JPH03176500A - リポコルチン類の精製方法 - Google Patents
リポコルチン類の精製方法Info
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- JPH03176500A JPH03176500A JP2318172A JP31817290A JPH03176500A JP H03176500 A JPH03176500 A JP H03176500A JP 2318172 A JP2318172 A JP 2318172A JP 31817290 A JP31817290 A JP 31817290A JP H03176500 A JPH03176500 A JP H03176500A
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4721—Lipocortins
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- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、リボコルチン類とくにｉ 白質ＰＰ４Ｘ、
ＰＡＰＩ［［、ｐ６８、アンコリン■ならびにリボコル
チンＩおよび■の精製方法に関する。
ＰＡＰＩ［［、ｐ６８、アンコリン■ならびにリボコル
チンＩおよび■の精製方法に関する。
これらの蛋白質は、リボコルチン類、カルバクチン類ま
たはアネキシン類と呼ばれる蛋白質のファミリーに属す
る。これらの蛋白質は、多くの生物体およびヒトでも、
大部分の臓器および細胞型に検出されている。これらの
蛋白質のこれまでに知られている最も重要な機能的性質
は、抗炎症作用および抗凝固作用である。この蛋白質７
７ミリーは、炎症性疾患および播種住血管内凝固（ＤＩ
Ｃ）を伴うことが多い凝固障害に影響し、これらを減少
させ、また中和することさえできる。
たはアネキシン類と呼ばれる蛋白質のファミリーに属す
る。これらの蛋白質は、多くの生物体およびヒトでも、
大部分の臓器および細胞型に検出されている。これらの
蛋白質のこれまでに知られている最も重要な機能的性質
は、抗炎症作用および抗凝固作用である。この蛋白質７
７ミリーは、炎症性疾患および播種住血管内凝固（ＤＩ
Ｃ）を伴うことが多い凝固障害に影響し、これらを減少
させ、また中和することさえできる。
これらの蛋白質を迅速に単離するための従来の方法（Ｔ
ａｉｔ、 Ｊ、Ｆ、ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２
７ ： ６２６８〜６２７６、１９８８）は、これらの
蛋白質の工業的単離には適当ではない。
ａｉｔ、 Ｊ、Ｆ、ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２
７ ： ６２６８〜６２７６、１９８８）は、これらの
蛋白質の工業的単離には適当ではない。
したがって、本発明の目的は、蛋白質ＰＰ４−Ｘ。
ＰＡＰＩｎ 、ｐ６８、アンコリン■ならびにリボコル
チンＩおよび■の精製方法を開発することにあっｔこ。
チンＩおよび■の精製方法を開発することにあっｔこ。
驚くべきことに、これらの蛋白質はカルシウムの存在下
に、糖のポリ（硫酸エステル）または硫酸化糖に親和性
を有すること、およびそれらを担体に結合させた糖のポ
リ（硫酸エステル）または硫酸化糖に結合させることが
可能で、方その操作の間に夾雑蛋白質の大部分は吸着さ
れないことが見出された。リボコルチン類の吸着はカラ
ム内で行ってもよく、またバッチシステムで行うことも
できる。
に、糖のポリ（硫酸エステル）または硫酸化糖に親和性
を有すること、およびそれらを担体に結合させた糖のポ
リ（硫酸エステル）または硫酸化糖に結合させることが
可能で、方その操作の間に夾雑蛋白質の大部分は吸着さ
れないことが見出された。リボコルチン類の吸着はカラ
ム内で行ってもよく、またバッチシステムで行うことも
できる。
本発明は、リボコルチンまたは数種のリボコルチン類を
含有する溶液を、担体に結合させた糖のポリ（硫酸エス
テル）または担体に結合させた硫酸化糖と、カルシウム
イオンの存在下に接触させ、上清溶液を分離除去し、負
荷担体物質を必要に応じて洗浄し、ついでイオン強度の
上昇によってリボコルチン類を個別に、群別にまたは一
括して溶出させることを特徴とするリボコルチン類の単
離方法に関する。
含有する溶液を、担体に結合させた糖のポリ（硫酸エス
テル）または担体に結合させた硫酸化糖と、カルシウム
イオンの存在下に接触させ、上清溶液を分離除去し、負
荷担体物質を必要に応じて洗浄し、ついでイオン強度の
上昇によってリボコルチン類を個別に、群別にまたは一
括して溶出させることを特徴とするリボコルチン類の単
離方法に関する。
−操作においては、リボコルチン０．Ｏ１〜５０ｍｇ／
ｒａＱ、およびカルシウムイオン０．０００１〜０．１
モル／ｌをたとえば塩化物、酢酸塩または乳酸塩の形で
含有し、ｐＨが５．５〜５．９である溶液を、担体に結
合した糖のポリ（硫酸エステル）または硫酸化糖（たと
えば担体に結合したヘパリン、デキストラン硫酸、ヘパ
リン硫酸、コンドロイチン硫酸、ケラチン硫酸またはデ
ルマタンｒｉＬ酸）と接触させ、上清溶液を分離除去し
、負荷担体物質を必要に応じて、ｐｔ＋が５．５〜５．
９でカルシウムｏ、ｏｏｏｉ〜０．１モル／ｌを含有す
る緩衝液で洗浄し、ついでリボコルチンを直線ＮａＣＱ
、 ＬｉＣｌ２またはＫＣＱ勾配によって溶出させる。
ｒａＱ、およびカルシウムイオン０．０００１〜０．１
モル／ｌをたとえば塩化物、酢酸塩または乳酸塩の形で
含有し、ｐＨが５．５〜５．９である溶液を、担体に結
合した糖のポリ（硫酸エステル）または硫酸化糖（たと
えば担体に結合したヘパリン、デキストラン硫酸、ヘパ
リン硫酸、コンドロイチン硫酸、ケラチン硫酸またはデ
ルマタンｒｉＬ酸）と接触させ、上清溶液を分離除去し
、負荷担体物質を必要に応じて、ｐｔ＋が５．５〜５．
９でカルシウムｏ、ｏｏｏｉ〜０．１モル／ｌを含有す
る緩衝液で洗浄し、ついでリボコルチンを直線ＮａＣＱ
、 ＬｉＣｌ２またはＫＣＱ勾配によって溶出させる。
溶液中にリボコルチン類が混合物として存在する場合に
は、それらを群別にまたは一緒に溶出させることもでき
る。
は、それらを群別にまたは一緒に溶出させることもでき
る。
糖のポリ（硫酸エステル）または硫酸化糖を共有結合さ
せることができる水不溶性担体マトリックスとしては、
たとえば不溶性デキストラン、アガロース、アクリルア
ミド、アミノ官能基が導入されている重合体および／ま
たはボリエチレングリコール、ペンタエリスライトおよ
びメタアクリレートの共重合体、あるいはそれらの混合
物を使用できる。糖のポリ（硫酸エステル）または硫酸
化糖は既知の方法により、たとえばＣＮＢｒまたはエポ
キシドを用いて予め活性化された担体物質またはアミノ
官能基がカルボジイミドを用いて導入された担体物質に
連結することができる。
せることができる水不溶性担体マトリックスとしては、
たとえば不溶性デキストラン、アガロース、アクリルア
ミド、アミノ官能基が導入されている重合体および／ま
たはボリエチレングリコール、ペンタエリスライトおよ
びメタアクリレートの共重合体、あるいはそれらの混合
物を使用できる。糖のポリ（硫酸エステル）または硫酸
化糖は既知の方法により、たとえばＣＮＢｒまたはエポ
キシドを用いて予め活性化された担体物質またはアミノ
官能基がカルボジイミドを用いて導入された担体物質に
連結することができる。
好ましい操作においては、リボコルチン含有溶液または
これらの蛋白質の混合物もしくはこれらの蛋白質のすべ
てを含有する溶液を担体に結合させたヘパリンまたはデ
キストラン硫酸、好ましくはヘパリン親和性樹脂と、０
．０００２〜０．０３モル／ｌのカルシウムの存在下ｐ
Ｈ６〜９で接触させ、この混合物を４〜３０°Ｃで３〜
３００分間インキュベートし、上清溶液を担体樹脂から
分離除去し、吸着物質を必要に応じて、ｐｔ＋が６〜９
で０．０００２〜０．０３モル／ｌのカルシウムを含有
する溶液で洗浄し、蛋白質を、伝導度を上昇させること
により好ましくは直線塩勾配によって個別に、または段
階的溶出によって群別に、または−括して、好ましくは
ＮａＣ＋２１ＫＣＩ２、Ｌ １Ｃ（２もしくはクエン酸
塩により塩濃度を０．６〜１．０モル／ｌに上昇させる
ことによって溶出する。
これらの蛋白質の混合物もしくはこれらの蛋白質のすべ
てを含有する溶液を担体に結合させたヘパリンまたはデ
キストラン硫酸、好ましくはヘパリン親和性樹脂と、０
．０００２〜０．０３モル／ｌのカルシウムの存在下ｐ
Ｈ６〜９で接触させ、この混合物を４〜３０°Ｃで３〜
３００分間インキュベートし、上清溶液を担体樹脂から
分離除去し、吸着物質を必要に応じて、ｐｔ＋が６〜９
で０．０００２〜０．０３モル／ｌのカルシウムを含有
する溶液で洗浄し、蛋白質を、伝導度を上昇させること
により好ましくは直線塩勾配によって個別に、または段
階的溶出によって群別に、または−括して、好ましくは
ＮａＣ＋２１ＫＣＩ２、Ｌ １Ｃ（２もしくはクエン酸
塩により塩濃度を０．６〜１．０モル／ｌに上昇させる
ことによって溶出する。
必要に応じて、ついで個別のまたはすべてのリボコルチ
ンの第二の精製を行うことができる。
ンの第二の精製を行うことができる。
これにはいくつかの可能性がある。すなわち、ｌ）他の
担体に結合した糖のポリ（硫酸エステル）上または他の
硫酸化糖上で再クロマトグラフィー ２）塩またはカルシウムイオンのたとえば透析による除
去、およびカルシウムの不存在下またはキレート形成剤
たとえばＥＤＴＡ、 ＥＧＴＡまたはクエン酸もしくは
シュウ酸の塩の存在下における担体に結合した糖のポリ
（硫酸エステル）によるまたは硫酸化糖によるクロマト
グラフィー３）たとえばカルボキシメチル−１ＤＥＡＥ
−ＱＡＥ−”５ｅｐｈａｒｏｓｅ、 ”５ｅｐｈａｃｅ
ｌまたはセルロース（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、 Ｓｗｅｄ
ｅｎ）上イオン交換クロマトグラフィー である。
担体に結合した糖のポリ（硫酸エステル）上または他の
硫酸化糖上で再クロマトグラフィー ２）塩またはカルシウムイオンのたとえば透析による除
去、およびカルシウムの不存在下またはキレート形成剤
たとえばＥＤＴＡ、 ＥＧＴＡまたはクエン酸もしくは
シュウ酸の塩の存在下における担体に結合した糖のポリ
（硫酸エステル）によるまたは硫酸化糖によるクロマト
グラフィー３）たとえばカルボキシメチル−１ＤＥＡＥ
−ＱＡＥ−”５ｅｐｈａｒｏｓｅ、 ”５ｅｐｈａｃｅ
ｌまたはセルロース（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、 Ｓｗｅｄ
ｅｎ）上イオン交換クロマトグラフィー である。
本発明の方法は、大規模にも、数工程で高純度カッ高収
率で蛋白質ＰＰ４−Ｘ、 ＰＡＰＩ［、ｐ６８、アンコ
リン■およびリボコルチンＩおよび■の単離を可能にす
る点できわめて優れている。
率で蛋白質ＰＰ４−Ｘ、 ＰＡＰＩ［、ｐ６８、アンコ
リン■およびリボコルチンＩおよび■の単離を可能にす
る点できわめて優れている。
これらのリボコルチンの大規模な単離には、十分な量の
入手が可能でありしかもこれらの蛋白質が高含食合まれ
ているヒト胎盤が、とくに、出発物質のソースとして適
している。アンコリン■の精製にはこの蛋白質を含有す
る線維非細胞がとくに適している 本明細書に使用される略号は次の通りである。
入手が可能でありしかもこれらの蛋白質が高含食合まれ
ているヒト胎盤が、とくに、出発物質のソースとして適
している。アンコリン■の精製にはこの蛋白質を含有す
る線維非細胞がとくに適している 本明細書に使用される略号は次の通りである。
ＥＤＴＡ ：エチレンジアミン四酢酸
ＥＧＴＡ ：エチレングリコ−ルー−ビス（アミノエチ
ルエーテル） −Ｎ、Ｎ、Ｎ’、Ｎ’−四酢酸ＤＥＡＥ
ニジエチルアミノエチル ＱＡＥ ：四級アミノエチル ＰＰ４−Ｘ ：胎盤蛋白質 ＰＡＰ ：胎盤抗凝固蛋白質 以下の実施例は、本発明を例示することを意図するもの
である。
ルエーテル） −Ｎ、Ｎ、Ｎ’、Ｎ’−四酢酸ＤＥＡＥ
ニジエチルアミノエチル ＱＡＥ ：四級アミノエチル ＰＰ４−Ｘ ：胎盤蛋白質 ＰＡＰ ：胎盤抗凝固蛋白質 以下の実施例は、本発明を例示することを意図するもの
である。
実施例 ｌ
成熟ヒト胎盤３６ｋｇを細片化し、０．９／ｌｏｏｍ１
２ＮａＣＩ２で数回洗浄し、ついで凍結乾燥した。凍結
乾燥物（：１９）を０．０２モル／（ｌ ｔｒｉｓ／
ＨＣＱ、 ｐＨ７，５，０，１５モル／（２ＮａＣαお
よび０．１Ｍクエン酸三ナトリウムの溶液５０ｉ２で抽
出し、硫酸アンモニウム（３３％飽和）を加え、フェニ
ル５ｅｐｈａｒｏｓｅ ４ Ｑとバッチ方式でインキュ
ベートした。樹脂を洗浄後、リボコルチンをすべて一緒
に水で溶出し、硫酸アンモニウムを８０％飽和まで添加
して沈澱させ、遠心分離してペレット化し、０．０２モ
ル／ｌ ｔｒｉｓ／ＨＣＱ、 ｐＨ８，０の溶液（緩衝
液Ａ）に取り、同じ緩衝液に対して透析した。ＣａＣｌ
２ 、を最終濃度０．０５モル／１２まで加えたのち、
ヘパリン−”５ｅｐｈａｒｏｓｅ ｌ Ｑを透析液にバ
ッチ方式で加え、混合物を室温で６０分間撹拌し、上清
溶液を分離除去した。次に吸着物質を０．００５モル／
ｌのＣａＣｌ２２とともに緩衝液Ａで洗浄し、０．０６
モル／ａのＮａＣＱで前溶出した。蛋白質ＰＰ４−Ｘ５
ＰＡＰＩ、ｐ６８ならびにリボコルチンンＩおよび■は
０．８モル／ Ｑ ＮａＣＱですべて一緒に溶出された
。
２ＮａＣＩ２で数回洗浄し、ついで凍結乾燥した。凍結
乾燥物（：１９）を０．０２モル／（ｌ ｔｒｉｓ／
ＨＣＱ、 ｐＨ７，５，０，１５モル／（２ＮａＣαお
よび０．１Ｍクエン酸三ナトリウムの溶液５０ｉ２で抽
出し、硫酸アンモニウム（３３％飽和）を加え、フェニ
ル５ｅｐｈａｒｏｓｅ ４ Ｑとバッチ方式でインキュ
ベートした。樹脂を洗浄後、リボコルチンをすべて一緒
に水で溶出し、硫酸アンモニウムを８０％飽和まで添加
して沈澱させ、遠心分離してペレット化し、０．０２モ
ル／ｌ ｔｒｉｓ／ＨＣＱ、 ｐＨ８，０の溶液（緩衝
液Ａ）に取り、同じ緩衝液に対して透析した。ＣａＣｌ
２ 、を最終濃度０．０５モル／１２まで加えたのち、
ヘパリン−”５ｅｐｈａｒｏｓｅ ｌ Ｑを透析液にバ
ッチ方式で加え、混合物を室温で６０分間撹拌し、上清
溶液を分離除去した。次に吸着物質を０．００５モル／
ｌのＣａＣｌ２２とともに緩衝液Ａで洗浄し、０．０６
モル／ａのＮａＣＱで前溶出した。蛋白質ＰＰ４−Ｘ５
ＰＡＰＩ、ｐ６８ならびにリボコルチンンＩおよび■は
０．８モル／ Ｑ ＮａＣＱですべて一緒に溶出された
。
溶出液を緩衝液Ａに対して透析したのち、ＥＤＴＡを最
終濃度０．００１モル／ｌになるまで加え、ついで蛋白
質含有溶液を、０．０２モル／ｌｔｒｉｓ／ＨＣＱ、
ｐＨ８，０，０，００１モル／４ ＥＤＴＡ中で平衡化
したヘパリン−”５ｅｐｈａｒｏｓｅ ２００ｍｆｆと
接触させ、混合物を室温で６０分間撹拌し、リボコルチ
ン蛋白質を含有する上清溶液を分離することによって、
残った夾雑物を除去した。この方法で精製したリボコル
チン蛋白質は、５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳
動において、３３ ｋＤ（ＰＰ４−Ｘ）、３４ｋＤ（Ｐ
ＡＰＩＩ［）、６８ｋＤ（ｐ６８）、３６ｋＤ（リボコ
ルチンＩ）および３７ｋＤ（リボコルチン■、重鎮）、
ならびに１０ｋＤ （軽鎖）の分子量を示す。個々の蛋
白質は実施例２に記載したようにして、イオン交換クロ
マトグラフィーによって単離された。個々の蛋白質の収
率は、フェニル−”５ｅｐｈａｒｏｓｅ溶出液に対して
７０〜９０％であった。
終濃度０．００１モル／ｌになるまで加え、ついで蛋白
質含有溶液を、０．０２モル／ｌｔｒｉｓ／ＨＣＱ、
ｐＨ８，０，０，００１モル／４ ＥＤＴＡ中で平衡化
したヘパリン−”５ｅｐｈａｒｏｓｅ ２００ｍｆｆと
接触させ、混合物を室温で６０分間撹拌し、リボコルチ
ン蛋白質を含有する上清溶液を分離することによって、
残った夾雑物を除去した。この方法で精製したリボコル
チン蛋白質は、５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳
動において、３３ ｋＤ（ＰＰ４−Ｘ）、３４ｋＤ（Ｐ
ＡＰＩＩ［）、６８ｋＤ（ｐ６８）、３６ｋＤ（リボコ
ルチンＩ）および３７ｋＤ（リボコルチン■、重鎮）、
ならびに１０ｋＤ （軽鎖）の分子量を示す。個々の蛋
白質は実施例２に記載したようにして、イオン交換クロ
マトグラフィーによって単離された。個々の蛋白質の収
率は、フェニル−”５ｅｐｈａｒｏｓｅ溶出液に対して
７０〜９０％であった。
実施例 ２
ＰＰ４−Ｘ、 ＰＡＰＩ［［、ｐ ６８ ｆｔらびにリ
ボコルチンｆおよび■を含有する溶液を、実施例１に記
載したと同様にしてヘパリン−”５ｅｐｈａｒｏｓｅと
接触させ、ついで吸着物質を洗浄した。ＰＰ４−Ｘ（０
，３５モル／ （ｌ ＮａＣ，（１）とＰＡＰｍ Ｃ０
，４８モル／（ｌＮａｃＱ＞を段階的溶出によって別個
に溶出させた。リボコルチンＩ、ＩＩおよびｐ６８は０
．８モル／ｌ２Ｎａ（ｊ２を用いて一緒に溶出させるこ
とができる。ＰＰ４−Ｘ、 ＰＡＰＩ［Ｉまたはｐ６８
、リボコルチン■および■は実施例１に記載したように
して残った夾雑物質が除去された。０．８モル／ｌＮａ
ＣＱで溶出された蛋白質はイオン交換クロマトグラフィ
ーによってさらに溶出された。ｐ６８、リボコルチンＩ
８よび■を含有する溶液は緩衝液Ａに対して透析され、
緩衝液Ａで平衡化したＤＥＡＥ −”５ａｐｈａｒｏｓ
ｅカラム上にポンプで給送した。吸着したｐ６８はＮａ
ＣＱ勾配によって溶出させた。このクロマトグラフィー
では吸着されなかった蛋白質リボコルチン■および■は
０．０１モル／ｌイミダゾール／ ＨＣＱ緩衝液、ｐＨ
６，０に対して透析し、撹拌しながらカルボキシメチル
セルロースと接触させ、ついで吸着物質を洗浄し、それ
をカラムに充填した。リボコルチンＩおよび■は０〜０
．７モル／ｌＮａＣＱの塩勾配を適用して別個に溶出さ
せた。このようにして単離されｔ；リボコルチン蛋白質
は９５％を越える純度を有し、 ５ＤＳ−ＰＡＧＥにおいてそれぞれ、 実施例１に記載した分子量を示した。
ボコルチンｆおよび■を含有する溶液を、実施例１に記
載したと同様にしてヘパリン−”５ｅｐｈａｒｏｓｅと
接触させ、ついで吸着物質を洗浄した。ＰＰ４−Ｘ（０
，３５モル／ （ｌ ＮａＣ，（１）とＰＡＰｍ Ｃ０
，４８モル／（ｌＮａｃＱ＞を段階的溶出によって別個
に溶出させた。リボコルチンＩ、ＩＩおよびｐ６８は０
．８モル／ｌ２Ｎａ（ｊ２を用いて一緒に溶出させるこ
とができる。ＰＰ４−Ｘ、 ＰＡＰＩ［Ｉまたはｐ６８
、リボコルチン■および■は実施例１に記載したように
して残った夾雑物質が除去された。０．８モル／ｌＮａ
ＣＱで溶出された蛋白質はイオン交換クロマトグラフィ
ーによってさらに溶出された。ｐ６８、リボコルチンＩ
８よび■を含有する溶液は緩衝液Ａに対して透析され、
緩衝液Ａで平衡化したＤＥＡＥ −”５ａｐｈａｒｏｓ
ｅカラム上にポンプで給送した。吸着したｐ６８はＮａ
ＣＱ勾配によって溶出させた。このクロマトグラフィー
では吸着されなかった蛋白質リボコルチン■および■は
０．０１モル／ｌイミダゾール／ ＨＣＱ緩衝液、ｐＨ
６，０に対して透析し、撹拌しながらカルボキシメチル
セルロースと接触させ、ついで吸着物質を洗浄し、それ
をカラムに充填した。リボコルチンＩおよび■は０〜０
．７モル／ｌＮａＣＱの塩勾配を適用して別個に溶出さ
せた。このようにして単離されｔ；リボコルチン蛋白質
は９５％を越える純度を有し、 ５ＤＳ−ＰＡＧＥにおいてそれぞれ、 実施例１に記載した分子量を示した。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）リボコルチンまたは数種のリボコルチン類を含有す
る溶液を、担体に結合させた糖のポリ（硫酸エステル）
または担体に結合させた硫酸化糖と、カルシウムイオン
の存在下に接触させ、上清溶液を分離除去し、負荷担体
物質を必要に応じて洗浄し、ついでイオン強度の上昇に
よってリボコルチン類を個別に、群別にまたは一括して
溶出させることを特徴とするリボコルチン類の単離方法
。 ２）リボコルチン類はＰＰ４−Ｘ、ＰＡＰIII、ｐ６８
、アンコリンIIまたはリボコルチン I もしくはIIであ
る請求項１記載の方法。 ３）次に、残留した夾雑物質をカルシウムイオンの不存
在下または過剰のキレート形成剤の存在下に糖のポリ（
硫酸エステル）または硫酸化糖に吸着させ、ついでリボ
コルチン含有溶液を分離してリボコルチン類を精製する
請求項１記載の方法。 ４）担体物質は不溶性デキストラン、アガロース、ポリ
アクリルアミド、アミノ官能基を導入した不溶性重合体
、もしくはポリエチレングリコール、ペンタエリスライ
トおよびメタアクリレートの共重合体、またはそれらの
配合物である請求項１および３のいずれかに記載の方法
。 ５）糖のポリ（硫酸エステル）は、ヘパリン、デキスト
ラン硫酸、ヘパリン硫酸、コンドロイチン硫酸、ケラタ
ン硫酸またはデルマタン硫酸である請求項１および３の
いずれかに記載の方法。 ６）担体に結合させたヘパリンまたはデキストラン硫酸
を使用する請求項１および３のいずれかに記載の方法。 ７）担体に結合させたヘパリンを使用する請求項１およ
び３のいずれかに記載の方法。 ８）ｐＨ５．５〜５．９でカルシウムイオン０．００１
〜０．１モル／ｌを含有する緩衝液中で実施する請求項
１記載の方法。 ９）キレート形成剤としてＥＤＴＡ、ＥＧＴＡ、クエン
酸もしくはシュウ酸の塩、またはそれらの組み合わせを
使用する請求項２記載の方法。 １０）キレート形成剤としてＥＤＴＡまたはＥＧＴＡを
含有する請求項２記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3939169A DE3939169A1 (de) | 1989-11-27 | 1989-11-27 | Verfahren zur reinigung von lipocortinen |
| DE3939169.8 | 1989-11-27 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03176500A true JPH03176500A (ja) | 1991-07-31 |
Family
ID=6394271
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2318172A Pending JPH03176500A (ja) | 1989-11-27 | 1990-11-26 | リポコルチン類の精製方法 |
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