JPH0317010A

JPH0317010A - う蝕予防剤

Info

Publication number: JPH0317010A
Application number: JP1151308A
Authority: JP
Inventors: Masaya Iwamoto; 昌也岩本; Keijiro Uchino; 内野　敬二郎; Toshiharu Matsuo; 松尾　俊治; Toshikatsu Shoji; 東海林　敏勝
Original assignee: Nippon Flour Mills Co Ltd
Current assignee: NIPPN Corp
Priority date: 1989-06-13
Filing date: 1989-06-13
Publication date: 1991-01-25

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、虫歯菌に対する増殖阻止効果を有するう蝕予
防剤に関する。

〔従来の技術〕

ミラー（Ｗ，　Ｄ．Ｍｉ　ｌｌｅｒ）が１９世紀末に提
唱した化学細菌税以来、う蝕の原因について種々の議論
が行われてきたが、現在では、長年にわたって最も広く
信じられてきた乳酸桿菌説が否定され、それに代わって
ストレブトコッカスミュータンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏ
ｃｃｕｓ　ｍｕｔａｎｓ；以下Ｓ．ミュータンスという
。）を中心とする口腔連鎖球菌が主要な原因菌であると
されている。

一方、従来う蝕予防法としては、ｌ）　食物から蔗糖を完全に除去すること、２）　歯質
を強化すること、３）　歯垢形戒の原因となる粘着性グルカンの生或を阻
止すること、４）　虫歯菌の増殖を阻止すること、などの手段が知られていた。

〔発明が解決しよとする課題〕

しかし上記のう蝕予防法は、いずれも不完全なものであ
った。例えば食物から蔗糖を除去することは非現実的で
あり、また歯質の強化剤や、粘着性グルカンの阻害酵素
、殺菌剤等は、副作用があったり、あるいは効果が低い
などの欠点のために満足すべきものではなかった。

そこで、副作用がなく、安価に製造することができ、し
かも効果の高いう蝕予防剤が望まれていた。

〔課題を解決するための手段〕

このような状況下で、本発明者らは、天然品で、安全性
が高く、しかも安価に製造できるものを求め鋭意研究を
行なったところ、貫衆の抽出物に強い虫歯菌への増殖阻
止効果があることが認められ、虫歯予防することができ
る口腔用組或物が得られることを発見し、本発明を完戒
するに至った。

すなわち本発明は、貫衆のメタノール抽出物を有効戒分
とずるう蝕予防剤を提供するものである。

本発明は、脱脂した貫衆のメタノール抽出物を透析チュ
ーブにより分画して得られる分子量、１，　０　０　０
〜１０，０００の画分からなる貫衆のメタノール抽出物
を有効或分とするう蝕予防剤を提供するものである。

また本発明は、脱脂した貫衆のメタノール抽出物透析チ
ューブより分画して得られる分子量１０，　０　０　０
以上の百分からなる貫衆のメタノール抽出物を有効威分
とするう蝕予防剤を提供するものである。また本発明は
、上記抽出物を更に精製して得られる、下記の理化学的
性質を有するＮＰＦ８　７ＫＡＮ　　Ｉ、ＮＰＦ　　８
　７ＫＡＮ　　ＩＩ、ＮＰＦ　−　８　７ＫＡＮ−ＩＡ
ＳＮＰＦ　−８　７ＫＡＮ　　　Ｉ　Ｂ，　ＮＰＦ　−
８　７ＫＡＮ一ｍＡ及びＮＰＦ　−８　７ＫＡＮ　−Ｉ
ＩＢからなる群より選ばれる物質を有効成分とずるう蝕
予防剤を提供するものである。

（ＮＰＦ　−　８　７　ＫＡＮ　−　１　）（ｉ＞形状
：淡褐色粉末（　ｉｉ　）融点：明瞭な融点、分解点を示さない。

（ｉｉｉ）元素分析（ｉｖ）分子量：　ｌ，　０００〜１０，０００　（透
析チューフによる。）（ｖ）赤外線吸収スペクトル：１４４３、１３７５、１２８４、ｌ２４５、ｌ１０３、
ｌ０６７、７７９（ｖｉ）紫外線吸収スペクトル；３０５　　肩（１０７　７）５１０　　肩（２１．６）（ｖｉｉ）溶解性：水、メタノール、エタノールに可溶。

ヘキサン、エーテル、酢酸エチル、クロロホルム不溶。

（ｖｉｎ）呈色反応：（ｖ）赤外線吸収スペクトル；（ｖｉ）紫外線吸収スペクトル：（ＮＰＦ　　　８　　７ＫＡＮ　　　Ｉｆ）（ｉ）形状
：淡褐色粉末（　ｉｉ　）融点：明瞭な融点、分解点を示さない。

＜　ｉｉｉ　）元素分析：５１０肩（２５．　５）（ｖｊ）溶解性：水、メタノール、エタノールに可溶。

ヘキサン、エーテル、酢酸エチル、クロロホルム不溶。

（ｖｊｉ）呈色反応：（ｉｖ＞分子量：　１０，　０００以上（透析チューブ
による。）（刃ＰＦ−　８　７ＫＡＮ−　Ｉ　Ａ）（ｉ
）形状：淡褐色粉末（　ｉｉ　）融点：明瞭な融点、分解点を示さない。

（ｉｉｉ）元素分析：Ｃ　　：３７．７１％Ｈ　　：　　３．９７％Ｎ　　：　　２．８３％灰分：１６．４８％（ｉｖ）分子量：８，１００（ポリエチレングリコールを基準としたゲル浸透１ｘク
ロマトグラフィーによる。）（ｖ）赤外吸収スペクトル
：１４４５．　１３８４．　１２５９．　１１１４，１０
６７．　８０２（ｖｉ）紫外線吸収スペクトル：（ｖｉｉ）溶解性：水、メタノール、エタノールに可溶。

ヘキサン、エーテル、酢酸エチル、クロロホルム不溶。

（ｖｉｉ）呈色反応：塩化第２鉄　　　　　　　　　陽性ニンヒドリン　　　　　　　　　陰性ｐ−アニシジンーフタル酸陰性アニシジンージフェニルアミン　陰性ドラーゲンドルフ　　　　　　　陰性（ＮＰＦ−　８　７ＫＡＮ　−　Ｉ　Ｂ）（ｉ）形状：
淡褐色粉末（　ｉｉ　）融点：明瞭な融点、分解点を示さない。

（ｉｉｉ）元素分析：Ｃ　　：４５．７８％Ｈ　　：　　４．４５％Ｎ　　：　　０．７１％灰分：１０．４５％＜０．９％（ｉｖ〉　分子量：　４，　９　０　０（ポ
リエチレングリコールを基準としたゲル浸透クロマトグ
ラフィーによる。〉（ｖ）赤外吸収スペクトル：１４４２．　１２８４，　１２６２．　１２０６．１１
５７，　１１１３．　１０６７．　８０３（ｖ１）紫外
線吸収スペクトル：（ｖｊ）溶解性：水、メタノール、エタノールに可溶。ヘキサン、エーテ
ル、酢酸エチノベクロロホルム不溶。

（ｖｉｉｉ）呈色反応：塩化第２鉄　　　　　　　　　　陽性ニンヒドリン　　　　　　　　　陰性ｐ−アニシジンーフタル酸陰性アニシジンージフェニルアミン　陰性ドラーゲンドルフ　　　　　　　陰性（ＮＰＦ−　８　７ＫＡＮ−　Ｉ［　Ａ）（ｉ）形状：
淡褐色粉末（ｉｉ＞Ｍ点；明瞭な融点、分解点を示さない。

（ｉｉｉ）元素分析：Ｃ　　：・３　８．　６　６％Ｈ　　　：　　　３．６７％Ｎ　　　：　　　２．８３％灰分：２２．９４％（ｉｖ）分子量：ｌ２，８００（ポリエチレングリコールを基準としたゲル浸透クロマ
トグラフィーによる。）（ｖ）赤外吸収スペクトル：１３７２，　１２８３．　１２０５，　１１１３．７９
５（ｖｉ）紫外線吸収スペクトル：水 λ．．．　　　ｎｍ　　（Ｅ＋ｃ＋ａ　　）　２８０（
ｖｊ）溶解性：水、メタノーノベエタノールｊこ可溶。ヘキサン、エー
テル、酢酸エチル、クロロホルム不溶。

（ｖｉｉ）呈色反応：塩化第２鉄　　　　　　　　　　陽性ニンヒドリン　　　　　　　　　陰性ｐ−アニシジンーフタル酸　　　陰性アニシジンージフェニルアミン　陰性ドラーゲンドルフ　　　　　　　陰性（ＮＰＦ　−　８　７ＫＡＮ　　ｎ　Ｂ）（ｉ＞形状：
淡褐色粉末（　ｉｉ　）融点：明瞭な融点、分解点を示さない。

（　ｉｉｉ　）元素分析：Ｃ　　：４４．９７％Ｈ：４、４４％Ｎ　　：　　０．７９％灰分：１４．３２％（ｉｖ）分子量＋　９．　４　０　０（ポリエチレングリコールを基準としたゲル浸透クロマ
トグラフィーによる。）（ｖ）赤外吸収スペクトル：１４４５，　１３７９．　１２Ｂ５．　１２６１．１２
０２．　１０９６．　８０２（ｖｉ）紫外線吸収スペクトル：（ｖｊ）溶解性水、メタノーノベエタノールに可溶。

ヘキサン、エーテル、酢酸エチル、クロロホルム不溶。

（ｖｉｉｉ）呈色反応；塩化第２鉄　　　　　　　　　　陽性ニンヒドリン　　　　　　　　　陰性ｐ−アニシジンーフタル酸陰性アニシジンージフェニルアミン　陰性ドラーゲンドルフ　　　　　　　陰性以下、本発明について、更に詳細に説明する。

■．原料本発明のう蝕予防剤の原料としては、貫衆を用いること
ができるが、加工・抽出しやすいように、乾燥、，粗砕
、粉砕などの処理をしたものを用いることが好ましい。

また市販されている生薬の形態のものを用いることが簡
便である。

また、貫衆については次のようなことが知られている。

すなわち、貫衆の煎剤は條虫、豚回虫、ミミズ、ヒル等
に対し試験管内において顕著な殺虫効果がある。またこ
の煎剤は腸管及び子宮収縮作用が強く、初期に呼吸中枢
興奮作用があり、しばらくの後心臓の活動を抑制し、血
圧を下げる作用がある。抗皮膚真菌作用や、わずかでは
あるが、血管を収縮させる作用があることも知られてい
る。

更に貫衆の煎剤は獣医方面において牛類の肝蛭病やその
他寄生虫病に対し治療効果があることが知られており、
その煎剤は１／３　０　０　０に希釈しても家兎の摘出
子宮に対して強い収縮作用がある。　貫衆は貫仲とも言
い、各種の原動物を原料とした生薬であるが、現在日本
、中国、朝鮮半島での市場品においては、次のような原
植物及び産地がｖｌ認されている。

（基源）　１）オシダ科学（Ａｓｐｉｃｌｉａｃｅａｅ
）のオシダＤｒｙｏｐｔｅｒｉｓ　ｃｒａｓｓｉｒｈｉ
ｚｏｍａ　ＮＡＫＡＩ．　　２＞オシダ科（＾ｓｐｉｄ
ｉａｃｅａｅ）のハクモウイノデ（ミャマシケシダ）八
ｔｈｙｒｉｕｍ　ｐｙｃｎｏｓｒｕｍ　ＣＨＲＩＳＴ．
　　（＝Ａ．ａｃｒｏｓｔ＋ｃｈｏ＋ｄｅｓ　　Ｄｒ＋
ａｔｓ．　　　＝ＬｕｎａｔｈｙｒｉｕｍＰｙｃｎｏｓ
ｏｒｕｍ　Ｋｏ＋ｎｚ．　）　．　　エゾメシダ（メシ
ダ、コウライメシダ）　Ａ，ｂｒｅｖｉｆｒｏｎｓ　Ｌ
ＫＡｒ　ｅｘＫＩＴＡＧＡＷＡ＋　３　）　　シシガラ
シ科（Ｂ　ｌｅｃｈｎａｃｅａｅ）のヒリュウシダＢｌ
ｅｅｈｕｍ　ｏｒｉｅｎｔａｔｅ　Ｌ．．　　４　）シ
シガシラ科（Ｂｌｅｃｈｎａｃｅａｅ）のハイコモチシ
ダＷｏｏｄｖ＋ａｒｄｉａ　ｕｎｉｇｅｍｍａｔａ　Ｎ
ＡＫＡＩ．　　：］モチシダＷ．ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ
　３ｗ，，　　５　）ゼンマイ科（口ｓｍｕｎｄａｃｅ
ａｅ＞のゼンマイＯｓｍｕｎｄａ　ｊａｐｏｎｉｃａ　
　ＴＨＵ）１８．　，　６　）オシダ科（Ａｓｐｉｄｉ
ａｃｅａｅ）のクサソテツ！Ｊｅｔｔｅｕｃｃｉａｓｔ
ｒｕｔｈｉｏｐｔｅｒｉｓ　Ｔｏ．．Ｒｏ（以上中国産
）。７）シシガシラ科（Ｂｌｅｃｈｎａｃｅａｅ）のシ
シガラシ（ヒメシシガシラ）　ｓｔｒｕｔｈｉｏｐｔｅ
ｒｉｓ　ｎｉｐｐｏｎｉｃａ（Ｋｕ，ｌｚｘ）　ＬＫＡ
＋　（日本産）、以上の植物の根茎を乾燥したもの。

（産ｊｔ！！）１）中国東北諸島、朝鮮半島に産し、東
北、北京、天津、沈陽（旧奉天）、旅大（旧大連）、ソ
ウル（旧京城）市場に出まわる。

２）華北、華中に産し、等該地区で消費されるほか、宣
北、北京市場に出まわる。３）華南に産し、広東市場に
出まわる。４）華東、華南、四川省一帯に産す。５）華
東、華中、河南一帯に産し、当該地区で消費される。上
海市場品は本品である。６）河北、華北諸省に産し、北
京等の市場に出まわる。７）日本各地に産す。

■．有効成分の抽出ａ　）　ＮＰＦ　−　８　７ＫＡＮ　−　Ｉ及びＮＰＦ
　−　８　７ＫＡＮ　−　ＩＩ本発明のう蝕予防剤の有
効成分であるＮＰＦ−８７ＫＡＮ−Ｉ及びＮＰＦ　−　
８　７ＫＡＮ　−　ＩＩはフェノール性物質であり、虫
歯菌増殖阻止活性によって特徴づけられるので、水、メ
タノール、エタノール等のメタノールによる抽出、遠心
分離や濾過などによって、この増殖阻止活性を指標とし
て適当な精製手段を適用して単離・精製することができ
る。

これらの方法は、必要に応じて単独あるいは任意の順序
に組合せ、または反復して適用できる。以下ＮＰＦ　−
　８　７ＫＡ？ｉ　−　Ｉ及びＮＰＦ　−８７ＫＡＮ　
−Ｈの抽出方法の１例を説明する。

なお、原料の貫衆は、加工抽出しやすいように、乾燥、
粗砕、粉砕などの処理をしたものを用いることが好まし
い。

イ）　へキサン、エーテルなどの脱脂溶媒を用いて、室
温で、または加熱して原料のヘキサン、エーテル可溶部
分を抽出除去する。

口）　ヘキサン又はエーテル等の脱脂溶媒可溶部分を抽
出除去した原料は、風乾又は真空乾燥して、溶媒を除去
する。

ハ〉　次いでメタノールを抽出原料に加えて常法に従い
抽出処理する。通常は沸騰下で抽出するが、室温、４℃
の低温室にて抽出を行なっても、活性戒分が得られる。

二）　得られたメタノール抽出液を濃縮乾固した後、水
で抽出する。具体的には水を加えて懸濁し、不溶物を濾
別し、さらに不溶物に水を加えて、よく撹拌した後濾過
し、前の液とあわせる。

ホ）　この水溶液に等量の酢酸エチル又はクロロホルム
等の非親水性有機溶媒を加え、有機溶媒可溶部分を除去
する。

へ）　非親水性有機溶媒可溶部分を除去した水層を分画
分子量１，　０　０　０の透析チュウーブ（スペクトラ
／ポア６；スペクトラムメディカルインダストリー社製
）に入れ、水にて透析し、内液と外液に分画する。

ト）　分画分子量１，　０　０　０の透析チューブにて
分画した透析内液をさらに、分画分子量１０．０００の
透析チューブ（スベクトラ／ポア６；スペクトラムメデ
ィカルインダストリー社製）に入れ、水にて透析し、内
液と外液に分画する。

チ）　このように分画した分子量１．　０　０　０〜ｔ
ｏ，　０　０　０及び１０，　０　０　０以上の画分は
強い虫歯菌増殖阻止活性を示す。これらの画分はさらに
凍結乾燥などの操作により、各々淡褐色の粉末として得
ることができる。

本発明者は、分子量１，　０　０　０〜１０，０００及
び１０．０００以上に分画された有効物質を各々ＮＰＦ
　−　８　７ＫＡＮ　−　Ｉ及びＮＰＦ−　８　７　Ｋ
ＡＮ−　Ｉｔと命名した。

ｂ）　ＮＰＦ−　８　７ＫＡＮ−　Ｉ　ＡＳＮＰＦ−　
８　７ＫＡＮ−　Ｉ　Ｂ，ＮＰＦ−　８　７　ＫＡＮ−
　ｎ　Ａ及びＮＰＦ−　８　７　ＫＡＮ−　ＩＩ　Ｂこ
の様に、透析チューブにて分画してきたＮＰＦ　−　８
　７ＫＡＮ　　　Ｉ及びＮＰＦ　−　８　７ＫＡＮ　−
　ＩＩは、さらにそれぞれ２つの画分に分離できる。

すなわち後述するようにＮＰＦ　　８７ＫＡＮ　　Ｉは
分子量８，１００の画分（ＮＰＦ　−　８　７ＫＡＮ　
−ＩＡ）と分子量４，９００の画分（ＮＰＦ　−　８　
７ＫＡＮ−ＩＢ）より、またＮＰＦ　−　８　７ＫＡＮ
　−　Ｉ［は分子量１２．８００の画分（ＮＰＦ　−　
８　７　ＫＡＮ　−Ｉ［Ａ）と分子量９，４００の画分
（ＮＰＦ　−　８　７　ＫＡＮ−ＩＩＢ）より構或され
ている〈第１１図Ａ及びＢ参照）。

これら４種（ＮＰＦ　−　８　７ＫＡＮ　−　Ｉ　Ａ，
　ＮＰＦ−　８７ＫＡＮ　　＝ＩＢＳ　ＮＰＦ−８７Ｋ
ＡＮ　　−ｍＡ，及びＮＰＦ　−　８　７ＫＡＮ　−　
ＩＩ　Ｂ）の物質の分離精製は、種々の公知の方法によ
って行うことができるが、以下の条件で高速液体クロマ
トグラフを用いて行うことが好ましい。

（ｉ）分離力ラムこの際分離力ラムとしては、分配・吸着型樹脂、イオン
交換樹脂、ゲル濾過型の分離剤等を充填したものを用い
ることができる。また付属的に自動注入や自動分取を行
う装置を使用することも好ましい。

（　ｉｉ　）溶離剤溶離剤としては、水一メタノール系の他、水、アセトニ
トリル、ジメチルホルムアミド、酢酸、ブタノーノベへ
キサンその他の各種緩衝溶液を単独で、又は任意の比率
で混合して、用いることができる。

（　ｉｉｉ　）指標本発明の有効物質を検出するための指標としては、２８
０ｎｍの波長の吸光度及び虫歯菌増殖阻止活性を用いる
ことができる。

（ｉｖ）処理方式処理方式としては、オーブンカラム、中圧又は高圧方式
を用いることができる。

ＮＰＦ　　　８　７ＫＡＮ　　　Ｉ　Ａ，　ＮＰＦ　　
　８　７ＫＡＮ−ＩＢ，　ＮＰＦ　−８　７ＫＡＮ　−
ＩＩＡ及びＮＰＦ　−８７ＫＡＮ−Ｉ［Ｂは、前記高速
液クロマトグラフでそれぞれ単一のピークを示し、虫歯
菌増殖阻止活性が一致する。

また、本物質の分子量を測定するために行なったゲル浸
透クロマトグラフにてｉ一ピークを示す。

各種ポリエチレングリコールの標準分子量にて検討した
ところＮＰＦ−　８　７　ＫＡＮ−　Ｉ　Ａの分子量は
８，１００、ＮＰＦ−　８　７ＫＡＮ−　Ｉ　Ｂは４，
９０　０、ＮＰＦ−８　７ＫＡＮ　−ＩｒＡは１　２，
８０　０そしてＮＰＦ　−８　７ＫＡＮ　−ＪＩＢは９
．４ＱＯと決定された。

以上述べてきたようにＮＰＦ　−　８　７　ＫＡＮ　−
　Ｉは、ＮＰＦ−　８　７ＫＡＮ　−Ｉ　ＡとＮＰＦ　
−　８　７ＫＡＮ−ＩＢの混合物で、一方ＮＰＦ　　８
７ＫＡＮ　　ＩｆはＮＰＦ　−　８　７ＫＡＮ　−　Ｉ
Ｉ　ＡとＮＰＦ　−　８　７ＫＡＮ−Ｉ［Ｂの混合物で
ある。高速液体グロマトグラムの解析により、ＮＰＦ　
−　８　７ＫＡＮ　−　Ｉは、ＮＰＦ　−８　７ＫＡＮ
　　−　ＩＡとＮＰＦ　−　８　７ＫＡＮ　−ｒＢの約
１対６の混合物であることが、一方ＮＰＦ　−　８　７
ＫＡＮ　−　ＩＩは、ＮＰＦ　　　８　７ＫＡＮ一ｍＡ
とＮＰＦ　　　８　７ＫＡＮ　−　ＩＩ　Ｂの約ｌ対４
の混合物であることが認められた。

後で述べるが、虫歯菌増殖阻止活性に関しては、ＮＰＦ
　　８　７ＫＡＮ　−　Ｉ　Ａ，　ＮＰＦ　−　８７Ｋ
ＡＮ−　Ｉ　Ｂ，　ＮＰＦ　−　８　７ＫＡＮ　−　Ｉ
Ｉ　Ａ及びＮＰＦ−８７ＫＡＮ−ＩＩＢ並びにＮＰＦ　
−　８　７ＫＡＮ　−■及びＮＰＦ　−　８　７ＫＡＮ
　−　Ｉ［はほぼ同程度の効果が認められる。

尚、有効物質は、メタノール、エタノール、水に可溶で
あるため、前述の抽出方法は、原料のメタノール抽出物
より出発しているが、高価な有機溶媒を節約するために
はまず大量の水または熱湯にて抽出した後、同様の操作
を行ってもよい。

また前記の紫外線吸収スペクトルでもあきらかなように
、アルカリ性にすると、本発明の新規物質はいずれも黄
褐色から赤褐色に着色するので、抽出過程全体を鉱酸や
有機酸を用いて弱酸性下で行うことも有効な抽出手役で
ある。

メタノール等のメタノールによる粗抽出物でも虫歯菌増
殖阻止活性を有し、本発明のう蝕予防剤の有効成分とし
て使用できるが、不純物をできる限り除去し、より虫歯
菌増殖阻止活性の強い物質を得、これを使用することが
好ましい。

■．う蝕予防剤貫衆より得られた本発明の有効或分は、ポリフェノール
性の化合物である。従来ポリフェノール性の化合物のあ
る種のもは、粘着性グルカン生或酵素（グルコシルトラ
ンスフエラーゼ〉の阻害を示すことが知られており、例
えば特開昭５８−１２１２１８号公報に開示されている
が、貫衆のポリフェノールについては、何ら言及されて
いない。

また煎茶より得られる低分子ポリフェノールには虫歯菌
の増殖阻止効果があることが最近報告されている（特開
昭６４−９０１２４号）が本発明のう蝕予防剤の有効成
分は、高分子ポリフェノールである。

本発明のう蝕予防剤は、貫衆をメタノールで抽出するな
ど、各種の方法によって有効成分を抽出したもの、又は
ＮＰＦ　　８　７ＫＡＮ　−　Ｉ、ＮＰＦ　−　８　７
ＫＡＮ　−　Ｉ［、ＮＰＦ　　８　７ＫＡＮ　−　Ｉ　
Ａ，ＮＰＦ−８７ＫＡＮ　−ＩＢ，ＮＰＦ−８７ＫＡＮ
　−ＩｆＡ及びＮＰＦ　−　８　７ＫＡＮ　−ＩＩ　Ｂ
の精製物の形態で、公知の口腔組或物に添加することに
より製造される。

公知の口腔組或物としては、練り歯磨き、粉歯磨き、マ
ウスウォッシュ、飴類、チューインガム、各種の甘味菓
子類、その他のあらゆる飲料、食品類及び口腔用の薬剤
等を挙げることができる。

■．急性毒性マウス腹腔内投与により求められたところ下記の値が得
られた。

ＮＰＦ　　８７ＫＡＮ　　　Ｉ　　　ＬＤｓｏ＝２００
ｍｇ／ｋｇＮＰＦ　　−　８　７　ＫＡＮ　　−　ｎ　
　　　Ｌ　Ｄｓｏ　＞４００　ｍｇ／ｋｇＮＰＦ　　　
８７Ｋ，ＡＮ　　−ＩＡ　　ＬＤｓｏ＝２００ｍｇ／ｋ
ｇＮＰＦ　−　８　７ＫＡＮ　　−　Ｉ　Ｂ　　Ｌ　Ｄ
ｓｏ＝２００　ｍｇ／ｋｇＮＰＦ　　　８７ＫＡＮ　　
−ＩＬＡ　　ＬＤｓｏ＞４００ｍｇ／ｋｇＮＰＦ　　　
８　７　ＫＡＮ　　　ＩＩ　Ｂ　　Ｌ　Ｄｓａ　＞４０
０　　ｍｇ／　ｋｇ〔実施例〕以下、実施例及び参考例によって本発明を更に詳細に説
明する。

参考例１：有効物質の抽出イ）粗砕・乾燥した貫衆〔発売元：■ウチダ和漢薬）５
００ｇをヘキサン１，５００ｍｊ！中に浸漬し２４時間
室温で放置した後、濾過によりヘキサンを除去した。こ
の操作を３回行い、脱脂した。

ヘキサン可溶部分の収量は１．１１ｇであった。

ロ）脱脂した貫衆を１日間風乾した。

ハ）風乾した貫衆をメタノール１．　０　０　０社中に
浸漬し、沸騰下３時間抽出した。この摸作を３回行い、
抽出液を集めた。

二）得られた抽出液を集め、エバポレーターにて水浴４
０℃で減圧下ａ縮し、真空下乾燥した（収量ｉ．５ｇ）
。

これに水５００−を加え、撹拌後濾過した。

不溶物はさらに水２　０　０ｍｊ！を加えて撹拌後濾過
し、濾液を集めた。

ホ〉この水溶液に５００一の酢酸エチルを加えて抽出し
た。この操作を３回行ない、酢酸エチル可溶部分Ｈ．０
３７）を除去した。酢酸エチル抽出物１．０３７を得た
。

へ）酢酸エチル可溶部分を除去した水抽出物を分面分子
量１．　０　０　０の透析チューブ（スベクトラ／ボア
６；スベクトラムメディカルインダストリー社製）に入
れ、水にて４℃で１週間撹拌しながら、その間に外液を
毎日交換して透析し、内液と外液に分画した。

ト）分画分子量１，　Ｏ　Ｏ　Ｏの透析チューブにて分
画した透析内液をさらに、分画分子量１０，０００の透
析チューブ（スベクトラ／ボア６；スベクトラムメディ
カルインダストリー社！！）に入れ、水にて４℃で１週
間撹拌しながら、その間に外液を毎日交換して透析し、
内液と外液に分画しＴこ。

チ）このように分画したところ、分子ｉｔ．　０　０　
０〜１０．０００および１０，０００上の分画部分に目
的とする虫歯菌増殖阻止活性を認め、凍結乾燥により、
有効物質を２　！ＯＡとも淡褐色の粉末として得ること
ができた。分子Ｉ１．　０　０　０〜１０，０００の画
分（ＮＰＦ　　　８　７ＫＡＮ　−　Ｉ）は、１．　７
　３　ｇ得ることができ、分子量１０，０００以上の画
分（ＮＰＦ　　８　７ＫＡＮ　一ＩＩ）は、１　１．　
８　ｇ得ることができた。

分子量１．　０　０　０以下の画分は、７．　９　２　
ｇ得ることができたが、虫歯菌増殖阻止活性はＮＰＦ　
−８７ＫＡＮ−ｉおよびＮＰＦ　　　８　７ＫＡＮ　−
　Ｉｆに比べて非常に弱かった。

参考例２：有効或分の抽出イ）粗砕・乾燥した貫衆〔発売元二一紀伊国屋漢薬局〕
５０ｇをヘキサン１５０ｇｒｎｉ中に浸漬し、２４時間
室温で放置した後、濾過によりヘキサンを除去した。こ
の操作を３回行い、脱脂した。ヘキサン可溶部分の収量
は０．　１　０ｇであった。

口）脱脂した貫衆をｌ日間風乾した。

ハ）風乾した貫衆をメタノール１００ｒｎｌ中に浸漬腰
沸騰下３時間抽出した。この操作を３回行い、抽出液を
集めた。

二）得られた抽出液を集めエバポレーターにて水浴４０
℃で減圧下ａ縮し、真空下乾燥した。

（収量２．０７ｇ）以上の段階における抽出物の収量は第１表の通りであっ
た。

第　　１　　表参考例３ＮＰＦ　−　８　７ＫＡＮ　−　１及びＮＰＦ　　８７
ＫＡＮ　　Ｉｆを高速液体クロマトグラフィに付し、Ｎ
ＰＦ　−　８　７ＫＡＮ　−　ＩＡＳＮＰＦ　−８　７
ＫＡＮ　−　ＩＢＳＮＰＦ　−８　７ＫＡＮ　一ＩＩＡ
及びＮＰＦ　−８　７ＫＡＮ　−ＩＩＢをそれぞれ分離
した。条件は次のとおりである。

分離力ラム：逆相分配型充填剤をつめたもの（ＴＳＫｇ
ｅｌ　ＯＤＳ−８　０ＴＩｖｆ　：東ソー■製）溶　離　液ニメタノール（ｌ％酢酸を含む）検　出　器
：紫外分光検出器（日本分光工業側製）２８Ｏｒ＋ｍＮＰＦ−８７ＫＡＮ　　−Ｉ　　　５００■よりＮＰＦ
　−　８　７　ＫＡＮＩＡ　　４９．５ｍｇ　ＮＰＦ−
８　７ＫＡＮ　　　Ｉ　Ｂ　　２　８　０ｍｇを得た。

また、ＮＰＦ　　８７ＫＡＮ　　Ｉ［　　２５０ｍｇよ
りＮＰＦ　　　８７ＫＡＮ　　　ｆｆＡ’３７．１ｍｇ
ＮＰＦ　　８７ＫＡＮ　−Ｉ［Ｂ　　ｌ　８　４■を得
た。

実施例ｌ：虫歯菌に対する増殖阻止効果（１）（方　法
）（イ）継代し、増殖させた虫歯菌（Ｓ，　ｍｕｔａｎｓ
，　ＭＴ８１４８（Ｃ）、Ｓ，ｍｕｔａｎｓ　６７１．
５　（１）　のスラントに、滅菌した生理食塩水８−を
加え、菌の懸濁液を得る。

（ロ）ｌ，５％寒天を添加したＲＰＭＩ　ｌ　６　４　
０　（ｐＨ７．０）Ｃ日水製薬■〕の培地にて、ＮＰＦ
−８７ＫＡＮ　−１及び〜ＰＦ　−８　７ＫＡＮ　−Ｉ
Ｉ並びに対照として分画分子量１，　Ｏ　Ｏ　Ｏ以上１
，　０　０　０以下の日本茶の水抽出物の各濃度の培地
１０ｍｌをつくり、８．　５　ｃｍシャーレに入れ、寒
天平板を作製した。

（ハ〉　この寒天平板にイ）で作製した懸濁液１００μ
ｌを均一に塗布し、３０℃にて一夜培養することにより
、最少増殖阻止濃度（Ｍ　Ｉ　Ｃと略称）を求めた。

尚、生育状態が判定しすらいものは一夜培養後、寒天無
添加の培地５ｒｎＩ．を加え、培養し、Ｍ　Ｉ　Ｃを求
めた。

以上の結果を第２表に示す。

実施例２：虫歯菌に対する増殖阻止効果（２）（方　法
）（イ）実施例１で用いたものと同じ虫歯菌の培養液とし
て、次の２種類を調製した。

Ａ培地：ＡＳＦ培地１０４　（味の素■）に牛胎児血を
ｌ％加えたもの、Ｂ培地＋ＡＳＦ培地１０４に、グルコース１％加えたも
の、（＋１）虫歯菌をＡ培地にて、一夜３０℃において培養
し、菌液とした。

（ハ〉　八及びＢ培地にて検体の各濃度の培地８ｍｌを
つくり、これに（＋１）の菌液１　０　０ｍｊ’を加え
、３０℃において一夜培養し、ＭＩ　Ｃを求めた。

判定は肉眼または６６０ｎｍの吸光度により行なった。

結果を第３表に示す。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ＮＰＦ　−　８　７ＫＡＮ　−　１の赤外線
スペクトルを示す。第２図は、ＮＰＦ　−　８　７ＫＡＮ　−　Ｉの水及び
０．１規定塩酸溶液の紫外線吸収スペクトルを示す。第
３図は、ＮＰＦ　−　８　７　ＫＡＮ　−　Ｉの０．１
規定水酸化ナトリウム液の紫外線吸収スペクトルを示す
。第４図は、ＮＰＦ　　８　７ＫＡＮ　−　ＩＩの赤外線
吸収スペクトルを示す。第５図は、ＮＰＦ　−　８　７ＫＡＮ　−　ｎの水及び
０．１規定塩酸溶液の紫外線吸収スペクトルを示す。第６図は、ＮＰＦ．−　８　７ＫＡＮ　−　Ｉｆの０．
１規定水酸化ナトリウム溶液の紫外線吸収スペクトルを
示す。第７図は、ＮＰＦ　−８　７ＫＡＮ　−　ＩＡの赤外線
吸収スペクトルを示す。第８図は、ＮＰＦ　−８　７ＫＡＮ　−　Ｉ　Ｂの赤外
線吸収スペクトルを示す。第９図は、ＮＰＦ　−８　７ＫＡＮ　−ＩｒＡの赤外線
吸収スペクトルを示す。第１０図は、ＮＰＦ−８７ＫＡＮ−ＩＩＢの赤外線吸収
スペクトルを示す。第１１図Ａ及びＢは、ＮＰＦ　−　８　７ＫＡＮ　−　
１及びＮＰＦ　−　８　７ＫＡＮ　−　ＩＩの高速液体
クロマトグラムを示す。（Ａ）（ＮＰＦ−８７ＫＡＮ−１）ＮＰＦ−８７ＫＡＮ−ＩＡ（Ｂ）（ＮＰＦ−８７ＫＡＮ−ＩＩ）ＮＰＦ−８７ＫＡＮ−ｍＡ

Claims

【特許請求の範囲】

（１）下記の理化学的性質を有する、ＮＰＦ−８７ＫＡＮ−Ｉ、ＮＰＦ−８７ＫＡＮ−II、Ｎ
ＰＦ−８７ＫＡＮ− I Ａ、ＮＰＦ−８ＫＡＮ−ＩＢ、
ＮＰＦ−８７ＫＡＮ−IIＡ及びＮＰＦ−８７ＫＡＮ−I
IＢからなる群より選ばれる物質を有効成分とするう蝕
予防剤。（ＮＰＦ−８７ＫＡＮ−Ｉ）（ｉ）形状：淡褐色粉末（ｉｉ）融点：明瞭な融点、分解点を示さない。（ｉｉｉ）元素分析：Ｃ：４９．１４％Ｈ：５．４２％Ｎ：＜０．５％灰分：＜０．９％（ｉｖ）分子量：１，０００〜１０，０００（透析チュ
ーブによる。）（ｖ）赤外線吸収スペクトル： ν＿ｍ＿ａ＿ｘｃｍ＾−＾１；３３９４、２９３８、１
６１７、１５２１、１４４３、１３７５、１２８４、１
２４５、１１０３、１０６７、７７９（ｖｉ）紫外線吸収スペクトル： λ＾水＿ｍ＿ａ＿ｘ　ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ）
２８０（７４．２）λ＾０＾−＾１＿ｍ＿ａ＿ｘ　規定
塩酸　ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ）２８０（７３．
４）λ＾０＾−＾１＿ｍ＿ａ＿ｘ　規定水酸化ナトリウ
ム　ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ）　３０５肩（１０
７．７）５１０肩（２１．６）（ｖｉｉ）溶解性：水、メタノール、エタノールに可溶。ヘキサン、エーテル、酢酸エチル、クロロホルム不溶。（ｖｉｉｉ）呈色反応：塩化第２鉄　陽性ニンヒドリン　陰性ｐ−アニシジン−フタル酸　〃アニシジン−ジフェニルアミン〃ドラーゲンドルフ〃（ＮＰＥ−８７ＫＡＮ−II）（ｉ）形状：淡褐色粉末（ｉｉ）融点：明瞭な融点、分解点を示さない。（ｉｉｉ）元素分析：Ｃ：５３．５８％Ｈ：４．５５％Ｎ：＜０．３％灰分：＜０．３％（ｉｖ）分子量：１０，０００以上（透析チューブによ
る。）（ｖ）赤外線吸収スペクトル： ν＿ｍ＿ａ＿ｘｃｍ＾−＾１；３４２２、２９２６、１
６０９、１５１８、１４４１、１３９２、１２８６、１
２４１、１１０３、１０６３、７８９（ｖｉ）紫外線吸収スペクトル： λ＾水＿ｍ＿ａ＿ｘ　ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ）
２８０（１２９．４）λ＾０＾−＾１＿ｍ＿ａ＿ｘ　規
定塩酸　ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ）２８０（１２
８．１）λ＿ｍ＿ａ＿ｘ　規定水酸化ナトリウム　ｎｍ
（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ）５１０肩（２５．５）（ｖ
ｉｉ）溶解性：水、メタノール、エタノールに可溶。ヘキサン、エーテル、酢酸エチル、クロロホルム不溶。（ｖｉｉｉ）呈色反応：塩化第２鉄　陽性ニンヒドリン　陰性ｐ−アニシジン−フタル酸　〃アニシジン−ジフェニルアミン　〃ドラーゲンドルフ　〃（ＮＰＦ−８７ＫＡＮ−ＩＡ）（ｉ）形状：淡褐色粉末（ｉｉ）融点：明瞭な融点、分解点を示さない。（ｉｉｉ）元素分析：Ｃ：３７．７１％Ｈ：３．９７％Ｎ：２．８３％灰分：１６．４８％（ｉｖ）分子量：８，１００（ポリエチレングリコールを基準としたゲル浸透クロマトグラフィーによる。）（ｖ）赤外吸収スペクトル： ν＾ｋ＾ａ＾ｒ＿ｍ＿ａ＿ｘｃｍ＾−＾１；３４２６、
２９２０、２８５２、１６２０、１４４５、１３８４、
１２５９、１１１４、１０６７、８０２（ｖｉ）紫外線吸収スペクトル： λ＾水＿ｍ＿ａ＿ｘ　ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ）
２８０（ｖｉｉ）溶解性：水、メタノール、エタノールに可溶。ヘキサン、エーテル、酢酸エチル、クロロホルム不溶。（ｖｉｉｉ）呈色反応：塩化第２鉄　陽性ニンヒドリン　陰性ｐ−アニシジン−フタル酸　陰性アニシジン−ジフェニルアミン　陰性ドラーゲンドルフ　陰性（ＮＰＦ−８７ＫＡＮ−ＩＢ）（ｉ）形状：淡褐色粉末（ｉｉ）融点：明瞭な融点、分解点を示さない。（ｉｉｉ）元素分析：Ｃ：４５．７８％Ｈ：４．４５％Ｎ：０．７１％灰分：１０．４５％（ｉｖ）分子量：４，９００（ポリエチレングリコールを基準としたゲル浸透クロマトグラフィーによる。）（ｖ）赤外吸収スペクトル： ν＾ｋ＾ａ＾ｒ＿ｍ＿ａ＿ｘｃｍ＾−＾１；３４１０、
２９６４、１６０９、１５２７１４４２、１２８４、１
２６２、１２０６、１１５７、１１１３、１０６７、８
０３（ｖｉ）紫外線吸収スペクトル： λ＾水＿ｍ＿ａ＿ｘ　ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ）
２８０（ｖｉｉ）溶解性：水、メタノール、エタノールに可溶。ヘキサン、エーテル、酢酸エチル、クロロホルム不溶。（ｖｉｉｉ）呈色反応：塩化第２鉄　陽性ニンヒドリン　陰性ｐ−アニシジン−フタル酸　陰性アニシジン−ジフェニルアミン　陰性ドラーゲンドルフ　陰性（ＮＰＦ−８７ＫＡＮ−IIＡ）（ｉ）形状：淡褐色粉末（ｉｉ）融点：明瞭な融点、分解点を示さない。（ｉｉｉ）元素分析：Ｃ：３８．６６％Ｈ：３．６７％Ｎ：１．５８％灰分：２２．９４％（ｉｖ）分子量：１２，８００（ポリエチレングリコールを基準としたゲル浸透クロマトグラフィーによる。）（ｖ）赤外吸収スペクトル： ν＾ｋ＾ｂ＾ｒ＿ｍ＿ａ＿ｘｃｍ＾−＾１；３４０２、
１６１１、１５２１、１４４２、１３７２、１２８３、
１２０５、１１１３、７９５（ｖｉ）紫外線吸収スペク
トル： λ＾水＿ｍ＿ａ＿ｘ　ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ）
２８０（ｖｉｉ）溶解性：水、メタノール、エタノールに可溶。ヘキサン、エーテル、酢酸エチル、クロロホルム不溶。（ｖｉｉｉ）呈色反応：塩化第２鉄　陽性ニンヒドリン　陰性ｐ−アニシジン−フタル酸　陰性アニシジン−ジフェニルアミン　陰性ドラーゲンドルフ　陰性（ＮＰＦ−８７ＫＡＮ−IIＢ）（ｉ）形状：淡褐色粉末（ｉｉ）融点：明瞭な融点、分解点を示さない。（ｉｉｉ）元素分析：Ｃ：４４．９７％Ｈ：４．４４％Ｎ：０．７９％灰分：１４．３２％（ｉｖ）分子量：９，４００（ポリエチレングリコールを基準としたゲル浸透クロマトグラフィーによる。）（ｖ）赤外吸収スペクトル： ν＾ｋ＾ａ＾ｒ＿ｍ＿ａ＿ｘｃｍ＾−＾１；３３８８、
２９６４、１６１１、１５１９、１４４５、１３７９、
１２８５、１２６１、１２０２、１０９６、８０２（ｖｉ）紫外線吸収スペクトル： λ＾水＿ｍ＿ａ＿ｘ　ｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ）
２８０（ｖｉｉ）溶解性：水、メタノール、エタノールに可溶。ヘキサン、エーテル、酢酸エチル、クロロホルム不溶。（ｖｉｉｉ）呈色反応：塩化第２鉄　陽性ニンヒドリン　陰性ｐ−アニシジン−フタル酸　陰性アニシジン−ジフェニルアミン　陰性ドラーゲンドルフ　陰性
（２）脱脂した貫衆のメタノール抽出物を、透析チュー
ブにより分画した得られる分子量１，０００〜１０，０
００の画分からなる貫衆の親水性溶媒抽出物を有効成分
とするう蝕予防剤。
（３）脱脂した貫衆のメタノール抽出物を、透析チュー
ブにより分画して得られる分子量１０，０００以上の画
分からなる貫衆の親水性溶媒抽出物を有効成分とするう
蝕予防剤。（４）貫衆の親水性溶媒抽出物を有効成分と
するう蝕予防剤。