JPH03210194A - 多層分析素子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、臨床化学に関し更に、詳しくは、水性流体、
例えば、生物学的流体試料中のアンモニア又はＡＴＰを
測定するための多層分析素子に関する。

〔従来の技術〕

アンモニアの測定は腎機能の診断において重要である。

又ＡＴＰの測定は、細菌の存在を知る上で重要である。

乾式多層分析素子の分野においては、アンモニアは、特
開昭５２−３４８８号記載の方法で測定されている。

この方法は、支持体上にｐＨ指示薬を含む第１層、分析
障害物質は通過させず、測定するアンモニアのみ通過さ
せる障壁層、及び、流体試料中のアンモニウム塩から、
アンモニアを生成するに必要なｐＨに緩衝した緩衝剤層
を順次積層し、アンモニウム塩を含む流体試料を展開層
から供給すると、緩衝剤層で、アンモニアに変化し、ア
ンモニアのみ障壁層を通過し、ｐＨ指示薬層のｐＨ指示
薬を変色し、その反射濃度を測定することで、アンモニ
ア濃度を知るというものである。

又、ＡＴＰの測定は、溶液反応（ウェット・ケミストリ
イ）の分野ではグルコースの存在下、試料中のＡＴＰに
ヘキソキナーゼ、グルコース−６−燐酸脱水素酵素、Ｎ
ＡＤ又はＮＡＤＰを共存させ、ＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨ
の生成を３４０ｎｍで測定する方法や、ルシフェリン及
びＭｇ２＋の存在下でＡＴＰにルシフェラーゼを作用さ
せ、発生する５６２ｎｍの発光強度からＡＴＰを定量す
る方法が知られている。

〔発明が解決しようとする問題点〕

前記したアンモニア測定法は、特別な酵素を用いない簡
便な方法ではあるが、障壁層と緩衝剤層の性質が著るし
く異なり、膜剥れを生じやすい。

特に保存時の膜剥れの傾向は大きく、問題がある。

又、前記ＡＴＰ定量法に関するヘキソキナーゼを用いる
方法では、感度が低くかつ、使用時に調製が必要な程安
定性が低いことが知られている。

又、ルシフェラーゼを使用する方法では、ルシフェラー
ゼ自体が高価であるという問題がある。

〔発明の目的〕

本発明の目的は、前記したような欠点がなく、素子構成
が堅牢で保存安定性に優れ、高感度で安価なアンモニア
又はＡＴＰの定量に適用できる多層分析素子の提供にあ
る。

〔問題点を解決するための手段〕

上記目的に沿い鋭意検討を重ねた結果、生物学的流体試
料中のアンモニア又はＡＴＰを定量する多層分析素子に
おいて； （イ）アンモニアとＡＴＰの共存系を作るＡＴＰ又はア
ンモニアのいづれかと、Ｌ−グルタミン酸、グルタミン
合成酵素、キナーゼ、該キナーゼの燐給与基質、及び （ロ）生成するキナーゼ反応生成物を検知可能な形態に
もたらす反応試薬組成物を含み、更に（ハ）前記反応試
薬組成物の反応速度を律速する規制量の前記キナーゼ及
び／又はグルタミン合成酵素量を含有することを特徴と
するアンモニア又はＡＴＰ定量用多層分析素子によって
達成される。

尚本発明の態様にあっては、前記反応試薬組成物の一部
又は全部を含む層が、前記規制量のキナーゼ及び／又は
グルタミン合成酵素を含む層より上層にあることが好ま
しい。

即ち本発明で用いられる反応は： ・Ｌｌ’ルタミン酸＋アンモニア＋ＡＴＰグルタミン 合成酵素Ｌ−グルタミン＋ＡＤＰ＋無機燐酸；： キナーゼ反応生成物＋ＡＴＰ ・キナーゼ反応生成物を検知可能な形態にもたらす反応
試薬組成物による反応 で示される。

本発明の多層分析素子には定量対象でないもう一方の化
合物、即ちアンモニア定量の場合にはＡＴＰ、又ＡＴＰ
定量の場合にはアンモニアが含有させられる。

又、当然の事ながら、本発明に供される流体試料として
はアンモニア又はＡＴＰのいずれか一方を含むものであ
れば良く、又アンモニア又はＡＴＰを生成する酵素反応
と組合せ、酵素活性、基質又は生成物の定量を行うこと
は可能である。

以下にアンモニア生成の酵素反応の一例を示す。

１、アスパラキナーゼ（ＥＣ３，５，１，１）Ｌ−アス
パラギン＋Ｈ，０→Ｌ−アスパラギン酸→ＮＨ。

２、アスパルターゼ（ＥＣ４，３，１，１）Ｌ−アスパ
ラギン酸→フマール酸＋ＮＨ。

３、アデニンデアミナーゼ（ＥＣ３，５，ｔ　２）アデ
ニン＋Ｈ，０→ピポキサンチン＋ＮＨ。

４、アデノシンデアミナーゼ（ＥＣ３，５，４，４）ア
デノシン十Ｈ，０→イノシン十ＮＨ。

５、アデノシンモノ燐酸デアミナーゼ（ＥＣ３，５，４
，６）ＡＭＰ＋Ｈ！Ｏ→ＩＭＰ十ＮＨ３ ６、アデノシン燐酸デアミナーゼ（ＥＣ３，５，ｔｌ　
７）アデノシン燐酸＋Ｈ！０→イノシン燐酸十ＮＨ３７
、アミンデヒドロゲナーゼ（ＥＣｌ　、　４．９９．３
）アミン＋酸化型７エナジンメトサル７エイト＋Ｈ２０
！→アルデヒド十還元型７エナジンメトサルフエイト十
ＮＨ。

８．アルギニンデイミナーゼ（ＥＣ３，５，３，６）Ｌ
−アルギニン→Ｌ−シトルリン十ＮＨ３９、アミダーゼ
（ＥＣ３，５，１，４）モノカルボン酸アミド＋　Ｈ２
０→２０→モノカルボン酸十ＮＨ、ω−アミダーゼ（Ｅ
Ｃ３，５，１，３）２−ケトダメシタラミン酸十Ｈ２０
→２−ケトグルタル１１、ウレアーゼ（ＥＣ３．５．１
．５）尿素＋Ｈ，Ｏ→２ＮＨ，＋ＣＯ２ １２、ウレイドスクシナーゼ（ＥＣ３．５．１．７）Ｎ
−カルバモイル− Ｌーアスパラギン酸＋ＣＯ，十ＮＨ。

１３、グアニンデアミナーゼ（ＥＣ３．５．４．３）グ
アニン＋Ｈ，Ｏ→キサンチン十ＮＨ。

１４、　グアノシンデアミナーゼ（ＥＣ３．５．４．１
５）グアノシン＋Ｈ．０→キサントシン＋ＮＨ。

１５、　グルタミナーゼ（ＥＣ３．５．１．２）グルタ
ミン＋Ｈ２０→Ｌ−グルタミンＭ＋ＮＨ。

１６、クレアチニンデイミナーゼ（ＥＣ３．５．４．２
１）クレアチニン＋Ｈ，０→Ｎ−メチルヒダントイン十
ＮＨ。

１７、　シチジンデアミナーゼ（ＥＣ３．５．４．５）
シチジン＋Ｈｇｏ→ウリジン十ＮＨ。

１８、　シトシンデアミナーゼ（ＥＣ３．５．４．１）
シトモノ十Ｈ，Ｏ→ウラつル十ＮＨ。

１９、シンセターゼ（ＥＣ３．５．１．２０）Ｌ−シト
ルリン＋２Ｈ＊ｏ−Ｌ−オルニｆ　ン＋　Ｃ　Ｏ　２　
＋　Ｎ　Ｈ　ｓ２０、トランスグルタミナーゼ（ＥＣ２
．３．２．１３）Ｎ”Ｒ−グルタミニルペプチド＋ＲＮ
Ｈｓ→Ｎ　Ｈ　３　＋　Ｎ　”−Ｒ−Ｎ’−Ｒ−グルタ
ミニルペプチド２１、トレオニンデヒドラターゼ（ＥＣ
４．２．１．１６）Ｌ−トレオニン＋Ｈ２０→２−ケト
ブチル酸中ＮＨ．＋Ｈ，０２２、　二：ｆｆチン７ミタ
ーゼ（ＥＣ３．５．１．１９）ニコチンアミド＋Ｈ．０
→ニコチン酸十Ｎ　Ｈ　ｓ２３、ニコチンアミドヌクレ
オチドアミターゼ（ＥＣ３．５．１．４２）ニコチンア
ミドモノヌクレオチＦ＋Ｈ，０→ニコチン酸−〇ーリボ
ヌクレオチド十ＮＨ。

２４、Ｌ−ヒスチジンアンモニアリアーゼ（ＥＣ４．３
．１．３）Ｌ−ヒスダグン−ウロカニン酸十ＮＨ。

２５、フェニルアラニンアンモニアリアーゼ（ＥＣ４．
３．１．５）Ｌ−７ｘニルアラニン−＊ｔｒａｎｓ−桂
皮酸十ＮＨ。

又酸中ＴＰを生成する酵素の反応の一例を以下に示す。

１、チロシル−ｔＲＮＡシンセターゼ（ＥＣ６．１．１
．ｌ）Ｌ−チロシル−ｔＲＮＡ＋ＡＭＰ＋ＰＰ　ｉ：Ｌ
−チロシン＋ＡＴＰ＋ｔＲＮＡ ２、アセチル−ＣｏＡシンセダーゼ（ＥＣ６．２．１．
１）ＡＭＰ＋ＰＰｉ＋アセチル−Ｃ　ｏＡ：Ａ　Ｔ　Ｐ
十酢酸＋ＣｏＡＳＨ３、アスパラギンシンセターゼ（Ｅ
Ｃ６．ｌ　１．ｌ）Ｌ−アスパラギン＋Ａ　Ｍ　Ｐ　＋
　Ｐ　Ｐ　ｉ　；Ｌ−アスパラギン酸十ＮＨ．＋ＡＴＰ ４、ＮＡＤシンセターゼ（ＥＣ６．３．１．５）ＡＭＰ
＋ピロリン酸＋ＡＭＰ．！ ＡＴＰ＋デアミド−ＮＡＤ＋ＮＩ（３ ５、リポース−ホスフェートピロホスホキナーゼ（ＥＣ
２．７．６．１）ＡＭＰ＋５−ホスホ−ａ−Ｄ−リボシ
ルピロ燐酸；ＡＴＰ＋Ｄ−リボース−５＝燐酸 ６、ピルビン酸オルソホス７エートジキナーゼ（ＥＣ２
．７．９．１）ＡＭＰ＋ホスホエノールピルビン酸＋Ｐ
Ｐｉ：ＡＴＰ＋ピルビン酸十Ｐ酸 中記反応は例示であり、本発明はこれによって何ら限定
されるものではない。

本発明に用いられるキナーゼの一例としてはピルビン酸
キナーゼが挙げられる。この場合のキナーゼ燐給与基質
としてはホスホエノールピルビン酸が用いられる。

この時生成するピルビン酸を、例えばピルビン酸オキシ
ダーゼ及び過酸化水素検知用組成物又はピルビン酸脱水
素酵素／テトラゾリウム塩のキナーゼ反応生成物を検知
可能な形態にもたらす反応試薬組成物と協同させ、定量
を行うことができる。

これらの試薬及び、他の試薬を展開層及び試薬層等の必
須層又は他の付加的な層に含有させることで、アンモニ
ア又はＡＴＰを定量することが可能である。

本発明は生物学的流体試料中のアンモニア又はＡＴＰを
定量することを目的としたものであるが、生物学的流体
試料例えば、血液中には既にピルビン酸が存在し、人の
場合では４．１〜６．８園−ｏ（１　／ｄ（１の範囲で
通常含まれている。当然のことながら血中ピルビン酸は
陽の誤差として測定されることになる。これを回避する
為に本発明の構成においては、血中ピルビン酸と試料由
来のピルビン酸の反応間にタイミングをとり、キナーゼ
及び／又はグルタミン合成酵素を律速量で含有させる。

これにより血中ピルビン酸が先に消費され、その後にア
ンモニア又はＡＴＰに由来するピルビン酸が生成し、こ
のピルビン酸を選択的に拾上げ、真のアンモニア又はＡ
ＴＰを測定することができる。

本発明で謂う律速量は、キナーゼ及び／又はグルタミン
合成酵素と、キナーゼ反応生成物を検知可能な形態にも
たらす酵素の比が１１５０−１／２．５、好ましくはｌ
／３０〜ｌ／３である。

即ち、キナーゼ及び／又はグルタミン合成酵素は５００
単位／　ｒａ”　〜２５，０００２５，０００単、キナ
ーゼ反応生成物を検知可能な形態にもたらす酵素（例え
ば、ピルビン酸オキシダーゼ、ピルビン酸脱水素酵素等
）は、１５，０００単位／ｌ１１２〜１，２５０．００
０単位／ｌａ”の範囲から選択される。

本発明に用いられるピルビン酸検出用反応試薬組成物は
、ピルビン酸酸化酵素を用いる場合、ペルオキシダーゼ
及び色原体の組合せが用いられる。

この時の色原体としては、特開昭５３−２６１８８号記
載のトリアリールイミダゾリルロイコ色素、特開昭５９
−１９３３５２号記載のジアリールイミダゾリルロイコ
色素、特開昭５７−９４６５６号、同５７−９４６５４
号、同５７−９４６５３号、同５７−９４６５５号、同
６３−１２７１５８号記載の耐拡散性カプラーと芳香族
第一級アミン化合物との組合せが挙げられ、又、４−ア
ミノアンチピリンの組合せも用いられる。

更に、酸化系発色色素としては、 ３′、３−ジアミノベンチジン−４塩酸塩、ｐ−ハイド
ロオキシフェニールプロピオン酸、３．３’−５，５′
−テトラメチルベンチジン及びその２塩酸塩、 またトリンダー試薬と称される、 Ｎ・エチル−Ｎ−スルホプロピル−ｍ−アニシジン、Ｎ
−エチル−Ｎ−スルホプロピルアニリン、Ｎ・エチル−
Ｎ−（ヒドロオキシ−３−スルホプロピル）−３，５・
ジメチルアニリン が挙げらる◎ 又、写真業界で公知の各種発色カプラーと発色現像薬の
組合せは、色彩の選択が自由なことと他の分析試薬、例
えば酵素等と共存させても、バックグランドの上昇、酵
素失活を招かず、好ましい色原体である。

更にピルビン酸脱水素酵素を用いる場合、還元型補酵素
（ＮＡＤ＋又はＮＡＤＰつ、電子伝達剤（７エナジンメ
トサルフエート、ｌ−メトキシ−フェナジンメトサルフ
ェート、メルトラブル−ジアホラーゼ等）、テトラゾリ
ウム塩（例えば、（株）同位化学研究所製；　Ｎｅｏ−
ＴＢ、　Ｎ１ｔｒｏ−ＴＢ、　ＴＮＴＢ。

ＴＢ等）の組合せが挙げられる。

分析素子の層内のｐＨは６．０〜８．５、好ましくは６
．３〜８．０の範囲で用いられる。上記ｐＨ緩衝には緩
衝剤が用いられる。例えば燐酸塩緩衝剤、Ｇｏｏｄの緩
衝剤、トリス−トリス塩酸緩衝剤が用いられる。

特にＧｏｏｄの緩衝剤は層内のイオン強度を上げない良
好な生化学用緩衝剤であり、はぼΔｐＨ−０，１５幅の
ｐＨレンジ及びｐＫａ（２０℃）別に各種の緩衝剤処方
がある。

本発明に係る、好ましい層構成の例を以下に示すが、本
発明はれこれに限定されるものではない。

（１）支持体上に試薬層、多孔性展開層が順次積層され
、かつ必要な試薬類が、好ましい量比ですべて試薬層に
含有されたもの。

（２）支持体上に試薬層、多孔性展開層が順次積層され
、かつピルビン酸オキシダーゼ（又はピルビン酸脱水素
酵素）が多孔性展開層に、その他の試薬類を適切な量比
で試薬層に含有したもの。

（３）支持体上に第一の試薬層、第二の試薬層、多孔性
展開層が順次積層され、第二の試薬層にピルビン酸オキ
シダーゼ（又はピルビン酸脱水素酵素）を、第一の試薬
層に、他の試薬を適切な量比で含有したもの。

本発明の態様としては血中及び試料由来のピルビン酸分
別性のよい（３）の層構成が好ましい。

尚第−の試薬層、第二の試薬層、多孔性展開層と順次積
層されＩ；層構成の場合、第一の試薬層と第二の試薬層
の膜厚の比が１＝２〜ｌ：５であることが好ましく、又
、硬膜度は第一の試薬層、第二の試薬層への硬膜剤の添
加量比で２＝１〜５：ｌが好ましい。

更に各バインダの量に着目して上記の膜厚と硬膜量を組
合せてもよい。

尚、試薬層、多孔性展開層の積層構成では、多孔性展開
層の全バインダに対して親水性バインダを５〜５０ｖｔ
％添加することが好ましい。

親水性バインダとしてはポリ−Ｎ−ビニルピロリドン、
ポリアクリルアミド、ポリメタアクリルアミド、ポリビ
ニルアルコールが挙げられる。更に上記ポリマーを構成
する単量体を少なくとも１０モル％以上含有するコポリ
マーも好ましく用いられる。

〔実施例〕

次に実施例を挙げて本発明を具体的に説明する。

実施例１ 透明な下塗り済み、厚さ約１８０μｍのポリ（エチレン
テレフタレート）支持体上に下記組成の層を順次積層し
た。

（試薬層） 脱イオン化ゼラチン　　　　　　　　　１２ｇ／ｍ”グ
ルタミン合成酵素　　　　　　　　５０００Ｕ　／＋”
ホスホエノールピルビン酸カリウム　０．７５ｇ／ｍ”
ＡＴＰ−Ｎａ２Ｊ　・３ｎ、ｏ　　　　　　　　　　２
．３２ｇ／ｍ”ピルビン酸オキシダーゼ　　　　　５０
．０００Ｕ　／ｌｒｒ２ＭｇＣｆｆ２・７Ｈ＊０　　　
　　　　　　　　　３．１ｇ／ｍ”チアミンピロホスフ
ェート　　　　　０．３１ｇ／ｍ’ＦＡＤ・２ナトリウ
ム　　　　　　　　　０−１１ｇ／ｍ”ペルオキシダー
ゼ　　　　　　　ｌｏ、ｏｏｏＵ　／ｍ”ＨＥＰＥＳ　
（グツト緩衝剤）　　　　　　　　　３ｇ／ｍ”アルカ
ノールＸ　ＣＯ，１５ｇ／ｍ” （デュポン社製） ピルビン酸キナーゼ　　　　　　　５．０００Ｕ　／ｌ
ａ２フタル酸ジブチル　　　　　　　　　　６．７ｇ／
ｒｎ”１−（２，４，６−）リクロルフェニル）３−（
２−クロル−オクタデシルスクシンイミドアニリノ）−
５−ピラゾロン　　　　　　　　　　６．７ｇ／ａ”ビ
ス（ビニルスルホニルメチル） エーテル　　　　　　　　　　　０．１２ｇ／ｍ２全体
をＫＯＨでｐＨ−７，５に緩衝 （接着層） ビニルピロリドン／ 酢酸ビニル共重合体　　１．２５ｇ／ｌ１１２（多孔性
展開層） 濾紙原材料用繊維（４０メツシュ以上）　　１０５ｇ／
ａ”ト　リ　ト　ン　Ｘ−１００ （ロームエンドハース社製）　　　ＩＯ，２ｇ／ｍ２Ｎ
、Ｎ−ジエチル−３−メタンスルホンアミドエチル−４
−アミノアニリン・ ｐ−トルエンスルホン酸　　　　　　　０．１５ｇ／ｍ
２アスコルビン酸オキシダーゼ　　　３０，０ＯＯＵ／
ｍ”ウシ牛血清アルブミン（アスコルビン酸オキシダー
ゼと共に溶解し凍結乾燥粉末として含有）１５ｇ／＋” スチレン／グリシジルメタアクリレート共重合体（共重
合比９　／　１　）　　　　　　　　　２５．６ｇ／ｍ
″更に比較の分析素子として、特公昭５８−１９０６２
号実施例の記載に準拠し、下記の組成の層をポリ（エチ
レンテレフタレート）支持体上にＭＩ層シｆ：、。

（第１の試薬層） ｌ−メチル−２−（２，４−ジニトロフェニル）メチル
キノリニウム過塩素酸塩　　　　　　　１．０８ｇ／＋
”酢酸セルロース　　　　　　　　　　６．３４ｇ／＋
”（障壁層） 酢酸酪酸セルロース　　　　　　　　０．８ｇ／ａ”（
アセチル含有２１％、ブチリル含有量２７％）（第２の
試薬層） 脱イオン化ゼラチン　　　　　　　　２１．６ｇ／ｍ”
ポリエチレングリコール オレイルエーテル　　　　　　　　　０．６５ｇ／ｍ２
Ｎ、Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン　　　
　　　　　　　　　　　５．４ｇ／ｍ”オルト燐酸２ナ
トリウム　　　　　　０．２８ｇ／＋ｍ”ビスビニルス
ルホニルメチルエーテル ０．１３ｇ／ｍ２ （全体をｐＨ＝８に緩衝） （接着層） ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）０．３２ｇ／
ｍ’（多孔性展開層） 酢酸セルロース　　　　　　　　　　６．６ｇ／ｍ”二
酸化チタン　　　　　　　　　　　４６．０ｇ／＋＊２
オクチルフェノキシ ポリエトキシエタノール　　　　　　２．６９ｇ／ｍ”
以上、本発明の分析素子ｌ及び比較分析素子（１）を１
．５Ｘ　１．５ｃｃｍに裁断し、口径８ＩＩＩｌ−の穴
のあるプラスチックマウントに装着したのち、−個ずつ
防湿の為のアルミラミネートシートに入れ封をした。

上記素子を４０℃の恒温器に１日、３日、５日、７日、
ｌＯ日間入れたもの及び５°Ｃで保存したものを用意し
、アンモニア濃度０．５ｔａ　ｗｈｏＱ／（１％１．０
＋ａｍｏｆｆ／Ｑに調整した７％ウシ血清アルブミン溶
液を試料として用意した。反射濃度測定はドライラボ８
０Ｍ■分析計（コニカ（株））を用い、試料ｌＯμａ点
着後、３７°Ｃ１７分間インキュベートし、本発明の分
析素子ｌは５４６ｎ■の干渉フィルタで、比較分析素子
（１）は、５８５ｎｍ干渉フィルタを用いて測定しｔこ
　。

結果は以下の表−１に示す。

表−１ （＊は層の剥離が起り測定不能） 上記結果の如く、本発明の分析素子（１）は比較分析素
子（１）にくらべて、良好な保存性を有していることが
明らかである。

実施例−２ 透明な下塗り済、厚さ約１８０μｍのポリ（エチレンテ
レフタレート）支持体上に表−２で示した組成の第１の
試薬層、第２の試薬層、接着層、多孔性展開層を順次積
層し、本発明の分析素子２〜６表−２ 表 ＊ｌマゼンカプラー（Ｍ）　；　１−（２，４，６−）
リクロルアエノール）−（２−クロルオクタデシルスク
シンイミドオニリド）−５−ピラゾロン ＊”　　硬１に剤（Ｈ）ｉビス（ビニルスルホンメチル
エーテル）＊３　発色現像剤ＣＤ−３；Ｎ、Ｎ−ジエチ
ル−３−メタンスルホンアミドエチル−４−アミノアニ
リンＩ）−トルエンスルホン酸＊６ ；アスコルビン酸オキシダーゼと共に溶解した凍結乾燥
粉末 前記本発明の分析素子２〜６及び比較分析素子（２）を
実施例−１と同様にプラスチック・マウントに装着した
。

試料はアンモニア０．３ｍｍｏ１／１２及び０．８＋ｍ
ｏ（２＃！を含むヒト血清に対してピルビン酸を０．０
．１５．０．５゜１、Ｏｍｍｏｌ／ｆｆ添加したものを
用いた。測定機は専用のドライラボ８０Ｍ■（コニカ（
株）製）を用い、試料ｌＯμρ点着後、３７°Ｃでイン
キュベートし、３．５分後及び、７分後の反射濃度を５
４６ｎｍのフィルタを用いて測定し、その差をとった。

表 以上の如く比較分析素子（２）に比べて、本発明の分析
素子２〜６はピルビン酸の影響を受けていないことが明
白である。

又、膜厚や硬膜度を変化することで良好な結果を示して
いることが明らかである。

実施例−３ 透明な厚さ約１８０μｍの下塗り済ポリエチレンテレフ
タレート支持体上に下記組成の層を積層した。

（試薬層） 脱イオン化ゼラチン　　　　　　　　　８ｇ／ｍ２グル
タミン合成酵素　　　　　　　５０００Ｕ　／＋ａ２ピ
ルビン酸キナーゼ　　　　　　　５０００Ｕ　／ｒｓ”
ＡＴＰ、Ｎａ２Ｈ２・３Ｈ２０２，３２ｇ／Ｉ１１”ホ
スホエノールピルビン酸カリウム０．７５ｇ／ｍ２ペル
オキシダーゼ　　　　　　　１０．０００Ｕ　／ｍ”Ｈ
Ｅ　Ｐ　Ｅ　Ｓ　　　　　　　　　　　　　２．００ｇ
／ｍ”マゼンタカプラー（Ｍ）　　　　　　　４．４７
ｇ／＋ｍ”フタル酸ジプチル　　　　　　　　　４．４
７ｇ／ｍ”アルカノールＸ　ＣＯ，１ｇ／■２ 硬膜剤（Ｈ）　　　　　　　　　　　　０．０８ｇ／Ｉ
ｌ”（全体をＫＯＨでｐＨ＝　７．５に緩衝）（接着層
） ビニルピロリドン／酢酸ビニル共重合体（共重合比２　
：　８　）　　　　２．５ｇ／＋ａ２（多孔性展開層） 濾紙原材料用繊維（４０メツシュ以上）　　１０５ｇ／
＋ａ”ト　リ　ト　ン　Ｘ　　−１００１０，２／＋ａ
　２発色現像剤ＣＤ　　３　　　　　　　　０．１５ｇ
／ｍ２アスコルビン酸オキシダーゼ　　３０，０ＯＯＵ
　／ｗ、２ピルビン酸オキシダーゼ　　　　５０．００
０Ｕ　／ｍ”ウシ血清アルブミン　　　　　　　　　１
５ｇ／＋ａ”（アスコルビン酸オキシダーゼ、ピルビン
酸オキシダーゼ、ウシ血清アルブミンを共に溶解し、凍
結乾燥粉末として含有） スチレン／グリシジル メタアクリレート共重合体　　表−４に記載（共重合比
ｌ／９） ポリビニルピロリドン 、芥 表 ４ 上記本発明の分析素子を実施例−２と同様にプラスチ７
クマウントに装着し、同様に測定を行った。結果は表−
５に示す。

以上の如く、本発明の分析素子はピルビン酸の影響を受
けない良好な性能を示している。

実施例−４ 実施例−１の試薬層中のＡＴＰ、　Ｎａ、Ｈｚ”３Ｈｓ
Ｏを塩化アンモニウム１．５０／ｍ２にかえて、ＡＴＰ
測定用分析素子を作成した。これを実施例＝１と同様に
プラスチックマウントに装清し、ＡＴＰ　１．０．０．
５゜０．２５１１１ｍｏｆ２７Ｑの溶液を用意し、実施
例−１と同様にドライラボ８０Ｍ■で測定を行った。

結果は表−６に示す。

表−６ 以上の如＜、ＡＴＰ測定においても良好な結果を示した
。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）生物学的流体試料中のアンモニア又はＡＴＰを定
   量する多層分析素子において； （イ）アンモニアとＡＴＰの共存系を作るＡＴＰ又はア
   ンモニアのいづれかと、Ｌ−グルタミン酸、グルタミン
   合成酵素、キナーゼ、該キナーゼの燐給与基質、及び （ロ）生成するキナーゼ反応生成物を検知可能な形態に
   もたらす反応試薬組成物を含み、更に （ハ）前記反応試薬組成物の反応速度を律速する規制量
   の前記キナーゼ及び／又はグルタミン合成酵素量を含有
   することを特徴とするアンモニア又はＡＴＰ定量用多層
   分析素子。（２）前記反応試薬組成物の一部又は全部を
   含む層が、前記規制量のキナーゼ及び／又はグルタミン
   合成酵素を含む層より上層にあることを特徴とする請求
   項１に記載のアンモニア又はＡＴＰ定量用多層分析素子
   。