JPH03255955A - カテコールアミン代謝物分析装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は新生児を対象に全数、各県の衛生研究所、ある
いは保健所において、尿中成分を液体クロマトグラフあ
るいは、他の機種を用いることによって小児ガンの早期
発見を行なうことができるもので、尿中成分を液体クロ
マトで全て行なう装置に関する。

〔従来の技術〕

従来の装置は、ＶＭＡ、ＨＶＡ、ＶＬＡは高速液体クロ
マトグラフにて測定、クレアチニンは。

クイクロプレートリーダで測定、その相関を求めて値を
算出している。

〔発明が解決しようとする課題〕

上記従来技術は、試料を２つに分けて、１つは液体クロ
マトグラフへ、１つはマイクロプレートへと分散させて
いる。この方法は数多い試料では取扱いミスが発生する
可能性があること、装置全体が大きくなることと、顧客
にとって価格面で負担となる。

本発明の目的は、マイクロプレートリーダを前処理機能
付オートサンプラで代用することにある。

〔課題を解決するための手段〕

上記目的を達成するために前処理機能付オートサンプラ
を用いてマイクロプレートリーダを代用させた。

この前処理付オートサンプラは数種類の反応試薬の分注
、希釈、試料の添加、撹拌（シリンジによって空気を吸
入し、反応試料びんに何回も空気を吐出することにより
、バブリング撹拌したり、あるいは反応液そのものをシ
リンジにて吸引、吐出し撹拌するもの）反応後はオート
サンプラのインジェクションバルブを切換え、ドレンバ
ルブに接続した可視光度計にて測定する。

一方では、原液尿試料びんから前処理無しで。

そのまま液体クロマトグラフで分析しているので時間、
試料のロスが少ない。

〔作用〕 液体クロマトグラフの前処理機能付オートサンプラはマ
イクロプレートリーダと同等の工程を組むことができる
。

例えば、測定しようとする試料を空反応ビーンに正確に
シリンジで吸引、吐出し、シリンジ内を洗浄後、反応液
を順次（２種類）加え、撹拌２反応後、反応液を一定量
とり可視検出器の５０５ｎｍで測定する（この工程を全
てマイクロシリンジで行う）。

このとき、測定しようとする試料をオートサンプラのマ
イクロシリンジを用いて、ＶＭＡ、ＶＬＡ。

ＨＶＡを測定する分離カラムと電気化学検出器（あるい
は蛍光検出器）の液体クロマトグラフへ、また、同一試
料からクレアチニンのみ測定するためにオートサンプラ
に組んだ反応プログラムに従って順次反応を行い（自動
分析と同じ方法）′４られた反応物をオートサンプラの
シリンジでバルブを介して可視光度計に送り込み、その
吸光度を測定する。それらの操作によって一つの試料よ
りＶＭＡ、ＨＶＡ、ＶＬＡ、クレアチニンを正確に測定
できる。

〔実施例〕

以下、本発明の一実施例を第１図〜第５図に従って説明
する。

第１図は、本発明を実施するために用いた装置の流路構
成を示す。

溶離液２４とそれを送るポンプ２３．オートサンプラ１
．カラム２８．検出器（検出器２９９分光器１６）、デ
ータ処理袋Ｗ１１７，１８，３０より構成されている。

はじめに、ＶＭＡ、ＨＬＡ、ＨＶＡを分析するために、
溶離液２４として５パーセント、アセトニトリルと９５
パーセントの５０ミリモル酒石酸、０．０１　パーセン
トＥＤＴＡ−２ナトリウムをポンプ２３で１分間に０．
８ｍＡ　　の流量で流す。

カラム２８には、日立バツクドカラム＃　３０５６（シ
リカゲル○Ｄ８　５ミクロン）、サイズ内径４ミリメー
トル、長さ１５０ミリメートルを４０度Ｃに保持された
カラムオープン２７中に設置した。標準試料を試料瓶１
４の列に並べ、一定量をニードル１１でとり、インジェ
クションポート２０よりサンプリングバルブ２１内に導
入し、カラム２８で３戒分を分離後、検出器２９（ＥＣ
Ｄ）で検出する。

一方、クレアチニンを測定する系は以下の通りで、検出
原理は以下の通りである。

クレアチニン＋水酸化ナトリウム＋ピクリン酸↓ クレアチニンピクレート （赤色−可視５０５ｎｍに吸収有り） 上記手法を前処理機能を有したオートサンプラで行う。

試料瓶１４より試料２０マイクロリツトルとり、反応瓶
１５に入れる。

反応試薬瓶１２に１６０ミリモル水酸化ナトリウムと非
イオン界面活性剤を入れておき、その中より、６００マ
イクロリツトルをとり、反応瓶１５に入れて、ニードル
１１を反応瓶に入れたままシリンジ５を１秒間に１５０
マイクロリツトルのスピードで５００マイクロリツトル
、反応瓶より出し入れすることにより撹拌混合する。

シリンジ５内が試料、試薬で汚染されないよう最初に５
０マイクロリットル程度の空気をニードル内に入れ、そ
の後に反応液を４５０マイクロリットル吸引、吐出を行
うことがより良い方法である。

反応試薬瓶１３に５．６　ミリモルのピクリン酸を入れ
ておき、その中より、ニードルで１４０マイクロリツト
ル吸引し反応瓶１５に全量吐出する。

上記同様ニードルを反応瓶に入れ充分に撹拌混合し、３
分間４０度Ｃで反応させる。

第２図で分析法を具体的に述べる。

最初にクレアチニンのクロマトグラムを得るために、ニ
ードル内にシリンジ５で、希釈液（吐出用）３３を３０
０マイクロリツトル吸引する。

次に反応瓶１５より反応液５０クイクロリツトルを吸引
、さらに希釈液（吐出用）１００マイクロリツトルを吸
引し、ニードル内の反応液をサンドイッチしておく。

インジェクションバルブ２１を第３図の様に、インジェ
クションボート、クレリアチニン測定用分光器を接続す
る。

ニードルをインジェクションボートに入れ、シリンジ５
のスピードを１分間に３ミリリツトルの速度で吐出する
。

第４図（Ｃ）の様にクロマトグラムが得られ、その面積
値をデータ処理装置１７に記憶される。

得られたクレアチニンとＶＭＡ、ＶＬＡ、ＨＶＡの結果
を第４図に示す。

（Ａ）は、ＶＭＡ、ＶＬＡ、ＨＶＡの標準試料のクロマ
トグラムで、この各面積値換算で未知試料を定量する。

（Ｂ）は、小児尿の分析例で、ＶＭＡとＨＶＡが検出さ
れている。

（Ｃ）はクレアチニンの分析結果である。

第４図で得られた各成分をさらにデータ処理装置（上位
コンピュータ）１８で、クレアチニン値補正し、最終結
果を算出する。

第５図にそのフローチャートを示す。

〔発明の効果〕

（イ）オートサンプラに前処理機能を組み込んだことに
より、サンプルを分ける手間が無く効率の向上が図れる
。特に利用する分野が検査センタや保健所で、新生見金
て測定の必要性があるので、簡単化省力化が重要である
。

（ロ）本発明では、クレアチニン測定のための専用機マ
イクロプレートリーダが不要となるので、価格面でも光
度計を用いることにより１／２〜１／３となる。

（ハ）スペースがマイクロプレートリーダ分だけ少なく
てすむ。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の実施例の流路図、第２図はクレアチニ
ン測定の流れ図、第３図は本発明の変形例を示す図、第
４図（Ａ）はＶＭＡ、ＨＬＡ、ＨＶＡ、標準試料のクロ
マトグラムを示す図、（Ｂ）は小児尿のクロマトグラム
を示す図、（Ｃ）はクレアチニンのクロマトグラムを示
す図、第５図はデータ処理フローチャートを示す図であ
る。 ｌ・・・オートサンプラ、２・・・シリンジバルブ制御
装置、３・・・シリンジ流路切換モータ、４・・・シリ
ンジ流路切換バルブ、５・・・シリンジ、６・・・シリ
ンジ用モータ、７・・・シリンジ制御装置、８・・・テ
フロンチューブ、９・・・ニードル高さ制御用モータ、
１０・・・ニードル高さ制御装置、１１・・・ニードル
、１−２・・・反応試薬瓶、１３・・・反応試薬瓶、１
４・・・試料瓶、１５・・・反応瓶、１６・・・分光器
、１７・・・データ処理装置、１８・・・データ処理装
置、１９・・・廃液瓶、２０・・・試料、２１・・・サ
ンプリングバルブ、２２・・・ループ、２３・・・ポン
プ、２４・・・溶離液、２５・・・サンプリングバルブ
制御装置、２６・・・サンプリングバルブ流路切換モー
タ、２７・・・カラムオープン、２８・・・カラム、２
９・・・検出器、３０・・・データ処理装置、３１・・
・ポンプカム、３２・・・ポンプ駆動用モ第 ４ 第２Ｅ２１ ＃３　図 察 困

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、送液ポンプ、自動希釈と反応および分注機能を有す
   るオートサンプラ、分離カラムとカラムオープン、複数
   の検出器そしてデータ処理部より構成されるシステムに
   おいて、オートサンプラに２流路切換バルブを設けるこ
   とにより分離カラムと検出器またはサンプラより直接も
   う一方の検出器へ流通する流路系を構成し、サンプルは
   同一の試料を２回ずつ吸引し、一回目は直接カラム流路
   系へ導入し、カテコールアミン代謝物を分析し、 その分析中に、他の一回分の試料は、オートサンプラ内
   で反応液と混合させたあと、その反応物を検出器流路系
   へ導入することによりクレアチニンを分析し、この２種
   の分析を一台のオートサンプラを介して行うと同時に、
   データ処理部により、クレアチニンのデータでカテコー
   ルアミン代謝物の量を補正できるようにしたことを特徴
   とするカテコールアミン代謝物分析装置。