JPH03173805A

JPH03173805A - 卵分割促進剤

Info

Publication number: JPH03173805A
Application number: JP2234280A
Authority: JP
Inventors: Michio Takahashi; 迪雄高橋; Kunio Shioda; 邦郎塩田; Hiroshiro Shibai; 柴井　博四郎
Original assignee: Ajinomoto Co Inc
Current assignee: Ajinomoto Co Inc
Priority date: 1989-09-11
Filing date: 1990-09-04
Publication date: 1991-07-29
Also published as: EP0417743A1; AU633967B2; EP0417743B1; US5206160A; AU6236390A

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】産１上坐剋且公立本発明は卵分割促進剤及び該卵分割促進剤で処理した受
精卵若しくは卵に関する。

従ｍ避動物は各々の種に固有の一定の妊娠期間を経て出産する
。このとき、排卵した卵子が精子と接触してから出産（
Ｗ化）まで発生する確立を生殖効率と呼び、ヒトでは３
０％以下、豚、牛などの家畜でも７０％前後に留まる。

この様な生殖効率が１００％にならない現象、つまり胚
淘汰は種保存という生命現象に関わる。また、妊娠期間
は一定とされている。胚淘汰の改善、妊娠期間の短縮は
、産業上、特に畜産利用などの分野においては大きな課
題と言える。試験管内での受精法は体外受精とトランス
ジェニック動物作製など実用上、学問上で広く利用され
ている。試験管内受精の成功率を高めるために、受精卵
もしくは卵の保存方法と発生効率の向上が望まれている
。

Ｉ　（“　しよ゛と　るｉ胚淘汰の改善、妊娠期間の短縮、試験管内受精法の改善
を目的とした卵分割促進剤を提供することにある。

ｉ　　　゛　るための本発明者等はかかる課題を解決するため非分割促進物質
を探索した結果、ポリペプチドＢＵＦ−３、ＢＵＦ−４
及びＢＵＦ−５のいずれにも非分割促進効果があること
を見いだし、本発明を完成した。

即ち本発明はポリペプチドＢＵＦ−３、ＢＵＦ−４及び
ＢＵＦ−５の内、１種類以上の物質を有効成分として含
有する卵分割促進剤及び該卵分割促進剤で処理してなる
受精卵又は卵である。

本発明を以下に詳細に記載する。

多くの哺乳動物の受精卵はインビトロで培養した場合特
定の時期に発生を停止、マウスの場合は２細胞期で停止
することが知られている。

この様な場合、ポリペプチドＢＵＦ−３、ＢＩＩＦ　−
４及びＢＵＦ−５のいずれか１種類以上を与えると、以
下のような非分割を促進させることができる。

交配マウスより採取した受精卵をｗｈ　ｉ　ｔ　ｔｅｎ
″Ｓ培地巾で培養する際に適当量の本発明の卵分割促進
剤を添加することにより、４細胞期、更には桑状胚への
移行を促進させることができる。この様にして得た胚を
仮親に移植すると妊娠分娩を通して正常な発育がみられ
る。この知見に基づき他の動物にも応用することが出来
る。

本発明の卵分割促進剤で処理される受精卵又は卵の種類
は魚、鳥、牛、豚、羊、山羊、馬、鼠、犬、猫又はヒト
である。また卵分割促進剤で処理された受精卵又は卵は
そのまま出産（卿化）されてもよいし、また凍結保存し
てもよい。

ポリペプチドＢＵＦ−３、ＢＵＦ−４及びＢＵＦ−５の
理化学的性質は以下の通りである。

（１）ポリペプチドＢＵＦ−３（以下ＢＵＦ−３とする
）の理化学的性質（ａ）　　構　造・・・単量体Ａ（第１図参照）のホモ
ダイマー（ｂ）　　分子量・・・単量体として１６±１ｋｄ（１
，０％メルカプトエタノール存在下、５ＯＳ−電気泳動法）ホモダイマーとして２５±１ｋｄ（メルカプトエタノール非存在下、５ＯＳ−電気泳動法）（Ｃ）　　等電点：ｐ１６．３±０．２（クロマトフオ
ーカ累ング法）ｐ１７．３（等電点電気泳動法）（ｄ）　　ｐＨ安定性：ｐＨ２，０〜１０．０の範囲で
安定（ｅ）　　熱安定性：６０°Ｃ，６０分の加熱で安
定（ｆ）　　有機溶媒安定性：低級アルコール、アセト
ニトリルに対し安定（ｇ）　　プロテアーゼ耐性：プロナーゼ処理で完全に
失活する。

（ハ）アミノ酸配列：単量体Ａのアミノ酸配列は第１に
示す。

（２）ポリペプチドＢＵＦ−４（以下ＢＵＦ−４とする
）の理化学的性質（ａ）　　構　造：単量体Ａ及び単量体Ｂ（第２図参照
）のヘテロダイマー（ｂ）　　分子量：単量体Ａ及び単量体Ｂともに１６±
１ｋｄ（１，０％メルカプトエタノール存在下、５ＯＳ−電気泳動法）ヘテロダイマーとして２５±１ｋｄ　（メルカプトエタノール非存在下、５ＯＳ−電気泳動法）（Ｃ）　　等電点：ｐｌｌ、３±０．５（等電点電気泳
動法）（ｄ）　　ｐＨ安定性：ｐＨ２，０〜１０．０の範囲で
安定（ｅ）　　熱安定性二６０″Ｃ２６０分の加熱で安
定（ｆ）　　有機溶媒安定性：低級アルコール、アセト
ニトリルに対し安定（ｇ）　　プロテアーゼ耐性：プロナーゼ処理で完全に
失活する。

（ロ）アミノ酸配列：単量体へのアミノ酸配列は第１図
に、単量体Ｂのアミノ酸配列は第２図に示す。

（３）ポリペプチドＢＵＦ−５（以下ＢｔｌＦ−５とす
る）の理化学的性質（ａ）　　構　造：単量体Ｂのへモダイマー構造（ｂ）
　　分子量：単量体として１６±１ｋｄ（１，０％メル
カプトエタノール存在下、５ＯＳ−電気泳動法）ホモダイマーとして２５±１ｋｄ　（メルカプトエタノール非存在下、５ＤＳ−電気泳動法）（Ｃ）　　等電点：ｐＨ７，３±０．５（等電点電気泳
動法）（ｄ）　　ｐＨ安定性：ｐＨ２，０〜１０．０の範囲で
安定（ｅ）　　熱安定性：６５°Ｃ１６０分の加熱で安
定（ｆ）　　有機溶媒安定性：低級アルコール、アセト
ニトリルに対し安定（の　プロテアーゼ耐性：プロナーゼ処理で完全に失活
する。

（ロ）アミノ酸配列：単量体Ｂのアミノ酸配列は第２図
に示す。

本発明に係るＢＵＦ−３，４及び５は第１図、第２図に
示す７５ノ酸配列と全く同一の７５ノ酸配列を有しなく
とも卵分割促進作用を有すれば、その物質は本発明のＢ
ＵＦ−３，４及び５に含有される。

即ち、第１図又は第２図に示すアミノ酸配列中の１個若
しくは複数のアミノ酸を他のアミノ酸に置換した構造を
有する物質並びに、当該配列において１個もしくは複数
個のアミノ酸がＮ末端又はＣ末端に付加された構造を有
する物質、更には、当該配列のＮ末端又はＣ末端より１
個もしくは複数のアミノ酸が欠損し、かつ連続している
アミノ酸配列よりなる構造を有する物質も本発明のＢｔ
ｌＦ３．４及び５に含まれる。

ＢＵＦ−３はマウスフレンドウィルス誘発白血病細胞Ｆ
５−５に対する分化誘導作用を指標に精製されたポリペ
プチドである。ＢＵＦ−３は種々の生理作用を有するこ
とが既に知られている。たとえばＢＵＦ−３はマウス白
血病細胞を正常細胞に分化成熟せしめる活性（特開昭６
２−２３４０９７、特開昭６２−２４０７０）以下にも
貧血治療効果（特開昭６２−２３４０９７、特開昭６２
−２４０７０）及び卵胞刺激ホルモン分泌作用（Ｎａｔ
ｕｒｅ、　３２ＬＸ、７７６　７７９．（１９８６））
を合せもつ有用な物質である。

尚、ＢＵＦ−３はＥＤＦ　（Ｅｒｙｔｈｒｏｉｄ　Ｄｉ
ｆｆｅｒｅｎｔｉａ−ｔｉｏｎ　Ｆａｃｔｏｒ）ともＦ
ＲＰ　（ＦＳＨＲｅｌｅａｓｉｎｇ　Ｐｒｏｔｅｉｎ）
とも呼ばれるが本発明においては従来から用いられてい
るＢＵＦ−３という名称を用いることにする。

尚、ＢＵＦ−３は正式にはヒト分化誘導因子ＢＵＦ　−
３という。

一方、ＢＵＦ−４が卵胞刺激ホルモン分泌作用を有する
ことは既に報告されている（Ｖａｌｅ、　Ｗ、。

Ｒｉｖｅｒ、　、ｙ、ｌ　Ｖａｕｇｈａｎ、　Ｊ、、　
ＭｃＣｌｉｎｔｏｃｋ、　Ｒ，。

Ｃｏｒｒｉｇａｎ、　Ａ、、　Ｗｏｏ＋　Ｗ、、　Ｋａ
ｒｒ＋　Ｄ、　ａｎｄ　５ｐｔｅｓｓ。

Ｊ、　Ｎａｔｕｒｅ　３２１．７７６−７７７（１９８
６））。

尚、ＢＵＦ−４はアクチビン（Ａｃｔｉｖｉｎ）とも称
されるが、本発明においてＢＵＦ−４という名称を用い
ることにする。

更に、ＢＵＦ−５は特開昭６３−１１９６７９号公報に
開示されている物質である。

上述のようにＢＵＰ−３、ＢＵＦ−４及びＢＵＦ−５に
は卵胞刺激ホルモン放出作用等の作用を有することは既
に知られているが、本発明の如き卵分割促進作用につい
ては全く報告されていない。

次に卵分割促進作用を有するＢＵＦ−３、ＢＵＦ　−４
及びＢＵＦ−５の製造法について簡単に説明する。

まずＢＵＦ−３であるが、ＢｔｌＦ−３は悪性白血病細
胞の細胞培養法又は、組換えＤＮＡ法のいずれを用いて
も生産できる。

まず、細胞培養法であるが、Ｂ［ＩＦ−３を産生ずるヒ
ト悪性単球細胞としては、ヒト白血病細胞又はヒト骨髄
細胞を人為的に悪性化されたもの、より具体的に例示す
れば次のようなものが有る。ヒト慢性骨髄性白血病細胞
（Ｕ−９３７＾ＴＣＣＣＲＬ　１５９３゜Ｉｎｔ、　Ｊ
、　Ｃａｎｃｅｒ　ｌｌ　：　５６５（１９７６）、　
Ｋ５６２．　Ｂｌｏｏｄ旦：　３２Ｈ１９７５））　、
急性単球性白血病細胞（ＴＨＰ　−１、Ｉｎｔ、　Ｊ、
　Ｃａｎｃｅｒ　２６　：　１７１−１７６（１９８０
））　、もちろん、ＢＵＦ−３を生産していれば、上記
以外のヒト白血病細胞を用いてもかまわない。さて特定
の分化誘導物質は、悪性化単球細胞と接触させた時、こ
の細胞をマクロファージ、顆粒球の単球細胞に分化誘導
させると共に、Ｂ（ＩＦ−３を生産せしめる作用を有す
る物質であり、具体的にはアクチノマイシンＤ、マイト
マイシンＣ１コンカナバリンＡ及びホルボールエステル
（ＴＰＡ）等の特定の分化誘導物質である。

本発明のＢＵＦ−３を生成せしめる方法は、悪性化単球
細胞を少くとも１１１又は２種以上の上記特定の分化誘
導物質の共存下で培養することによりなされ、ＢＵＦ−
３は培養液中（細胞外）に産生される。

悪性化単球細胞を培養する培地は、動物細胞を培養する
通常の培地が用いられる。例を挙げれば、ローズウェル
・パーク・メモリアル・インスティテユート１６４０培
地（Ｒｉｓｗｅｌｌ　Ｐａｒｋ　ＭｅｍｏｒｉａｌＩｎ
ｓｔｉｔｕｔｅ　１６４０、以下ＲＰＭＩ−１６４０と
略す。）が好適である。

悪性化単球細胞の培地は、通常１〜５Ｘ１０’個／　ｍ
ｆｌの細胞密度で、３５〜３８°Ｃにて４〜６％の炭酸
ガス気流中でゆるやかに攪拌しつつ行われる。特定の分
化誘導物質は、通常培養の最初より培地に添加しても良
く又培養の途中から添加しても良い。添加量は分化誘導
物質の種類によって異なるがアクチノマイシンＤ１マイ
トマイシンＣ等の場合には０．１〜１０μｇ／ｄ、ＴＰ
Ａの場合には九１〜５００ｒｇ／ｄである。このようにして１〜５日間
培養するとＢＵＦ−３は培養液中に蓄積される。

ス誘発白血病細胞Ｆ　５−５　　（Ｂｉｂ１．　Ｈａｅ
ｍｓｔ、＋４３゜３７（１９７６））に対する分化誘導
作用を有するので、この作用を利用してＢＵＦ−３の定
性及び定量分析ができ、Ｆ５−５を用いる分析は、Ｐｒ
ｏｃ、　Ｎａｔｌ。

Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、、　７１．９８．　（１９７５）
）に記載の方法に従って行われる。又活性の表示はＦ５
−５細胞分化が明瞭に確認される検体原液の希釈率の逆
数の値を原液１．０　ｄ当りの活性とする。この発明方
法でＢＵＰ−３を生産した時、培養液は４〜１０００単
位／ｍ２の活性を示す。このようにして目的とするＢＵ
Ｆ−３が生産される。

尚、本方法の詳細は特開昭６２−２３４０９７号公報、
特開昭６２−２４０７０号公報に記載されている。

組換えＤＮＡ法によるＢＵＰ−３の生産法、即ちＢＵＦ
−３をコードする遺伝子すなわち、単量体Ａを含有する
プラスミドにより形質転換された真核吻細胞（具体的に
はＩＦＯ−５０１４６等）を培養液中台で培養し、培養液中へ該ＢＵＦ−３を製造せしめるとい
う方法をもちいてもかまわない（特願昭６２２１０８１
０、Ｍａｓａｈｉｒｏ　Ｍｕｒａｔａ、Ｋａｚｕｙａ　
Ｏｎｏｍｉｃｈｔ。

Ｙｕｚｕｒｕ　Ｅｔｏ＋　Ｈｉｒｏｓｈｉｒｏ　５ｈｉ
ｂａｉ　ａｎｄ　ＭａｓａｍｉＭｕｒａｍａｔｓｕ　　
ＢＩＯＣＨＥＭＩＣＡＬ　　ＡＮＤ　　ＢＩＯＰＨＹＳ
ＩＣＡＬＲＥＳＥＡＲＣＨＣＯＭＭＵＮＩＣＡＴＩＯＮ
Ｓ　Ｖｏｌ、１５１．Ｎｏ、１．Ｐａｇｅｓ２３０−２
３５　（１９８８）　”）。

ＢＵＦ−４及びＢＵＦ−５の生産は組換えＤＮＡ法によ
るＢＵＦ−３の生産に準じておこなわれるので以下にそ
の概要のみを記載する。

ＢＵＦ−４を生成せしめる方法は、ＢＵＦ−４をコード
する遺伝子、すなわち単量体Ａ及び単量体Ｂを含有する
プラスくドにより形質転換された真核生物を培養液中で
培養し培養液中にＢＵＰ−４を製造させればよい（特開
昭６３−１１９６７９）。

またＢＵＦ−５を生成せしめる方法はＢＵＦ−５をコー
ドする遺伝子、すなわち単量体Ｂを含有するプラスミド
により形質転換された真核生物細胞を培養液中で培養し
培養液中にＢＵＰ−５を製造せしめるという方法をもち
いればよい（特開昭６３−１１９６７９）。

さて、このように生産されたＢＵＦ−３もしくはＢＵＦ
−４もしくはＢＵＦ−５の精製は通常のポリペプチドの
精製法に準じて行われる。例えば培養液を限外濾過法で
濃縮し、この濃縮液からポリペプチドを塩析し、透析後
陰イオン交換体を使用するイオン交換クロマトグラフィ
ーを行うことにより粗ポリペプチド標品が得られる。こ
の粗標品について疎水クロマトグラフィー又はクロマト
フオーカシング法により殆んどの夾雑蛋白が除去される
。

又この両者を組合せると更に精製倍率を向上することが
できる。このようにして精製した標品について逆相高速
液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）又はスーパーロー
ズ又はＭｏｎｏ　ＱＨＲ５／　５カラムを装備したＦＰ
ＬＣ（ファルマシア製Ｆａｓｔ　ＰｒｏｔｅｉｎＰｅｐ
ｔｉｄｅ　Ｐｏｔｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　Ｌｉｑｕｉ
ｄ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）システムによる高
性能ゲル濾過法又はイオン交換クロマトグラフィーを行
うことにより精製することができる。

また、上述のようなポリペプチドの一般的精製法とは別
に本発明者等が開発した所定の濃度の有機酸を含む有機
溶媒を駆使する精製法（特願昭６３−１３１２６８）を
用いて精製してもかまわない。

本発明に係るＢＵＦ−３、ＢＵＦ−４及びＢｔｌＦ−５
はそれぞれ単独でもまた２種類以上組み合せても、また
３種類全てを組み合せてもよい。

本発明のＢＵＦ類の含量はトータルで卵分割促進剤中０
．０００１〜１００重量％、好ましくはｏ、　ｉ〜９９
重量％である。

尚、ＢＵＦ類とはＢＵＦ−３、ＢＵＦ−４及びＢＵＦ　
−５の総称を言う。

ゼ（本発明においてはＳＯＤと略する）／又はエチレン
ジアミン四酢酸（本発明においてはＥＤＴＡと略する）
を適当量加えてもよい。これらの助剤を加えると、相乗
的に非分割促進作用が向上する。これらの助剤の添加量
は特に制限はないが、通常、ＳＯＯは卵分割促進剤中０
．０００１〜９９．０重量％、ＥＤＴＡも卵分割促進剤
中、０．０００１〜９９．０重量％である。

ＳＯＤはその起源は特にこだわらずヒト、犬、牛、細菌
等のいずれの起源のものを用いても良い。更に、血清ア
ルブ旦ン等の安定化剤、マンニトール等の賦形剤を卵分
割促進剤に含有させてもよい。

本発明の卵分割促進剤を用いて各種動物の受精卵を処理
する。また受精卵でなくとも未受精卵を本発明に係る卵
分割促進剤で処理した後に受精させてもよい。

さて、本発明の卵分割促進剤で受精卵又は卵を処理する
方法であるが、通常は本発明の卵分割促進剤を生理食塩
水、トリスバッファー等の溶液にＢＵＦ類が最終濃度で
０．０　ｉｎｇ／ｍ〜１００　ｕ　ｇ／戚好ましくは０
．ｉｎｇ／ｍ〜１．０μｇ／戚になるように調製した後
に、受精卵又は卵を１０分〜７日間、好ましくは１時間
〜２日間浸漬処理すればよい。またＢＵＦ類にＳＯＤ及
び／又はＥＤＴＡの助剤を合せて用いる時は最終濃度で
ＳＯＤが０．０１μｇ／１ｒｄｌ〜１　ｍｇ／ｄ、ＥＤ
ＴＡが０．１　ｎｇ／　ｍｌ　〜１０　ｍｇ／艷になる
ように調製して用いればよい。

処理する溶液の温度は通常Ｏ″Ｃ〜４５°Ｃ１好ましく
は３７°Ｃ前後がよい。

上記条件は一般的なものであって必ずしもこれに限定さ
れる訳ではない。

また上記浸漬性以外にも、処理方法としてマイクロイン
ジェクシッン法等を用いてもよい。

以下、本発明を実施例に基づいて説明する。

〈実施例１．動物及び受精卵の回収〉１４Ｌ１０Ｄ　（午前５時から午後７時の間、明条件に
付したという意味）で飼育した３〜４週令ＩＣＲマウス
（日本チャールズリバー）を用いた。

雌マウスに妊娠馬血清ゴナドトロピン（以下ＰＭＳＧと
略する）５１．Ｕ、を投与し、その４８時間後にヒト絨
毛ゴナドトロピン（以下ｈＣＧと略する）５１．Ｕ。

を投与した。

この処置を施した雌マウスを交配させ、受精卵を採取し
た。妊娠第−目隠のＡＭＩＯ：００　　（ｈＣＧ投与後
１９時間）に、マウスを断頭し、卵管を取り出した。

牛血清アルブミン（以下ＢＳＡとする。Ｂｏｅｈｒｉｎ
ｇｅｒＭａｎｈｅｉｎ社製７３５０７Ｂ）　３　ｍｇ／
Ｉｎｉを含むＷｈｉｔｔｅｎ’ｓｍｅｄｉｕｍ　（ｐＨ
７，０）液中（以下−Ｍ−Ｂ）で、卵管から受精卵を回
収した。その後受精卵を卵丘細胞（ｃｕｍｕｌｕｓ　ｍ
ａｓｓ）が除去されるまでＨｙａ　Ｉｏｒｏｎ　１ｄａ
ｓｅ液（１５０ｕｎｔｔｓ／ｄ　ｉｎ　ＷＭ−Ｂ）中で
処理した（室温、１分以下）、その後第２極体、又は、
両前核を有する卵を選別し、ＷＭ−Ｂで５回洗浄した。

〈実施例２．受精卵の培養〉ＢＵＦ−３を２０ｍＭ　ＨＥＰＥＳバッファー（ＳＩＧ
ＭＡ社Ｎａ　Ｈ−０２６４）を含む−Ｍ−８に、０．ｉ
ｎｇ／Ｉｄ、１．０ｎｇ／ｍｌ、１０．０　ｎｇ／ｍの
濃度に溶解して（以下ＢＵＦ−３液）以下の実験に用い
た。

１５〜２５個の受精卵を１ｒｎ１のＷＭ−８又はＢＵＦ
３液に浮遊させ、直径３５ｍｍのプラスチック培養皿を
用いて、５％ＣＯ，，５％０！、９０％Ｎ２．３７°Ｃ
で４８時間培養した。

ＢＵＦ−３は後半の２４時間に添加し、その濃度依存の
効果を検討した。その結果、ＢＵＦ−３非添加群では、
１６．７％の受精卵しか４８０１胞期へ移行しなかった
が、０．１　ｎｇ／　ｍ１ｌＳＢＵＦ　−３添加群では
４２．９％、１．Ｏｎｇ／ａｍ！、　　ＢＵＦ−３では
８３．１％、の受精卵が４細胞期へ移行した。詳細は表
１に示す。

表 ■ 〈実施例３．胚移植〉処理により、４細胞期へ移行した胚を偽妊娠２目隠の雌
マウスに移植したところ、移植後１８日目隠、新生仔を
分娩した。

〈実施例４．動物及び受精卵の回収〉マウスは、１２ＬＩ２Ｄ（７：００〜１９　：　００点
灯）条件で飼育したＣＤ−１（日本チャールズリバー）
、もしくはＤＢＡ／２ＪＪ　　（日本タレア）を用いた
。４〜５週齢”ｉ’ＰＭｓＧ　５１Ｕ、を、その４８時
間後ニｈＣＧ５ＩＵ、を皮下投与したそれぞれの系統の
雌マウスに、同系の雄マウスを交配し受精卵を回収した
。受精卵の回収はｈＣＧ投与から１７時間後に行い１５
０ｕｎｉｔ／ＩＩＩｆ／、のヒアルロニダーゼにより卵
丘細胞を取り除いた。第２極体の存在する卵を受精卵と
して実験に供した。

〈実施例５．受精卵の培養〉ｌＯ〜２０の受精卵を、３■／戚の牛血清アルブミンを
含むＷｈｉｔｔｅｎ’ｓ　Ｍｅｄｉｕｍ　（ＷＨ）　ｐ
Ｈ７，２（Ｗｈｉｔｔｅｎ、　１９７１　）　０．５　
ｍｌに浮遊し、３７°Ｃ１５％ＣＯ，でｈＣＧ投与から
７２時間まで培養した。

４８時間目に４細胞期までの移行率を、７２時間目に桑
状胚までの移行率を求めた。

〈実施例６．ＣＤ−１マウスにおけるＢＵＦ−３とＳＯ
Ｄの相乗効果〉ＣＤ−１マウスの受精卵を（イ）１０ｇ／ＩｄのＢＵＦ
−３単独及び（ロ）ｌｎｇ／ｄのＢＵＰ−３と７５μｇ
／ｒｄのＳＯＤ　　（ウシ由来）の共存下で培養し、そ
れぞれの３−４細胞期、桑状胚への移行率を求めた。表
２１表３に示すように、ＢＵＦ−３単独でも移行率は有
意に上昇したが、ＢＵＦ−３とＳＯＤを併用した系では
更に有意な増加が認められた。尚コントロールはＢＵＦ
−３及びＳＯＤ無添加の系である。

表表〈実施例７．　ＤＢＡ　／２ＪＪマウスにおける［１Ｕ
Ｆ−３とＳＯＯの相乗効果〉ＤＢＡ／２ＪＪマウスの受精卵を（イ）　２．５　ｎｇ
／　ｍｆｌのＢＵＰ−３単独、及び（ロ）２．５ｎｇ／
ｍ１のＢＵＦ−３と、３．１５Ｕｇ／ｄＥＤＴＡ　（シ
グマ社製、ＥＤ２ＳＳ）の共存下で培養し、それぞれの
４細胞期、桑状胚への移行率を求めた。表４１表５に示
すように、ＢＵＦ−３単独の添加で移行率は有意に増加
した。

また、ＥＤＴＡを共存させた系では更に移行率の増加が
認められた。尚、コントロールとはＢＵＦ−３及びＥＤ
ＴＡの相方無添加区である。

表　　　４表く効果〉本発明の卵分割促進剤を用いると、家畜の試験管内受精
の成功率を大幅に改良することが可能である。

従って、本発明の促進剤は畜産分野において極めて有用
な物質と考えられる。

【図面の簡単な説明】

第１図は単量体Ａのアミノ酸配列を示す。第２図は単量体Ｂのアミノ酸配列を示す。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）ポリペプチドＢＵＦ−３、ＢＵＦ−４及びＢＵＦ
−５の内、１種類以上の物質を有効成分として、含有す
る卵分割促進剤。
（２）助剤としてＳＯＤ及び／又はＥＤＴＡを含有して
なる請求項（１）記載の卵分割促進剤。
（３）請求項（１）又は（２）記載の卵分割促進剤で処
理された受精卵又は卵。
（４）請求項（１）又は（２）記載の卵分割促進剤で処
理後凍結保存してなる受精卵又は卵。
（５）受精卵又は卵が魚、鳥、牛、豚、羊、山羊、馬、
鼠、犬、猫若しくはヒトのものである請求項（３）又は
（４）項記載の受精卵又は卵。