JPH03215492A - Ｎ―アセチル―Ｄ―ヘキソサミン誘導体及びその製造方法並びにＮ―アセチル―β―Ｄ―ヘキソサミニダーゼ活性測定用基質及び測定方法 - Google Patents
Ｎ―アセチル―Ｄ―ヘキソサミン誘導体及びその製造方法並びにＮ―アセチル―β―Ｄ―ヘキソサミニダーゼ活性測定用基質及び測定方法Info
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- JPH03215492A JPH03215492A JP684690A JP684690A JPH03215492A JP H03215492 A JPH03215492 A JP H03215492A JP 684690 A JP684690 A JP 684690A JP 684690 A JP684690 A JP 684690A JP H03215492 A JPH03215492 A JP H03215492A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［ａ業上の利用分野］
本発明はＮ−アセチル−Ｄ−ヘキソサミン誘導体及びそ
の製造方法並びにＮ−アセチル−β−Ｄ一へキソサミニ
ダーゼ活性測定用基質及び測定方法に関する。
の製造方法並びにＮ−アセチル−β−Ｄ一へキソサミニ
ダーゼ活性測定用基質及び測定方法に関する。
［従来の技術］
体液中のＮ−アセチル−β−Ｄ−ヘキソサミニダーゼ（
以下ｒＮＡＧＪと略すことがある．）活性の測定は、急
性腎不全や糸球体腎炎等の腎疾患の早期診断や薬物の腎
毒性等に関する情報を与えるものとして臨床的意義が高
く、広く一般に実施されているものである． ＮＡＧ活性測定用の基貿としては従来よりいくつか提案
され、実際の診断に供せられている．具体的には次の■
〜■の基買が提案されている． ■ Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミンの１位にｐ−ニト
ロフェノールをβ結合させた基質（Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅ
ｎｘｙａ＋ｏｌ．， ２８， ７０２，（１９７２）
） ．■ Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミンの１位にｍ
−クレゾールスルホフタレインをβ結合させた基質（Ｃ
ｌｉｎ． Ｃｈｅａ＋．， ２９． １７１３（１９８
３）） ， ■ Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミンの１位にフェノー
ルをβ結合させた基質（特開昭５４−６０９９７ ）
． ■ Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミンの１位に２−クロ
ロ−４一二トロフェノールをβ結合させた基質（Ｃｌｌ
ｎ． Ｃｈｅｗ．． ３４． （１Ｇ）， ２１４０（
１９８Ｂ）） ． ところで、Ｎ−アセチルへキソサミンのβ−グリコシド
を合成する方法としては、Ｎ−アセチル−Ｄ−ヘキソサ
ミンのオキサゾリン体を経由する方法が知られており、
そのオキサゾリン体を合成する方法としても下記の通り
いくつかの方法が報告されている． ■ Ｎ−アセチルグルコサミンのα−メチルグリコシド
をアセトリシス条件下にて閉環してオキサゾリン体とす
る方法（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．， ６， １８
４−１９８（１９６Ｂ））■ Ｎ−アセチルグルコサミ
ンのβ−アセテートを塩化メチレン中、塩化第二鉄と反
応させオキサゾリン体とする方法（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ
．Ｒｅｓ．， ２１， ４６０−４６４（１９７２））
，Ｏ Ｎ−アセチルグルコサミンのアセトハロゲノ体か
ら出発してハライドイオン存在下で炭酸水素ナトリウム
を作用させオキサゾリン体とする方法（Ｊ．＾ｔａ．
Ｃｈｅｗ． Ｓｏｃ．，９７． ４０６３−４０６８
（１９７５））。
以下ｒＮＡＧＪと略すことがある．）活性の測定は、急
性腎不全や糸球体腎炎等の腎疾患の早期診断や薬物の腎
毒性等に関する情報を与えるものとして臨床的意義が高
く、広く一般に実施されているものである． ＮＡＧ活性測定用の基貿としては従来よりいくつか提案
され、実際の診断に供せられている．具体的には次の■
〜■の基買が提案されている． ■ Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミンの１位にｐ−ニト
ロフェノールをβ結合させた基質（Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅ
ｎｘｙａ＋ｏｌ．， ２８， ７０２，（１９７２）
） ．■ Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミンの１位にｍ
−クレゾールスルホフタレインをβ結合させた基質（Ｃ
ｌｉｎ． Ｃｈｅａ＋．， ２９． １７１３（１９８
３）） ， ■ Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミンの１位にフェノー
ルをβ結合させた基質（特開昭５４−６０９９７ ）
． ■ Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミンの１位に２−クロ
ロ−４一二トロフェノールをβ結合させた基質（Ｃｌｌ
ｎ． Ｃｈｅｗ．． ３４． （１Ｇ）， ２１４０（
１９８Ｂ）） ． ところで、Ｎ−アセチルへキソサミンのβ−グリコシド
を合成する方法としては、Ｎ−アセチル−Ｄ−ヘキソサ
ミンのオキサゾリン体を経由する方法が知られており、
そのオキサゾリン体を合成する方法としても下記の通り
いくつかの方法が報告されている． ■ Ｎ−アセチルグルコサミンのα−メチルグリコシド
をアセトリシス条件下にて閉環してオキサゾリン体とす
る方法（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．， ６， １８
４−１９８（１９６Ｂ））■ Ｎ−アセチルグルコサミ
ンのβ−アセテートを塩化メチレン中、塩化第二鉄と反
応させオキサゾリン体とする方法（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ
．Ｒｅｓ．， ２１， ４６０−４６４（１９７２））
，Ｏ Ｎ−アセチルグルコサミンのアセトハロゲノ体か
ら出発してハライドイオン存在下で炭酸水素ナトリウム
を作用させオキサゾリン体とする方法（Ｊ．＾ｔａ．
Ｃｈｅｗ． Ｓｏｃ．，９７． ４０６３−４０６８
（１９７５））。
■ Ｎ−アセチルグルコサミンのアリルβ−グリコシド
のアリル基をプロペニル基へ異性化し、塩化第二水銀と
処理する方法（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ． Ｒｅｓ．， ８
２． ２３７−２５２（１９８０））．［発明が解決し
ようとする課題］ 前記■〜■の従来の基質のうち、■のＮ−アセチル−Ｄ
−グルコサミンの１位にｐ−ニトロフエノールをβ結合
させた基質をＮＡＧ活性測定用基質として用いる場合、
ＮＡＧの至適ｐＨにおいてｐ−ニトロフェノールが発色
しないため，ＮＡＧとの反応と発色（検出）反応とを切
り離して行なわなければならない．このため、測定操作
が煩雑で測定精度上にも問題があクた．その結果、酵素
反応を測定するのに適した方法であるレートアッセイ（
キネティック分析）に適応することも困難であった． このような問題は上記■、■の基質においても解決され
ていない。
のアリル基をプロペニル基へ異性化し、塩化第二水銀と
処理する方法（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ． Ｒｅｓ．， ８
２． ２３７−２５２（１９８０））．［発明が解決し
ようとする課題］ 前記■〜■の従来の基質のうち、■のＮ−アセチル−Ｄ
−グルコサミンの１位にｐ−ニトロフエノールをβ結合
させた基質をＮＡＧ活性測定用基質として用いる場合、
ＮＡＧの至適ｐＨにおいてｐ−ニトロフェノールが発色
しないため，ＮＡＧとの反応と発色（検出）反応とを切
り離して行なわなければならない．このため、測定操作
が煩雑で測定精度上にも問題があクた．その結果、酵素
反応を測定するのに適した方法であるレートアッセイ（
キネティック分析）に適応することも困難であった． このような問題は上記■、■の基質においても解決され
ていない。
■のＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンの１位に２−クロ
ロ−４一二トロフェノールをβ結合させた基質では、ｐ
−ニトロフェノールにクロル基を導入することでｐＫａ
を低下させ、より低いｐｔｉ領域での発色を可能にはし
たが、β一ＮＡＧ活性測定に関して満足できるほどｐＫ
ａを低下するには到っていない．そのため、少しのｐＨ
変化において、発色程度を大きく変化させるという欠点
も生じて《る． また、■〜■のフェノール系話導体の発色基はスペクト
ルバンド幅が狭く、精度の高い分光器を用いなければ正
確な吸光度測定が困難であるという欠点もある。更に、
試料中に共存する、例えばヘモグロビンやビリルビン（
フェノール系既導体と吸収波長が重なり、しかもこれら
は光で分解し易い。）や界面活性物質（フェノール系屈
導体のモル吸光係数を変化させることがある．）により
影響を受け、吸光度が変動し易く、測定精度に問題があ
ることは周知の事実であり、未だこれらの問題は解決さ
れていない。
ロ−４一二トロフェノールをβ結合させた基質では、ｐ
−ニトロフェノールにクロル基を導入することでｐＫａ
を低下させ、より低いｐｔｉ領域での発色を可能にはし
たが、β一ＮＡＧ活性測定に関して満足できるほどｐＫ
ａを低下するには到っていない．そのため、少しのｐＨ
変化において、発色程度を大きく変化させるという欠点
も生じて《る． また、■〜■のフェノール系話導体の発色基はスペクト
ルバンド幅が狭く、精度の高い分光器を用いなければ正
確な吸光度測定が困難であるという欠点もある。更に、
試料中に共存する、例えばヘモグロビンやビリルビン（
フェノール系既導体と吸収波長が重なり、しかもこれら
は光で分解し易い。）や界面活性物質（フェノール系屈
導体のモル吸光係数を変化させることがある．）により
影響を受け、吸光度が変動し易く、測定精度に問題があ
ることは周知の事実であり、未だこれらの問題は解決さ
れていない。
ところで、尿中成分の検査においては、試験紙上の濾紙
に薬品類をしみ込ませて、これを尿中に浸し、発色の有
無から判定を行なう方法（試験紙法）が主流であり、Ｎ
ＡＧ測定においても臨床化学用自動分析装置を用いた方
法ばかりでなく、試験紙法のような簡便な方法も望まれ
ている．しかしながら、従来の基質では試験紙法への応
用は不可能ないし極めて困難であった． 以上のように、従来のＮＡＧ活性測定基質を用いる方法
はいずれもレートアッセイ（キネティック分析）に通用
が困難であり、操作性や測定精度等に多くの問題を有す
る上に、広く望まれている試験紙法への適用も困難であ
るという多くの欠点を有していた． 一方、前記■〜■の従来のオキサゾリン体の合成方法は
、いずれも収率が極めて悪いため、実用にあたっては改
善が必要とされる．しかも、これらの方法で得られたオ
キサゾリン体と他の糖とのカップリング（β−グリコシ
ド化）を行なうにあたっては、従来、反応温度１００℃
以上（例えば、上記■の文献）で行なわれていたことか
ら、副反応が生じるためにやはり収率が低いという問題
があった． 本発明は上記従来の問題点を解決し、 ■ 定量性に優れたＮＡＧのレートアツセイが可能、 ■ 内因性の物質やｐＨ変化、温度変化等の測定条件の
影響を殆ど受けないため、測定精度が高い、 ■ 簡便な試験紙法での測定への通用が可能、といった
優れた基質を提供し得るＮ−アセチル−Ｄ−ヘキソサミ
ン話導体及びこの話導体を高収率で製造する方法並びに
この誘導体を用いたＮ−アセチル−β−Ｄ−ヘキソサミ
ニダーゼ活性測定用基質及び測定方法を提供することを
目的とする。
に薬品類をしみ込ませて、これを尿中に浸し、発色の有
無から判定を行なう方法（試験紙法）が主流であり、Ｎ
ＡＧ測定においても臨床化学用自動分析装置を用いた方
法ばかりでなく、試験紙法のような簡便な方法も望まれ
ている．しかしながら、従来の基質では試験紙法への応
用は不可能ないし極めて困難であった． 以上のように、従来のＮＡＧ活性測定基質を用いる方法
はいずれもレートアッセイ（キネティック分析）に通用
が困難であり、操作性や測定精度等に多くの問題を有す
る上に、広く望まれている試験紙法への適用も困難であ
るという多くの欠点を有していた． 一方、前記■〜■の従来のオキサゾリン体の合成方法は
、いずれも収率が極めて悪いため、実用にあたっては改
善が必要とされる．しかも、これらの方法で得られたオ
キサゾリン体と他の糖とのカップリング（β−グリコシ
ド化）を行なうにあたっては、従来、反応温度１００℃
以上（例えば、上記■の文献）で行なわれていたことか
ら、副反応が生じるためにやはり収率が低いという問題
があった． 本発明は上記従来の問題点を解決し、 ■ 定量性に優れたＮＡＧのレートアツセイが可能、 ■ 内因性の物質やｐＨ変化、温度変化等の測定条件の
影響を殆ど受けないため、測定精度が高い、 ■ 簡便な試験紙法での測定への通用が可能、といった
優れた基質を提供し得るＮ−アセチル−Ｄ−ヘキソサミ
ン話導体及びこの話導体を高収率で製造する方法並びに
この誘導体を用いたＮ−アセチル−β−Ｄ−ヘキソサミ
ニダーゼ活性測定用基質及び測定方法を提供することを
目的とする。
［課題を解決するための手段及び作用］請求項（１）の
Ｎ−アセチル−Ｄ−ヘキソサミン話導体は、下記一般式
［１１で表されるものである。
Ｎ−アセチル−Ｄ−ヘキソサミン話導体は、下記一般式
［１１で表されるものである。
１
Ｃ＝０
１
ＣＨ３
請求項（２）のＮ−アセチル−Ｄ−ヘキソサミン誘導体
は、請求項（１）において、一般式［Ｎ中のＧがフルク
トース、グルコースー６−リン酸、シヨ糖又はガラクト
ースであることを特徴とする。
は、請求項（１）において、一般式［Ｎ中のＧがフルク
トース、グルコースー６−リン酸、シヨ糖又はガラクト
ースであることを特徴とする。
請求項（３）のＮ−アセチル−Ｄ−ヘキソサミン誘導体
の製造方法は、請求項（１）又は（２）のＮ−アセチル
−Ｄ−ヘキソサミン誘導体を製造するにあたり、Ｄ−ヘ
キソサミンをアセチル化した後、チオール系化合物と反
応させてＮ−アセチル−Ｄ−ヘキソサミン−１−チオ誦
導体とし、次いでオキサゾリン体化して得られる化合物
と、糖の話導体又はグルコースを除く糖とを２０〜９０
℃の条件下に反応させることを特徴とする．請求項（４
）のＮ−アセチル−β−Ｄ−ペキンサミニダーゼ活性測
定用基質は、請求項（１）又は（２）のＮ−アセチル−
Ｄ−ヘキソサミン誘導体を含むことを特徴とする。
の製造方法は、請求項（１）又は（２）のＮ−アセチル
−Ｄ−ヘキソサミン誘導体を製造するにあたり、Ｄ−ヘ
キソサミンをアセチル化した後、チオール系化合物と反
応させてＮ−アセチル−Ｄ−ヘキソサミン−１−チオ誦
導体とし、次いでオキサゾリン体化して得られる化合物
と、糖の話導体又はグルコースを除く糖とを２０〜９０
℃の条件下に反応させることを特徴とする．請求項（４
）のＮ−アセチル−β−Ｄ−ペキンサミニダーゼ活性測
定用基質は、請求項（１）又は（２）のＮ−アセチル−
Ｄ−ヘキソサミン誘導体を含むことを特徴とする。
請求項（５）のＮ−アセチル−β−Ｄ−ヘキソサミニダ
ーゼ活性測定方法は、請求項（４）のＮーアセチルーβ
一Ｄ−ヘキソサミニダーゼ活性測定用基質と試料とを接
触させ、遊離する糖又は糖の誘導体を測定して試料中の
Ｎ−アセチル−β一〇一へキソサミニダーゼ活性を測定
することを特徴とする． 以下に本発明を詳細に説明する。
ーゼ活性測定方法は、請求項（４）のＮーアセチルーβ
一Ｄ−ヘキソサミニダーゼ活性測定用基質と試料とを接
触させ、遊離する糖又は糖の誘導体を測定して試料中の
Ｎ−アセチル−β一〇一へキソサミニダーゼ活性を測定
することを特徴とする． 以下に本発明を詳細に説明する。
本発明のＮ−アセチル−Ｄ−ヘキソサミン誘導体（以下
、ｒＮＡｃＨ誘導体」と略す。）は、前記一般式［１１
で示される構造、即ち、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミ
ン又はＮ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミンがβ結合で糖
類又は糖類の誘導体、好ましくはフルクトース、グルコ
ールー６−リン酸、シヨ糖又はガラクトースと結合した
ものである． このよりなＮＡｃＨ９導体を高収率で得る方法について
神々検討を重ねた結果、オキサゾリン体を合成するに際
しては特に１−チオ誘導体を軽由することにより著しく
収率が向上し、β−グリコシド化反応に際しては反応温
度をある一定温度にすることにより副反応も殆どなく収
率が向上し、結果的に著しく高収率でＮＡｃＨ説導体を
合成することができることを見出し本発明の製造方法を
完成させた。
、ｒＮＡｃＨ誘導体」と略す。）は、前記一般式［１１
で示される構造、即ち、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミ
ン又はＮ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミンがβ結合で糖
類又は糖類の誘導体、好ましくはフルクトース、グルコ
ールー６−リン酸、シヨ糖又はガラクトースと結合した
ものである． このよりなＮＡｃＨ９導体を高収率で得る方法について
神々検討を重ねた結果、オキサゾリン体を合成するに際
しては特に１−チオ誘導体を軽由することにより著しく
収率が向上し、β−グリコシド化反応に際しては反応温
度をある一定温度にすることにより副反応も殆どなく収
率が向上し、結果的に著しく高収率でＮＡｃＨ説導体を
合成することができることを見出し本発明の製造方法を
完成させた。
本発明のＮＡｃＨ誘導体の製造方法は、下記一殻式［
ＩＩ ］で示されるＤ−ヘキソサミンをアセチル化して
下記一般式［ ＩＩ１ ］で示されるアセチルーＤ−ヘ
キソサミンとした後、常法によりα−八ロゲノ体とし（
ここでは図示せず）、これをチオール系化合物と反応さ
せて下記一般式［１ｖ］で示されるＮ−アセチル−Ｄ−
ヘキソサミン−１−チ才誘導体とし、次いでオキサゾリ
ン体化して下記一般式［Ｖ］で示されるオキサゾリン体
とした後、これを糖の話導体又はグルコースを除く糖と
２０〜９０℃、好ましくは５０〜７０℃の温度で反応さ
せ、最後に保護基をはずしてＮＡｃＨ誘導体とする． Ｊ ＣＨコ 以下に本発明のＮＡｃＨ誘導体の製造方法についてより
具体的に説明する。
ＩＩ ］で示されるＤ−ヘキソサミンをアセチル化して
下記一般式［ ＩＩ１ ］で示されるアセチルーＤ−ヘ
キソサミンとした後、常法によりα−八ロゲノ体とし（
ここでは図示せず）、これをチオール系化合物と反応さ
せて下記一般式［１ｖ］で示されるＮ−アセチル−Ｄ−
ヘキソサミン−１−チ才誘導体とし、次いでオキサゾリ
ン体化して下記一般式［Ｖ］で示されるオキサゾリン体
とした後、これを糖の話導体又はグルコースを除く糖と
２０〜９０℃、好ましくは５０〜７０℃の温度で反応さ
せ、最後に保護基をはずしてＮＡｃＨ誘導体とする． Ｊ ＣＨコ 以下に本発明のＮＡｃＨ誘導体の製造方法についてより
具体的に説明する。
なお、以下において、ＡＩ，Ａ２，ＢＩ８２．ＡＣ，Ｒ
は上記と同様であり、更に、Ｂｎはベンジル基 ｐｈはフエニル基 を示す。
は上記と同様であり、更に、Ｂｎはベンジル基 ｐｈはフエニル基 を示す。
（＋） 前記一般式［Ｖ］で示されるオキサゾリン体
の合成 １ 一〇 市販の塩酸グルコサミン又は塩酸ガラクトサミン
を通常の方法（例えば無水酢酸／ビリジン系にて反応さ
せる．）でアセチル化する． ｉ−■ アセチル化体Ｃ ＩＩＩ ］を塩化アセチルに
溶かし、ＨＣｊ２ガスを通してα−ハロゲノ体［ Ｖｌ
］とする． ｉ−■ α−八ロゲノ体［ Ｖｌ ］をアセトン中にて
ＨＳＣＳＮ （ＣＨ３ ）２ ．ＨＳＣＳＮ（Ｃ２ Ｈ
５ ）２ ，ＨＳＣＳＯＣ２ Ｈ５ ，ＨＳＣＯＣＨ３
，ＨＳＣＮ又はそのアルカリ金属塩或いはＳＣ （Ｎ
Ｈ２ ）２と還流して反応させ１−チオ鍔導体［ ＪＶ
］とする．ｉ一■ １−チオ誘導体［ ［Ｖ ］をア
セトニトリル中でＨｇＣｆ２，ＨｇＯと反応させること
によりオキサゾリン体［Ｖ］を高収率で得る． （ｉｆ） オキサゾリン体［Ｖ］とカップリングさせ
る糖誘導体の合成（カップリング反応させるＯＨ基のみ
を残し、他のＯＨ基を保謹基と置換して保護する．） ［フルクトース屈導体の合成］ ｉｔ一■ Ｄ−フルクトースをアセトン中濃Ｈ２ＳＯ４
を触媒としてイソブロピリデン化する． ＋１ ■ イソプロビリデン体をＭ ｏＨ中、 希 Ｈ２ＳＯ４と反応させ４， ５位のイソブロ ピリデン基をはずし、 ピリジン／無水酢酸 でアセチル化する． ｆｉ−■ アセチル体をジオキサン中、 ｘｏＨを触 媒として塩化ベンジルと反応させベンジル化する． ｉｆ一■ ベンジル体を酢酸水溶液中にて加熱し、イソプロビリデ
ン基をはずし、フルクトース話導体［■］を得る． ［グルコース−６−リン酸説導体の合成］ｉｉ−■ Ｄ
グルコースをＨＣＩＬガスを含むベンジルアルコール中
で反応させてペンジルグリコシド化する。
の合成 １ 一〇 市販の塩酸グルコサミン又は塩酸ガラクトサミン
を通常の方法（例えば無水酢酸／ビリジン系にて反応さ
せる．）でアセチル化する． ｉ−■ アセチル化体Ｃ ＩＩＩ ］を塩化アセチルに
溶かし、ＨＣｊ２ガスを通してα−ハロゲノ体［ Ｖｌ
］とする． ｉ−■ α−八ロゲノ体［ Ｖｌ ］をアセトン中にて
ＨＳＣＳＮ （ＣＨ３ ）２ ．ＨＳＣＳＮ（Ｃ２ Ｈ
５ ）２ ，ＨＳＣＳＯＣ２ Ｈ５ ，ＨＳＣＯＣＨ３
，ＨＳＣＮ又はそのアルカリ金属塩或いはＳＣ （Ｎ
Ｈ２ ）２と還流して反応させ１−チオ鍔導体［ ＪＶ
］とする．ｉ一■ １−チオ誘導体［ ［Ｖ ］をア
セトニトリル中でＨｇＣｆ２，ＨｇＯと反応させること
によりオキサゾリン体［Ｖ］を高収率で得る． （ｉｆ） オキサゾリン体［Ｖ］とカップリングさせ
る糖誘導体の合成（カップリング反応させるＯＨ基のみ
を残し、他のＯＨ基を保謹基と置換して保護する．） ［フルクトース屈導体の合成］ ｉｔ一■ Ｄ−フルクトースをアセトン中濃Ｈ２ＳＯ４
を触媒としてイソブロピリデン化する． ＋１ ■ イソプロビリデン体をＭ ｏＨ中、 希 Ｈ２ＳＯ４と反応させ４， ５位のイソブロ ピリデン基をはずし、 ピリジン／無水酢酸 でアセチル化する． ｆｉ−■ アセチル体をジオキサン中、 ｘｏＨを触 媒として塩化ベンジルと反応させベンジル化する． ｉｆ一■ ベンジル体を酢酸水溶液中にて加熱し、イソプロビリデ
ン基をはずし、フルクトース話導体［■］を得る． ［グルコース−６−リン酸説導体の合成］ｉｉ−■ Ｄ
グルコースをＨＣＩＬガスを含むベンジルアルコール中
で反応させてペンジルグリコシド化する。
ｉｌ−■ ペンジルグリコキシド体を酸触媒下ベンズア
ルデヒドと反応させ、４．６−ペンジリデン化する． ｉｉ−■ ４．６−ペンジリデン体をピリジン／無水酢
酸でアセチル化し、希Ｈ２ ＳＯ４中で脱ベンジリデン
した後、リン酸エステル化し、グルコースー６〜リン酸
話導体［■］ｉｆ一■ シａ［を低温で酸触媒下ベンズ
アルデヒドと反応させペンジリデン化する． ｉｉ−■ ペンジリデン体のフリーの一〇Ｈ基をアセチル化する． ■一■ アセチル体をメタノール中でＰｄ触媒下、Ｈ２
ガスにより接触還元を行ない、シ５１８１訪導体［１を
得る． 罰５’ｙ．．−Ｘｍ４体。８よ］〔■〕１ｉ−■ Ｄ−
ガラクトースをＨｃｉガスを含むベンジルアルコール中
で反応させ、ペンジルグリコシド化する． ｉｆ一■ ペンジルグルコシド体を酸触媒下ベンズアル
デヒドと反応させ、４．６−ペンジリデン化する． ｉｌ−■ ４．６−ペンジリデン体をピリジン／無水酢酸でアセチ
ル化し、希Ｈ２ ＳＯ４中で脱ベンジリデンすることに
より、ガラクトース誘導体［Ｘ］を得る。
ルデヒドと反応させ、４．６−ペンジリデン化する． ｉｉ−■ ４．６−ペンジリデン体をピリジン／無水酢
酸でアセチル化し、希Ｈ２ ＳＯ４中で脱ベンジリデン
した後、リン酸エステル化し、グルコースー６〜リン酸
話導体［■］ｉｆ一■ シａ［を低温で酸触媒下ベンズ
アルデヒドと反応させペンジリデン化する． ｉｉ−■ ペンジリデン体のフリーの一〇Ｈ基をアセチル化する． ■一■ アセチル体をメタノール中でＰｄ触媒下、Ｈ２
ガスにより接触還元を行ない、シ５１８１訪導体［１を
得る． 罰５’ｙ．．−Ｘｍ４体。８よ］〔■〕１ｉ−■ Ｄ−
ガラクトースをＨｃｉガスを含むベンジルアルコール中
で反応させ、ペンジルグリコシド化する． ｉｆ一■ ペンジルグルコシド体を酸触媒下ベンズアル
デヒドと反応させ、４．６−ペンジリデン化する． ｉｌ−■ ４．６−ペンジリデン体をピリジン／無水酢酸でアセチ
ル化し、希Ｈ２ ＳＯ４中で脱ベンジリデンすることに
より、ガラクトース誘導体［Ｘ］を得る。
（ｉ ｉ ｉ） オキナゾリン体［Ｖ］と糖膀導体［
■］［■］ ［ＤＣ］ ［Ｘ］とのカップリングに
よる各種基貢の合成 ［オキサゾリン体［Ｖ］とフルクトース誘導体［■］と
のカップリング］ オキサゾリン体［Ｖ］とフルクトース誘導体［■］とを
ドライ塩化メチレンに溶かし、ｐ一トルエンスルホン酸
存在下５０〜７０℃で加熱反応し、カップリングさせる
．次に、メタノール中、Ｎ ａ Ｏ Ｃ Ｈ ３と反応
させ脱アセチル化し、Ｐｄ触媒による接触還元にてベン
ジル基をはずし目的とするＮＡｃＨ誘導体［）ａ］を得
る． 〔１〕 ［オキサゾリン体［Ｖ］とグルコース−６−リン酸誘導
体［■］とのカップリング］ オキサゾリン体［Ｖ］とグルコース−６−リン酸誘導体
［■］とをドライ塩化メチレンに溶かし．Ｐ−トルエン
スルホン酸存在下５０〜７０ｔで加熱反応してカップリ
ングさせる．次いで、メタノール中、ＮａＯＣＨｓと反
応させて脱アセチル化し、Ｐｄによる接触還元にてベン
ジル基をはずすことにより目的とするＮＡｃＨ話導体［
Ｘ［Ｉ］（ＩＩＩ） ［オキサゾリン体［Ｖ］とショｍ誘導体［ＩＸ］とのカ
ップリング］ オキサゾリン体［Ｖ］とシヨ糖誘導体［ＩＸ］とをドラ
イ塩化メチレンに溶かし、ｐ一トルエンスルホン酸存在
下５０〜７０℃で加熱反応してカップリングさせる．次
いで、メタノール中、ＮａＯＣＨ２と反応させて脱アセ
チル化し、目的とするＮＡｃＨ話導体［鶏］を得る． ［オキサゾリン体［Ｖ］とガラクトース誘導体［Ｘ］と
のカップリング］ オキサゾリン体［Ｖ］とガラクトース話導体［Ｘ］とを
ドライ塩化メチレンに溶かし、ｐ一トルエンスルホン酸
存在下５０〜７０℃で加熱反応してカップリングさせる
．次いで、メタノール中、ＮａＯＣＨｚと反応させて脱
アセチル化し、次にＰｄ触媒による接触還元にてベンジ
ル基をはずし、目的とするＮＡｃＨ話導体［ＸＩＶ］を
得る．ＡＣ ＣＩＴＹＩ 本発明のＮＡＧ活性測定用基質は、このようにして製造
される［）ａ］〜［Ｘｌｌｌ！］等のＮＡＣＨ認導体を
含むものである。
■］［■］ ［ＤＣ］ ［Ｘ］とのカップリングに
よる各種基貢の合成 ［オキサゾリン体［Ｖ］とフルクトース誘導体［■］と
のカップリング］ オキサゾリン体［Ｖ］とフルクトース誘導体［■］とを
ドライ塩化メチレンに溶かし、ｐ一トルエンスルホン酸
存在下５０〜７０℃で加熱反応し、カップリングさせる
．次に、メタノール中、Ｎ ａ Ｏ Ｃ Ｈ ３と反応
させ脱アセチル化し、Ｐｄ触媒による接触還元にてベン
ジル基をはずし目的とするＮＡｃＨ誘導体［）ａ］を得
る． 〔１〕 ［オキサゾリン体［Ｖ］とグルコース−６−リン酸誘導
体［■］とのカップリング］ オキサゾリン体［Ｖ］とグルコース−６−リン酸誘導体
［■］とをドライ塩化メチレンに溶かし．Ｐ−トルエン
スルホン酸存在下５０〜７０ｔで加熱反応してカップリ
ングさせる．次いで、メタノール中、ＮａＯＣＨｓと反
応させて脱アセチル化し、Ｐｄによる接触還元にてベン
ジル基をはずすことにより目的とするＮＡｃＨ話導体［
Ｘ［Ｉ］（ＩＩＩ） ［オキサゾリン体［Ｖ］とショｍ誘導体［ＩＸ］とのカ
ップリング］ オキサゾリン体［Ｖ］とシヨ糖誘導体［ＩＸ］とをドラ
イ塩化メチレンに溶かし、ｐ一トルエンスルホン酸存在
下５０〜７０℃で加熱反応してカップリングさせる．次
いで、メタノール中、ＮａＯＣＨ２と反応させて脱アセ
チル化し、目的とするＮＡｃＨ話導体［鶏］を得る． ［オキサゾリン体［Ｖ］とガラクトース誘導体［Ｘ］と
のカップリング］ オキサゾリン体［Ｖ］とガラクトース話導体［Ｘ］とを
ドライ塩化メチレンに溶かし、ｐ一トルエンスルホン酸
存在下５０〜７０℃で加熱反応してカップリングさせる
．次いで、メタノール中、ＮａＯＣＨｚと反応させて脱
アセチル化し、次にＰｄ触媒による接触還元にてベンジ
ル基をはずし、目的とするＮＡｃＨ話導体［ＸＩＶ］を
得る．ＡＣ ＣＩＴＹＩ 本発明のＮＡＧ活性測定用基質は、このようにして製造
される［）ａ］〜［Ｘｌｌｌ！］等のＮＡＣＨ認導体を
含むものである。
そして、本発明のＮＡＧ活性測定方法は、このようなＮ
ＡｃＨ話導体を含むＮＡＧ活性測定用基質と試料とを接
触させ、遊離する糖又は糖の誘導体を測定して試料中の
ＮＡＧ活性を測定する方法である。
ＡｃＨ話導体を含むＮＡＧ活性測定用基質と試料とを接
触させ、遊離する糖又は糖の誘導体を測定して試料中の
ＮＡＧ活性を測定する方法である。
以下に、本発明による各基質の測定メカニズムについて
具体的に説明する。
具体的に説明する。
■ 前記一般式［１１中、ＧがフルクトースであるＮＡ
ｃＨ話導体（ ｒＮＡＧ−ＦＪと略す。）を基質として
用いる場合． ＮＡＧ−Ｆに試料中のＮＡＧが作用するとフルクトース
（Ｆ）が遊離する．ここで遊離したフルクトースを例え
ばマンニトールデヒドロゲナーゼ（ＭＤＨ）やソルビト
ールデヒドロゲナーゼ（ＳＤＨ）とＮＡＤＨ共存下に反
応させることによりＮＡＤを生成させ、その吸光度の減
少変化を測定することによりフルクトースの量を定量的
に測定することができる。
ｃＨ話導体（ ｒＮＡＧ−ＦＪと略す。）を基質として
用いる場合． ＮＡＧ−Ｆに試料中のＮＡＧが作用するとフルクトース
（Ｆ）が遊離する．ここで遊離したフルクトースを例え
ばマンニトールデヒドロゲナーゼ（ＭＤＨ）やソルビト
ールデヒドロゲナーゼ（ＳＤＨ）とＮＡＤＨ共存下に反
応させることによりＮＡＤを生成させ、その吸光度の減
少変化を測定することによりフルクトースの量を定量的
に測定することができる。
ＮＡＤ｝Ｉ ＮＡＤ
ＮＡＩ１｝ｌ ＮＡｆｌ
また、遊離したフルクトースを例えばフルクトースデヒ
ドロゲナーゼと反応させることにより、下記スキームの
通り、ＮＡＤ−ＮＡＤＨの吸光度変化又はＰＭＳ （フ
ェナジンメトサルフエート）のような電子伝達物質を介
し、ニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）等の発色（
ホルマザン発色系）を測定することにより、フルクトー
スの量を定量的に測定することかでぎる． ネルマザン ＮＢＴ ■ 前記一般式［Ｉ］中、Ｇがグルコース−６−リン酸
であるＮＡｃＨ話導体（ ｒＮＡＧ−Ｇ６ＰＪと略す．
）を基質として用いる場合．ＮＡＧ−０６Ｐに試料中の
ＮＡＧが作用するとグルコースー６−リン酸（０６Ｐ）
が遊離する．ここで遊離した０６Ｐを例えばグルコース
−６−リン酸デヒドロゲナーゼとＮＡＤ （Ｐ）共存下
に反応させると、前述と同様に生成するＮＡＤ （Ｐ）
Ｈの吸光度の増加を測定し、０６Ｐの量を定量的に測定
することができる．■ 前記一般式［１１中、Ｇがシヨ
糖であるＮＡｃＨ誘導体（ ｒＮＡＧ−Ｓｕｃ」と略す
．）を基質として用いる場合． ＮＡＧ−Ｓｕｃに試料中のＮＡＧが作用してシコ糖（Ｓ
ｕｃ）が遊離する．ここで遊離したシヨ糖をα−グルコ
シダーゼと反応させるとグルコースとフルクトースとに
解離するので、このフルクトースは前述のＮＡＤＨ−Ｎ
ＡＤ又はＮＡＤ−ＮＡＤＨの反応系、及びＮＢＴ等を用
いたホルマザン発色系を用い定量することができる．？
ＡＧ ＮＡＧ−Ｓｕｃ■遊＊ Ｓｕｃ α−グルコシダ一一 Ｓｕｃ−−一−−−−−一−一−→Ｇ＋ＦＮＡＤＨ ＮＡＤ 或いは、遊離したシヨ糖をシュクロースホスホリラーゼ
存在下でリン酸と反応させるとグルコース−１−リン酸
（ＧＩＰ）とフルクトースを生じ、このフルクトースは
前述と同様なＮＡＤＨ−ＮＡＤ又はＮＡＤ−ＮＡＤＨ及
びＮＢＴ等を用いたホルマザン発色系を用い測定できる
．，ａｍ＋！Ｃ／酸 シ・クａ−ｍｙ，ホリラ’
ＧＩＰ＋Ｆ■ 前記一般式［１］中、Ｇがガラ
クトースであるＮＡｃＨ誘導体（ ｒＮＡＧ−Ｇａｌｌ
」と略す。）を基質として用いる場合。
ドロゲナーゼと反応させることにより、下記スキームの
通り、ＮＡＤ−ＮＡＤＨの吸光度変化又はＰＭＳ （フ
ェナジンメトサルフエート）のような電子伝達物質を介
し、ニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）等の発色（
ホルマザン発色系）を測定することにより、フルクトー
スの量を定量的に測定することかでぎる． ネルマザン ＮＢＴ ■ 前記一般式［Ｉ］中、Ｇがグルコース−６−リン酸
であるＮＡｃＨ話導体（ ｒＮＡＧ−Ｇ６ＰＪと略す．
）を基質として用いる場合．ＮＡＧ−０６Ｐに試料中の
ＮＡＧが作用するとグルコースー６−リン酸（０６Ｐ）
が遊離する．ここで遊離した０６Ｐを例えばグルコース
−６−リン酸デヒドロゲナーゼとＮＡＤ （Ｐ）共存下
に反応させると、前述と同様に生成するＮＡＤ （Ｐ）
Ｈの吸光度の増加を測定し、０６Ｐの量を定量的に測定
することができる．■ 前記一般式［１１中、Ｇがシヨ
糖であるＮＡｃＨ誘導体（ ｒＮＡＧ−Ｓｕｃ」と略す
．）を基質として用いる場合． ＮＡＧ−Ｓｕｃに試料中のＮＡＧが作用してシコ糖（Ｓ
ｕｃ）が遊離する．ここで遊離したシヨ糖をα−グルコ
シダーゼと反応させるとグルコースとフルクトースとに
解離するので、このフルクトースは前述のＮＡＤＨ−Ｎ
ＡＤ又はＮＡＤ−ＮＡＤＨの反応系、及びＮＢＴ等を用
いたホルマザン発色系を用い定量することができる．？
ＡＧ ＮＡＧ−Ｓｕｃ■遊＊ Ｓｕｃ α−グルコシダ一一 Ｓｕｃ−−一−−−−−一−一−→Ｇ＋ＦＮＡＤＨ ＮＡＤ 或いは、遊離したシヨ糖をシュクロースホスホリラーゼ
存在下でリン酸と反応させるとグルコース−１−リン酸
（ＧＩＰ）とフルクトースを生じ、このフルクトースは
前述と同様なＮＡＤＨ−ＮＡＤ又はＮＡＤ−ＮＡＤＨ及
びＮＢＴ等を用いたホルマザン発色系を用い測定できる
．，ａｍ＋！Ｃ／酸 シ・クａ−ｍｙ，ホリラ’
ＧＩＰ＋Ｆ■ 前記一般式［１］中、Ｇがガラ
クトースであるＮＡｃＨ誘導体（ ｒＮＡＧ−Ｇａｌｌ
」と略す。）を基質として用いる場合。
ＮＡＧ−Ｇａｊ！に試料中のＮＡＧが作用してガラクト
ース（Ｇａｊ２）が遊離する．ここで遊離したガラクト
ースはガラクトースオキシダーゼが存在すると溶存酸素
と反応し、ガラクトーへキソジアルドースとＨ２ ０２
を生じる。更にＨ２ ０２をベルオキシダーゼ存在下に
水素供与物質（ｒＨＤＪと略す．）と反応させ色素を生
成させる．ここで生成した色素の吸光度を測定すること
により、遊離したガラクトースの量を定量的に測定する
ことができる．ここで用いるＨＤとしては、例えばジメ
チルアニリン、ジエチルアニリンなどのアニリン銹導体
、４−クロロフェノール、２．４−ジブロムフェノール
などのフェノール話導体、４−アミノアンチビリンなど
のアンチピリ？話導体、３−メチル−２−ベンゾチアゾ
リノンなどのペンゾチアゾリノン誘導体、ナフトール誘
導体、ヒドロキシキノリン話導体、モしてロイコ型色素
などのべルオキシダーゼの基質として一般に用いられる
ものを単独もしくは二種以上組み合わせることにより使
用することができる。
ース（Ｇａｊ２）が遊離する．ここで遊離したガラクト
ースはガラクトースオキシダーゼが存在すると溶存酸素
と反応し、ガラクトーへキソジアルドースとＨ２ ０２
を生じる。更にＨ２ ０２をベルオキシダーゼ存在下に
水素供与物質（ｒＨＤＪと略す．）と反応させ色素を生
成させる．ここで生成した色素の吸光度を測定すること
により、遊離したガラクトースの量を定量的に測定する
ことができる．ここで用いるＨＤとしては、例えばジメ
チルアニリン、ジエチルアニリンなどのアニリン銹導体
、４−クロロフェノール、２．４−ジブロムフェノール
などのフェノール話導体、４−アミノアンチビリンなど
のアンチピリ？話導体、３−メチル−２−ベンゾチアゾ
リノンなどのペンゾチアゾリノン誘導体、ナフトール誘
導体、ヒドロキシキノリン話導体、モしてロイコ型色素
などのべルオキシダーゼの基質として一般に用いられる
ものを単独もしくは二種以上組み合わせることにより使
用することができる。
ＮＡＧ
ＮＡＧ−ＧａｊＺ−一遊＠Ｇａｌｌ
Ｇａｕ＋０２ （溶存， ｉ５１ｈ−）Ｐｒシ
９−ｆ ガラ外−、キ肋肺一ユ や■２０２Ｈ２
０２ ＋ Ｈ Ｄ 仝ｕトサー色素＋ Ｈ２ ０以上
の通り、ＮＡＧ−Ｆ％ＨＡＧ−ＳｕｃはＮＡＤＨ−ＮＡ
Ｄ若しくはＮＡＤ−ＮＡＤＨの反応系及びホルマザン発
色系を、ＮＡＧ−Ｇ６ＰはＮＡＤ （Ｐ）→ＮＡＤ （
Ｐ）Ｈの反応系を、ＮＡＧ−ＧａｆＬの場合にはベルオ
キシダーゼの基質を用いた色素の発色をＮＡＧ活性測定
に利用する。このようなことから、本発明によれば、従
来用いられているフェノール系誘導体の吸光度を測定す
る方法に比べて、試料中の共存物質や測定条件による影
響は殆ど受けず精度の高い測定が可能である． ところで、従来のフェノール系誘導体の吸光度を測定す
る系では試験紙法への適用が困難であったが、本発明の
基質では反応系を色素発色に屈導できるため、試験紙法
への適用が可能である。
９−ｆ ガラ外−、キ肋肺一ユ や■２０２Ｈ２
０２ ＋ Ｈ Ｄ 仝ｕトサー色素＋ Ｈ２ ０以上
の通り、ＮＡＧ−Ｆ％ＨＡＧ−ＳｕｃはＮＡＤＨ−ＮＡ
Ｄ若しくはＮＡＤ−ＮＡＤＨの反応系及びホルマザン発
色系を、ＮＡＧ−Ｇ６ＰはＮＡＤ （Ｐ）→ＮＡＤ （
Ｐ）Ｈの反応系を、ＮＡＧ−ＧａｆＬの場合にはベルオ
キシダーゼの基質を用いた色素の発色をＮＡＧ活性測定
に利用する。このようなことから、本発明によれば、従
来用いられているフェノール系誘導体の吸光度を測定す
る方法に比べて、試料中の共存物質や測定条件による影
響は殆ど受けず精度の高い測定が可能である． ところで、従来のフェノール系誘導体の吸光度を測定す
る系では試験紙法への適用が困難であったが、本発明の
基質では反応系を色素発色に屈導できるため、試験紙法
への適用が可能である。
ＮＡＧ−Ｆ，ＮＡＧ−Ｇ６Ｐ，ＮＡＧ−Ｓｕｓは前述し
た通りＮＡＤＨ−ＮＡＤ若しくはＮＡＤ（Ｐ）−ＮＡＤ
（Ｐ）Ｈ反応系で検出するものである。この反応系に
ジアホラーゼ（又はＰＭＳ）及びニトロブルーテトラゾ
リウム（Ｎ ＢＴ）等を共存させることによりホルマザ
ン発色系に導くことができ、ＮＢＴ等の還元による発色
を測定することにより試験紙法でのＮＡＧ活性を測定す
ることができる． また、ＮＡＧ−Ｇａｕけ前述の通り色素発色によりＮＡ
Ｇ活性を測定するものである。
た通りＮＡＤＨ−ＮＡＤ若しくはＮＡＤ（Ｐ）−ＮＡＤ
（Ｐ）Ｈ反応系で検出するものである。この反応系に
ジアホラーゼ（又はＰＭＳ）及びニトロブルーテトラゾ
リウム（Ｎ ＢＴ）等を共存させることによりホルマザ
ン発色系に導くことができ、ＮＢＴ等の還元による発色
を測定することにより試験紙法でのＮＡＧ活性を測定す
ることができる． また、ＮＡＧ−Ｇａｕけ前述の通り色素発色によりＮＡ
Ｇ活性を測定するものである。
なお、測定条件は通常のＮＡＧ至適ｐＨで試料と本基質
を反応させ、そのままｐＨを変える必要もなく、容易に
検出することかでぎる。
を反応させ、そのままｐＨを変える必要もなく、容易に
検出することかでぎる。
［実施例］
以下に実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが
、本発明はその要旨を超えない限り、以下の実施例に限
定されるものではない。
、本発明はその要旨を超えない限り、以下の実施例に限
定されるものではない。
実施例１ （ＮＡｃＨ話導体の製造）
まず、１−チオ誘導体を経由しないでＮ−アセチルグル
コサミンのオキサゾリン体を合成し、フルクトース誘導
体と高温でカップリング（β−グルコシル化）させ、本
発明に係るＮＡｃＨｉ導体であるＮＡＧ−Ｆ ［Ｘ［］
を合成した例を示す。
コサミンのオキサゾリン体を合成し、フルクトース誘導
体と高温でカップリング（β−グルコシル化）させ、本
発明に係るＮＡｃＨｉ導体であるＮＡＧ−Ｆ ［Ｘ［］
を合成した例を示す。
（ｉ） Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミンのオキサ
ゾリン体の合成 まず、塩酸グルコサミン３．３ｇを無水酢酸ナトリウム
３．３ｇ、無水酢酸６５ｍ℃と共に３時間攪拌しながら
還流させた。反応液を２ＪＺの氷水にあけ６時間攪拌後
、析出物を吸引口過別し、十分水洗後、真空乾燥した。
ゾリン体の合成 まず、塩酸グルコサミン３．３ｇを無水酢酸ナトリウム
３．３ｇ、無水酢酸６５ｍ℃と共に３時間攪拌しながら
還流させた。反応液を２ＪＺの氷水にあけ６時間攪拌後
、析出物を吸引口過別し、十分水洗後、真空乾燥した。
次にシソ力オーブンカラム（クロロホルム／エーテル）
で精製し、テトラアセチルーＮ−アセチル−Ｄ−グルコ
サミン［ａ］を収率９５％で得た。
で精製し、テトラアセチルーＮ−アセチル−Ｄ−グルコ
サミン［ａ］を収率９５％で得た。
次に［ａ］ ３．２ｇを１００ｍＩＬの塩化メチレンに
溶かし、塩化第二鉄１．６ｇを加え室温にて３時間反応
させた。反応液を水洗し、硫酸ナトリウムで乾燥後、エ
バポレートし、シロップ状物を得た。シリカオープンカ
ラム（クロロホルム／工一テル）で精製し、Ｄ−グルコ
サミンのオキサゾリン体［ｂ］を収率１６％（［ａ］か
らの収率）で得た． （ｉ ｉ） フルクトース誘導体の合成Ｄ−フルクト
ース１４．４ｇにアセトン２８０ｍ１、濃硫酸１．４ｍ
ｕを加え、室温にて２時間攪拌した。氷冷した水酸化ナ
トリウム水溶液を加えて中和し、エバポレーターでアセ
トンを留去後塩化メチレンで抽出し、抽出液を２回水洗
後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾液をエバポレー
ターで濃縮後、エーテル／ペンタンより再結晶し、白色
粉末としてジイソプ口ピリデンフルクトース［Ｃコを収
率４５％で得た。
溶かし、塩化第二鉄１．６ｇを加え室温にて３時間反応
させた。反応液を水洗し、硫酸ナトリウムで乾燥後、エ
バポレートし、シロップ状物を得た。シリカオープンカ
ラム（クロロホルム／工一テル）で精製し、Ｄ−グルコ
サミンのオキサゾリン体［ｂ］を収率１６％（［ａ］か
らの収率）で得た． （ｉ ｉ） フルクトース誘導体の合成Ｄ−フルクト
ース１４．４ｇにアセトン２８０ｍ１、濃硫酸１．４ｍ
ｕを加え、室温にて２時間攪拌した。氷冷した水酸化ナ
トリウム水溶液を加えて中和し、エバポレーターでアセ
トンを留去後塩化メチレンで抽出し、抽出液を２回水洗
後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾液をエバポレー
ターで濃縮後、エーテル／ペンタンより再結晶し、白色
粉末としてジイソプ口ピリデンフルクトース［Ｃコを収
率４５％で得た。
［ｃ］ ０．５ｇにメタノール１６ｍλ、１０％Ｈ２
ＳＯ４ １．７５ｍｊ２を加え、密栓して室温で１．５
時間放置した。Ｋ２ＣＯ３を加えて中和後濾過し、濃縮
乾固した。真空にて完全に乾燥後、ピリジン１０ｍｊ２
と無水酢酸１０ｍ１を加え、室温にて一晩攪拌後、濃縮
乾固した．塩化メチレン２５ｍｌで３回抽出、水洗２回
し、塩化カルシウムで脱水後、濃縮乾固した。水／メタ
ノールから再結晶し、イソブロビリデンートリアセチル
ーＤ一フルクトース［ｄ］を白色粉末として収率８３％
（［Ｃ］からの収率）で得た． ＫＯ８４．２ｇを粉砕し、ジオキサン４ｍｊｌ、塩化ベ
ンジル５ｍＩｌを加え、これに［ｄｌを加え１１５℃オ
イルバスで攪拌しながら還流した．２時間後室温に冷却
し、水を加えて一晩攪拌した．塩化メチレンで抽出し、
水洗３回し、硫酸マグネシウムで乾燥後、エバポレート
した．さらに減圧蒸留してベンジルアルコールを除き、
シリカオーブンカラム（ベンゼン／エーテル）で精製後
、シロップ状物としてイソブロピリデンートリベンジル
ーＤ−フルクトース［ｅ］］を収率７０％（［ｄ］から
の収率）で得た． ［ｅコ９．７ｇに８０％酢酸を加え９５℃で２時間加熱
した。エバポレーターで濃縮し、乾燥後、シリカオーブ
ンカラム（ベンゼン／エーテル）で精製し、シロップ状
物としてトリベンジルーＤ−フルクトース［■］を収率
４４％（［ｅ］からの収率）で得た。
ＳＯ４ １．７５ｍｊ２を加え、密栓して室温で１．５
時間放置した。Ｋ２ＣＯ３を加えて中和後濾過し、濃縮
乾固した。真空にて完全に乾燥後、ピリジン１０ｍｊ２
と無水酢酸１０ｍ１を加え、室温にて一晩攪拌後、濃縮
乾固した．塩化メチレン２５ｍｌで３回抽出、水洗２回
し、塩化カルシウムで脱水後、濃縮乾固した。水／メタ
ノールから再結晶し、イソブロビリデンートリアセチル
ーＤ一フルクトース［ｄ］を白色粉末として収率８３％
（［Ｃ］からの収率）で得た． ＫＯ８４．２ｇを粉砕し、ジオキサン４ｍｊｌ、塩化ベ
ンジル５ｍＩｌを加え、これに［ｄｌを加え１１５℃オ
イルバスで攪拌しながら還流した．２時間後室温に冷却
し、水を加えて一晩攪拌した．塩化メチレンで抽出し、
水洗３回し、硫酸マグネシウムで乾燥後、エバポレート
した．さらに減圧蒸留してベンジルアルコールを除き、
シリカオーブンカラム（ベンゼン／エーテル）で精製後
、シロップ状物としてイソブロピリデンートリベンジル
ーＤ−フルクトース［ｅ］］を収率７０％（［ｄ］から
の収率）で得た． ［ｅコ９．７ｇに８０％酢酸を加え９５℃で２時間加熱
した。エバポレーターで濃縮し、乾燥後、シリカオーブ
ンカラム（ベンゼン／エーテル）で精製し、シロップ状
物としてトリベンジルーＤ−フルクトース［■］を収率
４４％（［ｅ］からの収率）で得た。
（ｉ ｉ ｉ） オキサゾリン体とフルクトース誘導
体とのカップリング（β−グリコシル化） ［ｂ］ ２．１ｇと［■］２．０ｇを無水トルエンとニ
トロメタン１：１混液５０ｍｌに溶かし、１１０〜１２
０℃で５０分加熱した。冷却後、クロロホルム２００ｍ
ｊＺを加え、冷却した炭酸水素ナトリウム水溶液及び水
で洗浄し、有機層を乾燥後、エバポレーターにて濃縮し
、シロップ状物をクロロホルム／エーテルより再結晶し
、［ｆ］を収率１２％（［ｂ］からの収率）で得た。
体とのカップリング（β−グリコシル化） ［ｂ］ ２．１ｇと［■］２．０ｇを無水トルエンとニ
トロメタン１：１混液５０ｍｌに溶かし、１１０〜１２
０℃で５０分加熱した。冷却後、クロロホルム２００ｍ
ｊＺを加え、冷却した炭酸水素ナトリウム水溶液及び水
で洗浄し、有機層を乾燥後、エバポレーターにて濃縮し
、シロップ状物をクロロホルム／エーテルより再結晶し
、［ｆ］を収率１２％（［ｂ］からの収率）で得た。
［ｆ］ ０．２ｇにメタノール４ｍＪＺ１０．５ＮＮａ
ＯＭｅ０．０８ｍＩＬを加え、密栓して室温で３０分間
攪拌した．イオン交換樹脂Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲ−
１２０（Ｈ”）で中和し、濃縮乾固し［ｇ］を収率７８
％（［ｆ］からの収率）で得た。
ＯＭｅ０．０８ｍＩＬを加え、密栓して室温で３０分間
攪拌した．イオン交換樹脂Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲ−
１２０（Ｈ”）で中和し、濃縮乾固し［ｇ］を収率７８
％（［ｆ］からの収率）で得た。
次にＰｄＣＪ！２１．４ｇをｄｉｓｔ．メタノール６０
ｍＩＬ中でＨ２ガス気流下１．５時間攪拌し、Ｐｄｂｌ
ａｃｋとした。この触媒を用いｄｉｓｔ．メタノール６
０ｍｊ！と共に［ｇ］を２．０ｇ加え、室温で３７時間
Ｈ２ガス気流下で攪拌した．Ｐｄｂｌａｃｋをｔ［ｊｌ
し、エバポレーターで濃縮後、シリカオーブンカラム（
７０％イソブロバノール／酢酸エチル＝２／１）で精製
し白色粉末として下記物性値の［ＸＩ］を収率９０％（
［ｇ］からの収率）で得た。
ｍＩＬ中でＨ２ガス気流下１．５時間攪拌し、Ｐｄｂｌ
ａｃｋとした。この触媒を用いｄｉｓｔ．メタノール６
０ｍｊ！と共に［ｇ］を２．０ｇ加え、室温で３７時間
Ｈ２ガス気流下で攪拌した．Ｐｄｂｌａｃｋをｔ［ｊｌ
し、エバポレーターで濃縮後、シリカオーブンカラム（
７０％イソブロバノール／酢酸エチル＝２／１）で精製
し白色粉末として下記物性値の［ＸＩ］を収率９０％（
［ｇ］からの収率）で得た。
従って、［Ｘ［］のＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンか
らの収率は１．３％であった。
らの収率は１．３％であった。
工ＬユＪロ１ｉｊ
１．ＮＭＲスペクトル
１−１ ’Ｈ−ＮＭＲスペクトル
’Ｈ−ＮＭＲ δ”４： ： ２．０７”（３８
，ｓ，ＮＡｃ）１−２ ”Ｃ−ＮＭＲスペクトル Ｃ−ｔ ７２．９５ １３Ｃ−ＮＭＲ化学シフト［δ（ｐｐｍ） ｆｒｏｍ
ＴＭＳ”Ｃ−２ （：−３ Ｇ−４
Ｃ−５ Ｃ−６９８．６８ ６９．２１
７０．８５ ７０．３３ ６４．８４］ Ｃ−１’ Ｃ−２’ Ｃ−３゜ Ｃ−４゜ Ｃ−５
゜ Ｃ−６’ ＮＣＯＣＨ３ ＮＣＯＣＩｓ１０２．
８８ ５６．８０ ７４．９５ ７１．１１
７７．１６ ６１．９３ １７８．１５ ２３．
５０２．元素分析 （計算値） Ｃ：４３．８６， Ｈ：８．５７， Ｎ
：３．６５（＊）（実ＩＪ｛ａ） Ｃ：４３．７８，
Ｈ：８．６２， Ｎ：３．８１（＊）３．施光度 ［
ａ ］ Ｉ！０− ５８．７°（Ｃ−０．８９，Ｈ２
０）実施例２（１−チ才８導体を経由するＮＡｃＨ誘導
体の製造例） （ｉ） Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミンのオキサゾ
リン体の合成 ［ａ］の合成は実施例１と同様に行なった．次に［ａ］
２．０ｇを塩化アセチル２０ｍＡに溶かし、ドライア
イスーメタノールで冷やしなからＨＣｊＺガスを２０分
通した。密栓して１日放置した後、濃縮乾固した。次に
、ジメチルジチオカルバミン酸ナトリウム３．６９ｇと
アセトン４０ｍｊ２を加え、１５分間遠流した。濃縮後
、塩化メチレンで抽出し、水洗、脱水、乾燥後、白色粉
末として［ｈ］を収率９５％で得た． ［ｈ］ １．２ｇにＨｇＣＩＬｚ ３．９ １ ｇ，Ｈ
ｇ０３．９２ｇを加えてアセトニトリル５０ｍｊ２中で
２０分攪拌した後、濾過し、濾液を濃縮乾固した。これ
に塩化メチレンと飽和ＫＩ水溶液を加え、分液ロートに
て塩化メチレン層を分取し、水洗、脱水、濃縮し、白色
粉末として［ｂ］を収率９７％（［ｈ］からの収率）で
得た．（ｉ ｉ） フルクトース誘導体の合成実施例
１と同じ操作にて［■］を得た．（ｔｉｔ） オキ
サゾリン体とフルクトース誘導体とのカップリング（β
−グリコシド化） ［ｂ］ １．３８ｇと［■コ２。４０ｇをｐ一トルエン
スルホン酸の０．ＯＩＭｄｒｙ塩化メチレン溶液に溶か
し、厳重に密栓して６０℃で２２時間攪拌した．これに
ピリジンを適当量加えて濃縮し、シリカオープン力ラム
（クロロホルム／アセトン）にて精製し、［ｆ］を収率
８５％（［ｂ］からの収率）で得た。次に、比較例１と
同様にして［ｆ］−［ｇ］−［ＸＩ］の手順で［ＸＩ］
を得た。このものの物性値は比較例１で得たものと同様
であった。
，ｓ，ＮＡｃ）１−２ ”Ｃ−ＮＭＲスペクトル Ｃ−ｔ ７２．９５ １３Ｃ−ＮＭＲ化学シフト［δ（ｐｐｍ） ｆｒｏｍ
ＴＭＳ”Ｃ−２ （：−３ Ｇ−４
Ｃ−５ Ｃ−６９８．６８ ６９．２１
７０．８５ ７０．３３ ６４．８４］ Ｃ−１’ Ｃ−２’ Ｃ−３゜ Ｃ−４゜ Ｃ−５
゜ Ｃ−６’ ＮＣＯＣＨ３ ＮＣＯＣＩｓ１０２．
８８ ５６．８０ ７４．９５ ７１．１１
７７．１６ ６１．９３ １７８．１５ ２３．
５０２．元素分析 （計算値） Ｃ：４３．８６， Ｈ：８．５７， Ｎ
：３．６５（＊）（実ＩＪ｛ａ） Ｃ：４３．７８，
Ｈ：８．６２， Ｎ：３．８１（＊）３．施光度 ［
ａ ］ Ｉ！０− ５８．７°（Ｃ−０．８９，Ｈ２
０）実施例２（１−チ才８導体を経由するＮＡｃＨ誘導
体の製造例） （ｉ） Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミンのオキサゾ
リン体の合成 ［ａ］の合成は実施例１と同様に行なった．次に［ａ］
２．０ｇを塩化アセチル２０ｍＡに溶かし、ドライア
イスーメタノールで冷やしなからＨＣｊＺガスを２０分
通した。密栓して１日放置した後、濃縮乾固した。次に
、ジメチルジチオカルバミン酸ナトリウム３．６９ｇと
アセトン４０ｍｊ２を加え、１５分間遠流した。濃縮後
、塩化メチレンで抽出し、水洗、脱水、乾燥後、白色粉
末として［ｈ］を収率９５％で得た． ［ｈ］ １．２ｇにＨｇＣＩＬｚ ３．９ １ ｇ，Ｈ
ｇ０３．９２ｇを加えてアセトニトリル５０ｍｊ２中で
２０分攪拌した後、濾過し、濾液を濃縮乾固した。これ
に塩化メチレンと飽和ＫＩ水溶液を加え、分液ロートに
て塩化メチレン層を分取し、水洗、脱水、濃縮し、白色
粉末として［ｂ］を収率９７％（［ｈ］からの収率）で
得た．（ｉ ｉ） フルクトース誘導体の合成実施例
１と同じ操作にて［■］を得た．（ｔｉｔ） オキ
サゾリン体とフルクトース誘導体とのカップリング（β
−グリコシド化） ［ｂ］ １．３８ｇと［■コ２。４０ｇをｐ一トルエン
スルホン酸の０．ＯＩＭｄｒｙ塩化メチレン溶液に溶か
し、厳重に密栓して６０℃で２２時間攪拌した．これに
ピリジンを適当量加えて濃縮し、シリカオープン力ラム
（クロロホルム／アセトン）にて精製し、［ｆ］を収率
８５％（［ｂ］からの収率）で得た。次に、比較例１と
同様にして［ｆ］−［ｇ］−［ＸＩ］の手順で［ＸＩ］
を得た。このものの物性値は比較例１で得たものと同様
であった。
本実施例の方法では、前記実施例１に比べて収率が良好
であり、〔Ｘ［］のＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンか
らの収率は５２．５％であった。
であり、〔Ｘ［］のＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンか
らの収率は５２．５％であった。
実施例３（本発明の基質によるＮＡＧ活性の測定）被検
液中のＮＡＧ活性を下記の試薬と操作法によって測定し
た。
液中のＮＡＧ活性を下記の試薬と操作法によって測定し
た。
試 薬
ＮＡＧ−Ｆ ４ｍＬＩｏＩＬ／ｆｌ塩化ナトリ
ウム ２００ ｍ ｍｏｎ ／ ＩＬＭＴＴ”
３．９ １Ｉｌｍａｉｌ／ＩｔＴｒ
ｉｔｏｎ Ｘ−１００ ０．５％１−ｍ
ｅｔｈｏｘｙ ＰＭＳ Ｏ．１５ ａａ ｍ
ｏｊｌ ／ ｊ２（＊ ： ３− （４．５−ジメチル
−２チアゾリル）−２．５−ジフェニル−２Ｈテトラゾ
リウムブロマイド） 操作法 上記試薬２．７ｍＪ！を３７℃で予備加温し、５７０ｎ
ｍにて吸光度変化のないことを確認の上、試料０．３ｍ
Ａを加え十分に攪拌し、５７０ｎｍにて吸光度変化を測
定した。２００ｍＵ／ｍｊ２−ＮＡＧをこの方法で加え
た時の反応曲線を第１図に示した。また、各種活性試料
を測定したときの反応速度との関係を第２図に示した。
ウム ２００ ｍ ｍｏｎ ／ ＩＬＭＴＴ”
３．９ １Ｉｌｍａｉｌ／ＩｔＴｒ
ｉｔｏｎ Ｘ−１００ ０．５％１−ｍ
ｅｔｈｏｘｙ ＰＭＳ Ｏ．１５ ａａ ｍ
ｏｊｌ ／ ｊ２（＊ ： ３− （４．５−ジメチル
−２チアゾリル）−２．５−ジフェニル−２Ｈテトラゾ
リウムブロマイド） 操作法 上記試薬２．７ｍＪ！を３７℃で予備加温し、５７０ｎ
ｍにて吸光度変化のないことを確認の上、試料０．３ｍ
Ａを加え十分に攪拌し、５７０ｎｍにて吸光度変化を測
定した。２００ｍＵ／ｍｊ２−ＮＡＧをこの方法で加え
た時の反応曲線を第１図に示した。また、各種活性試料
を測定したときの反応速度との関係を第２図に示した。
実施例４（本発明の基質によるＮＡＧ活性の測定）被検
液中のＮＡＧ活性を下記の試薬と操作法によって測定し
た。
液中のＮＡＧ活性を下記の試薬と操作法によって測定し
た。
試 薬
ＮＡＧ−Ｆ ４ ｍ ｍｏｂ／１２Ｔｒｉｔｏ
ｎ Ｘ−１００ ０．５％塩化ナトリウム
２００ ｔｍ ｍｏＩＬ／ ＩｔＮＴ Ｂ
３．９ ＩＩｌｔｒｒｏｌｌ／ＩＩ１−メ
トキシＰＭＳ Ｏ．１５ ｒａ ＩＩｌａＩＬ／
１１操作法 上記試薬を濾紙へ浸潤させ凍結乾燥した。このように製
作した濾紙にＮＡＧ活性既知溶液を添加後、温度２３℃
で反射強度計（中心波長５３５ｎｍ）にて反応タイムコ
ースを求め、結果を第３図に示した。
ｎ Ｘ−１００ ０．５％塩化ナトリウム
２００ ｔｍ ｍｏＩＬ／ ＩｔＮＴ Ｂ
３．９ ＩＩｌｔｒｒｏｌｌ／ＩＩ１−メ
トキシＰＭＳ Ｏ．１５ ｒａ ＩＩｌａＩＬ／
１１操作法 上記試薬を濾紙へ浸潤させ凍結乾燥した。このように製
作した濾紙にＮＡＧ活性既知溶液を添加後、温度２３℃
で反射強度計（中心波長５３５ｎｍ）にて反応タイムコ
ースを求め、結果を第３図に示した。
実施例５（本発明の基質によるＮＡＧ活性の測定）被検
液中のＮＡＧ活性を下記の試薬と操作法によって測定し
た。
液中のＮＡＧ活性を下記の試薬と操作法によって測定し
た。
試 薬
ＮＡＧ−０６ Ｐ ４ ｍ ｍａｉｌ／ｆＬ塩化
ナトリウム ２００ ｍ ｍｏｉ／ ｆＬＮＡ
Ｄ ４ｍｍｏｊＺ／ｊ！ 操作法 上記試薬２．４ｍｌＬを３７℃で予備加温し、３４０ｎ
ｍにて吸光度変化のないことを確認の上攪拌し、３４０
ｎｍにて吸光度の増加速度を測定した，２００ｍＵ／ｍ
ｊ２−ＮＡＧをこの方法で加えた時の反応曲線を第４図
に示した。
ナトリウム ２００ ｍ ｍｏｉ／ ｆＬＮＡ
Ｄ ４ｍｍｏｊＺ／ｊ！ 操作法 上記試薬２．４ｍｌＬを３７℃で予備加温し、３４０ｎ
ｍにて吸光度変化のないことを確認の上攪拌し、３４０
ｎｍにて吸光度の増加速度を測定した，２００ｍＵ／ｍ
ｊ２−ＮＡＧをこの方法で加えた時の反応曲線を第４図
に示した。
以上の結果から、本発明の基質によりＮＡＧ活性を精度
良く測定することができ、しかも試験紙法にも有効であ
ることが明らかである。
良く測定することができ、しかも試験紙法にも有効であ
ることが明らかである。
［発明の効果〕
以上詳述した通り、請求項（１）、（２）のＮＡｃＨ誘
導体によれば、ＮＡＧ活性測定用基質として有用な新規
化合物が提供される。このようなＮＡｃＨ誘導体は、請
求項（３）の方法により容易かつ効率的に高収率で製造
することができる． しかして、請求項（１）、（２）のＮＡｃＨｉ導体を含
む請求項（４）のＮＡＧ活性測定用基質及びこの基質を
用いる請求項（５）のＮＡＧ活性測定方法によれば、 ■ 従来の基質では困難であったＮＡＧのレートアッセ
イが可能とされる。
導体によれば、ＮＡＧ活性測定用基質として有用な新規
化合物が提供される。このようなＮＡｃＨ誘導体は、請
求項（３）の方法により容易かつ効率的に高収率で製造
することができる． しかして、請求項（１）、（２）のＮＡｃＨｉ導体を含
む請求項（４）のＮＡＧ活性測定用基質及びこの基質を
用いる請求項（５）のＮＡＧ活性測定方法によれば、 ■ 従来の基質では困難であったＮＡＧのレートアッセ
イが可能とされる。
■ 下記■〜■の理由から、測定精度が高い．■ 従来
の基質では測定する吸光度の半値幅がせまく、感度、精
度の高い分析装置が必要で、装置によって値にばらつき
があったが、本基質では装置の影響を殆ど受けない。
の基質では測定する吸光度の半値幅がせまく、感度、精
度の高い分析装置が必要で、装置によって値にばらつき
があったが、本基質では装置の影響を殆ど受けない。
■ 内因性物質（ヘモグロビン、ビリルビン、界面活性
物質等）の影響を受けな い。
物質等）の影響を受けな い。
■ ｐＨ、温度変化の影響を受けない。
■ 従来の基質では困難であった試験紙法への適用が可
能とされる。
能とされる。
等の効果が奏され、ＮＡＧ活性を容易にしかも高精度に
て測定することが可能とされる。
て測定することが可能とされる。
第１図及び第２図は実施例３の結果を示すグラフ、第３
図は実施例４の結果を示すグラフ、第４図は実施例５の
結果を示すグラフである。
図は実施例４の結果を示すグラフ、第４図は実施例５の
結果を示すグラフである。
Claims (5)
- （１）下記一般式［ I ］で表されるＮ−アセチル−Ｄ
−ヘキソサミン誘導体。 ▲数式、化学式、表等があります▼・・・・・［ I ］ ［ I ］式中、Ａ＿１、Ａ＿２はいずれか一方が水素で
他方がＯＨを示し、 Ｇは糖の誘導体又はグルコースを除く糖を示す。 - （２）Ｇがフルクトース、グルコース−６−リン酸、シ
ョ糖又はガラクトースである特許請求の範囲第１項に記
載のＮ−アセチル−Ｄ−ヘキソサミン誘導体。 - （３）Ｄ−ヘキソサミンをアセチル化した後、チオール
系化合物と反応させてＮ−アセチル−Ｄ−ヘキソサミン
−１−チオ誘導体とし、次いでオキサゾリン体化して得
られる化合物と、糖の誘導体又はグルコースを除く糖と
を２０〜９０℃の条件下に反応させることを特徴とする
特許請求の範囲第１項又は第２項に記載のＮ−アセチル
−Ｄ−ヘキソサミン誘導体の製造方法。 - （４）特許請求の範囲第１項又は第２項に記載のＮ−ア
セチル−Ｄ−ヘキソサミン誘導体を含むＮ−アセチル−
β−Ｄ−ヘキソサミニダーゼ活性測定用基質。 - （５）特許請求の範囲第４項に記載のＮ−アセチル−β
−Ｄ−ヘキソサミニダーゼ活性測定用基質と試料とを接
触させ、遊離する糖又は糖の誘導体を測定して試料中の
Ｎ−アセチル−β−Ｄ−ヘキソサミニダーゼ活性を測定
することを特徴とするＮ−アセチル−β−Ｄ−ヘキソサ
ミニダーゼ活性測定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP684690A JPH03215492A (ja) | 1990-01-16 | 1990-01-16 | Ｎ―アセチル―Ｄ―ヘキソサミン誘導体及びその製造方法並びにＮ―アセチル―β―Ｄ―ヘキソサミニダーゼ活性測定用基質及び測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP684690A JPH03215492A (ja) | 1990-01-16 | 1990-01-16 | Ｎ―アセチル―Ｄ―ヘキソサミン誘導体及びその製造方法並びにＮ―アセチル―β―Ｄ―ヘキソサミニダーゼ活性測定用基質及び測定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03215492A true JPH03215492A (ja) | 1991-09-20 |
Family
ID=11649607
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP684690A Pending JPH03215492A (ja) | 1990-01-16 | 1990-01-16 | Ｎ―アセチル―Ｄ―ヘキソサミン誘導体及びその製造方法並びにＮ―アセチル―β―Ｄ―ヘキソサミニダーゼ活性測定用基質及び測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH03215492A (ja) |
-
1990
- 1990-01-16 JP JP684690A patent/JPH03215492A/ja active Pending
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