JPH0322994A - 抗腫瘍活性物質ｓａｔｓ６５０４ - Google Patents
抗腫瘍活性物質ｓａｔｓ６５０４Info
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- JPH0322994A JPH0322994A JP1155883A JP15588389A JPH0322994A JP H0322994 A JPH0322994 A JP H0322994A JP 1155883 A JP1155883 A JP 1155883A JP 15588389 A JP15588389 A JP 15588389A JP H0322994 A JPH0322994 A JP H0322994A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本物質は、ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）属に属する黴生物
の生産する新規な抗腫瘍活性物質ＳＡＴＳ６５０４誼物
質を生産する微生物、及び譲物質の製造方法に関する． 〔従来の技術〕 癌治療の分野において化学療法剤の進歩はめざましいも
のがあるが、まだ不満足な点が多い．かような段階にあ
る現在、癌治療剤の開発をめざして、天然からの抗腫瘍
活性物質の単離は重要な課題となっている． ビブリオ馬から分離された抗！ｌ！瘍活性物質について
は、い《つかの報告（Ｏｋｕｔａｎｉ Ｉｔ．Ｂｕｌｌ
．Ｊａｐａｎ，Ｓｏｃ．Ｓｃｉ．Ｆ１ｓｈ．．４３．３
２３−３２８ （１９７７）はか）があるが、それらの
活性については、十分満足の行くものではない． 〔発明が解決しようとする課題〕 従って本発明は、抗腫瘍活性物質源として従来ほとんど
研究されていなかった海洋性微生物から高活性の新しい
タイプの抗腫瘍活性物質を得ようとするものである． 本発明者等は、海洋性微生物を扱う際にしばしば遭遇す
る種々の困難を解決し、広く海洋性微生物を研究した結
果、ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）属に属する新ｍ微生物が
新しいタイプの抗膳瘍活性物質を生産することを見出し
、かつ本活性物質の活性が、従来のビブリオ（Ｖｉｂｒ
ｉｏ）ｒＩＡより分離された物質より１００〜１０００
倍も高いこと、また化学的賭性状も異なる物質であるこ
とを見出し、本発明を完威した． 従って本発明は、ビプリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）属の黴生物
により生産される新規抗謙瘍活性物質ＳＡＴ３６５０４
、該物質を生産するビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）属の新ｍ
ｌｋ生物、及びｔｔ微生物を培養し、この培養物から前
記抗腫瘍活性物質を採取することを特徴とする該抗謙瘍
活性物質の製造方法を提供しようとするものである． 本発明の抗腫瘍活性物質ＳＡＴＳ ６５０４は次の性
質を有する． １．分解点；ｚｉｏ〜２８０℃の間で褐変し分解する．
２．比旋光度： 〔α） Ｈｅ鵬＋２９１ ” （ ｃ
−０．０２．ＩＩｓ’） ． ３，紫外吸収スペクトル： ０．０２％水溶液のスペク
トルに２２０〜３６０ｎ一で特徴的な吸収を示さない．
このチャートを第Ｆ図に示す． ４．赤外吸収スペクトル＋ ｊ［Ｂｒディスクによる測
定において３３００． １６４０ｃｍ−付近にペプチド
による吸収を示し、８４０３−’付近に糖による吸収を
示す．このチャートを第２図に示す． ５．塩基性、酸性、中性の区別＋０．２■／ｍｌの水溶
液はｌｌｌｉｌ性を示す． ６．物質の色：わずかに褐色を帯びた白色．ＬｔＩ剤へ
の溶解度：水に可溶性であり、アルコール類、アセトン
、エーテル、ヘキサン、クロロホルム、酢酸エチル等の
有機溶剤にｌ［溶又は不溶である． ８．分子量：ゲル濾過法による測定では１００，０００
以上を示す． ９．呈色反応 ビエーレフト反応 十 ニンヒドリン反応 フォリン反応 十 アンスロン硫酸反応 十 システイン硫酸反応 十 以上の知見により物質ＳＡＴＳ ６５０４は糖及び蛋
白により構或されていると推定される．後に具体的に示
すごとく、この物質ＳＡＴＳ６５０４はマウスリンパ性
白ｍｖ４細胞Ｐ３８８を用いるＩｎ ｖｌｔｒｏ活性賦
験において、５０％増殖阻止濃度Ｉ Ｃｓｅ ａ．ｓ
ｘ １ ０−’μｇ／ｍｌを持つ極めて強力な抗腫瘍剤
である． 本発明において使用する微生物は、ビブリオ（Ｖｉｂｒ
ｉｏ）属に属し、物質ＳＡＴＳ ６５０４を生産する
事ができるものであればよく、このような微生物は自然
界から新たに分離することができる．ビブリオ（Ｖｉｂ
ｒｉｏ）に属する微生物の例として、物質ＳＡＴＳ
６５０４産生能を持つ微生物として本発明者等が新たに
分離し、ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）漠に属する新規微生
物と同定したＳＣＲＣ−６５０４を挙げることができる
．この新菌株ピブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）漠に属する新規
微生物ＳＣＲＣ−６５０４は工業技術院漱生物工業技術
研究所に徽工研菌寄１０７８９号として・寄托されてい
る．この新薗株は次のように分離した． 次の表に示す＆ｌ威の培地を調整した．酵母エキス
０．５％ ベブトン １．０％ ＮａＣＩ １．５％ 寒天 １．５％ 水道水 ｐｎ７．ｏ この寒天平板培地に各地の海洋より採取した海洋性サン
プルを滅菌した生理食塩水で適度に希釈したものを接種
し、２５℃で１〜２日間培養した．この寒天平板培地に
出現したコロニーを同じ培地＆Ｉｌ戒の斜面培地に約薗
した． このようにして各地の海洋より採取した海洋性サンプル
から多数の菌株を分離した．次に表の培地より寒天を抜
いたものを試験管に５ｍｌずつ分注し、同様に滅菌した
．それぞれの菌株をこの培地で２５℃、１〜２日間培養
した．このようにして、物質ＳＡＴ３ ６５Ｇ４を生
産する下記の菌株を相模湾より採取した海洋性サンプル
より得た．この新規な菌株は、次のような菌学的性質を
有する． 観察項目 ａ）形態 １ 細胞の形 大きさ ２ 多形性の有無 ３ 運動性の有無 鞭毛の着生状態 胞子の有無 ダラム染色 抗酸性 各培地に於ける生育状態 肉汁寒天平板培養（２５℃． イ） コロニーの形状（直径） 短かん薗 １ ．Ｏｘ ２ ．０／Ｊ ｍ 無 有 単極毛 無 陰性 陰性 ２日間〉 ２．０〜３．０鶴 コロニーの形 コロニーの表面の形状 コロニーの隆起状態 コロニーの周縁 コロニーの色調 コロニーの透明度 コロニーの光沢 可溶性色素の生成 ２ 肉汁寒天斜薗培養（２５℃， イ） 生育の良否 ｏ） コロニーの光沢 ３ 肉汁液体培地（２５℃． イ）表面の生育 Ｅｌ）濁度 ハ）沈澱 二） ガス発生 ４ 肉汁ゼラチン（２５℃． ゼラチン液化 円形 平滑 台状 全縫 黄褐色 半透明 光沢 無 ２日間） 良好 光沢 ２日間） 無 濁る 粉状 無 ２日間） 液化 ５ リトマスξルク Ｃ）生理学的性質 １ 硝酸塩の還元 ２脱窒 ３ ＭＲ ４ ＶＰ ５ インドール生或 ６ 硫化水素の生威 ７ デンブンの加水分解 ８ クエン酸利用 イ） ｌｌｏｓｅｔ Ｄ） Ｃｈｒｌｓｔｅｎｓｅｎ ９ 硝酸塩の利用 １０ 色素生或 イ）ＫｉｎｇＡ 培地 Ｄ） Ｋｌａｇ Ｂ 培地 ｌ１ ウレアーゼ １２ オキシダーゼ 還元・凝固・液化 ＋ 十 カタラーゼ ＋ 生育の範囲 ｐＨ ４〜１１ 温度 １０℃〜３７℃ 酸素に対する態度 通性嫌気性 ０−Ｆテスト（グルコース） Ｆ 糖頻から酸及びガス生或 Ｌ−アラビノース Ｄ−キシａ−ス Ｄ−グルコース ＋ Ｄ−マンノース ＋ Ｄ−フラクトース ＋ Ｄ−ガラクトース 麦芽糖 十 シ１糖 乳糖 トレハロース ＋ Ｄ−ソルビフト 士 １２．Ｄ−マンニソト ＋ １３．イノシフト １４．グリセリン １５．デンブン （ただしガスの生成 全項目 一） ｄ）その他の諸性質 ｓｓｙｊ天培地での生育 マソコンキー寒天培地での生育 ＋ ６．５％Ｎａ（：ｌ耐塩性 十ＤＮ Ｉ
ｌ ｓｓ ＋
オルニチンの分解 アルギニンの分解 Ｇ◆Ｃ含量 ５２．４％ゼラチンの
分解 十 ＮａＣｌ９Ｌ！求性 十以上のよ
うな諸性質から、本菌株ＳＣＲＣ−６５０４は下記のよ
うな特徴を持つ． ■ ダラム陰性 ■ 運動性を持つ ■ 非胞子形威の遣性嫌気性かん菌 Φ Ｏ−Ｆテスト陰性 ■ カタラーゼ、オキシターゼ陽性 ■ 一本の極鞭毛を持つ ■ ゼラチン、ＤＮＡ分解能を持つ ■ グルコースからの酸度生（＋）、ガス産生（−）■
ＭａＣ１または海水要求性 ＠ Ｇ＋Ｃ含量 ５２．４％ ０ 硝酸塩還元能を持つ ■ オルチニン分解ｍ （−） このような諸性質を有する本菌株ＳＣＲＣ６５０４株の
分類学的な位置は、バージイズ・マニュアル・オブ・デ
ィタ竃ナティブ・バクテリオロジー（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ
Ｍａｎｕａｌ ｏｆ ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅＢ
ａｃｔｅｒ１ｏ１ｏｇｙ）第８版、１９７４年、及びバ
ージイズ・マニュアル・オブ・システマティク・バクテ
リオロジ−（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ
ＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒ１ｏ１ｏｇｙ）第１
巻、１９８４年の分類基準に従って、本菌株はビプリオ
ｎｉｂｒｉｏ）属に属する新規微生物であると同定した
． 以上、自然界から分離したこの新菌株について詳細に記
載したが、この菌に変異を生じさせて一層生産性の高い
菌株を得ることも出来る．この発明の菌株は、常法に従
って保存することができ、例えば寒天スラント培地上で
、または凍結乾燥法により保存することができる．寒天
スラント培地としては、ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）属細
菌の保存に常用されている培地、例えば菌の分離に関し
て前記した培地を使用することができる．また、凍結乾
燥保存も常法に従って行うことができる．前記の微生物
を培養して本発明の物質ＳＡＴＳ６５０４を製造しよう
とする場合、基礎栄養培地として、この発明の微生物が
増殖しうるものであればいずれを使用しても良い． この培地は、窒素源として例えば酵母エキス、ペプトン
、肉エキス等の１種類または襟数種類を含有する．また
この培地には必要に応して炭素源として各種のｔ＊＊を
加えることができる．この培地には、塩化ナトリウム、
もしくは天然海水や人工海水を加えることが必要である
． 培養は固体培地または液体壇地のいずれを用いても良い
が、目的とする物’ｊｊｓＡＴｓ ６５０４を多量に
得る為には、液体培地を用い、静２培養もしくは振とう
培養、通気、攪拌培養等にょり好気条件下で培養を行う
のが好ましい．培養温度は菌が生育し、物質ＳＡＴＳ
６５０４が生産される温度範囲であればいずれの温度
でも良く、好ましくは１０〜３７℃であり、より好まし
くは２０〜３０℃である．ρＨは４〜】１、好ましくは
７〜８の範囲である．培養時間は採取し得る量の物賓Ｓ
Ａ”ｒＳ ６５０４が生産される時間を選べば良く、
好ましくは８〜４８時間である． 次に得られた培養物から例えば次のようにして本発明の
物１ｉｓＡＴｓ ６５０４が採取される．上記の培養
液をまず遠心分離によって菌体を沈めた後の上澄を０．
２μｍの滅菌フィルターを通して菌体を除去した．つい
で限外濾過により活性物質をｉｌ＄ｌｉｌＬた．これを
硅酸アンモニウムによる分画を行い、５０％の飽和硫酸
アンモニウム溶液で沈降する部分を集めた．ついで七フ
アクリルＳ−３００を用いてゲル濾過し、０ ．２Ｍ
ＮａＣＩ水溶液で溶出させ、Ｐ３８８を用いる活性試
験で活性を示す部分を集めた．半ｉ！ｉ膜を用いて脱塩
をした後、凍枯乾燥してＳＡＴＳ ６５０４を得た． 以下実施例、及び試験例によりさらに詳しく説明するが
、この方法にのみ限定されるものではない． 去−１Ｌ」４一よ ＳＣＲＣ−６５０４ の璽１セ」レ
１底盪瘍 ＳＡＴＳ ６５０４の 酵母エキス０．５％、ペブトン１．０％、ＮａＣｒ ｔ
．５％を含有し、ｐＨ７．０に！ＩＮ！Ｉｔ，た培地
１０１を１２１℃、１５分間加熱殺薗した後、ビブリオ
属に属する新規微生物ＳＣＲＣ−６５０４ （微工研菌
寄第１０７８９号）を接種し、２５℃で２４時間培養し
た．培ＩＩ後、遠心分離機で上澄を採取した．こうして
得られた墳昇上澄（１１）を滅菌フィルター（０．２μ
ｍ）をかけた後分子量３０，０００の限外濾過膜（東ソ
ー，ＴＳ−３０）を用いて４０ｍｌにＩＩＩＩＬた．こ
の濃縮液に硫安を添加し，、５０％飽和度で沈降した百
分を遠心分離にまり分取、これを約５ｍｌの水溶液とし
、セフアクリルＳ−３００カラム（２ ．５ｘ ４ ７
ｃｍ）にのせ、０ ．２Ｍ ＮａＣ１で溶出し、培
養細胞Ｐ３８８に対して増殖明害活性のある内分（Ａ）
を分取した．溶出曲線を第３図に示す．八の活性画分溶
出液を透析膜で脱塩した後、凍結乾燥し、抗腫瘍活性物
質ＳＡＴＳ ６５０４を７６■得た． 試一』（一畳 抗４３１３３ （死逢思本発明の物質
ＳＡＴＳ ６５０４の抗膣瘍活性を次のようにしてｆ
ｌｌｔＬ！Ｌた． マウスリンパ性白血病細胞（Ｐ３ＢＢ）を１０％牛胎児
血清含有のＩ？ＰＭＩ−１６４０培養液に加え、培養細
胞を５Ｘ１０’個／ｍｌに調整し、実施例１で得られた
物ｌＪｒＳＡＴＳ ６５０４を所定の濃度になるよう
にし、３７℃で２日間培養した．コールターカウンター
を用い、浮遊細胞数を計数して、対照群に対する増殖阻
害率から、５０％細胞増殖阻害濃度（ＴＣＩ＠）を求め
た．結果を次の表に示す．試料 ＩＣｉｏ（μｇ／１０ ＳＡＴＳ ６５０４ ８．５ ＸＩＯ−’ ＡＤＭ （既知物質） １．３ ＸＩＯ−” ５−ＦＵ （既知物質） ４．９ ＸＩＯ−” さらにＰ３８Ｂ担ガンマウスに９日間投与したところ、
０．１５ａｗ／ｋｇ体重の投与量において明らかな延命
効果が見られた．
の生産する新規な抗腫瘍活性物質ＳＡＴＳ６５０４誼物
質を生産する微生物、及び譲物質の製造方法に関する． 〔従来の技術〕 癌治療の分野において化学療法剤の進歩はめざましいも
のがあるが、まだ不満足な点が多い．かような段階にあ
る現在、癌治療剤の開発をめざして、天然からの抗腫瘍
活性物質の単離は重要な課題となっている． ビブリオ馬から分離された抗！ｌ！瘍活性物質について
は、い《つかの報告（Ｏｋｕｔａｎｉ Ｉｔ．Ｂｕｌｌ
．Ｊａｐａｎ，Ｓｏｃ．Ｓｃｉ．Ｆ１ｓｈ．．４３．３
２３−３２８ （１９７７）はか）があるが、それらの
活性については、十分満足の行くものではない． 〔発明が解決しようとする課題〕 従って本発明は、抗腫瘍活性物質源として従来ほとんど
研究されていなかった海洋性微生物から高活性の新しい
タイプの抗腫瘍活性物質を得ようとするものである． 本発明者等は、海洋性微生物を扱う際にしばしば遭遇す
る種々の困難を解決し、広く海洋性微生物を研究した結
果、ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）属に属する新ｍ微生物が
新しいタイプの抗膳瘍活性物質を生産することを見出し
、かつ本活性物質の活性が、従来のビブリオ（Ｖｉｂｒ
ｉｏ）ｒＩＡより分離された物質より１００〜１０００
倍も高いこと、また化学的賭性状も異なる物質であるこ
とを見出し、本発明を完威した． 従って本発明は、ビプリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）属の黴生物
により生産される新規抗謙瘍活性物質ＳＡＴ３６５０４
、該物質を生産するビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）属の新ｍ
ｌｋ生物、及びｔｔ微生物を培養し、この培養物から前
記抗腫瘍活性物質を採取することを特徴とする該抗謙瘍
活性物質の製造方法を提供しようとするものである． 本発明の抗腫瘍活性物質ＳＡＴＳ ６５０４は次の性
質を有する． １．分解点；ｚｉｏ〜２８０℃の間で褐変し分解する．
２．比旋光度： 〔α） Ｈｅ鵬＋２９１ ” （ ｃ
−０．０２．ＩＩｓ’） ． ３，紫外吸収スペクトル： ０．０２％水溶液のスペク
トルに２２０〜３６０ｎ一で特徴的な吸収を示さない．
このチャートを第Ｆ図に示す． ４．赤外吸収スペクトル＋ ｊ［Ｂｒディスクによる測
定において３３００． １６４０ｃｍ−付近にペプチド
による吸収を示し、８４０３−’付近に糖による吸収を
示す．このチャートを第２図に示す． ５．塩基性、酸性、中性の区別＋０．２■／ｍｌの水溶
液はｌｌｌｉｌ性を示す． ６．物質の色：わずかに褐色を帯びた白色．ＬｔＩ剤へ
の溶解度：水に可溶性であり、アルコール類、アセトン
、エーテル、ヘキサン、クロロホルム、酢酸エチル等の
有機溶剤にｌ［溶又は不溶である． ８．分子量：ゲル濾過法による測定では１００，０００
以上を示す． ９．呈色反応 ビエーレフト反応 十 ニンヒドリン反応 フォリン反応 十 アンスロン硫酸反応 十 システイン硫酸反応 十 以上の知見により物質ＳＡＴＳ ６５０４は糖及び蛋
白により構或されていると推定される．後に具体的に示
すごとく、この物質ＳＡＴＳ６５０４はマウスリンパ性
白ｍｖ４細胞Ｐ３８８を用いるＩｎ ｖｌｔｒｏ活性賦
験において、５０％増殖阻止濃度Ｉ Ｃｓｅ ａ．ｓ
ｘ １ ０−’μｇ／ｍｌを持つ極めて強力な抗腫瘍剤
である． 本発明において使用する微生物は、ビブリオ（Ｖｉｂｒ
ｉｏ）属に属し、物質ＳＡＴＳ ６５０４を生産する
事ができるものであればよく、このような微生物は自然
界から新たに分離することができる．ビブリオ（Ｖｉｂ
ｒｉｏ）に属する微生物の例として、物質ＳＡＴＳ
６５０４産生能を持つ微生物として本発明者等が新たに
分離し、ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）漠に属する新規微生
物と同定したＳＣＲＣ−６５０４を挙げることができる
．この新菌株ピブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）漠に属する新規
微生物ＳＣＲＣ−６５０４は工業技術院漱生物工業技術
研究所に徽工研菌寄１０７８９号として・寄托されてい
る．この新薗株は次のように分離した． 次の表に示す＆ｌ威の培地を調整した．酵母エキス
０．５％ ベブトン １．０％ ＮａＣＩ １．５％ 寒天 １．５％ 水道水 ｐｎ７．ｏ この寒天平板培地に各地の海洋より採取した海洋性サン
プルを滅菌した生理食塩水で適度に希釈したものを接種
し、２５℃で１〜２日間培養した．この寒天平板培地に
出現したコロニーを同じ培地＆Ｉｌ戒の斜面培地に約薗
した． このようにして各地の海洋より採取した海洋性サンプル
から多数の菌株を分離した．次に表の培地より寒天を抜
いたものを試験管に５ｍｌずつ分注し、同様に滅菌した
．それぞれの菌株をこの培地で２５℃、１〜２日間培養
した．このようにして、物質ＳＡＴ３ ６５Ｇ４を生
産する下記の菌株を相模湾より採取した海洋性サンプル
より得た．この新規な菌株は、次のような菌学的性質を
有する． 観察項目 ａ）形態 １ 細胞の形 大きさ ２ 多形性の有無 ３ 運動性の有無 鞭毛の着生状態 胞子の有無 ダラム染色 抗酸性 各培地に於ける生育状態 肉汁寒天平板培養（２５℃． イ） コロニーの形状（直径） 短かん薗 １ ．Ｏｘ ２ ．０／Ｊ ｍ 無 有 単極毛 無 陰性 陰性 ２日間〉 ２．０〜３．０鶴 コロニーの形 コロニーの表面の形状 コロニーの隆起状態 コロニーの周縁 コロニーの色調 コロニーの透明度 コロニーの光沢 可溶性色素の生成 ２ 肉汁寒天斜薗培養（２５℃， イ） 生育の良否 ｏ） コロニーの光沢 ３ 肉汁液体培地（２５℃． イ）表面の生育 Ｅｌ）濁度 ハ）沈澱 二） ガス発生 ４ 肉汁ゼラチン（２５℃． ゼラチン液化 円形 平滑 台状 全縫 黄褐色 半透明 光沢 無 ２日間） 良好 光沢 ２日間） 無 濁る 粉状 無 ２日間） 液化 ５ リトマスξルク Ｃ）生理学的性質 １ 硝酸塩の還元 ２脱窒 ３ ＭＲ ４ ＶＰ ５ インドール生或 ６ 硫化水素の生威 ７ デンブンの加水分解 ８ クエン酸利用 イ） ｌｌｏｓｅｔ Ｄ） Ｃｈｒｌｓｔｅｎｓｅｎ ９ 硝酸塩の利用 １０ 色素生或 イ）ＫｉｎｇＡ 培地 Ｄ） Ｋｌａｇ Ｂ 培地 ｌ１ ウレアーゼ １２ オキシダーゼ 還元・凝固・液化 ＋ 十 カタラーゼ ＋ 生育の範囲 ｐＨ ４〜１１ 温度 １０℃〜３７℃ 酸素に対する態度 通性嫌気性 ０−Ｆテスト（グルコース） Ｆ 糖頻から酸及びガス生或 Ｌ−アラビノース Ｄ−キシａ−ス Ｄ−グルコース ＋ Ｄ−マンノース ＋ Ｄ−フラクトース ＋ Ｄ−ガラクトース 麦芽糖 十 シ１糖 乳糖 トレハロース ＋ Ｄ−ソルビフト 士 １２．Ｄ−マンニソト ＋ １３．イノシフト １４．グリセリン １５．デンブン （ただしガスの生成 全項目 一） ｄ）その他の諸性質 ｓｓｙｊ天培地での生育 マソコンキー寒天培地での生育 ＋ ６．５％Ｎａ（：ｌ耐塩性 十ＤＮ Ｉ
ｌ ｓｓ ＋
オルニチンの分解 アルギニンの分解 Ｇ◆Ｃ含量 ５２．４％ゼラチンの
分解 十 ＮａＣｌ９Ｌ！求性 十以上のよ
うな諸性質から、本菌株ＳＣＲＣ−６５０４は下記のよ
うな特徴を持つ． ■ ダラム陰性 ■ 運動性を持つ ■ 非胞子形威の遣性嫌気性かん菌 Φ Ｏ−Ｆテスト陰性 ■ カタラーゼ、オキシターゼ陽性 ■ 一本の極鞭毛を持つ ■ ゼラチン、ＤＮＡ分解能を持つ ■ グルコースからの酸度生（＋）、ガス産生（−）■
ＭａＣ１または海水要求性 ＠ Ｇ＋Ｃ含量 ５２．４％ ０ 硝酸塩還元能を持つ ■ オルチニン分解ｍ （−） このような諸性質を有する本菌株ＳＣＲＣ６５０４株の
分類学的な位置は、バージイズ・マニュアル・オブ・デ
ィタ竃ナティブ・バクテリオロジー（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ
Ｍａｎｕａｌ ｏｆ ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅＢ
ａｃｔｅｒ１ｏ１ｏｇｙ）第８版、１９７４年、及びバ
ージイズ・マニュアル・オブ・システマティク・バクテ
リオロジ−（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ
ＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒ１ｏ１ｏｇｙ）第１
巻、１９８４年の分類基準に従って、本菌株はビプリオ
ｎｉｂｒｉｏ）属に属する新規微生物であると同定した
． 以上、自然界から分離したこの新菌株について詳細に記
載したが、この菌に変異を生じさせて一層生産性の高い
菌株を得ることも出来る．この発明の菌株は、常法に従
って保存することができ、例えば寒天スラント培地上で
、または凍結乾燥法により保存することができる．寒天
スラント培地としては、ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）属細
菌の保存に常用されている培地、例えば菌の分離に関し
て前記した培地を使用することができる．また、凍結乾
燥保存も常法に従って行うことができる．前記の微生物
を培養して本発明の物質ＳＡＴＳ６５０４を製造しよう
とする場合、基礎栄養培地として、この発明の微生物が
増殖しうるものであればいずれを使用しても良い． この培地は、窒素源として例えば酵母エキス、ペプトン
、肉エキス等の１種類または襟数種類を含有する．また
この培地には必要に応して炭素源として各種のｔ＊＊を
加えることができる．この培地には、塩化ナトリウム、
もしくは天然海水や人工海水を加えることが必要である
． 培養は固体培地または液体壇地のいずれを用いても良い
が、目的とする物’ｊｊｓＡＴｓ ６５０４を多量に
得る為には、液体培地を用い、静２培養もしくは振とう
培養、通気、攪拌培養等にょり好気条件下で培養を行う
のが好ましい．培養温度は菌が生育し、物質ＳＡＴＳ
６５０４が生産される温度範囲であればいずれの温度
でも良く、好ましくは１０〜３７℃であり、より好まし
くは２０〜３０℃である．ρＨは４〜】１、好ましくは
７〜８の範囲である．培養時間は採取し得る量の物賓Ｓ
Ａ”ｒＳ ６５０４が生産される時間を選べば良く、
好ましくは８〜４８時間である． 次に得られた培養物から例えば次のようにして本発明の
物１ｉｓＡＴｓ ６５０４が採取される．上記の培養
液をまず遠心分離によって菌体を沈めた後の上澄を０．
２μｍの滅菌フィルターを通して菌体を除去した．つい
で限外濾過により活性物質をｉｌ＄ｌｉｌＬた．これを
硅酸アンモニウムによる分画を行い、５０％の飽和硫酸
アンモニウム溶液で沈降する部分を集めた．ついで七フ
アクリルＳ−３００を用いてゲル濾過し、０ ．２Ｍ
ＮａＣＩ水溶液で溶出させ、Ｐ３８８を用いる活性試
験で活性を示す部分を集めた．半ｉ！ｉ膜を用いて脱塩
をした後、凍枯乾燥してＳＡＴＳ ６５０４を得た． 以下実施例、及び試験例によりさらに詳しく説明するが
、この方法にのみ限定されるものではない． 去−１Ｌ」４一よ ＳＣＲＣ−６５０４ の璽１セ」レ
１底盪瘍 ＳＡＴＳ ６５０４の 酵母エキス０．５％、ペブトン１．０％、ＮａＣｒ ｔ
．５％を含有し、ｐＨ７．０に！ＩＮ！Ｉｔ，た培地
１０１を１２１℃、１５分間加熱殺薗した後、ビブリオ
属に属する新規微生物ＳＣＲＣ−６５０４ （微工研菌
寄第１０７８９号）を接種し、２５℃で２４時間培養し
た．培ＩＩ後、遠心分離機で上澄を採取した．こうして
得られた墳昇上澄（１１）を滅菌フィルター（０．２μ
ｍ）をかけた後分子量３０，０００の限外濾過膜（東ソ
ー，ＴＳ−３０）を用いて４０ｍｌにＩＩＩＩＬた．こ
の濃縮液に硫安を添加し，、５０％飽和度で沈降した百
分を遠心分離にまり分取、これを約５ｍｌの水溶液とし
、セフアクリルＳ−３００カラム（２ ．５ｘ ４ ７
ｃｍ）にのせ、０ ．２Ｍ ＮａＣ１で溶出し、培
養細胞Ｐ３８８に対して増殖明害活性のある内分（Ａ）
を分取した．溶出曲線を第３図に示す．八の活性画分溶
出液を透析膜で脱塩した後、凍結乾燥し、抗腫瘍活性物
質ＳＡＴＳ ６５０４を７６■得た． 試一』（一畳 抗４３１３３ （死逢思本発明の物質
ＳＡＴＳ ６５０４の抗膣瘍活性を次のようにしてｆ
ｌｌｔＬ！Ｌた． マウスリンパ性白血病細胞（Ｐ３ＢＢ）を１０％牛胎児
血清含有のＩ？ＰＭＩ−１６４０培養液に加え、培養細
胞を５Ｘ１０’個／ｍｌに調整し、実施例１で得られた
物ｌＪｒＳＡＴＳ ６５０４を所定の濃度になるよう
にし、３７℃で２日間培養した．コールターカウンター
を用い、浮遊細胞数を計数して、対照群に対する増殖阻
害率から、５０％細胞増殖阻害濃度（ＴＣＩ＠）を求め
た．結果を次の表に示す．試料 ＩＣｉｏ（μｇ／１０ ＳＡＴＳ ６５０４ ８．５ ＸＩＯ−’ ＡＤＭ （既知物質） １．３ ＸＩＯ−” ５−ＦＵ （既知物質） ４．９ ＸＩＯ−” さらにＰ３８Ｂ担ガンマウスに９日間投与したところ、
０．１５ａｗ／ｋｇ体重の投与量において明らかな延命
効果が見られた．
第１図は本発明の実施例１で得られた物質ＳＡＴＳ
６５０４の紫外線吸収スペクトル図である． 第２図は本発明の実施例ｌで得られた物質ＳＡＴＳ
６５０４の赤外線吸収スペクトル図である． 第３図はセフアクリルＳ−３００カラムを用いるクロマ
トグラフィーにおける本発明の実施例ｌで得られた物質
ＳＡＴＳ ６５０４の溶出の様子を示すグラフである
． ５ｔＪ．ｎｍ １１回 ２ ａ ８ ＆ ミ ａ も ＊ Ａ ＝＜ ＠
智嘴咎
６５０４の紫外線吸収スペクトル図である． 第２図は本発明の実施例ｌで得られた物質ＳＡＴＳ
６５０４の赤外線吸収スペクトル図である． 第３図はセフアクリルＳ−３００カラムを用いるクロマ
トグラフィーにおける本発明の実施例ｌで得られた物質
ＳＡＴＳ ６５０４の溶出の様子を示すグラフである
． ５ｔＪ．ｎｍ １１回 ２ ａ ８ ＆ ミ ａ も ＊ Ａ ＝＜ ＠
智嘴咎
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）属に属する微生物により
生産される下記の理化学的性質を有する抗腫瘍活性物質
ＳＡＴＳ６５０４。 （１）分解点：２１０〜２８０℃の間で褐変し分解する
； （２）比旋光度：（α）■＝＋２９１゜（ｃ＝０．０２
、Ｈ＿２Ｏ）； （３）紫外線吸収スペクトル：０．０２％水溶液のスペ
クトルに２２０ｎｍ〜３６０ｎｍの範囲で特徴的な吸収
を示さない； （４）赤外線吸収スペクトル：ＫＢｒディスクによる測
定において３３００ｃｍ＾−＾１及び１６４０ｃｍ＾−
＾１付近にペプチドによる吸収を示し、８４０ｃｍ＾−
＾１付近に糖による吸収を示す； （５）塩基性、酸性、中性の別：０．２ｍｇ／ｍｌの水
溶液は弱酸性を示す； （６）溶剤への溶解性：水に可溶であり、アルコール類
、アセトン、エチルエーテル、ヘキサン、クロロホルム
、酢酸エチル等の有機溶剤に難溶又は不溶である； （７）分子量：ゲル濾過法により測定した場合、１００
，０００以上である； （８）次の呈色反応を示す： ビューレット反応＋ ニンヒドリン反応− フォリン反応＋ アンスロン硫酸反応＋ システイン硫酸反応＋。 ２、請求項１に記載の抗腫瘍活性物質ＳＡＴＳ６５０４
を生産するビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）属微生物。 ３、前記微生物がビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）ｓｐ、ＳＣ
ＲＣ６５０４（微工研菌寄第１０７８９号）である請求
項２に記載の微生物。 ４、請求項２に記載の微生物を培養し、その培養液から
請求項１に記載の抗腫瘍活性物質ＳＡＴＳ６５０４を採
取することを特徴とする抗腫瘍活性物質ＳＡＴＳ６５０
４の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1155883A JPH0322994A (ja) | 1989-06-20 | 1989-06-20 | 抗腫瘍活性物質ｓａｔｓ６５０４ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1155883A JPH0322994A (ja) | 1989-06-20 | 1989-06-20 | 抗腫瘍活性物質ｓａｔｓ６５０４ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0322994A true JPH0322994A (ja) | 1991-01-31 |
Family
ID=15615590
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1155883A Pending JPH0322994A (ja) | 1989-06-20 | 1989-06-20 | 抗腫瘍活性物質ｓａｔｓ６５０４ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0322994A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2760022A1 (fr) * | 1997-02-25 | 1998-08-28 | Ifremer | Souche bacterienne marine du genre vibrio, polysaccharides hydrosolubles produits par cette souche, et leurs utilisations |
-
1989
- 1989-06-20 JP JP1155883A patent/JPH0322994A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2760022A1 (fr) * | 1997-02-25 | 1998-08-28 | Ifremer | Souche bacterienne marine du genre vibrio, polysaccharides hydrosolubles produits par cette souche, et leurs utilisations |
| WO1998038327A1 (fr) * | 1997-02-25 | 1998-09-03 | Institut Francais De Recherche Pour L'exploitation De La Mer (Ifremer) | Souche bacterienne marine du genre vibrio, polysaccharides hydrosolubles produits par cette souche, et leurs utilisations |
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