【発明の詳細な説明】[Detailed description of the invention]
本発明は合成樹脂製免疫検査具に関し、詳しく
は免疫反応を用いる検査の内、抗原又は抗体を含
む血清を用いる検査に使用される合成樹脂製免疫
検査具に関するものである。
このような免疫検査として、例えば梅毒抗原
（脂質抗原あるいは病原体抗原）と抗血清による
梅毒血清学的検査、リウマチ因子、抗核抗体、甲
状腺自己抗体等の免疫反応による自己抗体検査、
赤血球に結合している不完全抗体（免疫グロプリ
ン）と抗グロプリン血清との凝集反応による免疫
検査、ヒト組織適合性遺伝子座抗原と抗血清との
反応による免疫検査等のHLA検査が存する。
HLA検査の原理は、リンパ球と抗HLA血清と
を反応させた後、ウサギの補体を加えるとリンパ
球上の抗原と抗体が対応していればリンパ球は細
胞障害を受けて死滅し、生死判定を顕微鏡により
判定することができる。
HLA抗原は染色体上の遺伝子座にある遺伝子
により支配されており、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、DRの
遺伝子座別に分類され、各座につき極めて多種類
の抗原が存在することが明らかにされている。従
つてHLA検査における操作は、これらの多種類
の抗血清をセツトした免疫検査具を用意し、これ
に被検体白血球を注入して固定すること（タイピ
ング）が主眼となる。
従来これらの抗血清は液状で取扱われてきた
が、保存、取扱が煩雑であつた。このため、抗血
清をタイピングを実施する免疫検査具上に凍結乾
燥させて付着固定する方法が採られている。
HLA検査に使用される免疫検査具としては、
合成樹脂製で板面に多数の凹部が形成されたもの
が一般的である。
しかしながらかゝる合成樹脂製の免疫検査具に
抗血清を凍結乾燥させて付着固定させる場合に、
凹部の表面で凍結乾燥血清の付着力が弱く、保
管、輸送時に剥離しやすいためにタイピング判定
に誤りをきたしやすい欠点があつた。又凍結乾燥
血清を付着させるために、不充分な凍結状態で乾
燥したものを使用することが行なわれてきたが、
この場合は凍結乾燥血清が多孔性に乏しい膜状物
として凹部表面に付着することになりタイピング
操作における溶解が速やかに行ない得ないものと
なり、更に残存する水分によつて抗体力価の経時
低下を起しやすい欠点があつた。
本発明は上記の欠点を解消することを目的とす
るものであり、その要旨は、板面に多数個の凹部
が形成されており、該凹部の表面に、該表面のＸ
線光電子スペクトルによる酸素原子／炭素原子比
が0.15〜0.35の範囲となるように、低温プラズマ
処理が施されてなり、該凹部に血清を注入した
後、凍結乾燥することにより、該凹部に血清を付
着させて使用されるものであることを特徴とする
合成樹脂製免疫検査具に存する。
次に本発明合成樹脂製免疫検査具について更に
詳細に説明する。
本発明を構成する合成樹脂としては、例えばポ
リスチレン、ポリメチルメタクリレート、ポリ塩
化ビニル、ポリカーボネート、アクリロニトリル
−メチルアクリレート共重合体、スチレン−無水
マレイン酸共重合体、スチレン−アクリロニトリ
ル共重合体、アセチルセルロース、アセチルブチ
ルセルロース、アセタール化ポリビニルアルコー
ル、ポリプロピレン、エチレン−プロピレン共重
合体、ポリエステル、ポリメチルペンテン−１等
を挙げることができるが、特に好ましくは、処理
効果が特に顕著であるポリスチレン、スチレン−
アクリロニトリル共重合体、スチレン−無水マレ
イン酸共重合体、及びポリ塩化ビニルである。こ
れらの合成樹脂中には、充填剤、着色剤、安定剤
等が含有されていてもよい。
本発明合成樹脂製免疫検査具は、例えば第１図
及び第２図に示されるように、浅い容器状に形成
することができる。
この場合は、免疫検査具１の底部の板面２に多
数個の凹部３が形成されており、周壁４が立設さ
れる。又周壁４の上方に必要に応じ蓋体５を設け
ることができる。又、本発明合成樹脂製免疫検査
具は、例えば板状、シート状、瓶状等となすこと
ができる。
板面２に形成された多数個の凹部３の表面に低
温プラズマ処理が施される。
低温プラズマ処理とは、100mmHg以下の低圧ガ
スに高周波電界、マイクロ波電界又は直流電界を
印加することによつて低温プラズマを発生させ、
このプラズマガス流を免疫検査具１の凹部２の表
面に接触させることであり、本発明に従つて凹部
２の表面のＸ線光電子スペクトルによる酸素原
子／炭素原子比が0.15〜0.35好ましくは0.20〜
0.30の限定された範囲にあるように表面を酸化し
て、凍結乾燥血清の付着性を著しく向上させるこ
とができる。
この場合において、酸素原子／炭素原子比が
0.15より小さいときは凍結乾燥血清の付着性が乏
しくなる傾向を示し、又0.35よりも大きくなると
血清中の抗体に作用して力価を低下させる傾向を
有する。
第３図は高周波放電低温プラズマ処理装置の一
例を示す。
ベルジヤー１１内は１×10-2mmHg乃至100mm
Hg、好ましくは１×10-1mmHg乃至50mmHgの減
圧雰囲気下にあり、高周波発生装置１２に接続し
たバンド（電極）１３により雰囲気ガスをプラズ
マ化する。雰囲気ガスはガス導入管１４からベル
ジヤー１１内に供給し、ガス排出管１５から真空
ポンプ（図示せず）により排気し、生じたプラズ
マガス流が免疫検査具１の凹部２の表面に効果的
に接触するように免疫検査具１をベルジヤー１１
内に配置し、低温プラズマ処理を施す。この場合
において免疫検査具１の凹部２の表面にのみ低温
プラズマ処理を施す場合には、該凹部２に合致す
る多数の孔が設けられている被覆板を載置した状
態で低温プラズマ処理を施すことができる。
このようにして処理した免疫検査具１の凹部２
の表面の酸化度の指標としての酸素原子／炭素原
子比は、Ｘ線光電子スペクトルにおいて534eV電
子結合エネルギの位置に現われる酸素原子のIsピ
ークの面積Ao及び285eVの電子結合エネルギー
の位置に表われる炭素原子のIsピークの面積Ac
から式（Ao／Ac）×ｊにより求めることができ
る。ここに、ｊは元素間の補正係数であり、Ｘ線
源としてMgKα線を用いた場合のｊは0.45であ
る。
本発明合成樹脂性免疫検査具によれば、板面に
形成された多数個の凹部の表面に低温プラズマ処
理が施されて凍結乾燥血清付着性が改善されてい
るので、保管、輸送時に剥離することがなく、タ
イピング判定に誤まりを生じないものとなる。又
凹部表面への凍結乾燥血清付着性がすぐれている
ので、充分凍結させて乾燥させた水分残料存量の
少ない凍結乾燥血清が使用でき、凹部表面に付着
される凍結乾燥血清は多孔質に富み、タイピング
操作における溶解が速やかに行なわれ、又抗体力
価の経時低下が少ないものとなる。
実施例 １
第１図及び第２図に示される容器状の免疫検査
具１の板面２に、開口部の直径が５mmで底部に直
径１mmの平坦面を有する略摺鉢状の凹部３を60個
形成したポリスチレン樹脂製の免疫検査具１（寸
法55mm×85mm×10mm）を噴射成形により成形し
た。次いでこの免疫検査具１を第３図に示すよう
な装置により低温プラズマ処理した。ベルジヤー
１１内を２×10-1mmHgの空気圧に保ちつつ、処
理条件を高周波出力100〜250W、処理時間数分〜
10分の範囲で変動させ、前記した表面酸素原子／
炭素原子比の種々異なる処理物を得た。
次いでＸ線光電子分析装置ESCA650B（(株)島津
製作所製）（Ｘ線源MgKα線）を用いて前記比を
測定した。
上記凹部２内に標準HLA坑血清1μを分注し
た後、凍結真空乾燥（真空度２×10-2Torr、３
時間）を行なつた。
この凍結乾燥血清付着性を調べるため、40cmの
高さから板面２を水平に保持した状態で３回落下
させ、凍結乾燥血清の剥離を見た。
上記のプラズマ処理時の高周波出力、処理時
間、酸素原子／炭素原子比、落下テストにおける
凹部60個中の血清の剥離した凹部の数の関係を表
１に示した。
又これとの比較のためにプラズマ処理におい
て、酸素原子／炭素原子比が0.15〜0.35の範囲を
はずれるもの及びプラズマ処理を施さないものに
ついても上記と同様に行い、その結果も表１に示
した。
The present invention relates to a synthetic resin immunoassay device, and more particularly to a synthetic resin immunoassay device used for tests using serum containing antigens or antibodies, among tests using immune reactions. Examples of such immunological tests include syphilis serological tests using syphilis antigens (lipid antigens or pathogen antigens) and antiserum, autoantibody tests using immune reactions such as rheumatoid factor, antinuclear antibodies, and thyroid autoantibodies;
There are HLA tests such as immunoassays based on the agglutination reaction between incomplete antibodies (immunoglobulin) bound to red blood cells and anti-globulin serum, and immunoassays based on the reaction between human histocompatibility locus antigen and antiserum. The principle of HLA testing is that after reacting lymphocytes with anti-HLA serum, rabbit complement is added, and if the antigen and antibody on the lymphocytes match, the lymphocytes will be damaged and die. Life or death can be determined using a microscope. HLA antigens are controlled by genes located at loci on chromosomes, and are classified into A, B, C, D, and DR loci, and it has been revealed that there are extremely many types of antigens for each locus. There is. Therefore, the main focus of the operations in HLA testing is to prepare an immunological test tool containing these various antisera, and to inject and fix the test subject's leukocytes into this tool (typing). Conventionally, these antisera have been handled in liquid form, but storage and handling are complicated. For this reason, a method has been adopted in which the antiserum is lyophilized and adhered and fixed onto the immunological test instrument used for typing. The immunological testing tools used for HLA testing include:
It is generally made of synthetic resin and has many recesses formed on the plate surface. However, when the antiserum is freeze-dried and fixed on such a synthetic resin immunoassay device,
The adhesion of the freeze-dried serum to the surface of the concave portion is weak, and it easily peels off during storage and transportation, leading to errors in typing determination. In addition, in order to attach freeze-dried serum, it has been done to use dried serum that has been insufficiently frozen.
In this case, the freeze-dried serum adheres to the surface of the recess as a film with poor porosity, making it impossible to dissolve it quickly during the typing operation, and furthermore, the remaining moisture may cause the antibody titer to decline over time. There were some flaws that could easily occur. The present invention aims to eliminate the above-mentioned drawbacks, and its gist is that a large number of recesses are formed on the plate surface, and the surface of the recesses is
Low-temperature plasma treatment is performed so that the oxygen atom/carbon atomic ratio is in the range of 0.15 to 0.35 according to line photoelectron spectra, and the serum is injected into the recesses and then freeze-dried to inject the serum into the recesses. The present invention relates to a synthetic resin immunoassay device characterized in that it is used by attaching it to the device. Next, the synthetic resin immunoassay device of the present invention will be explained in more detail. Examples of the synthetic resins constituting the present invention include polystyrene, polymethyl methacrylate, polyvinyl chloride, polycarbonate, acrylonitrile-methyl acrylate copolymer, styrene-maleic anhydride copolymer, styrene-acrylonitrile copolymer, acetyl cellulose, Examples include acetyl butyl cellulose, acetalized polyvinyl alcohol, polypropylene, ethylene-propylene copolymer, polyester, polymethylpentene-1, etc., but particularly preferred are polystyrene and styrene-1, which have a particularly remarkable treatment effect.
They are acrylonitrile copolymer, styrene-maleic anhydride copolymer, and polyvinyl chloride. These synthetic resins may contain fillers, colorants, stabilizers, and the like. The synthetic resin immunoassay device of the present invention can be formed into a shallow container shape, for example, as shown in FIGS. 1 and 2. In this case, a large number of recesses 3 are formed in the plate surface 2 at the bottom of the immunological test device 1, and a peripheral wall 4 is erected. Further, a lid 5 can be provided above the peripheral wall 4 if necessary. Furthermore, the synthetic resin immunoassay device of the present invention can be shaped into, for example, a plate, a sheet, a bottle, or the like. A low-temperature plasma treatment is performed on the surfaces of a large number of recesses 3 formed in the plate surface 2. Low-temperature plasma treatment involves generating low-temperature plasma by applying a high-frequency electric field, microwave electric field, or DC electric field to a low-pressure gas of 100 mmHg or less.
This plasma gas flow is brought into contact with the surface of the concave portion 2 of the immunoassay device 1, and according to the present invention, the oxygen atom/carbon atom ratio of the surface of the concave portion 2 according to the X-ray photoelectron spectrum is 0.15 to 0.35, preferably 0.20 to
The surface can be oxidized to within a limited range of 0.30 to significantly improve the adhesion of lyophilized serum. In this case, the oxygen atom/carbon atom ratio is
When it is smaller than 0.15, the adhesion of the freeze-dried serum tends to be poor, and when it is larger than 0.35, it tends to act on antibodies in the serum and lower the titer. FIG. 3 shows an example of a high frequency discharge low temperature plasma processing apparatus. Inside Belgear 11 is 1×10 -2 mmHg to 100mm
It is under a reduced pressure atmosphere of Hg, preferably 1×10 -1 mmHg to 50 mmHg, and the atmospheric gas is turned into plasma by a band (electrode) 13 connected to a high frequency generator 12. Atmospheric gas is supplied into the bell gear 11 from the gas introduction pipe 14 and exhausted from the gas exhaust pipe 15 by a vacuum pump (not shown), and the generated plasma gas flow is effectively applied to the surface of the recess 2 of the immunoassay device 1. Place the immunological test tool 1 in contact with the bell jar 11.
placed inside and subjected to low-temperature plasma treatment. In this case, when performing low temperature plasma treatment only on the surface of the recess 2 of the immunoassay test device 1, perform the low temperature plasma treatment with a covering plate provided with a large number of holes that match the recess 2 placed thereon. be able to. Recess 2 of immunoassay test device 1 treated in this way
The oxygen atom/carbon atomic ratio as an indicator of the degree of oxidation on the surface of Area of atomic Is peak Ac
It can be determined from the formula (Ao/Ac)×j. Here, j is a correction coefficient between elements, and j is 0.45 when MgKα rays are used as an X-ray source. According to the synthetic resin immunoassay device of the present invention, the surface of the numerous recesses formed on the plate surface is treated with low-temperature plasma to improve the adhesion of freeze-dried serum, so it does not peel off during storage or transportation. This prevents errors in typing judgment. In addition, since the adhesion of freeze-dried serum to the surface of the recess is excellent, it is possible to use freeze-dried serum that has been sufficiently frozen and dried and has a small residual amount of water, and the freeze-dried serum that adheres to the surface of the recess is highly porous. Therefore, the lysis during the typing operation is performed quickly, and the decrease in antibody titer over time is reduced. Example 1 A substantially mortar-shaped recess 3 having an opening diameter of 5 mm and a flat surface of 1 mm diameter at the bottom was formed on the plate surface 2 of the container-shaped immunological test device 1 shown in FIGS. 1 and 2. Sixty polystyrene resin immunoassay devices 1 (dimensions: 55 mm x 85 mm x 10 mm) were molded by injection molding. Next, this immunoassay test device 1 was subjected to low-temperature plasma treatment using an apparatus as shown in FIG. While maintaining the air pressure inside the Belgear 11 at 2 x 10 -1 mmHg, the processing conditions were high frequency output of 100 to 250 W and processing time of several minutes.
The surface oxygen atoms/
Treated products with various carbon atomic ratios were obtained. Next, the ratio was measured using an X-ray photoelectron analyzer ESCA650B (manufactured by Shimadzu Corporation) (X-ray source MgKα ray). After dispensing 1μ of standard HLA antiserum into the recess 2, freeze-vacuum dry (vacuum level 2 × 10 -2 Torr, 3
time). In order to examine the adhesion of this freeze-dried serum, the plate surface 2 was dropped three times from a height of 40 cm while being held horizontally, and the peeling of the freeze-dried serum was observed. Table 1 shows the relationship between the high frequency output during the above plasma treatment, the treatment time, the oxygen atom/carbon atomic ratio, and the number of recesses from which serum had peeled off among the 60 recesses in the drop test. In addition, for comparison, the same procedure as above was performed for those whose oxygen atom/carbon atomic ratio was outside the range of 0.15 to 0.35 and those that were not subjected to plasma treatment, and the results are also shown in Table 1. .
【表】
酸素原子／炭素原子比が0.15〜0.35の範囲のも
のは、凍結乾燥血清の剥離を全く生じなかつた。
この範囲をはずれるもの及びプラズマ処理を施さ
ないものについては、凍結乾燥血清の付着性に乏
しいか又は抗体の力価を低下させた。[Table] Freeze-dried serum with an oxygen atom/carbon atom ratio in the range of 0.15 to 0.35 did not peel off at all.
For those outside this range and those that were not subjected to plasma treatment, the lyophilized serum had poor adhesion or the antibody titer was reduced.
【図面の簡単な説明】[Brief explanation of drawings]
第１図は本発明免疫検査具の一例を示す斜視
図、第２図は同上の蓋体を取付けた状態での縦断
面図、第３図は低温プラズマ処理態様の一例の説
明図である。
符号の説明、１……免疫検査具、２……板面、
３……凹部、４……周壁、５……蓋体、１１……
ベルジヤー、１２……高周波発生装置、１３……
バンド、１４……ガス導入管、１５……ガス排出
管。
FIG. 1 is a perspective view showing an example of the immunoassay device of the present invention, FIG. 2 is a longitudinal cross-sectional view of the same with the lid attached, and FIG. 3 is an explanatory diagram of an example of a low-temperature plasma treatment mode. Explanation of symbols, 1...Immunology test tool, 2...Plate surface,
3... Recessed portion, 4... Peripheral wall, 5... Lid, 11...
Bergier, 12... High frequency generator, 13...
Band, 14... gas introduction pipe, 15... gas discharge pipe.