JPH03233358A - 抗原または抗体の高感度測定法 - Google Patents
抗原または抗体の高感度測定法Info
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- JPH03233358A JPH03233358A JP3116090A JP3116090A JPH03233358A JP H03233358 A JPH03233358 A JP H03233358A JP 3116090 A JP3116090 A JP 3116090A JP 3116090 A JP3116090 A JP 3116090A JP H03233358 A JPH03233358 A JP H03233358A
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Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野]
本発明は、試料中の測定対象物質である抗原または抗体
の高感度測定法に関する。
の高感度測定法に関する。
〔従来の技術・発明が解決しようとする課題〕従来、試
料中の抗原または抗体の測定法としては、試料中の抗原
(または抗体)とそれに対応する抗体(または抗原)の
免疫反応により生成する抗原抗体反応物を、濁度として
光学的に測定する方法が広く用いられている。しかし、
この方法によると、抗原抗体反応物の量をそのまま濁度
として光学的に測定しているため、測定感度が低く、特
に低値レヘルでは良好な測定精度が得られないという問
題がある。更にこの方法では少しでも感度を高めるため
、一般に300〜400nmの短波長で測定するが、こ
の場合試料自身の濁りや色調がブランク値の変動を招く
という問題もある。
料中の抗原または抗体の測定法としては、試料中の抗原
(または抗体)とそれに対応する抗体(または抗原)の
免疫反応により生成する抗原抗体反応物を、濁度として
光学的に測定する方法が広く用いられている。しかし、
この方法によると、抗原抗体反応物の量をそのまま濁度
として光学的に測定しているため、測定感度が低く、特
に低値レヘルでは良好な測定精度が得られないという問
題がある。更にこの方法では少しでも感度を高めるため
、一般に300〜400nmの短波長で測定するが、こ
の場合試料自身の濁りや色調がブランク値の変動を招く
という問題もある。
従って、本願発明の目的は、試料中の測定対象物質であ
る抗原または抗体の高感度測定法を提供することにある
。
る抗原または抗体の高感度測定法を提供することにある
。
本願発明者らは、上記目的を達成するために鋭意研究を
重ねてきたところ、水不溶性担体に吸着されたClqと
試料中の測定対象物質である抗原(または抗体)とそれ
に対応する抗体(または抗原)の免疫反応により生成す
る抗原抗体反応物との結合による複合体を測定すること
によって、試料中の抗原または抗体を、従来より高感度
に測定できることを見出して本発明を完成した。
重ねてきたところ、水不溶性担体に吸着されたClqと
試料中の測定対象物質である抗原(または抗体)とそれ
に対応する抗体(または抗原)の免疫反応により生成す
る抗原抗体反応物との結合による複合体を測定すること
によって、試料中の抗原または抗体を、従来より高感度
に測定できることを見出して本発明を完成した。
すなわち、本願発明は水不溶性担体に吸着されたClq
と試料中の抗原(または抗体)とそれに対応する抗体(
または抗原)の免疫反応により生成する抗原抗体反応物
との結合による複合体を測定することを特徴とする抗原
または抗体の高感度測定法である。
と試料中の抗原(または抗体)とそれに対応する抗体(
または抗原)の免疫反応により生成する抗原抗体反応物
との結合による複合体を測定することを特徴とする抗原
または抗体の高感度測定法である。
本発明の測定法は、通常、次の工程を経て行われる。
(1)試料と試料中の抗原(または抗体)に対応する抗
体(または抗原)を混和し免疫反応を開始させて抗原抗
体反応物を生成させた後、これに担体に吸着されたCl
qを加えて複合体を形成させる工程。
体(または抗原)を混和し免疫反応を開始させて抗原抗
体反応物を生成させた後、これに担体に吸着されたCl
qを加えて複合体を形成させる工程。
(21Clqを吸着させた担体上で、当該抗原抗体反応
物を結合させて複合体を形成させる工程。
物を結合させて複合体を形成させる工程。
以下、本発明について上記工程順に従い説明する。
本明細書でいう試料とは、通常、生体試料のことで、た
とえば、血清、血漿、髄液、尿、唾液などを挙げること
ができる。
とえば、血清、血漿、髄液、尿、唾液などを挙げること
ができる。
また、本願発明における試料中の測定対象物質としては
、臨床検査の分野で抗原(ハプテンも含む)、抗体とし
て分類されるものであれば特に制限はなく、たとえばT
SH(甲状腺刺激ホルモン)、h’CG(胎盤性性腺刺
激ホルモン)、CRP(C反応性蛋白)、ASO(抗ス
トレプトリジンO)、AFP(α−)ニドプロティン)
、I gG、 IgA 。
、臨床検査の分野で抗原(ハプテンも含む)、抗体とし
て分類されるものであれば特に制限はなく、たとえばT
SH(甲状腺刺激ホルモン)、h’CG(胎盤性性腺刺
激ホルモン)、CRP(C反応性蛋白)、ASO(抗ス
トレプトリジンO)、AFP(α−)ニドプロティン)
、I gG、 IgA 。
IgM、IgD、rgE、CEA(癌胎児性抗原)、ト
ランスフェリン、フェリチン、フィブリンおよびフィブ
リノーゲン分解産物、ハプトグロビン、α、−アンチト
リプシン、α、アシドグリコプロティン、α2−マクロ
グロブリン、β2−ミクログロブリンなどを挙げること
ができる。
ランスフェリン、フェリチン、フィブリンおよびフィブ
リノーゲン分解産物、ハプトグロビン、α、−アンチト
リプシン、α、アシドグリコプロティン、α2−マクロ
グロブリン、β2−ミクログロブリンなどを挙げること
ができる。
本発明で使用するClqは補体成分の一種で、ヒトまた
は動物由来のいずれでも良く、担体への吸着は通常用い
られる物理的吸着法による。
は動物由来のいずれでも良く、担体への吸着は通常用い
られる物理的吸着法による。
Clqは担体に直接吸着させてもよく、また任意の蛋白
を吸着させた担体の蛋白にClqを共有結合させてもよ
い。
を吸着させた担体の蛋白にClqを共有結合させてもよ
い。
担体は、通常の免疫学的測定法において使用される水に
不溶性の担体であればよく、一般に、ポリスチレンラテ
ックス粒子、ろ紙デイスク、テフロン、ガラス、アガロ
ース、ポリアクリルなどが用いられるが、特に、ポリス
チレンラテックス粒子が好適である。また担体の粒径は
、通常0.06〜1.0μmであるが、特に0.1〜0
.3μmが好適である。粒径が0.1μmより小さい場
合は、感度に劣る場合があり、1.0μmを越える場合
は、反応が安定しない傾向にある。
不溶性の担体であればよく、一般に、ポリスチレンラテ
ックス粒子、ろ紙デイスク、テフロン、ガラス、アガロ
ース、ポリアクリルなどが用いられるが、特に、ポリス
チレンラテックス粒子が好適である。また担体の粒径は
、通常0.06〜1.0μmであるが、特に0.1〜0
.3μmが好適である。粒径が0.1μmより小さい場
合は、感度に劣る場合があり、1.0μmを越える場合
は、反応が安定しない傾向にある。
本願発明において、水不溶性担体に吸着されたClqと
当該抗原抗体反応物との結合による複合体は通常、次の
(1)または(2)の方法によって調製される。
当該抗原抗体反応物との結合による複合体は通常、次の
(1)または(2)の方法によって調製される。
(1)試料と試料中の抗原(または抗体)に対応する抗
体(または抗原)を混和し免疫反応を開始させて抗原抗
体反応物を生成させた後、これに担体に吸着されたCl
qを加えて複合体を形成させる方法。
体(または抗原)を混和し免疫反応を開始させて抗原抗
体反応物を生成させた後、これに担体に吸着されたCl
qを加えて複合体を形成させる方法。
(2) Clqを吸着させた担体上で、当該抗原抗体反
応物を結合させて複合体を形成させる方法。
応物を結合させて複合体を形成させる方法。
前記(1)の方法における、抗原抗体反応物の生成は、
通常の免疫反応に用いられる条件下に行われ一般には、
20〜40’C13〜15分間、好ましくは30〜37
℃、5〜10分間で抗原抗体反応物が生成する。
通常の免疫反応に用いられる条件下に行われ一般には、
20〜40’C13〜15分間、好ましくは30〜37
℃、5〜10分間で抗原抗体反応物が生成する。
このようにして生成した抗原抗体反応物に、担体に吸着
されたClqを結合させることによって複合体が形成さ
れる。
されたClqを結合させることによって複合体が形成さ
れる。
前記(2)の方法、即ち、Clqを吸着させた担体上で
抗原抗体反応物を生成させる方法は、試料に試料中の抗
原(または抗体)に対応する抗体(または抗原)および
担体に吸着されたClqを同時に加えることによって行
われる。当該方法は工程を簡単にできるので望ましい方
法である。
抗原抗体反応物を生成させる方法は、試料に試料中の抗
原(または抗体)に対応する抗体(または抗原)および
担体に吸着されたClqを同時に加えることによって行
われる。当該方法は工程を簡単にできるので望ましい方
法である。
当該(2)の方法は、一般には、20〜40°C13〜
15分間、好ましくは30〜37℃、5〜10分間で当
該複合体が形成される。
15分間、好ましくは30〜37℃、5〜10分間で当
該複合体が形成される。
本発明における複合体は、濁度としてその量を光学的に
吸光度を測定することにより定量できる。
吸光度を測定することにより定量できる。
この際、吸光度を測定する波長としては通常400〜9
00nm、特に500〜700nmが好適である。この
ようにして複合体を測定することによって試料中の抗原
または抗体の測定が可能である。
00nm、特に500〜700nmが好適である。この
ようにして複合体を測定することによって試料中の抗原
または抗体の測定が可能である。
この場合、試料の代わりに測定対象物質である抗原また
は抗体と同し種類のものからなり、その含量(濃度)が
あらかしめ定められたもの(標準液など)を用いたとき
の測定値と比較することによって、試料中の抗原または
抗体の量が算出できる。
は抗体と同し種類のものからなり、その含量(濃度)が
あらかしめ定められたもの(標準液など)を用いたとき
の測定値と比較することによって、試料中の抗原または
抗体の量が算出できる。
以下、本発明を実施例で説明するが、本発明はこれらに
限定されるものではない。
限定されるものではない。
実施例1
ヒト新鮮血清から公知の方法CTENNERら、The
Journal of Immunology、127
(2) 648−653(1981) 〕によって精
製して調製したClqを、PBS (リン酸食塩緩衝液
、10鴎L pl(7,4)で068■/−の濃度に希
釈した。これと、粒径0.178μmのポリスチレンラ
テックスをPBSで0.5%の濃度に懸渇したものを等
量混和し、室温で50分間反応させて、Clq吸着ラテ
ックス液を調製した。
Journal of Immunology、127
(2) 648−653(1981) 〕によって精
製して調製したClqを、PBS (リン酸食塩緩衝液
、10鴎L pl(7,4)で068■/−の濃度に希
釈した。これと、粒径0.178μmのポリスチレンラ
テックスをPBSで0.5%の濃度に懸渇したものを等
量混和し、室温で50分間反応させて、Clq吸着ラテ
ックス液を調製した。
マンニトール12%およびウシ血清アルブごン2%を含
むPBSを第1試薬とし、先に調製したClqW&着ラ
テックス液0.1%および抗CRP血清1gG溶液(6
■/−)を含むPBSを第2試薬とする。
むPBSを第1試薬とし、先に調製したClqW&着ラ
テックス液0.1%および抗CRP血清1gG溶液(6
■/−)を含むPBSを第2試薬とする。
そして、CRP41準液を生理食塩水で希釈した試料(
0,05,0,1,0,25,0,5,1,0■/di
)を各5μlとり、これに第1試薬400μlを加え、
37°Cで5分間加温する。次に第2試薬100μlを
加え37°Cで5分間加温後、波長570nmでの吸光
度を測定した。その結果、第1図のような検量線が得ら
れた。
0,05,0,1,0,25,0,5,1,0■/di
)を各5μlとり、これに第1試薬400μlを加え、
37°Cで5分間加温する。次に第2試薬100μlを
加え37°Cで5分間加温後、波長570nmでの吸光
度を測定した。その結果、第1図のような検量線が得ら
れた。
比較例
従来の方法として、ポリエチレングリコール(6000
) 3%および塩化ナトリウム0.1Mを含むHEPE
S(N−2−hydroxyethylpiperaz
ine−N ’ −2−ethanesul−foni
c acid)緩衝液(10mM、pH7,4)を第1
試薬とし、抗CRP血清1gG溶液(6■/l11)を
含むPBSを第2試薬とする。そして第1試薬400μ
lおよび第2試薬100μlを用い、以下、実施例1と
同様の操作で検量線を作成した。その結果を第1図に示
す。
) 3%および塩化ナトリウム0.1Mを含むHEPE
S(N−2−hydroxyethylpiperaz
ine−N ’ −2−ethanesul−foni
c acid)緩衝液(10mM、pH7,4)を第1
試薬とし、抗CRP血清1gG溶液(6■/l11)を
含むPBSを第2試薬とする。そして第1試薬400μ
lおよび第2試薬100μlを用い、以下、実施例1と
同様の操作で検量線を作成した。その結果を第1図に示
す。
第1図の結果から、本発明の方法は従来の方法に比べ高
感度に測定できることが判った。
感度に測定できることが判った。
以上、説明したように、従来の方法では、抗原抗体反応
物の量をそのまま濁度として光学的に測定しても十分な
感度は得られないが、本発明では担体に吸着されたCl
qが抗原抗体反応物と瞬時に結合して複合体を形成する
ので、この複合体を測定することにより測定レヘルが飛
躍的に上昇する。更に、400nm以上の長波長で測定
することができるため、試料に起因する問題を解決する
ことができる。また、臨床検査の分野においては、自動
分析装置による測定が従来より高感度で行えるので、有
用な測定法として供することができる。
物の量をそのまま濁度として光学的に測定しても十分な
感度は得られないが、本発明では担体に吸着されたCl
qが抗原抗体反応物と瞬時に結合して複合体を形成する
ので、この複合体を測定することにより測定レヘルが飛
躍的に上昇する。更に、400nm以上の長波長で測定
することができるため、試料に起因する問題を解決する
ことができる。また、臨床検査の分野においては、自動
分析装置による測定が従来より高感度で行えるので、有
用な測定法として供することができる。
第1図は本発明法および従来法によるCRP測定におけ
る吸光度の対比を示したグラフである。 第1図 0.1 0.25 0.5 RP (mg/d見) 1.0
る吸光度の対比を示したグラフである。 第1図 0.1 0.25 0.5 RP (mg/d見) 1.0
Claims (1)
- 水不溶性担体に吸着されたClqと試料中の抗原(また
は抗体)とそれに対応する抗体(または抗原)の免疫反
応により生成する抗原抗体反応物との結合による複合体
を測定することを特徴とする抗原または抗体の高感度測
定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3116090A JPH03233358A (ja) | 1990-02-08 | 1990-02-08 | 抗原または抗体の高感度測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3116090A JPH03233358A (ja) | 1990-02-08 | 1990-02-08 | 抗原または抗体の高感度測定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03233358A true JPH03233358A (ja) | 1991-10-17 |
Family
ID=12323695
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3116090A Pending JPH03233358A (ja) | 1990-02-08 | 1990-02-08 | 抗原または抗体の高感度測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH03233358A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001092888A3 (en) * | 2000-05-31 | 2002-07-04 | Cistem Biotechnologies Gmbh | A method for screening and isolating microorganisms |
| CN108169145A (zh) * | 2017-11-17 | 2018-06-15 | 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 | 一种测定血清补体C1q的试剂盒及其制备使用方法 |
| CN108474738A (zh) * | 2016-01-22 | 2018-08-31 | 株式会社日立高新技术 | 自动分析装置及其散射光测定光学系统评价用标准液 |
-
1990
- 1990-02-08 JP JP3116090A patent/JPH03233358A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001092888A3 (en) * | 2000-05-31 | 2002-07-04 | Cistem Biotechnologies Gmbh | A method for screening and isolating microorganisms |
| CN108474738A (zh) * | 2016-01-22 | 2018-08-31 | 株式会社日立高新技术 | 自动分析装置及其散射光测定光学系统评价用标准液 |
| CN108169145A (zh) * | 2017-11-17 | 2018-06-15 | 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 | 一种测定血清补体C1q的试剂盒及其制备使用方法 |
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