JPH03224478A - 微生物の生物学的に純粋な培養物、ラクトン生成方法、ジオール生成方法、化合物生成方法および環状エーテルの生成方法 - Google Patents
微生物の生物学的に純粋な培養物、ラクトン生成方法、ジオール生成方法、化合物生成方法および環状エーテルの生成方法Info
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- JPH03224478A JPH03224478A JP2196449A JP19644990A JPH03224478A JP H03224478 A JPH03224478 A JP H03224478A JP 2196449 A JP2196449 A JP 2196449A JP 19644990 A JP19644990 A JP 19644990A JP H03224478 A JPH03224478 A JP H03224478A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［発明の要旨］
本発明は、
下記微生物の生物学的に純粋な培養
に関するものである。
Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓ。
ＡＴＣＣ２０９１８゜
Ｂｅｎｓｉｎｇｔｏｎｉａ ｃｉｌｉａｔａ、 ＡＴ
ＣＣ２０９１９、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ １ａｕ
ｒｅｎＬｉｉ、 ＡＴＣＣ２０９２０、及びＣｒｙｐ
ｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓ、 ＡＴＣＣ２０９
２１他の実施例に於いて本発明は、下記微生物に関する
培養液についてのものである。
ＣＣ２０９１９、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ １ａｕ
ｒｅｎＬｉｉ、 ＡＴＣＣ２０９２０、及びＣｒｙｐ
ｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓ、 ＡＴＣＣ２０９
２１他の実施例に於いて本発明は、下記微生物に関する
培養液についてのものである。
Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓ、 ＡＴＣ
Ｃ２０９１８、Ｂｅｎｓｉｎｇｔｏｎｉａ ｃｉｌｉａ
Ｌａ、 ＡＴＣＣ２０９１９、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕ
ｓ １ａｕｒｅｎｔｉｉ、 ＡＴＣＣ２０９２０、及び
Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓ、 ＡＴＣ
Ｃ２０９２１これら培養液は各々、 水性養分培地における通気条件下で、 次の構造のジオールか、 どちらかを次のようにして生産することができる。
Ｃ２０９１８、Ｂｅｎｓｉｎｇｔｏｎｉａ ｃｉｌｉａ
Ｌａ、 ＡＴＣＣ２０９１９、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕ
ｓ １ａｕｒｅｎｔｉｉ、 ＡＴＣＣ２０９２０、及び
Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓ、 ＡＴＣ
Ｃ２０９２１これら培養液は各々、 水性養分培地における通気条件下で、 次の構造のジオールか、 どちらかを次のようにして生産することができる。
Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓ、 ＡＴＣ
Ｃ２０９１８とＣｒｙｐｔｏｃ。
Ｃ２０９１８とＣｒｙｐｔｏｃ。
ｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓ、 ＡＴＣＣ２０９２１は、
次の構造のスクラレオール［ｓｃ １ａｒｅａ ｌ ］
と次の構造のエビスクラレオール［ｅｐｉｓｃｌａｒｅ
ｏｌ］との混合物から を生産することができる、 また、 Ｂｅｎｓｉｎｇｔｏｎｉａ ｃ ｉｌｉａＬａ。
次の構造のスクラレオール［ｓｃ １ａｒｅａ ｌ ］
と次の構造のエビスクラレオール［ｅｐｉｓｃｌａｒｅ
ｏｌ］との混合物から を生産することができる、 また、 Ｂｅｎｓｉｎｇｔｏｎｉａ ｃ ｉｌｉａＬａ。
ＡＴＣＣ２０９１９
と
Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ
ｌａｕｒｅｎｔｉｉ。
ＡＴＣＣ２０９２０は、
次の構造のスクラレオール［５ｃｌａ
ｒｅｏｌ］と、
次の構造のエビスクラレオール［ｅｐｉｓｃｌａｒｅｏ
ｌ］がら 工 次の構造のジオール シ を生産することができるものである。
ｌ］がら 工 次の構造のジオール シ を生産することができるものである。
さらに別の実施例では本発明は、水性養分培地における
通気条件下で、次の微生物を（個々に）培養することに
よって産生される混合物にも関する。
通気条件下で、次の微生物を（個々に）培養することに
よって産生される混合物にも関する。
ＡＴＣＣ２０９１８、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌ
ｂｉｄｕｓ。
ｂｉｄｕｓ。
ＡＴＣＣ２０９１９、Ｂｅｎｓｉｎｇｔｏｎｉａ ｃｉ
ｌｉａｔａ。
ｌｉａｔａ。
ＡＴＣＣ２０９２０、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ １
ａｕｒｅｎｔｉｉ。
ａｕｒｅｎｔｉｉ。
ＡＴＣＣ２０９２１、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌ
ｂｉｄｕｓ、 以上さらに別の実施例では本発明は、 （１）次の構造 及び／又は、次の構造の ○ ｌまたは２以上の化合物を含有する水性養分培地におい
て通気条件下でＡＴＣＣ２０９１８のＣｒｙｐｔｏｃｏ
ｃｃｕｓａｌｂｉｄｕｓまたはＡＴＣＣ２０９２１のＣ
ｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓといった微生
物のいずれかを培養することを特徴とする次の構造のス
クラレオライド の生産方法の過程に関する。
ｂｉｄｕｓ、 以上さらに別の実施例では本発明は、 （１）次の構造 及び／又は、次の構造の ○ ｌまたは２以上の化合物を含有する水性養分培地におい
て通気条件下でＡＴＣＣ２０９１８のＣｒｙｐｔｏｃｏ
ｃｃｕｓａｌｂｉｄｕｓまたはＡＴＣＣ２０９２１のＣ
ｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓといった微生
物のいずれかを培養することを特徴とする次の構造のス
クラレオライド の生産方法の過程に関する。
さらに別の実施例では発明は、
一ルの生産方法の過程に関し、
次の構造のジオ
シ
（ａ） ＡＴＣＣ２０９１９、Ｂｅｎｓｉｎｇｔｏｎｉ
ａ ｃｉｌｉａｔａ、または（ｂ） ＡＴＣＣ２０９２
０、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ １ａｕｒｅｎｔｉｉと
いった微生物のいずれかを、（１）次の構造のスクラレ
オール （２）次の構造のエビスクラレオール （３）次の構造のアセテート から成る群から選択される化合物の１または２以上を有
する水性養分培地で通気条件下に培養することを特徴と
するものである。
ａ ｃｉｌｉａｔａ、または（ｂ） ＡＴＣＣ２０９２
０、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ １ａｕｒｅｎｔｉｉと
いった微生物のいずれかを、（１）次の構造のスクラレ
オール （２）次の構造のエビスクラレオール （３）次の構造のアセテート から成る群から選択される化合物の１または２以上を有
する水性養分培地で通気条件下に培養することを特徴と
するものである。
化合物の変換過程は、
次の構造の
化合物の１または２または全部の存在下に、水性養分培
地で、 ＡＴＣＣ２０９１８のＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌ
ｂｉｄｕｓ。
地で、 ＡＴＣＣ２０９１８のＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌ
ｂｉｄｕｓ。
ＡＴＣＣ２０９１９のＢｅｎｓｉｎｇｔｏｎｉａ ｃｉ
ｌｉａｔａ。
ｌｉａｔａ。
ＡＴＣＣ２０９２０のＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ １ａ
ｕｒｅｎｔｉｉ、またはＡＴＣＣ２０９２１のＣｒｙｐ
ｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓといった微生物の１
の培養を含むものである。
ｕｒｅｎｔｉｉ、またはＡＴＣＣ２０９２１のＣｒｙｐ
ｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓといった微生物の１
の培養を含むものである。
このようにこれら化合物は単独で、または上記化合物の
任意の数を含有する混合物として使用することができる
。
任意の数を含有する混合物として使用することができる
。
こうしてＡＴＣＣ２０９１８のＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕ
ｓ ａｌｂｉｄｕｓ。
ｓ ａｌｂｉｄｕｓ。
またはＡＴＣＣ２０９２１のＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ
ａｌｂｉｄｕｓを使用して反応させると、次の反応を
起すことができる。
ａｌｂｉｄｕｓを使用して反応させると、次の反応を
起すことができる。
り
及び／又は
ＡＴＣＣ２０９１９のＢｅｎｓｉｎｇｔｏｎｉａ ｃｉ
ｌｉａｔａ、またはＡＴｃｃ ２０９２０のＣｒｙｐｔ
ｏｃｏｃｃｕｓ １ａｕｒｅｎｔｉｉを使用して反応を
させると次の反応を起こすことができる。
ｌｉａｔａ、またはＡＴｃｃ ２０９２０のＣｒｙｐｔ
ｏｃｏｃｃｕｓ １ａｕｒｅｎｔｉｉを使用して反応を
させると次の反応を起こすことができる。
及び／又は
使用される微生物の形態［ｆｏｒｍ］は重要でない。
微生物は、細胞およびその細胞に好適な養分溶液を含む
培養液（懸濁液）としてか、または緩衝液中に懸濁した
細胞という形態で使用することができる。細胞またはそ
の抽出された酵素は適当な固形支持体上に固定すること
ができ、そうすれば、これらは化合物の変換に用いるこ
とができる。
培養液（懸濁液）としてか、または緩衝液中に懸濁した
細胞という形態で使用することができる。細胞またはそ
の抽出された酵素は適当な固形支持体上に固定すること
ができ、そうすれば、これらは化合物の変換に用いるこ
とができる。
懸濁状の培養液混合物は適当な水性養分培地への微生物
の接種によって調製される。適当な養分培地とは窒素源
、無機塩、成長要素、好適な基質、および任意的にその
他の炭素源を包含するものをいう。本発明方法の実施に
好適な種類の炭素源としては、例えばグルコース、ガラ
クトース、Ｌソルボース、マルトース、スクロース、七
ロビオース、トレハロース、Ｌ−アラビノース、Ｌ−ラ
ムノース、エタノール、グリセロール、Ｌ−二すトリト
ール、Ｄ−マンニトール、ラクトース、メリビオース、
ラフィノース、メレチトース、デンプン、Ｄ−キシロー
ス、Ｄ−ソルビトール、ａ−メチル−Ｄ−グルコシド、
乳酸、クエン酸、およびコハク酸がある。好適な窒素源
には、例えばペプトン、肉抽已物、抽出酵母、コーンス
ターチ酒、カゼイン、尿素、アミノ酸のような窒素含有
の有機物質、または硝酸塩、亜硝酸塩、無機アンモニア
塩のような窒素含有の無機化合物がある。好適な無機塩
には例えば、マグネシウム、カリウム、カルシウム、ま
たはナトリウムのリン酸塩がある。上記の培地の養分は
、所望により例えばビタミンＢ群の１まｔ；は２以上、
及び／又はＦｅ、Ｍｏ、Ｃｕ。
の接種によって調製される。適当な養分培地とは窒素源
、無機塩、成長要素、好適な基質、および任意的にその
他の炭素源を包含するものをいう。本発明方法の実施に
好適な種類の炭素源としては、例えばグルコース、ガラ
クトース、Ｌソルボース、マルトース、スクロース、七
ロビオース、トレハロース、Ｌ−アラビノース、Ｌ−ラ
ムノース、エタノール、グリセロール、Ｌ−二すトリト
ール、Ｄ−マンニトール、ラクトース、メリビオース、
ラフィノース、メレチトース、デンプン、Ｄ−キシロー
ス、Ｄ−ソルビトール、ａ−メチル−Ｄ−グルコシド、
乳酸、クエン酸、およびコハク酸がある。好適な窒素源
には、例えばペプトン、肉抽已物、抽出酵母、コーンス
ターチ酒、カゼイン、尿素、アミノ酸のような窒素含有
の有機物質、または硝酸塩、亜硝酸塩、無機アンモニア
塩のような窒素含有の無機化合物がある。好適な無機塩
には例えば、マグネシウム、カリウム、カルシウム、ま
たはナトリウムのリン酸塩がある。上記の培地の養分は
、所望により例えばビタミンＢ群の１まｔ；は２以上、
及び／又はＦｅ、Ｍｏ、Ｃｕ。
Ｍｎ及びＢのようなｌまたは２以上の微量鉱物で補足す
ることができる。ビタミンや微量鉱物は、酵母エキスの
少量が培地に追加されるときには不要である。細菌汚染
が問題になるときは、クロロアンフェニコル［ｃｈｌｏ
ｒｏａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ］またはクロロテトラサイク
リンのような抗生物質を添加することが好ましい。
ることができる。ビタミンや微量鉱物は、酵母エキスの
少量が培地に追加されるときには不要である。細菌汚染
が問題になるときは、クロロアンフェニコル［ｃｈｌｏ
ｒｏａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ］またはクロロテトラサイク
リンのような抗生物質を添加することが好ましい。
微生物の培養は、静置培養としてでも、あるいは通気条
件下で深部培養（例えば、撹拌培養、発酵器［ｆｅｒｍ
ｅｎｔｏｒ］を用いた培養）としてでも行うことができ
る。ものによってはｐＨ約２．５〜９゜０の範囲で行な
うことができるが、好ましくは約３．０〜７．５、最適
には約３．０〜６．５の範囲である。ｐＨ値は、塩酸、
酢酸、シュウ酸等の無機酸または有機酸を添加すること
によって調整することができ、あるいは水酸化ナトリウ
ム、水酸化アンモニウムのような塩基を添加することに
より、またはリン酸塩またはフタル酸塩のような緩衝剤
を添加することにより調整することができる。インキュ
ベーション温度は約１２℃〜約３３℃に維持されていな
ければならず、より好ましくは約１５℃〜３０℃、最適
には約１８℃〜２８℃である。
件下で深部培養（例えば、撹拌培養、発酵器［ｆｅｒｍ
ｅｎｔｏｒ］を用いた培養）としてでも行うことができ
る。ものによってはｐＨ約２．５〜９゜０の範囲で行な
うことができるが、好ましくは約３．０〜７．５、最適
には約３．０〜６．５の範囲である。ｐＨ値は、塩酸、
酢酸、シュウ酸等の無機酸または有機酸を添加すること
によって調整することができ、あるいは水酸化ナトリウ
ム、水酸化アンモニウムのような塩基を添加することに
より、またはリン酸塩またはフタル酸塩のような緩衝剤
を添加することにより調整することができる。インキュ
ベーション温度は約１２℃〜約３３℃に維持されていな
ければならず、より好ましくは約１５℃〜３０℃、最適
には約１８℃〜２８℃である。
本発明に係る方法は、下記構造の化合物及び／又は
の１つ又は混合物を単一炭素源として培養着手時に養分
培地に添加することによって好適に行われる。別法とし
て、培養中か、または炭素源が枯渇されたときに、デキ
ストロースのような別の炭素源と組み合わせて基質を加
えてもよい。培地における基質濃度に対する唯一の制限
は培養液を効果的に空気にさらすことができることにあ
る。しかし基質濃度は好ましくは約０．１ｇ／Ｑ〜約１
３０ｇ／Ｑ、ヨリ好マシくハ約０．５ｇ／１２−１２０
ｇ／Ｑ。
培地に添加することによって好適に行われる。別法とし
て、培養中か、または炭素源が枯渇されたときに、デキ
ストロースのような別の炭素源と組み合わせて基質を加
えてもよい。培地における基質濃度に対する唯一の制限
は培養液を効果的に空気にさらすことができることにあ
る。しかし基質濃度は好ましくは約０．１ｇ／Ｑ〜約１
３０ｇ／Ｑ、ヨリ好マシくハ約０．５ｇ／１２−１２０
ｇ／Ｑ。
最適には約２．５ｇ／Ｑ〜約１００ｇ／ｆｆの範囲がよ
い。化合物の変換は、上記のいかなる環境下でも最適に
行なわれ得る。
い。化合物の変換は、上記のいかなる環境下でも最適に
行なわれ得る。
化合物の変換の全時間（初期培養期後の）は養′分培地
の組成および基質濃度に依って変ってくる。
の組成および基質濃度に依って変ってくる。
一般に振盪７ラスコを用いた培養は約１２時間〜約２６
４時間を要する。しかし、発酵器が使用されるときは培
養時間は約４８時間またはそれ以下に短縮される。
４時間を要する。しかし、発酵器が使用されるときは培
養時間は約４８時間またはそれ以下に短縮される。
化合物の変換は培養液から単離された微生物の細胞、ま
たは従来技術として周知の方法で細胞から単離された抽
出酵素を用いて行われる。この場合には化合物の変換は
、例えば緩衝溶液中、生理食塩溶液中、新鮮な養分培地
中、または水中といった様々な水性養分培地で便宜的に
行われる。単離された細胞または抽出された酵素は固形
支持体上に固定されて所望の化合物の変換が達成される
。
たは従来技術として周知の方法で細胞から単離された抽
出酵素を用いて行われる。この場合には化合物の変換は
、例えば緩衝溶液中、生理食塩溶液中、新鮮な養分培地
中、または水中といった様々な水性養分培地で便宜的に
行われる。単離された細胞または抽出された酵素は固形
支持体上に固定されて所望の化合物の変換が達成される
。
また基質の化合物の変換は、この有機体（微生物）の突
然変異体によって影響される。このような突然変異体は
、例えば細胞を紫外線またはＸ線、あるいは例えばアク
リジンオレンジのような公知の突然変異誘発物質にさら
すという周知の方法によって簡単に得ることができる。
然変異体によって影響される。このような突然変異体は
、例えば細胞を紫外線またはＸ線、あるいは例えばアク
リジンオレンジのような公知の突然変異誘発物質にさら
すという周知の方法によって簡単に得ることができる。
基質は粉末として、あるいはＴＷＥＥＮ ８０（商標）
（ポリオキシエチレンソルビタンモノオレイン酸塩）の
ような乳化剤中スラリーとして、あるいは乳化剤中の溶
液として、あるいは例えばアセトン、メタノ−Ｊし、エ
タノール、エチレンクリコーノ呟するいはジオキサンの
ような親水性溶媒中の溶液として培地に添加することが
できる。表面活性剤または分散剤も基質の水性懸濁液に
添加することができるし、あるいは基質は超音波を用い
て乳化することができる。
（ポリオキシエチレンソルビタンモノオレイン酸塩）の
ような乳化剤中スラリーとして、あるいは乳化剤中の溶
液として、あるいは例えばアセトン、メタノ−Ｊし、エ
タノール、エチレンクリコーノ呟するいはジオキサンの
ような親水性溶媒中の溶液として培地に添加することが
できる。表面活性剤または分散剤も基質の水性懸濁液に
添加することができるし、あるいは基質は超音波を用い
て乳化することができる。
シリコーン油（例えばＵＣＯＮ） 、ポリアルキレング
リコール誘導体、とうもろこし油、または大豆油のよう
な入手容易な消泡剤が発泡を抑制するのに使用できる。
リコール誘導体、とうもろこし油、または大豆油のよう
な入手容易な消泡剤が発泡を抑制するのに使用できる。
基質の変換は、気−液クロマトグラフイ（ＧＬＣ）。
薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ） 、高圧液体クロマト
グラフィ（ＨＰＬＣ） 、赤外スペクトル（ＩＲ）、お
よび核磁気共鳴（ＮＭＲ）のような標準的な分析法を用
し１てモニターすることができる。もし基質の急速な消
失が観察されるときには、微生物の化合物変換能力を最
大限にするため、もつとたくさんの基質をそのとき追加
することができる。一般にこの過程は、基質の大部分が
培地から消失した。ときに終りにされる。
グラフィ（ＨＰＬＣ） 、赤外スペクトル（ＩＲ）、お
よび核磁気共鳴（ＮＭＲ）のような標準的な分析法を用
し１てモニターすることができる。もし基質の急速な消
失が観察されるときには、微生物の化合物変換能力を最
大限にするため、もつとたくさんの基質をそのとき追加
することができる。一般にこの過程は、基質の大部分が
培地から消失した。ときに終りにされる。
使用される微生物の種類に依って、
下
または下記構造の化合物を
シ
水性養分培地から回収できる。
下記構造の化合物
は、
シ
米国特許第４．７９８．７９９号明細書の第８１！４、
第５２行、第５３行に記載されているように（この言及
により本明細書の一部に組み入れるものとする）下記構
造の化合物に環化される。
第５２行、第５３行に記載されているように（この言及
により本明細書の一部に組み入れるものとする）下記構
造の化合物に環化される。
また、
その方香の価値から用いてもよく、
あるい
は下記構造の化合物に
次の反応を経て還元されてもよい。
次の構造の化合物の生成は
まづ次の構造の化合物を
次の構造のジオールへと還元し、
次にそのジオールを再閉環し、
次の構造の化合物を生成することにより行われる。
これは次の反応による。
および
好ましくはこの還元反応は、
ＶＩＴＲＩＤＥ（商標）のような還元剤−一一一米国特
許第３．５０７．８９５号明細書に記載されている水素
化ビス（２−メトキシエトキシ）水酸化アルミニウムナ
トリウムーーーーを使用したトルエンのような不活性溶
媒の存在下で行われる。この反応は好ましくは約り０℃
〜約９０℃の温度域で約１時間〜約３時間で行われる。
許第３．５０７．８９５号明細書に記載されている水素
化ビス（２−メトキシエトキシ）水酸化アルミニウムナ
トリウムーーーーを使用したトルエンのような不活性溶
媒の存在下で行われる。この反応は好ましくは約り０℃
〜約９０℃の温度域で約１時間〜約３時間で行われる。
再閉環反応、即ち、
は好ましくは、例えば水性水酸化カリウム、あるいは水
性水酸化ナトリウムのような水性水酸化アルカリ金属と
いう塩基性条件で行われる。その詳細については後述の
実施例■に記載する。
性水酸化ナトリウムのような水性水酸化アルカリ金属と
いう塩基性条件で行われる。その詳細については後述の
実施例■に記載する。
下記構造の化合物の発酵ブイヨンからの単離および精製
は、 ろ過、 遠心、 溶媒抽出、 蒸留、 結晶化等の従来技 術によって行うことができる。
は、 ろ過、 遠心、 溶媒抽出、 蒸留、 結晶化等の従来技 術によって行うことができる。
下記構造の化合物は、
シ
米国特許第４．７９８，７９９号の第８欄、第５８〜６
８行、米国特許第４，７９８，７９９号の第９欄、第１
〜２行に記載されている当業者に周知のよく使われる環
化法により、下記構造の化合物に変換することができる
。
８行、米国特許第４，７９８，７９９号の第９欄、第１
〜２行に記載されている当業者に周知のよく使われる環
化法により、下記構造の化合物に変換することができる
。
本発明に使用される各微生物は、様々な地理的箇所から
入手された土壌サンプルから単離された。
入手された土壌サンプルから単離された。
各菌株は次の入手番号下にアメリカン タイプカルチャ
ー コレクション［ＡＴＣＣ］に寄託した。
ー コレクション［ＡＴＣＣ］に寄託した。
Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓ、 ＡＴＣ
Ｃ２０９１８：Ｂｅｎｓｉｎｇｔｏｎｉａ ｃｉｌｉａ
ｔａ、 ＡＴＣＣ２０９１９；Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕ
ｓ １ａｕｒｅｎｔｉｉ、 ＡＴＣＣ２０９２０；
及び Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓ、ＡＴＣ
Ｃ２０９２１Ｂｅｎｓｉｎｇｔｏｎｉａ ｃｉｌｉａＬ
ａとＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ １ａｕｒｅｎｔｉｉ
の両微生物は、セントラルビューロー ヴオーシメール
カルチャーズ（ＣＢＳ）で調べられ、ＣＢＳは両微生物
に次の名前を与えた。即ち、 Ｌｅｃｙｔｈｏｐｈｅｒｅ ｈｏｆｆｍａｎｎｉｉ （
ｖａｎ Ｂｅｉｊｍａ）、Ｗ、Ｇａｍ５ （ｓｙｎｏｎ
ｙｍ Ｐｈ１ａｌｏｐｈｏｒａ ｈｏｆｆｍａｎｎｉｉ
）なぜならＣＢＳによればこれは糸状菌だからである。
Ｃ２０９１８：Ｂｅｎｓｉｎｇｔｏｎｉａ ｃｉｌｉａ
ｔａ、 ＡＴＣＣ２０９１９；Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕ
ｓ １ａｕｒｅｎｔｉｉ、 ＡＴＣＣ２０９２０；
及び Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓ、ＡＴＣ
Ｃ２０９２１Ｂｅｎｓｉｎｇｔｏｎｉａ ｃｉｌｉａＬ
ａとＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ １ａｕｒｅｎｔｉｉ
の両微生物は、セントラルビューロー ヴオーシメール
カルチャーズ（ＣＢＳ）で調べられ、ＣＢＳは両微生物
に次の名前を与えた。即ち、 Ｌｅｃｙｔｈｏｐｈｅｒｅ ｈｏｆｆｍａｎｎｉｉ （
ｖａｎ Ｂｅｉｊｍａ）、Ｗ、Ｇａｍ５ （ｓｙｎｏｎ
ｙｍ Ｐｈ１ａｌｏｐｈｏｒａ ｈｏｆｆｍａｎｎｉｉ
）なぜならＣＢＳによればこれは糸状菌だからである。
Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓ、 ＡＴＣ
Ｃ２０９１８もＣＢＳで調べられ、ＣＢＳはこの培養菌
をＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓ ｖａｒ
、 ａｌｂｉｄｕｓ （Ｓａｉｔｏ） ５ｋｉｎｎｅｒ
と命名した。
Ｃ２０９１８もＣＢＳで調べられ、ＣＢＳはこの培養菌
をＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓ ｖａｒ
、 ａｌｂｉｄｕｓ （Ｓａｉｔｏ） ５ｋｉｎｎｅｒ
と命名した。
Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓ、 ＡＴＣ
Ｃ２０９１８については次のように記述されている。
Ｃ２０９１８については次のように記述されている。
形態学： 液体培地における増殖は単極の出芽細胞を現
した。この液体表面には薄膜が現われ、一方重い沈降物
が観察された。固体寒天における増殖は単細胞で、白色
から僅かにピンク色がかった、非常に光沢のある、明る
く、ねばねばした、丸くてはっきりとした境界のコロニ
ーを持っていた。偽菌糸［ｐｓｅｕｄｏｈｙｐｈａｅｌ
はコーンミール寒天に形成されなかった。
した。この液体表面には薄膜が現われ、一方重い沈降物
が観察された。固体寒天における増殖は単細胞で、白色
から僅かにピンク色がかった、非常に光沢のある、明る
く、ねばねばした、丸くてはっきりとした境界のコロニ
ーを持っていた。偽菌糸［ｐｓｅｕｄｏｈｙｐｈａｅｌ
はコーンミール寒天に形成されなかった。
生理学および生化学：
炭素固定： 炭素固定：
（増殖） （増殖）
グルコース ＋ Ｄ−リポース 不明ガラクト
ース ＋ Ｌ−ラムノース ＋Ｌ−ソルボース＋
Ｄ−グルコサミン ＋マルトース ＋ エ
タノール 不明スクロース ＋ エリトリトー
ルセロビオース ＋ グリセロール 不明トレハロ
ース ＋ アドニトール（リビトール） ＋ ラクトース ＋ ズルシトール（ガラクチトール） ＋ メリビオース Ｄ−マンニトール 十 ラフィノース ＋Ｄ−ソル
ビトール（ズルシトール） ＋メレチトース ＋ ａ−メチル−Ｄ−グルコシ イヌリン 可溶性デンプン Ｄ−キシロース Ｌ−アラビノース Ｄ−アラビノ−ス ト ＋ サリシン イノシトール 乳酸 クエン酸 コハク酸 ３０℃で増殖 ＋ ３７℃で増殖 ビタミンなしの増殖 アルブチンの分裂 ＋ 窒素同化： ＮＨ，Ｎ０３ ＫＮＯ。
ース ＋ Ｌ−ラムノース ＋Ｌ−ソルボース＋
Ｄ−グルコサミン ＋マルトース ＋ エ
タノール 不明スクロース ＋ エリトリトー
ルセロビオース ＋ グリセロール 不明トレハロ
ース ＋ アドニトール（リビトール） ＋ ラクトース ＋ ズルシトール（ガラクチトール） ＋ メリビオース Ｄ−マンニトール 十 ラフィノース ＋Ｄ−ソル
ビトール（ズルシトール） ＋メレチトース ＋ ａ−メチル−Ｄ−グルコシ イヌリン 可溶性デンプン Ｄ−キシロース Ｌ−アラビノース Ｄ−アラビノ−ス ト ＋ サリシン イノシトール 乳酸 クエン酸 コハク酸 ３０℃で増殖 ＋ ３７℃で増殖 ビタミンなしの増殖 アルブチンの分裂 ＋ 窒素同化： ＮＨ，Ｎ０３ ＫＮＯ。
ＮＯ。
エチルアミン
発
酵
（酸形成）
グルコース
ガラクトース
マルトース
スクロース
ラクトース
ラフィノース
メリビオース
イヌリン
セロビオース
メレチトース
デンプン
トレハご−ス
Ｂｅｎｓｉｎｇｔｏｎｉａ ｃｉｌｉａｔａ、 ＡＴＣ
Ｃ２０９１９については次のように記述されている。
Ｃ２０９１９については次のように記述されている。
形態学二 酵母維持ブイヨン（ＡＴＣＣ培地＃２００）
上で細胞は１細胞当り１〜３芽を持つ球形である。
上で細胞は１細胞当り１〜３芽を持つ球形である。
固形培地で細胞は、産生された射出胞子を有する糸状の
ものとなる。コロニーは、サーモン黄褐色で、平たくて
、どんよりしていているが、はっきりした境界を持って
いる。コーンミール寒天（ＡＴＣＣ培地＃３０７）上で
、３週間後に真の菌糸体が観察された。
ものとなる。コロニーは、サーモン黄褐色で、平たくて
、どんよりしていているが、はっきりした境界を持って
いる。コーンミール寒天（ＡＴＣＣ培地＃３０７）上で
、３週間後に真の菌糸体が観察された。
生理学：
炭素固定ニ
ゲルコース ＋ Ｄ−リボースガラクトース
＋ Ｌ−ラムノース ＋Ｌ−ンルポース ＋
Ｄ−グルコサミン ＋マルトース ＋ エ
タノール 弱スクロース ＋ エリトリトー
ル ＋セロビオース ＋ グリセロール ＋ト
レハロース ＋ アドニトール（リビトール） 弱 ラクトース ズルシトール（ガラクチトール） 弱 メリビオース ＋ Ｄ−マンニトール弱ラフィノ
ース ＋ Ｄ−ソルビトール（ズルシトール）弱 メレチトース ＋ ａ−メチル−Ｄ−グルコシド 弱イヌリン 可溶性デンプン Ｄ−キシロース し−アラビノース ＋ Ｄ−アラビノース ＋ ＋ サリシン イノシトール 乳酸 クエン酸 コハク酸 弱 弱 ビタミンなしの成長 窒素同化： ＮＨ，ＮＯ，弱 高温における増殖： ３０℃弱／ ３７℃ 分類学上の説明： Ｂｅｎｓｉｎｇｔｏｎｉａ ｃｉｌｉａｔａ Ｃ，Ｔ、
Ｉｎｇｏｌｄ （後記の＠参照） 線画調（不完全菌類） ［Ｆｕｎｇｉ Ｉｍｐａｒｆｅ
ｃｔｉｌ射出胞子の菌類（勢いよくはじき飛ばされる胞
子） この射出胞子は無色で、液体培地中で２Ｘ５μ、はとん
ど８×５μの卵形で、尖端が尖り基部が平らである。
＋ Ｌ−ラムノース ＋Ｌ−ンルポース ＋
Ｄ−グルコサミン ＋マルトース ＋ エ
タノール 弱スクロース ＋ エリトリトー
ル ＋セロビオース ＋ グリセロール ＋ト
レハロース ＋ アドニトール（リビトール） 弱 ラクトース ズルシトール（ガラクチトール） 弱 メリビオース ＋ Ｄ−マンニトール弱ラフィノ
ース ＋ Ｄ−ソルビトール（ズルシトール）弱 メレチトース ＋ ａ−メチル−Ｄ−グルコシド 弱イヌリン 可溶性デンプン Ｄ−キシロース し−アラビノース ＋ Ｄ−アラビノース ＋ ＋ サリシン イノシトール 乳酸 クエン酸 コハク酸 弱 弱 ビタミンなしの成長 窒素同化： ＮＨ，ＮＯ，弱 高温における増殖： ３０℃弱／ ３７℃ 分類学上の説明： Ｂｅｎｓｉｎｇｔｏｎｉａ ｃｉｌｉａｔａ Ｃ，Ｔ、
Ｉｎｇｏｌｄ （後記の＠参照） 線画調（不完全菌類） ［Ｆｕｎｇｉ Ｉｍｐａｒｆｅ
ｃｔｉｌ射出胞子の菌類（勢いよくはじき飛ばされる胞
子） この射出胞子は無色で、液体培地中で２Ｘ５μ、はとん
ど８×５μの卵形で、尖端が尖り基部が平らである。
射出胞子は酵母のような出芽型胞子を形成して発芽する
。そして上記出芽型胞子は反復的に胞子形成を繰り返し
ながら典型的な酵母コロニーを形成する（写真参照）。
。そして上記出芽型胞子は反復的に胞子形成を繰り返し
ながら典型的な酵母コロニーを形成する（写真参照）。
ある種の射出胞子は、射出胞子を産生ずる短い菌糸の形
成や反復的な胞子の放出を伴って発芽し、全体的に菌糸
型のコロニーとなる（写真参照）。
成や反復的な胞子の放出を伴って発芽し、全体的に菌糸
型のコロニーとなる（写真参照）。
下記培地からの評価：
ＡＴＣＣ培地
＃３０７ ”−ンミール寒天（Ｄｉｒｃｏ ０３８
６）及び学力のコーンミール寒天 酵母モルト寒天（Ｄｉｒｃｏ ０７１２）アカパンカビ
［Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ］寒天（Ｄｉｆｃ。
６）及び学力のコーンミール寒天 酵母モルト寒天（Ｄｉｒｃｏ ０７１２）アカパンカビ
［Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ］寒天（Ｄｉｆｃ。
０３２１）
ＥＰＤ
モルトエキス寒天（Ｄｉｆｃｏ ００２４）ポテトデキ
ストロース寒天 ＃２００ ＃３２４ ＃１２４５ ＃３３１ ＃３３６ ＃３４３ Ｖ−８ジユース寒天 ＠ １． Ｉｎｇｏｌｄ、 Ｃ，Ｔ、 （１９８６）
Ｂｅｎｓｉｎｇｔｏｎｉａ ｃｉｌｉａｔａ Ｇｅｎ、
ｅｔ、 ｓｐ、 ｎｏｖ、、 Ｂａ１ｌｉｓｔｏｐｏ
ｒｉｃ Ｆｕｎｇｕｓ。
ストロース寒天 ＃２００ ＃３２４ ＃１２４５ ＃３３１ ＃３３６ ＃３４３ Ｖ−８ジユース寒天 ＠ １． Ｉｎｇｏｌｄ、 Ｃ，Ｔ、 （１９８６）
Ｂｅｎｓｉｎｇｔｏｎｉａ ｃｉｌｉａｔａ Ｇｅｎ、
ｅｔ、 ｓｐ、 ｎｏｖ、、 Ｂａ１ｌｉｓｔｏｐｏ
ｒｉｃ Ｆｕｎｇｕｓ。
Ｔｒａｎｓ、 Ｂｒ、 Ｍｙｃｏｌ、Ｓｏｃ、 ８６（
２）： ３２５−３２８２、１ｎｇｏｌｄ、 Ｃ，Ｔ、
（１９８８） Ｂｅｎｓｉｎｇｔｏｎｉａ ｃｉｌｉ
ａｔａに関するさらなる観察 Ｔｒａｎｓ、 Ｂｒ、
Ｍｙｃｏｌ、 Ｓｏｃ、 ９１（１）： １６２−１６
６Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ １ａｕｒｅｎｔｉｉ、
ＡＴＣＣ２０９２０については次のように記載されてい
る。即ち、生理学および生化学： 炭素固定： （増殖） グルコース ＋ ガラクトース ＋ Ｌ−ソルボース 十弱 Ｄ−グルコサミン マルトース ＋ スクロース ＋ セロビオース ＋ Ｄ−リポース 十弱 し−ラムノース ＋ 可変 エタノール ＋ エリトリトール＋ グリセロール ＋ トレハロース ＋ アドニトール（リビトール） 土偶 ラクトース 十弱 ズルシトール（ガラクチトール） 可変メリビオース
＋ Ｄ−マンニトール ＋ ラフィノースＤ−ソルビト
ール（ズルシトール） ＋メレチトース ＋ ａ−メチル−Ｄ−グルコ・ンド ＋イヌリン
＋ ケリシン 可溶性デンプン ＋ イノシトールＤ−キシロース
＋ 乳酸 Ｌ−アラビノース ＋ クエン酸 り−アラビノース 十弱 コハク酸 窒素同化二 ＮＨ，ＮＯ。
２）： ３２５−３２８２、１ｎｇｏｌｄ、 Ｃ，Ｔ、
（１９８８） Ｂｅｎｓｉｎｇｔｏｎｉａ ｃｉｌｉ
ａｔａに関するさらなる観察 Ｔｒａｎｓ、 Ｂｒ、
Ｍｙｃｏｌ、 Ｓｏｃ、 ９１（１）： １６２−１６
６Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ １ａｕｒｅｎｔｉｉ、
ＡＴＣＣ２０９２０については次のように記載されてい
る。即ち、生理学および生化学： 炭素固定： （増殖） グルコース ＋ ガラクトース ＋ Ｌ−ソルボース 十弱 Ｄ−グルコサミン マルトース ＋ スクロース ＋ セロビオース ＋ Ｄ−リポース 十弱 し−ラムノース ＋ 可変 エタノール ＋ エリトリトール＋ グリセロール ＋ トレハロース ＋ アドニトール（リビトール） 土偶 ラクトース 十弱 ズルシトール（ガラクチトール） 可変メリビオース
＋ Ｄ−マンニトール ＋ ラフィノースＤ−ソルビト
ール（ズルシトール） ＋メレチトース ＋ ａ−メチル−Ｄ−グルコ・ンド ＋イヌリン
＋ ケリシン 可溶性デンプン ＋ イノシトールＤ−キシロース
＋ 乳酸 Ｌ−アラビノース ＋ クエン酸 り−アラビノース 十弱 コハク酸 窒素同化二 ＮＨ，ＮＯ。
ＫＮＯ。
Ｏ２
エチルアミン
ビタミンなしの成長
＋
アルブチンの分裂
＋
発 酵（ガス発生）
グルコース
ガラクトース
マルトース
スクロース
ラクトース
ラフィノース
メリビオース
イヌリン
セロビオース
メレチトース
デンプン
トレハロース
形態学：ピンク色のねばねばしたコロニーで、丸い発芽
細胞、フラスコ中で重い沈澱物； Ｄａ１ｍａｕ皿上に
薄い菌糸が形成された。
細胞、フラスコ中で重い沈澱物； Ｄａ１ｍａｕ皿上に
薄い菌糸が形成された。
参照： Ｃ，Ｐ、 Ｋｕｒｔｚｍａｎ、 Ｍｙｃｏｌｏ
ｇｉａ ６５； ｐ、３８８−３９５．１９７３ Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓ、 ＡＴＣ
Ｃ２０９２１については次のように記載されている。
ｇｉａ ６５； ｐ、３８８−３９５．１９７３ Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓ、 ＡＴＣ
Ｃ２０９２１については次のように記載されている。
生理学および生化学：
炭素固定：
（増殖）
グルコース ＋ Ｄ−リボース
ガラクトース ＋ Ｌ−ラムノース ＋Ｌ−ソル
ボース ＋ Ｄ−グルコサミン ＋マルトース
＋ エタノール 可変スクロース ＋ ユ
リトリトールセロビオース 士 グリセロール 可
変トレハロース ＋ アドニトール（リビトール） 可変 ラクトース 士 ズルシトール（ガラクチトール） ＋ メリビオース Ｄ−マンニトール ＋ ラフィノース ＋Ｄ−ソル
ビトール（グルシトール） メレチトース ＋ ａ−メチル−Ｄ−グルコシド イヌリン 可溶性デンプン ＋ Ｄ−キシロース ＋ Ｌ−アラビノース ＋ Ｄ−アラビノース ＋ サリシン イノシトール 乳酸 クエン酸 コハク酸 ＋ ＋ 窒素同化： ＮＨ，ＮＯ。
ボース ＋ Ｄ−グルコサミン ＋マルトース
＋ エタノール 可変スクロース ＋ ユ
リトリトールセロビオース 士 グリセロール 可
変トレハロース ＋ アドニトール（リビトール） 可変 ラクトース 士 ズルシトール（ガラクチトール） ＋ メリビオース Ｄ−マンニトール ＋ ラフィノース ＋Ｄ−ソル
ビトール（グルシトール） メレチトース ＋ ａ−メチル−Ｄ−グルコシド イヌリン 可溶性デンプン ＋ Ｄ−キシロース ＋ Ｌ−アラビノース ＋ Ｄ−アラビノース ＋ サリシン イノシトール 乳酸 クエン酸 コハク酸 ＋ ＋ 窒素同化： ＮＨ，ＮＯ。
ＫＮＯ。
Ｏ２
エチルアミン
ビタミンなしの成長
＋
アルブチンの分裂
＋
発 酵 （ガス発生）：
グルコース
ガラクトース
マルトース
スクロース
ラクトース
ラフィノース
メリビオース
イヌリン
セロビオース
メレチトース
デンプン
トレハロース
形態学： 黄褐色の、ねばねばしたコロニー。丸い発芽
細胞。フラスコ中に重い沈澱物、偽菌糸体または真の菌
糸体。
細胞。フラスコ中に重い沈澱物、偽菌糸体または真の菌
糸体。
［実施例コ
第１図は、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓ
（ＡＴＣＣ２０９１８）を使用したときのｐＨに対す
る実施例工の生成物の薄層クロマトグラフィ展開スポッ
トの写真で、下記構造のスクラレオライドと、 １ 下記構造のジオール山間体とが、 ン 下記構造のスクラレオール （基質）から生成され ている。
（ＡＴＣＣ２０９１８）を使用したときのｐＨに対す
る実施例工の生成物の薄層クロマトグラフィ展開スポッ
トの写真で、下記構造のスクラレオライドと、 １ 下記構造のジオール山間体とが、 ン 下記構造のスクラレオール （基質）から生成され ている。
リ
エ
第２図は、
実施例■の出発物質のＧＣ−ＭＳの
スペクトルである。
符号２１で示されるピークは、
符号２０で示されるピークは、
下記構造の化合物、
即ち内部標準化合物のピークである。
第３図は、
下記構造を有する化合物である実施
例■の反応生成物の核磁気共鳴［ＮＭＲ］スペクトルで
ある。
ある。
シ
第４図は、
下記構造を有する実施例■の反応生
クトルである。
以下実施例は、現時点で好適な本発明の具体例を示すた
めに記載されるものであって、いかなる意味においても
本発明の範囲を限定するものではない。特に断っていな
い限り重量はダラム、温度は摂氏、圧力はｍｍ／Ｈｇの
単位で示す。
めに記載されるものであって、いかなる意味においても
本発明の範囲を限定するものではない。特に断っていな
い限り重量はダラム、温度は摂氏、圧力はｍｍ／Ｈｇの
単位で示す。
（Ｓａｉｔ。
実施例 Ｉ
Ｃｒｙｔ＋ｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓ［５ｋｉ
ｎｎｅｒ ｖａｒ、 ａｌｂＬｄｕｓｌ）（ＡＴＣＣを
使用してスクラレオールを スクラレオライドに 変換するときのｐＨの影響 ２０９１８） 反応： および 次の培地が調製された。
ｎｎｅｒ ｖａｒ、 ａｌｂＬｄｕｓｌ）（ＡＴＣＣを
使用してスクラレオールを スクラレオライドに 変換するときのｐＨの影響 ２０９１８） 反応： および 次の培地が調製された。
Ｎ Ｈ４Ｎ Ｏ３０−１％
ＫＨ，ＰＯ４０，１％
Ｍｇ５Ｏ，・７Ｈ，ＯＯ，０５％
酵母エキス ０．２％
各々ｌｏＯ＋ｎＱの培地と、ＴＷＥＥＮ８０（商標）中
の１ｇのスクラレオール（ＴＷＥＥＮ８０ ：スクラレ
オール＝２＝１）を内包する１１個のフラスコ。各フラ
スコは、２５℃、１５０ｒｐｍでデキストロース上に増
殖する２４時間培養液の５ｍαで接種された。生成物と
基質は、 薄層クロマトグラフィで既知標準化 金物を対照にモニターされた。
の１ｇのスクラレオール（ＴＷＥＥＮ８０ ：スクラレ
オール＝２＝１）を内包する１１個のフラスコ。各フラ
スコは、２５℃、１５０ｒｐｍでデキストロース上に増
殖する２４時間培養液の５ｍαで接種された。生成物と
基質は、 薄層クロマトグラフィで既知標準化 金物を対照にモニターされた。
ここに「基質」とは、
下記構造の化合物と、
下記構造の化合物
との８０＝
２０の混合物であるスクラレオールを
いう。
「中間体」
とは、
下記構造の化合物をいう。
「生成物」とは、
下記構造の化合物であるスクラ
レオライ
ドをいう。
第１表
フラスコ 時
番号 ｐ）（２４時間
１ ２．５ ＴＰ＋Ｓ＋ＴＩ２
３．０ Ｐ＋ＴＳ＋１３ ３．５ Ｐ＋
ＴＳ＋ＴＩ ４ ４．０ Ｐ＋ＴＳ４１ ５ ４．５ Ｐ＋ＴＳ＋１ ６ ５．０ Ｐ＋ＴＳ＋１ ７ ７．０ Ｐ＋Ｓ＋１ ８ ７．５ Ｐ＋Ｓ＋１ ９ ８．０ Ｐ＋Ｓ＋１ １０ ８．５ Ｐ＋Ｓ＋１ １１ ．９．ＯＰ＋Ｓ＋ｒ ［株］ ＴＳ：微量基質 Ｓ： 間 ４８時間 Ｐ＋Ｓ＋ Ｔ ｐ＋ｓ＋ ｒ Ｐ＋Ｔｌ Ｐ＋Ｔｌ Ｐ＋１ Ｐ＋１ Ｐ＋１ Ｐ＋１ Ｐ＋ＴＩ＋Ｉ Ｐ＋ＴＳ＋ Ｉ Ｐ＋ＴＳ＋１ 基質 ＴＰニ ７２時間 Ｐ＋Ｓ＋ＴＩ Ｐ＋Ｔｌ Ｐ＋Ｔ Ｉ Ｐ＋Ｔｌ Ｐ＋１ Ｐ＋１ Ｐ＋１ Ｐ＋１ Ｐ＋１ 微量生成物 Ｐ：生成物 Ｉ：中間体 Ｔに微量中間体第１図はＣｒ
ｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓ （ＡＴＣＣ２
０９１８）を使用した生成物の薄層クロマトグラフィ溶
出物のスポットである。
３．０ Ｐ＋ＴＳ＋１３ ３．５ Ｐ＋
ＴＳ＋ＴＩ ４ ４．０ Ｐ＋ＴＳ４１ ５ ４．５ Ｐ＋ＴＳ＋１ ６ ５．０ Ｐ＋ＴＳ＋１ ７ ７．０ Ｐ＋Ｓ＋１ ８ ７．５ Ｐ＋Ｓ＋１ ９ ８．０ Ｐ＋Ｓ＋１ １０ ８．５ Ｐ＋Ｓ＋１ １１ ．９．ＯＰ＋Ｓ＋ｒ ［株］ ＴＳ：微量基質 Ｓ： 間 ４８時間 Ｐ＋Ｓ＋ Ｔ ｐ＋ｓ＋ ｒ Ｐ＋Ｔｌ Ｐ＋Ｔｌ Ｐ＋１ Ｐ＋１ Ｐ＋１ Ｐ＋１ Ｐ＋ＴＩ＋Ｉ Ｐ＋ＴＳ＋ Ｉ Ｐ＋ＴＳ＋１ 基質 ＴＰニ ７２時間 Ｐ＋Ｓ＋ＴＩ Ｐ＋Ｔｌ Ｐ＋Ｔ Ｉ Ｐ＋Ｔｌ Ｐ＋１ Ｐ＋１ Ｐ＋１ Ｐ＋１ Ｐ＋１ 微量生成物 Ｐ：生成物 Ｉ：中間体 Ｔに微量中間体第１図はＣｒ
ｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓ （ＡＴＣＣ２
０９１８）を使用した生成物の薄層クロマトグラフィ溶
出物のスポットである。
実施例 ■
ジオール中間体の生成
反応
および
ニューシャーシー州、バーネガットタウンシップ、グリ
ーンウッド７オ１／ストから持ち込まれた１０個の土壌
サンプルをスクリーニングしている間に、数個のフラス
コは薄層クロマトグラフィに下記構造の化合物に対応す
るスポットを示した。
ーンウッド７オ１／ストから持ち込まれた１０個の土壌
サンプルをスクリーニングしている間に、数個のフラス
コは薄層クロマトグラフィに下記構造の化合物に対応す
るスポットを示した。
次の培地が調整された。
ＮＨ，ＮＯ３０，２％
ＫＨ２Ｆ０． ０．１％
ＭｇＳ○４−７Ｈ２００，０５％
酵母エキス ０．２％
デキストロース １．０％
５、ＯＯｍＱフラスコ中に、１００ｍ＋２の培地と、ス
クラ１／オール粉末： ＴＷＥＥＮ ８０（商標）が５
０ ： ５０の混合物１ｇと、が入れられた。このフラ
スコは、Ｂｅｎｓｉｎｇｔｏｎｉａ ｃｉｌｉａｔａ、
ＡＴＣＣ２０９１９の分離株４００マイクロリツトル
で接種された。２５℃１１５Ｑ ｒｐｍで１週間後に、
生成した生成物が、３３０ｍＱの酢酸エチルで抽出され
、抽出物は無水硫酸ナトリウム上に乾燥された。溶媒は
回転蒸発器で除去された。残渣は温めたヘキサンと酢酸
エチル中に溶解された。その抽出物は２４時間かけて自
然蒸発されたが、そのとき下記構造の化合物の純結晶（
３５０ｍｇ）が得られた。
クラ１／オール粉末： ＴＷＥＥＮ ８０（商標）が５
０ ： ５０の混合物１ｇと、が入れられた。このフラ
スコは、Ｂｅｎｓｉｎｇｔｏｎｉａ ｃｉｌｉａｔａ、
ＡＴＣＣ２０９１９の分離株４００マイクロリツトル
で接種された。２５℃１１５Ｑ ｒｐｍで１週間後に、
生成した生成物が、３３０ｍＱの酢酸エチルで抽出され
、抽出物は無水硫酸ナトリウム上に乾燥された。溶媒は
回転蒸発器で除去された。残渣は温めたヘキサンと酢酸
エチル中に溶解された。その抽出物は２４時間かけて自
然蒸発されたが、そのとき下記構造の化合物の純結晶（
３５０ｍｇ）が得られた。
第３図は下記構造の化合物の核磁気共鳴スペクトルであ
る。
る。
実施例 ■
Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓ（Ｓａｉｔ
ｏ ［５ｋｉｎｎｅｒ ｖａｒ、 ａｌｂｉｄｕｓ］）
、 ＡＴＣｏ ２０９１８を使用したスクラレオライド
の生成 反応： および 培地 ＮＨ，ＮＯ，０，２％ ＫＨ２Ｐ０． ０．１％ Ｍｇ５Ｏ，・７Ｈ２００，０５％ 抽出酵母 ０．２％ 消泡剤 １０．０ｇ ｄ−Ｈ２Ｏ８，５ｆｆ 発酵体パラメータ 温度： ２５℃ 通気： ］ 、ＯＱ／ｍｉｎ。
ｏ ［５ｋｉｎｎｅｒ ｖａｒ、 ａｌｂｉｄｕｓ］）
、 ＡＴＣｏ ２０９１８を使用したスクラレオライド
の生成 反応： および 培地 ＮＨ，ＮＯ，０，２％ ＫＨ２Ｐ０． ０．１％ Ｍｇ５Ｏ，・７Ｈ２００，０５％ 抽出酵母 ０．２％ 消泡剤 １０．０ｇ ｄ−Ｈ２Ｏ８，５ｆｆ 発酵体パラメータ 温度： ２５℃ 通気： ］ 、ＯＱ／ｍｉｎ。
撹拌： ４３０ｒｐｍｐ）（は２５％
ＮａＯＨで５，８に制御される。
ＮａＯＨで５，８に制御される。
期間＝ ４日間
基質の調整：
５００ｇのスクラレオール、２５０ｇのＴＷＥＥＮ ８
０および１１２５９の水がブレンダーにかけられ、５分
間撹拌されてエマルションになった。
０および１１２５９の水がブレンダーにかけられ、５分
間撹拌されてエマルションになった。
上記培地を有する発酵器が１２１℃で３０分間滅菌され
２５℃にまで冷やされた。この発酵器がＣｒｙｐｔｏｃ
ｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓ （Ｓａｉｔｏ ［５ｋｉ
ｎｎｅｒ ｖａｒ、 ａｌｂｉｄｕｓ］） ＡＴＣＣ
２０９１８の２４時間増殖菌３００ｍＱで接種された。
２５℃にまで冷やされた。この発酵器がＣｒｙｐｔｏｃ
ｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓ （Ｓａｉｔｏ ［５ｋｉ
ｎｎｅｒ ｖａｒ、 ａｌｂｉｄｕｓ］） ＡＴＣＣ
２０９１８の２４時間増殖菌３００ｍＱで接種された。
６００ｇのスクラレオールのエマルションが接種の際に
添加され、６００９のエマルションが２４時間、４８時
間、７２時間目に添加された。９６時間後に、発酵器の
内容物は４００メツシユのふるいでろ過された。このよ
うにして得られた粗間形生成物はＩＰＡ中に溶解され、
ろ過され、その溶液が濃縮されると結晶化されて、４３
０ｇの純スクラレオライドが得られた。
添加され、６００９のエマルションが２４時間、４８時
間、７２時間目に添加された。９６時間後に、発酵器の
内容物は４００メツシユのふるいでろ過された。このよ
うにして得られた粗間形生成物はＩＰＡ中に溶解され、
ろ過され、その溶液が濃縮されると結晶化されて、４３
０ｇの純スクラレオライドが得られた。
第２図はこの実施例■中の初期反応混合物のＧＣ−ＭＳ
スペクトルである。符号２１で示すピークはスクラレオ
ールのピークで、下記構造の化合物の８０： ２０の混合物である。
スペクトルである。符号２１で示すピークはスクラレオ
ールのピークで、下記構造の化合物の８０： ２０の混合物である。
符号２０で示すピークは下記構造の化合物の内部標準化
合物のピークである。
合物のピークである。
第４図は、
下記構造のこの実施例■により生成
されたスクラレオライ
ドの核磁気共鳴スペク
トル
である。
実施例
■
Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓ。
ＡＴＣＣ２０９１８
を使用しての
スクラレオールからのスクラレオライドの生成実施例■
で使用されたものと同一の培地ならびにパラメータが使
用された。しかし基質調整および添加の方法は変更した
。
で使用されたものと同一の培地ならびにパラメータが使
用された。しかし基質調整および添加の方法は変更した
。
スクラレオール粉末１６０ｇと、ＴＷＥＥＮ ８０（商
標）８０ｇが滅菌に先たち培地に加えられた。それとは
別の基質が、微細粉にされたスクラレオール（２部）と
ＴＷＥＥＮ ８０（１部）を混ぜてペースト状に形成す
ることで調整された。このペーストの２２５ｇ部が接種
後２４時間、４８時間、７２時間目に加えられた。
標）８０ｇが滅菌に先たち培地に加えられた。それとは
別の基質が、微細粉にされたスクラレオール（２部）と
ＴＷＥＥＮ ８０（１部）を混ぜてペースト状に形成す
ることで調整された。このペーストの２２５ｇ部が接種
後２４時間、４８時間、７２時間目に加えられた。
全部で６５５ｇの、純度６７．３４％の粗スクラレオラ
イドが得られた。
イドが得られた。
実施例 Ｖ
Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓ、 ＡＴＣ
Ｃ２０９２１を使用してのスクラレオールから スクラレオライドの生成 実施例■で使用されたものと同一の培地ならびにパラメ
ータが使用された。しかし基質の量および撹拌は変更し
た。。
Ｃ２０９２１を使用してのスクラレオールから スクラレオライドの生成 実施例■で使用されたものと同一の培地ならびにパラメ
ータが使用された。しかし基質の量および撹拌は変更し
た。。
スクラレオール１５０ｇと、ＴＷＥＥＮ８０（商標）７
５９が滅菌に先たち培地に加えられた。
５９が滅菌に先たち培地に加えられた。
ペースト状の基質２４１ｇだけが接種後２４時間目に加
えられた。撹拌は４３０ ｒｐｍで開始され、その後６
３０ ｒｐｍまで高められた。
えられた。撹拌は４３０ ｒｐｍで開始され、その後６
３０ ｒｐｍまで高められた。
全部で４９１ｇの、純度４４％の粗スクラレオライド（
モル１モル変換９４．７％）が得られた。
モル１モル変換９４．７％）が得られた。
実施例 ■
スクラレオーノペジオール中間体、
およびジオールアセテートからの
スクラレオライドの生成
反応：
および
次の培地が調整された。
Ｎ Ｈ４Ｎ Ｏｘ
Ｋ Ｈ！ Ｐ ０４
Ｍ ｇ Ｓ Ｏ４・７Ｎ（２０
抽出酵母
０．２％
０．１％
０．０５％
０．２％
デキストロース ０．５％
１０（１容量の発酵器が次の操作条件で用いられた。
温度＝ ２５℃
ｐＨ： ６．０
撹拌： ４３０ ｒｐｍ
滅菌： １２１’Ｃで３０分間
この発酵器は、同一培地で２５℃、１５０ ｒｐｍで増
殖された４８時間振盪フラスコ培養液ｌＯＯｍＱで接種
された。
殖された４８時間振盪フラスコ培養液ｌＯＯｍＱで接種
された。
２４時間の増殖後、発行器内の発行物がそれぞれ２００
ｖ２に分取され、冷却されている遠心機中でｌ Ｏ，０
０Ｏｒｐｍｌ ０分間、遠心された。各試験管中のこの
細胞が２度、バターフィールド氏のリン酸−緩衝液で洗
浄された。
ｖ２に分取され、冷却されている遠心機中でｌ Ｏ，０
０Ｏｒｐｍｌ ０分間、遠心された。各試験管中のこの
細胞が２度、バターフィールド氏のリン酸−緩衝液で洗
浄された。
緩衝液の調製
保存溶液ニ
リン酸水素モノカリウム ３４．０９蒸留水
５００．０ｍ（２約１７５ｍ１２の１．ＯＮ
（規定）水酸化ナトリウム溶液でｐＨ７，２に調整し、
ＩＱに希釈し貯蔵する。
５００．０ｍ（２約１７５ｍ１２の１．ＯＮ
（規定）水酸化ナトリウム溶液でｐＨ７，２に調整し、
ＩＱに希釈し貯蔵する。
希釈剤：
１．２５ｍＱの保存溶液を蒸留水でｌＱに希釈する。適
当な容器中に希釈盲検溶液を調製する。１２１℃で１５
分間滅菌する。
当な容器中に希釈盲検溶液を調製する。１２１℃で１５
分間滅菌する。
この細胞は次にこの緩衝液１００ｍＱ中に採取される。
ｐＨが６に調整され、そしてこの混合物は５００ｍ０フ
ラスコに移された。
ラスコに移された。
テストされた化合物：
ａ、化合物１− ＴＷＥＥＮ８０中のスクラレオール（
１：２）ペースト ｂ、化合物２−下記構造のアセテートをＴＷＥＥＮ８０
に１＝１で混合したもの Ｃ０化合物３− ＴＷＥＥＮ８０中に混合された下記構
造のジオール（１： １）ペースト １００ｍ１２の緩衝液を内包する３００ｎｏ２フラスコ
と細胞（休止細胞）が、２５℃、１５０ ｒｐｍでシェ
ーカーインキュベータに入れられ、薄層クロマトグラフ
ィを用いて標準既知化合物に対して２４時間、４８時間
、および７２時間と、サンプルが分析された。
１：２）ペースト ｂ、化合物２−下記構造のアセテートをＴＷＥＥＮ８０
に１＝１で混合したもの Ｃ０化合物３− ＴＷＥＥＮ８０中に混合された下記構
造のジオール（１： １）ペースト １００ｍ１２の緩衝液を内包する３００ｎｏ２フラスコ
と細胞（休止細胞）が、２５℃、１５０ ｒｐｍでシェ
ーカーインキュベータに入れられ、薄層クロマトグラフ
ィを用いて標準既知化合物に対して２４時間、４８時間
、および７２時間と、サンプルが分析された。
次の表（第■表）において、Ｐとは生成物たる下記構造
のスクラレオライド： Ｓとは下記構造の基質で化合物の１つ：８０：２０の比
率の および Ｉは下記構造の化合物たる中間体： 第■表 フラスコ 期 番号 基質 ２４時間 １ 化合物Ｉ Ｐ＋Ｓ＋１ ２ 化合物２ Ｐ＋ＴＳ＋１ ３ 化合物３ ７Ｐ＋Ｓ （各々１ｇ添加） 間 ４８時間 ７２時間 Ｐ＋Ｉ Ｐ＋Ｉ Ｐ＋Ｉ Ｐ＋ＴＩ Ｐ＋Ｓ Ｐ＋ＴＳ 実施例 ■ Ｂｅｎｓｉｎｇｔｏｎｉａ ｃｉｌｉａｔａ、 ＡＴＣ
Ｃ２０９１９を用いたスクラレオライドからの ジオール中間体の生成 実施例■と同一方法による実験が、次の仕様で行われた
。
のスクラレオライド： Ｓとは下記構造の基質で化合物の１つ：８０：２０の比
率の および Ｉは下記構造の化合物たる中間体： 第■表 フラスコ 期 番号 基質 ２４時間 １ 化合物Ｉ Ｐ＋Ｓ＋１ ２ 化合物２ Ｐ＋ＴＳ＋１ ３ 化合物３ ７Ｐ＋Ｓ （各々１ｇ添加） 間 ４８時間 ７２時間 Ｐ＋Ｉ Ｐ＋Ｉ Ｐ＋Ｉ Ｐ＋ＴＩ Ｐ＋Ｓ Ｐ＋ＴＳ 実施例 ■ Ｂｅｎｓｉｎｇｔｏｎｉａ ｃｉｌｉａｔａ、 ＡＴＣ
Ｃ２０９１９を用いたスクラレオライドからの ジオール中間体の生成 実施例■と同一方法による実験が、次の仕様で行われた
。
微生物： Ｂｅｎｓｉｎｇｔｏｎｉａ ｃｉｌｉａｔａ
、 ＡＴＣＣ２０９１９培地： Ｎ Ｈ＜ Ｎ Ｏ３４０−Ｏｇ 抽出酵母 ４０．０ｇＫＨ２ＰＯｔ
２０．ＯｇＭｇＳＯ，，７Ｈ，０１０
，Ｏｇ スクラレオール １６０．０ｇＴＷＥＥＮ ８
０ ８０ 、Ｏｇｄ−Ｈ，ｏ
１９．ＯＱ発酵器パラメータ
： 温度： ２５℃ 通気＝２Ｑ／分 撹拌： ３００ｒｐｍ ｐＨ： ２５％のＮａＯＨで６．０に制御 期間： １５日間 上記培地を有する発酵器が１２１℃で３０分間滅菌され
、２５℃に冷やされた。この発酵器が４８時間増殖され
たＢｅｎｓｉｎｇｔｏｎｉａ ｃｉｌｉａｔａ、 ＡＴ
ＣＣ２０９１９の培養液ＩＱで接種された。１５日間の
インキュベーション後に、基質は生成物になっていた。
、 ＡＴＣＣ２０９１９培地： Ｎ Ｈ＜ Ｎ Ｏ３４０−Ｏｇ 抽出酵母 ４０．０ｇＫＨ２ＰＯｔ
２０．ＯｇＭｇＳＯ，，７Ｈ，０１０
，Ｏｇ スクラレオール １６０．０ｇＴＷＥＥＮ ８
０ ８０ 、Ｏｇｄ−Ｈ，ｏ
１９．ＯＱ発酵器パラメータ
： 温度： ２５℃ 通気＝２Ｑ／分 撹拌： ３００ｒｐｍ ｐＨ： ２５％のＮａＯＨで６．０に制御 期間： １５日間 上記培地を有する発酵器が１２１℃で３０分間滅菌され
、２５℃に冷やされた。この発酵器が４８時間増殖され
たＢｅｎｓｉｎｇｔｏｎｉａ ｃｉｌｉａｔａ、 ＡＴ
ＣＣ２０９１９の培養液ＩＱで接種された。１５日間の
インキュベーション後に、基質は生成物になっていた。
発酵器の内容物は４００メツシユのふるいにかけられて
ろ過された。このようにして得られた粗間形生成物は風
乾された。１０１．７ｇの生成物が得られた。
ろ過された。このようにして得られた粗間形生成物は風
乾された。１０１．７ｇの生成物が得られた。
実施例 ■
デカヒ
ドロ
３ａ、６．６，９ａ−テトラメチル
ナフト［２
ｂコツランの調製
および
機械的撹拌装置、温度計、滴下漏斗、および還流冷却器
が装備されたＩＱの三日反応容器に、１２４ｍＱのＶＩ
ＴＲＩＤＥ（商標）（水素化ビス（２−メトキシエトキ
シ）アルミニウムナトリウム）を添加した。
が装備されたＩＱの三日反応容器に、１２４ｍＱのＶＩ
ＴＲＩＤＥ（商標）（水素化ビス（２−メトキシエトキ
シ）アルミニウムナトリウム）を添加した。
このＶＩＴＲＩＤＥに撹拌しなから５００＋ｎＱのトル
エンが添加された。実施例■の方法で調製された下記構
造のスクラレオライド５０ｇが１２０ｍ（２のトルエン
中に溶解された。
エンが添加された。実施例■の方法で調製された下記構
造のスクラレオライド５０ｇが１２０ｍ（２のトルエン
中に溶解された。
次にこのスクラレオール／トルエン溶液は滴下漏斗を介
して反応混合物へ半時間のあいだ滴々滴下された。この
ときの反応混合物の温度は５５℃にまで上げてもよい。
して反応混合物へ半時間のあいだ滴々滴下された。この
ときの反応混合物の温度は５５℃にまで上げてもよい。
次に反応混合物は２時間のあいだ８０℃に加熱された。
次に反応混合物は、氷で冷却されながら５％水酸化ナト
リウム水溶液６００＋ｄをゆっくりと添加することによ
り処理された。
リウム水溶液６００＋ｄをゆっくりと添加することによ
り処理された。
トルエン層が分液され、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗
浄され、等容量のメチルアルコールと飽和炭酸水素ナト
リウムの水溶液で洗浄された。
浄され、等容量のメチルアルコールと飽和炭酸水素ナト
リウムの水溶液で洗浄された。
次にトルエン層を濃縮すると重量４３．３４ｇの固体が
得られた（収率８６％）。
得られた（収率８６％）。
このようにして得られた固体は下記構造を持つ。
〉
この化合物１．５ｇが、３０ｍα水中の水酸化カリウム
１２．０ｇの溶液に混合された。この混合物がヒーター
、撹拌装置、および還流冷却器で装備されたフラスコ中
に入れられ３時間のあいだ８０℃で還流された。３時間
後に、生成物が蒸気温度１６２〜１６４℃、気圧１５ｍ
ｍ／Ｔ（ｇ、で分別蒸留され、下記構造のかなり純粋な
化合物を得Ｉ−０実施例 ■ 環状エーテルの生成 反応： および 次の培地が調製された。
１２．０ｇの溶液に混合された。この混合物がヒーター
、撹拌装置、および還流冷却器で装備されたフラスコ中
に入れられ３時間のあいだ８０℃で還流された。３時間
後に、生成物が蒸気温度１６２〜１６４℃、気圧１５ｍ
ｍ／Ｔ（ｇ、で分別蒸留され、下記構造のかなり純粋な
化合物を得Ｉ−０実施例 ■ 環状エーテルの生成 反応： および 次の培地が調製された。
成
分
重
量
部
Ｎ ）（４Ｎ Ｏｓ
０．２％
ＫＨ，Ｐｏ、 ０．１％ＭｇＳ
Ｏ４・ ７Ｈ，ＯＯ，０５％ 抽出酵母 ０．２％ デキストロース １．０％５００ｍ（２の
フラスコにｌｏｏｍｃの培地と１．０ｇのスクラレオー
ル粉末・ＴＷＥＥＮ８０の５０：５０混合物が入れられ
た。フラスコは４００マイクロリツトルのＣｒｙｐｔｏ
ｃｏｃｃｕｓ １ａｕｒｅｎｔｉｉ、 ＡＴＣＣ２０９
２０の分離株で接種された。２５℃，１５０ｒｐｍで１
週間後、生じた生成物は３３０ｍＱの酢酸エチルで抽出
され、この抽出物は無水硫酸ナトリウムで乾燥されｔ；
。溶媒は回転蒸発器で蒸留された。残渣は温かいヘキサ
ンと酢酸エチル中に溶解された。有機層を２４時間自然
蒸発すると、下記構造の化合物の純結晶（３５０ｍｇ）
が得られた。
Ｏ４・ ７Ｈ，ＯＯ，０５％ 抽出酵母 ０．２％ デキストロース １．０％５００ｍ（２の
フラスコにｌｏｏｍｃの培地と１．０ｇのスクラレオー
ル粉末・ＴＷＥＥＮ８０の５０：５０混合物が入れられ
た。フラスコは４００マイクロリツトルのＣｒｙｐｔｏ
ｃｏｃｃｕｓ １ａｕｒｅｎｔｉｉ、 ＡＴＣＣ２０９
２０の分離株で接種された。２５℃，１５０ｒｐｍで１
週間後、生じた生成物は３３０ｍＱの酢酸エチルで抽出
され、この抽出物は無水硫酸ナトリウムで乾燥されｔ；
。溶媒は回転蒸発器で蒸留された。残渣は温かいヘキサ
ンと酢酸エチル中に溶解された。有機層を２４時間自然
蒸発すると、下記構造の化合物の純結晶（３５０ｍｇ）
が得られた。
第１図は、ＣｒｙｐＬｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｉｄｕｓ
（ＡＴＣＣ２０９１８）を使用したときのｐＨに対す
る実施例工の生成物の薄層クロマトグラフィ展開スポッ
トの写真である。第２図は、実施例■の出発物質のＧＣ
−ＭＳのスペクトルである。第３図は、下記構造を有す
る化合物である実施例■の反応生成物の核磁気共鳴［Ｎ
ＭＲ］スペクトルである。第４図は、下記の核磁気共鳴
スペクトルである。 、− 一一−會− １−一−参； 嘩−一一事・・ 臭−ぶ瞼−曳 ＄４ ＝７ −− ′１ ｌｈ ２ 事件の表示 平成２年特許願第１９６４４９号 発明の名称 微生物の生物学的に純粋な培養液、ラクトン生成方法、
ジオール生成方法、化合物生成方法および環状エーテル
の生成方法 補正をする者 事件との関係 特許出願人
（ＡＴＣＣ２０９１８）を使用したときのｐＨに対す
る実施例工の生成物の薄層クロマトグラフィ展開スポッ
トの写真である。第２図は、実施例■の出発物質のＧＣ
−ＭＳのスペクトルである。第３図は、下記構造を有す
る化合物である実施例■の反応生成物の核磁気共鳴［Ｎ
ＭＲ］スペクトルである。第４図は、下記の核磁気共鳴
スペクトルである。 、− 一一−會− １−一−参； 嘩−一一事・・ 臭−ぶ瞼−曳 ＄４ ＝７ −− ′１ ｌｈ ２ 事件の表示 平成２年特許願第１９６４４９号 発明の名称 微生物の生物学的に純粋な培養液、ラクトン生成方法、
ジオール生成方法、化合物生成方法および環状エーテル
の生成方法 補正をする者 事件との関係 特許出願人
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１）下記の菌からなる群から選択される１微生物の生
物学的に純粋な培養液： （イ）Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓａｌｂｉｄｕｓ（Ｓａ
ｉｔｏ［Ｓｋｉｎｎｅｒｖａｒ．ａｌｂｉｄｕｓ］）、
ＡＴＣＣ２０９１８ （ロ）Ｂｅｎｓｉｎｇｔｏｎｉａｃｉｌｉａｔａ、ＡＴ
ＣＣ２０９１９（ハ）Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓｌａｕ
ｒｅｎｔｉｉ、ＡＴＣＣ２０９２０；及び（ニ）Ｃｒｙ
ｐｔｏｃｏｃｃｕｓａｌｂｉｄｕｓ、ＡＴＣＣ２０９２
１（２）次の構造のラクトン ▲数式、化学式、表等があります▼ を通気条件下、下記の化合物： ▲数式、化学式、表等があります▼▲数式、化学式、表
等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼および▲数式、化学
式、表等があります▼ の１つあるいはそれ以上の化合物を含む水性養分培地で
、上記化合物群から選択された化合物の少なくとも１を
変換し、回収可能な量で生産する方法。この方法はＣｒ
ｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓａｌｂｉｄｕｓ（Ｓａｉｔｏ［Ｓ
ｋｉｎｎｅｒｖａｒ．ａｌｂｉｄｕｓ］）、ＡＴＣＣ２
０９１８、およびＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓａｌｂｉｄ
ｕｓ、ＡＴＣＣ２０９２１の群から選択された微生物の
一を培養することを特徴とする。 （３）下記構造を有する群から選択された化合物の変換
により、 ▲数式、化学式、表等があります▼および▲数式、化学
式、表等があります▼ 回収可能な量で下記ジオールを生成するため、Ｂｅｎｓ
ｉｎｇｔｏｎｉａｃｉｌｉａｔａ、ＡＴＣＣ２０９１９
、およびＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓｌａｕｒｅｎｔｉｉ
、ＡＴＣＣ２０９２０からなる群から選択された一微生
物を培養することを特徴とする、下記構造のジオールの
生成方法。 ▲数式、化学式、表等があります▼ （４）（イ）［１］反応混合物のｐＨが約２．５〜約９
．０で、［２］その反応混合物の温度が約１２℃〜約３
３℃で、［３］基質濃度が約０．１ｇ／１ｌ〜約１３０
ｇ／１ｌである、下記化合物の群： ▲数式、化学式、表等があります▼▲数式、化学式、表
等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼および▲数式、化学
式、表等があります▼ の１または２以上の化合物および追加的な炭素源を含む
水性養分培地中で通気条件下に、次の構造のラクトンを
得るため、 ▲数式、化学式、表等があります▼ 炭素源を含む基質、さらに上記化合物群から選択された
少なくとも一の化合物を変換して回収可能な量で生成す
るため、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓａｌｂｉｄｕｓ、Ａ
ＴＣＣ２０９１８とＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓａｌｂｉ
ｄｕｓ、ＡＴＣＣ２０９２１からなる群から選択された
一微生物を培養し、 （ロ）下記構造の化合物を生成するため ▲数式、化学式、表等があります▼ 還元剤で下記構造のラクトンを還元し、 ▲数式、化学式、表等があります▼ （ハ）下記構造の化合物を生成するため ▲数式、化学式、表等があります▼ 下記構造の化合物を塩基で再閉環し ▲数式、化学式、表等があります▼ （ニ）上記反応混合物から、下記構造の化合物を得る、 ▲数式、化学式、表等があります▼ というステップを特徴とする、下記構造の化合物の調製
方法。 ▲数式、化学式、表等があります▼ （５）［１］反応混合物のｐＨが約２．５〜約９．０で
、［２］その反応混合物の温度が約１２℃〜約３３℃で
、［３］基質濃度が約０．１ｇ／１ｌ〜約１３０ｇ／１
ｌである、下記の群からの ▲数式、化学式、表等があります▼および▲数式、化学
式、表等があります▼ １または２の化合物と追加的な炭素源とを有する水性養
分培地中で通気条件下に、炭素源と上記化合物の群から
選択された少なくとも１の化合物とから成る基質を変換
して回収可能な量で下記の環状エーテルを ▲数式、化学式、表等があります▼ 生成する微生物、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓｌａｕｒｅ
ｎｔｉｉ、ＡＴＣＣ２０９２０を培養することを特徴と
する、下記構造の ▲数式、化学式、表等があります▼ 環状エーテルの調製方法。
Applications Claiming Priority (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/399,826 US4970163A (en) | 1989-08-28 | 1989-08-28 | Process for producing diol and lactone and microorganisms capable of same |
| US399826 | 1989-08-28 | ||
| US07/513,789 US5212078A (en) | 1989-08-28 | 1990-04-25 | Process for producing a lactone |
| US513789 | 1990-04-25 | ||
| US51943990A | 1990-05-04 | 1990-05-04 | |
| US519439 | 1990-05-04 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20308194A Division JP2802588B2 (ja) | 1994-08-05 | 1994-08-05 | 微生物の生物学的に純粋な培養物、並びにそれを用いるジオール製造方法および環状エーテル製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03224478A true JPH03224478A (ja) | 1991-10-03 |
| JPH0779682B2 JPH0779682B2 (ja) | 1995-08-30 |
Family
ID=27410360
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2196449A Expired - Lifetime JPH0779682B2 (ja) | 1989-08-28 | 1990-07-26 | 微生物の生物学的に純粋な培養物、ラクトン生成方法、ジオール生成方法、化合物生成方法および環状エーテルの生成方法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
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