JPH03191797A - Ｄ，ｌ―アミン類の酵素的光学分割方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、有機溶媒を主体とする溶媒中で、固定化酵素
を用いり、　　Ｌ−アミン類の一方の光学活性体のみを
高選択的に基質エステル体と反応させることにより光学
活性アミド体と他方の光学活性アミン類を得ることによ
りＤ，Ｌ−アミン類の酵素的光学分割方法に関する。

（従来の技術） 光学活性有機化合物の合成は生理活性化合物の開発の上
で非常に重要であり、例えばシェリー・マーチ（Ｊｅｒ
ｒｙ　Ｍａｒｃｈ）著、アドバンスト　オーガニ７り　
ケミストリー（＾ｄｖａｎｃｅｄ　　ＯｒｇａｎｉｃＣ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ）　　（マグロウ−ヒル；１９７７年
）第２版、１０６頁に記載の光学活性体合成法（Ａｓｙ
＋＋ｎｅｔｒｉｃ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ）や、同上１０
８頁に記載の光学分割法が知られている。

しかしながら従来の方法は、ラセミ体を分離したり、一
方の光学活性体を生成させるのに光学活性基質を同モル
必要とするとか、光学活性体の光学収率が非常に低いと
かの欠点を有している。しかもカルボニル化合物、カル
ボン酸類、オレフィン類への適用例は数多く知られてい
るが、光学活性ア１ン類の合成や、光学活性アミン類の
分離についてはあまり知られていないのが現状である。

一方、従来から進められてきた化学法による光学活性体
の合成とともに、近年酵素反応を用いる光学活性体の合
成が活発化している。その化学法に対する長所としては
、高選択性すなわち光学収率が高く、反応条件が穏和で
あり、副反応が起り難い、触媒量の酵素が存在すればよ
い等が挙げられるが、水中での反応では加水分解反応や
、酸化還元反応等しか適用出来ないため、アミン類の光
学合成という点では難点であった。しかしながらこのよ
うな酵素法の限界を克服する新規な方法として有機溶媒
中での酵素反応が検討され、ペプチド合成が可能となっ
てきた０例えば＾１ｅｘａｎｄｅｒ町Ｋ１１ｂａｎｏｒ
等はプロテアーゼ又はリパーゼの粉末を有機溶媒中に加
え、Ｌ−リジンエステル体とフェニルアラニンのエステ
ル体との反応により水系での酵素反応では全く生成しな
かったε−ペプチドを得ることに成功している＊　（Ｔ
ｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔｅｒｓ、　１９８８．５
４８７）　。

更にこれらの知見を発展させて、有機溶媒中にサブチリ
シン又はリパーゼの粉末を加え、Ｄ、　　Ｌアミン類と
基質エステル体とを反応させることにより光学活性アミ
ド体を得ることに成功している（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ
　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　５ｏｃｉｅｔ
ｙ。

１９８９．１１１．３０９４）。

しかしながら、このような粉末法では、反応終了後の目
的物の単離が困難であるとか、酵素が溶解していないた
め触媒としての酵素が有効に利用されないとか、反応に
伴って生成するアルコール類の除去が困難であったり、
系内に存在する水分量が均一でないため逆反応が同時に
併発して目的物の生成収率が低下する等、多くの問題が
ある。

特に、有機溶媒中の酵素反応に於いては反応系の水分量
の調節が重要である。水分量が多すぎると、逆反応や転
位反応を促進したりする。一方、酵素活性を保つ上では
云わゆるエソセンシャルウオーターと呼ばれる水分量が
必ず必要であると考えられている。すなわち活性な状態
では、酵素およびその近傍にはある程度の量の水が存在
しており、そのような親水的環境にある酵素に対して水
に溶けにくい基質分子を如何に効率よく供給するかが重
要な問題である。

（発明が解決しようとする課題） 有機溶媒中で酵素粉末を用いる酵素法によるり。

Ｌ−アミン類の光学分割法は従来行われている化学法に
較べて優れた方法であるが、上記の如く、生成物の単離
操作がやっかいである、酵素の利用効率が低い、逆反応
を有効に防止できないため化学収率および光学収率が低
下する、基質の酵素近傍への供給速度が小さいため反応
収率／時間が低い等の問題を有している０本発明の目的
は、このような問題を解決する新しい手段を提供するこ
とにある。

（課題を解決するための手段） 本発明のこれらの目的は、Ｄ、Ｌ−アミン類と基質エス
テル体とを固定化酵素の存在下で反応させることにより
達成された。

本発明で用いられるＤ，Ｌ−アミン類及び基質エステル
体はそれぞれ下記の一般式（Ｉ）および０口で表わされ
る。

Ｈｔ　　Ｎ　　　ＣＨＲ”　　　　　Ｒ”　　　ＣＯＲ
’１ （１） （ＩＩ） 一般式（Ｉ）で表わされるアミン類のＲ１としては、炭
素数１乃至１０の置換又は未置換のアルキル基が好まし
く、環形成していてもよい、それらの置換基としてはア
ルキル基、フェニル基、ハロゲン原子又はアルコキシ基
が好ましい。Ｒ１として特に好ましいものは炭素数１〜
４の直鎖又は分岐アルキル基である。一般式（１）で表
わされるアミン類のＲｔとしては、炭素数１乃至１５の
アルキル基又はアリール基もしくはカルバモイル基が好
ましく、その置換基としてはアルキル基、アリール基、
ハロゲン原子、又はアルコキシ基が好ましい。Ｒ２とし
て特に好ましいものは、炭素数２乃至８の直鎖状又は分
岐状アルキル基、炭素数６乃至１０の了り−ル基、炭素
数８〜１２のアリール基又はヘテロ環置換アルキル基も
しくは炭素数１〜５のカルバモイル基を表わす。

一般式ＣＩ＋）で表わされる基質エステル体のＲ３とし
ては、炭素数１乃至１０のアルキル基又はアリール基が
好ましく、置換基としてはアルキル基、ハロゲン原子、
アリール基が好ましい。Ｒ３として特に好ましくは、炭
素数１乃至５のアルキル基、炭素数６乃至１０のアリー
ル基を表わす。Ｒ４としては、炭素数１乃至１０の置換
又は未置換のアルキル基、および炭素数６乃至１６の置
換又は未置換の了り−ル基が好ましく、特に好ましくは
炭素数１乃至５の未置換又はクロロ原子あるいはフルオ
ロ原子が置換したアルキル基を表わす。

一般式（１）で表わされるＤ，Ｌ−アミン類は、その多
くのものが市販されており容易に入手できるが、その前
駆体である下記一般式（ＩＩ）で示されるケトン体より
イミン体（ＩＶ）を得た後、接触還元又はＬ　ｉ　Ａ　
Ｉ　Ｈａ還元によって容易に合成される。

ＣＩＩＩ）　　　　　　　、　　（ＩＶ）　　　　　　
　　　　（１）あるいは対応するハロゲン体〔ｖ〕とフ
タルイミドアニオンとのＳＮ２反応によって置換体（Ｖ
ｌ）を得た後、ヒドラジン還元することによっても容易
に合成される（Ｇａｂｒｉｅｌ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓと
して有名な反応である）。

一般式（ＩＩ）で表わされるエステル体は、市販されて
おり容易に入手できるが、カルボン酸類とアルコール類
との縮合反応によって容易に合成することもできる。

以下に一般式（Ｉ）および一般式（Ｉ［）で表わされる
化合物の具体例を示すが、これらに限定されるものでは
ない。

（１） （１） ＨｚＮ　　ＣＯＣＪｓ ＣＨ３ ＣＩ。

ＣＩ）−（３） ＨＪ　　ＣＨＨＣＨｚ）４ｃＨｓ ＣＨｌ ｃ、ｎ。

Ｈｓ （１）−（５） ＨＪ　　ＣＨＣ＋ｏＨｔ＋ Ｈｉ ＣＨ３ Ｈ３ ＣＨ２ Ｏ Ｆ３ Ｈ１Ｆ （ＩＩ） （４） Ｃ４Ｈ９Ｃ０ＣｚＨｎＣ１ １ し２ ＨＩ Ｈｓ （ＩＩ） （１） ＣＨ２−Ｃ−ＯＣＲｓ １ （ＩＩ） （２） ＣｓＨｓＣＯＣＨ３ ＩＩ （ＩＩ） （３） Ｃ１ＨｓＣ−ＯＣＨｘＣＦｓ １ （ＩＩ） （１３） Ｃ３ＨｔＣ−ＯＣＨＩＣＨ茸ＣＦ２ １ （ｎ） （１４） ＣｓＨ＋＋Ｃ−０ＣｔＨａＣｊ！ １ ［１１） （１５） ＣｓＨｔＣ−ＯＣＨｔＣ１１ｔＯＨ １ （Ｉｆ） （１６） ＣＨｓＣＯＣＪ＊ １ ＣＩ。

本発明で用いる固定化酵素に供される酵素は、プロテア
ーゼ又はリパーゼである。プロテアーゼの例としてはα
−キモトリプシン、サブチライシン、パパイン、プロメ
ライン、プロリシン、サーモライシンなどが挙げられ、
特にサブチライシンが最も好ましい。リパーゼの例とし
ては、リポプロティンリパーゼが最も好ましい。

本発明の方法ではこれらの酵素の固定化されたものを使
用する。固定化のための粉末又は成型粒子としては用い
る有機溶媒に耐性があれば特に限定されるものではな（
、天然もしくは合成重合体および無機物を用いる事がで
きる。以下にそれらの例を示す。天然の材料としてはセ
ルロースの粉末又は成型粒子（例えば商品名セルロファ
イン（Ｃｅｌｌｕｌｏｆｉｎｅ））およびその誘導体で
あるカルボキシメチルセルロース、スルホプロピルセル
ロース、硫酸化セルロース、ジエチルアミノエチルセル
ロース、イミノジ酢酸誘導体化セルロース等の粉末又は
成型粒子を挙げる事ができ、又、キチンおよびキトサン
の粉末又は成型粒子（例えば商品名キトバール、キトビ
ーズ、マリンカイト）、グルコマンナンの粉末又は成型
粒子を挙げることができる０合成重合体としてはポリビ
ニルアルコール、ポリ　（２−ヒドロキシエチル）メタ
クリレート、ポリスチレン、ポリメチルメタクリレート
、ポリアクリルアミド他のビニル重合体およびそれらの
共重合体が挙げられる〔商品としては例えばアンバーラ
イト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ）　％アンバーリスト（Ａｍ
ｂｅｒｌｙｓｔ）、ダウエックス（Ｄｏｗｅｘ）等の樹
脂等セファクリル（５ｅｐｈａｃｒｙｌ　）　　　）コ
パール（Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ）　、スフエロン（Ｓｐｈ
ｅｒｏｎ）等の液体クロマトグラフィー用担体を挙げる
ことができる）。

無機材料ではガラス、多孔性セラミック、金属酸化物な
どが挙げられる。

酵素をこれらの担体に固定化する方法は通常の方法、例
えば物理的吸着法、包接法、架橋法、共有結合法を用い
ることができる。これらの方法については、例えばＭｅ
ｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ　ｖｏｌ。

３４”、”同、ｖｏｌ、４４”、　　“同、　ｖｏｌ、
１３５　”（以上＾ｃａｄｅｓ＋ｉｃ　Ｐｒｅｓｓ）、
　”Ｉｓｓ＋ｏｂｉｌｉｚｅｄ　Ｅｎｚｙｍｅｓａｎｄ
　Ｃｅ１ｌｓ”　（Ａｄａａ＋　Ｈｉｌｇｅｒ、　　１
９８７　）および“固定化生体触媒”　（千畑一部編　
講談社、１９８６）などに詳しく述べられている。しか
しその固定化法はこれらに限定されるものではな（、例
えば多孔性担体に酵素をただ単に保持させたようなもの
も使用することができる（なお、以下において、酵素を
上記のような粉末、成型粒子等の粒子に固定化したもの
を酵素固定担体とよぶ）。

本発明の方法においては酵素を固定化後、凍結乾燥によ
り乾燥するか、又は使用する有機溶媒に徐々に置き換え
た後に使用する事ができる。

本発明で用いる固定化酵素には膜に固定化された酵素も
包含される。酵素固定膜の膜の材質は、用いる有機溶媒
系に不溶のものであれば何であっても良く特に限定され
るものではないが、例えばセルロース、キトサン、グル
コマンナン、ポリビニルアルコール、エチレン−ビニル
アルコール共重合体、ポリエチレン、ポリプロピレン、
ポリテトラフルオロエチレン、ポリイミド、セラミック
などは広範囲の有機溶媒系に耐性があるものが好ましく
、その中でもセルロースを主成分とする膜は蛋白質の非
特異吸着が少ないため特に好ましい。

膜の形状としては平膜、中空系、管状のいずれでも良く
、膜厚は膜強度の点から１０１１ｍ以上が好ましい、孔
径は広範囲のものが使用できるが、特に酵素の利用効率
の点で微小な孔を持つ膜が好ましく、０．１μ〜２０μ
の平均孔径を持つ濾過膜（ミクロフィルター、濾紙など
）や排除限界分子量が１０００〜１，０００，０００で
ある限界枦過膜が特に好ましい、膜の構造としては厚さ
方向で孔径の変化しないもの（例えば濾紙など）であっ
ても良いが、孔径の変化するいわゆる非対称膜が特に好
ましい。

酵素固定膜と有機溶媒との接触には常圧にてフローで行
う方法でもよいが、基質溶液の移動を速くすることによ
り酵素の反応効率を増大するため、圧力をかけて酵素固
定膜中を有機溶媒を通過させる方法がより好ましい。

前述の酵素を膜に固定化する方法については、多官能性
試薬を用いて酵素間を架橋する方法や、酵素を膜に共有
結合、静電相互作用、物理吸着等の方法で固定化するな
ど担体に固定する時とほぼ同様の操作により固定するこ
とができる。

本発明に於て使用できる有機溶媒には特に制限は無いが
例として次の様なものが挙げられる。水と混ざる溶媒と
してはメタノール、エタノール、エチレングリコール、
グリセロール、アセトン、ジオキサン、テトラヒドロフ
ラン、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ、Ｎ−ジメチ
ルアセトアミド、ジメチルスルホキシドなど、又、水と
混ざりにくい溶媒としてはｎ−プロピルアルコール、イ
ソプロピルアルコール、ｎ−ブチルアルコール、５ｅｃ
−ブチルアルコール、ｔ−ブチルアルコール、２−メチ
ル−２−ブタノール、ｎ−アミルアルコール、１ｓｏ−
アミルアルコール、ｔ−アミルアルコール、ｎ−ヘキサ
ノール、３−メチル３−ペンタノール、ｎ−ヘプタツー
ル、ｎ−オクタツール、ジエチルエーテル、ジイソプロ
ピルエーテル、酢酸エチル、酢酸ｎ−ブチル、塩化メチ
レン、クロロホルム、四塩化−＊　素、ｎ−ヘキサン、
ｎ−へブタン、ｎ−オクタン、イソオクタン、シクロヘ
キサン、ベンゼン、トルエン、キシレンなどがある。こ
れらの有機溶媒は使用する酵素との組合せによって選択
されるが、水と混ざる溶媒として好ましくは、Ｎ、Ｎ−
ジメチルホルムアミド、Ｎ、Ｎ−ジメチルアセトアミド
、ジメチルスルホキシド、水と混ざりにくい溶媒として
は、ｔ−プチルアルコール、２−メチル−２−ブタノー
ル、１ｓｏ−アミルアルコール、ｔ−アミルアルコール
、３−メチル−３−ペンタノール、塩化メチレン、トル
エンが使用される。中でも特に好まシ＜ハ、Ｎ、Ｎ−ジ
メチルホルムアミド、ｉｓ。

−アミルアルコール、ｔ−アミルアルコール、３メチル
−３−ペンタノール、トルエンが使用される。

これらの溶媒には混合して使用する事もでき、１０％以
内の濃度で、かつ飽和溶解度以下の濃度の水を含有させ
ることもできる。

本発明の方法で使用する出発原料の濃度はできるだけ高
い方が反応速度が速く好ましい、これらは通常それぞれ
の溶媒に対する溶解度以内の濃度で使用され、−船釣に
は１ｍＭから２Ｍ、通常はｌＱｍＭから０．５Ｍ程度で
用いるのが好ましい。

本発明で使用する固定化酵素の使用量は特に限定されな
い、使用濃度が高い程反応時間が短時間で完了するが、
これは固定化酵素の比活性にも依存する。乾燥重量基準
で一般的には再出発物質１ミリ−ｏ１　当り酵素の重量
として１■から１０ｇ１好ましくは１０■から５ｇ程度
あれば良し１゜本発明の方法において、一般式（Ｉ）お
よび（ｎ）で表わされる化合物の使用量比は、モル比で
１０：１ないしは１：１０、好ましくは３：１ないしは
１：３で用いられる。

本発明の酵素固定担体を用いる方法では、例えば乾燥し
た固定化酵素を一般式（１）および（ＩＩ）で表わされ
る両原料を含む有ａ溶媒中に懸濁させ攪拌することによ
り行なうことができる０反応終了後濾過又はデカンテー
ション等の操作により生成物の溶液を容易にとり出すこ
とができる。またカラムに、反応に使用する有機溶媒に
懸濁した固定化酵素を充填し、この充填層に再出発原料
を含む有機溶媒を流すことによって行なうことができる
。このような方法を用いた場合反応が連続的に行なえる
点工業的に有利である。

反応温度は通常４℃から８０℃、好ましくは２０℃〜５
０℃である。

基質溶液と固定化酵素の接触時間（反応時間）は通常約
５分ないし約１００時間であるが、これは基質の種類お
よび濃度、固定化酵素の量および活性、温度等に大きく
左右されるものである。

本発明の酵素固定膜を利用する場合、基質溶液を酵素に
固定化した膜中に透過させる際の流速は、約０．０３〜
約２ｍ／分・ｄが好ましく、又反応温度は１０〜９０℃
が好ましい。

使用に適した装置としてはＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
　ａｎｄＢｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　ｖｏｌ、　Ｘ
Ｉ、　ｐ　３６６　　（１９６９）、Ｓ、　５ｏｕｒｉ
ｒａｊａｎ著ｒＲｅｖｅｒｓｅ　０ｓｌＩｌｏｓｉｓＪ
　、ＬｏｇｏｓＰｒｅｓｓ　Ｌｉｍ１ｔｅｄ　５ｃｉｅ
ｎｔｉｆｉｃ　Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ　（１９７０）
ｐＩ）２５〜２７、特公昭６２−５３１５１号などに記
載されている装置があげられる。

（発明の効果） 本発明の酵素固定担体を用いるＤ，Ｌ−アミン類の酵素
的光学分割方法では、後で酵素を除去するための抽出操
作や透析等が全く不要となり、反応後直ちに溶媒を留去
することにより生成物が得られる。又、水分量などの溶
媒組成を最適条件に保てるため、逆反応や副反応を抑え
ることができ、高い反応収率および光学収率を達成でき
る。

本発明の酵素固定膜を用いるＤ，Ｌ−アミン類の酵素的
光学分割方法でも酵素を除去するための操作が不要とな
る。又、微細孔内表面に酵素が均一に固定されているた
め、酵素の利用効率が非常に高く効率的である。逆反応
に影響を与える水分量や、反応で生じてくるアルコール
類が膜全体に均一に分布するため逆反応が有効に防止さ
れる。

更にある一定の圧力で微細孔内に基質を強制的に送り込
むことにより拡散に鯨らずに基質を供給することができ
、逆反応の進行による反応収率の低下の防止、溶解性の
劣る生成物や副生成物による酵素反応阻害の防止、水溶
性の低い基質の酵素近傍への接近促進効果による生成速
度の増大等の効果が得られる。

（実施例） 次に実施例をあげて本発明を更に詳細に説明するが本発
明はこれらに限定されるものではない。

実施例１ 鼠粟門定■体鬼盟遺 サブチライシン１００■を水冷した０、０２５ＭのＨＥ
ＰＥＳバッファー３＋ｄ　（ｐＨ７，５，５ＭのＮａＢ
ｒを含む）に溶解し、さらに０．５ｇの乾燥したアンバ
ーライトＸＡＤ−７樹脂（ローム・アンド・ハース社製
の多孔製ポリマービーズ）を加えた。４℃で１２時間ゆ
っくりと振とう後、５０％グルタルアルデヒド溶液を０
．２−添加し４℃で３時間振とうして酵素を固定させた
。その後０．１ＭのＨＥＰＥＳバッファーｐｉ（’７．
　５）で洗浄して未固定のサブチライシンを除去した。

又、同様の操作により、サーモライシンおよびリボプロ
ティンリパーゼを固定化した。

実施例２ 離精製し、〔α〕。を測定し、文献値データと比較し表
１に示した。

比較例１ 実施例２に記載したと同じ基質溶液（２０−）に酵素粉
末１００■を加え、フラスコ中２５℃〜４５℃で２４４
時間振うした。反応液をが過後、溶媒を減圧留去しシリ
カゲルクロマトグラフィーによりアミド体を分離した。

得られたデータを比較例として表１に示した。

酵素固定担体を内径１ｃ１１のガラスカラムに充填し、
ペリスタポンプを用いてＤ，Ｌ−アミン類（一般式ＣＩ
〕）４ｍＭおよび基質エステル体（一般式Ｃ１Ｃ１１）
）４の有ｌ１１溶剤溶液（２０ｄ）を２５℃〜４５℃で
流速約１−７分で２４時間透過・循環させた０反応液の
溶媒を減圧留去後、シリカゲルクロマトグラフィーによ
りアミド体を分表１より本発明の固定化担体を用い反応
溶液を透過・循環させる方法は、粉末酵素を溶媒中に添
加する公知の方法（比較例）に較べて同一の酵素、反応
基質での収率および光学収率が向上することが分かる。

また、本発明の実験例（−１〜嵐５）では反応液中に酵
素が全く存在しないため、後処理工程での酵素を除去す
る操作が不要であり、この工程での逆反応の進行による
反応収率の低下が全く起きなかった。

実施例３ ■皇皿定腋■作製 セルロース製ミクロフィルターＦＲ４０（富士写真フィ
ルム■製）１２００ｄにｐ−ニトロフェノキシクロロフ
ォルメート３４ｇとアセトニトリル１００−を加える。

水冷下で攪拌しながらピリジン３０−を滴下し、続いて
４０℃で３０分間振とうする。その後膜をメタノールお
よびアセトンで良く洗浄して活性化セルロース膜を得た
。

続いてサブチライシン１００ｗを１６ｍＭのＣａＣｊｇ
を含むｐＨ８，０の０．０５Ｍホウ酸バッファー５０−
に溶解する。炉通用の４７−φフィルターホルダーにセ
ットした活性化セルロース膜に上記溶液をペリスタポン
プを用いて４℃約３−７分の速度で透過させ、５時間循
環することによりサブチライシンを固定化した０次に残
った活性基を除くために０．１Ｍエタノールアミン水溶
液を４℃で２時間循環させ、最後にバッファー液を透過
させて十分膜を洗浄し、サブチライシン固定セルロース
製ミクロフィルターを得た。

全く同様の操作により、サーモライシン（１００■）お
よびリポプロティンリパーゼ（１００■）を固定したセ
ルロース製ミクロフィルターを作製した。

実施例４ 実施例３で作製したサーモライシン固定膜をフィルター
ホールシダ−（４７ｍ−φ）にセットし、ヘリスタポン
プを用い、Ｄ、Ｌ−アミン類〔１３４ｍＭおよび基質エ
ステル体（ＩＩ）４ｍＭの有機溶媒溶液（２０ｓｄ）を
２５℃〜４５℃で透過・循環させ、２４時間後に生成し
たアミド体を単離、定量した。流速は約３−７分であっ
た。実験結果を表２に示した。

比較例２ 比較例１に記載したと同様の方法によりアミド体を生成
・分離し、得られたデータを比較例として表２に示した
。

表２より、本発明の酵素固定膜を用いるり、　Ｌ−アミ
ン類の酵素的光学分割法は、粉末酵素を有機溶媒中に添
加する公知の方法（比較例）に較べて、アミド化の収率
および光学収率が向上することが分かる。また、反応後
に酵素を除去する操作が不要となるとともに、反応処理
中に酵素が混入することによる逆反応を防止できた。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）Ｄ，Ｌ−アミン類を有機溶媒を主体とする溶媒中
   、固定化酵素の存在下で基質エステル体と反応させるこ
   とにより光学活性アミド体を高選択的に得ることを特徴
   とするＤ，Ｌ−アミン類の酵素的光学分割方法。
2. （２）特許請求範囲第一項において、該固定化酵素が粉
   末又は成型粒子に固定化された酵素であることを特徴と
   するＤ，Ｌ−アミン類の酵素的光学分割方法。
3. （３）特許請求範囲第一項において、該固定化酵素が膜
   に固定化された酵素であることを特徴とするＤ，Ｌ−ア
   ミン類の酵素的光学分割方法。