JPH021497A - 新規物質及びう蝕予防剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、新規物質及びそれを有効成分とする虫歯菌に
対する増殖阻止効果を有するう蝕予防剤に関する。

〔従来の技術〕

ミラー（ＩＩＩ、　Ｄ、　Ｍ　ｉ　１１ｅｒ）が１９世
紀末に提唱した化学細菌説以来、う蝕の原因について種
々の議論が行われてきたが、現在では、長年にわたって
最も広く信じられてきた乳酸桿菌説が否定され、それに
代わってストレプトコッカスミュータンス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｍｕｔａｎｓ；以下Ｓ、ミニータン
スという。）を中心とする口腔連鎖球菌が主要な原因菌
であるとされている。

一方、従来う蝕予防法としては、 １）　食物から蔗糖を完全に除去すること、２）　歯質
を強化すること、 ３）　歯垢形成の原因となる粘着性グルカンの生成を阻
止すること、 ４）　虫歯菌の増殖を阻止すること、 などの手段が知られていた。

〔発明が解決しようとする課題〕

しかし上記のう蝕予防法は、いずれも不完全なものであ
った。例えば食物から蔗糖を除去することは非現実的で
あり、また歯質の強化剤や、粘着性グルカンの阻害酵素
、殺菌剤等は、副作用があったり、あるいは効果が低い
などの欠点のために満足すべきものではなかった。

そこで、副作用がなく、安価に製造することができ、し
かも効果の高いう蝕予防剤が望まれていた。

〔課題を解決するだめの手段〕

このような状況下で、本発明者らは、天然品で、安全性
が高く、しかも安価に製造できるものを求め鋭意研究を
行なったところ、ブドウの皮抽出物に強い虫歯菌への増
殖阻止効果があることが認められ、虫歯予防をすること
ができる口腔用組成物が得られることを発見し、本発明
を完成するに至った。

即ち、本発明は、ブドウの皮の親水性溶媒抽出物を有効
成分とするう蝕予防剤を提供するものである。

本発明は、脱脂したブドウの皮のメタノール抽出物を透
析チューブにより分画して得られる分子量１．０００〜
１０，０００の画分からなるブドウの皮の親水性溶媒抽
出物を提供するものである。

また本発明は、脱脂したブドウの皮のメタノール抽出物
を透析チューブにより分画して得られる分子ｉｉｏ、ｏ
ｏｏ以上の画分からなるブドウの皮の親水性溶媒抽出物
を提供するものである。

本発明は、上記抽出物をさらに精製して得られる、次の
理化学的性質を有するＮＰＦ−８８ＢＵ−Ｉ、ＮＰＦ−
８８ＢＵ−ＩＩ、ＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＡ、ＮＰＦ−８
８ＢＵ−ＩＢＳＮＰＦ−８８ＢＵ−ＨＡ及びＮＰＦ−８
８ＢＵ−ｎＢを提供するものである。

ＮＰＦ−８８ＢＵ−Ｉ （ｉ）形　　状：淡褐色粉末 （ｉｉ）融　　点：明瞭な融点、分解点を示さない。

（ｉｉｉ　）元素分析： Ｃ：５４．５６％ Ｈ：４．３１％ Ｎ：０．４４％ 灰分：１．２８％ ０：３４．１４％ （ｉｖ）分子量　：ｔ、ｏｏｏ〜１０．０００（透析チ
ューブによる） （ｖ）赤外線吸収スペクトル（第１図参照）１５２２．
１４４３．１３７４． １２８３．１２２４．１１５７． １１１０．１０６３．８１８． ７６５゜ （ｖｉ）紫外線吸収スペクトル（第２〜４図参照）（ｖ
ｉ）溶解性： 水、メタノール、エタノール可溶、ヘキサン、エーテル
、酢酸エチル、クロロホルム不溶。

（ｖｉｉｉ）呈色反応： 塩化第２鉄　　　　　　　　　（＋ ニンヒドリン　　　　　　　　（− ｐ−アニシジン−フタル酸　　く− アニシジン−ジフェニルアミン（− ドラーゲンドルフ　　　　　　　（− ＮＰＦ−８８ＢＵ−ｎ （ｉ）形　　状：淡褐色粉末 （ｉｉ）融　　点：明瞭な融点、分解点を示さない。

（ｉｉｉ　）元素分析 Ｃ：　５５．１８％ Ｈ：４．４６％ Ｎ：０．３９％ 灰分：０．９７％ ０：３５．１７％ （ｉｖ）分子量　：１０，０００以上（透析チューブに
よる） ＜ｖ）赤外線吸収スペクトル（第５図）νｒａａｘ　Ｃ
ｍ−’　：　３３９４．２９２４．１６０８．１５２０
．１４４２．１３６６． １２８６．１２４７．１１５８． １１０８．１０６３．８２０． ７６７゜ （ｖｉ）紫外線吸収スペクトル（第６〜８図）（ｖｉｉ
）溶解性： 水、メタノール、エタノール可溶。ヘキサン、エーテル
、酢酸エチル、クロロホルム不溶。

（ｖｉｉｉ）呈色反応： 塩化第２鉄　　　　　　　　　（＋） ニンヒドリン　　　　　　　　（−） ｐ−アニシジン−フタル酸　　く−） アニシジン−ジフェニルアミン（−） ドラーゲンドルフ　　　　　　　（−）ＮＰＦ−８８Ｂ
Ｕ−ＩＡ （ｉ）形　　状：淡褐色粉末 （ｉｉ）融　　点：明瞭な融点、分解点を示さない。

（ｉｉｉ　）元素分析 Ｃ：４９．６３％ Ｈ：４．７１％ Ｎ：０．０６％ 灰分：４．４６％ ０：３５．０９％ （ｉｖ）分子量　ニア、８５ｃｌ（ポリエチレングリコ
ールを標準としたゲル浸透クロ マトグラフィーによる。） （ｖ）赤外線吸収スペクトル（第９図）’ｗａｘ　Ｃｍ
−’　：　３４１０．２９２４．１６０８．１５２１． １３８３．１２８５． １２０６．１１５９． １０６５．８０２゜ （ｖｉ）紫外線吸収スペクトル ２８５２． １４４２． １２４８． １１１１、 （ｖｊ）溶解性： 水、メタノール、エタノール可溶。ヘキサン、エーテル
、酢酸エチノベクロロホルム不溶。

（ｖｉｉｉ）呈色反応： 塩化第２鉄　　　　　　　　　（十） ニンヒドリン　　　　　　　　（−） アニシジン−ジフェニルアミン（−） ドラーゲンドルフ　　　　　　　（−）ｐ−アニシジン
−フタル酸　　（−） ＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＢ （ｉ）形　　状：淡褐色粉末 （ｉｉ）融　　点：明瞭な融点、分解点を示さない。

（ｉｉｉ　）元素分析 Ｃ：５５．６６％ Ｈ：４．６３％ Ｎ：０．２６％ 灰分：２．４３％ ０：３９．７５％ （ｉｖ）分子ｆｆｉ：５，９５０（ポリエチレングリコ
ールを標準としたゲル浸透クロ マトグラフィーによる。） （ｖ）赤外線吸収スペクトル（第１０図）１５１９．１
４４３．１３７１ １２８２．１２４８．１２１２． １１５７．１１１１．１０６３． ８２０、 （ｖｉ）紫外線吸収スペクトル （ｖｊ）溶解性： 水、メタノール、エタノール可溶。ヘキサン、エーテノ
ペ酢酸エチル、クロロホルム不溶。

（ｖｉｉｉ）呈色反応： 塩化第２鉄　　　　　　　　　（＋） ニンヒドリン　　　　　　　　（−） アニシジン−ジフェニルアミン（−） ドラーゲンドルフ　　　　　　　（−）ｐ−アニシジン
−フタル酸　　（−） ＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＩＡ （ｉ）形　　状：淡褐色粉末 （ｉｉ）融　　点：明瞭な融点、分解点を示さない。

（ｉｉｉ　）元素分析 Ｃ：５２．７５％ Ｈ：’４．７３％ Ｎ：０．３３％ 灰分：１．８４％ ０　：　３４．４６％ （ｉｖ）分子ｉ　　：１１．９００（ポリエチレングリ
コールを標準としたゲル浸透ク ロマトグラフィーによる。） （ｖ）赤外線吸収スペクトル（第１１図）１５２０．１
４４２．１３７５． １２８３．１２５６．１１１１． １０６４．７９９、 （ｖｉ）紫外線吸収スペクトル （ｖｉｉ）溶解性： 水、メタノール、エタノール可溶。ヘキサン、エーテノ
ペ酢酸エチル、クロロホルム不溶。

（Ｖ血）呈色反応： 塩化第２鉄　　　　　　　　　　（＋）ニンヒドリン　
　　　　　　　　（−）アニシジン−ジフェニルアミン
（−） ドラーゲンドルフ　　　　　　　（−）ｐ−アニシジン
−フタル酸　　（−） ＮＰＦ−８８ＢＵ−］ＩＢ （ｉ）形　　状：淡褐色粉末 （ｉｉ）融　　点二明瞭な融点、分解点を示さない。

（ｉｉｉ　）元素分析 Ｃ：　５４．２４％ Ｈ：４．５０％ Ｎ：０．２１％ 灰分：１．８１％ （ｉｖ）分子量　：１１−．３００（ポリエチレングリ
コールを標準としたゲル浸透ク ロマトグラフィーによる。） （ｖ）赤外線吸収スペクトル（第１２図）１５１９．１
４４２．１３６６． １２８３．１２５１．１２０９． １１０９．１０６２．８２０、 （ｖｉ）紫外線吸収スペクトル （ｖｉｉ）溶解性： 水、メタノーノペエタノール可溶。ヘキサン、エーテル
、酢酸エチル、クロロホルム不溶。

（ｖｉｉ）呈色反応： 塩化第２鉄　　　　　　　　　　＋） ニンヒドリン　　　　　　　　　−） アニシジン−ジフェニルアミン　−） ドラーゲンドルフ　　　　　　　−） ｐ−アニシジン−フタル酸　　　−） また本発明は、上記の新規物質、すなわち、分子量１．
０００〜１０．０００の画分、分子量１０．０００以上
の画分、ＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＳＮＰＦ−８８ＢＵ−Ｉ
［、ＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＡＳＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＢ
ＳＮＰＦ−８８ＢＵ−ｎＡ。

ＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＩＢからなる群より選ばれる物質
又はブドウの皮の親水性溶媒抽出物を有効成分とするう
蝕予防剤を提供するものである。

さらに本発明は、ぶどうの皮を水、アルコール又はそれ
らの混合溶媒で抽出することを特徴とするＮＰＦ−８８
ＢＵ−１，ＮＰＦ−８８ＢＵ−ｎ、ＮＰＦ−８８ＢＵ−
ＩＡＳ　ＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＢ、ＮＰＦ−８８ＢＵ−
ｎＡ及びＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＩＢからなる群より選ば
れる物質の製造法に関する。

また本発明は、ぶどうの皮の粉末を含有する上記のう蝕
予防剤に関する。

また本発明は、食品の形である上記のぶどうの皮の粉末
を含有するう蝕予防剤に関する。

以下、本発明について、更に詳細に説明する。

■、原料 本発明の新規物質及びう蝕予防剤の原料としては、ブド
ウ科に属する各種の植物果皮を用いることができ、産地
、品種を問わない。

市場において入手の容易なものとしては、例えばプラウ
エア、マスカット、巨峰、キャンベルアーリー等を挙げ
ることができる。また赤ワインにも本発明の新規物質が
含まれているので、原料として用いることができる。

産業的な観点からは、ぶどう酒の製造工程において、主
醗酵の前又は後に分離され、廃棄されるぶどうの果皮を
用いることが有利である。

Ｈ１抽出 ａ）　　ＮＰＦ−８８ＢＵ−Ｉ及びＮＰＦ−８８ＢＵ−
Ｉ［本発明のＮＰＦ−８８ＢＵ−Ｉ及びＮ　Ｐ　Ｆ　−
８８ＢＵ−ＩＩはフェノール性物質であり、虫歯菌増殖
阻止活性によって特徴づけられるので、水、メタノーノ
ベエタノール等の親水性溶媒による抽出、遠心分離や濾
過などによって、この増殖阻止活性を指標として適当な
精製手段を適用して単離・精製することができる。

これらの方法は、必要に応じて単独あるいは任意の順序
に組合せ、または反復して適用できる。

以下にＮＰＦ−８８ＢＵ−Ｉ及びＮＰ、Ｆ−８８ＢＵ−
■の抽出方法の１例を説明する。

イ）　へキサン、エーテルなどの脱脂溶媒を用いて、室
温で、または加熱して原料の脱脂溶媒可溶部分を抽出除
去する。

口）　次いで原料を、風乾又は真空乾燥して、溶媒を除
去する。

ハ）　次いでメタノールを抽出原料に加えて常法に従い
抽出処理する。通常は沸騰下で抽出するが、室温又は４
℃の低温室にて抽出を行なっても、活性成分が得られる
。

二）　得られたメタノール抽出液を濃縮乾固した後、水
で抽出する。具体的には水を加えて懸濁し、不溶物を濾
別し、さらに不溶物に水を加えて、よく撹拌した後濾過
し、前の液とあわせる。

ホ）　この水溶液に等量の酢酸エチル又はクロロホルム
等の非親水性有機溶媒を加え、有機溶媒可溶部分を除去
する。

へ）　非親水性有機溶媒可溶部分を除去した水層を分画
分子Ｉｔ、　ＯＯＯの透析チューブ（スペクトラ／ポア
６；スペクトラムメディカルインダストリー社製）に入
れ、水にて透析し、内液と外液に分画する。

ト）　分画分子量１．０００の透析チューブにて分画し
た透析内液をさらに、分画分子量１０，０００の透析チ
ューブ（スペクトラ／ポア６；スペクトラムメディカル
インダストリー社製）に入れ、水にて透析し、内液と外
液に分画する。

チ）　このように分画した分子量１．０００〜１０．０
００及び１０，０００以上の画分は強い虫歯菌増殖阻止
活性を示す。これらの画分はさらに凍結乾燥などの操作
により、それぞれ淡褐色の粉末として得ることができる
。

本発明者は、分子量１．０００〜１０，０００及び１０
，０００以上に分画された有効物質を各々ＮＰＦ−８８
ＢＵ−Ｉ及ＮＰＦ−８８ＢＵ−Ｉ［と命名した。

ｂ）　　ＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＡ、ＮＰＦ−８８ＢＵ−
ＩＢ、ＮＰＦ＝８８ＢＵ−Ｉ［Ａ及びＮ　Ｐ　Ｆ　−８
８Ｕ−ｎＢ このように、透析チューブにて分画してきたＮＰＦ−８
８ＢＵ　−Ｉ及びＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＩは、さらにそ
れぞれ２つの画分に分離できる。

すなわちＮＰＦ−８８ＢＵ−Ｉは、分子量７、８５０の
画分（ＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＡ）と分子量５．９５０の
画分（ＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＢ）から、またＮＰＦ−８
８ＢＵ−ｍは分子量１１．９００の画分（ＮＰＦ−８８
ＢＵ−ＩＩＡ）と分子量１１．３００の画分（ＮＰＦ−
８８ＢＵ−ＩＩＢ）から構成されている。（第１３図参
照） これら４種（ＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＡＳＮＰＦ−８８Ｂ
Ｕ−ＩＢＳＮＰＦ−８８ＢＵ−ｍＡ。

及びＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＩＢ）の物質の分離精製は、
種々の公知の方法によって行うことができるが、以下の
条件で高速液体クロマトグラフを用いて行うことが好ま
しい。

（ｉ）分離カラム この際分離カラムとしては、分配・吸着型樹脂、イオン
交換樹脂、ゲル濾過型の分離剤等を充填したものを用い
ることができる。また付属的に自動注入や自動分取を行
う装置を使用することも好ましい。

（ｉｉ）溶離剤 溶離剤としては、水−メタノール系の他、水、アセトニ
トリノペジメチルホルムアミド、酢酸、ブタノール、ヘ
キサンその他の各種緩衝溶液を単独で、又は任意の比率
で混合して、用いることができる。

（ｉｉｉ　）指標 本発明の有効物質を検出するための指標としては、２８
０ｎｍの波長の吸光度及び虫歯菌増殖阻止活性を用いる
ことができる。

（ｉｖ）処理方式 処理方式としては、オープンカラム、中圧又は高圧方式
を用いることができる。

ＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＡ、ＮＰＦ−８８ＢＵＩＢ、ＮＰ
Ｆ　　８８ＢＵ−Ｉ［Ａ及びＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＩＢ
は、前記高速液体クロマトグラフでそれぞれ単一のピー
クを示し、虫歯菌増殖阻止活性が一致する。

また、本物質の分子量を測定するために行なったゲル浸
透クロマトグラフにても単一ピークを示す。

各種ポリエチレングリコールの標準分子量にて検討した
ところＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＡの分子量は７．８５０、
ＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＢは５、９５０、ＮＰＦ−８８Ｂ
Ｕ−ＩＩＡは、１１．９００そしてＮＰＦ　　８８ＢＵ
　　ＩＩＢは１１，３００と決定された。

以上述べてきたようにＮＦ−８８ＢＵ−Ｉは、ＮＰＦ−
８８ＢＵ−ＩＡとＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＢの混合物で、
一方ＮＦ−８８ＢＵ−ＩＩはＮＰＦ−８８ＢＵ−ｍＡと
ＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＩＢの混合物である。

後で述べるが、虫歯菌増殖阻止活性に関しては、ＮＰＦ
　　８８ＢＵ−ＩＡＳＮＰＦ　　８８ＢＩＪ−ＩＢ、Ｎ
ＰＦ−８８ＢＵ　　ＩＩＡ及びＮＰＦ−８８ＢＵ−ｎＢ
並びにＮＰＦ−８８ＢＵ−Ｉ、ＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＩ
はほぼ同程度の効果が認められる。

尚、有効物質は、メタノール、エタノーノペ水に可溶で
あるため、前述の抽出方法は、原料のメタノール抽出物
より出発しているが、高価な有機溶媒を節約するために
はまず大量の水または熱湯にて抽出した後、同様の操作
を行ってもよい。

また前記の紫外線吸収スペクトルでもあきらかなように
、アルカリ性にすると、本発明の新規物質はいずれも黄
褐色から赤褐色に着色するので、抽出過程全体を鉱酸や
有機酸を用いて弱酸性下で行うことも有効な抽出手段で
ある。

メタノール等の親水性溶媒による粗抽出物も虫歯菌増殖
阻止活性を有し、本発明のう蝕防止剤の有効成分として
使用できるが、不純物をできる限り除去し、より虫歯菌
増殖阻止作用の強い物質を得、これを使用することが好
ましい。

■、う蝕予防剤 ぶどうの皮より得られた本発明の有効成分は、ポリフェ
ノール性の化合物である。従来ポリフェノール性の化合
物のある種のものは、粘着性グルカン生成酵素（グ、ル
コシルトランスフェラーゼ）の阻害を示すことが知られ
ており、例えば特開昭５８−１２１２１８号公報に開示
されているが、ぶどう由来のポリフェノールについては
、何ら言及されていない。

また煎茶より得られる低分子ポリフェノールには虫歯菌
の増殖阻止効果があることが最近報告されている（１９
８７年１１月１６日付の毎日新聞朝刊第３版第αＱ面の
記事：「ムシ歯予防に緑茶！」参照）が、本発明のう蝕
予防剤の有効成分は、高分子ポリフェノールである。

本発明のう蝕予防剤は、ぶどうの皮をそのまま粉末にし
たものや、各種の方法によって有効成分を抽出したもの
、又はＮＰＦ−８８ＢＵ−１、ＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＩ
、ＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＡ。

ＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＢ、ＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＩＡ及
びＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＩＢの精製物の形態で、公知の
口腔用組成物に添加することにより製造される。ぶどう
の皮の粉末は、乾燥させて粉砕する方法や、フリーズド
ライ法などによって製造することができ、ぶどうの皮の
粉末を用いて、繊維入食品を製造することができる。こ
こで食品とは、飲料をも含む。

公知の口腔用組成物としては、次のようなものを挙げる
ことができる。

練り歯磨き、粉歯暦き、マウスウォッシニ、飴類、チュ
ーインガム、各種の甘味菓子類、その池のあらゆる飲料
、食品類及び口腔用の薬剤。

■、毒性及び変異原性 急性毒性 マウス腹腔内投与により求める。

変異原性 サルモネラ菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｔｙｐｈｉｍｕ
ｒｉｕｍ　ＴＡｌｏｏ、Ｓ、　ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ
　Ｔ’　Ａ　９８　）を用い、復帰変異を指標とした変
異原性試験を実施することによって調べる。

またこの直接試験において、さらには乳動物のもつ薬物
代謝酵素（Ｓ−９）を検体に作用させて産生される代謝
物の変異原料を検討する。

以上の方法は、一般にエイムス（Ａｍｅｓ）テストと呼
ばれている。（Ｄ、　ｉＡ、　Ｍａｒｏｎ　ａｎｄ　Ｂ
、　Ｎ、八ｍｅｓ：ＭｕｔａｔｉｏｎＲｅｓｅａｒｃｈ
、　　１１３．１７３（１９８３））。

〔実施例〕

以下、実施例によって本発明をさらに詳細に説明する。

実施例１：有効物質の製造 協和発酵工業株式会社より分与されたワイン原料ブドウ
の皮（品種ヴエルデレー）を原料として、次の工程によ
り本発明の新規物質を製造した。

イ）　ウェット状態ブドウの皮１ｋｇをメタノール３、
０００−中に浸浸し、沸騰下３時間抽出した。

この操作を３回行ない、抽出液を集めた。

口）　得られた抽出液を集め、エバポレーターにて水浴
４０℃で減圧下濃縮し、真空下乾燥した。

これに水６５０ｍｆ！を加え、撹拌後濾過した。

不溶物に、さらに水２００ｍ１を加えて撹拌した後、濾
過し、濾液を集めた。

ハ）　この水溶液に５００ｍ１の酢酸エチルを加えて抽
出した。この操作を３回行ない、酢酸エチル可溶部分を
除去した。酢酸エチル抽出物は微量であった。

二）　酢酸エチル可溶部分を除去した水抽出物を分画分
子量１．０００の透析チューブ（スペクトラ／ポア６；
スペクトラムメディカルインダストリー社製）に入れ、
水にて４℃で１週間撹拌しながらその間に外液を毎日交
換して、透析し、内液と外液に分画した。

ネ）　分画分子量１．０００の透析チューブにて分画し
た透析内液をさらに分画分子１ｔｌｏ、０００の透析チ
ューブ（スペクトラ／ポア６；スペクトラムメディカル
インダストリー社製）に入れ、水にて４℃で１週間撹拌
しながらその間に外液を毎日交換して、透析し、内液と
外液に分画した。

へ）　このように分画したところ、分子量１．０００〜
１０，０００および１０，０００以上の分画部分に目的
とする虫歯菌増殖阻止活性を認め、凍結乾燥により、有
効物質を２種とも淡褐色の粉末として得ることができた
。

分子量１．０００〜１０．０００の画分（ＮＰＦ−８８
ＢＵ−Ｉ）は、２．５９　ｇ得ることができた。

分子量１０，０００以上の画分（ＮＰＦ−８８ＢＵ−Ｉ
［）は、１．０５ｇ得ることができた。

分子量１．０００以下の画分は１３．０７　ｇ得ること
ができたが、虫歯菌増殖阻止活性はＮＰＦ−８８ＢＵ−
Ｉ及びＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＩに比べて弱かった。

結果を表１に示す。

表　　１ 実施例２：有効物質の製造 市販の巨峰（山梨−宮農業協同組合より買入）を原料と
して用いた。

イ）　巨峰を果肉と果皮に分離し、ウェット状態の皮２
１３．３ｇをメタノール１．　ＯＯＯ−に浸浸し、沸騰
下３時間抽出した。この操作を３回行ない、抽出液を得
た。

口）　以降は実施例１と同様に実施した。

結果を表２に示す。

表２ 実施例３ ＮＰＦ−８８ＢＵ−１及びＮＰＦ−８８ＢＵ−■からＮ
ＰＦ−８８ＢＵ−ＩＡ、ＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＢ、ＮＰ
Ｆ−８８ＢＵ−ＩＩΔ及びＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＩＢの
分離・精製を高速液体クロマトグラフにて行なった。条
件は次のとおりである。

分離カラム：吸着・分配型樹脂を充填したもの（Ｓｈｏ
ｄｅｘ　Ｒ３−ｐａｃｋ　、　Ｄ　Ｅ　−６１３：昭和
電工社製） 溶　離　液：水：メタノール−１：９ 検　出　器：紫外分光検出器（日本分光工業■製）　　
　２８０ｎｍ ＮＰＦ−８８ＢＵ−１，１８５ｍｇからＮＰＦ−８８Ｂ
Ｕ−１，Ａ１７ｍｇ及びＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＢ７７ｍ
ｇを得た。

またＮＰＦ−８８ＢＵ−Ｉ［，２００ｍｇからＮＰＦ−
８８ＢＵ−ＩＩＡ４８ｍｇ及びＮＰＦ−８８ＢＵ　−Ｉ
［８７５ｍｇを得た。

実施例４：虫歯菌に対する増殖阻止効果（１）（方法） イ）１！代し、増殖させた虫歯菌（Ｓ、　ｍｕｔａｎｓ
　１．１Ｔ８１４８（ｃ）　、Ｓ、ｍｕｔａｎｓ　６７
１５　（ｇ）　）のスラントに、滅菌した生理食塩水８
−を加え、菌の懸濁液を得る。

口）１．５％寒天を添加したＲＰＭＩ　１６４０　　（
ｐＨ７，０）（田水製薬■〕の培地にて、Ｎ　Ｐ　Ｆ　
−８８ＢＵ−Ｉ及びＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＩ並びに対照
として分画分子Ｉｔ、　ＯＯ０以上と１．０００以下の
日本茶の水抽出物の各濃度の培地１０ｒｄをつくり、８
．５　ａｍシャーレに入れ、寒天平板を作製した。

ハ）　この寒天平板にイ）で作製した懸濁液１００μβ
を均一に塗布し、３０℃にて一夜培養することにより、
最少増殖阻止濃度（ＭＩＣと略称）を求めた。

尚、生育状態が判定しすらいものは一夜培養後、寒天無
添加の培地５ｍｊ！を加え、培養し、ＭＩＣを求めた。

以上の結果を表３に示す。

実施例５：虫歯菌に対する増殖阻止効果（２）（方法） （イ）虫歯菌の培養液としては次の２種類を用いた。

Ａ培地：ＡＳＦ培地１０４　（味の素９１）に牛胎児血
清を１％加えたもの。

Ｂ培地：ＡＳＦ培地１０４に、グルコース１％加えたも
の。

（ロ）虫歯菌をＡ培地にて一夜３０℃にて培養し、菌液
とする。

（ハ）Ａ及びＢ培地にて検体の各濃度の培地８ｄをつく
り、これに（ロ）の菌液１００μｌを加え、３０℃にて
一夜培養し、ＭＩＣを求めた。結果を表４に示す。

判定は肉眼または６６０ｎｍの吸光度による。

実施例６：虫歯菌による不溶性グルカン生成阻止効果 （方法） （イ）グルカン生成用培地としては、実施例５−（イ）
のＡＳＢ培地に１％蔗糖を添加したものを用いた。

（ロ）虫歯菌は実施例５−（０）の菌液を用いた。

（ハ）１％蔗糖添加Ａ１及びＢ培地にて検体の各濃度の
培地３ｒｄをつくり、これに（ロ）の菌液１ｍｊ！を加
え、３０℃にて一夜培養し、不溶性グルカンの生成を１
００％阻止する最小濃度を求めた。

結果を表５に示す。

表５ 試験例 （急性毒性） 各物質のマウス腹腔内投与による急性毒性は次のとおり
であった。

ＮＰＦ　　８８ＢＵ　　Ｉ　　　ＬＤｓｏ＞４００ｍｇ
／ｋｇＮＰＦ　　８８ＢＵ−ＩＩ　　　ＬＤｓｏ＝３０
０ｍｇ／ｋｇＮＰＦ　　８８ＢＵ　　４Ａ　　ＬＤｓｏ
＞４００ｍｇ／ｋｇＮＰＦ　　８８ＢＵ　　ＩＢ　　Ｌ
Ｄｓｏ＞４００ｍｇ／ｋｇＮＰＦ　　８８ＢＵ　　ＩＩ
Ａ　　ＬＤｓｏ＝３００ｍｇ／ｋｇＮＰＦ−８８ＢＵ−
Ｉ［Ｂ　　ＬＤｓｏ＝３００ｍｇ／ｋｇ（変異原性） ＮＰＦ−８８ＢＵ−１及びＮＰＦ−８８ＢＵ−■は、変
異原性を有しなかった。

またさらには乳動物のもつ、薬物代謝酵素（Ｓ−９）を
検体に作用させて産生される代謝物の変異原性を検討し
たが、変異原性を有しなかった。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ＮＰＦ　　８８ＢＵ−Ｉの赤外線吸収スペク
トルを示す。 第２図は、ＮＰＦ−８８ＢＵ−Ｉの紫外線吸収スペクト
ル（水中）を示す。 第３図は、ＮＰＦ−８８ＢＵ−Ｉの紫外線吸収スペクト
ル（０，１規定塩酸溶液中）を示す。 第４図は、ＮＰＦ−８８ＢＵ−Ｉの紫外線吸収スペクト
ル（０，１規定水酸化ナトリウム溶液中）を示す。 第５図は、ＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＩの赤外線吸収スペク
トルを示す。 第６図は、ＮＰＦ−８８ＢＵ−Ｉ［の紫外線吸収スペク
トル（水中）を示す。 第７図は、ＮＰＦ−８８ＢＵ−ｎ紫外線吸収スペクトル
（０，１規定塩酸溶液中）を示す。 第８図は、ＮＰＦ　　８８ＢＵ　　ＩＩの紫外線吸収ス
ペクトル（０，１規定水酸化ナトリウム溶液中）を示す
。 第９図はＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＡの赤外線吸収スペクト
ルを示す。 第１０図はＮＰＦ−８８ＢＵ−ＩＢの赤外線吸収スペク
トルを示す。 第１１図はＮＰＦ−８８ＢＵ−ｍＡの赤外線吸収スペク
トルを示す。 第１２図はＮＰＦ−８８ＢＵ−ｎＢの赤外線吸収スペク
トルを示す。 第１３図（ａ）及び（ｂ）はＮＰＦ−８８ＢＵ−■及び
ＮＰＦ−８８ＢＵ−［の高速液体クロマトグラムを示す
。 第１３図 （α）　ＮＰＦ−８８ＢＩＪ−１ 保埒峙間 （分） 第１３図 （ｂ）　ＮＰＦ−８８ＢｔＪ−ｎ 保持時間 （分）

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. （１）次の理化学的性質を有するＮＰＦ−８８ＢＵ−Ｉ
   ＿ｏ （ｉ）形状：淡褐色粉末 （ｉｉ）融点：明瞭な融点、分解点を示さない。 （ｉｉｉ）元素分析： Ｃ：５４．５６％ Ｈ：４．３１％ Ｎ：０．４４％ 灰分：１．２８％ Ｏ：３４．１４％ （ｉｖ）分子量：１，０００〜１０，０００（透析チュ
   ーブによる） （ｖ）赤外線吸収スペクトル ν＿ｍ＿ａ＿ｘｃｍ＾−＾１；３４１０、２９２４、１
   ６１１、１５２２、１４４３、１３７４、１２８３、１
   ２２４、１１５７、１１１０、１０６３、８１８、７６
   ５。 （ｖｉ）紫外線吸収スペクトル ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｅ▲数式、化学式
   、表等があります▼）２７９（１２７．５） ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｅ▲数式、化学式
   、表等があります▼）２７９（１２４．７） ▲数式、化学式、表等があります▼なし （ｖｉｉ）溶解性： 水、メタノール、エタノール可溶、ヘキサン、エーテル
   、酢酸エチル、クロロホルム不溶。 （ｖｉｉｉ）呈色反応： 塩化第２鉄（＋） ニンヒドリン（−） ｐ−アニシジン−フタル酸（−） アニシジン−ジフェニルアミン（−） ドラーゲンドルフ（−）
2. （２）次の理化学性性質を有するＮＰＦ−８８ＢＵ−I
   I。 （ｉ）形状：淡褐色粉末 （ｉｉ）融点：明瞭な融点、分解点を示さない。 （ｉｉｉ）元素分析： Ｃ：５５．１８％ Ｈ：４．４６％ Ｎ：０．３９％ 灰分：０．９７％ Ｏ：３５．１７％ （ｉｖ）分子量：１０，０００以上（透析チューブによ
   る） （ｖ）赤外線吸収スペクトル ▲数式、化学式、表等があります▼；３３９４、２９２
   ４、１６０８、１５２０、１４４２、１３６６、１２８
   ６、１２４７、１１５８、１１０８、１０６３、８２０
   、７６７。（ｖｉ）紫外線吸収スペクトル ▲数式、化学式、表等があります▼（▲数式、化学式、
   表等があります▼）２７９（１２０．９） ▲数式、化学式、表等があります▼（▲数式、化学式、
   表等があります▼）２７９（１２２．４） ▲数式、化学式、表等があります▼（▲数式、化学式、
   表等があります▼）なし （ｖｉｉ）溶解性： 水、メタノール、エタノール可溶。 ヘキサン、エーテル、酢酸エチル、クロロホルム不溶。 （ｖｉ）呈色反応： 塩化第２鉄（＋） ニンヒドリン（−） ｐ−アニシジン−フタル酸（−） アニシジン−ジフェニルアミン（−） ドラーゲンドルフ（−）
3. （３）次の理化学的性質を有するＮＰＦ−８８ＢＵ（ｉ
   ）形状：淡褐色粉末 （ｉｉ）融点：明瞭な融点、分解点を示さない。 （ｉｉｉ）元素分析： Ｃ：４９．６３％ Ｈ：４．７１％ Ｎ：０．０６％ 灰分：４．４６％ Ｏ：３５．０９％ （ｉｖ）分子量：７，８５０（ポリエチレングリコール
   を標準としたゲル浸透クロマトグラフィーによる。） （ｖ）赤外線吸収スペクトル ν＿ｍ＿ａ＿ｘｃｍ＾−＾１；３４１０、２９２４、２
   ８５２、１６０８、１５２１、１４４２、１３８３、１
   ２８５、１２４８、１２０６、１１５９、１１１１、１
   ０６５、８０２。 （ｖｉ）紫外線吸収スペクトル ▲数式、化学式、表等があります▼（▲数式、化学式、
   表等があります▼）２８０（７６．２） ▲数式、化学式、表等があります▼（▲数式、化学式、
   表等があります▼）２７８（６５．０） ▲数式、化学式、表等があります▼（▲数式、化学式、
   表等があります▼）なし （ｖｉｉ）溶解性： 水、メタノール、エタノール可溶。 ヘキサン、エーテル、酢酸エチル、クロロホルム不溶。 （ｖｉｉｉ）呈色反応： 塩化第２鉄（＋） ニンヒドリン（−） アニシジン−ジフェニルアミン（−） ドラーゲンドルフ（−） ｐ−アニシジン−フタル酸（−）
4. （４）次の理化学的性質を有するＮＰＦ−８８ＢＵ（ｉ
   ）形状：淡褐色粉末 （ｉｉ）融点：明瞭な融点、分解点を示さない。 （ｉｉｉ）元素分析： Ｃ：５５．６６％ Ｈ：４．６３％ Ｎ：０．２６％ 灰分：２．４３％ Ｏ：３９．７５％ （ｉｖ）分子量：５，９５０（ポリエチレングリコール
   を標準としたゲル浸透 クロマトグラフィーによる。） （ｖ）赤外線吸収スペクトル ν＿ｍ＿ａ＿ｘｃｍ＾−＾１；３４０４、２９３０、１
   ６０８、１５１９、１４４３、１３７１、１２８２、１
   ２４８、１２１２、１１５７、１１１１、１０６３、８
   ２０、 （ｖｉ）紫外線吸収スペクトル ▲数式、化学式、表等があります▼（▲数式、化学式、
   表等があります▼）２７８（５１．４） ▲数式、化学式、表等があります▼（▲数式、化学式、
   表等があります▼）２７９（７２．９） ▲数式、化学式、表等があります▼（▲数式、化学式、
   表等があります▼）なし （ｖｉｉ）溶解性： 水、メタノール、エタノール可溶。 ヘキサン、エーテル、酢酸エチル、クロロホルム不溶。 （ｖｉｉｉ）呈色反応： 塩化第２鉄（＋） ニンヒドリン（−） アニシジン−ジフェニルアミン（−） ドラーゲンドルフ（−） ｐ−アニシジン−フタル酸（−）
5. （５）次の理化学的性質を有するＮＰＦ−８８ＢＵ−I
   IＡ。 （ｉ）形状：淡褐色粉末 （ｉｉ）融点：明瞭な融点、分解点を示さない。 （ｉｉｉ）元素分析： Ｃ：５２．７５％ Ｈ：４．７３％ Ｎ：０．３３％ 灰分：１．８４％ Ｏ：３４．４６％ （ｉｖ）分子量：１１，９００（ポリエチレングリコー
   ルを標準としたゲル浸 透クロマトグラフィーによる。） （ｖ）赤外線吸収スペクトル νｍ＿ａ＿ｘｃｍ＾−＾１；３３９８、２９２４、１６
   ０７、１５２０、１４４２、１３７５、１２８３、１２
   ５６、１１１１、１０６４、７９９、 （ｖｉ）紫外線吸収スペクトル ▲数式、化学式、表等があります▼（▲数式、化学式、
   表等があります▼）２７９（７４．７） ▲数式、化学式、表等があります▼（▲数式、化学式、
   表等があります▼）２７９（７８．３） ▲数式、化学式、表等があります▼（▲数式、化学式、
   表等があります▼）なし （ｖｉｉ）溶解性： 水、メタノール、エタノール可溶。 ヘキサン、エーテル、酢酸エチル、クロロホルム不溶。 （ｖｉｉｉ）呈色反応： 塩化第２鉄（＋） ニンヒドリン（−） アニシジン−ジフェニルアミン（−） ドラーゲンドルフ（−） ｐ−アニシジン−フタル酸（−）
6. （６）次の理化学的性質を有するＮＰＦ−８８ＢＵ−I
   IＢ。 （ｉ）形状：淡褐色粉末 （ｉｉ）融点：明瞭な融点、分解点を示さない。 （ｉｉｉ）元素分析： Ｃ：５４．２４％ Ｈ：４．５０％ Ｎ：０．２１％ 灰分：１．８１％ （ｉｖ）分子量：１１，３００（ポリエチレングリコー
   ルを標準としたゲル浸 透クロマトグラフィーによる。） （ｖ）赤外線吸収スペクトル ν＿ｍ＿ａ＿ｘｃｍ＾−＾１；３３７６、２９２６、１
   ６０７、１５１９、１４４２、１３６６、１２８３、１
   ２５１、１２０９、１１０９、１０６２、８２０、 （ｖｉ）紫外線吸収スペクトル ▲数式、化学式、表等があります▼（▲数式、化学式、
   表等があります▼）２８０（９８．８） ▲数式、化学式、表等があります▼（▲数式、化学式、
   表等があります▼）２８０（１００．４） ▲数式、化学式、表等があります▼（▲数式、化学式、
   表等があります▼）なし （ｖｉ）溶解性： 水、メタノール、エタノール可溶、ヘキサン、エーテル
   、酢酸エチル、クロロホルム不溶。 （ｖｉｉｉ）呈色反応： 塩化第２鉄（＋） ニンヒドリン（−） アニシジン−ジフェニルアミン（−） ドラーゲンドルフ（−） ｐ−アニシジン−フタル酸（−）
7. （７）脱脂したブドウの皮のメタノール抽出物を、透析
   チューブにより分画して得られる分子量１，０００〜１
   ０，０００の画分からなるブドウの皮の親水性溶媒抽出
   物。
8. （８）脱脂したブドウの皮のメタノール抽出物を、透析
   チューブにより分画して得られる分子量１０，０００以
   上の画分からなるブドウの皮の、親水性溶媒抽出物。
9. （９）請求項１〜８のいずれか１項に記載の物質を有効
   成分とするう蝕予防剤。
10. （１０）ブドウの皮の親水性溶媒抽出物を有効成分とす
    るう蝕予防剤。
11. （１１）ブドウの皮を水、アルコール又はそれらの混合
    溶媒で抽出することを特徴とする請求項（１）〜（８）
    のいずれか１項に記載の物質の製造方法。