JPS6188884A - エンケフアリナ−ゼｂ阻害物質およびその製法 - Google Patents
エンケフアリナ−ゼｂ阻害物質およびその製法Info
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- JPS6188884A JPS6188884A JP59208789A JP20878984A JPS6188884A JP S6188884 A JPS6188884 A JP S6188884A JP 59208789 A JP59208789 A JP 59208789A JP 20878984 A JP20878984 A JP 20878984A JP S6188884 A JPS6188884 A JP S6188884A
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- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06139—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic
- C07K5/06165—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic and Pro-amino acid; Derivatives thereof
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は新規なエンケファリナーゼＢ阻害物質に関する
。
。
生体内において、モルフインレセプターの存在が明らか
にされ、内因性モルフイネ様物質が検索された結果、１
９７５年ＨｕｇｈｅＳらによりメチオニンーエンケファ
リン（Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｍｅ％ ）お
よびロイシン−エンケファリン（Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌ
ｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ ）と呼ばれるペンタペプチドが見
出された（Ｎａｔｕｒｅ、 ２５８．５７７（１９７５
））。
にされ、内因性モルフイネ様物質が検索された結果、１
９７５年ＨｕｇｈｅＳらによりメチオニンーエンケファ
リン（Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｍｅ％ ）お
よびロイシン−エンケファリン（Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌ
ｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ ）と呼ばれるペンタペプチドが見
出された（Ｎａｔｕｒｅ、 ２５８．５７７（１９７５
））。
これを契機として種々の内因性物質（オピオイドペプチ
ド）が見出されるとともに、遺伝子工学的方法により、
前駆体も明らかにされた。そして、これらのペプチドは
必ずＮ末端側にメチオニンーエンケファリンマタハロイ
シンーエンケファリンの構造を有していることも明らか
になった。
ド）が見出されるとともに、遺伝子工学的方法により、
前駆体も明らかにされた。そして、これらのペプチドは
必ずＮ末端側にメチオニンーエンケファリンマタハロイ
シンーエンケファリンの構造を有していることも明らか
になった。
一般に「エンケファリン」は鎮痛作用を多られすことが
期待されるが脳内投与しても、すみやかに代謝、分解さ
れその活性を失う。このようなオピオイドペプチドの分
解に関与する酵ふとして、アミノペプチダーゼ、エンケ
ファリナーゼＢ１エンケファリナーゼＡの３種類が知ら
れている。
期待されるが脳内投与しても、すみやかに代謝、分解さ
れその活性を失う。このようなオピオイドペプチドの分
解に関与する酵ふとして、アミノペプチダーゼ、エンケ
ファリナーゼＢ１エンケファリナーゼＡの３種類が知ら
れている。
Ｔｙｒ−Ｇｌｙ結合を切断するアミノペグチダーゼは、
脳の可溶性画分および膜画分に存在するが、両者の酵素
学的性質は異なっている。Ｇｌｙ−Ｃ）ｌｙ結合を切断
するエンケファリナーゼＢは膜画分に存在するが、その
酵素学的性質は、はとんど明らかにされていない。Ｇｌ
ｙ−Ｐｈｅ結合を切断する酵素としてエンケファリナー
ゼＡおよびアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）が知ら
れておシ、両者とも膜画分に存在するが、エンケファリ
ン代謝には王にエンケファリナーゼＡが関与している。
脳の可溶性画分および膜画分に存在するが、両者の酵素
学的性質は異なっている。Ｇｌｙ−Ｃ）ｌｙ結合を切断
するエンケファリナーゼＢは膜画分に存在するが、その
酵素学的性質は、はとんど明らかにされていない。Ｇｌ
ｙ−Ｐｈｅ結合を切断する酵素としてエンケファリナー
ゼＡおよびアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）が知ら
れておシ、両者とも膜画分に存在するが、エンケファリ
ン代謝には王にエンケファリナーゼＡが関与している。
これらのエンケファリン類分解に関与する酵素の阻害剤
が生体内でエンケファリンあるいは他のオピオイドペグ
チドの分解を抑制することができれば、その生物活性を
保持することができ、鎮痛薬として使用できることが期
待される。
が生体内でエンケファリンあるいは他のオピオイドペグ
チドの分解を抑制することができれば、その生物活性を
保持することができ、鎮痛薬として使用できることが期
待される。
現在、アミノペプチダーゼ阻害剤としては、ビューロマ
イシン（Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ
、、 Ｕ、Ｓ、Ａ。
イシン（Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ
、、 Ｕ、Ｓ、Ａ。
６９．６２４（１９７２））、ペスタチン（Ｊ 、Ａｎ
ｔｉｂｉｏｔｉｃｓ。
ｔｉｂｉｏｔｉｃｓ。
２９．９７（１９７６））、アマスタチン（Ｊ、Ａｎｆ
＋１ｋ）１０ｔｌＣ８＋３１．６３６（１９７８））ま
たはアルファメニン（Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、３
６，１５７２．１５７６（１９８３））が、またエンケ
ファリナーゼＡ阻害剤としてはチオールファン（Ｎａｔ
ｕｒｅ、 ２８８．２８６（１９８０））。
＋１ｋ）１０ｔｌＣ８＋３１．６３６（１９７８））ま
たはアルファメニン（Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、３
６，１５７２．１５７６（１９８３））が、またエンケ
ファリナーゼＡ阻害剤としてはチオールファン（Ｎａｔ
ｕｒｅ、 ２８８．２８６（１９８０））。
ホスホラミトン（Ｌｉｆｅ ５ｃｉｅｎｃｅ、 ２９
＋ ２５９３（１９８１）） が知られている。
＋ ２５９３（１９８１）） が知られている。
今回、本発明者らはエンケファリン分解に関与する酵素
の一つであるエンケファリナーゼＢを特異的に阻害する
物質（以下、プロピオキサチンＡおよびＢと称する）が
キタサトスポリア（微工研菌＄７５８１号）から生産さ
れることを見出し本発明を完成した。
の一つであるエンケファリナーゼＢを特異的に阻害する
物質（以下、プロピオキサチンＡおよびＢと称する）が
キタサトスポリア（微工研菌＄７５８１号）から生産さ
れることを見出し本発明を完成した。
プロピオキサチンＡおよびＢはエンケファリナーゼＢの
阻害作用を有する。従って、鎮痛剤として用いることが
できる。
阻害作用を有する。従って、鎮痛剤として用いることが
できる。
本発明に用いられる５ＡＮＫ６０６８４株は以下に示す
苗字的性質を有する。
苗字的性質を有する。
１）形態学的性質
５ＡＮＫ６０６８４株は、菌株同定用寒天培地上、２８
℃で７ないし１４日間の培寮において比較的良好な生育
を示し、基生菌糸は豊富に伸長・分枝する。基生菌糸の
幅は、０．５〜０．８μｍであシ、断裂やノカルディア
様のジグザグ伸長は観察されない。気菌糸は、幅０．５
〜０．８μｍであシ、第１表に示すような形態学的性質
を有する。なお、胞子柄の着生位置は気菌糸上のみでち
ゃ、胞子のり、ペン毛胞子、菌核、車軸分枝等の特殊器
官は認められない。
℃で７ないし１４日間の培寮において比較的良好な生育
を示し、基生菌糸は豊富に伸長・分枝する。基生菌糸の
幅は、０．５〜０．８μｍであシ、断裂やノカルディア
様のジグザグ伸長は観察されない。気菌糸は、幅０．５
〜０．８μｍであシ、第１表に示すような形態学的性質
を有する。なお、胞子柄の着生位置は気菌糸上のみでち
ゃ、胞子のり、ペン毛胞子、菌核、車軸分枝等の特殊器
官は認められない。
第１表 気菌糸の形態学的性質
菌糸の分枝法 単純分枝
胞子柄の形態 直ないし曲状
胞子の表面構造 平滑
胞子の大きさ ０．６〜０．９Ｘ１．４〜２．２
屑胞子の形状 長円ないし柱状 胞子の連鎖数 １０〜５０ ２）各種培地上の諸性質 下記、各種平板培地上で２８℃、１４日間の培養をした
ときの性状を第２表に示す。色調の表示は日不色彩研究
所版゛標準色票″のカラーチップナンバーを表わす。
屑胞子の形状 長円ないし柱状 胞子の連鎖数 １０〜５０ ２）各種培地上の諸性質 下記、各種平板培地上で２８℃、１４日間の培養をした
ときの性状を第２表に示す。色調の表示は日不色彩研究
所版゛標準色票″のカラーチップナンバーを表わす。
第２表 各種培地上の培養性状
Ｇ二生育
ＡＭ：気菌糸
１ヨ１ 二 ｊ１七Ｌ 面
ＳＰ：可溶性色素
３）生理学的性質
（１）生育温度範囲
（イースト・麦芽寒天＝ＩＳＰ ２培地、２週間）
温度範囲 ６℃〜３８℃
生育最適温度 １７℃〜２８℃
（２）ゼラチンの液化 陰性（グルコ
ース−ペプトン・ゼラチン培地。
ース−ペプトン・ゼラチン培地。
穿刺培養）
スターチの加水分解 陽性（澱粉・無機
塩寒天：ｌ８Ｐ４培地、ヨード反応）脱脂乳の凝固およ
びペグトン化 陽性（スキムミルク（ディフコ社製
） 硝酸塩の還元 陽′匪（３） メ
ラニン様色素の生成（２８℃、２週間）チロシン寒天培
地（ＩＳＰ７） 陰性ペプトン・イーストエキス・鉄
寒天培地（ＩＳＰ ６ ） 陰性 トリプトン・イーストエキス・プロス （ＩＳＰ １ ） 陰性 （４ン 分解 チロシン 陰性 キサンチン 陰性 カゼイン 陽性 （５）は塩性（イースト・麦芽寒天： ＩＳＰ ２培地
。
塩寒天：ｌ８Ｐ４培地、ヨード反応）脱脂乳の凝固およ
びペグトン化 陽性（スキムミルク（ディフコ社製
） 硝酸塩の還元 陽′匪（３） メ
ラニン様色素の生成（２８℃、２週間）チロシン寒天培
地（ＩＳＰ７） 陰性ペプトン・イーストエキス・鉄
寒天培地（ＩＳＰ ６ ） 陰性 トリプトン・イーストエキス・プロス （ＩＳＰ １ ） 陰性 （４ン 分解 チロシン 陰性 キサンチン 陰性 カゼイン 陽性 （５）は塩性（イースト・麦芽寒天： ＩＳＰ ２培地
。
２週間）
２チまで生育するが、３チ以上では生育しない。
（６）炭素源の資化性
グリドハム・ゴトリーブ寒天を基礎培地として２８℃で
１４日間培養し、以下の結果を得た。
１４日間培養し、以下の結果を得た。
Ｄ−１”ルコースは資化されるが、Ｄ−キシロースは資
化が疑わしい、Ｌ−アラビノース、イノシトール、Ｄ−
マンニトール、Ｂ−フルクトース、Ｌ−ラムノース、シ
ュークロースオよヒラフイノースは資化されない。
化が疑わしい、Ｌ−アラビノース、イノシトール、Ｄ−
マンニトール、Ｂ−フルクトース、Ｌ−ラムノース、シ
ュークロースオよヒラフイノースは資化されない。
４）細胞化学的性状
全細胞の加水分解物からは、メンジアミノピメリン酸お
よびＬＬ−ジアミノピメリン酸と、グリシンが検出され
た（ Ａｐｐｌ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、 、 １３
。
よびＬＬ−ジアミノピメリン酸と、グリシンが検出され
た（ Ａｐｐｌ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、 、 １３
。
２３６（１９６５））。また糖成分としては、グルコー
ス、ガラクトースおよびマンノースが検出された。
ス、ガラクトースおよびマンノースが検出された。
以上の結果よシ、本発明における目的物質グロピオキサ
チンＡおよびＢを生産する菌株は、キタサトスポリアハ
に分類され（キタサトスポリア１セタルパ（： Ｋｉｔ
ａｓａｔｏｓｐｏｒｉａ ５ｅｔａｌｂａ （工、Ｊ
。
チンＡおよびＢを生産する菌株は、キタサトスポリアハ
に分類され（キタサトスポリア１セタルパ（： Ｋｉｔ
ａｓａｔｏｓｐｏｒｉａ ５ｅｔａｌｂａ （工、Ｊ
。
Ｓ、Ｂｏ、 ３３．６７２（１９８３） ） 、 （Ｊ
、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ。
、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ。
３５．１０１３（１９８２）］） 、キタサトスポリア
・エスピー・５ＡＮＫ ６０６８４ （Ｋｉｔａｓａｔ
ｏｓｐｏｒｉａ ｓｐ。
・エスピー・５ＡＮＫ ６０６８４ （Ｋｉｔａｓａｔ
ｏｓｐｏｒｉａ ｓｐ。
８ＡＮＫ６０６８４）と命名した。
以上、ノロビオキサテンの生産菌について説明したが、
放線菌の諸性質は一定したものではなく、自然的、人工
的に容易に変化することは周知の通シであシ、本発明で
使用しうる菌株はキタサトスポリア属に属する、プロピ
オキサチンを生産するすべての菌株を包含するものであ
る。本発明における培養は一般放線菌における培養方法
に準じて行われ、液体培地中での振盪培養るるいは通気
攪拌培養によるのが好ましい。
放線菌の諸性質は一定したものではなく、自然的、人工
的に容易に変化することは周知の通シであシ、本発明で
使用しうる菌株はキタサトスポリア属に属する、プロピ
オキサチンを生産するすべての菌株を包含するものであ
る。本発明における培養は一般放線菌における培養方法
に準じて行われ、液体培地中での振盪培養るるいは通気
攪拌培養によるのが好ましい。
培地成分としては、放線菌の栄養源として公知のものが
使用され、たとえば炭素源としてブドウ糖、シュクロー
ス、グリセリン、マルトース、デキストリン、澱粉、大
豆油、綿実油などが、窒素源としては、大豆粉、落花生
粉、綿実粉、ファーマミン、魚粉、コーン・スチーゾ・
リカー、ペグトン、肉エキス、イースト、イーストエキ
ス、硝酸ノーグー、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウ
ム、種々のアミノ酸等が、また無機塩として食塩、燐酸
塩、炭酸カルシウム、微量金属塩などが必要に応じて適
宜添加される。
使用され、たとえば炭素源としてブドウ糖、シュクロー
ス、グリセリン、マルトース、デキストリン、澱粉、大
豆油、綿実油などが、窒素源としては、大豆粉、落花生
粉、綿実粉、ファーマミン、魚粉、コーン・スチーゾ・
リカー、ペグトン、肉エキス、イースト、イーストエキ
ス、硝酸ノーグー、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウ
ム、種々のアミノ酸等が、また無機塩として食塩、燐酸
塩、炭酸カルシウム、微量金属塩などが必要に応じて適
宜添加される。
液体培養に際しては、シリコン油、植物油、界面活性剤
等が消泡剤として適宜使用される。培地の声は５．５〜
８，０、培養温度は６℃から３８℃、特に２８℃前後が
好ましい。
等が消泡剤として適宜使用される。培地の声は５．５〜
８，０、培養温度は６℃から３８℃、特に２８℃前後が
好ましい。
本発明におけるノロビオキサテンＡおよびＢの大部分は
、５ＡＮＫ ６０６８４株の培養液中に存在する。
、５ＡＮＫ ６０６８４株の培養液中に存在する。
本発明におけるプロピオキサチンを培養液から採取する
にあたっては、培養涙液から吸着剤への吸脱着により好
収率で採取できる。吸着剤としては、例えばダイヤイオ
ンＨＰ２０（三菱化とんど溶出される。また、溶媒抽出
法も用いることができる。ノロビオキサテンは、ｐｉ−
１２，０の条件下でｎ−ブタノール層に抽出され、ｐ）
１７．０の条件下では水層に抽出される。さらにイオン
笈換体のクロマトグラフィーも稍製に用いられる。特に
イオン父換体として、ノエチルアミノエチル基（ＤＥＡ
Ｅ ）を有するものが有効であシ、例エバ、ＤＥＡＥ−
セファデックス（ファルマシア社製）、ＤＥＡＥ −）
ヨパール６５０Ｓ （東洋曹達工業■社製）に吸着され
、酢酸濃度を上げることによりグロビオキサチンは溶出
される。逆相シリカゲルカラムも使用でき、高速液体ク
ロマトグラフィー用ＯＤＳ （オクタデシル基）カラム
は非常に有効であり、ノロビオキサテンＡとプロピオキ
サチンＢを相互に分離できる。これらの方法を適宜組み
合わせることにょクゾロビオキサテンＡおよびＢを白色
粉末として取得できる。
にあたっては、培養涙液から吸着剤への吸脱着により好
収率で採取できる。吸着剤としては、例えばダイヤイオ
ンＨＰ２０（三菱化とんど溶出される。また、溶媒抽出
法も用いることができる。ノロビオキサテンは、ｐｉ−
１２，０の条件下でｎ−ブタノール層に抽出され、ｐ）
１７．０の条件下では水層に抽出される。さらにイオン
笈換体のクロマトグラフィーも稍製に用いられる。特に
イオン父換体として、ノエチルアミノエチル基（ＤＥＡ
Ｅ ）を有するものが有効であシ、例エバ、ＤＥＡＥ−
セファデックス（ファルマシア社製）、ＤＥＡＥ −）
ヨパール６５０Ｓ （東洋曹達工業■社製）に吸着され
、酢酸濃度を上げることによりグロビオキサチンは溶出
される。逆相シリカゲルカラムも使用でき、高速液体ク
ロマトグラフィー用ＯＤＳ （オクタデシル基）カラム
は非常に有効であり、ノロビオキサテンＡとプロピオキ
サチンＢを相互に分離できる。これらの方法を適宜組み
合わせることにょクゾロビオキサテンＡおよびＢを白色
粉末として取得できる。
以上に述べた方法は一例であシ、培地組成、培養条件、
ノロビオキサテンの生産量などに応じて適切に工夫する
ことができる。
ノロビオキサテンの生産量などに応じて適切に工夫する
ことができる。
このようにして得られたプロピオキサチンＡおよびＢは
次の理化学的および生物学的性質を示す。
次の理化学的および生物学的性質を示す。
１、 ノロビオキサテンＡの理化学的および生物学的性
質 １）物質の性状二白色粉末の酸性物質 ２）元素分析値ヴ〕 Ｃ，５４，６７：Ｈ，７，５１；Ｎ、１１．６７３）分
子量 ３７１（質量分析法により測定） ４）分子式：Ｃ１７Ｈ２，Ｎ３０６ ５）比旋光度、〔α］Ｄ−７０．９°（Ｃ＝１．０．水
）６）赤外線吸収スペクトルニジＫＢｒ ｃｎＬ−１ａ
ｘ ＫＢｒ錠で測定した赤外線吸収スペクトルは第１図に示
す通りである。
質 １）物質の性状二白色粉末の酸性物質 ２）元素分析値ヴ〕 Ｃ，５４，６７：Ｈ，７，５１；Ｎ、１１．６７３）分
子量 ３７１（質量分析法により測定） ４）分子式：Ｃ１７Ｈ２，Ｎ３０６ ５）比旋光度、〔α］Ｄ−７０．９°（Ｃ＝１．０．水
）６）赤外線吸収スペクトルニジＫＢｒ ｃｎＬ−１ａ
ｘ ＫＢｒ錠で測定した赤外線吸収スペクトルは第１図に示
す通りである。
７）核磁気共鳴スペクトル： δ： ｐｐｍ重水中、外
部基準にテトラメチルシランを使用して４００■２で測
定した核磁気共鳴スペクトルは第２図に示す通りである
。
部基準にテトラメチルシランを使用して４００■２で測
定した核磁気共鳴スペクトルは第２図に示す通りである
。
８）紫外線吸収スペクトル：λｍａｘ ｌ１ｌｌｌ （
Ｅ：よ）水溶液中で測定した紫外線吸収スペクトルは末
端吸収以外は特性吸収を示さない。
Ｅ：よ）水溶液中で測定した紫外線吸収スペクトルは末
端吸収以外は特性吸収を示さない。
９）溶解性：
水、メタノール、ツメチルスルホキシドに可溶、エタノ
ール、アセトンに僅かに可溶、酢酸エチル、クロロホル
ム、ベンゼン、エーテルに不溶。
ール、アセトンに僅かに可溶、酢酸エチル、クロロホル
ム、ベンゼン、エーテルに不溶。
１０）酸加水分解；
バリンおよびプロリンを１分子ずつ含む（１２Ｎ塩酸−
氷酢酸（１：１）を用いて、１１０℃、２４時間で加水
分解を行い、アミノ酸自動分析計により検出）。
氷酢酸（１：１）を用いて、１１０℃、２４時間で加水
分解を行い、アミノ酸自動分析計により検出）。
１１）呈色反応
ニンヒドリン反応に陰性。加水分解後はニンヒドリン反
応に陽性。
応に陽性。
１２） 高速液体クロマトグラフィーにおける溶出時
間 Ｔ８に−Ｃ）ＥＬ 、 ＯＤ８１２０− Ａカラム（東
洋曹達工業■社製、０．４６Ｘ２５の）を用いた高速液
体クロマトグラフィーにおいて、２０％アセトニトリル
−０，１％トリフルオロ酢酸で１．０ｄ／分の流速で溶
出しＵＶ ２３０ ｎｍで検出すると約６．５０分で溶
出される。
間 Ｔ８に−Ｃ）ＥＬ 、 ＯＤ８１２０− Ａカラム（東
洋曹達工業■社製、０．４６Ｘ２５の）を用いた高速液
体クロマトグラフィーにおいて、２０％アセトニトリル
−０，１％トリフルオロ酢酸で１．０ｄ／分の流速で溶
出しＵＶ ２３０ ｎｍで検出すると約６．５０分で溶
出される。
（３） エンケファリナーゼＢの阻害作用阻害形式は
拮抗型であり、そのＫｌ値（阻害定数）は１゜３Ｘ１０
Ｍｔ−示す。
拮抗型であり、そのＫｌ値（阻害定数）は１゜３Ｘ１０
Ｍｔ−示す。
２、プロピオキサチンＢの理化学的および生物学的性質
１）物質の性状二白色粉末の酸性物質
２）元素分析値（支））
Ｃ、５０，５９；Ｈ、７，１９：Ｎ 、 ９．５９３）
分子量 ３８５（質量分析法により測定） ４）分子式”１Ｂ”５１Ｎ５０６ ５）比旋光度：〔α発５−５１．３°（Ｃ＝ＬＯ，水）
６）赤外線吸収スペクトルニジＫＢｒ 、７１ａｘ ＫＢｒ錠で測定した赤外線吸収スペクトルは第３図に示
す通りである。
分子量 ３８５（質量分析法により測定） ４）分子式”１Ｂ”５１Ｎ５０６ ５）比旋光度：〔α発５−５１．３°（Ｃ＝ＬＯ，水）
６）赤外線吸収スペクトルニジＫＢｒ 、７１ａｘ ＫＢｒ錠で測定した赤外線吸収スペクトルは第３図に示
す通りである。
７）核磁気共鳴スペクトル： δ： ｐｐｍ重水中、外
部基準にテトラメチルシランを使用して４００ ＭＨｚ
で測定した核磁気共鳴スペクトルは第４図に示す通りで
ある。
部基準にテトラメチルシランを使用して４００ ＭＨｚ
で測定した核磁気共鳴スペクトルは第４図に示す通りで
ある。
８ノ 紫外線吸収スペクトル：λ。ａＸｎｍ （Ｅ：：
）水溶液中で測定した紫外線吸収スペクトルは末端吸収
以外は特性吸収を示さない。
）水溶液中で測定した紫外線吸収スペクトルは末端吸収
以外は特性吸収を示さない。
９）溶解性：
水、メタノール、ジメチルスルホキシドに可溶、エタノ
ール、ア七トンに僅かに可溶、酢酸エチル、クロロホル
ム、ベンゼン、エーテルに不溶。
ール、ア七トンに僅かに可溶、酢酸エチル、クロロホル
ム、ベンゼン、エーテルに不溶。
１０）酸加水分解：
バリンおよびプロリンを１分子ずつ含む（１２Ｎ塩酸−
氷酢酸（１：１）を用いて、１１０℃、２４時間で加水
分解を行い、アミノ酸自動分析計により検出）。
氷酢酸（１：１）を用いて、１１０℃、２４時間で加水
分解を行い、アミノ酸自動分析計により検出）。
１１）呈色反応
ニンヒドリン反応に陰性。加水分解後はニンヒドリン反
応に陽性。
応に陽性。
１２）高速液体クロマトグラフィーにおける溶出時間
１トゲラフイーにおいて、２０％アセトニトリル−０，
１％ ）リフルオロ酢酸で１．Ｏｒｎ！、７分の流速で
溶出し’Ｕｖ２３．０ ｎｍで検出すると約１２．１０
分で溶出される。
１％ ）リフルオロ酢酸で１．Ｏｒｎ！、７分の流速で
溶出し’Ｕｖ２３．０ ｎｍで検出すると約１２．１０
分で溶出される。
１３）エンケファリナーゼＢの阻害作用阻害形式は拮抗
型であり、そのに１（阻害定数）値は１．１ＸＩＵ
Ｍを示す。
型であり、そのに１（阻害定数）値は１．１ＸＩＵ
Ｍを示す。
本発明における目的物質プロピオキサチンＡおよびＢの
培養工程ならびにＩｔ製工程中での追跡は、抗エンケフ
ァリナーゼＢ活性の測定に基づいて行な５゜すなわち、
メチオニン−エンケファリンをプロピオキサチンを含む
エンケファリナーゼＢｉ液と反応させた後、生成物であ
るチロシルグリシン（Ｔｙｒ−Ｃ）ｌｙ ） ヲ薄Ｉ
ｔクロマトグラフィーまたは高速液体クロマトグラフィ
ーなどのクロマトグラフィーにより分離し、その量を測
定する。一方、プロピオキサチンを含まない場合の１検
を同時に行ない、エンケファリナーゼＢ阻害剤定数を測
定する。実施例に示すような方法はもつとも簡便で迅速
な方法である。
培養工程ならびにＩｔ製工程中での追跡は、抗エンケフ
ァリナーゼＢ活性の測定に基づいて行な５゜すなわち、
メチオニン−エンケファリンをプロピオキサチンを含む
エンケファリナーゼＢｉ液と反応させた後、生成物であ
るチロシルグリシン（Ｔｙｒ−Ｃ）ｌｙ ） ヲ薄Ｉ
ｔクロマトグラフィーまたは高速液体クロマトグラフィ
ーなどのクロマトグラフィーにより分離し、その量を測
定する。一方、プロピオキサチンを含まない場合の１検
を同時に行ない、エンケファリナーゼＢ阻害剤定数を測
定する。実施例に示すような方法はもつとも簡便で迅速
な方法である。
また、この測定に用いられるエンケファリナーゼＢ溶液
はラット脳より、一般的に知られた酵素精製法を用いて
調製する。エンケファリナーゼＢはラット脳においては
膜結合性酵素とじて存在するので、たとえばトリトンＸ
−１００のような界面活性剤を用い膜より可溶化する。
はラット脳より、一般的に知られた酵素精製法を用いて
調製する。エンケファリナーゼＢはラット脳においては
膜結合性酵素とじて存在するので、たとえばトリトンＸ
−１００のような界面活性剤を用い膜より可溶化する。
これをさらに、ジエチルアミノエチル基（ＤＥＡＥ ）
を有する各種イオン又換体を用いたイオン父換クロマト
グラフィー、分子ふるいに基づくゲル口過法または等電
点分画法などのその他の方法を組み合わせることにより
、精製エンケファリナーゼＢ溶液を得る。これをエンケ
ファリナーゼＢ活性の測定に用いる。
を有する各種イオン又換体を用いたイオン父換クロマト
グラフィー、分子ふるいに基づくゲル口過法または等電
点分画法などのその他の方法を組み合わせることにより
、精製エンケファリナーゼＢ溶液を得る。これをエンケ
ファリナーゼＢ活性の測定に用いる。
ゾロビオキサテンを有効成分とする薬剤としては、プロ
ピオキサチンあるいはその薬学的に許容される塩を常用
の担体として配合して製剤できる。ゾロビオキサテンの
塩類の例としては薬学的に許容できる陽イオンたとえば
ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなど
の陽イオンがある。
ピオキサチンあるいはその薬学的に許容される塩を常用
の担体として配合して製剤できる。ゾロビオキサテンの
塩類の例としては薬学的に許容できる陽イオンたとえば
ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなど
の陽イオンがある。
による非経口投与法あるいは錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、
散剤、カプセル剤などによる経口投与法のいずれでも良
い。注射剤を調製する場合はゾロビオキサテンあるいは
その塩にｐｌ（１４ｕ剤、緩衝剤、安定化剤などを添加
し、常法により開結乾燥を行ない、凍結乾燥注射剤を作
ることができる。経口用固形製剤を調製する場合は有効
成分化合物に賦形剤あるいは結合剤、崩壊剤、滑沢剤、
着色剤、矯味剤、雉臭剤を加えた後、常法により、錠剤
、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等を作ることが
できる。直腸生薬製剤を調製する場合には、有効成分化
合物に、賦形剤、必要に応じて界面活性剤を加えた後、
常法により坐剤とすることができる。プロピオキサチン
の投与量は症状により異なるが成人ではプロピオキサチ
ンとして０６０１〜１０（ＩＩＦ／１回を１日１〜３回
経口あるいは非経口的に投与するのが好ましい。
散剤、カプセル剤などによる経口投与法のいずれでも良
い。注射剤を調製する場合はゾロビオキサテンあるいは
その塩にｐｌ（１４ｕ剤、緩衝剤、安定化剤などを添加
し、常法により開結乾燥を行ない、凍結乾燥注射剤を作
ることができる。経口用固形製剤を調製する場合は有効
成分化合物に賦形剤あるいは結合剤、崩壊剤、滑沢剤、
着色剤、矯味剤、雉臭剤を加えた後、常法により、錠剤
、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等を作ることが
できる。直腸生薬製剤を調製する場合には、有効成分化
合物に、賦形剤、必要に応じて界面活性剤を加えた後、
常法により坐剤とすることができる。プロピオキサチン
の投与量は症状により異なるが成人ではプロピオキサチ
ンとして０６０１〜１０（ＩＩＦ／１回を１日１〜３回
経口あるいは非経口的に投与するのが好ましい。
次に実施例および参考例をあげて本発明を更に具体的に
説明する。
説明する。
実施例
３０７容シャーファーメンタ−２基により、培地成分と
して、グルコース３．（１，化イースト１．０％、脱脂
大豆粉３．０％、炭酸カルシウム０、４ ％ 、塩化マ
グネシウム０．２％および消泡剤（アイスフオームＣＢ
−４２２（日本油脂■製））０．００５％を用い４日間
培養した。培養液をセライトを用いて口過し、菌体を除
去すると口液２８ｊが得られた。これを２０チ体積量の
ダイヤイオンＨＰ ２０カラムに付し、プロピオキサチ
ンを吸着させ、５０％エタノールで溶出した。エタノー
ル溶出液を減圧濃縮し、約２！とじた。この溶液を塩酸
にてｐＨ２，０に調整し、等量のｎ−ブタノールを用い
て抽出するとゾロビオキサテンはほとんどｎ−ブタノー
ル層に抽出された。このｎ−ブタノール層を水酸化ナト
リウム溶液にてＰＨ７，０とし水を用いて抽出すると今
度はゾロビオキサテンは水層に移行した。この水層をＤ
ＥＡＲ−セファデックスＡ−２５（ファルマシア社製。
して、グルコース３．（１，化イースト１．０％、脱脂
大豆粉３．０％、炭酸カルシウム０、４ ％ 、塩化マ
グネシウム０．２％および消泡剤（アイスフオームＣＢ
−４２２（日本油脂■製））０．００５％を用い４日間
培養した。培養液をセライトを用いて口過し、菌体を除
去すると口液２８ｊが得られた。これを２０チ体積量の
ダイヤイオンＨＰ ２０カラムに付し、プロピオキサチ
ンを吸着させ、５０％エタノールで溶出した。エタノー
ル溶出液を減圧濃縮し、約２！とじた。この溶液を塩酸
にてｐＨ２，０に調整し、等量のｎ−ブタノールを用い
て抽出するとゾロビオキサテンはほとんどｎ−ブタノー
ル層に抽出された。このｎ−ブタノール層を水酸化ナト
リウム溶液にてＰＨ７，０とし水を用いて抽出すると今
度はゾロビオキサテンは水層に移行した。この水層をＤ
ＥＡＲ−セファデックスＡ−２５（ファルマシア社製。
酢酸型）カラム（４，５ｘ ３５ｃｍ）に付し、プロピ
オキサチンを吸着させた。１０ｍＭ酢酸（２，５７）か
ら１Ｍ酢酸（２，５Ｉ／）への直線濃度勾配法により溶
出した。溶出液はフラクションコレクターにて２０ｍ／
ｆつ分画し、ゾロビオキサテンを含有する画分を得た。
オキサチンを吸着させた。１０ｍＭ酢酸（２，５７）か
ら１Ｍ酢酸（２，５Ｉ／）への直線濃度勾配法により溶
出した。溶出液はフラクションコレクターにて２０ｍ／
ｆつ分画し、ゾロビオキサテンを含有する画分を得た。
この両分を真空凍結乾燥して粗粉末約７００■が得られ
た。次にこの粗粉末を１０ｍＭ酢酸５０−に溶解し、Ｄ
ＥＡＥ−）コノ９−ル６５０８（東洋曹達工業■社製、
酢酸型）カラム（２，２ｘ２８ｃｍ）に吸着させた。１
０ ｍＭ酢９ （０，５ｋ）から１Ｍ酢酸（０，５７）
への直線濃度勾配法により溶出させ、溶出液を７ラクシ
ヨンコレクターにて１０−ずつ分画し、プロピオキサチ
ンを含有する画分を得た。この画分を真空凍結乾燥して
粗粉末３００ηが得られた。粗粉末を０．１％）リフル
オロ酢酸を含むアセトニトリル−水（１５：８５ ）の
混液０．５−に溶解させ、逆相シリカゲルカラム（東洋
曹達工業■社製、 ＴＳＫ −ｏＥＬ ０ＤＳ−１２
ＯＡ、０．７８ｘ３０ｃｒＩＬ）に付し同じ混液で２．
０ｄ／分の流速で溶出すると、ゾロビオキサテンＡは２
０分前後、ゾロビオキサテンＢは４８分前後に溶出され
た。両物質を減圧濃縮し、少量の水に溶解させ、真空凍
結乾燥すると、グロピオキサチンＡが１４η、プロピオ
キサチンＢが４■それぞれ純粋の白色粉末として得られ
た。
た。次にこの粗粉末を１０ｍＭ酢酸５０−に溶解し、Ｄ
ＥＡＥ−）コノ９−ル６５０８（東洋曹達工業■社製、
酢酸型）カラム（２，２ｘ２８ｃｍ）に吸着させた。１
０ ｍＭ酢９ （０，５ｋ）から１Ｍ酢酸（０，５７）
への直線濃度勾配法により溶出させ、溶出液を７ラクシ
ヨンコレクターにて１０−ずつ分画し、プロピオキサチ
ンを含有する画分を得た。この画分を真空凍結乾燥して
粗粉末３００ηが得られた。粗粉末を０．１％）リフル
オロ酢酸を含むアセトニトリル−水（１５：８５ ）の
混液０．５−に溶解させ、逆相シリカゲルカラム（東洋
曹達工業■社製、 ＴＳＫ −ｏＥＬ ０ＤＳ−１２
ＯＡ、０．７８ｘ３０ｃｒＩＬ）に付し同じ混液で２．
０ｄ／分の流速で溶出すると、ゾロビオキサテンＡは２
０分前後、ゾロビオキサテンＢは４８分前後に溶出され
た。両物質を減圧濃縮し、少量の水に溶解させ、真空凍
結乾燥すると、グロピオキサチンＡが１４η、プロピオ
キサチンＢが４■それぞれ純粋の白色粉末として得られ
た。
参考例１． エンケファリナーゼＢ醇素溶液の調製法
ラット脳１００２を５０ｍＭ）リス−塩酸緩衝液（ｐ）
１７．７ ） Ｉ Ａでホモジネート後、５０，０００
）１で１５分間遠心を行ない沈澱が得られた。これを同
様にして３回洗滌しトリトンＸ−１００を１チ含む同じ
緩衝液５００ｒｎｔに懸濁し、３７℃で１時間保温した
。これを１００，０００Ｘｆで１時間の遠心を行なうと
上清にエンケファリナーゼＢ粗酵素液が得られた。この
粗酵素液を５ ｍＭ リン酸緩衝液（ｐＨ７，０）に透
析し、あらかじめ１％トリトンＸ−１００を含む同じ緩
衝液（Ａｍ）で平衡化Ｌ ７’ＣＤＥＡＥ−セファセル
（ファルマシア社製）カラム（３，０Ｘ３０ｃｉ）に吸
着させた。カラムをＡ液で洗滌し、２．５７のＡ液と２
．５！の０．４Ｍ食塩を含むＡ液を用いて直線濃度勾配
法により溶出し、エンケファリナーゼ３画分が得られた
。
１７．７ ） Ｉ Ａでホモジネート後、５０，０００
）１で１５分間遠心を行ない沈澱が得られた。これを同
様にして３回洗滌しトリトンＸ−１００を１チ含む同じ
緩衝液５００ｒｎｔに懸濁し、３７℃で１時間保温した
。これを１００，０００Ｘｆで１時間の遠心を行なうと
上清にエンケファリナーゼＢ粗酵素液が得られた。この
粗酵素液を５ ｍＭ リン酸緩衝液（ｐＨ７，０）に透
析し、あらかじめ１％トリトンＸ−１００を含む同じ緩
衝液（Ａｍ）で平衡化Ｌ ７’ＣＤＥＡＥ−セファセル
（ファルマシア社製）カラム（３，０Ｘ３０ｃｉ）に吸
着させた。カラムをＡ液で洗滌し、２．５７のＡ液と２
．５！の０．４Ｍ食塩を含むＡ液を用いて直線濃度勾配
法により溶出し、エンケファリナーゼ３画分が得られた
。
エンケファリナーゼ３画分をＡ液に透析し、あらかじめ
Ａ液で平衡化したＤＥＡＥ −）ヨ／４−ル６７０８（
東洋曹達工業（へ）社製）カラム（１，６×２７ｃＴｒ
Ｌ）に吸着させ、５００ｒｄのＡ液と５００−の０．４
Ｍ食塩を含むＡ液を用いて直線濃度勾配法により溶出
してエンケファリナーゼ３画分が得られた。エンケファ
リナーゼ３画分を０．０２５Ｍイミダゾール−塩酸緩衝
液（ｐＨ７，４）に透析し、あらかじめ同じ緩衝液で平
衡化したポリバッファー交換体ＰＢＥ ９４ （ファル
マシア社製）カラム（１，０Ｘ２６Ｃ！ＩＬ）に吸着さ
せた。このカラムにポリバッファー７４（ファルマシア
社製）を純水で９倍に希釈し、塩酸で−４，０に調整し
た溶液を流してエンケファリナーゼ３画分が得られた。
Ａ液で平衡化したＤＥＡＥ −）ヨ／４−ル６７０８（
東洋曹達工業（へ）社製）カラム（１，６×２７ｃＴｒ
Ｌ）に吸着させ、５００ｒｄのＡ液と５００−の０．４
Ｍ食塩を含むＡ液を用いて直線濃度勾配法により溶出
してエンケファリナーゼ３画分が得られた。エンケファ
リナーゼ３画分を０．０２５Ｍイミダゾール−塩酸緩衝
液（ｐＨ７，４）に透析し、あらかじめ同じ緩衝液で平
衡化したポリバッファー交換体ＰＢＥ ９４ （ファル
マシア社製）カラム（１，０Ｘ２６Ｃ！ＩＬ）に吸着さ
せた。このカラムにポリバッファー７４（ファルマシア
社製）を純水で９倍に希釈し、塩酸で−４，０に調整し
た溶液を流してエンケファリナーゼ３画分が得られた。
エンケファリナーゼＢ画分ｔコロジオンパンク（エムニ
ス社製）にて約１．０艷に濃縮し、あらかじめ０．１Ｍ
食塩を含んだ５０ＩｎＭリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）で
平衡化したトヨノ９−ルＨＷ−５５（東洋曹達工業■社
製）カラム（１，６ｘ７９ｃＩｒＬ）に付し、同じ緩衝
液を流してゲル口過を行ないエンケファリナーゼ３画分
が得られた。このようにして得られたエンケファリナー
ゼＢの酵素学的性質を以下に示す。
ス社製）にて約１．０艷に濃縮し、あらかじめ０．１Ｍ
食塩を含んだ５０ＩｎＭリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）で
平衡化したトヨノ９−ルＨＷ−５５（東洋曹達工業■社
製）カラム（１，６ｘ７９ｃＩｒＬ）に付し、同じ緩衝
液を流してゲル口過を行ないエンケファリナーゼ３画分
が得られた。このようにして得られたエンケファリナー
ゼＢの酵素学的性質を以下に示す。
エンケファリナーゼＢの酵素学的性質
分子量：約ｓｏ、ｏｏ。
至適ｐｉ（： ６．５
等を点＝４．２
参考例２． グロピオキサチン人およびＢのエンケファ
リナーゼＢ阻害作用 ０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６，５） ４０
μｔ１プロピオキサチンＡ液１０μｔおよびエンケファ
リナーゼＢ溶液４０μｔの混合液を３７℃で５分間保温
し、次いで１ｍＭまたは１０ｍＭメチオニン−エンケフ
ァリン溶液１０μｔを加え、３７℃で２０分間攪拌した
。次いで２Ｎ塩酸１０μｔを加えることにより反応を停
止させ、反応液２０μｔについてチロシルグリシン（Ｔ
ｙｒ−Ｇｌｙ）の生成１（Ｖｉ）を高速液体クロマトグ
ラフィーにより測定した。同時に、プロピオキサチンを
含まない、緩衝液のみを用いた１検のチロシルグリシン
の生成量（Ｖ）を測定し、エンケファリナーゼＢ阻害剤
定数（Ｋ１）をＤｉｘｏｎの方法（Ｄｉｘｏｎ Ｍ、。
リナーゼＢ阻害作用 ０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６，５） ４０
μｔ１プロピオキサチンＡ液１０μｔおよびエンケファ
リナーゼＢ溶液４０μｔの混合液を３７℃で５分間保温
し、次いで１ｍＭまたは１０ｍＭメチオニン−エンケフ
ァリン溶液１０μｔを加え、３７℃で２０分間攪拌した
。次いで２Ｎ塩酸１０μｔを加えることにより反応を停
止させ、反応液２０μｔについてチロシルグリシン（Ｔ
ｙｒ−Ｇｌｙ）の生成１（Ｖｉ）を高速液体クロマトグ
ラフィーにより測定した。同時に、プロピオキサチンを
含まない、緩衝液のみを用いた１検のチロシルグリシン
の生成量（Ｖ）を測定し、エンケファリナーゼＢ阻害剤
定数（Ｋ１）をＤｉｘｏｎの方法（Ｄｉｘｏｎ Ｍ、。
Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｊ、、５５，１７０（１９５３））に
より算出した。プロピオキサチンＡのに１値は１．３Ｘ
１０ Ｍであった。なお、高速液体クロマトグラフィ
ーの条件は、溶出液として１０ｍＭリン酸カリウム溶液
−メタノール（１０００：５０）、カラムは）、恰Ｓパ
ックＣｌ８（エムニス機器■社製、０．＋６Ｘ１５ｃｒ
ＩＬ）を用い、流速は１．０ 、ｒｔ／分でちる。螢光
スペクトロモニター（■島津製作所製、ＦｔＦ５３０）
で励起波長２７５ｎｍ、螢光波長３０４ｎｍを用いて測
定するとチロシル グリシンは試料注入後約６分で溶出
された。プロピオキサチンＢについても同様にして測定
した結果、そのＫｉ値は１．１×１０−７Ｍでちった。
より算出した。プロピオキサチンＡのに１値は１．３Ｘ
１０ Ｍであった。なお、高速液体クロマトグラフィ
ーの条件は、溶出液として１０ｍＭリン酸カリウム溶液
−メタノール（１０００：５０）、カラムは）、恰Ｓパ
ックＣｌ８（エムニス機器■社製、０．＋６Ｘ１５ｃｒ
ＩＬ）を用い、流速は１．０ 、ｒｔ／分でちる。螢光
スペクトロモニター（■島津製作所製、ＦｔＦ５３０）
で励起波長２７５ｎｍ、螢光波長３０４ｎｍを用いて測
定するとチロシル グリシンは試料注入後約６分で溶出
された。プロピオキサチンＢについても同様にして測定
した結果、そのＫｉ値は１．１×１０−７Ｍでちった。
参考例３． プロピオキサチンの鎮痛作用効果プロピオ
キサチンとエンケファリンをラット脳室内に同時投与し
Ｒａｎｄａｌｌ −５ｅｌｉｔｔｏ法により鎮痛作用を
調べた結果、エンケファリン単独投与時よりも強力な鎮
痛持続効果が認められた。
キサチンとエンケファリンをラット脳室内に同時投与し
Ｒａｎｄａｌｌ −５ｅｌｉｔｔｏ法により鎮痛作用を
調べた結果、エンケファリン単独投与時よりも強力な鎮
痛持続効果が認められた。
第１図は、グロピオキサチンＡのＫＢｒ錠により測定し
た赤外線吸収スペクトルを示し、第２図は、グロピオキ
サチンＡの重水中４００ＭＨｚで測定した核磁気共鳴ス
ペクトルを示し、第３図は、グロピオキサチンＢのＫＢ
ｒ錠により測定した赤外線吸収スペクトルを示し、第４
図は、グロピオキサチンＢの重水中４００ＭＨｚで測定
した核磁気共鳴スペクトルを示す。
た赤外線吸収スペクトルを示し、第２図は、グロピオキ
サチンＡの重水中４００ＭＨｚで測定した核磁気共鳴ス
ペクトルを示し、第３図は、グロピオキサチンＢのＫＢ
ｒ錠により測定した赤外線吸収スペクトルを示し、第４
図は、グロピオキサチンＢの重水中４００ＭＨｚで測定
した核磁気共鳴スペクトルを示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、プロピオキサチンＡ（ＰｒｏｐｉｏｘａｔｉｎＡ）
およびその薬理上許容しうる塩。ここにプロピオキサチ
ンＡは下記の特性を有する。 １）物質の性状：白色粉末の酸性物質 ２）元素分析値（％） Ｃ、５４．６７：Ｈ、７．５１；Ｎ、１１．６７３）分
子量 ３７１（質量分析法により測定） ４）分子式：Ｃ＿１＿７Ｈ＿２＿９Ｎ＿３Ｏ＿６５）比
旋光度：〔α〕＾２＾５＿Ｄ−７０．９°（Ｃ＝１．０
、水）６）赤外線吸収スペクトル：ν＾Ｋ＾Ｂ＾ｒ＿ｍ
＿ａ＿ｘｃｍ＾−＾１ＫＢｒ錠で測定した赤外線吸収ス
ペクトルは第１図に示す通りである。 ７）核磁気共鳴スペクトル：δ：ｐｐｍ 重水中、外部基準にテトラメチルシランを 使用して４００ＭＨｚで測定した核磁気共鳴スペクトル
は第２図に示す通りである。 ８）紫外線吸収スペクトル：λ＿ｍ＿ａ＿ｘｎｍ（Ｅ＾
１＾％＿１＿ｃ＿ｍ）水溶液中で測定した紫外線吸収ス
ペクトル は末端吸収以外は特性吸収を示さない。 ９）溶解性： 水、メタノール、ジメチルスルホキシドに 可溶、エタノール、アセトンに僅かに可溶、酢酸エチル
、クロロホルム、ベンゼン、エーテルに不溶。 １０）酸加水分解： バリンおよびプロリンを１分子ずつ含む （１２Ｎ塩酸−氷酢酸（１：１）を用いて、１１０℃、
２４時間で加水分解を行い、アミノ酸自動分析計により
検出）。 １１）呈色反応 ニンヒドリン反応に陰性。加水分解後はニ ンヒドリン反応に陽性。 １２）高速液体クロマトグラフイーにおける溶出時間 ＴＳＫ−ＧＥＬ、ＯＤＳ１２０−Ａカラム（東洋曹達工
業（株）社製、０．４６×２５ｃｍ）を用いた高速液体
クロマトグラフイーにおいて、２０％アセトニトリル−
０．１％トリフルオロ酢酸で１．０ｍｌ／分の流速で溶
出しＵＶ２３０ｎｍで検出すると約６．５０分で溶出さ
れる。 ２、プロピオキサチンＢ（ＰｒｏｐｉｏｘａｔｉｎＢ）
およびその薬理上許容しうる塩。ここにプロピオキサチ
ンＢは下記の特性を有する。 １）物質の性状：白色粉末の酸性物質 ２）元素分析値（％） Ｃ、５０．５９；Ｈ、７．１９；Ｎ、９．５９３）分子
量 ３８５（質量分析法により測定） ４）分子式：Ｃ＿１＿８Ｈ＿３＿１Ｎ＿３Ｏ＿６５）比
旋光度：〔α〕＾２＾５＿Ｄ−５１．３°（Ｃ＝１．０
、水）６）赤外線吸収スペクトル：ν＾Ｋ＾Ｂ＾ｒ＿ｍ
＿ａ＿ｘｃｍ＾−＾１ＫＢｒ錠で測定した赤外線吸収ス
ペクトルは第３図に示す通りである。 ７）核磁気共鳴スペクトル：δ：ｐｐｍ 重水中、外部基準にテトラメチルシランを 使用して４００ＭＨｚで測定した核磁気共鳴スペクトル
は第４図に示す通りである。 ８）紫外線吸収スペクトル：λ＿ｍ＿ａ＿ｘｎｍ（Ｅ＾
１＾％＿１＿ｃ＿ｍ）水溶液中で測定した紫外線吸収ス
ペクトル は末端吸収以外は特性吸収を示さない。 ９）溶解性： 水、メタノール、ジメチルスルホキシドに 可溶、エタノール、アセトンに僅かに可溶、酢酸エチル
、クロロホルム、ベンゼン、エーテルに不溶。 １０）酸加水分解： バリンおよびプロリンを１分子ずつ含む （１２Ｎ塩酸−氷酢酸（１：１）を用いて、１１０℃、
２４時間で加水分解を行い、アミノ酸自動分析計により
検出）。 １１）呈色反応 ニンヒドリン反応に陰性。加水分解後はニ ンヒドリン反応に陽性。 １２）高速液体クロマトグラフイーにおける溶出時間 ＴＳＫ−ＧＥＬ、ＯＤＳ１２０−Ａカラム（東洋曹達工
業（株）社製、０．４６×２５ｃｍ）を用いた高速液体
クロマトグラフイーにおいて、２０％アセトニトリル−
０．１％トリフルオロ酢酸で１．０ｍｌ／分の流速で溶
出しＵＶ２３０ｎｍで検出すると約１２．１０分で溶出
される。 ３、キタサトスポリア属に属するプロピオキサチン（Ｐ
ｒｏｐｉｏｘａｔｉｎ）ＡおよびＢ生産菌を培養して、
その培養物よりプロピオキサチンＡおよびＢを採取する
ことを特徴とするプロピオキサチンＡおよびＢの製法。 ここにプロピオキサチンＡおよびＢは下記の特性を有す
る。 プロピオキサチンＡの特性 １）物質の性状：白色粉末の酸性物質 ２）元素分析値（％） Ｃ、５４．６７；Ｈ、７．５１；Ｎ、１１．６７３）分
子量 ３７１（質量分析法により測定） ４）分子式：Ｃ＿１＿７Ｈ＿２＿９Ｎ＿３Ｏ＿６５）比
旋光度：〔α〕＾２＾５＿Ｄ−７０．９°（Ｃ＝１．０
、水）６）赤外線吸収スペクトル、ν＾Ｋ＾Ｂ＾ｒ＿ｍ
＿ａ＿ｘｃｍ＾−＾１ＫＢｒ錠で測定した赤外線吸収ス
ペクトルは第１図に示す通りである。 ７）核磁気共鳴スペクトル：δ：ｐｐｍ 重水中、外部基準にテトラメチルシランを 使用して４００ＭＨｚで測定した核磁気共鳴スペクトル
は第２図に示す通りである。 ８）紫外線吸収スペクトル：λ＿ｍ＿ａ＿ｘｎｍ（Ｅ＾
１＾％＿１＿ｃ＿ｍ）水溶液中で測定した紫外線吸収ス
ペクトル は末端吸収以外は特性吸収を示さない。 ９）溶解性： 水、メタノール、ジメチルスルホキシドに 可溶、エタノール、アセトンに僅かに可溶、酢酸エチル
、クロロホルム、ベンゼン、エーテルに不溶。 １０）酸加水分解： バリンおよびプロリンを１分子ずつ含む （１２Ｎ塩酸−氷酢酸（１：１）を用いて、１１０℃、
２４時間で加水分解を行い、アミノ酸自動分析計により
検出）。 １１）呈色反応 ニンヒドリン反応に陰性。加水分解後はニ ンヒドリン反応に陽性。 １２）高速液体クロマトグラフイーにおける溶出時間 ＴＳＫ−ＧＥＬ、ＯＤＳ１２０−Ａカラム（東洋曹達工
業（株）社製、０．４６×２５ｃｍ）を用いた高速液体
クロマトグラフイーにおいて、２０％アセトニトリル−
０．１％トリフルオロ酢酸で１．０ｍｌ／分の流速で溶
出しＵＶ２３０ｎｍで検出すると約６．５０分で溶出さ
れる。 プロピオキサチンＢの特性 １）物質の性状：白色粉末の酸性物質 ２）元素分析値（％） Ｃ、５０．５９；Ｈ、７．１９；Ｎ、９．５９３）分子
量 ３８５（質量分析法により測定） ４）分子式：Ｃ＿１＿８Ｈ＿３＿１Ｎ＿３Ｏ＿６５）比
旋光度：〔α〕＾２＾５＿Ｄ−５１．３°（Ｃ＝１．０
、水）６）赤外線吸収スペクトル：ν＾Ｋ＾Ｂ＾ｒ＿ｍ
＿ａ＿ｘｃｍ＾−＾１ＫＢｒ錠で測定した赤外線吸収ス
ペクトルは第３図に示す通りである。 ７）核磁気共鳴スペクトル：δ：ｐｐｍ 重水中、外部基準にテトラメチルシランを 使用して４００ＭＨｚで測定した核磁気共鳴スペクトル
は第４図に示す通りである。 ８）紫外線吸収スペクトル：λ＿ｍ＿ａ＿ｘｎｍ（Ｅ＾
１＾％＿１＿ｃ＿ｍ）水溶液中で測定した紫外線吸収ス
ペクトル は末端吸収以外は特性吸収を示さない。 ９）溶解性： 水、メタノール、ジメチルスルホキシドに 可溶、エタノール、アセトンに僅かに可溶、酢酸エチル
、クロロホルム、ベンゼン、エーテルに不溶。 １０）酸加水分解： バリンおよびプロリンを１分子ずつ含む （１２Ｎ塩酸−氷酢酸（１：１）を用いて、１１０℃、
２４時間で加水分解を行い、アミノ酸自動分析計により
検出）。 １１）呈色反応 ニンヒドリン反応に陰性。加水分解後はニ ンヒドリン反応に陽性。 １２）高速液体クロマトグラフイーにおける溶出時間 ＴＳＫ−ＧＥＬ、ＯＤＳ１２０−Ａカラム（東洋曹達工
業（株）社製、０．４６×２５ｃｍ）を用いた高速液体
クロマトグラフイーにおいて、２０％アセトニトリル−
０．１％トリフルオロ酢酸で１．０ｍｌ／分の流速で溶
出しＵＶ２３０ｎｍで検出すると約１２．１０分で溶出
される。 ４、キタサトスポリア属に属するプロピオキサチンＡお
よびＢ生産菌がキタサトスポリア・エスピー・ＳＡＮＫ
６０６８４株（微工研菌寄第７５８１号）である特許請
求の範囲第３項記載の方法。
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