JPH03178994A - ヒメニスタチン - Google Patents
ヒメニスタチンInfo
- Publication number
- JPH03178994A JPH03178994A JP2318165A JP31816590A JPH03178994A JP H03178994 A JPH03178994 A JP H03178994A JP 2318165 A JP2318165 A JP 2318165A JP 31816590 A JP31816590 A JP 31816590A JP H03178994 A JPH03178994 A JP H03178994A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- pro
- methylene chloride
- ile
- methanol
- hymenistatin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/64—Cyclic peptides containing only normal peptide links
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/27—Cyclic peptide or cyclic protein
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
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- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
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- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
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- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本願発明は、「ヒメニスタチン １」と称される新規な
シクロ−オクタペプチドの単離および構造解明に関する
ものである。
シクロ−オクタペプチドの単離および構造解明に関する
ものである。
ヒメニスタチン １は、南太平洋の海綿動物ヒメニアシ
ドン（ｌｌｙｍｅｎｉａｃｉｄｏｎ）から単離され、そ
して１３８８ネズ珀白血病細胞株（Ｎ、Ｃ，１，プロ１
−コル）で測定するとき腫瘍増殖阻止剤としての有用性
を示すことが見出された。
ドン（ｌｌｙｍｅｎｉａｃｉｄｏｎ）から単離され、そ
して１３８８ネズ珀白血病細胞株（Ｎ、Ｃ，１，プロ１
−コル）で測定するとき腫瘍増殖阻止剤としての有用性
を示すことが見出された。
ヒメニスクチン
ｌは化学構造：
を有する。
（従来の技術）
海の海綿動物から得られる抗新生物成分の単離に向けら
れた初期の研究は、最初はジェオジオスタチン（ｇｅｏ
ｄｉｏｓｔａｔｉｎ）に、そしてその後一連のピロラク
タム類に至った。更に最近では、抗新生物ペプチドを含
む他の有望な手掛りがポリフェラフィラム（Ｐｏｒｉｆ
ｅｒａ ｐｈｙｌｕｍ）で見出された。
れた初期の研究は、最初はジェオジオスタチン（ｇｅｏ
ｄｉｏｓｔａｔｉｎ）に、そしてその後一連のピロラク
タム類に至った。更に最近では、抗新生物ペプチドを含
む他の有望な手掛りがポリフェラフィラム（Ｐｏｒｉｆ
ｅｒａ ｐｈｙｌｕｍ）で見出された。
現在までのところ、僅か２．３のアミノ酸、ペプチドお
よび抗新生物物質が海の海綿動物から単離されているだ
けである。１９７９年にパラオで採取されたヒメニアシ
ドン種〔デモスポンジェ（Ｄｅｍ。
よび抗新生物物質が海の海綿動物から単離されているだ
けである。１９７９年にパラオで採取されたヒメニアシ
ドン種〔デモスポンジェ（Ｄｅｍ。
ｓｐｏｎｇｉａｅ）網〕の１つから２−プロパノ−ルー
メチレンクロライド水生抽出物が産生され、これは米国
国立癌研究所のネズ、３ Ｐ３８８リンパ性白血病＜Ｐ
Ｓ系）に対して３０χの寿命延長を示した。ＰＳ白血病
データを使用するハイオアソセイで指示された単離δこ
よって、本明細書で「ヒメニスタチン１１と称する新規
な細胞増殖抑制性ペプチドが単離され且つ同定された。
メチレンクロライド水生抽出物が産生され、これは米国
国立癌研究所のネズ、３ Ｐ３８８リンパ性白血病＜Ｐ
Ｓ系）に対して３０χの寿命延長を示した。ＰＳ白血病
データを使用するハイオアソセイで指示された単離δこ
よって、本明細書で「ヒメニスタチン１１と称する新規
な細胞増殖抑制性ペプチドが単離され且つ同定された。
１つまたはそれ以上の種々の癌の治療用に種々の天然お
よび合成物質を突き止めそして明らかにする継続的な努
力で、研究化学著述は、既知の化学療法剤に付随する重
篤な副作用を完全に除去しなくても幾つかを最小限度に
しながら、腫瘍増殖抑制、または抗新生物活性を示す新
規物質を単離し、そして同定するために天然の植物およ
び動物を探し続けている。
よび合成物質を突き止めそして明らかにする継続的な努
力で、研究化学著述は、既知の化学療法剤に付随する重
篤な副作用を完全に除去しなくても幾つかを最小限度に
しながら、腫瘍増殖抑制、または抗新生物活性を示す新
規物質を単離し、そして同定するために天然の植物およ
び動物を探し続けている。
これまで顧みられなかった海洋種が、単離されたとき、
例えば腫瘍増殖を阻止するような有用な生物学的特性を
示す成分を含有しているかどうかを決定するために、こ
れら種を現在試験しているのは上記の目標を更に追跡す
るためである。
例えば腫瘍増殖を阻止するような有用な生物学的特性を
示す成分を含有しているかどうかを決定するために、こ
れら種を現在試験しているのは上記の目標を更に追跡す
るためである。
（発明が解決しようとする課題）
本願発明の主要な目的は、有用な生物学的特性を有する
新規薬剤を提供することである。
新規薬剤を提供することである。
本願発明のもう１つの目的は、ヒト宿主に生しそして悪
性腫瘍増殖番こよって現れる１つまたはそれ以上のタイ
プの癌の治療および管理に容易にかつ有用に使用できる
形態の、海洋生物から得られる抗新生物物質の単離法お
よび手順を提供することである。
性腫瘍増殖番こよって現れる１つまたはそれ以上のタイ
プの癌の治療および管理に容易にかつ有用に使用できる
形態の、海洋生物から得られる抗新生物物質の単離法お
よび手順を提供することである。
本願発明の更にもう１つの目的は、南太平洋の海綿動物
ヒメニアシドン種から得られる新規なシクロ−オクタペ
プチドを単離しそしてその構造を解明する固有の手段お
よび方法を提供することである。
ヒメニアシドン種から得られる新規なシクロ−オクタペ
プチドを単離しそしてその構造を解明する固有の手段お
よび方法を提供することである。
上記の目的および以下で明らかになる本願発明の更なる
目的は、本願発明の例示的な実施態様に関する以下の詳
細な説明から容易に理解されるように、極めて予期され
なかった態様で本願発明によって容易に充足される。
目的は、本願発明の例示的な実施態様に関する以下の詳
細な説明から容易に理解されるように、極めて予期され
なかった態様で本願発明によって容易に充足される。
（課題を解決するための手段）
本発明の簡単な要約
南太平洋の海洋生物から得られる生物学的に活性の物質
に関する継続的な研究によって、本願明細書で「ヒメニ
スタチン １」と称される新規なシクロ−オクタペプチ
ドが導かれた。このものは国立癌研究所のネズξＰ３８
８リンパ性白血病（ＰＳ系）に対してｌｌｆｆ１１ｇ増
姑阻止特性を示し、Ｆ、Ｄ５ｏは、３．５μｇ／ｍＬで
ある。構造決定および絶対配置は、キラルガスクロマト
グラフィー分析と連係した高磁場ＮＭＲ（４００ＭＩＩ
ｚ）およびマススベクＩ・ル技術（ＦＡＢ ＭＳ／ＭＳ
）を使用して達成された。試験される物質のＰＳ系と最
終的なヒトでの有効性との間の直接的な関係が確立され
ている（Ｖｅｎｄｅｔｔｉおよび八ｂｂｏｔ 。
に関する継続的な研究によって、本願明細書で「ヒメニ
スタチン １」と称される新規なシクロ−オクタペプチ
ドが導かれた。このものは国立癌研究所のネズξＰ３８
８リンパ性白血病（ＰＳ系）に対してｌｌｆｆ１１ｇ増
姑阻止特性を示し、Ｆ、Ｄ５ｏは、３．５μｇ／ｍＬで
ある。構造決定および絶対配置は、キラルガスクロマト
グラフィー分析と連係した高磁場ＮＭＲ（４００ＭＩＩ
ｚ）およびマススベクＩ・ル技術（ＦＡＢ ＭＳ／ＭＳ
）を使用して達成された。試験される物質のＰＳ系と最
終的なヒトでの有効性との間の直接的な関係が確立され
ている（Ｖｅｎｄｅｔｔｉおよび八ｂｂｏｔ 。
Ｌｌｏｙｄｉａ 、３０．３２２ 、以下参照（１９６
７）並びに本明細書に引用した参照文献参照）。
７）並びに本明細書に引用した参照文献参照）。
ヒメニスタチン １は次の構造を有している：好ましい
実施態様の説明 一般的方法 クロマトグラフィ一方法で使用される溶媒は再蒸留した
。
実施態様の説明 一般的方法 クロマトグラフィ一方法で使用される溶媒は再蒸留した
。
ゲル浸透および分配クロマトグラフィーで使用されるセ
ファデフクス１．Ｈ−２０（２５−１００）は、スウエ
デンのウプサラのファルマシア ファイン ヶくカルズ
（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ
）八Ｂから人手しブこ。
ファデフクス１．Ｈ−２０（２５−１００）は、スウエ
デンのウプサラのファルマシア ファイン ヶくカルズ
（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ
）八Ｂから人手しブこ。
ギルソン（Ｇｉｌｓｏｎ）のＨＭ ＵＶ−可視検出器に
接続したギ、ルソンＦＣ−２２０レース１〜ランクおよ
びＦＣ−８０ミクロ分画器は、クロマトグラフィー分画
実験および西ドイツ ダルムシュタソトのＥ、メルク（
Ｍｅｒｃｋ）によって供給される、シリカゲル６０が予
め、ｌされた「ローバー（ＬＯＢＡＲ） Ｊカラムを使
用するシリカゲルでのカラムクロマトグラフィーの方法
で使用した。
接続したギ、ルソンＦＣ−２２０レース１〜ランクおよ
びＦＣ−８０ミクロ分画器は、クロマトグラフィー分画
実験および西ドイツ ダルムシュタソトのＥ、メルク（
Ｍｅｒｃｋ）によって供給される、シリカゲル６０が予
め、ｌされた「ローバー（ＬＯＢＡＲ） Ｊカラムを使
用するシリカゲルでのカラムクロマトグラフィーの方法
で使用した。
ＴＬＣ用のシリカゲルＧＦユニプレーｔ−（Ｕｎｉｐｌ
ａｔｅｓ）は、プラウエア州ニューアークのアナルテソ
クインコーボレーテソド（Ａｎａｌｔｅｃｈ Ｉｎｃ、
）から入手した。Ｔ１、Ｃプレートは全て０ｖ光で検査
し、および／または硫酸セリウム−硫酸スプレーで発色
（絢１５０’Ｃで１０分間加熱）させた。
ａｔｅｓ）は、プラウエア州ニューアークのアナルテソ
クインコーボレーテソド（Ａｎａｌｔｅｃｈ Ｉｎｃ、
）から入手した。Ｔ１、Ｃプレートは全て０ｖ光で検査
し、および／または硫酸セリウム−硫酸スプレーで発色
（絢１５０’Ｃで１０分間加熱）させた。
訂正していない融点は、コツフラー（Ｋｏｆｌｅｒ）タ
イプの融点装置を使用して観察した。Ｕｖスペクトルは
１ｌＰ７２２５Ａプロツターを備えたヒューレソトパソ
カード（ｌｌｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ）８４５０
八ＩＩＶ−可視スペクトルフォトメーターを使用して記
録した。
イプの融点装置を使用して観察した。Ｕｖスペクトルは
１ｌＰ７２２５Ａプロツターを備えたヒューレソトパソ
カード（ｌｌｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ）８４５０
八ＩＩＶ−可視スペクトルフォトメーターを使用して記
録した。
旋光度およびＩＲスペクトルデータは、それぞれパーキ
ン−エルマー（Ｐｅｒｋｉｎ−１ｉ１ｍｅｒ）２４１偏
光計およびニコレソＩ・（Ｎｉｃｏｌｅｔ）ＭＸ−Ｉ
ＦＴＩＲスペクトロフォトメーターを使用して得た。
ン−エルマー（Ｐｅｒｋｉｎ−１ｉ１ｍｅｒ）２４１偏
光計およびニコレソＩ・（Ｎｉｃｏｌｅｔ）ＭＸ−Ｉ
ＦＴＩＲスペクトロフォトメーターを使用して得た。
マススペクトル
（Ｋｒａｔｏｓ）ＭＳ−５０スペクトルメーターを使用
して記録した。
して記録した。
ＮＭＩ？実験は、ブルーカー（Ｂｒｕｋｅｒ）ＷＨ−４
００器具および溶媒として重水素クロロホルムを使用し
て実施した（ＴＭＳ内部標準）。
００器具および溶媒として重水素クロロホルムを使用し
て実施した（ＴＭＳ内部標準）。
動物採集および予備実験
１９７９年の始めに、約２Ｋｇ（湿潤重量）の海綿動物
ヒメニアシドン種（ヒメニアシドニダエ（Ｉｌｙｍｅｎ
ｔａｃｉｄｏｎｉｄａｅ）科、ハリコンドリダ（Ｈａｌ
ｉｃｈｏｎｄｒｉｄａ）目、セラチノモルフ７ （Ｃｅ
ｒａｔｉｎｏｍｏｒｐｈａ）亜網、デモスポンジエｍ）
＆ｊ、西カロリン諸島、バラオ アーキベラゴ（Ｐａｌ
ａｕ Ａｒｃｈｉｐｅｌａｇｏ）のロングアイランド（
Ｌｏｎｇ ｌ５ｌａｎｄ） （南側）の近くでスキュー
バで集めた。分類法的識別は、参照標本を整理している
スミスソニアン インスチチューション（Ｓｍｉｔｈｓ
ｏｎｉａｎ Ｉｎ５ｕｔｉｔｕｔｉｏｎ）で実施した。
ヒメニアシドン種（ヒメニアシドニダエ（Ｉｌｙｍｅｎ
ｔａｃｉｄｏｎｉｄａｅ）科、ハリコンドリダ（Ｈａｌ
ｉｃｈｏｎｄｒｉｄａ）目、セラチノモルフ７ （Ｃｅ
ｒａｔｉｎｏｍｏｒｐｈａ）亜網、デモスポンジエｍ）
＆ｊ、西カロリン諸島、バラオ アーキベラゴ（Ｐａｌ
ａｕ Ａｒｃｈｉｐｅｌａｇｏ）のロングアイランド（
Ｌｏｎｇ ｌ５ｌａｎｄ） （南側）の近くでスキュー
バで集めた。分類法的識別は、参照標本を整理している
スミスソニアン インスチチューション（Ｓｍｉｔｈｓ
ｏｎｉａｎ Ｉｎ５ｕｔｉｔｕｔｉｏｎ）で実施した。
ヒメニアシドン種の初期試料は、２−プロパノルー塩化
メチレン中に入れておいた。溶媒を除去すると、米国国
立癌研究所のネズ５ｌ）３８８リンパ性白血病（Ｉ’ｓ
系）に対して、５．５ ｍｇ／Ｋｇで寿命を３０χ延長
する、活性値に達していることが確証された抽出物が得
られた。
メチレン中に入れておいた。溶媒を除去すると、米国国
立癌研究所のネズ５ｌ）３８８リンパ性白血病（Ｉ’ｓ
系）に対して、５．５ ｍｇ／Ｋｇで寿命を３０χ延長
する、活性値に達していることが確証された抽出物が得
られた。
動物抽出および溶媒分装
置９８５年３月に、ロングアイランドの南側近くのバラ
オの同一地域から２１３Ｋｇ （湿潤重量）のヒメニア
シドン種を再度採取し、２−プロパツール中に入れてお
いた。その後、２−プロパツールを細流し、そして海綿
動物は同しアルコニルで再度抽出した。第１の抽出物は
、部分真空下で５０リットルの水濃縮物に変換し、そし
てかなりの量（１．２Ｋｇ）の淡褐色懸濁物（ＰＳ Ｔ
／Ｃ ５０ｍｇ／Ｋｇで毒性）を含有することが見出
された。この懸濁物は遠心および細流によって除去した
。クリーム色の水性層は塩化メチレン（９０ リットル
）およびｎ−ブタノール（９０リツトル）間で連続的に
分配した。
オの同一地域から２１３Ｋｇ （湿潤重量）のヒメニア
シドン種を再度採取し、２−プロパツール中に入れてお
いた。その後、２−プロパツールを細流し、そして海綿
動物は同しアルコニルで再度抽出した。第１の抽出物は
、部分真空下で５０リットルの水濃縮物に変換し、そし
てかなりの量（１．２Ｋｇ）の淡褐色懸濁物（ＰＳ Ｔ
／Ｃ ５０ｍｇ／Ｋｇで毒性）を含有することが見出
された。この懸濁物は遠心および細流によって除去した
。クリーム色の水性層は塩化メチレン（９０ リットル
）およびｎ−ブタノール（９０リツトル）間で連続的に
分配した。
２つの組み合わせた有機抽出物の各々から溶媒を留去す
ると、それぞれ非常に暗褐色のゲル様固形物（］、８０
ｇ， ＰＳ ＥＤｓｏ １．８ｇ／ｍＬおよびＴ／Ｃ≧
５０ｍｇ／Ｋｒ，で毒性）および淡褐色無晶形固形物（
３３０ｇ、ＰＳ ＥＤｓｏ ６． ］、 ｇ／ｍｌおよ
びＴ／Ｃ−＞５０ｍｇ／Ｋｇで毒性〉が得られた。残り
の水性抽出物はｐｓ不活性であることが見出されそして
破棄した。塩化メチレンフラクション（１８０ｇ）の９
＝１メタノール−水溶液は、ヘキサン（３Ｘ１リツトル
）で抽出した。
ると、それぞれ非常に暗褐色のゲル様固形物（］、８０
ｇ， ＰＳ ＥＤｓｏ １．８ｇ／ｍＬおよびＴ／Ｃ≧
５０ｍｇ／Ｋｒ，で毒性）および淡褐色無晶形固形物（
３３０ｇ、ＰＳ ＥＤｓｏ ６． ］、 ｇ／ｍｌおよ
びＴ／Ｃ−＞５０ｍｇ／Ｋｇで毒性〉が得られた。残り
の水性抽出物はｐｓ不活性であることが見出されそして
破棄した。塩化メチレンフラクション（１８０ｇ）の９
＝１メタノール−水溶液は、ヘキサン（３Ｘ１リツトル
）で抽出した。
メタノール−水層は３：２に希釈し塩化メチレンで抽出
した。
した。
得られたヘキサン（１４６ｇ） 、塩化メチレン（２０
ｇ）２ および３：２のメタノール−水（１４ｇ）フラクション
は濃縮し、そしてその分別物はハイオアソセイに供した
。
ｇ）２ および３：２のメタノール−水（１４ｇ）フラクション
は濃縮し、そしてその分別物はハイオアソセイに供した
。
顕著なｐｓ細胞増グ直抑制活性（ＰＳ ＢＤ５。 ０．
２６）は塩化メチレン抽出物中に残存することが見出さ
れた。
２６）は塩化メチレン抽出物中に残存することが見出さ
れた。
ヒメニスタチン １の単離
典型的な一連・の方法では、記載したようにして製造さ
れた３：２の塩化メチレン−メタノール中の２０ｇの塩
化メチレン活性フラクションは、セファデックスＬＨ−
２０のカラム（ １．２Ｋｇ； ２０ｘ１２０ｃｍ）で
クロマ１〜グラフイーにかけた。成分の際立った分離は
観察されなかったが、活性物質（フラクション八、ｌａ
ｇ ＰＳ ＢＤ５０ １．６ μｇ／ｍＬ）の更な
る濃縮が認められた。
れた３：２の塩化メチレン−メタノール中の２０ｇの塩
化メチレン活性フラクションは、セファデックスＬＨ−
２０のカラム（ １．２Ｋｇ； ２０ｘ１２０ｃｍ）で
クロマ１〜グラフイーにかけた。成分の際立った分離は
観察されなかったが、活性物質（フラクション八、ｌａ
ｇ ＰＳ ＢＤ５０ １．６ μｇ／ｍＬ）の更な
る濃縮が認められた。
セファデックスＬｌｌ−２０（ １．２Ｋｇ； ２０ｘ
１２０ｃｍ）での更なる分配クロマトグラフィーおよび
３：１：１のヘキサン−トルエン−メタノールでの溶出
によって１１個の明白な組成フラクション中に活性フラ
クションＢ （０．５０ｇ 、 ＰＳ ＢＤ．ｏ
２．６ ｇ／ｍＬ）およびＣ （ １． ６ ４ｇ 、
ＰＳ ＢＤｓ。 １． ７ ｕ ｇ／ｍＬ）が得られ
た。フラクションＢおよびＣを合わせてセファデックス
Ｌ Ｈ − ２ ０カラム上メタノールで更に分離した
。
１２０ｃｍ）での更なる分配クロマトグラフィーおよび
３：１：１のヘキサン−トルエン−メタノールでの溶出
によって１１個の明白な組成フラクション中に活性フラ
クションＢ （０．５０ｇ 、 ＰＳ ＢＤ．ｏ
２．６ ｇ／ｍＬ）およびＣ （ １． ６ ４ｇ 、
ＰＳ ＢＤｓ。 １． ７ ｕ ｇ／ｍＬ）が得られ
た。フラクションＢおよびＣを合わせてセファデックス
Ｌ Ｈ − ２ ０カラム上メタノールで更に分離した
。
得られた９個のフラクション群の中で、Ｄと標識したフ
ラクション（０．７ ５ｇ 、 Ｐｓ ｌＥＤ５。
ラクション（０．７ ５ｇ 、 Ｐｓ ｌＥＤ５。
３、１Ｈｇ／ｍＬ）は、Ｔ１．Ｃで殆ど単一のスボ・ノ
ドを示した。最終精製は、予め充填したシリカゲル６０
カラム（２．５ｘ３０ｃｍ）を有する媒体圧力（５０ｐ
．ｓ．ｉ．まで）液体クロマトグラフィーユニ・ノドお
よび９７．５〜２．５の塩化メチレン−メタノールでの
溶出を使用して遠戚された。
ドを示した。最終精製は、予め充填したシリカゲル６０
カラム（２．５ｘ３０ｃｍ）を有する媒体圧力（５０ｐ
．ｓ．ｉ．まで）液体クロマトグラフィーユニ・ノドお
よび９７．５〜２．５の塩化メチレン−メタノールでの
溶出を使用して遠戚された。
ヒメニスタチン １は、無色の結晶性無晶形固形物（４
９ｍｇ，収’Ｉｔ ３． １ｘｌＯ− ”％）として得
られた。
９ｍｇ，収’Ｉｔ ３． １ｘｌＯ− ”％）として得
られた。
１８０〜１８２℃で融解： 〔α） 、 − ８．６°
（Ｃ・１、ＣＩＩＣ１３） ：ｌＩＶ（ＣＨ３０Ｈ）
λｍａｘ（ｌｏｇ ）、２２２（３．８２）、２
７８（ ３．１６）ｎｍ： ＩＲ（ＮａＣ１プレー））
３３２０ 、２９６０、２９２０、１６８０、１６１７
、１５１７ ｃｍ −’：ＭＳ（ＩＩＲＳＰ−ＳＩＭＳ
）、８９３、５５０５ （門＋Ｈ ｌ］ ” 、Ｃ４７
１１７３Ｎ８０！＋として、計算値８９３．５５０］．
、ＮＭＲ（ＣＤＣ１３） 、δ；プロリンーａ単位、１
１．４．２０（ＩＩ−２） 、３．７２（ｔｌ−５ａ
）、３．３８ （＋（−５ｂ）、２．１５（ＩＩ３ａ）
、２．１１． （Ｈ−４ａ）、］、、９５（Ｈ−４ｂ）
、 １．９３（ＩＬ３ｂ）； ”’Ｃ； ６０．８９
（Ｃ−２）、４７．３５（Ｃ−５）、 ３１．８７（Ｃ
−３） 、２５．０６（Ｃ−４）： プＬ’ｌ ＩＪ
：／ ｌ）単位、’Ｈ，４，１０（ｄｄ 、 Ｊ＝９．
４．３．５； ｌｌ−２） 、３．２８（Ｈ−５ａ
）、３．２１（Ｈ−５ｂ）、２．１６（Ｉｆ−３ａ）、
１．７７（ｔＬ３ｂ）、１．６０（Ｈ−４ａ）、０．８
５（Ｈ−４ｂ）； ”Ｃ： ５９．１９（Ｃ−２）
、４６．９４（Ｃ−５）、２８、５２ （Ｃ−３）
、２１．１１（Ｃ−４）、チロシン単位、■、８．７０
（ｂｒ ｓ 、 ＯＨ） 、７．０３（ｄ 、 Ｊ
＝８．１； Ｈ−５） 、６．８４（ｄ、 Ｊ＝８
．Ｏ； Ｈ−６） 、４．２２（Ｈ−２） 、３
．２９（Ｈ−３ａ）、２．９０（ｔ、、Ｊ＝１３．Ｏ；
Ｈ−３ｂ） 、”Ｃ，１５６，５６（Ｃ−７）、１
２９．６７（Ｃ−５、Ｃ−９）、１２７．００（Ｃ−４
） 、１１５．９４（Ｃ−６、Ｃ−８）、５８．１３
（Ｃ−２）、３６．６７ （Ｃ−３）、バリン単位、
Ｉｔ： ７．５８（ｄ、、Ｊ＝８．８； Ｎｔｌ）
、４．５６（ｔ、 、Ｉ＝５．９；ｌｌ−２）、１．９
５（Ｈ−３） 、０．９８（６１１； ｌｌ−１、
Ｉｆ−５）； １３（：： ５６．２９（Ｃ−２）
、３１．６７（Ｃ−３）、１９．２９（Ｃ−４）、
１８．１９ （Ｃ−５）。
（Ｃ・１、ＣＩＩＣ１３） ：ｌＩＶ（ＣＨ３０Ｈ）
λｍａｘ（ｌｏｇ ）、２２２（３．８２）、２
７８（ ３．１６）ｎｍ： ＩＲ（ＮａＣ１プレー））
３３２０ 、２９６０、２９２０、１６８０、１６１７
、１５１７ ｃｍ −’：ＭＳ（ＩＩＲＳＰ−ＳＩＭＳ
）、８９３、５５０５ （門＋Ｈ ｌ］ ” 、Ｃ４７
１１７３Ｎ８０！＋として、計算値８９３．５５０］．
、ＮＭＲ（ＣＤＣ１３） 、δ；プロリンーａ単位、１
１．４．２０（ＩＩ−２） 、３．７２（ｔｌ−５ａ
）、３．３８ （＋（−５ｂ）、２．１５（ＩＩ３ａ）
、２．１１． （Ｈ−４ａ）、］、、９５（Ｈ−４ｂ）
、 １．９３（ＩＬ３ｂ）； ”’Ｃ； ６０．８９
（Ｃ−２）、４７．３５（Ｃ−５）、 ３１．８７（Ｃ
−３） 、２５．０６（Ｃ−４）： プＬ’ｌ ＩＪ
：／ ｌ）単位、’Ｈ，４，１０（ｄｄ 、 Ｊ＝９．
４．３．５； ｌｌ−２） 、３．２８（Ｈ−５ａ
）、３．２１（Ｈ−５ｂ）、２．１６（Ｉｆ−３ａ）、
１．７７（ｔＬ３ｂ）、１．６０（Ｈ−４ａ）、０．８
５（Ｈ−４ｂ）； ”Ｃ： ５９．１９（Ｃ−２）
、４６．９４（Ｃ−５）、２８、５２ （Ｃ−３）
、２１．１１（Ｃ−４）、チロシン単位、■、８．７０
（ｂｒ ｓ 、 ＯＨ） 、７．０３（ｄ 、 Ｊ
＝８．１； Ｈ−５） 、６．８４（ｄ、 Ｊ＝８
．Ｏ； Ｈ−６） 、４．２２（Ｈ−２） 、３
．２９（Ｈ−３ａ）、２．９０（ｔ、、Ｊ＝１３．Ｏ；
Ｈ−３ｂ） 、”Ｃ，１５６，５６（Ｃ−７）、１
２９．６７（Ｃ−５、Ｃ−９）、１２７．００（Ｃ−４
） 、１１５．９４（Ｃ−６、Ｃ−８）、５８．１３
（Ｃ−２）、３６．６７ （Ｃ−３）、バリン単位、
Ｉｔ： ７．５８（ｄ、、Ｊ＝８．８； Ｎｔｌ）
、４．５６（ｔ、 、Ｉ＝５．９；ｌｌ−２）、１．９
５（Ｈ−３） 、０．９８（６１１； ｌｌ−１、
Ｉｆ−５）； １３（：： ５６．２９（Ｃ−２）
、３１．６７（Ｃ−３）、１９．２９（Ｃ−４）、
１８．１９ （Ｃ−５）。
プロリンＣ単位、１１１．３ 、９２ （Ｈ−５ａ）、
３．７９ ＜ｔ 、、、ｒ＝１．８： ＋１−２）
、３．６８（Ｈ−５ｂ）、２．３１ （Ｈ−３ａ）、
２．０８ （Ｈ４ａ） 、２．０６（ＩＬ４ｂ）、
１．９１ （Ｈ−３ｂ）、”Ｃ、６３，１１（Ｃ２）、
４８．５５ （Ｃ−５）、３０．００（Ｃ−３）、２４
．７５（Ｃ−４）、ロイ５ シン単位、’ＩＩ ６．２５（ｂｒ ｓ、 Ｎ１１）
、３．９８（１１−２）、１．９６（Ｉｔ−３ａ）、１
．８２（Ｈ−３ｂ）、１．５５（Ｉｆ−４） 、０．
９３（３Ｈ；ｄ ＸＪ−６，３、Ｉｆ６）、Ｏ，Ｆ１８
（３＋１ 、Ｉｆ−５）、１３ｃ１５５．７９（Ｃ−２
）、３９．２７ （Ｃ−３）、２５．３１ （Ｃ−４）
、２２．９５（Ｃ６）、２１．２７ （Ｃ−５）、イソ
ロイシン−ａ単位、１！（，７，７０（ｄＸＪ−８，５
、Ｎｉ１） 、４．４０（ｔＸＪ、、８．５ 、ＩＩ
−２）、１．５７（Ｈ−３） 、１．５０（ＩＩ−４ａ
）、１．１５（ＩＩ−４ｂ）、０．９６（３１１，１ｌ
−６）０．８７（３Ｈ； Ｈ−５）；”Ｃ： ６０．５
２（Ｃ−２） 、３８．２６（Ｃ−３）、２４ 、９
５ （Ｃ−４）、１５．４７（Ｃ−６）、１０．６４
（Ｃ−５）、イソロイシン−ｂ単位、’Ｈ２７，４０（
ｄ、 Ｊ＝８．５ 、ＮＨ） 、４．６９（ｔ、 Ｊ＝
９．０ 、＋１−２）、１．７６（ＩＩ−３） 、１．
５３（Ｉｔ−４ａ）、１．０５（ｌｌ−４ｂ）、０．８
２（３０； Ｈ−６） 、０．８０（３１１； ｌｌ
−５）；１３Ｃ、５５，０１（Ｃ−２）、３６．９４
（Ｃ−３）、２４．７９（Ｃ，−４）、１６．２０（Ｃ
−６）、１１．８７（Ｃ−５）。８個（２） ；）Ｊ
ルｄＦ ニア１ｚ ” Ｃ共鳴は、１７２．７２．１７
２．２９．１７２．１０．１７１．９８．１７１．９５
．１７１．１８．１７０．３５で現れる（多様性が示さ
れない場合には重複するシグナルのため測定され得なか
ったのであろう）。
３．７９ ＜ｔ 、、、ｒ＝１．８： ＋１−２）
、３．６８（Ｈ−５ｂ）、２．３１ （Ｈ−３ａ）、
２．０８ （Ｈ４ａ） 、２．０６（ＩＬ４ｂ）、
１．９１ （Ｈ−３ｂ）、”Ｃ、６３，１１（Ｃ２）、
４８．５５ （Ｃ−５）、３０．００（Ｃ−３）、２４
．７５（Ｃ−４）、ロイ５ シン単位、’ＩＩ ６．２５（ｂｒ ｓ、 Ｎ１１）
、３．９８（１１−２）、１．９６（Ｉｔ−３ａ）、１
．８２（Ｈ−３ｂ）、１．５５（Ｉｆ−４） 、０．
９３（３Ｈ；ｄ ＸＪ−６，３、Ｉｆ６）、Ｏ，Ｆ１８
（３＋１ 、Ｉｆ−５）、１３ｃ１５５．７９（Ｃ−２
）、３９．２７ （Ｃ−３）、２５．３１ （Ｃ−４）
、２２．９５（Ｃ６）、２１．２７ （Ｃ−５）、イソ
ロイシン−ａ単位、１！（，７，７０（ｄＸＪ−８，５
、Ｎｉ１） 、４．４０（ｔＸＪ、、８．５ 、ＩＩ
−２）、１．５７（Ｈ−３） 、１．５０（ＩＩ−４ａ
）、１．１５（ＩＩ−４ｂ）、０．９６（３１１，１ｌ
−６）０．８７（３Ｈ； Ｈ−５）；”Ｃ： ６０．５
２（Ｃ−２） 、３８．２６（Ｃ−３）、２４ 、９
５ （Ｃ−４）、１５．４７（Ｃ−６）、１０．６４
（Ｃ−５）、イソロイシン−ｂ単位、’Ｈ２７，４０（
ｄ、 Ｊ＝８．５ 、ＮＨ） 、４．６９（ｔ、 Ｊ＝
９．０ 、＋１−２）、１．７６（ＩＩ−３） 、１．
５３（Ｉｔ−４ａ）、１．０５（ｌｌ−４ｂ）、０．８
２（３０； Ｈ−６） 、０．８０（３１１； ｌｌ
−５）；１３Ｃ、５５，０１（Ｃ−２）、３６．９４
（Ｃ−３）、２４．７９（Ｃ，−４）、１６．２０（Ｃ
−６）、１１．８７（Ｃ−５）。８個（２） ；）Ｊ
ルｄＦ ニア１ｚ ” Ｃ共鳴は、１７２．７２．１７
２．２９．１７２．１０．１７１．９８．１７１．９５
．１７１．１８．１７０．３５で現れる（多様性が示さ
れない場合には重複するシグナルのため測定され得なか
ったのであろう）。
ヒメニスタチンキラルセンターの
アサインメント
シクロ−オクタペプチドは、１：１のプロピオン酸１２
Ｎ塩酸を用いて１６０℃で１５分間加水分解した。対応
するア旦ノ酸をＮ−ペンタフルオロプロピオニル−イソ
プロビルエステル誘導体に変換し、そしてキラシル パ
ル（Ｃｈｉｒａｓｉｌ Ｖａｌ） ｍカラＪ３を使用し
て、シャ９（Ｓｈａｗ）およびコツタ（Ｃｏｔｔｅｒ）
（Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉａ、２Ｌ １９７（
１９８６）参照）が記載したようにして、キラル キャ
ピラリクロマトグラフィーで配置を確立した。各アくノ
酸成分はＳ （Ｌ）−シリーズに属することが見出され
ノこ。
Ｎ塩酸を用いて１６０℃で１５分間加水分解した。対応
するア旦ノ酸をＮ−ペンタフルオロプロピオニル−イソ
プロビルエステル誘導体に変換し、そしてキラシル パ
ル（Ｃｈｉｒａｓｉｌ Ｖａｌ） ｍカラＪ３を使用し
て、シャ９（Ｓｈａｗ）およびコツタ（Ｃｏｔｔｅｒ）
（Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉａ、２Ｌ １９７（
１９８６）参照）が記載したようにして、キラル キャ
ピラリクロマトグラフィーで配置を確立した。各アくノ
酸成分はＳ （Ｌ）−シリーズに属することが見出され
ノこ。
（実施例）
本願発明の１つの実施では、最初に、２１８ Ｋｇの海
綿動物を保存するために使用したイソプロピルアルコー
ル−水溶液は、どちらかというと粘性のヘ−ジ、プ、色
の懸濁物を含有する５０リツトルの水性フラクションに
まで濃縮させ、この懸濁物は１０００Ｇでの遠心および
口過によって除去しなければならない。不透明なりリー
ム色の水性部分は、塩化メチレン、次いでｎ−ブタノー
ルの間で連続的に分配して、以下に作成した経過系で示
されるようにして２つの活性フラクションが得られた。
綿動物を保存するために使用したイソプロピルアルコー
ル−水溶液は、どちらかというと粘性のヘ−ジ、プ、色
の懸濁物を含有する５０リツトルの水性フラクションに
まで濃縮させ、この懸濁物は１０００Ｇでの遠心および
口過によって除去しなければならない。不透明なりリー
ム色の水性部分は、塩化メチレン、次いでｎ−ブタノー
ルの間で連続的に分配して、以下に作成した経過系で示
されるようにして２つの活性フラクションが得られた。
ヒメニアシトン種
ＰＳ
０．２７
〉１０
ＰＳ
（１８ｇ）
１．６
（０，７５ｇ）
ＰＳ
３．５
／ｍＬ
９
Ｉ）Ｓ活性の塩化メチレン抽出物は、９：１のメタノー
ル−水とヘキサン間で分配させ、次いで３：２のメタノ
ール−水に希釈させそして塩化メチレンで分配させた。
ル−水とヘキサン間で分配させ、次いで３：２のメタノ
ール−水に希釈させそして塩化メチレンで分配させた。
塩化炭素を留去させて、ｐｓ白血病を顕著に阻止するオ
レンジ色の固形物（ｐｓ ＥＤ５００．２６）が得られ
た。セファデックスＬｌｌ−２０による塩化メチレン−
可溶性フラクションの最初のゲルー透過クロマトグラフ
ィー分離および３：２の塩化メチレン−メタノールでの
溶出によってフラクションへの活性が更に濃縮された。
レンジ色の固形物（ｐｓ ＥＤ５００．２６）が得られ
た。セファデックスＬｌｌ−２０による塩化メチレン−
可溶性フラクションの最初のゲルー透過クロマトグラフ
ィー分離および３：２の塩化メチレン−メタノールでの
溶出によってフラクションへの活性が更に濃縮された。
セファデックスＬ ＩＩ −２０および ３：１：１の
ヘキザンートルエンーメタノールでの分配クロマトグラ
フィーを使用してより良い分離が遠戚され、フラクショ
ンＢおよびＣが得られた。次いで、これら２つの主要な
活性フラクションＦ３およびＣを合わせ、そしてフラク
ションＤを得た。この方法によって得られたほぼ純粋な
細胞増殖抑制成分は、シリカゲル６０ローバー（ＬＯＢ
ＡＲ） Ｂカラムを使用して、クロマ１へグラフィーに
かけた。９７．５ ： ２．５の塩化メチレン−メタノ
ールで溶出して、本明細書でヒメニス０ タチン １と称する細胞増殖阻止性（ｐＳ ＥＤ５゜
３．５μｇ／ｍｌ、）の生を酸生成物が得られた。
ヘキザンートルエンーメタノールでの分配クロマトグラ
フィーを使用してより良い分離が遠戚され、フラクショ
ンＢおよびＣが得られた。次いで、これら２つの主要な
活性フラクションＦ３およびＣを合わせ、そしてフラク
ションＤを得た。この方法によって得られたほぼ純粋な
細胞増殖抑制成分は、シリカゲル６０ローバー（ＬＯＢ
ＡＲ） Ｂカラムを使用して、クロマ１へグラフィーに
かけた。９７．５ ： ２．５の塩化メチレン−メタノ
ールで溶出して、本明細書でヒメニス０ タチン １と称する細胞増殖阻止性（ｐＳ ＥＤ５゜
３．５μｇ／ｍｌ、）の生を酸生成物が得られた。
本明細書で（Ｒ告するように、ヒメニスタチン１のマス
スペクトル測定は、８個の窒素原子の存在を示し、”Ｃ
ＮＭＲスペクトルで観察された８個のアミドカルボニル
を有する上記原子はオクタペプチドを示した。ＥＩＭＳ
スペクトル中で観察された比較的高い分子イオン度（ヘ
ースピ−り）は、推定されるオクタペプチドが環状であ
ることを示唆した。次に、２−ＤＮＭＲ技術を広範に使
用して８個のアミノ酸単位の同一性を決定した。４００
ＭＨｚの’Ｈ−ＮＭＲスペクトルは５個のアξドプロ
トンの存在だけを明白に示した。＋１１、’Ｈ−ＣＯ３
ＹおよびＩｎ、’Ｈ中継Ｃ０５Ｙを使用して、これらプ
ロトンのスピンシステムに従って、これらアミノ酸は、
バリン、ロイシン、チロシンおよび２つのイソロイシン
単位であることが決定された。’Ｈ，’＋１−Ｃ０５Ｙ
および’ＩＬ ’Ｉ＋ＩＩＣ０５Ｙは、残りのＮＭＲシ
グナルがブロリンニ典型的なタイプＸ−Ｃ１１−ＣＨｚ
−ＣＨｚ−ＣＨ２−Ｘの３個の独立したスピン系から成
ることを示した。８個のアミノ酸単位は観察された正確
なマス分子量を説明している。アミノ酸の実際の配列は
以下で示されるように１Ｏ−Ｎｏｎ実験から確認された
。
スペクトル測定は、８個の窒素原子の存在を示し、”Ｃ
ＮＭＲスペクトルで観察された８個のアミドカルボニル
を有する上記原子はオクタペプチドを示した。ＥＩＭＳ
スペクトル中で観察された比較的高い分子イオン度（ヘ
ースピ−り）は、推定されるオクタペプチドが環状であ
ることを示唆した。次に、２−ＤＮＭＲ技術を広範に使
用して８個のアミノ酸単位の同一性を決定した。４００
ＭＨｚの’Ｈ−ＮＭＲスペクトルは５個のアξドプロ
トンの存在だけを明白に示した。＋１１、’Ｈ−ＣＯ３
ＹおよびＩｎ、’Ｈ中継Ｃ０５Ｙを使用して、これらプ
ロトンのスピンシステムに従って、これらアミノ酸は、
バリン、ロイシン、チロシンおよび２つのイソロイシン
単位であることが決定された。’Ｈ，’＋１−Ｃ０５Ｙ
および’ＩＬ ’Ｉ＋ＩＩＣ０５Ｙは、残りのＮＭＲシ
グナルがブロリンニ典型的なタイプＸ−Ｃ１１−ＣＨｚ
−ＣＨｚ−ＣＨ２−Ｘの３個の独立したスピン系から成
ることを示した。８個のアミノ酸単位は観察された正確
なマス分子量を説明している。アミノ酸の実際の配列は
以下で示されるように１Ｏ−Ｎｏｎ実験から確認された
。
提案された構造を更に確証するために、陽イオンＦＡＢ
ＭＳ／ＭＳを実施した。以下で示されるように、各プ
ロリン窒素の陽イオン化によってマススベクｉ・ルでａ
、ｂおよびＣと記される３つの異なる線状ペプチドイオ
ンが得られた。それらのフラグメンテーションから推測
されるイオンのうち１つを除いて全部が観察され、それ
によって本明細書でヒメニスクチン １と定めた構造が
確認された。
ＭＳ／ＭＳを実施した。以下で示されるように、各プ
ロリン窒素の陽イオン化によってマススベクｉ・ルでａ
、ｂおよびＣと記される３つの異なる線状ペプチドイオ
ンが得られた。それらのフラグメンテーションから推測
されるイオンのうち１つを除いて全部が観察され、それ
によって本明細書でヒメニスクチン １と定めた構造が
確認された。
各キラルセンターの絶対配置は、Ｎ−ペンタフルオロプ
ロピオニルイソプロピルエステルｓｉ ｉ 体全製造し
た後ペプチド加水分解物のキラルＧＣ分析（キラシル−
ハル ■ カラム）を使用して特定した。ア呉ノ酸ユニ
ソ１〜は全て１．−配置を存していることが見出された
。
ロピオニルイソプロピルエステルｓｉ ｉ 体全製造し
た後ペプチド加水分解物のキラルＧＣ分析（キラシル−
ハル ■ カラム）を使用して特定した。ア呉ノ酸ユニ
ソ１〜は全て１．−配置を存していることが見出された
。
１ｉＡＢ ＭＳ／ＭＳによるヒメニスタチン １のペプ
チド配列決定 シクロ（Ｐｒｏａ−Ｐｒｏｂ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ
ｃ−Ｌｅｕ−１ｉｅＴｈｅ）プロリンの陽イオン化から
得られる観察されたマススペクトル（ａ、ｂまたはずＣ
で示される）： ３ ａ 、、Ｐｒｏｌｌ’−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｐ
ｒｏ−Ｌｅｕ−１ｉｅ−Ｉ１ｃｍ／ｚ １９
５ ３５８ ４５７ ５５４ ６６７ ７８０ｍ／ｚ
７８０のＭＳニよる 実施例 ２ 実施例Ｊで製造されたクリーム色の水性相は、塩化メチ
レン（９０リソ］・ル）とｎ−ブタノール（９０リツト
ル）間で分配させた。合わせた２つの有機抽出物の各々
から溶媒を蒸発させると非常に暗褐色のゲル様固形物（
１８０ｇ、 ＰＳ Ｐ、Ｄ、ｏ ６．１ ｇ／ｍＬ
およびＴ／Ｃ３０ｍｇ／Ｋｇで苛性）が得られた。
チド配列決定 シクロ（Ｐｒｏａ−Ｐｒｏｂ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ
ｃ−Ｌｅｕ−１ｉｅＴｈｅ）プロリンの陽イオン化から
得られる観察されたマススペクトル（ａ、ｂまたはずＣ
で示される）： ３ ａ 、、Ｐｒｏｌｌ’−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｐ
ｒｏ−Ｌｅｕ−１ｉｅ−Ｉ１ｃｍ／ｚ １９
５ ３５８ ４５７ ５５４ ６６７ ７８０ｍ／ｚ
７８０のＭＳニよる 実施例 ２ 実施例Ｊで製造されたクリーム色の水性相は、塩化メチ
レン（９０リソ］・ル）とｎ−ブタノール（９０リツト
ル）間で分配させた。合わせた２つの有機抽出物の各々
から溶媒を蒸発させると非常に暗褐色のゲル様固形物（
１８０ｇ、 ＰＳ Ｐ、Ｄ、ｏ ６．１ ｇ／ｍＬ
およびＴ／Ｃ３０ｍｇ／Ｋｇで苛性）が得られた。
実施例 ３
実施例２に従って製造された塩化メチレンフラクション
（１，８０ｇ）を９：１のメタノール−水溶液（１リソ
Ｉ・ル）中に入れ、ヘキサン（３ｘ１リンドル）で抽出
した。メタノール−水相は３：２に希釈し、そして塩化
メチレンで抽出した。得られたヘキサン（１４６ｇ ）
、塩化メチレン（２０ｇ）および３：２のメタノール−
水（１４ｇ）フラクションを濃縮し、その分別４ 物をハイオアソセイに付した。塩化メチレン抽出物は顕
著なｐｓ細胞増殖抑制活性（ＰＳ ＥＤｓｏ ０．
２６ｇ）を有していることが見出された。
（１，８０ｇ）を９：１のメタノール−水溶液（１リソ
Ｉ・ル）中に入れ、ヘキサン（３ｘ１リンドル）で抽出
した。メタノール−水相は３：２に希釈し、そして塩化
メチレンで抽出した。得られたヘキサン（１４６ｇ ）
、塩化メチレン（２０ｇ）および３：２のメタノール−
水（１４ｇ）フラクションを濃縮し、その分別４ 物をハイオアソセイに付した。塩化メチレン抽出物は顕
著なｐｓ細胞増殖抑制活性（ＰＳ ＥＤｓｏ ０．
２６ｇ）を有していることが見出された。
実施例 ４
実施例３に従って製造された塩化メチレンフラクション
（２０ｇ）を３：２の塩化メチレン−メタノール中に分
散させ、その後セファデックスＬｌ＋−２０のカラム（
１，２Ｋｇ ； ２０ｘ１２０ｃｍ）でクロマトグラフ
ィーにかけた。活性物質を更に濃縮するとフラクション
Ａが生した。（１８ｇ ＰＳ ＥＤｓｏ １．６
ｇ／ｍ１−） 。セファデックスＬＨ−２０（１，２Ｋ
ｇ； ２０ｘ１２０ｃｍ）で更に分配クロマトグラフィ
ーにかけ、そして１１：１のヘキサントルエン−メタノ
ールで溶出すると、なかでもフラクションＢ （０，５
ｇ ： ＰＳ ＥＤｓｏ ２．５ μｇ／ｍＬ）お
よび当面のフラクションＣ（１，６４ｇＸＰＳ ＥＤ
ｓ。
（２０ｇ）を３：２の塩化メチレン−メタノール中に分
散させ、その後セファデックスＬｌ＋−２０のカラム（
１，２Ｋｇ ； ２０ｘ１２０ｃｍ）でクロマトグラフ
ィーにかけた。活性物質を更に濃縮するとフラクション
Ａが生した。（１８ｇ ＰＳ ＥＤｓｏ １．６
ｇ／ｍ１−） 。セファデックスＬＨ−２０（１，２Ｋ
ｇ； ２０ｘ１２０ｃｍ）で更に分配クロマトグラフィ
ーにかけ、そして１１：１のヘキサントルエン−メタノ
ールで溶出すると、なかでもフラクションＢ （０，５
ｇ ： ＰＳ ＥＤｓｏ ２．５ μｇ／ｍＬ）お
よび当面のフラクションＣ（１，６４ｇＸＰＳ ＥＤ
ｓ。
１．７μｇ／ｍＬ）が製造された。
実施例 ５
実施例４から得られたフラクションＢおよびフラクショ
ンＣを合わせ、セファデックスＬＨ−２０カラム上メタ
ノールで更に９つの分離フラクションに分離した。得ら
れたフラクションのなかで、Ｄと称したフラクション（
０＝７５ｇ 、ＰＳ ＥＤｓ。３．１ μｇ／ｍＬ）
はＴＬＣで殆ど単一のスボソ１へを示した。
ンＣを合わせ、セファデックスＬＨ−２０カラム上メタ
ノールで更に９つの分離フラクションに分離した。得ら
れたフラクションのなかで、Ｄと称したフラクション（
０＝７５ｇ 、ＰＳ ＥＤｓ。３．１ μｇ／ｍＬ）
はＴＬＣで殆ど単一のスボソ１へを示した。
実施例 ６
実施例５から得られたフラクションＤは、予め充填した
シリカゲル６０カラム（２，５ｘ ３０ｃｍ）を有する
媒体圧力（５０ｐｓｉまで）液体クロマトグラフィーユ
ニットを使用して更に精製し、そして９７．５−２．５
の塩化メチレン−メタノールで溶出させた。
シリカゲル６０カラム（２，５ｘ ３０ｃｍ）を有する
媒体圧力（５０ｐｓｉまで）液体クロマトグラフィーユ
ニットを使用して更に精製し、そして９７．５−２．５
の塩化メチレン−メタノールで溶出させた。
ヒメニスタチン １は１８０〜１８２℃で融解する無色
の結晶性無晶形固形物（４９ｍｇ、収量３．１ ｘ １
０−５χ）として得られた。
の結晶性無晶形固形物（４９ｍｇ、収量３．１ ｘ １
０−５χ）として得られた。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）構造式 ▲数式、化学式、表等があります▼ を有するヒメニスタチンと称される化合物。 に従って、選択されたＮＯＥを有する、特許請求の範囲
第１項に記載の化合物。 ３）ＦＡＢＭＳ／ＭＳによって決定された次のペプチド
配列 シクロ〔Ｐｒｏ＾ａ−Ｐｒｏ＾ｂ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｐ
ｒｏ＾ｃ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ〕（式中、 Ｐｒｏ＾ａはＰｒｏＨ＾＋−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−
Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅであり、 Ｐｒｏ＾ｂはＰｒｏＨ＾＋−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−
Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏであり、そして Ｐｒｏ＾ｃはＰｒｏＨ＾＋−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−
Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｖａｌである）を有するヒメ
ニスタチンと称される化合物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US443,882 | 1989-11-30 | ||
| US07/443,882 US5130414A (en) | 1989-11-30 | 1989-11-30 | Isolation and structural elucidation of the cyclic peptide hymenistatin 1 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03178994A true JPH03178994A (ja) | 1991-08-02 |
Family
ID=23762552
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2318165A Pending JPH03178994A (ja) | 1989-11-30 | 1990-11-26 | ヒメニスタチン |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5130414A (ja) |
| EP (1) | EP0430538A1 (ja) |
| JP (1) | JPH03178994A (ja) |
| CA (1) | CA2030293A1 (ja) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020013906A1 (en) * | 2000-06-14 | 2002-01-31 | Walter Wallach | Secure medical test and result delivery system |
| CN1152050C (zh) * | 2001-07-12 | 2004-06-02 | 中国人民解放军第二军医大学 | 一种新的具有抗癌活性的环肽类化合物phakellistatin 12 |
| AU2003249078A1 (en) * | 2002-08-06 | 2004-02-23 | Instituto Biomar, S.A. | New cytotoxic cyclopeptide and its use for the treatment of cancer |
| CN101284871B (zh) * | 2008-05-01 | 2011-05-04 | 杭州中肽生化有限公司 | 一种可用作免疫抑制剂的带有-Pro-Sta-Tyr-残基片段的环肽及其合成工艺 |
| WO2016130969A1 (en) | 2015-02-13 | 2016-08-18 | George Robert Pettit | Silstatin compounds |
| WO2019094709A1 (en) | 2017-11-09 | 2019-05-16 | Pettit George R | Betulastatin compounds |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8817743D0 (en) * | 1988-07-26 | 1988-09-01 | Fujisawa Pharmaceutical Co | Fr901228 substance & preparation thereof |
-
1989
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1990
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
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