JPS60252464A - ヒドロラ−ゼ用の基質およびそれらの製法 - Google Patents
ヒドロラ−ゼ用の基質およびそれらの製法Info
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- JPS60252464A JPS60252464A JP60071334A JP7133485A JPS60252464A JP S60252464 A JPS60252464 A JP S60252464A JP 60071334 A JP60071334 A JP 60071334A JP 7133485 A JP7133485 A JP 7133485A JP S60252464 A JPS60252464 A JP S60252464A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はヒドロラーゼ測定用の基質、それらの製法、ヒ
ドロラーゼ測定へのそれらの使用およびその目的に適す
る薬剤に関する。
ドロラーゼ測定へのそれらの使用およびその目的に適す
る薬剤に関する。
ヒドロラーゼの検出または測定は種々の疾患の診断およ
び経過監視にとって重要である。例えばアミラーゼ測定
は膵臓診断にとってそして酸フオスファター七は前立腺
癌の診断に〔概要はアールージエー惨バッジエン（Ｒ，
Ｊ、Ｈａｓｃｈｅｎ）氏の「エンザイムダイアグノステ
ィック（Ｅｎｚｙｍ−ｃＬｉａｇｎｏ ｅｔｉｋ ）
Ｊ、ゲスタフ−フィッシャー（ＧｕｅｔａｖＦｉｓｃｈ
θｒ）出版、シュトットガルト、１９７０年参照〕、エ
ステラーゼは白血球の指標として（ヨーロッパ特許出願
ＥＰ−Ａ −１２，９５７号）またはホスファターゼま
たはガラクトシダーゼは免疫学的測定法のための指示薬
として酵素免疫検定において重要である。
び経過監視にとって重要である。例えばアミラーゼ測定
は膵臓診断にとってそして酸フオスファター七は前立腺
癌の診断に〔概要はアールージエー惨バッジエン（Ｒ，
Ｊ、Ｈａｓｃｈｅｎ）氏の「エンザイムダイアグノステ
ィック（Ｅｎｚｙｍ−ｃＬｉａｇｎｏ ｅｔｉｋ ）
Ｊ、ゲスタフ−フィッシャー（ＧｕｅｔａｖＦｉｓｃｈ
θｒ）出版、シュトットガルト、１９７０年参照〕、エ
ステラーゼは白血球の指標として（ヨーロッパ特許出願
ＥＰ−Ａ −１２，９５７号）またはホスファターゼま
たはガラクトシダーゼは免疫学的測定法のための指示薬
として酵素免疫検定において重要である。
７以下の至適ｐＨを有するヒドロラーゼの測定は目下の
ところ一般に２点測定により測光的に実施されている。
ところ一般に２点測定により測光的に実施されている。
２点測定は一般に動力学的に実施されうる測定よりも長
い時間を必要としそしてその上広く使用される自動分析
に使用できないので費用のかかる手動測定しか可能でな
い。さらに、これらは動力学的方法より正確さが劣りそ
して検分困難で、このことが誤った結果を導きうる。
い時間を必要としそしてその上広く使用される自動分析
に使用できないので費用のかかる手動測定しか可能でな
い。さらに、これらは動力学的方法より正確さが劣りそ
して検分困難で、このことが誤った結果を導きうる。
酸性の至適ｐＨを有するヒドロラーゼの少数の、動力学
的に実施されうる測定は、例えば西ドイツ特許第２，１
１５，７４８号に記載された酸ホスファターゼについて
のような数段階反応を必要とするか、または例えば４−
メチルーウンベリ７工ロンの誘導体のような螢光発色基
質（ｆ’ｌｕｏｒｏ−ｇｅｎｉｃ日ｕｂｓｔｒａｔｅ
）を使用する。しかしながら数段階反応に試薬中、なか
んずく助酵素中の不純物による測定の妨害、および生物
学的液体の成分との競合反応を来たす。さらに、この方
法は価格を増大させる。螢光性物質は特殊な装置でのみ
測定でき、標準化が困難でありそして種々の影響の下に
妨害されがちであり、このことが正確さを低くしそして
誤った結果を生じる。その上螢光発色基質は慣用に必要
な飽和濃度においては酵素活性の測定には使用できない
、何故ならこの条件下では反応生成物の螢光は基質の吸
光によりかなり消光するからである。適当な結果を得る
には骨の折れる補正および標準化操作が必要であろう。
的に実施されうる測定は、例えば西ドイツ特許第２，１
１５，７４８号に記載された酸ホスファターゼについて
のような数段階反応を必要とするか、または例えば４−
メチルーウンベリ７工ロンの誘導体のような螢光発色基
質（ｆ’ｌｕｏｒｏ−ｇｅｎｉｃ日ｕｂｓｔｒａｔｅ
）を使用する。しかしながら数段階反応に試薬中、なか
んずく助酵素中の不純物による測定の妨害、および生物
学的液体の成分との競合反応を来たす。さらに、この方
法は価格を増大させる。螢光性物質は特殊な装置でのみ
測定でき、標準化が困難でありそして種々の影響の下に
妨害されがちであり、このことが正確さを低くしそして
誤った結果を生じる。その上螢光発色基質は慣用に必要
な飽和濃度においては酵素活性の測定には使用できない
、何故ならこの条件下では反応生成物の螢光は基質の吸
光によりかなり消光するからである。適当な結果を得る
には骨の折れる補正および標準化操作が必要であろう。
ｐ−ニトロフェニル−α−マルト−ｙ’キｙ：、トｖン
例えばテストマー／ｌ／（Ｔθ日切ｍａｒ ）［Ｆ］−
アミラーゼ、ベーリングベルケ（Ｂｅｈｒｉｎｇｗｅｒ
ｋｅ） ＡＧ社、ドイツ連邦共和国、を用いるα−アミ
ラーゼ活性の測定法はすでに知られており、そこでは測
定は動力学的にｐＨ７で実施され、これは遊離されたニ
トロフェノールの吸光率がｐＨ値に強く依存しそして試
験が妨害され易くなるとい５欠点を有する。さらに、ニ
トロフェニル基が色原体である場合感度の約５０９ｂが
失われる、なぜならニトロフェノールのモル吸光率はｐ
Ｈ７で例工ばｐＨ９におけるより半分の大きさしかない
からである。しかしながらｐＨ９ではアミラーゼの活性
測定ができない、何故ならこれはこの条件下でその活性
を失うからである。
例えばテストマー／ｌ／（Ｔθ日切ｍａｒ ）［Ｆ］−
アミラーゼ、ベーリングベルケ（Ｂｅｈｒｉｎｇｗｅｒ
ｋｅ） ＡＧ社、ドイツ連邦共和国、を用いるα−アミ
ラーゼ活性の測定法はすでに知られており、そこでは測
定は動力学的にｐＨ７で実施され、これは遊離されたニ
トロフェノールの吸光率がｐＨ値に強く依存しそして試
験が妨害され易くなるとい５欠点を有する。さらに、ニ
トロフェニル基が色原体である場合感度の約５０９ｂが
失われる、なぜならニトロフェノールのモル吸光率はｐ
Ｈ７で例工ばｐＨ９におけるより半分の大きさしかない
からである。しかしながらｐＨ９ではアミラーゼの活性
測定ができない、何故ならこれはこの条件下でその活性
を失うからである。
さらにこれ迄のすべての動力学的に実施されうるアミラ
ーゼ測定（西ドイツ特許公開公報第２７５．２０１号、
同第２，７５１，３７２号、同第２，８２２，３６４号
、同第３，０００，２９２および日本特許第１１へ１５
８号参照）は１種類またはそれ以上の助酵素を必要とす
る数段階反応である。このことはすでに前記した欠点と
結びついている。
ーゼ測定（西ドイツ特許公開公報第２７５．２０１号、
同第２，７５１，３７２号、同第２，８２２，３６４号
、同第３，０００，２９２および日本特許第１１へ１５
８号参照）は１種類またはそれ以上の助酵素を必要とす
る数段階反応である。このことはすでに前記した欠点と
結びついている。
生物学的液体中の痕跡成分の測定においては検出系の感
度が決定的に重要である。従って近年放射線免疫検定に
加え酵素免疫検定が開発された。それは指示薬反応に例
えばガラクトシダーゼを使用して人間の血清中における
痕跡量の蛋白質の検出を許容するものである。しかしな
がらこれ迄の方法はすべて１〜数時間なる培養時間を要
するという欠点を有する。指示薬反応の感度がより太き
いと培養時間が減少されうるしまたは同じ培養時間で感
度が対応して高められうる・ エステラーゼは白血球の存在についての診断上のパラメ
ーターである。現今、特異性と並んで２〜３分の反応時
間後にはすでに結果が読みとられうるためにはまた高度
の感度も必要である。例えば試験片のような眼で見て判
定可能な試験系では人間の眼にとって最適な色表示（赤
、緑、青）を生ずる色素が必要である。ニトロフェノー
ルまたはニド、ロアニリンの黄色はこの点で非常に不都
合である。従って達成しうる感度は基質の色原体分子部
分に決定的に依存するものである。
度が決定的に重要である。従って近年放射線免疫検定に
加え酵素免疫検定が開発された。それは指示薬反応に例
えばガラクトシダーゼを使用して人間の血清中における
痕跡量の蛋白質の検出を許容するものである。しかしな
がらこれ迄の方法はすべて１〜数時間なる培養時間を要
するという欠点を有する。指示薬反応の感度がより太き
いと培養時間が減少されうるしまたは同じ培養時間で感
度が対応して高められうる・ エステラーゼは白血球の存在についての診断上のパラメ
ーターである。現今、特異性と並んで２〜３分の反応時
間後にはすでに結果が読みとられうるためにはまた高度
の感度も必要である。例えば試験片のような眼で見て判
定可能な試験系では人間の眼にとって最適な色表示（赤
、緑、青）を生ずる色素が必要である。ニトロフェノー
ルまたはニド、ロアニリンの黄色はこの点で非常に不都
合である。従って達成しうる感度は基質の色原体分子部
分に決定的に依存するものである。
現在の技術水準の色原体基質は生成する色（黄色）のゆ
えにまたはそれらの反応性が低いゆえに眼で見ることに
よる判定には適さない。従って例えばすべて非常に良好
に肉眼で識別しうる色を生ずるヨーロッパ特許第０．０
０７，４０７号（スルホフタレン）、同第０．００８，
４３８号（アゾ色素）、同第０．０１２，９５７号（イ
ンドキシル〕または西ドイツ特許第３．０［１５，８４
５号（インドアニリン）記載の色原体アミノ酸エステル
を用いて、発色に要求される約２分以内で白血球下限２
〜５／μｔなる感度が得られる。しかしながら診断には
これよりはるかに近い限界値が望ましい。この基質にお
いては促進剤を付加的に添加することにより感度が高め
られる。
えにまたはそれらの反応性が低いゆえに眼で見ることに
よる判定には適さない。従って例えばすべて非常に良好
に肉眼で識別しうる色を生ずるヨーロッパ特許第０．０
０７，４０７号（スルホフタレン）、同第０．００８，
４３８号（アゾ色素）、同第０．０１２，９５７号（イ
ンドキシル〕または西ドイツ特許第３．０［１５，８４
５号（インドアニリン）記載の色原体アミノ酸エステル
を用いて、発色に要求される約２分以内で白血球下限２
〜５／μｔなる感度が得られる。しかしながら診断には
これよりはるかに近い限界値が望ましい。この基質にお
いては促進剤を付加的に添加することにより感度が高め
られる。
米国特許第３．５７Ｆ！、、４６５号にはインドキシル
およびレゾルフィン型の色原体を有するエステ２−ゼ基
質の螢光が記載されている、しかしながらこのものは適
当な装置（螢光針）による判定においてのみ使用できる
。この特許の第５欄第６１〜６５行には、相当するイン
ドキシル誘導体はレゾルフィン誘導体よりかなり速かに
分解される、という興味ある記載がある。それゆえ前記
したことと関連して、レゾルフィンエステルは例えば白
血球からのエステラーゼの検出においてまた、さらに低
い感度さえ有するであろうと予想される。
およびレゾルフィン型の色原体を有するエステ２−ゼ基
質の螢光が記載されている、しかしながらこのものは適
当な装置（螢光針）による判定においてのみ使用できる
。この特許の第５欄第６１〜６５行には、相当するイン
ドキシル誘導体はレゾルフィン誘導体よりかなり速かに
分解される、という興味ある記載がある。それゆえ前記
したことと関連して、レゾルフィンエステルは例えば白
血球からのエステラーゼの検出においてまた、さらに低
い感度さえ有するであろうと予想される。
前記特許に記載される基質のもう一つの欠点はそれが他
のエステラーゼに対するその反応性Ｋｌる。コリンエス
テラーゼ、アシラーゼ、リパーゼまたは醗ホスファター
ゼのようなエステラーゼのみならずキモトリプシンのよ
うなプロテアーゼもレゾルフィンアセテートまたはブチ
レートと反応する（前記米国特許第■表参照）。
のエステラーゼに対するその反応性Ｋｌる。コリンエス
テラーゼ、アシラーゼ、リパーゼまたは醗ホスファター
ゼのようなエステラーゼのみならずキモトリプシンのよ
うなプロテアーゼもレゾルフィンアセテートまたはブチ
レートと反応する（前記米国特許第■表参照）。
それゆえ、ヒドロラーゼの動力学的に自動分析器を用い
て実施されうる測定を可能となすかまたは酵素免疫検定
にとって感度の良い指示薬反応が構成されうるためには
、できるだけ低いｐＫａ 値およびできるだけ高いアニ
オンのモル吸光率を有するアニオン性色素（色素として
はここでは３Ｄ［Ｊ〜７６０μｍに吸収を有する化合物
と理解される〕が酵素的加水分解により遊離されるとこ
ろの酵素反応にとって感度の良い指示薬を入手するとい
う課題が存在した１、さらに、１種類の酵素とのみ特異
的に反応し従って生物学的液体中に存在するような酵素
混合物中における酵素または酵素群の特異的な測定を許
容する酵素基質を入手するというｎＭがあった。
て実施されうる測定を可能となすかまたは酵素免疫検定
にとって感度の良い指示薬反応が構成されうるためには
、できるだけ低いｐＫａ 値およびできるだけ高いアニ
オンのモル吸光率を有するアニオン性色素（色素として
はここでは３Ｄ［Ｊ〜７６０μｍに吸収を有する化合物
と理解される〕が酵素的加水分解により遊離されるとこ
ろの酵素反応にとって感度の良い指示薬を入手するとい
う課題が存在した１、さらに、１種類の酵素とのみ特異
的に反応し従って生物学的液体中に存在するような酵素
混合物中における酵素または酵素群の特異的な測定を許
容する酵素基質を入手するというｎＭがあった。
今、驚くべきことに、一般式
〔上式中ＡはＡ”−０−Ｂの加水分解後のその吸光が測
光測定される酸性ｐＫａ値を有する複素環式化合物Ａ−
ＯＨのイオンＡ−０′″の残基な表わし、一方Ｂはある
種の酵素との反応にとってその化合物を特異的となす化
合物Ｂ−ＯＨの残基であり、そしてその際Ａ−ＯＨは ａ、一般式■ １：１大 （式中Ｒ１は０Ｈ１ＮＯ２またはハロゲンそしてＲ３、
Ｒ４およびＲ５は）ｉまたはＮｏ２であることができそ
の際最高２個のＮＯ２が存在する）を有する化合物、 ｂ、一般式■ ３ （式中Ｂ１はＨまたは１〜１２個好ましくは１〜３個の
炭素原子を有するアルキルそしてＲ２、Ｒ３およびＲ４
はＨまたはＮＯ２であることができ、その場合１個また
は２個のＮＯ２が存在する）を有する化合物、 Ｃ・ 一般式■ １ （式中Ｒ１は０または電子対、Ｒ２は０、ＳまたはＮ（
ＣＨ３）２そしてＲ３はＯまたはＳであることができる
）を有する化合物、または ｄ、一般式■ Ｒ噌 （式中Ｂ１はアリール好ましくはフェニル、ＣＮまたは
１〜１２個好ましくは１〜５個の炭素原子を有するアル
キルであることができる）を有する化合物、 であり、モしてＢ−ＯＨは糖または糖誘導体特にグルコ
ース、マルトデキストリン、ガンクトース、グルクロン
酸、Ｎ−アセチルグルコサミンまたはフコース、アミノ
酸またはオリゴペプチド（これらはそのそれぞれが保護
基特にトルエンスルホニル基またはカルボベンジルオキ
シ（ＣＢＺ）基を担持しうる）特にＮ−トシルアラニン
またはＣＢＺ−グリシン、または無機酸特に燐酸または
硫酸である〕を有する化合物がヒドロラーゼ測定にとっ
て高い検出感度を有する基質であることが見出された。
光測定される酸性ｐＫａ値を有する複素環式化合物Ａ−
ＯＨのイオンＡ−０′″の残基な表わし、一方Ｂはある
種の酵素との反応にとってその化合物を特異的となす化
合物Ｂ−ＯＨの残基であり、そしてその際Ａ−ＯＨは ａ、一般式■ １：１大 （式中Ｒ１は０Ｈ１ＮＯ２またはハロゲンそしてＲ３、
Ｒ４およびＲ５は）ｉまたはＮｏ２であることができそ
の際最高２個のＮＯ２が存在する）を有する化合物、 ｂ、一般式■ ３ （式中Ｂ１はＨまたは１〜１２個好ましくは１〜３個の
炭素原子を有するアルキルそしてＲ２、Ｒ３およびＲ４
はＨまたはＮＯ２であることができ、その場合１個また
は２個のＮＯ２が存在する）を有する化合物、 Ｃ・ 一般式■ １ （式中Ｒ１は０または電子対、Ｒ２は０、ＳまたはＮ（
ＣＨ３）２そしてＲ３はＯまたはＳであることができる
）を有する化合物、または ｄ、一般式■ Ｒ噌 （式中Ｂ１はアリール好ましくはフェニル、ＣＮまたは
１〜１２個好ましくは１〜５個の炭素原子を有するアル
キルであることができる）を有する化合物、 であり、モしてＢ−ＯＨは糖または糖誘導体特にグルコ
ース、マルトデキストリン、ガンクトース、グルクロン
酸、Ｎ−アセチルグルコサミンまたはフコース、アミノ
酸またはオリゴペプチド（これらはそのそれぞれが保護
基特にトルエンスルホニル基またはカルボベンジルオキ
シ（ＣＢＺ）基を担持しうる）特にＮ−トシルアラニン
またはＣＢＺ−グリシン、または無機酸特に燐酸または
硫酸である〕を有する化合物がヒドロラーゼ測定にとっ
て高い検出感度を有する基質であることが見出された。
本発明はまた、式Ａ−０−Ｂおよび前記した定義を有す
る化合物、それらの製法、ならびにヒドロラーゼ測定へ
のそれらの使用にも関する。
る化合物、それらの製法、ならびにヒドロラーゼ測定へ
のそれらの使用にも関する。
至適ｐＨ７以下を有するヒドロ２−ゼの動力学的測定に
は、その加水分解によりｐＫａ値７値下以下する色素が
遊離される基質が特に適当である。使用される色素はす
でにｐＨ７以下で強い色を示しそしてそれに相当して測
光的にまたは肉眼により感度よ（検出されうる。
は、その加水分解によりｐＫａ値７値下以下する色素が
遊離される基質が特に適当である。使用される色素はす
でにｐＨ７以下で強い色を示しそしてそれに相当して測
光的にまたは肉眼により感度よ（検出されうる。
低いｐＫａ値を有するアグリコンすなわち比較的強い酸
性のアグリコンを有するグリコシドを合成する可能性に
対しては偏見があった、何故ならかかるグリコシドにと
っては低い熱力学的安定性が予期されるからである。
性のアグリコンを有するグリコシドを合成する可能性に
対しては偏見があった、何故ならかかるグリコシドにと
っては低い熱力学的安定性が予期されるからである。
かかる化合物は知られているように通常のグリコシドお
よびエステルよりも熱力学的に相当不安定な無水物の特
性を有する傾向がある。
よびエステルよりも熱力学的に相当不安定な無水物の特
性を有する傾向がある。
しかしながら驚いたことに、低いｐＫａ値を有する前記
した複素環式物質の誘導体は、これ迄グリコシドおよび
エステルの合成に用いられた同素環式化合物例えば２，
４−ジニトロフェニルガラクトシドと比較して、満足で
きる収率で得られるに充分な動力学的安定性を有するこ
とが見出された。
した複素環式物質の誘導体は、これ迄グリコシドおよび
エステルの合成に用いられた同素環式化合物例えば２，
４−ジニトロフェニルガラクトシドと比較して、満足で
きる収率で得られるに充分な動力学的安定性を有するこ
とが見出された。
これら化合物のもう一つの驚（べき性質は比較的シャー
プな、部分的には非常に高くそして長波長の吸収帯を有
することであり、このことがこれら化合物を広く用いら
れる吸収測光測定についての指示薬として特に適合させ
ている。
プな、部分的には非常に高くそして長波長の吸収帯を有
することであり、このことがこれら化合物を広く用いら
れる吸収測光測定についての指示薬として特に適合させ
ている。
かつまた、たとえ色素成分が天然の類似の基質成分（二
糖類または殿粉中のアグリコン部分、エステルのアルコ
ール成分）と何ら類似性を有しないとしても、前記した
化合物はこれらがその基質として使用されるべきヒドロ
ラーゼにより特に速かに分解されることは事実である。
糖類または殿粉中のアグリコン部分、エステルのアルコ
ール成分）と何ら類似性を有しないとしても、前記した
化合物はこれらがその基質として使用されるべきヒドロ
ラーゼにより特に速かに分解されることは事実である。
このことは予期されていなかった。
一般式Ａ−０−Ｂを有する基質は三段階で調製される。
（１） ＡＯＨ部分、すなわち色素の調製、（２） Ｂ
ＯＨ部分、すなわち炭水化物または炭水化物誘導体また
は酸の調製、 （３）特に炭水化物および炭水化物誘導体において所望
の立体異性を有する基質を生ずる方法によるＡＯＨおよ
びＢＯＨからの基質Ａ、−０−Ｂの調製。
ＯＨ部分、すなわち炭水化物または炭水化物誘導体また
は酸の調製、 （３）特に炭水化物および炭水化物誘導体において所望
の立体異性を有する基質を生ずる方法によるＡＯＨおよ
びＢＯＨからの基質Ａ、−０−Ｂの調製。
知られた色素は下記の方法により調製されうる、すなわ
ち、ニトロピリジン誘導体およびクマリン誘導体は一般
に硫酸溶液中でＨＮｏ５／ａ２ｓｏ４混合物を滴下する
ことにより相当する出発物質を約Ｄ℃でニトロ化するこ
とによる〔シャー（Ｓｈ、ａｈ）およびメータ（Ｍｅｈ
ｔａ）氏の「ジエー・インティアン・ケム・ツク（Ｊ、
工ｎｄｉａｎ Ｃｈｅｍ、８ｏｃ、）Ｊ（１９５４年）
、第７８４頁、ズツクマン（Ｂｅ ｃｈｍａｎ ）およ
びオーベルミューラ−（Ｏｂｅｒｍｕｌ’１ｅｒ）氏の
「ベル（Ｂａｒ −） Ｊ第３４巻（１９０１年ン第６
６０頁、シャクラワルテイ（Ｃｈａｋｒａｗａｒｔｉ
）氏の［ジエー・インティアン・ケム・ツク（Ｊ、工ｎ
ｄｉａｎ Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、）ベル（Ｂｅｒ −）ｊ
第３４巻（１９（１１年）第６６０頁、シャクラワルテ
イ氏の［ジエー・インディアン・ヶムーソク（Ｊ、工ｎ
ｄｉａＨＣｈｅｍ、Ｓｏｃ、）Ｊ第１２巻（１９５５年
）第７９１〜７９５頁 、＜ ）ン（Ｂｕｒｔｏｎ）氏
他ノ［ジエー・ケム・ツク・ベリン（Ｊ、Ｃｈｅｍ。
ち、ニトロピリジン誘導体およびクマリン誘導体は一般
に硫酸溶液中でＨＮｏ５／ａ２ｓｏ４混合物を滴下する
ことにより相当する出発物質を約Ｄ℃でニトロ化するこ
とによる〔シャー（Ｓｈ、ａｈ）およびメータ（Ｍｅｈ
ｔａ）氏の「ジエー・インティアン・ケム・ツク（Ｊ、
工ｎｄｉａｎ Ｃｈｅｍ、８ｏｃ、）Ｊ（１９５４年）
、第７８４頁、ズツクマン（Ｂｅ ｃｈｍａｎ ）およ
びオーベルミューラ−（Ｏｂｅｒｍｕｌ’１ｅｒ）氏の
「ベル（Ｂａｒ −） Ｊ第３４巻（１９０１年ン第６
６０頁、シャクラワルテイ（Ｃｈａｋｒａｗａｒｔｉ
）氏の［ジエー・インティアン・ケム・ツク（Ｊ、工ｎ
ｄｉａｎ Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、）ベル（Ｂｅｒ −）ｊ
第３４巻（１９（１１年）第６６０頁、シャクラワルテ
イ氏の［ジエー・インディアン・ヶムーソク（Ｊ、工ｎ
ｄｉａＨＣｈｅｍ、Ｓｏｃ、）Ｊ第１２巻（１９５５年
）第７９１〜７９５頁 、＜ ）ン（Ｂｕｒｔｏｎ）氏
他ノ［ジエー・ケム・ツク・ベリン（Ｊ、Ｃｈｅｍ。
Ｓｏｃ、Ｐｅｒｉｎ月Ｉｆ（１９７２年）第１９５３−
１９５８頁、ブリグネ／ｌ／ （Ｂｒｉｇｎｅｌｌ）氏
他の［ジエー・ケム・ツク（Ｊ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、月
（Ｂ） （１９６８年）第１４７７頁、デセレムス（ａ
ｅ Ｓｅｌｅｍｓ）氏の「ジュー０オルグ・ケム（Ｊ、
Ｏｒｇ、Ｃｈｅｍ、 ）Ｊ第３３巻（１９６８年）第４
７８頁、タリク（Ｔａｌｉｋ）およびタリク（Ｔａ′Ｌ
ｉｋ）、「ロクツイニキ・ケミイ（Ｒｏｃｚｉｎｉｋｉ
Ｃｈｅｍｉｉ）、アン−ツク・ケム・ボロノルム（Ａ
ｎｎ、Ｓｏｃ、Ｃｈｅｍ・Ｐ０１０ｎＯｒｕｍ月第４０
巻（１９６６年）第１１８７頁参照〕、レサズリン（３
Ｈ−７−ヒトロキシフエノキサジンー３−オンの１０−
オキシド）はニエツキー（Ｎｉθｔｚｋｉ ）氏他の「
ベル・デル・ドイトーケムＳゲス（Ｂｅｒ、ｃｌｅｒ
Ｄｅｕｔ、Ｃｈｅｍ、（）ｅｓ、）Ｊ第２２巻（１８８
９年）第５０２０頁の記載により、レゾルフィンＣ３Ｆ
ｉ−７−ヒトロキシフエノキサジンー３−オン）はレサ
ズリンを水素化硼素ナトリウムで還元することにより、
６−ヒドロキシ−９−フェニル−３Ｈ−−？サンテンー
５−オンはナセン（Ｎａｔｈｅｎ）氏の「ジエー・アメ
ル・ケム・ツク（Ｊ、Ａｍｅｒ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、月
第４７巻（１９２５年）第１０７９頁の記載により、そ
して他のフェノキサジンおよびキサンテノンはシュドツ
カ（Ｓｔｕｚｋａ）氏他ノ「コレクション・チェコスロ
ブ・ケム・コミュン（Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｚｅａ
ｈｏｓｌｏｖ、Ｃｈｅｍ、Ｃｏａｍｕｎ、）Ｊ第６４巻
（１９６９年）第２２１頁の記載またはケールマン（Ｋ
ｅｈｒｍａｎ ）およびデ・ゴットラウ（ｄθＧｏｔｔ
ｒａｕ）氏の「ベル（Ｂｅｒ月第５８巻第２５７５頁（
１９０５年）の記載による。
１９５８頁、ブリグネ／ｌ／ （Ｂｒｉｇｎｅｌｌ）氏
他の［ジエー・ケム・ツク（Ｊ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、月
（Ｂ） （１９６８年）第１４７７頁、デセレムス（ａ
ｅ Ｓｅｌｅｍｓ）氏の「ジュー０オルグ・ケム（Ｊ、
Ｏｒｇ、Ｃｈｅｍ、 ）Ｊ第３３巻（１９６８年）第４
７８頁、タリク（Ｔａｌｉｋ）およびタリク（Ｔａ′Ｌ
ｉｋ）、「ロクツイニキ・ケミイ（Ｒｏｃｚｉｎｉｋｉ
Ｃｈｅｍｉｉ）、アン−ツク・ケム・ボロノルム（Ａ
ｎｎ、Ｓｏｃ、Ｃｈｅｍ・Ｐ０１０ｎＯｒｕｍ月第４０
巻（１９６６年）第１１８７頁参照〕、レサズリン（３
Ｈ−７−ヒトロキシフエノキサジンー３−オンの１０−
オキシド）はニエツキー（Ｎｉθｔｚｋｉ ）氏他の「
ベル・デル・ドイトーケムＳゲス（Ｂｅｒ、ｃｌｅｒ
Ｄｅｕｔ、Ｃｈｅｍ、（）ｅｓ、）Ｊ第２２巻（１８８
９年）第５０２０頁の記載により、レゾルフィンＣ３Ｆ
ｉ−７−ヒトロキシフエノキサジンー３−オン）はレサ
ズリンを水素化硼素ナトリウムで還元することにより、
６−ヒドロキシ−９−フェニル−３Ｈ−−？サンテンー
５−オンはナセン（Ｎａｔｈｅｎ）氏の「ジエー・アメ
ル・ケム・ツク（Ｊ、Ａｍｅｒ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、月
第４７巻（１９２５年）第１０７９頁の記載により、そ
して他のフェノキサジンおよびキサンテノンはシュドツ
カ（Ｓｔｕｚｋａ）氏他ノ「コレクション・チェコスロ
ブ・ケム・コミュン（Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｚｅａ
ｈｏｓｌｏｖ、Ｃｈｅｍ、Ｃｏａｍｕｎ、）Ｊ第６４巻
（１９６９年）第２２１頁の記載またはケールマン（Ｋ
ｅｈｒｍａｎ ）およびデ・ゴットラウ（ｄθＧｏｔｔ
ｒａｕ）氏の「ベル（Ｂｅｒ月第５８巻第２５７５頁（
１９０５年）の記載による。
以下においてシアノルフィン（ｃｙａｎｏｒｕｆｉｎ）
トして表示される６Ｈ−６−ヒドロキシ−９・−シアノ
キサンチン−６−オンは新規である。これは実施例記載
の方法により調製された。
トして表示される６Ｈ−６−ヒドロキシ−９・−シアノ
キサンチン−６−オンは新規である。これは実施例記載
の方法により調製された。
同様に７−ヒドロキシ−３−ニトロクマリンも新規であ
り、このものはニトロスチレン誘導体の閉環により調製
された。このものは融点１９２〜１９８℃を有しそして
ｐＨ８以上で最大吸収は４５ Ｄ ｎｍに、そしてｐＨ
６以下で最大吸収は３９０ｎｍに存在する。
り、このものはニトロスチレン誘導体の閉環により調製
された。このものは融点１９２〜１９８℃を有しそして
ｐＨ８以上で最大吸収は４５ Ｄ ｎｍに、そしてｐＨ
６以下で最大吸収は３９０ｎｍに存在する。
Ａ−ＯＨとの反応による式Ａ−０−Ｂを有する化合物の
調製に適する、場合により保護基を担持する炭水化物Ｂ
−ＯＨの知られた誘導体は［メソツズ・イン・カーボハ
イドレート・ケミストリー（Ｍｅｔｈｏａｓｉｎ Ｃａ
ｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）Ｊ第■巻
、アカデミツクプレス（Ａｃａａｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ
）出版、１９６３年、の記載に従い調製された。保護基
を備えたアミノ酸またはオリゴペプチドは購入するかま
たは実施例１６〔「ジエー・アメル・ケム・ツク（Ｊ、
ａｍｅｒ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、）Ｊ第５９巻（１９３７
年）第１１１６〜１１１８頁〕の記載により調製された
。
調製に適する、場合により保護基を担持する炭水化物Ｂ
−ＯＨの知られた誘導体は［メソツズ・イン・カーボハ
イドレート・ケミストリー（Ｍｅｔｈｏａｓｉｎ Ｃａ
ｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）Ｊ第■巻
、アカデミツクプレス（Ａｃａａｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ
）出版、１９６３年、の記載に従い調製された。保護基
を備えたアミノ酸またはオリゴペプチドは購入するかま
たは実施例１６〔「ジエー・アメル・ケム・ツク（Ｊ、
ａｍｅｒ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、）Ｊ第５９巻（１９３７
年）第１１１６〜１１１８頁〕の記載により調製された
。
式Ａ−０−Ｂを有する新規化合物はそれ自体知られた方
法により式Ａ −ＯＨを有する化合物および弐Ｂ−ＯＨ
を有する化合物の反応性誘導体から調製された。
法により式Ａ −ＯＨを有する化合物および弐Ｂ−ＯＨ
を有する化合物の反応性誘導体から調製された。
式Ａ−０−Ｂを有する化合物はヒドロラーゼの検出およ
び測定用の基質として使用されうる。
び測定用の基質として使用されうる。
分解に際して遊離される色素Ａ−ＯＨは現在技術水準に
比較してかなりの利点を有する。しばしば使用される色
素ｐ−ニトロフェノールのｐＫａ 値、すなわちｐ−二
トロフェノールの半分が７エノラートアニオンとして解
離形態で存在するｐＨ値は７であるが、本発明で使用さ
れる色素Ａ−ＯＨのｐＫａ値は６より小さい（第１表参
照）。このことはすでに７以下のｐＨ範囲でｐ−ニトロ
フェノールより相当高い吸光が同じモル濃度で存在し、
従ってこの色素から新たに調製される基質がかなりより
感度よく測定されうろことを意味する。
比較してかなりの利点を有する。しばしば使用される色
素ｐ−ニトロフェノールのｐＫａ 値、すなわちｐ−二
トロフェノールの半分が７エノラートアニオンとして解
離形態で存在するｐＨ値は７であるが、本発明で使用さ
れる色素Ａ−ＯＨのｐＫａ値は６より小さい（第１表参
照）。このことはすでに７以下のｐＨ範囲でｐ−ニトロ
フェノールより相当高い吸光が同じモル濃度で存在し、
従ってこの色素から新たに調製される基質がかなりより
感度よく測定されうろことを意味する。
現在技術水準のものと比較した新規な基質を使用する利
点を以下に実施例により記載する。
点を以下に実施例により記載する。
ヒトの尿中におけるα−グルコシダーゼの活性は新規な
基質である２Ｈ−７−０−（α−Ｄ−ゲルコピ２ノシル
） −４−メ？ルー８−ニトローベンゾピラン−２−オ
ン（化合物Ｓ１、実施例１参照）Ｋより動力学的試験に
おいて非常に感度良く測定されうる。α−グルコシダー
ゼの至適ｐＨは４〜６であるので、これまで慣用の基質
ｐ−ニトロフェニル−α−グルコピラノシドを用いては
活性は動力学的に測定され得ない、狗故なら遊離された
ニトロフェノールは４０５ｎｍで非常にわずかな吸光し
か示さないからである（第１表参照）。
基質である２Ｈ−７−０−（α−Ｄ−ゲルコピ２ノシル
） −４−メ？ルー８−ニトローベンゾピラン−２−オ
ン（化合物Ｓ１、実施例１参照）Ｋより動力学的試験に
おいて非常に感度良く測定されうる。α−グルコシダー
ゼの至適ｐＨは４〜６であるので、これまで慣用の基質
ｐ−ニトロフェニル−α−グルコピラノシドを用いては
活性は動力学的に測定され得ない、狗故なら遊離された
ニトロフェノールは４０５ｎｍで非常にわずかな吸光し
か示さないからである（第１表参照）。
第１表
異なるｐＨ値における例として選
４−メーＩＦ−ルー８−ニトロベンソヒラン−２−オン
４．４５ ３−ヒドロキシ−２−二トロピリジン ５．ルゾルフイ
ン ５．９５ ３−ヒドロキシ−４−二トロー２−クロロピリジン 五
１３−ヒドロキシー２−ニトロ−６−クロロピリジン
３．９ｐ−ニトロフェノール ７．０ ０−二トロフェノール １０８ ａ〕計算値 ｂ）可変波長光度計 Ｃ〕水銀灯および固定された波長に対する７尺された色
素の吸光率 波 ３６ ｇン ５．８０ １１．３ １ ６．１０ １
６．２５ １ ／ｌ＋、３０４０５ ０．５０２．３２
５．０９ ５．８０ ５．９０ｂ） ５７８ ０．７５ ５．７ ２２．８０ ３９．６ ４
１．０００ｓ７２）を宿 ？！ ２％、’６４４９．８
７５５．４２４０５ ４．９３ ５．３４ ５．４０
５．４８ ５．４３６５ ７：８４ １１．８７ｉ２．
９ １３．２ １３．２４０５ Ｑ、２０ α４０ １
．５０ ９．７ １＆３０４０５ ＣＬ４７ ０．４８
０．７５ ２．３４ ４．０１イルターを備えた光度
計 それゆえこの基質を有する試験混合物は所定の反応時間
後測定しうる吸光まで到達するために重炭酸塩のような
添加剤によりアルカリ性となされねばならない。、− これに対し基質としての化合物Ｓ１を用いて正常なヒト
の尿において吸収差毎分０．０４０が動力学的試験にお
いて測定でき、従って測定の自動化が可能である。
４．４５ ３−ヒドロキシ−２−二トロピリジン ５．ルゾルフイ
ン ５．９５ ３−ヒドロキシ−４−二トロー２−クロロピリジン 五
１３−ヒドロキシー２−ニトロ−６−クロロピリジン
３．９ｐ−ニトロフェノール ７．０ ０−二トロフェノール １０８ ａ〕計算値 ｂ）可変波長光度計 Ｃ〕水銀灯および固定された波長に対する７尺された色
素の吸光率 波 ３６ ｇン ５．８０ １１．３ １ ６．１０ １
６．２５ １ ／ｌ＋、３０４０５ ０．５０２．３２
５．０９ ５．８０ ５．９０ｂ） ５７８ ０．７５ ５．７ ２２．８０ ３９．６ ４
１．０００ｓ７２）を宿 ？！ ２％、’６４４９．８
７５５．４２４０５ ４．９３ ５．３４ ５．４０
５．４８ ５．４３６５ ７：８４ １１．８７ｉ２．
９ １３．２ １３．２４０５ Ｑ、２０ α４０ １
．５０ ９．７ １＆３０４０５ ＣＬ４７ ０．４８
０．７５ ２．３４ ４．０１イルターを備えた光度
計 それゆえこの基質を有する試験混合物は所定の反応時間
後測定しうる吸光まで到達するために重炭酸塩のような
添加剤によりアルカリ性となされねばならない。、− これに対し基質としての化合物Ｓ１を用いて正常なヒト
の尿において吸収差毎分０．０４０が動力学的試験にお
いて測定でき、従って測定の自動化が可能である。
グルコシダーゼの活性に影響する抑制や質が尿中に出現
しうろことが知られている。その場合例えば透析または
ケ゛／Ｉ／濾過のような適当な措置により抑制物質は除
去されねばならない。精製されたβ−グルコシダーゼの
使用は基質Ｓ１がα−グルコシダーセにとって特異的な
基質であることを示している、何故ならこのものはβ−
グルコシダーゼによって分解されないからである。
しうろことが知られている。その場合例えば透析または
ケ゛／Ｉ／濾過のような適当な措置により抑制物質は除
去されねばならない。精製されたβ−グルコシダーゼの
使用は基質Ｓ１がα−グルコシダーセにとって特異的な
基質であることを示している、何故ならこのものはβ−
グルコシダーゼによって分解されないからである。
α−グルコシダーゼ活性を動力学的に測定するもう一つ
の可能性は３Ｈ−７−０−（α−グルコピラノシル）−
フェノキサジン−３−オン（レゾルフィン−α−Ｄ−グ
ルコピラノシド）の使用である。レゾルフィンのｐＫａ
値が５．９にあることは事実である、しかしながら５７
８ｎｍでの非常に高いそル吸光率により例えば］）Ｈ６
では尿グルコシダーゼは充分な感度を以って測定され得
る。３７℃での実施では試薬４００μＬおよび尿２００
μｔの使用で毎分０．１３６の吸収差が見られた。５７
８ ｎｍでの測定では尿中の着色した成分が妨害しない
という長所を有した。ここでもまたβ−グルコシダーゼ
の使用は、レゾルフィン−α−グルコピラノシドがα−
グルコシダーゼの特異的な基質であることを示した。
の可能性は３Ｈ−７−０−（α−グルコピラノシル）−
フェノキサジン−３−オン（レゾルフィン−α−Ｄ−グ
ルコピラノシド）の使用である。レゾルフィンのｐＫａ
値が５．９にあることは事実である、しかしながら５７
８ｎｍでの非常に高いそル吸光率により例えば］）Ｈ６
では尿グルコシダーゼは充分な感度を以って測定され得
る。３７℃での実施では試薬４００μＬおよび尿２００
μｔの使用で毎分０．１３６の吸収差が見られた。５７
８ ｎｍでの測定では尿中の着色した成分が妨害しない
という長所を有した。ここでもまたβ−グルコシダーゼ
の使用は、レゾルフィン−α−グルコピラノシドがα−
グルコシダーゼの特異的な基質であることを示した。
人間の尿中のβ−グルコシダーゼ活性の測定□はその感
度が低いので慣用の試験ではこれまで可能でなかった。
度が低いので慣用の試験ではこれまで可能でなかった。
３−０−（β−Ｄ−グルコピラノシル）−３−ヒドロキ
シ−２−二トロビリジン（化合物ｓ５）およびｐ−ニト
ロフェニル−β−Ｄ−グルコピラノシドを用いてβ−グ
ルコシダーゼ活性が比較して測定された。第２表にその
結果が示されそして新規な基質Ｓ５を用いると毎分約７
倍大きい吸収変化が見られることが証明される。
シ−２−二トロビリジン（化合物ｓ５）およびｐ−ニト
ロフェニル−β−Ｄ−グルコピラノシドを用いてβ−グ
ルコシダーゼ活性が比較して測定された。第２表にその
結果が示されそして新規な基質Ｓ５を用いると毎分約７
倍大きい吸収変化が見られることが証明される。
第２表
尿試料中におけるβ−グルコシダーゼ活性の測定吸収差
７分 子−２５℃ ｐ−ニトロフェニル誘導体 ０．０４７６８５ （１３
５２ α−アミラーゼの測定には吸光変化を下記の新規物質、
すなわち２Ｈ−７−０−（α−Ｄ−マルトトリオシル）
−４−メチル−８−二トロベンゾピラン−２−オン（化
合物Ｅｌ ｊ Ｏ）、相当するマルトテトラオシル化合
物（化合物５１１）なナラびＫｏ−ニトロフェニル−α
−マルトトリオシト、を用いて比較測定した。
７分 子−２５℃ ｐ−ニトロフェニル誘導体 ０．０４７６８５ （１３
５２ α−アミラーゼの測定には吸光変化を下記の新規物質、
すなわち２Ｈ−７−０−（α−Ｄ−マルトトリオシル）
−４−メチル−８−二トロベンゾピラン−２−オン（化
合物Ｅｌ ｊ Ｏ）、相当するマルトテトラオシル化合
物（化合物５１１）なナラびＫｏ−ニトロフェニル−α
−マルトトリオシト、を用いて比較測定した。
基質Ｅ１１１を用いるとニトロフェニル誘導体を用いる
より約１４倍そして基質８１０を用いると３２倍すら大
きな吸収変化が測定された（第３表参照）。
より約１４倍そして基質８１０を用いると３２倍すら大
きな吸収変化が測定された（第３表参照）。
第３表
助酵素α−グルコシダーゼを用いない
尿試料中のα−アミラーセ活性の測定
ニトロフェニ）Ｌ／訪導体 ０．０２０日１１ Ｑ、１
３４ ｓ１０ ０．６３５ 新規な基質を用いるこの高い吸収変化は従来の試験系に
おいては色素を遊離させるために必要な助酵素としての
α−グルコシダーゼの関与を伴わずに達成される。従っ
て試薬価格および、従来のアミラーゼ測定用の動力学的
試験が有する他の困難、すなわち一般に数分間に及んで
いた非直線状の動力学の初期相がなくなる。これに対し
新規物質を使用する場合動力学は初めから直線状に進行
する。それによって手動およびなかんずく自動分析器に
より相当より迅速な測定が可能である。
３４ ｓ１０ ０．６３５ 新規な基質を用いるこの高い吸収変化は従来の試験系に
おいては色素を遊離させるために必要な助酵素としての
α−グルコシダーゼの関与を伴わずに達成される。従っ
て試薬価格および、従来のアミラーゼ測定用の動力学的
試験が有する他の困難、すなわち一般に数分間に及んで
いた非直線状の動力学の初期相がなくなる。これに対し
新規物質を使用する場合動力学は初めから直線状に進行
する。それによって手動およびなかんずく自動分析器に
より相当より迅速な測定が可能である。
３−０−（α−Ｄ−マルトトリオシル）−５−ヒドロキ
シ−２−二トロピリジン（化合物８１２）を用いても同
様に助酵素α−グルコシダーゼの関与なしでそして直ち
に線状の運動において現在技術水準に比較して充分に高
い吸収変化が達成できた。
シ−２−二トロピリジン（化合物８１２）を用いても同
様に助酵素α−グルコシダーゼの関与なしでそして直ち
に線状の運動において現在技術水準に比較して充分に高
い吸収変化が達成できた。
３−０−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−３−ヒドロ
キシ−２−二トロピリジンを使用して人間の尿中におけ
るα−ガラクトシダーゼの活性が動力学的に測定できた
。この目的には緩衝された基質溶液１−中に正常な尿の
１０倍濃縮物０，２−を加えそして４０５ｎｍおよび２
２℃での吸光変化を記録した。この条件下で毎分０．０
Ｄ１２Ａの吸光差が測定された。この基質はβ−ガラク
トシダーゼにより分解されない。
キシ−２−二トロピリジンを使用して人間の尿中におけ
るα−ガラクトシダーゼの活性が動力学的に測定できた
。この目的には緩衝された基質溶液１−中に正常な尿の
１０倍濃縮物０，２−を加えそして４０５ｎｍおよび２
２℃での吸光変化を記録した。この条件下で毎分０．０
Ｄ１２Ａの吸光差が測定された。この基質はβ−ガラク
トシダーゼにより分解されない。
β−ガラクトシダーゼ活性は２Ｈ−７−０−（β−Ｄ−
ガラクトピラノシル）−４−メチル−８−ニトロ−ベン
ゾビラン−２−オン（化合物５１５）を用いて人間の尿
で動力学的に測定できた。緩衝された基質溶液２００ｇ
および正常な濃度の尿２００μｔを使用して２３℃およ
び３６６ｎｍで毎分Ｑ、０１４Ａの吸光変化が記録され
た。この基質はα−ガラクトシダーゼにより分解されな
い。レゾルフィン−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（化合
物Ｓ６）を使用する場合にも人間の尿中のβ−ガラクト
シダーゼは動力学的に測定できた。ここでは３７℃、５
７８ｎｍで毎分０．００３８Ａの吸収変化が達成された
。
ガラクトピラノシル）−４−メチル−８−ニトロ−ベン
ゾビラン−２−オン（化合物５１５）を用いて人間の尿
で動力学的に測定できた。緩衝された基質溶液２００ｇ
および正常な濃度の尿２００μｔを使用して２３℃およ
び３６６ｎｍで毎分Ｑ、０１４Ａの吸光変化が記録され
た。この基質はα−ガラクトシダーゼにより分解されな
い。レゾルフィン−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（化合
物Ｓ６）を使用する場合にも人間の尿中のβ−ガラクト
シダーゼは動力学的に測定できた。ここでは３７℃、５
７８ｎｍで毎分０．００３８Ａの吸収変化が達成された
。
人間の尿中におけるβ−グルクロニダーゼの活性は２Ｈ
−７−０−（β−Ｄ−グルクロノピラノシル）−４−メ
チル−８−ニトロベンゾピラン−２−オン（化合物８９
）を用いて動力学的に測定できた。その際緩衝された基
質溶液０．６−に尿素濃縮物０．１ ｍｌを加えそして
活性をｐ）Ｔ５．３０℃および３６６ｎｍで記録した。
−７−０−（β−Ｄ−グルクロノピラノシル）−４−メ
チル−８−ニトロベンゾピラン−２−オン（化合物８９
）を用いて動力学的に測定できた。その際緩衝された基
質溶液０．６−に尿素濃縮物０．１ ｍｌを加えそして
活性をｐ）Ｔ５．３０℃および３６６ｎｍで記録した。
この条件下で吸収差毎分０．０１４Ａが測定された。
従ってこの測定は慣用のｐ−ニトロフェニル基質を用い
るよりも幾倍も感度が良い（第４表参照）。
るよりも幾倍も感度が良い（第４表参照）。
第４表
ｐＨ５でのヒトの尿中のβ−グルクロニダーゼの測定化
合物 ｓ９ ０．０１４ ｐ−ニトロフェニル基質 ０．０００５牛の腎臓からの
Ｎ−アセチル−β−グルコサミニターセを用いて基質ｐ
−ニトロフェニル−Ｎ−アセチルアミノ−グルコシドお
よび２Ｈ−７−０−（２−アセトアミド−２−デオキシ
−β−Ｄ−グルコピラノシル）−４−メチル−８−二ト
ロベンゾピラン−２−オン（化合物ＢＢ）の感度を相互
に比較した。基質溶液０．５ ｍｇに１：１０１に希釈
した酵素溶液〔シグマ（Ｓｉｇｍａ）社製品） ０．１
ｔｎｔを加えそして２２℃および４０５ｎｍまたは３
６５ ｎｍで吸収変化を測定した。その結果を第５表に
まとめる。
合物 ｓ９ ０．０１４ ｐ−ニトロフェニル基質 ０．０００５牛の腎臓からの
Ｎ−アセチル−β−グルコサミニターセを用いて基質ｐ
−ニトロフェニル−Ｎ−アセチルアミノ−グルコシドお
よび２Ｈ−７−０−（２−アセトアミド−２−デオキシ
−β−Ｄ−グルコピラノシル）−４−メチル−８−二ト
ロベンゾピラン−２−オン（化合物ＢＢ）の感度を相互
に比較した。基質溶液０．５ ｍｇに１：１０１に希釈
した酵素溶液〔シグマ（Ｓｉｇｍａ）社製品） ０．１
ｔｎｔを加えそして２２℃および４０５ｎｍまたは３
６５ ｎｍで吸収変化を測定した。その結果を第５表に
まとめる。
吸収変化はｐＨ４，５に調整した場合Ｅ８につぃてはｐ
−ニトロフェニルアセチルアミノ−グルコシドより約６
６倍太きい。
−ニトロフェニルアセチルアミノ−グルコシドより約６
６倍太きい。
Ｓ８を用いてヒトの尿（１０倍濃縮）中の活性も動力学
的に測定されうる。緩衝された基質溶液０．５−および
１０倍濃縮された正常な尿０．１−を用い５７℃および
３６５ｎｍで測定するとｐＨ５，５で吸収変化毎分０．
Ｄ ２３ ＡそしてｐＨ４，ｓで毎分０．０１４Ａが
得られた。この吸光変化は大へん大きいので、希釈して
ない尿の同じ試料量においても充分な感度を以って動力
学的に活性が測定できた。
的に測定されうる。緩衝された基質溶液０．５−および
１０倍濃縮された正常な尿０．１−を用い５７℃および
３６５ｎｍで測定するとｐＨ５，５で吸収変化毎分０．
Ｄ ２３ ＡそしてｐＨ４，ｓで毎分０．０１４Ａが
得られた。この吸光変化は大へん大きいので、希釈して
ない尿の同じ試料量においても充分な感度を以って動力
学的に活性が測定できた。
第５表
Ｎ−アセチルグルコサミニダー七の測定ｐ−ニトロフェ
ニル基質 ０．００７６化合物 ｓ３ ０．２６６ ２Ｈ−７−０−４−メチル−８−ニトロ−ベンゾピラン
−２−オンホスペード（化合物ｓ １３）を用いて酸ホ
スファターゼの活性がニトロフェニルホスペードを用い
るより相当に感度よく動力学的に測定できた。測定は１
：１０１に希釈した精液−プラズマ中で両基質を用いて
実施された。ｐＨ４，８の緩衝された基質溶液１ｓ／！
に希釈された試料０．０１ｍを加えそして吸光変化を４
０５または３６５ｎｍで動力学的に測定した。
ニル基質 ０．００７６化合物 ｓ３ ０．２６６ ２Ｈ−７−０−４−メチル−８−ニトロ−ベンゾピラン
−２−オンホスペード（化合物ｓ １３）を用いて酸ホ
スファターゼの活性がニトロフェニルホスペードを用い
るより相当に感度よく動力学的に測定できた。測定は１
：１０１に希釈した精液−プラズマ中で両基質を用いて
実施された。ｐＨ４，８の緩衝された基質溶液１ｓ／！
に希釈された試料０．０１ｍを加えそして吸光変化を４
０５または３６５ｎｍで動力学的に測定した。
第６表に示されるよ５に、吸収変化はｓ１５を用いると
ニトロフェニルホスペードを用いるよりもおよそ１５倍
大きい。
ニトロフェニルホスペードを用いるよりもおよそ１５倍
大きい。
第６表
化合物ｓ１３ ０．０９７５ １５
ｐ−ニトロフェニルホスペード ０．００７５ １本発
明はまた吸収性担体、フィルム層、ゆるいかまたは緊密
な粉末混合物、式Ａ−０−Ｂ （式中Ａ−ＯＨは一般式
■または■を有する色素でありそしてＢＯＨは必要な場
合は保護基を備えたアミノ酸またはオリゴＲプチドであ
る）を有する化合物の１種類またはそれ以上と慣用の添
加物質例えば緩衝物質、洗浄剤、活性剤または抑制剤ま
たは／および安定剤とを含有する凍結乾燥組成物または
溶液からなる、エステル分解酵素特に白血球中に存在す
るエステラーゼの検出のための診断剤にも関する。
明はまた吸収性担体、フィルム層、ゆるいかまたは緊密
な粉末混合物、式Ａ−０−Ｂ （式中Ａ−ＯＨは一般式
■または■を有する色素でありそしてＢＯＨは必要な場
合は保護基を備えたアミノ酸またはオリゴＲプチドであ
る）を有する化合物の１種類またはそれ以上と慣用の添
加物質例えば緩衝物質、洗浄剤、活性剤または抑制剤ま
たは／および安定剤とを含有する凍結乾燥組成物または
溶液からなる、エステル分解酵素特に白血球中に存在す
るエステラーゼの検出のための診断剤にも関する。
さらに本発明は体液中のエステル分解酵素、特に白血球
中に存在するエステラーゼを検出するための診断剤調製
への前節記載の式Ａ−０−Ｂを有する化合物の使用にも
関する。
中に存在するエステラーゼを検出するための診断剤調製
への前節記載の式Ａ−０−Ｂを有する化合物の使用にも
関する。
非常に低い濃度で存在する物質は一般に酵素免疫検定に
より検出すべきである。この検出系の感度はかくして大
へん重要である。
より検出すべきである。この検出系の感度はかくして大
へん重要である。
新規な基質を用いる場合現在技術水準の酵素免疫検定に
おいてかなりの感度増大が達成できた。この検定におい
ては工ｇ′Ｂ濃度はアレルギーの尺度として間接的抗体
技法により測定される。
おいてかなりの感度増大が達成できた。この検定におい
ては工ｇ′Ｂ濃度はアレルギーの尺度として間接的抗体
技法により測定される。
種々の基質に対し同じ培養時間でレゾルフィン−β−ガ
ラクトシド（化合物ｓ６）では商業上入手しうる０−ニ
トロフェニル−β−ガラクトシドを用いた場合よりも約
４，３倍高い吸収そして５−ヒドロキシ−２−二トロピ
リジンーβ−ガラクトシドでは約１．７倍高い吸収が測
定できた。
ラクトシド（化合物ｓ６）では商業上入手しうる０−ニ
トロフェニル−β−ガラクトシドを用いた場合よりも約
４，３倍高い吸収そして５−ヒドロキシ−２−二トロピ
リジンーβ−ガラクトシドでは約１．７倍高い吸収が測
定できた。
従ってレゾルフィン−β−ガラクトシドにとっては同じ
感度の場合は酵素反応の培養時間が相当短縮されうるし
または同じ培養時間では工ｇＢ検出の感度が多大に増大
されうる。この二つの段階は実際上非常に重要でありう
る。より感度が大きいことが重要かまたは試験結果がよ
り速やかなことが重要かは検出すべき物質の如何による
。
感度の場合は酵素反応の培養時間が相当短縮されうるし
または同じ培養時間では工ｇＢ検出の感度が多大に増大
されうる。この二つの段階は実際上非常に重要でありう
る。より感度が大きいことが重要かまたは試験結果がよ
り速やかなことが重要かは検出すべき物質の如何による
。
第７表
レゾルフィン−β−ガラクトシド ５７６ｎｍ ０．７
６１０−二トロフェニルガラクトシド ４０５ ｎｍ
０１７６以下の実施例は本発明を説明するためΩもので
ある。
６１０−二トロフェニルガラクトシド ４０５ ｎｍ
０１７６以下の実施例は本発明を説明するためΩもので
ある。
実施例 １
２Ｈ−７−０−（α−Ｄ−グルコピラノシル）−４−メ
チル−８−ニトロベンゾピラン−２−オン（化合物５ｉ
） １−β−クロロ−３，４，６−トリアセチルグルコピラ
ノシド１７３１ｔ”）ルエン中２Ｈ−７−ヒドロキシ−
４−メチル−８−ニトローペンソヒランー２−オン１５
９と２０時間還流下および水分を遮断して加熱した。次
に溶媒を蒸発させ、残留物を０Ｈ２０ρ２中にとル、飽
和ＮａＨＯＯ５溶液で洗い、乾燥しそして再び濃縮した
。このシロップ状物質を温メタノール中にとシそして晶
出せしめた。収量２２．５９Ｃ理論量の７５％）。
チル−８−ニトロベンゾピラン−２−オン（化合物５ｉ
） １−β−クロロ−３，４，６−トリアセチルグルコピラ
ノシド１７３１ｔ”）ルエン中２Ｈ−７−ヒドロキシ−
４−メチル−８−ニトローペンソヒランー２−オン１５
９と２０時間還流下および水分を遮断して加熱した。次
に溶媒を蒸発させ、残留物を０Ｈ２０ρ２中にとル、飽
和ＮａＨＯＯ５溶液で洗い、乾燥しそして再び濃縮した
。このシロップ状物質を温メタノール中にとシそして晶
出せしめた。収量２２．５９Ｃ理論量の７５％）。
コノトリアセチル誘導体の結晶をメタノール／トリエチ
ルアミン／水（５０：５：５）混合物２００ｍ１中に！
濁させそして攪拌するとこのものは約４０分後に溶解し
た１〜２時間後脱アセチル化されたグルコシドが分離し
、このものを０℃で一夜放置し、沈殿を濾過しそしてメ
タノールで洗った。母液から反復して沈殿させるこ七に
よ）さらに物質が得られた。総収量１１ア（理論量の６
５％）、融点１３０℃。
ルアミン／水（５０：５：５）混合物２００ｍ１中に！
濁させそして攪拌するとこのものは約４０分後に溶解し
た１〜２時間後脱アセチル化されたグルコシドが分離し
、このものを０℃で一夜放置し、沈殿を濾過しそしてメ
タノールで洗った。母液から反復して沈殿させるこ七に
よ）さらに物質が得られた。総収量１１ア（理論量の６
５％）、融点１３０℃。
元素分析値（分子式Ｃ１６Ｈ１７０１ＯＮｓ分子量３８
３．３１５として） ０％ Ｈチ Ｎチ ０％ 計算値： ５０．１ ４．５ ５．７ ４１．７実測値
： ４９．９ ４．５ ３．７ ４１．７実施例 ２ ３−０−（α−Ｄ−ゲルコピ２ノシル）−２−二トロピ
リジン（化合物８２） 化合物Ｓ２は２Ｈ−７−ヒドロキシ−４−メチル−８−
ニトローペンソヒランー２−オンを５−ヒドロキシ−２
−二トロピリジンｉｏｐで置換する以外は化合物Ｓ１と
同様にして調製された。融点１７８℃。
３．３１５として） ０％ Ｈチ Ｎチ ０％ 計算値： ５０．１ ４．５ ５．７ ４１．７実測値
： ４９．９ ４．５ ３．７ ４１．７実施例 ２ ３−０−（α−Ｄ−ゲルコピ２ノシル）−２−二トロピ
リジン（化合物８２） 化合物Ｓ２は２Ｈ−７−ヒドロキシ−４−メチル−８−
ニトローペンソヒランー２−オンを５−ヒドロキシ−２
−二トロピリジンｉｏｐで置換する以外は化合物Ｓ１と
同様にして調製された。融点１７８℃。
元素分析値
０％ Ｈ％ ８％ ０％
計算値： ４３．７ ４．７ ９．４ ４２．２実測値
： ４３．７ ４．８ ９．１ ４２．５実施例 ６ ３−０−（α−Ｄ−ガ２クトピラノシル）−２−ニトロ
ピリジン（化合物８３） アセトブロモガラクトース４１９（０，１モル）および
３−ヒドロキシ−２−ニトロピリジン２８Ｆ（０，２モ
ル）の緊密な混合物を水分を遮断してよく攪拌しながら
７０℃に加温することによシ融解させた。Ｈｇ（ＯＮ）
２１３９およびＨｇＢｒ２１Ｐの混合物を添加したのち
攪拌下に温度を１００℃をなした（１時間） （ＨＯＮ
発生）。冷却後酢酸エチル５０雌次にａａβ４２００１
１１ｆｉを加え、活性炭１９で処理しそして次にシリカ
ゲル１０ｊＩを通して濾過した。沖液を飽和重炭酸塩そ
して次にｊ Ｎ ＫＢｒ溶液と振盪し、乾燥しそして蒸
発乾固させた。シロップ状の残留物を温メタノール中に
溶解させそして０℃で結晶化せしめた。
： ４３．７ ４．８ ９．１ ４２．５実施例 ６ ３−０−（α−Ｄ−ガ２クトピラノシル）−２−ニトロ
ピリジン（化合物８３） アセトブロモガラクトース４１９（０，１モル）および
３−ヒドロキシ−２−ニトロピリジン２８Ｆ（０，２モ
ル）の緊密な混合物を水分を遮断してよく攪拌しながら
７０℃に加温することによシ融解させた。Ｈｇ（ＯＮ）
２１３９およびＨｇＢｒ２１Ｐの混合物を添加したのち
攪拌下に温度を１００℃をなした（１時間） （ＨＯＮ
発生）。冷却後酢酸エチル５０雌次にａａβ４２００１
１１ｆｉを加え、活性炭１９で処理しそして次にシリカ
ゲル１０ｊＩを通して濾過した。沖液を飽和重炭酸塩そ
して次にｊ Ｎ ＫＢｒ溶液と振盪し、乾燥しそして蒸
発乾固させた。シロップ状の残留物を温メタノール中に
溶解させそして０℃で結晶化せしめた。
テトラアセチル化合物の結晶をメタノール／トリエチル
アミン／水（５０：５：５）混合物２００峨中に懸濁さ
せそして攪拌するとこのものは約４０分後に溶解した。
アミン／水（５０：５：５）混合物２００峨中に懸濁さ
せそして攪拌するとこのものは約４０分後に溶解した。
１〜２時間後脱アセチル化されたα−ガラクトシドが分
離した。これを−夜０℃で放置し、濾過しそしてメタノ
ールで洗った。融点２２０℃。
離した。これを−夜０℃で放置し、濾過しそしてメタノ
ールで洗った。融点２２０℃。
元素分析値（分子式〇１ ｊＨ１４０８Ｎ２、分子：１
３０２．２４３として） 」と１ 四％Ｎ％Ｏ憑− 計算値：４３．７ ４．７ ９．２ ４２．３実測値：
４３．８ ４．８ ９．２ ４２．８実施例 ４ ２Ｈ−７−０−（β−Ｄ−グルコピラノシルンー４−ｙ
’ｆルー８−二トロベンゾビラン−２−オン（化合物８
４） ２Ｈ−７−ヒドロキシ−４−メチル−８−二トロベンゾ
ピラン−２−オン１８９．アセトブロム−グルコース１
６ｊｌおよび無水Ｎａ２００３ ５０ｐをアセトン２０
０ｍ１中２０時間還流下に煮梯し、混合物を濾過し、濃
縮し、残留物をクロロホルム中にとｉ） 、Ｃ１，Ｉ
Ｎ ＮａＯＨで洗い、乾燥し、再び濃縮しそして次に残
留物をメタノール中にとるとテトラアセチル誘導体が結
晶化した。脱アセチル化するにはテトラアセチル誘導体
を触媒量のナトリウムメチラートとメタノール中約８時
間攪拌した。融点２１０℃。
３０２．２４３として） 」と１ 四％Ｎ％Ｏ憑− 計算値：４３．７ ４．７ ９．２ ４２．３実測値：
４３．８ ４．８ ９．２ ４２．８実施例 ４ ２Ｈ−７−０−（β−Ｄ−グルコピラノシルンー４−ｙ
’ｆルー８−二トロベンゾビラン−２−オン（化合物８
４） ２Ｈ−７−ヒドロキシ−４−メチル−８−二トロベンゾ
ピラン−２−オン１８９．アセトブロム−グルコース１
６ｊｌおよび無水Ｎａ２００３ ５０ｐをアセトン２０
０ｍ１中２０時間還流下に煮梯し、混合物を濾過し、濃
縮し、残留物をクロロホルム中にとｉ） 、Ｃ１，Ｉ
Ｎ ＮａＯＨで洗い、乾燥し、再び濃縮しそして次に残
留物をメタノール中にとるとテトラアセチル誘導体が結
晶化した。脱アセチル化するにはテトラアセチル誘導体
を触媒量のナトリウムメチラートとメタノール中約８時
間攪拌した。融点２１０℃。
元素分析値
０チ Ｈチ Ｎ％ Ｏチ
計算値：５０．１ ４．５ ３．７ ４１．．７実測値
：５０．４ ４．６ ３．７ ４１．２実施例 ５ ３−○−（β−Ｄ−グルコピラノシル）−２−二トロピ
リジン（化合物８５） 化合物Ｓ５は２Ｈ−７−ヒドロキシ−４−メチル−８−
二トロベンソヒランー２−オンヲ３−ヒドロキシ−２−
二トローピリジンのａｍ １６２によ多置換して化合物
Ｓ４と同様にして調夷した。融点２０６℃。
：５０．４ ４．６ ３．７ ４１．２実施例 ５ ３−○−（β−Ｄ−グルコピラノシル）−２−二トロピ
リジン（化合物８５） 化合物Ｓ５は２Ｈ−７−ヒドロキシ−４−メチル−８−
二トロベンソヒランー２−オンヲ３−ヒドロキシ−２−
二トローピリジンのａｍ １６２によ多置換して化合物
Ｓ４と同様にして調夷した。融点２０６℃。
元素分析値
」ｊヨ ±（旦１−リー
計算値：４３．７ ４．６ ９．２ ４２．３実測値：
４３．５ ４．５ ９．１ ４２．３実施例 ６ レゾシンイン−８−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（化合
物８６） レサズリンーＮａ ５ ｊｌをアセトブロモガシクトー
ス８．２９とアセトニトリル中５日間攪拌した。
４３．５ ４．５ ９．１ ４２．３実施例 ６ レゾシンイン−８−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（化合
物８６） レサズリンーＮａ ５ ｊｌをアセトブロモガシクトー
ス８．２９とアセトニトリル中５日間攪拌した。
Ｐ通抜溶媒を除去しｈ残留物を酢酸エチル中にとシそし
て飽和ＮａＨＯＯ５溶液と嶽盪した。乾燥後また酢酸エ
チルを真空下に除去しそしてレサズリンーβ−ガラクト
シドーテトラアセテートからなる残留物をメタノールか
ら結晶化させた。
て飽和ＮａＨＯＯ５溶液と嶽盪した。乾燥後また酢酸エ
チルを真空下に除去しそしてレサズリンーβ−ガラクト
シドーテトラアセテートからなる残留物をメタノールか
ら結晶化させた。
レゾルフィン−β−Ｄ−ガラクトピ２ノシドはレサズリ
ンーβ−Ｄ−ガラクトピラノシドーテトラアセテー：・
からメタノール中触媒としてパラジウム／活性炭を用い
て水素添加することによ）調製した。
ンーβ−Ｄ−ガラクトピラノシドーテトラアセテー：・
からメタノール中触媒としてパラジウム／活性炭を用い
て水素添加することによ）調製した。
溶液が完全に無色で必る場合は、溶液１００峨当ジメタ
ツール中の０．１Ｎナトリウムメチラート溶液１絨を加
え、６時間攪拌しそしてシリカゲル１０９を通してｐ過
した。空気を吹き込みながら濃縮するとレゾルンインガ
ラクトシドが晶出した。０℃で２４時間後橙色の結晶を
吸引濾過した。融点２２２℃。
ツール中の０．１Ｎナトリウムメチラート溶液１絨を加
え、６時間攪拌しそしてシリカゲル１０９を通してｐ過
した。空気を吹き込みながら濃縮するとレゾルンインガ
ラクトシドが晶出した。０℃で２４時間後橙色の結晶を
吸引濾過した。融点２２２℃。
元素分析値
０％ Ｈ％ ８％ ０％
計算値：５７．６ ４．６ ３．７ ３４．１実測値：
５７．８ ４．９ ３，４ ３４．２実施例 ７ ３−０−（β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−２−二トロ
ピリジン（化合物Ｓ７） 化合物Ｓ７は化合物Ｓ４と同様にして調製するが、但し
２Ｈ−７−ヒドロキシ−４−メチル−８−ニトロベンゾ
ピラン−２−オンを３−ヒドロキシ−２−二トローピリ
ジンの銀塩１６９によ多置換しそしてアセトブロモグル
コースをアセトブロモガラクトースによ多置換した。融
点２４５℃。
５７．８ ４．９ ３，４ ３４．２実施例 ７ ３−０−（β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−２−二トロ
ピリジン（化合物Ｓ７） 化合物Ｓ７は化合物Ｓ４と同様にして調製するが、但し
２Ｈ−７−ヒドロキシ−４−メチル−８−ニトロベンゾ
ピラン−２−オンを３−ヒドロキシ−２−二トローピリ
ジンの銀塩１６９によ多置換しそしてアセトブロモグル
コースをアセトブロモガラクトースによ多置換した。融
点２４５℃。
元素分析値
０％ Ｈチ ８％ Ｏチ
計算値： ４３．７ ４．７ ９．４ ４２．２実測値
： ４３．７ ４．６ ９，３４２．１５Ｉ！施例 ８ ２Ｈ−７−〇−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β
−Ｄ−グルコピラノシル）−４−メチル−８−二トロベ
ンゾピラン−２−オン（化＆物Ｓ８ン β−クロロ−Ｎ−７セチルアミノグルコシド１５３１を
２Ｈ−７−ヒドロキシ−４−メチル−８−ニトロベンゾ
ピラン−２−オン６．６５９と一緒にアセトン２００Ｉ
ｎＩｌ中に溶層させそして少量の水中のＮａ０Ｈ２ｊｌ
の溶液を添加したのちこの混合物を室温で１日攪拌しそ
してさらに５日間０〜５℃に保持した。
： ４３．７ ４．６ ９，３４２．１５Ｉ！施例 ８ ２Ｈ−７−〇−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β
−Ｄ−グルコピラノシル）−４−メチル−８−二トロベ
ンゾピラン−２−オン（化＆物Ｓ８ン β−クロロ−Ｎ−７セチルアミノグルコシド１５３１を
２Ｈ−７−ヒドロキシ−４−メチル−８−ニトロベンゾ
ピラン−２−オン６．６５９と一緒にアセトン２００Ｉ
ｎＩｌ中に溶層させそして少量の水中のＮａ０Ｈ２ｊｌ
の溶液を添加したのちこの混合物を室温で１日攪拌しそ
してさらに５日間０〜５℃に保持した。
アセトンを減圧下に除去し、残留物を０ＨＯＩＩ ｓ中
にとシ、飽和ＮａＨＣＯ３溶液と振盪し、乾燥しそして
ＯＨＯぶ３を除去した。残留物は温メタノールで処理す
ると直ちに結晶化した。脱アセチル化するには溶液１０
０緘当ジメタツール中の０．１ Ｎナトリウムメチラー
ト溶液１戦を用いた。融点２１６〜２１８℃。
にとシ、飽和ＮａＨＣＯ３溶液と振盪し、乾燥しそして
ＯＨＯぶ３を除去した。残留物は温メタノールで処理す
ると直ちに結晶化した。脱アセチル化するには溶液１０
０緘当ジメタツール中の０．１ Ｎナトリウムメチラー
ト溶液１戦を用いた。融点２１６〜２１８℃。
元素分析値
互Ｌ ±（玉（」Ｊ−
計算値：５０．９ ４．８ ６．６ ３７．７実測値：
５０．１４．９ ６．５ ３８．１実施例 ９ ２Ｈ−７−０−（１−β−Ｄ−グルクロノピラノシル）
−４−メチル−８−ニトロ−ベンゾピラン−２−オン（
化合物Ｓ９） 高性能攪拌器を備えた攪拌用フラスコ１．５β中１５ノ
の化合物Ｓ４をｐＨ６，８の燐酸塩緩衝液６００随中室
温で白金黒２９の存在下に酸素ガスを吹き込むことによ
シフ２時間酸化した。終了時に加温し、触媒を吸引濾過
したのちＦ液を酸性となし、蒸発乾固でせそして残留物
を熱酢酸エチルで抽出した。水中に放置すると所望のβ
−グルクロニドが晶出した。
５０．１４．９ ６．５ ３８．１実施例 ９ ２Ｈ−７−０−（１−β−Ｄ−グルクロノピラノシル）
−４−メチル−８−ニトロ−ベンゾピラン−２−オン（
化合物Ｓ９） 高性能攪拌器を備えた攪拌用フラスコ１．５β中１５ノ
の化合物Ｓ４をｐＨ６，８の燐酸塩緩衝液６００随中室
温で白金黒２９の存在下に酸素ガスを吹き込むことによ
シフ２時間酸化した。終了時に加温し、触媒を吸引濾過
したのちＦ液を酸性となし、蒸発乾固でせそして残留物
を熱酢酸エチルで抽出した。水中に放置すると所望のβ
−グルクロニドが晶出した。
元素分析値
０％ Ｈ％ ８％ Ｏチ
計算値： ４６．２ ４．１ ３．４ ４６．２実側値
： ４５．１ ３．９ ３，２ ４４．６実施例 １０ ２Ｈ−７−０−（α−Ｄ−マルトトリオシル）−４−）
ｆルー８−二トロベンソヒランー２−オン（化合物５１
０） 化合物Ｓ１１９およびα−シクロデキストリン５ｐをシ
クロデキストリン−グルコシル−トランスフェラーゼと
一緒にモルホリン−エタンスルホン酸緩衝液中ｐＨ６，
５で２〜５日間培養したのちトランス７エ２−ゼ反応の
生成物をバイオ−ラド（Ｂｉｏ−Ｒａｄ） Ｐ２ （４
００メツシユ）の１５０Ｘ５０のカラムで３〜５バール
、３０℃および流量毎時１２０〜２５０雌でクロマトグ
ラフイ−した。溶離剤は脱気した水でおった。
： ４５．１ ３．９ ３，２ ４４．６実施例 １０ ２Ｈ−７−０−（α−Ｄ−マルトトリオシル）−４−）
ｆルー８−二トロベンソヒランー２−オン（化合物５１
０） 化合物Ｓ１１９およびα−シクロデキストリン５ｐをシ
クロデキストリン−グルコシル−トランスフェラーゼと
一緒にモルホリン−エタンスルホン酸緩衝液中ｐＨ６，
５で２〜５日間培養したのちトランス７エ２−ゼ反応の
生成物をバイオ−ラド（Ｂｉｏ−Ｒａｄ） Ｐ２ （４
００メツシユ）の１５０Ｘ５０のカラムで３〜５バール
、３０℃および流量毎時１２０〜２５０雌でクロマトグ
ラフイ−した。溶離剤は脱気した水でおった。
種々の７ラクシヨンを集めそして凍結乾燥した。
元素分析値
０％ Ｉ（％ Ｎ４ ０％
計算値： ４５．５ ５．５ １．８ ４７．３実測値
： ４５．５ ５．３ １．９ ４４．５実施例 １１ ２Ｈ−７−０−（α−Ｄ−マルトテトラオシル）−４−
メチル−８−二トロベンゾピ２ンー２−オン（化合物５
１１） 化合物８１１は化合物Ｓ１０と同様にして調製されるが
、化合物Ｓ１０のあとにクロマトグラフィーカラムから
溶離される７５クシヨンを集めそして凍結乾燥した。
： ４５．５ ５．３ １．９ ４４．５実施例 １１ ２Ｈ−７−０−（α−Ｄ−マルトテトラオシル）−４−
メチル−８−二トロベンゾピ２ンー２−オン（化合物５
１１） 化合物８１１は化合物Ｓ１０と同様にして調製されるが
、化合物Ｓ１０のあとにクロマトグラフィーカラムから
溶離される７５クシヨンを集めそして凍結乾燥した。
ＨＰＬＯ分析
ウォーター社（Ｆａ、Ｗａｔθｒ）製のフェニルカラム
〔ボンタパツク−７工＝ ル（Ｂｏｎｄａ、ｐａｋ−Ｐ
ｈｅｎｙｌ） 。
〔ボンタパツク−７工＝ ル（Ｂｏｎｄａ、ｐａｋ−Ｐ
ｈｅｎｙｌ） 。
１０μｍ、３．９Ｘ！＋００簡〕上水／メタノール（７
０：３Ｑ）混合物および流量毎分１．１２城で溶層した
。
０：３Ｑ）混合物および流量毎分１．１２城で溶層した
。
化合物８１１はこの条件下で溶離時間的Ｚ３分後に溶出
される。
される。
実施例 １２
３−０−（α−Ｄ−マルトトリオシル）−２−二トロピ
リジン（化合物５１２） 化合物８１２は化合物８１０と同様にして調製されるが
、その際化合物Ｓ１の代ルに１ｐの化合物Ｓ２が用いら
れた。
リジン（化合物５１２） 化合物８１２は化合物８１０と同様にして調製されるが
、その際化合物Ｓ１の代ルに１ｐの化合物Ｓ２が用いら
れた。
元素分析値
Ｃチ Ｈ％ Ｑチ Ｎ％
計算値：４１．６ ５，７ ４８．３ ４．２実側値：
４１．４ ５．６ ４６．８ ３．１実施例 １３ ２Ｈ−７−０−（ホスホリル）〜４−メチルー８−ニト
ロベンゾピラン−２−オン（化合物Ｓ１３ン すべての試薬は注意深く乾燥されねばならない。２Ｈ−
７−ヒドロキシ−４−メチル−８−二トロベンゾピラン
−２−オン１２．５ｊＪをピリジン２００ｍ１中に溶解
させた。この溶液をピリジン２０峨中のＰＯＯら８．５
２の溶液中に攪拌下に滴下した。その際温度が５℃を越
えないよりに注意した。３０分後反応生成物を氷水の添
加（１００ｍｌ ）によ）分解した。次Ｋ １ ＯＮ
ＮａＯＨを攪拌下に滴加することによルこの溶液をｐＨ
７，５に調整した。
４１．４ ５．６ ４６．８ ３．１実施例 １３ ２Ｈ−７−０−（ホスホリル）〜４−メチルー８−ニト
ロベンゾピラン−２−オン（化合物Ｓ１３ン すべての試薬は注意深く乾燥されねばならない。２Ｈ−
７−ヒドロキシ−４−メチル−８−二トロベンゾピラン
−２−オン１２．５ｊＪをピリジン２００ｍ１中に溶解
させた。この溶液をピリジン２０峨中のＰＯＯら８．５
２の溶液中に攪拌下に滴下した。その際温度が５℃を越
えないよりに注意した。３０分後反応生成物を氷水の添
加（１００ｍｌ ）によ）分解した。次Ｋ １ ＯＮ
ＮａＯＨを攪拌下に滴加することによルこの溶液をｐＨ
７，５に調整した。
ピリジンおよび水を減圧下にできるだけ低温（５０℃）
で蒸発させた。残留物にアセトン３０峨を加え、すシつ
ぶしそして温８０容量チ水性メタノール１２５ｍＱを用
いて抽出した。メタノール溶液にアセトン６００峨を加
えた。化合物８１３がジナトリウム塩として得られた。
で蒸発させた。残留物にアセトン３０峨を加え、すシつ
ぶしそして温８０容量チ水性メタノール１２５ｍＱを用
いて抽出した。メタノール溶液にアセトン６００峨を加
えた。化合物８１３がジナトリウム塩として得られた。
７０容量チ水性エチルアルコールから再結晶した。
実施例 １４
レゾルンインホスペード（化合物Ｓ １４ ）乾燥アセ
トニトリル５０１ｎ１中のナトリウムレサズリン２．５
ｐ （０，ｏ １モルノにアセトニトリル５０１１１
１中のビス−２，２，２−トリクロロエチル−ホスホリ
ル−クロライド” ４．５ Ｐの溶液を滴下した。これ
に添加終了時にピリジン５謔を加えた。この混合物を水
冷下に３時間そして室温でさらに１５分間攪拌した。こ
の混合物を減圧下に蒸発させ、残留物をクロロホルム中
にとル、ＮａＨＯＯ５で洗い、乾燥し、濃縮しそして残
留物をエタノールから結晶化させた。レゾルフインホス
ペードは結晶化した生成物をピリジン／亜鉛末で還元す
ることによシ得られ、その際保Ｍｉ＆も除去された。
トニトリル５０１ｎ１中のナトリウムレサズリン２．５
ｐ （０，ｏ １モルノにアセトニトリル５０１１１
１中のビス−２，２，２−トリクロロエチル−ホスホリ
ル−クロライド” ４．５ Ｐの溶液を滴下した。これ
に添加終了時にピリジン５謔を加えた。この混合物を水
冷下に３時間そして室温でさらに１５分間攪拌した。こ
の混合物を減圧下に蒸発させ、残留物をクロロホルム中
にとル、ＮａＨＯＯ５で洗い、乾燥し、濃縮しそして残
留物をエタノールから結晶化させた。レゾルフインホス
ペードは結晶化した生成物をピリジン／亜鉛末で還元す
ることによシ得られ、その際保Ｍｉ＆も除去された。
実施例 １５
３Ｈ−７−ヒドロキシ−９−シアノキサンチン−６−オ
ン（シアノルフィン（Ｏｙａｎｏｒｕｆｉｎ） 、化合
物０１） 無水ジオキサン中の３Ｈ−７−ヒドロキシ−９−ヒドロ
キシイミノメチル−キサンチン−３−オン９Ｆおよび無
水ピリジン１１．５雌の水冷され攪拌されている溶液に
温度が５℃以下に保たれるような速度でトリフルオロ酢
酸無水物５．５峨を滴下した。添加後との混合物を室温
となしそしてさらに６時間攪拌し、氷冷した２ＮＨＯ１
２００ＩｆｆＩｌ上に加え、分離した沈殿を吸引Ｐ遇し
、水洗しそして乾燥した。エタノールから再結晶、収量
Ｚ７２（理論量の８９．５％）。
ン（シアノルフィン（Ｏｙａｎｏｒｕｆｉｎ） 、化合
物０１） 無水ジオキサン中の３Ｈ−７−ヒドロキシ−９−ヒドロ
キシイミノメチル−キサンチン−３−オン９Ｆおよび無
水ピリジン１１．５雌の水冷され攪拌されている溶液に
温度が５℃以下に保たれるような速度でトリフルオロ酢
酸無水物５．５峨を滴下した。添加後との混合物を室温
となしそしてさらに６時間攪拌し、氷冷した２ＮＨＯ１
２００ＩｆｆＩｌ上に加え、分離した沈殿を吸引Ｐ遇し
、水洗しそして乾燥した。エタノールから再結晶、収量
Ｚ７２（理論量の８９．５％）。
シアノルフィンの融点は３００℃以上であった。
シアノルフィンはｐＫａ値５．５５を有し、最大吸収は
５７８ ｎｍにあ９１モル吸光率は５７８ ｎｍおよび
ｐＨ７１で６４，４２０１７モル／ｃｎｓ である。
５７８ ｎｍにあ９１モル吸光率は５７８ ｎｍおよび
ｐＨ７１で６４，４２０１７モル／ｃｎｓ である。
元素分析４ａ（分子式０１４Ｈ７０５Ｎ １ 分子１ｉ
２３７２１７として） （Ｊ Ｈ％ ０％ Ｎ％ 計算値： ７０．９ ５．０ ２０．７ ５．９実側値
： ６９．６ ３．６ ２０．７ ５．３この新規な色
原体の長所はそのｐＫａ値の低いこと、その吸光率が非
常に高いことおよび長波長範囲にあるその吸収にある。
２３７２１７として） （Ｊ Ｈ％ ０％ Ｎ％ 計算値： ７０．９ ５．０ ２０．７ ５．９実側値
： ６９．６ ３．６ ２０．７ ５．３この新規な色
原体の長所はそのｐＫａ値の低いこと、その吸光率が非
常に高いことおよび長波長範囲にあるその吸収にある。
実施例 １６
Ｎ−１ルエンスルホニルーＬ−アラニン（トシルアラニ
ン）の調製 ■−１−アラニア０．０１モルを１モルの水酸化ナトリ
ウム溶液２０雌中に溶解させ、これにジエチルエーテル
１０ ＋ｄ中ｔＤ ０．０１モルｐ−トルエンスルホン
酸クロ２イド溶液を加えそしてこの混合物ｔ−４時間は
げしく攪拌した。エーテル相を分離し、そして水相を濃
塩酸を用いてｐＨ３に酸性化した。粗製のＮ−）ルエン
スルホニルーＬ−ア２ニンが結晶化しはじめ（必要なら
ば４℃に冷却）そしてＰ遇したのち６ｏ容童−の水性ア
ルコールから再結晶した。融点１５０〜１３１℃。
ン）の調製 ■−１−アラニア０．０１モルを１モルの水酸化ナトリ
ウム溶液２０雌中に溶解させ、これにジエチルエーテル
１０ ＋ｄ中ｔＤ ０．０１モルｐ−トルエンスルホン
酸クロ２イド溶液を加えそしてこの混合物ｔ−４時間は
げしく攪拌した。エーテル相を分離し、そして水相を濃
塩酸を用いてｐＨ３に酸性化した。粗製のＮ−）ルエン
スルホニルーＬ−ア２ニンが結晶化しはじめ（必要なら
ば４℃に冷却）そしてＰ遇したのち６ｏ容童−の水性ア
ルコールから再結晶した。融点１５０〜１３１℃。
実施例 １７
トシルアラニルレゾルフィンの調製
ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ） Ｓ ｍｅ中にジシク
ロへキシルカルボジイミド２２０！１ｆ （１，１ミリ
モルン＆ １−ヒドロキシベンゾトリアゾール１６５〜
（１，１ミリモル）およびトシルアラニン１ミリモルを
攪拌下に室温で溶解させた。次にこれにレゾルフィン〔
米国アルドリッチ（Ａｌｃｌｒｉｃｈ）社製品）２１０
〜（１ミリモルンを加えそしてさらに２時間攪拌した。
ロへキシルカルボジイミド２２０！１ｆ （１，１ミリ
モルン＆ １−ヒドロキシベンゾトリアゾール１６５〜
（１，１ミリモル）およびトシルアラニン１ミリモルを
攪拌下に室温で溶解させた。次にこれにレゾルフィン〔
米国アルドリッチ（Ａｌｃｌｒｉｃｈ）社製品）２１０
〜（１ミリモルンを加えそしてさらに２時間攪拌した。
次にこの混合物を氷水１００ｍ、ｌ！中に加えそして酢
酸エチル：ｉ！５Ｑｍｉｌと振盪した。分離したのち酢
酸エチル相を硫酸ナトリウムで乾燥しそして酢酸エチル
を減圧下に除去した。
酸エチル：ｉ！５Ｑｍｉｌと振盪した。分離したのち酢
酸エチル相を硫酸ナトリウムで乾燥しそして酢酸エチル
を減圧下に除去した。
力２ムクロマトグラフイー精製した生成物〔力２ム：シ
リカゲル、移動相：０ＨＯＡ５＋０Ｈ５０Ｈ（９１））
は融点１６５℃を有しそして薄層クロマドグ２フイー上
純粋であった。
リカゲル、移動相：０ＨＯＡ５＋０Ｈ５０Ｈ（９１））
は融点１６５℃を有しそして薄層クロマドグ２フイー上
純粋であった。
実施例 １８
Ｔｏｌｌ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−レサズリンのｖ４
製１ミリモルのＴｏｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＯＨ
を（乾燥）テトラヒドロフ２ン３０ｍ＆中に懸濁させた
。これに４ミリモルのクロロ蟻酸エチルエステルを加え
、この混合物を約１５分間攪拌しそして一１０℃に冷却
した。３ミリモルのＮ−メチルモルホリンを加えそして
室温で６０分間攪拌した。
製１ミリモルのＴｏｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＯＨ
を（乾燥）テトラヒドロフ２ン３０ｍ＆中に懸濁させた
。これに４ミリモルのクロロ蟻酸エチルエステルを加え
、この混合物を約１５分間攪拌しそして一１０℃に冷却
した。３ミリモルのＮ−メチルモルホリンを加えそして
室温で６０分間攪拌した。
これに（乾燥コテトラヒドロン２ン６ＯＩＩＬｉｌ中の
３ミリモルのレサズリンを滴下した。反応は４時間後に
終了し、Ｆ遇しそしてＦ液を蒸発させた。粗生成物をク
ロマトゲランイーカラム〔固定相ニジリカゲル、移動相
： ＯＨＣ！β３＋氷酢酸（１９：１ン〕で精製した。
３ミリモルのレサズリンを滴下した。反応は４時間後に
終了し、Ｆ遇しそしてＦ液を蒸発させた。粗生成物をク
ロマトゲランイーカラム〔固定相ニジリカゲル、移動相
： ＯＨＣ！β３＋氷酢酸（１９：１ン〕で精製した。
試験紙をこの基質の０．１チアルコール溶液で含浸しそ
して乾燥すると崩漿溶液で湿した場合に直ちに彎紫色を
生ずる。
して乾燥すると崩漿溶液で湿した場合に直ちに彎紫色を
生ずる。
実施例 １９
化合物８１０を用いるα−アミラーゼ活性の測定
ｐＨ６，０の柘５モル燐酸塩緩衝液１００ｍｎ中にＮａ
０Ａ ５８５”ｌおよび化合物Ｓ １０２００１１ｊｌ
を溶解させた。この溶液１峨中に尿２ＱｍＱをピスット
で加えそして良く混合した。投ンレコーダーを備えた光
度計中３６５ ｎｕｎで吸収変化を継続的に記録し友。
０Ａ ５８５”ｌおよび化合物Ｓ １０２００１１ｊｌ
を溶解させた。この溶液１峨中に尿２ＱｍＱをピスット
で加えそして良く混合した。投ンレコーダーを備えた光
度計中３６５ ｎｕｎで吸収変化を継続的に記録し友。
ペンレコーダーの記録に基づき１分画シの吸収変化（δ
Ａ／分）を計算しそして下記の式を用いて酵素活性（Ｕ
／ｌ）を計算した。
Ａ／分）を計算しそして下記の式を用いて酵素活性（Ｕ
／ｌ）を計算した。
１０２−試料を含む試験谷量緘
０．０２−試料容１を緘
１０００に峨からＬへの換算因子
１６．１−ｐＨ６，０および３６５ ｎｍにおける２Ｈ
−７−ヒドロキシ−４−メチル−８−ニトロベンゾピラ
ン−２−オンの吸光率ａｎ２／μモル 他のヒドロ２−ゼは本発明によるそしてその酵素に特異
的な基質を用いて適合した反応条件下に同様にして測定
されうる。
−７−ヒドロキシ−４−メチル−８−ニトロベンゾピラ
ン−２−オンの吸光率ａｎ２／μモル 他のヒドロ２−ゼは本発明によるそしてその酵素に特異
的な基質を用いて適合した反応条件下に同様にして測定
されうる。
実施例 ２０
トシル−アラニル−レゾルフィンを用いる白血球エステ
ラーゼの測定 ドイツ連邦共和国ヅユレン（Ｄｉｒｅｎ）のマツ力しイ
ーナーゲル（Ｍａａｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌ）社製の指
示薬試験紙第２１８号を下記溶液で逐次含浸しそして乾
燥した。
ラーゼの測定 ドイツ連邦共和国ヅユレン（Ｄｉｒｅｎ）のマツ力しイ
ーナーゲル（Ｍａａｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌ）社製の指
示薬試験紙第２１８号を下記溶液で逐次含浸しそして乾
燥した。
ａ）ｐＨ８の０．２５モル／ぶ水性硼酸緩衝液。
ｂ）酢酸エチル１Ｌ中に０．２５９溶解させたトシル−
アラニル−レゾルフィン。
アラニル−レゾルフィン。
溶液ａ）の乾燥温度としては約８０℃そしてｂ）につい
ては約１２０℃が選択された。
ては約１２０℃が選択された。
試料としては種々の白血球濃度を有する懸濁液が用いら
れ、その中に試験用紙片を短時間浸した。約１分後に赤
紫色が現われ、その強さは白血球濃度の如何に応する。
れ、その中に試験用紙片を短時間浸した。約１分後に赤
紫色が現われ、その強さは白血球濃度の如何に応する。
この試験系の検出感度は白血球１０００個／μぷである
。
。
含浸溶液ｂ）中にＮ−トシル−アミノブチリル−レゾル
フィンまたはＢｏａ−Ｌｅｕ−レゾルフィンを用いるこ
とによシその検出感度がそれぞれ白血球１０００および
２０［］０／μβにある試験紙が得られた。
フィンまたはＢｏａ−Ｌｅｕ−レゾルフィンを用いるこ
とによシその検出感度がそれぞれ白血球１０００および
２０［］０／μβにある試験紙が得られた。
実施例 ２１
２Ｈ−７−０−（β−ガ２クトピ２ノシルンー４−メチ
ル−８−二トロベンソヒランー２−オン（化合物５１５
）の調製 化合物８１５は化合物Ｓ４と同様にしてｖｓｍされるが
、但しアセトブロモグルコースの代すにアセトブロモガ
ラクトース１６ｊＩが用いられた。融点１８８〜１９２
℃。
ル−８−二トロベンソヒランー２−オン（化合物５１５
）の調製 化合物８１５は化合物Ｓ４と同様にしてｖｓｍされるが
、但しアセトブロモグルコースの代すにアセトブロモガ
ラクトース１６ｊＩが用いられた。融点１８８〜１９２
℃。
元素分析値
Ｃチ Ｈ−Ｎチ Ｏチ
計算値： ５０．１ ４．５ ３．７ ４１．７実測値
： ５０．２ ４．６ ３．７ ４１３特許出願人 ベ
ーリングヴエルケ・アクチェンゲゼルシャフト 外２名 第１頁の続き
： ５０．２ ４．６ ３．７ ４１３特許出願人 ベ
ーリングヴエルケ・アクチェンゲゼルシャフト 外２名 第１頁の続き
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １〕式 を有する化合物、ここで上式中ＡはＡ−０−Ｂの加水分
解後のその吸光が測光測定される酸性ｐＫａ値を有する
複素環式化合物Ａ−ＯＨのイオンＡ−０′″の残基を表
わし、一方Ｂはある種の酵素との反応にとってその化合
物を特異的となす化合物Ｂ−ＯＨの残基であり、そして
その際Ａ−ＯＨＱよ ａ０式Ｉ Ｒ罵 （式中Ｒ１はＯＨ，ＮＯ２またはハロゲンそしてＲ５、
Ｒ４およびＲ５はＨまたはＮＯ２であることができその
際最高２個のＮＯ２が存在する〕を有する化合物、 ｂ０式■ ３ （式中Ｒ１はＨまたは１〜１２個好ましくは１〜３個の
炭素原子を有するアルキルそしてＲ２、Ｒ３およびＲ４
はＨまたはＮＯ２であることができ、その場合１個また
は２個のＮＯ２が存在する）を有する化合物、 Ｃ０弐■ Ｒ帽 （式中Ｒ１は０または電子対、Ｒ２はＯ，ＳまたはＮ（
ＣＨ３）２そしてＩ（３はＯまたはＳであることができ
る）を有する化合物、またはｄ０式■ （式中Ｒ１はアリール好ましくはフェニル、ＣＮまたは
１〜１２個好ましくは１〜３個の炭素原子を有するアル
キルであることができる〕を有する化合物 であり、そしてＢ−ＯＨは糖または糖誘導体特にグルコ
ース、マルトデキストリン、ガラクトース、グルクロン
酸、Ｎ−アセチルグルコサミンまたはフコース、アミノ
酸またはオリゴはプチド（これらはそのそれぞれが保護
基特にトルエンスルホニル基またはカルボベンジルオキ
シ（ＣＢＺ）基を担持しうる〕特にＮ−）ジルアラニン
またはＣＢＺ−グリシン、または無機酸特に燐酸または
硫酸であるものとする。 ２）式Ａ−ＯＨを有する化合物を式Ｂ−ＯＨを有する化
合物の反応性訪導体と反応せしめることからなる前記特
許請求の範囲第１項記載の式Ａ−０−Ｂを有する化合物
の製法。 ３）ヒドロラーゼの検出および測定用の基質としての前
記特許請求の範囲第１項記載の式Ａ−０−Ｂを有する化
合物の使用。 ４）吸収性担体、フィルム層、ゆるいかまたは緊密な粉
末混合物、式Ａ−０−Ｂ （式中Ａ−ＯＨは式■または
■を有する色素でありそしてＢＯＨは必要な場合は保護
基を備えたアミノ酸またはオリゴはプチドである）を有
する化合物と慣用の添加物質例えば緩衝物質、洗浄剤、
活性剤または抑制剤または／および安定剤とを含有する
凍結乾燥物または溶液からなる、エステル分解酵素特に
白血球中に存在するエステラーゼの検出のための診断剤
。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3412939.1 | 1984-04-06 | ||
| DE19843412939 DE3412939A1 (de) | 1984-04-06 | 1984-04-06 | Substrate fuer hydrolasen, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60252464A true JPS60252464A (ja) | 1985-12-13 |
Family
ID=6232820
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60071334A Pending JPS60252464A (ja) | 1984-04-06 | 1985-04-05 | ヒドロラ−ゼ用の基質およびそれらの製法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4716222A (ja) |
| EP (1) | EP0157384B1 (ja) |
| JP (1) | JPS60252464A (ja) |
| AT (1) | ATE117311T1 (ja) |
| AU (1) | AU596072B2 (ja) |
| CA (1) | CA1283248C (ja) |
| DE (2) | DE3412939A1 (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6399083A (ja) * | 1985-10-01 | 1988-04-30 | ベ−リンガ−・マンハイム・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング | レゾルフイン誘導体の燐酸塩、その製法及びこの塩を含有するホスフアタ−ゼ検出用診断薬 |
| JPS63183595A (ja) * | 1986-10-07 | 1988-07-28 | ベーリング・ダイアグノステイツクス・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング | 芳香族置換グリコシド |
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