の洗浄よりも、高効率且つ容易にＢ／
Ｆ分離を行え、測定精度の向上及び測定時間の短縮化に
寄与でき、また標識物質の種類によっては、標識活性の
測定もフロ一方式により行うことができるという利点を
有する。

上記の多孔性プラスチックからなる不溶性担体上への免
疫反応性物質の固定化は、物理化学的方法（例えば、吸
着法、イオン結合法等）、化学結合を介する方法等が挙
げられる。

物理化学的方法による固定化は、０．０１〜ＩＭ程度の
適当な緩衝岐に免疫反応性物質を溶解し、ここに不溶性
担体を、室温又は冷却下、１〜１０時間程度浸漬し、次
いで水又は緩衝液で十分に洗浄することにより行われる
。

一方、化学結合を介する方法としては、結合剤を用いる
方法、結合性を有する物質対を用いる方法等が挙げられ
る。上記結合剤を用いる方法における結合剤としては、
例えば、グルタルアルデヒド、マロンジアルデヒド、ス
クシンジアルデヒド等のジアルデヒド類；ヘキサメチレ
ンジイソシアネート等のジイソシアネート類；Ｎ，Ｎ−
−ｏ−フェニレンジマレイミド、Ｎ，Ｎ−−ｍ−フェニ
レンジマレイミド等のジマレイミド類．Ｎ，Ｎ−一ジシ
クロへキシルカルボジイミド、Ｎ一エチル−Ｎ−−　（
３−ジメチルアミノブロビル）カルボジイミド等のカル
ボジイミド類などが挙げられる。

これらの結合剤を用いることにより、免疫反応性物質と
不溶性担体上の官能基とを反応させて結合させることが
できる。この反応は慣用の方法にて行うことができ、例
えば、千畑編「固定化酵素」（１９７５年講談社刊行）
等に記載されている。

また、上記の結合性を有する物質対を用いる方法におけ
る物質対としては、例えば、アビジンービオチン対、コ
ンカナバリンＡ一糖類対等が挙げられ、これらは極めて
強固な非共有結合対を形成することが知られている。こ
の方法をアビジンービオチン対の例をもって説明すると
、まず、結合対の一方の物質（例えば、アビジン）を不
溶性担体に固定化（例えば、吸着法、上記の結合剤を用
いる方法等）し、一方、物質対の他方の物質（すなわち
ビオチン）を免疫反応性物質に固定化（例えば、上記の
結合剤を用いる方法等）しておく。

次いで、この両者を反応させると、アビジンとビオチン
が結合対を形成するので、該アビジンービオチン結合を
介して免疫反応性物質が不溶性担体上に固定化される。

なお、不溶性担体上に固定化される免疫反応性物質の量
は特に限定されず、担体の空隙率、測定対象物質の種類
及び濃度、測定法の扛類等により適宜調整することがで
き、また固定化量の調整は、不溶性担体と反応させる際
の免疫反応性物質溶液の濃度、結合剤の使用量等を適宜
選択することにより行うことができる。

かくして、免疫反応性物質が固定化された不溶性担体は
プロッキング剤で処理し、免疫反応性物質の非固定化部
をプロツキングする。ここで使用されるプロツキング剤
としては、目的とする免疫反応に関与しないものであれ
ばいずれのものも使用でき、例えば、脱脂粉乳、牛血清
アルブミン、ゼラチン及びその加水分解物、カゼイン及
びその加水分解物、デキストラン、ポリエチレングリコ
ール等が挙げられ、特に脱脂粉乳及び牛血清アルブミン
が好ましい。上記のブロッキング剤による不溶性担体の
処理は、例えば、０．５〜１０、好ましくは３〜５　（
Ｖ／Ｖ）％程度のブロッキング剤水溶液（又は分散液）
中に不溶性担体を浸漬し、ブロッキング剤を不溶性担体
上に吸着させ、次いで水洗することにより行われる。こ
れらのブロッキング剤を不溶性担体に吸着させ、免疫反
応性物質が固定化されていない箇所をブロッキングする
ことにより、免疫反応における非特異的反応を抑制する
ことができ、バックグランドを低下させることができる
。

次に、不溶性担体として、上記の処理がなされた多孔性
プラスチックを用いる本発明の免疫学的測定法を、より
詳細に説明する。

その一例として、サンドイッチ法による免疫学的測定法
を用いて、測定対象物質としての抗原を測定（定ｆｌ）
する例をもって説明する。この方法においては、抗体が
固定化されると共にブロッキング剤で処理された多孔性
プラスチックからなる不溶性担体に、測定対象物質であ
る抗原を含有する検体を加え、検体中の抗原を不溶性担
体上の抗体で捕捉し、洗浄することによりＢ／Ｆ分離を
行う。次いで、担体に標識化抗体を加え、担体上に捕捉
された抗原をサンドイッチ状に挟み、過剰の標識化抗体
を洗浄により除去し、Ｂ／Ｆ分離を行う。かくして、標
識化抗体を含む抗原抗体反応物を担体上に固定化し、固
定化された標識化抗体の標識活性を測定する。一方、上
記の抗原含有検体の代わりに、濃度既知の抗原標準試料
を用いて、同様な方法により標識活性を測定し、抗原濃
度に対する標識活性の標準曲線（検量線）を作戊する。

この標準曲線と抗原含有検体の標識活性とを対比するこ
とにより、抗原含有検体中の抗原量を定量することがで
きる（以下、便宜上、測定法Ｉという）。

また、他の例として、第二抗体固体化担体を用いた競合
法に基いて、抗原（測定対象物質）の測定（定量）法を
説明する。この方法においては、測定対象物質である抗
原を含有する検体と一定量の標識化抗原とを第一抗体（
測定対象物質である抗原に対する抗体）に対して競合反
応させる。次いで第二抗体（第一抗体に対する抗体）が
固定化されると共にブロッキング剤で処理された多孔性
プラスチックからなる不溶性担体を加え、標識化抗原を
含む抗原抗体反応物を担体上に固定化し、水洗すること
により、Ｂ／Ｆ分離を行う。かくして固定化された標識
化抗原の標識活性を測定する。

一方、上記の抗原含有検体の代りに、濃度既知の抗原標
準試料を用いて、同様な方法により標識活性を測定し、
抗原濃度に対する標識活性の標準曲線を作成する。この
標準曲線と抗原含有検体の標識活性とを対比することに
より、抗原含有検体中の抗原量を定量することができる
（以下、便宜上、測定法■という）。

上記の測定法Ｉ及び■において、不溶性担体上に固体化
される抗体、標識化される抗体及び第二抗体は、ポリク
ローナル抗体（抗血清）及びモノクローナル抗体のいず
れであってもよく、またＦ（ａｂ−）２画分も使用する
ことができる。これらの抗体は従来から慣用の方法にて
得ることができる。なお、測定対象物質がハプテン等の
免疫原性のない物質の場合には、アルブミン、グロプリ
ン、ヘモグロビン等の慣用のキャリャーと結合させて免
疫抗原を調製した後、常法の抗体産生法により抗体を得
ることができる。

また、標識化抗体及び標識化抗原は公知の方法にて調製
することができ、例えば、標識が酵素の場合には、前述
の結合剤を用いて酵素と抗体（又は抗原）とを反応させ
ることにより得られる。標１２５ 識が放射性物質、例えば、　　　■の場合には、常法の
クロラミンＴ法、ラクトバーオキシダーゼと過酸化水素
を用いる酵素法等により、抗体（又は抗原）を標識化す
ることができる。更に、標識が螢光物質の場合には、上
記の酵素標識と同様な方法にても行うことができるが、
螢光物質をマイクロカプセル中に封入し、このマイクロ
カプセルと抗体（又は抗原）とを吸着法、化学結合法等
により結合させて標識化する方法が好ましい。

標識活性の測定は、標識の種類に応じて適宜の方法が用
いられ、例えば、標識が放射性物質の場合にはその放射
能をカウントすることにより行われ、また標識が酵素の
場合には該酵素の基質を作用させ、常広に従って該基質
の減少量若しくは酵素反応生成物の増加量又はそれらの
変化速度を、吸光度測定等の方法で求めることにより行
われる。

かかる標識酵素と基質の組み合わせの例としては、例え
ば、バーオキシダーゼと過酸化水素及び０−フエニレン
ジアミンとの組み合わせ、β−ガラクトシダーゼと０−
ニトロフエニルーβ一Ｄ−ガラクトシドとの組み合わせ
、アルカリホスファターゼとｐ−ニトロホスフエートと
の組み合わせ等が挙げられる。標識が螢光物質の場合に
は、螢光強度測定等により行われる。

なお、上記の測定法■及び■は、本発明の測定法のある
種の態様を示したものであり、これらの方法に限定され
るものではなく、測定対象物質等に応じて適宜変更する
ことができる。例えば、測定法■において、測定対象物
質として抗体を測定するには、抗原固定化担体及び標識
化抗原を用いればよく、また同様に、測定法Ｈにおいて
は、第−抗体の代りに抗原を用いると共に標識化抗体を
用いればよい。

次に、本発明の免疫学的測定法の一例を、サンドイッチ
法を用いた酵素免疫測定法により、測定対象物質として
の抗原を測定する例に基き、より具体的に説明する。

まず、抗体固定化担体を作製する。抗体固定化担体の作
製は、抗体又はそのＦ（ａｂ−）ｚ画分を１０〜２００
μｇ／１１程度となるように、適当な緩衝液（例えば、
０．１Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７程度）に溶解し、この溶
液に多孔性プラスチックを室温又は冷却下に０．５〜１
０時間、好ましくは１〜３時間程度浸漬した後、水又は
緩衝液で洗浄し、次いで、３〜５％（Ｗ／Ｖ）程度の濃
度のプロツキング剤溶液に室温又は冷却下に０．５〜５
時間、好ましくは１〜３時間程度浸漬した後、水又は緩
衝液で洗浄することにより行われる。

次いで、かくして得られた抗体固定化担体を用いて抗原
を測定する。この測定操作としては、まず、測定対象物
質である抗原を含有する検体をそのまま又は適当な緩衝
液で濃度調整をした後、該担体に加え、検体中の抗原を
担体上の抗体で捕捉する。この反応は、冷却下〜加温下
、通常、室温程度で行われ、１〜１０分間程度、通常、
２〜５分間程度で終了する。次いで、該担体を適当な緩
衝岐で洗浄してＢ／Ｆ分離を行った後、適当な濃度の酵
素標識抗体溶液を添加し、担体上に固定化された抗原と
反応させることにより、酵素標識抗体を担体上に固定化
する。この反応は、冷却下〜加温下、通常、室温程度で
行われ、１〜１０分間程度、通常、２〜５分間程度で終
了する。かくして、酵素標識抗体を含む抗原抗体反応物
が固定化された担体は、緩衝液で洗浄することによりＢ
／Ｆ分離を行う。Ｂ／Ｆ分離された担体に、酵素の基質
溶液を添加し、所定時間（通常、１〜１０分間程度）反
応させた後、基質の減少量、酵素反応生成物の増加量等
を吸光度測定等の方法で測定し、担体上の標識酵素の酵
素活性を測定する。得られた測定値に基き、予め作成し
た標準曲線から、検体中の抗原量を求めることができる
。なお、標準曲線の作成は、上記の測定方法において、
検体の代りに濃度既知の抗原標準試料を用い、同様な操
作により酵素活性を求め、抗原濃度に対して酵素活性を
プロットすることにより得られる。

なお、上記の測定法において、Ｂ／Ｆ分離、酵素活性の
測定等は、不溶性担体として通水性材料を用いることに
より、フロ一方式により行うこともできる。また、使用
される緩衝液、反応時間、反応温度等は、測定対象物質
、標識酵素の種類等により、適宜選択することができる
。

本発明の免疫学的測定法は種々の微量成分の測定（定量
）に用いることができ、測定対象物質としては、例えば
、α−フエトプロテイン、Ｃ反応性蛋白、ガン胎児性抗
原、ハブトグロビン、免疫グロブリン類等の血清蛋白質
、インスリン、甲状腺刺激ホルモン、成長ホルモン等の
ホルモン、ステロイドホルモン、ＨＢｓ抗原等のウイル
ス抗原、カナマイシン、テオフィリン等の薬剤などが挙
げられ、これらの物質を含む検体としては、例えば、血
清、血漿、尿、髄液、リンパ液等が挙げられる。

く発明の作用・効果〉 本発明の免疫学的測定法においては、不溶性担体として
多孔性プラスチックが用いられており、比表面積が大き
いので、担体上に免疫反応性物質を多量（高濃度）に固
定化できる。従って、検体を高度に希釈することなく、
抗原抗体反応を行うことができ、その結果、反応は短時
間に進行し迅速な測定を行うことができる。特に、多孔
性プラスチックは透水性に優れると共に耐圧性も良好な
ので、Ｂ／Ｆ分離を容易且つ高効率で行うことができる
。また、多孔性プラスチックは加工性に優れるので種々
の形態の担体とすることができる。

更に、濾紙担体等を使用すると微細の剥離片がノイズと
なるが、多孔性プラスチックはかかる剥離片を生じない
ので、ノイズの発生を防止できる。

また、本発明で用いられる多孔性プラスチック担体は、
ブロッキング剤により処理されているので、非特異的結
合が抑制され、測定精度の向上に寄与できると共にブラ
ンクの測定値の上昇を防ぎ、バックグランドを低下させ
ることができるので、Ｓ／Ｎ比が向上し、高感度で測定
を行うことができる。

従って、本発明の免疫学的測定法によれば、短時間に測
定が終了し、測定精度及びハ１定感度を著しく向上させ
ることができるという効果を奏し、反応の迅速性、Ｂ／
Ｆ分離の容易性等から、自動分析化にも適した測定法で
ある。

く実施例〉 以下、実施例に基き本発明をより詳細に説明するが、本
発明はこれらの実施例に限定されるものではない。

実施例１ （１）抗体固定化担体の作製 多孔性担体として市販のプラスチック製多孔性担体（ボ
アーレックス社製、Ｘ−４８９７、厚さ１．６ｍｍ）を
約１５ＣＩｌｌＸ１０ＣＩ＋の大きさに裁断し、水洗し
た後、抗Ｃ反応性蛋白（ＣＲＰ）抗体のＦ（ａｂ）ｚ画
分を１００ｕｇ／ｘｉ含む０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
７．０）中に浸漬させ、室温で１〜２時間放置した。次
いで、担体を取り出し、０，ＩＭリン酸緩衝液（ｐＨ７
．０）で洗浄し、更に脱脂粉乳を５％含むＯ．ＩＭホウ
酸緩衝液（　ｐ　Ｈ　８　．　　５　）　４　０　１１
に１〜２時間浸漬して抗体固定化担体を作製した。

（２）　Ｃ　Ｒ　Ｐの測定 上記（１）で作製した抗体固定化担体を直径５ＩＩＩ１
の円板状に裁断し、適当な容器に詰めて反応容器とした
。

これに検体として、ＣＲＰを１００ｎ　ｇ　／　１１含
む０．１ＭＩＪン酸緩衝液（ｐ　Ｈ　７．　　０，　１
　（Ｗ／Ｖ）％ウシ血清アルブミン含有、以下、測定緩
衝液という）を２０μｐ添加し、３分間放置して反応さ
せ、更に西洋ワサビバーオキシダーゼ標識抗ＣＲＰ抗体
を０．５単位／　ｘｌ含む測定緩衝液を５０μｇ添加し
、３分間反応させた。次いで、０．１Ｍリン酸緩衝液（
ｐＨ７．０）を１．５１１加えて洗浄した後、抗体固定
化担体を取り出した。この担体に２■／１！の０−フエ
ニレンジアミンを含む６ｍＭ過酸化水素溶液を０．５ｘ
Ｉ加えて３分間反応させた後、２Ｎ一硫酸を０．５ｖＩ
加えて反応を停止し、波長４９２ｎｍにおける吸光度を
測定した（３重測定）。

一方、ブランクとして、検体の代わりに上記測定緩衝族
を用いて同様に測定した。

検体を３重測定した結果は、吸光度の平均値が１．８４
７、標準偏差が０．０３８、変動係数が２，０５％とな
り良好な測定再現性が得られた。

なお、ブランクの吸光度の測定値は０．０１９であった
。コノ結果、ＣＲＰ濃度１　０　０　ｎ　ｇ　／　１１
における測定値のＳ／Ｎ比は９７．２となり、感度よく
判定できることが判った。

また、上記の測定操作に示されるように、本発明の測定
法は極めて短時間に反応が終了した。

実施例２ 実施例１で作製した抗体固定化担体を使用し、検体とし
て各種濃度のＣ　Ｒ　Ｐ　ｉｌｌＪ定緩衝液溶液を５０
μｐ用いて、実施例１と同様の方法で吸光度を測定した
。

その結果を第１図に示す。第１図から明らかなように、
ＣＲＰを短時間に広範囲に亘って測定できることが判っ
た。

実施例３ （１）抗体固定化担体の作製 多孔性担体として市販のプラスチック製多孔性担体（ボ
アーレックス社製、Ｘ−４８９７、厚サ１．６ｍｍ）を
約１　５　ｃ＋ｎ　Ｘ　１　０　ｃｒｎの大きさに裁断
し、水洗した後、抗α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）抗
体のＦ（ａｂ−）２画分を５　０　ｕ　ｇ　／　ｘｌ含
む０，ＩＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）中に浸漬させ、
室温で１〜２時間放置した。次いで、担体を取り出し、
０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）で洗浄し、更に脱
脂粉乳を５％含む０．１Ｍホウ酸緩衝液（　ｐ　Ｈ　８
　．　　５　）　４　０　１１に１〜２時間浸漬させて
抗体固定化担体を作製した。

（２）　Ａ　Ｆ　Ｐの測定 上記（１）で作製した抗体固定化担体を直径５ｆｆｉＩ
１の円板状に裁断し、適当な容器に詰めて反応容器とし
た。

これに検体として、ＡＦＰを９　２　ｎ　ｇ　／　１１
含む測定緩衝液を２０μｐ添加し、３分間放置して反応
させ、更に西洋ワサビパーオキシダーゼ標識抗ＡＦＰ抗
体を１．０単位／１！含む測定緩衝液を５０μρ添加し
、３分間反応させた。次いで、０．１Ｍリン酸緩衝液（
ｐＨ７．０）を１．５ｆｆ，ｆ加えて洗浄した後、抗体
固定化担体を取り出した。

この担体に２　１Ｉｌｇ　／　１１の０−フエニレンジ
アミンを含む５ｍＭ過酸化水素溶液を０．５１１加えて
３分間反応させた後、２Ｎ一硫酸を０．５１１加えて反
応を停止し、波長４９２ｎｍにおける吸光度を測定した
（３重測定）。

一方、ブランクとして、検体の代わりに前記測定緩衝液
を用いて同様に測定した。

検体を３重測定した結果は、吸光度の平均値が０．７９
８、標準偏差が０．０１０、変動係数が１．２８％とな
り良好な測定再現性が得られた。

なお、ブランクの吸光度の測定値は０．０３７であった
。この結果、ＡＦＰ濃度９　２　ｎ　ｇ　／　１１にお
ける測定値のＳ／Ｎ比は２１．６となり、感度よく判定
できることが判った。

また、上記の測定操作に示されるように、本発明の測定
法は極めて短時間に反応が終了した。

実施例４ 実施例３で作製した抗体固定化担体を使用し、検体とし
て各種濃度のＡ　Ｆ　Ｐ　＃Ｊ定緩衝液溶液を２０μｇ
用い、実施例３と同様の方法で吸光度を測定した。

その結果を第２図に示す。第２図から明らかなように、
ＡＦＰを短時間に広範囲に亘って測定できることが判っ
た。

【図面の簡単な説明】

第１図はＣＲＰを本発明の測定法により測定したときの
標準曲線、第２図はＡＦＰを本発明の測定法により測定
したときの標準曲線を示す図である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １、抗原又は抗体が固定化された不溶性担体を用いる免
   疫学的測定法において、抗原又は抗体が固定化された不
   溶性担体がブロッキング剤で処理されていると共に不溶
   性担体が多孔性プラスチックからなることを特徴とする
   免疫学的測定法。