JPH03271233A - ウイルスエンベロープ糖タンパク質及びその糖タンパク質の中和エピトープに対応するペプチドの間の相乗作用による、ウイルス性感染に対する防御の誘発 - Google Patents
ウイルスエンベロープ糖タンパク質及びその糖タンパク質の中和エピトープに対応するペプチドの間の相乗作用による、ウイルス性感染に対する防御の誘発Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
発明の背景
本発明は予防接種方法に係り、その方法は接種抗原（ｐ
＋ｉｍｉｎｇ ａｎｔｉｇｅｎ） この場合ＨＩ Ｖ
。
＋ｉｍｉｎｇ ａｎｔｉｇｅｎ） この場合ＨＩ Ｖ
。
ＳＩＶ又は自然宿主にＡＩＤＳを誘発する能力のあるレ
ンチウィルスのようなウィルスに由来するか、又はＨＴ
ＬＶ−Ｉ若しくはＨＴＬＶ−Ｉｆ型のレトロウィルスに
由来する糖タンパク質、及び合成オリゴペプチドから成
る増幅組成物の同時又は逐次の使用を含む。そのオリゴ
ペプチドは遊離か又は担体分子に結合し、かつ同じ糖タ
ンパク質に対する中和エピトープに対応する。本発明は
この方法に使用する組成物にも関する。
ンチウィルスのようなウィルスに由来するか、又はＨＴ
ＬＶ−Ｉ若しくはＨＴＬＶ−Ｉｆ型のレトロウィルスに
由来する糖タンパク質、及び合成オリゴペプチドから成
る増幅組成物の同時又は逐次の使用を含む。そのオリゴ
ペプチドは遊離か又は担体分子に結合し、かつ同じ糖タ
ンパク質に対する中和エピトープに対応する。本発明は
この方法に使用する組成物にも関する。
ウィルスに対し有効なワクチン組成物は、ウィルスの急
速な中和を生じることにより、ウィルスが静止細胞の染
色体内部に潜伏プロウィルス型になって多分ウィルス自
体を防御したり、又は免疫系の力の及ばないような細胞
もしくは組織の区画に避難したりしないようにしなけれ
ばならない。
速な中和を生じることにより、ウィルスが静止細胞の染
色体内部に潜伏プロウィルス型になって多分ウィルス自
体を防御したり、又は免疫系の力の及ばないような細胞
もしくは組織の区画に避難したりしないようにしなけれ
ばならない。
ＨＩＶの場合チンパンジー及びＳＩＶの場合マカック属
サルの両方を使用して前に行った実験から明らかなよう
に、ウィルスエンベロープ糖タンパク質単独の接種では
完全な防御免疫応答が得られるようには出来ない。特に
、ウィルスエンベロープ糖タンパク質は感染に対して防
御を提供するために充分な水準の中和抗体を産生じない
。
サルの両方を使用して前に行った実験から明らかなよう
に、ウィルスエンベロープ糖タンパク質単独の接種では
完全な防御免疫応答が得られるようには出来ない。特に
、ウィルスエンベロープ糖タンパク質は感染に対して防
御を提供するために充分な水準の中和抗体を産生じない
。
従って、ウィルスによる感染を受は易い宿主にウィルス
感染に対する充分な水準の中和抗体を誘導に、その方法
に使用する医薬組成物が当業界に於いて求められている
。
感染に対する充分な水準の中和抗体を誘導に、その方法
に使用する医薬組成物が当業界に於いて求められている
。
発明の要約
本発明はこれらの当業界に於ける要望を満たすものであ
る。本発明の目的はウィルスの少くとも工つのエンベロ
ープ糖タンパク質の免疫原性を強化することであって、
糖タンパク質を少くとも１つのペプチドと結合し、かつ
好ましくは、いろいろの場合に１群のペプチド（エンベ
ロープ糖タンパク質の配列から誘導され、かつウィルス
中和エピトープに対応する）と結合することによる。即
ち、そのペプチドは投与される宿主に中和抗体を産生ず
るのに必要なアミノ酸配列に対応する。
る。本発明の目的はウィルスの少くとも工つのエンベロ
ープ糖タンパク質の免疫原性を強化することであって、
糖タンパク質を少くとも１つのペプチドと結合し、かつ
好ましくは、いろいろの場合に１群のペプチド（エンベ
ロープ糖タンパク質の配列から誘導され、かつウィルス
中和エピトープに対応する）と結合することによる。即
ち、そのペプチドは投与される宿主に中和抗体を産生ず
るのに必要なアミノ酸配列に対応する。
従って、本発明は宿主のウィルスのエンベロープ糖タン
パク質の免疫原性を増強する方法を提供する。その方法
はウィルスの少くとも１つのエンベロープ糖タンパク質
及びエンベロープ糖タンパク質のアミノ酸配列から誘導
される少くとも１つのペプチドを宿主に投与することか
ら成る。ペプチドは少くとも１個のウィルス中和エピト
ープを含む。宿主に中和抗体を誘発するのに充分な量で
エンベロープ糖タンパク質及びペプチドを投与する。
パク質の免疫原性を増強する方法を提供する。その方法
はウィルスの少くとも１つのエンベロープ糖タンパク質
及びエンベロープ糖タンパク質のアミノ酸配列から誘導
される少くとも１つのペプチドを宿主に投与することか
ら成る。ペプチドは少くとも１個のウィルス中和エピト
ープを含む。宿主に中和抗体を誘発するのに充分な量で
エンベロープ糖タンパク質及びペプチドを投与する。
本発明はウィルスによる感染に対し宿主を予防接種する
ための組成物も提供する。組成物はエンベロープ糖タン
パク質を投与する宿主に予防接種を施すのに充分な量の
、でウィルスの少くとも１つのエンベロープ糖タンパク
質を含む。組成物はエンベロープ糖タンパク質のアミノ
酸配列から誘導される少くとも１つのペプチドも含有す
る。ペプチドは糖タンパク質の少くとも１個のウィルス
枡 中和エピトープを含む。組成物は宿主のｌ続性中和抗体
の誘発を増強するのに充分な量のペプチドを含有する。
ための組成物も提供する。組成物はエンベロープ糖タン
パク質を投与する宿主に予防接種を施すのに充分な量の
、でウィルスの少くとも１つのエンベロープ糖タンパク
質を含む。組成物はエンベロープ糖タンパク質のアミノ
酸配列から誘導される少くとも１つのペプチドも含有す
る。ペプチドは糖タンパク質の少くとも１個のウィルス
枡 中和エピトープを含む。組成物は宿主のｌ続性中和抗体
の誘発を増強するのに充分な量のペプチドを含有する。
ペプチド及びエンベロープ糖タンパク質を、非共有性物
理的結合又は共有性化学結合によって相互作用させる条
件下に結合することができる。別法として、本発明の好
ましい実施態様では、エンベロープ糖タンパク質の注射
によって開始予防接種（ｐＢｔｎｌｎｇ ｖｚｃｃｉｎ
ｓｌｌｏｌｌ） を施し、次いで中和エピトープに対
応する免疫原性ペプチドの注射によって防御免疫を増強
する。
理的結合又は共有性化学結合によって相互作用させる条
件下に結合することができる。別法として、本発明の好
ましい実施態様では、エンベロープ糖タンパク質の注射
によって開始予防接種（ｐＢｔｎｌｎｇ ｖｚｃｃｉｎ
ｓｌｌｏｌｌ） を施し、次いで中和エピトープに対
応する免疫原性ペプチドの注射によって防御免疫を増強
する。
好ましい実施態様の詳細な説明
予防接種によってチンパンジーのＨＩＶ感染を防御する
既往の試みは、幾つもの異なる型のワクチン、即ち合成
ペプチド、ＨＸｖ抗原を発現する生の組換えワクシニア
ウィルス（ｖＶ）、未変性又は組換えｇ ｐ １２０又
はｇ １） １６０エンベロープ抗原及び不活化全ウィ
ルスの使用にもかかわらず失敗した。組換えＶｖを用い
て事前予防接種し、次いでホルマリン−及びβ−プロピ
オラクトン−不活化した全ＨＩＶによってチンパンジー
の感染性ＨＩＶ攻撃を防御することが出来なかったこと
ｌ前に報告されている。
既往の試みは、幾つもの異なる型のワクチン、即ち合成
ペプチド、ＨＸｖ抗原を発現する生の組換えワクシニア
ウィルス（ｖＶ）、未変性又は組換えｇ ｐ １２０又
はｇ １） １６０エンベロープ抗原及び不活化全ウィ
ルスの使用にもかかわらず失敗した。組換えＶｖを用い
て事前予防接種し、次いでホルマリン−及びβ−プロピ
オラクトン−不活化した全ＨＩＶによってチンパンジー
の感染性ＨＩＶ攻撃を防御することが出来なかったこと
ｌ前に報告されている。
この失敗により本発明のアプローチが根拠とする次の２
つの考えに達した。
つの考えに達した。
１°無細胞ＨＩＶによる感染に対する防御は高水準の中
和抗体（Ａｂ）を多分必要とする。中和Ａｂ又は抗体依
存性細胞媒介細胞障害（Ａ Ｄ ＣＣ）によってウィル
スが根絶を免れるとすれば、統合されたプロウィルスと
して、及び／又は骨髄系又は中枢神経系の細胞の感染に
よってのいずれかで、免疫系から隠れたままでウィルス
が容易に生き残ることができよう。ウィルスの複（転）
は、たとえ限定されていても、中和回避突然変異体の早
期出現を生じ得るであろう。従って、感染ウィルスの早
急な中和は予防接種が成功する鍵となり得る。
和抗体（Ａｂ）を多分必要とする。中和Ａｂ又は抗体依
存性細胞媒介細胞障害（Ａ Ｄ ＣＣ）によってウィル
スが根絶を免れるとすれば、統合されたプロウィルスと
して、及び／又は骨髄系又は中枢神経系の細胞の感染に
よってのいずれかで、免疫系から隠れたままでウィルス
が容易に生き残ることができよう。ウィルスの複（転）
は、たとえ限定されていても、中和回避突然変異体の早
期出現を生じ得るであろう。従って、感染ウィルスの早
急な中和は予防接種が成功する鍵となり得る。
２、今までは、チンパンジーで試験したどのワクチンに
よる中和Ａｂの誘発も、よくても平凡であった。このこ
とにより、ワクチンが動物の感染を防御できないことを
説明し得る。従って、ワクチンが効果をあげるには、従
来得られた力価に比べて高い中和Ａｂ力価を誘発しなけ
ればならない。
よる中和Ａｂの誘発も、よくても平凡であった。このこ
とにより、ワクチンが動物の感染を防御できないことを
説明し得る。従って、ワクチンが効果をあげるには、従
来得られた力価に比べて高い中和Ａｂ力価を誘発しなけ
ればならない。
従って、多様な免疫原を使用し連続免疫プロトコールを
介してチンパンジーに可能な限り最高の中和Ａｂ力価を
引き出すよう試みられた。
介してチンパンジーに可能な限り最高の中和Ａｂ力価を
引き出すよう試みられた。
１頭のチンパンジーＣ−３３９を、２５０／ＩＩ！９の
ホルマリン及びβ−プロビオラクトンー不活化全ＨＩＶ
を１■のスレオニルＭＤＰ濃度を使用して５ＡＦ−１と
混合した４回の注射（０，１，２及び６ケ月）により最
初に免疫した。この動物は高いＨＩＶ ＥＬＩＳＡ力
価（１：２００．０００．カットオフ１１のＤｉａｇｎ
ｏｓｔｉｃ ＰｘｒｌｅｕｒｆＡＥ Ｌ Ａ Ｖ Ｉ
Ａキット使用）を生じ、ｇｐ１６Ｇ 、ｇｐ１２０及び
ｇｐ４１ｅｎｖ並びにｐ５５、ｐ４０、ｐ２５及びｐ１
８ｇａｇに対しウェスタンプロットにより強い反応性を
示した。その中和Ａｂ力価は、２つの異なる中和検定法
を使用してそれぞれ１：４００及び１：６４に達した。
ホルマリン及びβ−プロビオラクトンー不活化全ＨＩＶ
を１■のスレオニルＭＤＰ濃度を使用して５ＡＦ−１と
混合した４回の注射（０，１，２及び６ケ月）により最
初に免疫した。この動物は高いＨＩＶ ＥＬＩＳＡ力
価（１：２００．０００．カットオフ１１のＤｉａｇｎ
ｏｓｔｉｃ ＰｘｒｌｅｕｒｆＡＥ Ｌ Ａ Ｖ Ｉ
Ａキット使用）を生じ、ｇｐ１６Ｇ 、ｇｐ１２０及び
ｇｐ４１ｅｎｖ並びにｐ５５、ｐ４０、ｐ２５及びｐ１
８ｇａｇに対しウェスタンプロットにより強い反応性を
示した。その中和Ａｂ力価は、２つの異なる中和検定法
を使用してそれぞれ１：４００及び１：６４に達した。
第１の検定はＭＴ４１１胞上免疫賃上免疫蛍光法オーカ
ス形成の５０％阻害の評価であって、第２の検定は、Ｃ
ＥＭ−８Ｓ細胞に於ける融合細胞形成の９０％阻害の評
価である。もっと厳密な検定（新鮮なヒトＰＢＬ中の逆
転写酵素産生の１００％阻害）を使用して、二次免疫注
射直後に得られた中和Ａｂの最大力価は１：１６０であ
った。しかしながら、これらの力価は持続せず、速やか
に下降してもっと低い水準となった。
ス形成の５０％阻害の評価であって、第２の検定は、Ｃ
ＥＭ−８Ｓ細胞に於ける融合細胞形成の９０％阻害の評
価である。もっと厳密な検定（新鮮なヒトＰＢＬ中の逆
転写酵素産生の１００％阻害）を使用して、二次免疫注
射直後に得られた中和Ａｂの最大力価は１：１６０であ
った。しかしながら、これらの力価は持続せず、速やか
に下降してもっと低い水準となった。
チンパンジーＣ−３３９の中和Ａｂ力価を増大する試み
で、Ｖ Ｖ−１１６３に感染させたＢＨＫ−２１細胞培
養の上清から精製した組換え可溶性ｇ ｐ １６０ｅｎ
ｖを用いて動物の追加免疫を反復した。ｇｐ１６０分子
を発現するｖｖ−ｅｎｖ組換え型はトランスメンブラン
ドメインの欠失及び切断を防ぐためｇ ｐ １２０／ｇ
ｐ ４１切断部位の部位特異的突然変異誘発による修
飾を含んでいた。ワクシニアウィルスＶ Ｖ −１１６
３はＫｉｅａｙ等、Ｐｒａｌｅｉｎ ＥｎｇＩｎｅｅｒ
ｊｎｇ２ ： ２１９〜２２６（１９８８）の記載
した手順を使用して作製できる。抗原を逐次のレクチン
及び陽イオン交換クロマトグラフィーによって精製し、
次いでＢＣＧのヒト用量を用い胸部の種々の部位に皮肉
注射した（注射１回ごとに １２５〜１５０１４”Ｉ。
で、Ｖ Ｖ−１１６３に感染させたＢＨＫ−２１細胞培
養の上清から精製した組換え可溶性ｇ ｐ １６０ｅｎ
ｖを用いて動物の追加免疫を反復した。ｇｐ１６０分子
を発現するｖｖ−ｅｎｖ組換え型はトランスメンブラン
ドメインの欠失及び切断を防ぐためｇ ｐ １２０／ｇ
ｐ ４１切断部位の部位特異的突然変異誘発による修
飾を含んでいた。ワクシニアウィルスＶ Ｖ −１１６
３はＫｉｅａｙ等、Ｐｒａｌｅｉｎ ＥｎｇＩｎｅｅｒ
ｊｎｇ２ ： ２１９〜２２６（１９８８）の記載
した手順を使用して作製できる。抗原を逐次のレクチン
及び陽イオン交換クロマトグラフィーによって精製し、
次いでＢＣＧのヒト用量を用い胸部の種々の部位に皮肉
注射した（注射１回ごとに １２５〜１５０１４”Ｉ。
これに次いでＳＡＦと調合した抗原の筋肉内注射を３回
続けて行った。ＥＬＩＳＡ及び中和Ａｂの力価を定形的
に追跡したが、この免疫の間及び後で両刃価とも不変の
ままであった。
続けて行った。ＥＬＩＳＡ及び中和Ａｂの力価を定形的
に追跡したが、この免疫の間及び後で両刃価とも不変の
ままであった。
ｇｌ）１ｆｉＯｅｎｖが抗体応答を増強できないことは
免疫原性の不足に帰せられないのは、前にＨＩＶ抗原に
暴露したことがなかった未試験のチンパンジーＣ−５１
９を同時に免疫することによって判明した。Ｃ−３３９
に対するのと同じ免疫プロトコールを使用して、Ｃ−５
１９は強い抗ｇｐ１６０Ａｂ応答を容易に示し、そのＥ
Ｌ Ｉ ＳＡ力価は２回の注射の後２０Ｇ、 Ｇｏｏに
達した。従って、ｇｌ）１６０ｅｎｖの注射にＣ−３３
９が応答できないことは免疫原の抗原力価の不足のため
ではなくて、多くは動物の何か未確認の免疫遮断による
らしい。
免疫原性の不足に帰せられないのは、前にＨＩＶ抗原に
暴露したことがなかった未試験のチンパンジーＣ−５１
９を同時に免疫することによって判明した。Ｃ−３３９
に対するのと同じ免疫プロトコールを使用して、Ｃ−５
１９は強い抗ｇｐ１６０Ａｂ応答を容易に示し、そのＥ
Ｌ Ｉ ＳＡ力価は２回の注射の後２０Ｇ、 Ｇｏｏに
達した。従って、ｇｌ）１６０ｅｎｖの注射にＣ−３３
９が応答できないことは免疫原の抗原力価の不足のため
ではなくて、多くは動物の何か未確認の免疫遮断による
らしい。
中和Ａｂの誘発に要したｇ ｐ １２０分子のエピトー
プのみを動物に注射することによってこのような減損を
回避し得ることが推論される。
プのみを動物に注射することによってこのような減損を
回避し得ることが推論される。
ＨＩＶ中和Ａｂはｇｐ１２０の■３領域由来の型特異的
超可変ループに対し第一義的に特異的であることが判明
した。従って、ＨＩＶ−Ｉ ＢＲＵ（Ｉ［ｂ）株由来
（Ｄ ルー ）４− （ＹＮＴＲＫＳ ＩＲＩＱＲＧＰ
ＧＲＡＦＶＴＩＧＫＩＧＮ）の配列を有する２５量体オ
リゴペプチドを、ビス−ジアゾベンジジンを使用してＫ
ＬＨに架橋した。０．３及び１９９回目Ｓ Ａ Ｆ （
３００１のペプチド）の存在下にペプチド−担体複合体
をＣ−３３９に注射した。ＥＬ Ｉ ＳＡ力価の増加を
認めなかったが、２回目の注射に次いで中和Ａｂ力価が
持続して得られた。もう１頭のチンパンジー、ＲＯＢＥ
ＲＴ。
超可変ループに対し第一義的に特異的であることが判明
した。従って、ＨＩＶ−Ｉ ＢＲＵ（Ｉ［ｂ）株由来
（Ｄ ルー ）４− （ＹＮＴＲＫＳ ＩＲＩＱＲＧＰ
ＧＲＡＦＶＴＩＧＫＩＧＮ）の配列を有する２５量体オ
リゴペプチドを、ビス−ジアゾベンジジンを使用してＫ
ＬＨに架橋した。０．３及び１９９回目Ｓ Ａ Ｆ （
３００１のペプチド）の存在下にペプチド−担体複合体
をＣ−３３９に注射した。ＥＬ Ｉ ＳＡ力価の増加を
認めなかったが、２回目の注射に次いで中和Ａｂ力価が
持続して得られた。もう１頭のチンパンジー、ＲＯＢＥ
ＲＴ。
Ｃ−４３３と一緒に動物Ｃ−３３９を２６週に感染させ
た（後記参照）。Ｃ−４３３は別個ではあるが、平行し
て免疫処理を受けていた。
た（後記参照）。Ｃ−４３３は別個ではあるが、平行し
て免疫処理を受けていた。
チンパンジーＣ−４３３ハ、Ｖ Ｖ −１１３９ニヨツ
”Ｃ初めに抗原刺激をしておいた。このＶＶ組換え体は
、Ｖ Ｖ −１１６３と同じｇｌ）１６０ｅｎｖの非切
断型を発現するが、トランスメンブランドメインを含有
する。ワクシニアウィルスＶ Ｖ −１１３９は、Ｋｉ
ｅｎ７等、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｎｅｅｒｉｎ
ｇ ２ ： ２１９〜２２６（１９８８）の記載の
手順を使用して製造することができる。２Ｘ１０８ＰＦ
ＵのＶＶ組換え体を使用して乱切皮膚試験を４週と２２
週に繰返して行った。次いで、前記のようにして精製し
た組換え可溶性ｇｐ１６０、並びにＳＡＦと混合した組
換えｐ１８ｇ ａ ｇ、 ｐ２７ｎ ｅ ｆ及びｐ２３
ｖｉｆ（大腸菌から精製）それぞれ１２５〜１５０ ＃
を使用して動物を免疫した。注射は０．１．２及び６月
目とし、結果としてＥＬＩＳＡ Ａｂ力価１：４００
．０００を生じた。しかしながら、中和Ａｂ力価は再度
低いままであって、免疫蛍光フォーカス及び融合細胞形
成検定によりそれぞれ１：４００及び１・１２８であっ
た。従って、同じ免疫プロトコールに従って、Ｃ，−３
３９と同じＶ３ペプチド−ＫＬＨ複合体を使用してＣ−
４３３に注射した。Ｃ−４３３の中和Ａｂ力価は直ちに
数倍に急増してＣ−’３３９と平行して動物を感染させ
た。
”Ｃ初めに抗原刺激をしておいた。このＶＶ組換え体は
、Ｖ Ｖ −１１６３と同じｇｌ）１６０ｅｎｖの非切
断型を発現するが、トランスメンブランドメインを含有
する。ワクシニアウィルスＶ Ｖ −１１３９は、Ｋｉ
ｅｎ７等、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｎｅｅｒｉｎ
ｇ ２ ： ２１９〜２２６（１９８８）の記載の
手順を使用して製造することができる。２Ｘ１０８ＰＦ
ＵのＶＶ組換え体を使用して乱切皮膚試験を４週と２２
週に繰返して行った。次いで、前記のようにして精製し
た組換え可溶性ｇｐ１６０、並びにＳＡＦと混合した組
換えｐ１８ｇ ａ ｇ、 ｐ２７ｎ ｅ ｆ及びｐ２３
ｖｉｆ（大腸菌から精製）それぞれ１２５〜１５０ ＃
を使用して動物を免疫した。注射は０．１．２及び６月
目とし、結果としてＥＬＩＳＡ Ａｂ力価１：４００
．０００を生じた。しかしながら、中和Ａｂ力価は再度
低いままであって、免疫蛍光フォーカス及び融合細胞形
成検定によりそれぞれ１：４００及び１・１２８であっ
た。従って、同じ免疫プロトコールに従って、Ｃ，−３
３９と同じＶ３ペプチド−ＫＬＨ複合体を使用してＣ−
４３３に注射した。Ｃ−４３３の中和Ａｂ力価は直ちに
数倍に急増してＣ−’３３９と平行して動物を感染させ
た。
Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃ！ｎｅｅｒ Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ
提供（Ｌａｒｒ７＾ｒｊｈｕｒ、 ＮＣＩ、 Ｆｒｅｄ
ｅ＋ｉｃｋ、 ＭＤ寄贈）の滴定したウィルス株（ｍＢ
株、ロット番号４０）を使用して２頭のチンパンジーを
感染した。１０ Ｔ ＣＩ Ｄ５ｏ／ｍ＋を含有する
株を１：１００に希釈して、１ ｍｌの希釈液を両方の
免疫した動物に静脈注射した。動物の不必要な使用を避
ける目的、及びウィルス株がチンパンジーで２回滴定し
てあって、チンパンジーに対するその感染力が規則的に
査定されている事実のため、この実験では対照の未試験
チンパンジーを使用しなかった。このウィルス株のチン
パンジー■Ｄ５ｏは４ＴＣＩＤ５ｏと同等であった。２
回の実験で、４０７ＣＩＤ５ｏをチンパンジーに注射す
ることにより注射後早くも２週間でＰＢＬ中に検出可能
なウィルスの出現を生じ、続いて４週目でセロコンバー
ジョン（ｓｅｒｏｃｏｎｖｅｒ＋１ｏｎ）を生じた。
提供（Ｌａｒｒ７＾ｒｊｈｕｒ、 ＮＣＩ、 Ｆｒｅｄ
ｅ＋ｉｃｋ、 ＭＤ寄贈）の滴定したウィルス株（ｍＢ
株、ロット番号４０）を使用して２頭のチンパンジーを
感染した。１０ Ｔ ＣＩ Ｄ５ｏ／ｍ＋を含有する
株を１：１００に希釈して、１ ｍｌの希釈液を両方の
免疫した動物に静脈注射した。動物の不必要な使用を避
ける目的、及びウィルス株がチンパンジーで２回滴定し
てあって、チンパンジーに対するその感染力が規則的に
査定されている事実のため、この実験では対照の未試験
チンパンジーを使用しなかった。このウィルス株のチン
パンジー■Ｄ５ｏは４ＴＣＩＤ５ｏと同等であった。２
回の実験で、４０７ＣＩＤ５ｏをチンパンジーに注射す
ることにより注射後早くも２週間でＰＢＬ中に検出可能
なウィルスの出現を生じ、続いて４週目でセロコンバー
ジョン（ｓｅｒｏｃｏｎｖｅｒ＋１ｏｎ）を生じた。
対照的に、１００ＴＣＩＤ５ｏによるチンパンジーＣ−
３３９及びＣ−４３３の感染は、感染時以後経過した２
４週間には抗体力価に検出できる増加を生じなかった。
３３９及びＣ−４３３の感染は、感染時以後経過した２
４週間には抗体力価に検出できる増加を生じなかった。
更に、Ｃ−４３３は抗１）２５ｇａｇＡｂを発生せず、
Ｃ−３３９は抗ｐ２７ｎｅｆＡｂを発生せず、又この２
動物は抗ｐ６６ｐｏｌＡｂも発生しなかった。
Ｃ−３３９は抗ｐ２７ｎｅｆＡｂを発生せず、又この２
動物は抗ｐ６６ｐｏｌＡｂも発生しなかった。
攻撃後６週、１２週及び２４週目に行った両方のチンパ
ンジー由来のＰＢＬに対するＰＣＲ試験は１Ｆ 陰性であったけれども、悪夢を受けて１年前に感染した
免疫の不充分だったチンパンジー（Ｃ−４８７）はＰＣ
Ｈにより陽性であった。最後に、ヒトＰＢＬとＣ−３３
９又はＣ−４３３のいずれかに由来するＰＢＬの共生培
養によってウィルスが回収させなかったことを、培養の
６週後ＲＴ活性の存在しないことで判断した。
ンジー由来のＰＢＬに対するＰＣＲ試験は１Ｆ 陰性であったけれども、悪夢を受けて１年前に感染した
免疫の不充分だったチンパンジー（Ｃ−４８７）はＰＣ
Ｈにより陽性であった。最後に、ヒトＰＢＬとＣ−３３
９又はＣ−４３３のいずれかに由来するＰＢＬの共生培
養によってウィルスが回収させなかったことを、培養の
６週後ＲＴ活性の存在しないことで判断した。
「中和エピトープ」と言う表現は、ＨＩＶ−１の場合、
とりわけＰｕｊｎｅ７等（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３４
： １３９２〜１３９５）により１９８６年に、かツＲ
ｕ５ｃｈｅ等（ＰｒｏｃＮａｉｌ、 Ａｃｘｄ、Ｓｃｉ
、ＵＳＡ ８５ ： ３１９８〜３２Ｇ２）により１
９８８年に記載されたような主要ウィルス中和エピトー
プを意味するものと解釈する。それについての塩基配列
はＨＩＶ−１エンベロープ糖タンパク質のアミノ酸２９
６〜３３１にほぼ対応することはＭ７ｅｒｓ等（Ｈｕｍ
ａｎ Ｒｅ１ｒｏｖｉｒｕｓｅｓ ａｌＩｄ ＡＩＤＳ
１９８９Ｌｏｔ Ａｌａｍｏｓ、 Ｎａ＋１．Ｌａｂ
、）の業績に記載の通りである。同様に本発明により包
含されるのは、ヒトのＨＴ Ｖ−１、又は別のレトロウ
ィルスであるＨＩＶ−２、ＨＴＬＶ−１若しくはＨＴＬ
Ｖ−ＩＩ、動物のＦＩＶ、ＦｅＬＶ、又は別のレンチウ
ィルスの種々の変異体の同等の部位に対応するペプチド
であって、それらは問題にしているウィルスの中和エピ
トープに対応する。
とりわけＰｕｊｎｅ７等（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３４
： １３９２〜１３９５）により１９８６年に、かツＲ
ｕ５ｃｈｅ等（ＰｒｏｃＮａｉｌ、 Ａｃｘｄ、Ｓｃｉ
、ＵＳＡ ８５ ： ３１９８〜３２Ｇ２）により１
９８８年に記載されたような主要ウィルス中和エピトー
プを意味するものと解釈する。それについての塩基配列
はＨＩＶ−１エンベロープ糖タンパク質のアミノ酸２９
６〜３３１にほぼ対応することはＭ７ｅｒｓ等（Ｈｕｍ
ａｎ Ｒｅ１ｒｏｖｉｒｕｓｅｓ ａｌＩｄ ＡＩＤＳ
１９８９Ｌｏｔ Ａｌａｍｏｓ、 Ｎａ＋１．Ｌａｂ
、）の業績に記載の通りである。同様に本発明により包
含されるのは、ヒトのＨＴ Ｖ−１、又は別のレトロウ
ィルスであるＨＩＶ−２、ＨＴＬＶ−１若しくはＨＴＬ
Ｖ−ＩＩ、動物のＦＩＶ、ＦｅＬＶ、又は別のレンチウ
ィルスの種々の変異体の同等の部位に対応するペプチド
であって、それらは問題にしているウィルスの中和エピ
トープに対応する。
更に本発明の範囲に含まれるのは、副次的（ｍｉｎｏ「
）中和エピトープとして知られるペプチドに対応するペ
プチドであって、その特徴はそれがエンベロープ糖タン
パク質の保存部位に属すること、及び問題のウィルスの
幾つもの種々の分離株、たとえばＨＴＶ−１の幾つもの
種々の分離株、又はＨＩＶ−１、及び同様にＨＩＶ−２
の種々の分離株までも、比較的低い力価で中和する能力
のある抗体を誘発することである。副次エピトープの例
はＣｈａｎｈ等の１９８６年の業績（Ｔｈｅ ＥＭＢＯ
ｊｏｕｒｎａｌ。
）中和エピトープとして知られるペプチドに対応するペ
プチドであって、その特徴はそれがエンベロープ糖タン
パク質の保存部位に属すること、及び問題のウィルスの
幾つもの種々の分離株、たとえばＨＴＶ−１の幾つもの
種々の分離株、又はＨＩＶ−１、及び同様にＨＩＶ−２
の種々の分離株までも、比較的低い力価で中和する能力
のある抗体を誘発することである。副次エピトープの例
はＣｈａｎｈ等の１９８６年の業績（Ｔｈｅ ＥＭＢＯ
ｊｏｕｒｎａｌ。
５： ３０６５〜３Ｇ７１） 、及びＥｖａｎ＋等の１
９８９年の業績１ｒＲｅｌｒａｖ ｔｕｓｅｓ ａｔ
ｈｕｍａｎ ＡＩＤＳ ａＩＩｄ ｒｅｌａ
ｔｅｄ ａｎｉ−ｍａｌ ｄｉｓｅａｓｅｓＪ （
Ｍ、Ｇｉｒａｒｄ 及びり、 Ｖａｌｅｔｆｅ、 Ｆ
ｏｕｎ−ｄａｊｉｏｎ Ｍａｒｃｅｌ Ｍｅ＋１ｅｕｘ
、Ｌｙｏｎ、 １９Ｈ１年印刷中）中の業績、又はＧ
ｏｌｄＮｅｉｎ等に見出すことができる。
９８９年の業績１ｒＲｅｌｒａｖ ｔｕｓｅｓ ａｔ
ｈｕｍａｎ ＡＩＤＳ ａＩＩｄ ｒｅｌａ
ｔｅｄ ａｎｉ−ｍａｌ ｄｉｓｅａｓｅｓＪ （
Ｍ、Ｇｉｒａｒｄ 及びり、 Ｖａｌｅｔｆｅ、 Ｆ
ｏｕｎ−ｄａｊｉｏｎ Ｍａｒｃｅｌ Ｍｅ＋１ｅｕｘ
、Ｌｙｏｎ、 １９Ｈ１年印刷中）中の業績、又はＧ
ｏｌｄＮｅｉｎ等に見出すことができる。
主要及び副次の中和エピトープの免疫原性ペプチドは好
ましくは相互に混合して最大の可能な防御を確保する。
ましくは相互に混合して最大の可能な防御を確保する。
それらは遊離状態として、担体分子に共役（結合）せず
に投与することができる。
に投与することができる。
特にＧｉ＋ｘｒｄ −Ｇｌｕｃｋｍａｎ −Ｂａｈ＋ａ
ｏｕｉの１９８９年 ８月１８日付フランス特許出願第
８９．１１０４４号の記載のように、それらは１つ以上
の構造的又は非構造的タンパク質に由来する１つ又は好
ましくは幾つかのＴ−エピトープを有するアミノ酸の配
列と組合すことも可能であって、そのタンパク質は同じ
レトロウィルスか又は該レトロウィルスと免疫交叉反応
性のレトロウィルスのタンパク質である。
ｏｕｉの１９８９年 ８月１８日付フランス特許出願第
８９．１１０４４号の記載のように、それらは１つ以上
の構造的又は非構造的タンパク質に由来する１つ又は好
ましくは幾つかのＴ−エピトープを有するアミノ酸の配
列と組合すことも可能であって、そのタンパク質は同じ
レトロウィルスか又は該レトロウィルスと免疫交叉反応
性のレトロウィルスのタンパク質である。
本発明の特に好ましい実施態様の工つとして、中和エピ
トープに対応する免疫原性ペプチドをＴエピトープに対
応するアミノ酸の配列と化学的Ｅ に共役する。別の場合としては、たとえば二宮声性試薬
又は他の所望の共役剤とペプチドを反応させることによ
って、所望のＴ−エピトープを有する担体分子にペプチ
ドを共役させる。
トープに対応する免疫原性ペプチドをＴエピトープに対
応するアミノ酸の配列と化学的Ｅ に共役する。別の場合としては、たとえば二宮声性試薬
又は他の所望の共役剤とペプチドを反応させることによ
って、所望のＴ−エピトープを有する担体分子にペプチ
ドを共役させる。
担体分子としては、ウィルスゲノムによってコードされ
たタンパク質を使用することができ（ＨＩＶの場合には
、ｔａｔ、ｒｅｖ、ｖｉｆ。
たタンパク質を使用することができ（ＨＩＶの場合には
、ｔａｔ、ｒｅｖ、ｖｉｆ。
ｐＯｌ、ｖｐｒ、ｖｐｘｌ ｖｐｕｌｇａｇ。
ｅｎｖ、又はｎｅｆ遺伝子により産生されるタンパク質
）、又は他の（タンパク質型）分子、たとえばＨＢｓ抗
原、ＨＢｃ抗原、破傷風類毒素、ヘモシアニン、ヒトア
ルブミン、又はポリペプチド（たとえばポリリシン）若
しくは適当なりポペプチドを使用できる。
）、又は他の（タンパク質型）分子、たとえばＨＢｓ抗
原、ＨＢｃ抗原、破傷風類毒素、ヘモシアニン、ヒトア
ルブミン、又はポリペプチド（たとえばポリリシン）若
しくは適当なりポペプチドを使用できる。
本発明の特定の実施態様の中で、エンベロープ糖タンパ
ク質分子並びに主要及び副次の中和ペプチド（遊離か又
は担体分子に結合しているかのいずれか）が同じワクチ
ン製剤中に一緒にされる場合に、ワクチンの初めの１回
又は少数回の注射の後にエンベロープ糖タンパク質の接
種（ｐ＋ｉｍｉｎｇ）効果化が現われ、ペプチドに基づ
く増幅（増強）効果がその直後に現れる。
ク質分子並びに主要及び副次の中和ペプチド（遊離か又
は担体分子に結合しているかのいずれか）が同じワクチ
ン製剤中に一緒にされる場合に、ワクチンの初めの１回
又は少数回の注射の後にエンベロープ糖タンパク質の接
種（ｐ＋ｉｍｉｎｇ）効果化が現われ、ペプチドに基づ
く増幅（増強）効果がその直後に現れる。
従って、本発明の目的は、第一の抗原、即ちこの場合に
は、この抗原は問題のそれぞれのレトロウィルス血清型
の幾つかのエンベロープ糖タンパク質であって免疫系の
応答を開始する効果を有するもの及び第二の抗原、即ち
この場合には、問題のウィルスの異なる血清型の主要な
中和エピトープと更に有り得る副次の中和エピトープに
も対応する合成ペプチドを予防接種（好ましくは逐次で
、要すれば混合物で）用に、特に持続性の高力価中和抗
体の誘発を介して、初期応答を増幅し強化するために使
用することである。本発明は約６ケ月の間、そして１年
以上の永い間にまで持続する免疫を誘発することを可能
にする。
は、この抗原は問題のそれぞれのレトロウィルス血清型
の幾つかのエンベロープ糖タンパク質であって免疫系の
応答を開始する効果を有するもの及び第二の抗原、即ち
この場合には、問題のウィルスの異なる血清型の主要な
中和エピトープと更に有り得る副次の中和エピトープに
も対応する合成ペプチドを予防接種（好ましくは逐次で
、要すれば混合物で）用に、特に持続性の高力価中和抗
体の誘発を介して、初期応答を増幅し強化するために使
用することである。本発明は約６ケ月の間、そして１年
以上の永い間にまで持続する免疫を誘発することを可能
にする。
免疫系の応答の初期抗原刺激をするため使用される糖タ
ンパク質は、起り得る切断以前に得られるような分子全
体であることが好ましい。それで、ＨＩＶ−１の場合に
は、ｇ １） １６０はｇ ｐ １２０よりも好ましく
、同じことが他のレトロウィルスについてあてはまる。
ンパク質は、起り得る切断以前に得られるような分子全
体であることが好ましい。それで、ＨＩＶ−１の場合に
は、ｇ １） １６０はｇ ｐ １２０よりも好ましく
、同じことが他のレトロウィルスについてあてはまる。
これによって抗ｇｐ４１抗体が特に誘発されるようにな
り、それはウィルス保菌者に好都合なしるしである（Ｋ
ｌ ａ ｓ ｓ ｅ等、Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ＾ｃａ
ｄ Ｓｃｉ、ＵＳＡ ８５ ： ５２２５〜５２２９）
。
り、それはウィルス保菌者に好都合なしるしである（Ｋ
ｌ ａ ｓ ｓ ｅ等、Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ＾ｃａ
ｄ Ｓｃｉ、ＵＳＡ ８５ ： ５２２５〜５２２９）
。
「アンブリファイア」を構成するペプチドは遊離か又は
担体分子と物理的に結合（特に疎水性結合によって）若
しくは化学的に結合（特に共有結合によって）すること
ができる。それらはＴ−エピトープに対応する他のペプ
チドと会合することもでき、あるいは更にペプチド、リ
ポペプチド、糖ペプチド、脂肪族鎖、脂肪酸とでも会合
し、又はこれらの組合せであって免疫系を刺激する能力
及び／又は「アンブリファイア」ペプチドを抗体提示細
胞の特異的目標とする能力のある組合せと会合すること
ができる。
担体分子と物理的に結合（特に疎水性結合によって）若
しくは化学的に結合（特に共有結合によって）すること
ができる。それらはＴ−エピトープに対応する他のペプ
チドと会合することもでき、あるいは更にペプチド、リ
ポペプチド、糖ペプチド、脂肪族鎖、脂肪酸とでも会合
し、又はこれらの組合せであって免疫系を刺激する能力
及び／又は「アンブリファイア」ペプチドを抗体提示細
胞の特異的目標とする能力のある組合せと会合すること
ができる。
この観点から、ＨＩＶ中和エピトープに対応するペプチ
ドの特に有利な提示は、好ましくは共有化学結合によっ
て、そのペプチドをリポペプチドに結合することである
ことが、特に１９８９年Ｄｅｒｅｓ゛等（Ｎａｔｕｒｅ
３４２： ５６１〜５６４）により記載された通り
である。このようにして提示される増幅ペプチドはＢ−
細胞応答ばかりでなく、ＣＴＬＣＤ８＋応答、制限ＨＬ
Ａクラスエを誘発できることが、タカナシ等により１９
８８年に記載されている（Ｐｒｏｃ、 Ｎａｊｌ、＾ｃ
ａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ、 ８５： ３１０５〜３１０９
）。
ドの特に有利な提示は、好ましくは共有化学結合によっ
て、そのペプチドをリポペプチドに結合することである
ことが、特に１９８９年Ｄｅｒｅｓ゛等（Ｎａｔｕｒｅ
３４２： ５６１〜５６４）により記載された通り
である。このようにして提示される増幅ペプチドはＢ−
細胞応答ばかりでなく、ＣＴＬＣＤ８＋応答、制限ＨＬ
Ａクラスエを誘発できることが、タカナシ等により１９
８８年に記載されている（Ｐｒｏｃ、 Ｎａｊｌ、＾ｃ
ａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ、 ８５： ３１０５〜３１０９
）。
ＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２の場合のように、ウィルスが
高度の抗原変異性を有する場合には、初晦 期刺激抗原として唯１つのエンベロープｌタンパク質で
はなく、配列が異なり、各配列が問題のウィルスの分離
株又は分離株のグループに対応する幾ツかのエンベロー
プ糖タンパク質を使用することが必要であって、それに
よって初期抗原刺激現象が望むだけ多数得られる。なぜ
ならばそれは単一の分離株又は分離株のグループにそれ
ぞれ特異的なためである。この場合には、増幅ペプチド
の組成が問題の分離株のそれぞれの中和ペプチドの混合
物であることは、下記により示す通りである。
高度の抗原変異性を有する場合には、初晦 期刺激抗原として唯１つのエンベロープｌタンパク質で
はなく、配列が異なり、各配列が問題のウィルスの分離
株又は分離株のグループに対応する幾ツかのエンベロー
プ糖タンパク質を使用することが必要であって、それに
よって初期抗原刺激現象が望むだけ多数得られる。なぜ
ならばそれは単一の分離株又は分離株のグループにそれ
ぞれ特異的なためである。この場合には、増幅ペプチド
の組成が問題の分離株のそれぞれの中和ペプチドの混合
物であることは、下記により示す通りである。
本発明のＨＩＶ−１アンブリフアイアペプチドの調製物
は１文字のアミノ酸暗号で表された下記のる傘配列の少
くとも１つ又はこの配列のｉｌｌ！を含有することを特
徴とする。
は１文字のアミノ酸暗号で表された下記のる傘配列の少
くとも１つ又はこの配列のｉｌｌ！を含有することを特
徴とする。
Ｃ−ＴＲＰＮＮＮＴＲＫＲＩＲＩＱＲＧＰＧＲＡＣ−Ｔ
ＲＰＮＮＮＴＲＫＳ ＩＲＩＱＲＧＰＧＲＡＣ−ＴＲ
ＰＮＮＮＴＲＫＫ ＩＲＩＱＲＧＰＧＲＡＣ−ＴＲＰ
ＮＮＮＴＲＧＳ ＩＩ！ＩＱＲＧＰＧＩＩＡＣ−ＴＲ
ＰＮＮＮＴＲＫＳ ＩＹＩ−ＧＰＧＲＡＣ−ＴＲＰＹ
ＮＮＶＲＲＳ ＬＳＩ−ＧＰＧＲＡＣ−ＴＲＰＧＮＮ
ＴＲＲＧ ＩＨＦ−ＧＰＧＱＡＣ−＾ＲＰＹＱにＴＲ
ＱＲＴＰＩ−ＧＬＧＱＳＣ−丁ＲＰＮＮＮＴＲＫＳ
１丁に−ＧＰＧＲＶＣ−ＴＲＰＮＮＮＴＩＫＲ１Ｔｂ１
−ＧＰＧＲＶＣ−ＴＲＰＧＳＤＫＲＱＳ ＴＰＩ−Ｇ
ＬＧＱＡＣ−ＴＲＰＧＳＤＫＫＩＲＱＳＩＲＩＧＰＧＫ
ＶＣ−ＴＲＰＮＮＮＴＫＫＧ ｌ＾１−ＧＰＧＩＩＴ
Ｃ−ＴＲＰＮＮＨＴＲＫＲＶＴＬ−ＧＰＧＲＶＣ−ＴＲ
ＰＧＮＮＴＲＲＧ ５ＨＦ−ＧＰＧＱＡＣ−ＴＲＰＤ
ＮＫＩＴＳＲＱ−ＴＰＩ−ＧＬＧＱＡＣ−ＴＲＰＮＮＮ
ＶＲＲＲ−８１）１１−ＧＰＧＲＡＣ−ＴＲＰＹｌ［Ｎ
ＴＩｔＱＳ−ＴＰＩ−ＧＬＧＱＡＣ−ＴＲＰＮＮＮＴＴ
Ｒ３−ＩＨＩ−ＧＰＧＲＡＣ−ＴＲＰＮＹＮＫＲＫＲ−
１ｔ（Ｉ−ＧＰＧＲ＾ＦＶＴＩＧＫ−ＩＧＮ Ｍ−Ｒ
ＱＡＨ−ＣＦＶＴＩＧＫ−ＩＧＮ Ｍ−ＲＱＡＨ−Ｃ
ＦＶＴＩＧＫ−ＩＧＮ Ｍ−ＲＱＡＩ（−ＣＦＶｒｌ
ＧＩｆ−ＩＧＮ Ｍ−ＲＱＡ）ｌ−ＣＦ）ＩＴＴＧＲＩ
ＩＧＤ −ＩＲＫＡＨ−ＣＦＲＴＲＥ−１１ＧＩ
−ＩＲＱＡ）ｌ−ＣＬＹＴＴＧＩＶ−ＧＤ −ＩＲＲ
ＡＹ−ＣＬＹＴＴＲＳＲ−５ｔ −ＩＧＱＡＦＩ−Ｃ
ＩＹＡＴＧＱＩＩＧＤ −ＩＲＫＡＩＩ−ＣＹＹＴＴ
ＧＱＩＩＧＤ −ＩＲＲＡＨ−ＣＬＹＴＴＲＧＲＴＫ
Ｉ −ＩＧＱＡＨ−ＣＦＹＡＫＧＧ−−−１−ＴＧＱ
ＡＨ−Ｃ１ＹＡｌｌＥＫＩＩＧＤ ｌ！ＩＱＡ）ｌ−
ＣＷＹＴＴＧＥＩＬＧＮ −ＩＲＱＡＨ−ＣＬＹＴＴ
ＧＩＶＧＤＩ −ＲＲＡＹ−ＣＬＹＴＴＲＩＫＧＤＩ
−ＲＱＡＹ−ＣＦＹ丁ＧＥＩＲＮＩ −ＲＱＡ
Ｈ−ＣＬＹ丁丁１１ＴＫＳＩ −ＧＱＡ）Ｉ−ＣＦ
ＹＡＴＧＤＩＩＧＴＩＲＱＡＨ−Ｃ ＦＹＴＴＫＮＩＩＧＤＩＲＱＡＨ−Ｃ 少なくとも１つの中和エピトープ及び特に前記リストか
らのｌっを含有する配列並びに少くとも１つのＴ−エピ
トープを有する担体配列を１つ使用して、本発明の増幅
分子を産生ずることは、これらの配列の結合によるか又
は同じ組成の物理的結合により達成し得る。
ＲＰＮＮＮＴＲＫＳ ＩＲＩＱＲＧＰＧＲＡＣ−ＴＲ
ＰＮＮＮＴＲＫＫ ＩＲＩＱＲＧＰＧＲＡＣ−ＴＲＰ
ＮＮＮＴＲＧＳ ＩＩ！ＩＱＲＧＰＧＩＩＡＣ−ＴＲ
ＰＮＮＮＴＲＫＳ ＩＹＩ−ＧＰＧＲＡＣ−ＴＲＰＹ
ＮＮＶＲＲＳ ＬＳＩ−ＧＰＧＲＡＣ−ＴＲＰＧＮＮ
ＴＲＲＧ ＩＨＦ−ＧＰＧＱＡＣ−＾ＲＰＹＱにＴＲ
ＱＲＴＰＩ−ＧＬＧＱＳＣ−丁ＲＰＮＮＮＴＲＫＳ
１丁に−ＧＰＧＲＶＣ−ＴＲＰＮＮＮＴＩＫＲ１Ｔｂ１
−ＧＰＧＲＶＣ−ＴＲＰＧＳＤＫＲＱＳ ＴＰＩ−Ｇ
ＬＧＱＡＣ−ＴＲＰＧＳＤＫＫＩＲＱＳＩＲＩＧＰＧＫ
ＶＣ−ＴＲＰＮＮＮＴＫＫＧ ｌ＾１−ＧＰＧＩＩＴ
Ｃ−ＴＲＰＮＮＨＴＲＫＲＶＴＬ−ＧＰＧＲＶＣ−ＴＲ
ＰＧＮＮＴＲＲＧ ５ＨＦ−ＧＰＧＱＡＣ−ＴＲＰＤ
ＮＫＩＴＳＲＱ−ＴＰＩ−ＧＬＧＱＡＣ−ＴＲＰＮＮＮ
ＶＲＲＲ−８１）１１−ＧＰＧＲＡＣ−ＴＲＰＹｌ［Ｎ
ＴＩｔＱＳ−ＴＰＩ−ＧＬＧＱＡＣ−ＴＲＰＮＮＮＴＴ
Ｒ３−ＩＨＩ−ＧＰＧＲＡＣ−ＴＲＰＮＹＮＫＲＫＲ−
１ｔ（Ｉ−ＧＰＧＲ＾ＦＶＴＩＧＫ−ＩＧＮ Ｍ−Ｒ
ＱＡＨ−ＣＦＶＴＩＧＫ−ＩＧＮ Ｍ−ＲＱＡＨ−Ｃ
ＦＶＴＩＧＫ−ＩＧＮ Ｍ−ＲＱＡＩ（−ＣＦＶｒｌ
ＧＩｆ−ＩＧＮ Ｍ−ＲＱＡ）ｌ−ＣＦ）ＩＴＴＧＲＩ
ＩＧＤ −ＩＲＫＡＨ−ＣＦＲＴＲＥ−１１ＧＩ
−ＩＲＱＡ）ｌ−ＣＬＹＴＴＧＩＶ−ＧＤ −ＩＲＲ
ＡＹ−ＣＬＹＴＴＲＳＲ−５ｔ −ＩＧＱＡＦＩ−Ｃ
ＩＹＡＴＧＱＩＩＧＤ −ＩＲＫＡＩＩ−ＣＹＹＴＴ
ＧＱＩＩＧＤ −ＩＲＲＡＨ−ＣＬＹＴＴＲＧＲＴＫ
Ｉ −ＩＧＱＡＨ−ＣＦＹＡＫＧＧ−−−１−ＴＧＱ
ＡＨ−Ｃ１ＹＡｌｌＥＫＩＩＧＤ ｌ！ＩＱＡ）ｌ−
ＣＷＹＴＴＧＥＩＬＧＮ −ＩＲＱＡＨ−ＣＬＹＴＴ
ＧＩＶＧＤＩ −ＲＲＡＹ−ＣＬＹＴＴＲＩＫＧＤＩ
−ＲＱＡＹ−ＣＦＹ丁ＧＥＩＲＮＩ −ＲＱＡ
Ｈ−ＣＬＹ丁丁１１ＴＫＳＩ −ＧＱＡ）Ｉ−ＣＦ
ＹＡＴＧＤＩＩＧＴＩＲＱＡＨ−Ｃ ＦＹＴＴＫＮＩＩＧＤＩＲＱＡＨ−Ｃ 少なくとも１つの中和エピトープ及び特に前記リストか
らのｌっを含有する配列並びに少くとも１つのＴ−エピ
トープを有する担体配列を１つ使用して、本発明の増幅
分子を産生ずることは、これらの配列の結合によるか又
は同じ組成の物理的結合により達成し得る。
のような脂質アジュバント、又は不完全フロイントアジ
ュバントによって接種及び増強（ｐｒｉｍｉｎｇ及びａ
ｍｐｌｉｆ７ｉｎｇ）抗原を増強させねばならない。
ュバントによって接種及び増強（ｐｒｉｍｉｎｇ及びａ
ｍｐｌｉｆ７ｉｎｇ）抗原を増強させねばならない。
接種及び増幅用抗原は霊長類のような宿主、特にヒトに
筋肉内投与するのが好ましい。下記の典型的免疫予定表
はｇｐ１６０及びＨＩＶのペプチドに採用することがで
きる。
筋肉内投与するのが好ましい。下記の典型的免疫予定表
はｇｐ１６０及びＨＩＶのペプチドに採用することがで
きる。
１１６０ ペプチド
（月 数） （月 数）０１、 （２
）、 ６ １２．１３０１２１２
１３．１４０１２１２
１．２（１２）これらの免疫予定表は単に代表的
なものに過ぎず、宿主に最適の応答が得られるように予
定表を変えることができることは理解されよう。同様に
、初回刺激（接種）して増幅する抗原の量を変えること
が出来る。たとえば５ｙｎｔｅｘＳ Ａ Ｆ −１アジ
ュバント中約１５０μｇのｇｐｔｕを指示のように投与
し、次いで各ペプチドの典型的な量として１００μｇの
ペプチドを投与することができる。
）、 ６ １２．１３０１２１２
１３．１４０１２１２
１．２（１２）これらの免疫予定表は単に代表的
なものに過ぎず、宿主に最適の応答が得られるように予
定表を変えることができることは理解されよう。同様に
、初回刺激（接種）して増幅する抗原の量を変えること
が出来る。たとえば５ｙｎｔｅｘＳ Ａ Ｆ −１アジ
ュバント中約１５０μｇのｇｐｔｕを指示のように投与
し、次いで各ペプチドの典型的な量として１００μｇの
ペプチドを投与することができる。
最後に、関係するペプチドの相対的比率は最終の製剤中
の各ペプチドの所望の最終比率に応じて変えることがで
きる。特に、これらの比率は各ペプチドの免疫原性及び
各ペプチドの有する官能基の数に対応して調整される。
の各ペプチドの所望の最終比率に応じて変えることがで
きる。特に、これらの比率は各ペプチドの免疫原性及び
各ペプチドの有する官能基の数に対応して調整される。
その官能基は、少くともこれらのペプチドが担体分子と
共役する場合に、相補的官能基と共役反応を起す能力が
あるものである。
共役する場合に、相補的官能基と共役反応を起す能力が
あるものである。
本発明の特別な応用として、増幅ペプチドの注射を粒子
、ウィルス又は細菌の投与により代替する。それらは問
題にしているウィルスの中和エピトープをその表面上及
び／又その増殖中に表現する組換え体であって、そのよ
うにして前記のレトロウィルスに対する中和抗体を誘発
する能力を有する次のようなものである。即ちＨＢｃ抗
原粒子、ＨＢｓ抗原粒子、たとえばｌ ａｍＢ受容体の
ような表面タンパク質又は細胞質タンパク質中に中和エ
ピトープを発現する細菌、たとえばポリオウィルス−Ｈ
ＩＶキメラのようなピコルナウィルスキメラ、ポックス
ウィルス組換え体、アデノウィルス組換え体又はアデノ
ウィルスキメラ等である。
、ウィルス又は細菌の投与により代替する。それらは問
題にしているウィルスの中和エピトープをその表面上及
び／又その増殖中に表現する組換え体であって、そのよ
うにして前記のレトロウィルスに対する中和抗体を誘発
する能力を有する次のようなものである。即ちＨＢｃ抗
原粒子、ＨＢｓ抗原粒子、たとえばｌ ａｍＢ受容体の
ような表面タンパク質又は細胞質タンパク質中に中和エ
ピトープを発現する細菌、たとえばポリオウィルス−Ｈ
ＩＶキメラのようなピコルナウィルスキメラ、ポックス
ウィルス組換え体、アデノウィルス組換え体又はアデノ
ウィルスキメラ等である。
中和エピトープの提示のために選択される生ベクターに
応じて、この投与は経口投与される生ワクチン（たとえ
ば、セービンポリウイルス株若しくはヒトアデノウィル
ス、又はサルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ） 、シゲ
ラ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）若しくは他の腸内細菌の弱毒株
、又は経口投与後免疫応答を誘発する能力のある生物体
、ウィルス、酵母、細菌から構成されるキメラ）の形態
で、若しくは非経口経路により投与される生ワクチン（
たとえば組換えポックスウィルス）の形態で、又は非経
口経路による不活化ワクチン（たとえばポリオウィルス
のＭＩｈｏｍｅ７株から構成されるキメラ、又はＨＢｓ
Ａｇ若しくはＨＢｃＡｇの不活性粒子）の形態でも行う
ことができる。
応じて、この投与は経口投与される生ワクチン（たとえ
ば、セービンポリウイルス株若しくはヒトアデノウィル
ス、又はサルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ） 、シゲ
ラ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）若しくは他の腸内細菌の弱毒株
、又は経口投与後免疫応答を誘発する能力のある生物体
、ウィルス、酵母、細菌から構成されるキメラ）の形態
で、若しくは非経口経路により投与される生ワクチン（
たとえば組換えポックスウィルス）の形態で、又は非経
口経路による不活化ワクチン（たとえばポリオウィルス
のＭＩｈｏｍｅ７株から構成されるキメラ、又はＨＢｓ
Ａｇ若しくはＨＢｃＡｇの不活性粒子）の形態でも行う
ことができる。
実施例上
ＨＩＶ−Ｉ ＢＲＵ及びその分離株の糖タンパク質によ
るチンパンジーの免疫。ＫＬＨと共役するＢＲＵｅｎｖ
オリゴペプチドによる応答の増幅。
るチンパンジーの免疫。ＫＬＨと共役するＢＲＵｅｎｖ
オリゴペプチドによる応答の増幅。
２５０μｇノ精製ＨＩＶ−１ＢＲＵウィルスを０、０２
５％のホルマリンにより３０℃で４８時間、かつ０、０
２５％のβ−プロピオラクトンにより３７℃で３０分間
処理して不活化し、５％のスクアラン及び２．５％のプ
ルロニックポリマーの乳濁液中に１ｍｇ ／ ｍｌのス
レオニル−ＭＤＰを含有する５ｙｎｌｅｘアジユバント
を加え、これをニガ間隔で３回注射することにより先ず
チンパンジー３３９ （Ｆ Ｕ ＮＦＡＣＥ）を免疫
した。これらの注射に次いで７月目に最初の追加免疫を
、１年後に２度目の追加免疫を行った。
５％のホルマリンにより３０℃で４８時間、かつ０、０
２５％のβ−プロピオラクトンにより３７℃で３０分間
処理して不活化し、５％のスクアラン及び２．５％のプ
ルロニックポリマーの乳濁液中に１ｍｇ ／ ｍｌのス
レオニル−ＭＤＰを含有する５ｙｎｌｅｘアジユバント
を加え、これをニガ間隔で３回注射することにより先ず
チンパンジー３３９ （Ｆ Ｕ ＮＦＡＣＥ）を免疫
した。これらの注射に次いで７月目に最初の追加免疫を
、１年後に２度目の追加免疫を行った。
次いで動物は、ワクシニアウィルス組換え体（株ＶＶｅ
ｎｖ１１６３）を感染させたＢＨＫ−２１細胞培養の上
清から精製したＢＲＵウィルスエンベロープ糖タンパク
質（ｇｐ１６０）の注射を５回受けた。そのワクシニア
ウィルス組換え体の有するゲノムには遺伝子組換え技術
を使用して、オリゴヌクレオチド部位特異的突然変異誘
発を介してｇｐ１２０ ／ｇｐ４１切断に含まれる配列
を除去すべく修飾し、トランスメンプラン疎水域を除去
したｇｐ１６０ ｅ ｎ ｖをコード化するＨｒＶ−Ｉ
ＢＲＵの月 配列を挿入し７ｅ（Ｋｉｅｎ７等、 Ｐｒｏｌ、 Ｅｎ
ｇｉｎｅｅｒｉｎｇ２：２１９〜２２６１９８８年記載
）。精製タンパク質は５Ｙ７０ｔｅｘアジユバント存在
下に筋肉内注射ごとに１２５〜１５０μｇの量を使用し
た。糖タンパク質を調製するため、Ｖ Ｖ −１１６３
を感染させたＢＨＫ細胞の培地を硫酸アンモニウム、及
び次いでトリクロロ酢酸による沈降によって濃縮した。
ｎｖ１１６３）を感染させたＢＨＫ−２１細胞培養の上
清から精製したＢＲＵウィルスエンベロープ糖タンパク
質（ｇｐ１６０）の注射を５回受けた。そのワクシニア
ウィルス組換え体の有するゲノムには遺伝子組換え技術
を使用して、オリゴヌクレオチド部位特異的突然変異誘
発を介してｇｐ１２０ ／ｇｐ４１切断に含まれる配列
を除去すべく修飾し、トランスメンプラン疎水域を除去
したｇｐ１６０ ｅ ｎ ｖをコード化するＨｒＶ−Ｉ
ＢＲＵの月 配列を挿入し７ｅ（Ｋｉｅｎ７等、 Ｐｒｏｌ、 Ｅｎ
ｇｉｎｅｅｒｉｎｇ２：２１９〜２２６１９８８年記載
）。精製タンパク質は５Ｙ７０ｔｅｘアジユバント存在
下に筋肉内注射ごとに１２５〜１５０μｇの量を使用し
た。糖タンパク質を調製するため、Ｖ Ｖ −１１６３
を感染させたＢＨＫ細胞の培地を硫酸アンモニウム、及
び次いでトリクロロ酢酸による沈降によって濃縮した。
次いでレンチルレクチン上のアフィニティクロマトグラ
フィー、陽イオン交換樹脂上のイオン交換及び高性能液
体クロマトグラフィー（ＨＰ Ｌ Ｃ）の逐次３回操作
により糖タンパク質を精製した。このようにして得た組
換えｇｐ１６０は純度９５％である。それはＨＩＶ−１
のｇｌ１１６θの特異釣車クローン抗体及び特にＢＲＵ
分離株の主要中和エピトープに対する特異的中和抗体１
１０−４によって認識される。その上、それはＴ４リン
パ球のＣＤ４受容体に強い親和力を示す。
フィー、陽イオン交換樹脂上のイオン交換及び高性能液
体クロマトグラフィー（ＨＰ Ｌ Ｃ）の逐次３回操作
により糖タンパク質を精製した。このようにして得た組
換えｇｐ１６０は純度９５％である。それはＨＩＶ−１
のｇｌ１１６θの特異釣車クローン抗体及び特にＢＲＵ
分離株の主要中和エピトープに対する特異的中和抗体１
１０−４によって認識される。その上、それはＴ４リン
パ球のＣＤ４受容体に強い親和力を示す。
不活化ウィルスの注射に対する応答に誘発される抗体の
水準（ＥＬＩＳＡ定量： Ｄｉ！ｇｎｏｉｌｉｅｌＦｓ
ｓｌｅａｒ １！ｌ！Ｅ Ｌ Ａ Ｖ Ｉ Ａキットに
より１／２００，０００ 。
水準（ＥＬＩＳＡ定量： Ｄｉ！ｇｎｏｉｌｉｅｌＦｓ
ｓｌｅａｒ １！ｌ！Ｅ Ｌ Ａ Ｖ Ｉ Ａキットに
より１／２００，０００ 。
中和力価：免疫螢光法フォーカス形成の５０％阻害の測
定により１／４００ 、 ＣＥＭ−Ｓ Ｓ細胞中融合
細胞形成の９０％の阻害の測定によりｌ／６４）はｇｐ
１６Ｇの注射によって大して変化はしなかった。
定により１／４００ 、 ＣＥＭ−Ｓ Ｓ細胞中融合
細胞形成の９０％の阻害の測定によりｌ／６４）はｇｐ
１６Ｇの注射によって大して変化はしなかった。
動物にはＢＲＵ分離株の中和エピトープに対応シテ配列
ＹＩＩＴＲＫＳＩＲＩＱＲＧＰＧＲＡＦＶＴＩＧＫＩＧ
Ｎ ヲ有すル合成ペプチドの製剤３００μｇを与えた。
ＹＩＩＴＲＫＳＩＲＩＱＲＧＰＧＲＡＦＶＴＩＧＫＩＧ
Ｎ ヲ有すル合成ペプチドの製剤３００μｇを与えた。
その配列のチロシン残基（Ｙ）はビス（ジアゾベンジジ
ン）によりヘモシアニン（Ｋ Ｌ Ｈ）に共役し、かつ
５７ｎｊｅＩアジユバントを配合した。注射はその後３
週後に１回反覆し、次いで１９週白心２度目を行った。
ン）によりヘモシアニン（Ｋ Ｌ Ｈ）に共役し、かつ
５７ｎｊｅＩアジユバントを配合した。注射はその後３
週後に１回反覆し、次いで１９週白心２度目を行った。
これらの注射はＥＬ Ｉ ＳＡによる測定で抗体力価の
増加を生じなかった（第１図）が、３つの異なる抗体滴
定法による測定により第↓表及び第２図に見られるよう
に、中和抗体の著しい増加を生じた。
増加を生じなかった（第１図）が、３つの異なる抗体滴
定法による測定により第↓表及び第２図に見られるよう
に、中和抗体の著しい増加を生じた。
第１表
Ｃ：Ｈ９細胞の免疫蛍光の７５％阻害
次いでＬｘｒｒ７ Ａｒ１ｈｕ＋ （Ｎ ＣＩ 、 Ｆ
ｒｅｄｅｒｉｃｋ ）寄贈の力価１０４Ｔ ＣＩ Ｄ
５０／ ｍｌを示すＨＩＶ−１株の１＋１００稀釈液１
ｍｌ、即ち １００Ｔ ＣＩ Ｄ ５０を静脈台に力
価を測定し、それによってＡｒ１ｈｕ＋等はチンパンジ
ーに対するＩＤ５０を４ＴＣＩＤ５０として定量できた
。非免疫チンパンジーにこの株を４０７ ＣＩ Ｄ５０
注射することにより注射後２週間後に動物のリンパ球に
ウィルスの出現が検出され始め、続いて４週以内に抗Ｈ
ＩＶセロコンバージョンを生じたことが、２つの試料に
よって認められた。これは、Ａｒｆｈｌｌｒ等により１
９８９年（Ｊ、Ｖｉｒｏｌ、）発表された通りである。
ｒｅｄｅｒｉｃｋ ）寄贈の力価１０４Ｔ ＣＩ Ｄ
５０／ ｍｌを示すＨＩＶ−１株の１＋１００稀釈液１
ｍｌ、即ち １００Ｔ ＣＩ Ｄ ５０を静脈台に力
価を測定し、それによってＡｒ１ｈｕ＋等はチンパンジ
ーに対するＩＤ５０を４ＴＣＩＤ５０として定量できた
。非免疫チンパンジーにこの株を４０７ ＣＩ Ｄ５０
注射することにより注射後２週間後に動物のリンパ球に
ウィルスの出現が検出され始め、続いて４週以内に抗Ｈ
ＩＶセロコンバージョンを生じたことが、２つの試料に
よって認められた。これは、Ａｒｆｈｌｌｒ等により１
９８９年（Ｊ、Ｖｉｒｏｌ、）発表された通りである。
チンパンジーＦＵＮＦＡＣＥは株０４０ウィルスの １
００Ｔ ＣＩ Ｄ ５０による感染に対して完全と思わ
れる防御を実証した。なぜならば、感染注射後６か月ま
ででは、リンパ球にはウィルスが少しも検出されず（ｐ
ｏｌ及びｇａｇプローブによる遺伝子増幅による測定、
又はヒトリンパ球との共生培養及び培養上清から得られ
るペレット １００． ＯＯＯＸｇ中の逆転写酵素の検
定による測定のいずれかによる）、６ケ月目には、ＥＬ
ＩＳＡ又はウェスタンプロットによる測定では抗ＨＩＶ
既往性反応がなく （第２表）、ウェスタンプロットに
よって検出可能な抗ｎｅｆ抗体もなかった。
００Ｔ ＣＩ Ｄ ５０による感染に対して完全と思わ
れる防御を実証した。なぜならば、感染注射後６か月ま
ででは、リンパ球にはウィルスが少しも検出されず（ｐ
ｏｌ及びｇａｇプローブによる遺伝子増幅による測定、
又はヒトリンパ球との共生培養及び培養上清から得られ
るペレット １００． ＯＯＯＸｇ中の逆転写酵素の検
定による測定のいずれかによる）、６ケ月目には、ＥＬ
ＩＳＡ又はウェスタンプロットによる測定では抗ＨＩＶ
既往性反応がなく （第２表）、ウェスタンプロットに
よって検出可能な抗ｎｅｆ抗体もなかった。
第２表
実施例２
ＨＴＶ−１の組換え抗原ｅｎｖ、ｇａｇ。
ｎｅｆ、及びｖｉｆによるチンノくンジーの免疫。
ＫＬＨに共役したＢＲＵｅｎｖオリゴペプチドによる応
答の増幅。
答の増幅。
ＨＩＶ−ＩＢＲＵのｇｐ１６０ ｅ ｎ ｖを表現する
組換えワクシニアウィルス（ＶＶ ｅ ｎ ｖ１１３９
）の２Ｘ１０”ＰＦＵを３回続けてチンパンジー４３３
（ＲＯＢＥＲＴ）に接種し、次いで前もって組換えウィ
ルスＶＶｅｎｖ１１３９により試験管内で感染させ、ホ
ルムアルデヒド中で固定してあった自分のリンパ球を静
脈内投与した。その後動物は１月間隔で３回連続して筋
肉注射を受け、次いで３３週、３８週及び４０週に３回
追加免疫し、６６週に最後の追加免疫を受けた。追加免
疫は次の抗原、即ちｇｐ１６０ ｅ ｎ ｖ （前記実
施例■の記載に従って精製）並びに大腸菌（Ｅ、ｃｏｌ
ｉ）中に発現した蛋白質ｐ２８ｇ ａ ｇｚ ｐ２７
ｎ ｅ ｆ 、及びｐ２３ｖ ｉ ｆ （１９８９年８
月１８日付フランス特許出願第８９．１１０４４号の記
載に従って精製）それぞれ１２５〜１５０μｇに５７ｎ
ｊｅｘアジユバントを配合した混合物から成る。
組換えワクシニアウィルス（ＶＶ ｅ ｎ ｖ１１３９
）の２Ｘ１０”ＰＦＵを３回続けてチンパンジー４３３
（ＲＯＢＥＲＴ）に接種し、次いで前もって組換えウィ
ルスＶＶｅｎｖ１１３９により試験管内で感染させ、ホ
ルムアルデヒド中で固定してあった自分のリンパ球を静
脈内投与した。その後動物は１月間隔で３回連続して筋
肉注射を受け、次いで３３週、３８週及び４０週に３回
追加免疫し、６６週に最後の追加免疫を受けた。追加免
疫は次の抗原、即ちｇｐ１６０ ｅ ｎ ｖ （前記実
施例■の記載に従って精製）並びに大腸菌（Ｅ、ｃｏｌ
ｉ）中に発現した蛋白質ｐ２８ｇ ａ ｇｚ ｐ２７
ｎ ｅ ｆ 、及びｐ２３ｖ ｉ ｆ （１９８９年８
月１８日付フランス特許出願第８９．１１０４４号の記
載に従って精製）それぞれ１２５〜１５０μｇに５７ｎ
ｊｅｘアジユバントを配合した混合物から成る。
結局ＲＯＢＥＲＴは前記実施例でＦＵＮＦＡＣＥで行っ
たのと同じ接種計画により、ＫＬＨと共役し５７ｎｌｅ
ｘアジユバントを配合した同じＢＲＵペプチドを受容し
た。
たのと同じ接種計画により、ＫＬＨと共役し５７ｎｌｅ
ｘアジユバントを配合した同じＢＲＵペプチドを受容し
た。
ペプチド−ＫＬ）Ｉ複合体の注射はＥＬ Ｉ ＳＡによ
る測定では抗体レベルに何も増加を生じなかった（第３
図）が、第２図中と第３表中に見られるように、中和抗
体には著しい増加を生じた。中和抗体は３つの異なる方
法によっても測定した。
る測定では抗体レベルに何も増加を生じなかった（第３
図）が、第２図中と第３表中に見られるように、中和抗
体には著しい増加を生じた。中和抗体は３つの異なる方
法によっても測定した。
第３表
次いでＲＯＢＥＲＴにはＮＣＩ提供のＨＩＶ−ｌウィル
スの前記実施例と同じ株０４０を１０ＧＴＣＩＤ５０用
いて静脈接種によりＦＵＮＦＡＣＥと平行して感染を行
った。感染後６か月で動物のリンパ球中にウィルスのな
いこと及びＰＣＨの陰性から判断し、かつ感染後６か月
日にＥＬＩＳＡ又はウェスタンプロットによる測定によ
り抗ｐ２５ｇ ａ ｇ及び抗ｐ２７ｎ ｅ （抗体カナ
イコト、並びに既往性抗ＨＩＶ反応がないことにより判
断し、この場合にもまた感染に対する完全な防御が得ら
れたと見られる。第４表は抗Ｅ９１６Ｇ及び抗ＢＲＵ中
和エピトープに対する既往性効果が同様に存在しないこ
とを示す。
スの前記実施例と同じ株０４０を１０ＧＴＣＩＤ５０用
いて静脈接種によりＦＵＮＦＡＣＥと平行して感染を行
った。感染後６か月で動物のリンパ球中にウィルスのな
いこと及びＰＣＨの陰性から判断し、かつ感染後６か月
日にＥＬＩＳＡ又はウェスタンプロットによる測定によ
り抗ｐ２５ｇ ａ ｇ及び抗ｐ２７ｎ ｅ （抗体カナ
イコト、並びに既往性抗ＨＩＶ反応がないことにより判
断し、この場合にもまた感染に対する完全な防御が得ら
れたと見られる。第４表は抗Ｅ９１６Ｇ及び抗ＢＲＵ中
和エピトープに対する既往性効果が同様に存在しないこ
とを示す。
第４表
実施例３
ＨＩＶ−１抗原のｇｐ１６０ ｎ ｅ ｗ及びｐ１８ｇ
ａ ｇによるチンパンジーの免疫。担体分子と共役し
ていないＨＩＶ−１ｅｎｖペプチドによる増幅。
ａ ｇによるチンパンジーの免疫。担体分子と共役し
ていないＨＩＶ−１ｅｎｖペプチドによる増幅。
この実験には３頭のチンパンジーを使用した。そのチン
パンジーはＪ ＯＪ ＯＴ ＯＯ（４９９１１ＲＡ （
１５１）及びＨＥ Ｎ ＲＹ ＩＩ （５Ｎ）である。
パンジーはＪ ＯＪ ＯＴ ＯＯ（４９９１１ＲＡ （
１５１）及びＨＥ Ｎ ＲＹ ＩＩ （５Ｎ）である。
最初のＪ ＯＪ ０ＴＯＯは、前記のようにして精製し
て５ｙｎｆｅｚアジユバントと混合したｇｐ１６［１ｅ
ｎｖ及びｐＨ１ｇ ａ ｇの １２０〜１５０ ｔｔ
ｇの注射を、１月置きに３回受けた。この初めの系列の
注射についで同じ抗原の３回の追加免疫を３３週、３８
週及び４０週に行い、１４月に最終の追加免疫をした。
て５ｙｎｆｅｚアジユバントと混合したｇｐ１６［１ｅ
ｎｖ及びｐＨ１ｇ ａ ｇの １２０〜１５０ ｔｔ
ｇの注射を、１月置きに３回受けた。この初めの系列の
注射についで同じ抗原の３回の追加免疫を３３週、３８
週及び４０週に行い、１４月に最終の追加免疫をした。
これらの注射の結果、初めの３回の注射後直ちにウェス
タンプロット及びＥＬ Ｉ ＳＡにより検出可能な高水
準の抗体の出現が生じたけれども、中和抗体の水準が比
較的低かったことは後記の通りである。
タンプロット及びＥＬ Ｉ ＳＡにより検出可能な高水
準の抗体の出現が生じたけれども、中和抗体の水準が比
較的低かったことは後記の通りである。
二番目のチンパンジーＩＲＡはＨＩＶ−ＩＢＲＵのｇｐ
１６０ ｅｎＶ％ ｐ５５ｇａｇ、 ｐ２７ｎｅ
ｆｓ及びｐ２３ｖ ｉ ｆをそれぞれ発現する４つの組
換えワクシニアウィルス株の各１０８ＰＦＵにより免疫
をした。これらの皮肉経路により与えた接種は、何ら中
和抗体の出現を生じなかったが、かろうじて有意な水準
（≦ｌ：２００ ）の抗体がウェスタンプロット又はＥ
ＬＩＳＡにより検出できた。次いでチンパンジーＩＲＡ
を２年間休養させた。
１６０ ｅｎＶ％ ｐ５５ｇａｇ、 ｐ２７ｎｅ
ｆｓ及びｐ２３ｖ ｉ ｆをそれぞれ発現する４つの組
換えワクシニアウィルス株の各１０８ＰＦＵにより免疫
をした。これらの皮肉経路により与えた接種は、何ら中
和抗体の出現を生じなかったが、かろうじて有意な水準
（≦ｌ：２００ ）の抗体がウェスタンプロット又はＥ
ＬＩＳＡにより検出できた。次いでチンパンジーＩＲＡ
を２年間休養させた。
三番目のチンパンジーＨＥＮＲＹｎは実験日の以前はＨ
ＩＶ又はＳＩＶ抗原との接触はなかった。
ＩＶ又はＳＩＶ抗原との接触はなかった。
当日前記３頭の動物に２１の合成ペプチドを組成とする
反応混液を使用して筋肉内注射した。そのペプチドはＭ
７ｅｒｓ等（１９８９年）の発表したＨＩＶｌの主要中
和エピトープ（ループＶ３）の２１の配列に対応し、ペ
プチド当り５０μｇの量であって、５ｙＩＩｅｘアジユ
バントを存在させた。それぞれのペプチドはＮ−末端の
位置にシスティンとＣ−末端にもう１つのシスティンを
有し、従って所定の分離株の完全なＶ−３ループ（ＢＲ
Ｕ分離株のアミノ酸２９６〜３３１及びＭ７ｅ＋ｓ等（
１９８９年）の整列による対応アミノ酸）を表現した。
反応混液を使用して筋肉内注射した。そのペプチドはＭ
７ｅｒｓ等（１９８９年）の発表したＨＩＶｌの主要中
和エピトープ（ループＶ３）の２１の配列に対応し、ペ
プチド当り５０μｇの量であって、５ｙＩＩｅｘアジユ
バントを存在させた。それぞれのペプチドはＮ−末端の
位置にシスティンとＣ−末端にもう１つのシスティンを
有し、従って所定の分離株の完全なＶ−３ループ（ＢＲ
Ｕ分離株のアミノ酸２９６〜３３１及びＭ７ｅ＋ｓ等（
１９８９年）の整列による対応アミノ酸）を表現した。
第１回の注射後１及び２月でそれぞれ同じ混合物により
動物に再注射した。ペプチドの混合物（１注射当り １
．０５■）によるこの免疫に続いてＪ ＯＪ ０ＴＯＯ
ではＢＲＵ分離株のｇｐｌｆｉ（ｌ及びその主要中和エ
ピトープに対する有意の既往性反応があった。測定はＥ
Ｌ Ｉ ＳＡにより、かつ精製したｇｐｌｆ＋Ｑ Ｂ
ＲＵ又ＢＲＵペプチドを抗原として使用した（第５表及
び第６表）。
動物に再注射した。ペプチドの混合物（１注射当り １
．０５■）によるこの免疫に続いてＪ ＯＪ ０ＴＯＯ
ではＢＲＵ分離株のｇｐｌｆｉ（ｌ及びその主要中和エ
ピトープに対する有意の既往性反応があった。測定はＥ
Ｌ Ｉ ＳＡにより、かつ精製したｇｐｌｆ＋Ｑ Ｂ
ＲＵ又ＢＲＵペプチドを抗原として使用した（第５表及
び第６表）。
第５表
第６表
抗中和エピトープ抗体の誘発（ＥＬＩＳＡ 抗ＢＲＵ
力価）ＩＲＡについて得た力価は非常に低いままであり
、ＨＥＮＲＹｎについては完全に陰性であった。
力価）ＩＲＡについて得た力価は非常に低いままであり
、ＨＥＮＲＹｎについては完全に陰性であった。
これらの結果はｇｐ１６Ｇによる前免疫から生じる免疫
応答に対する接種又は初回抗原刺激効果（ｐ＋ｉｍｉｎ
ｇ ｅｆｆｅｃｔ）を明瞭に説明する。
応答に対する接種又は初回抗原刺激効果（ｐ＋ｉｍｉｎ
ｇ ｅｆｆｅｃｔ）を明瞭に説明する。
しかしながら、ＪＯＪＯＴＯＯについての抗ペプチド及
び抗ｇｐ１６Ｄ力価の増加は抗ＨＩ Ｖ−Ｅ ＬＩＳＡ
力価の目立った増加を伴わなかったことが、市販の診断
薬キット（ＤｉＢｎｏｓ）ｉｃｓ Ｐａ＋ｌｅｕ＋社Ｅ
ＬＡＶ１．Ａ）を使用することにより知ることができた
。（第７表）。
び抗ｇｐ１６Ｄ力価の増加は抗ＨＩ Ｖ−Ｅ ＬＩＳＡ
力価の目立った増加を伴わなかったことが、市販の診断
薬キット（ＤｉＢｎｏｓ）ｉｃｓ Ｐａ＋ｌｅｕ＋社Ｅ
ＬＡＶ１．Ａ）を使用することにより知ることができた
。（第７表）。
第７表
対照的に、）ＩＩＶ−１の２１分離株の中和エピトープ
に対応する合成ペプチドの混合物の注射は、ＢＲＵ分離
株を中和する抗体の水準に非常に明白な増加を生じたこ
とが第８表及び第４図で見られる。この増加はＪ ＯＪ
０ＴＯＯでのみ認められたが、ＩＲＡにもＨＥＮＲＹ
ＩＩにも見られず、ｇｐｔａｏによる前免疫の初回抗原
刺激効果の特異性を例証することは注目に値する（第４
図）。
に対応する合成ペプチドの混合物の注射は、ＢＲＵ分離
株を中和する抗体の水準に非常に明白な増加を生じたこ
とが第８表及び第４図で見られる。この増加はＪ ＯＪ
０ＴＯＯでのみ認められたが、ＩＲＡにもＨＥＮＲＹ
ＩＩにも見られず、ｇｐｔａｏによる前免疫の初回抗原
刺激効果の特異性を例証することは注目に値する（第４
図）。
その上、ＪＯＪＯＴＯＯの中和抗体応答は、第５図で認
めることができるようにＢＲＵ分離株について特異的で
あって、その血清はＳＦ２分離株（ＡＲＶ−２）を中和
しないが、ＢＲＵ分離株（ＨＴＬＶ−３＝ＬＡＶ１）だ
けは中和する。
めることができるようにＢＲＵ分離株について特異的で
あって、その血清はＳＦ２分離株（ＡＲＶ−２）を中和
しないが、ＢＲＵ分離株（ＨＴＬＶ−３＝ＬＡＶ１）だ
けは中和する。
第１図はチンパンジーＦ Ｕ Ｎ Ｆ Ａ ＣＥ （Ｃ
−３３９）及び対照（Ｃ−５１９）についてＥ Ｌ Ｉ
Ｓ Ａ （ＧｅｎｅｔｉｃＳ７ｒｔｅｍｓ社キット）
により測定した抗ＨＩＶ抗体水準を示す。結果を血清Ｅ
Ｌ Ｉ ＳＡ力価（１：陽性応答を生じる希釈度）対時
間として示す。図中の時間０は不活化ＨＩＶによる第１
回追加免疫の日に対応する。動物への感染は７０週目に
行った（矢印）。 第２図はＫＬＨ−ＢＲＵペプチド複合体の注射（矢印）
に対する応答としてチンパンジーＦＵＮＦＡＣＥ （黒
丸）及びＲＯＢＥＲＴ （白ヌキ丸）での中和抗体水準
を示す。動物は［１，３及び１９週（矢印）に接種し、
２４週に感染した。 第３図はチンパンジーＲＯＢ Ｅ ＲＴ ｆｃ−４３３
）についてＥＬＩＳＡによって測定した抗ＨＩＶ抗体水
準を示す。結果を血清ＥＬ Ｉ ＳＡ力価（ｌ・陽性応
答を生じる希釈度）対時間として示す。時間０は第１回
抗原注射（ｇｐ１６０ ｅ ｎ Ｖ） ｐ２７ｎ ｅ
ｆ 。 ｐ２３ｖ ｉ ｆ及びｐ１８ｇａｇ）の日に対応する。 動物への感染を８４週目（矢印）に行った。 第４図は遊離ペプチドの第３回接種後、時間０（図）並
びに２週（ロ）及び５週（◆）でのチンパンジーＪＯＪ
ＯＴＯＯ（４９９） ＩＲＡ（１５１）及びＨＥ
Ｎ ＲＹ ＩＩ （５３１）についてのＨＩ Ｖ−ＩＢ
ＲＵの中和を血清希釈度に対して示す。 第５図は時間０（田）及び遊離ペプチドの第３回接種後
（◆）におけるチンパンジーＪ ＯＪ ＯＴ ＯＯ（Ｃ
−４９９）について血清希釈度に対するＨ ＴＶ−Ｉ
ＢＲＵ （点線）及びＨＩＶ−１、ＡＲＶ−２（実線）
の中和を示す。
−３３９）及び対照（Ｃ−５１９）についてＥ Ｌ Ｉ
Ｓ Ａ （ＧｅｎｅｔｉｃＳ７ｒｔｅｍｓ社キット）
により測定した抗ＨＩＶ抗体水準を示す。結果を血清Ｅ
Ｌ Ｉ ＳＡ力価（１：陽性応答を生じる希釈度）対時
間として示す。図中の時間０は不活化ＨＩＶによる第１
回追加免疫の日に対応する。動物への感染は７０週目に
行った（矢印）。 第２図はＫＬＨ−ＢＲＵペプチド複合体の注射（矢印）
に対する応答としてチンパンジーＦＵＮＦＡＣＥ （黒
丸）及びＲＯＢＥＲＴ （白ヌキ丸）での中和抗体水準
を示す。動物は［１，３及び１９週（矢印）に接種し、
２４週に感染した。 第３図はチンパンジーＲＯＢ Ｅ ＲＴ ｆｃ−４３３
）についてＥＬＩＳＡによって測定した抗ＨＩＶ抗体水
準を示す。結果を血清ＥＬ Ｉ ＳＡ力価（ｌ・陽性応
答を生じる希釈度）対時間として示す。時間０は第１回
抗原注射（ｇｐ１６０ ｅ ｎ Ｖ） ｐ２７ｎ ｅ
ｆ 。 ｐ２３ｖ ｉ ｆ及びｐ１８ｇａｇ）の日に対応する。 動物への感染を８４週目（矢印）に行った。 第４図は遊離ペプチドの第３回接種後、時間０（図）並
びに２週（ロ）及び５週（◆）でのチンパンジーＪＯＪ
ＯＴＯＯ（４９９） ＩＲＡ（１５１）及びＨＥ
Ｎ ＲＹ ＩＩ （５３１）についてのＨＩ Ｖ−ＩＢ
ＲＵの中和を血清希釈度に対して示す。 第５図は時間０（田）及び遊離ペプチドの第３回接種後
（◆）におけるチンパンジーＪ ＯＪ ＯＴ ＯＯ（Ｃ
−４９９）について血清希釈度に対するＨ ＴＶ−Ｉ
ＢＲＵ （点線）及びＨＩＶ−１、ＡＲＶ−２（実線）
の中和を示す。
Claims (23)
- （１）宿主中のウィルスのエンベロープ糖タンパク質の
免疫原性を増強する方法であって、その方法がウィルス
の少くとも１つのエンベロープ糖タンパク質、及び該エ
ンベロープ糖タンパク質のアミノ酸配列から誘導される
少くとも１つのペプチドを宿主に投与することから成り
、そのペプチドが少くとも１つのウィルス中和エピトー
プを含み、そのエンベロープ糖タンパク質及びペプチド
を宿主の中和抗体を誘発するのに充分な量で投与するこ
とによる前記方法。 - （２）ウィルスをＨＩＶ、ＳＩＶ、ＨＴＬＶ−１、ＨＴ
ＬＶ−２、ＦＩＶ及びＦｅＬＶから成るグループから選
択する、請求項１に記載の方法。 - （３）ウィルスのエンベロープ糖タンパク質の免疫原性
を増強する方法であって、その方法が予防接種を施すの
に充分な量のウィルスの少くとも１つのエンベロープ糖
タンパク質、及び前記エンベロープ糖タンパク質のアミ
ノ酸配列から誘導される少くとも１つのペプチドであっ
てウィルスの前記糖タンパク質の少くとも１つのウィル
ス中和エピトープを含むペプチドを宿主に投与すること
から成り、かつ宿主の中和抗体の誘発を増強するのに充
分な量のそのペプチドを宿主に投与して、ウィルスに対
する持続性免疫を宿主に付与する前記方法。 - （４）前記エンベロープ糖タンパク質及び前記ペプチド
を前記宿主に同時に投与する、請求項３に記載の方法。 - （５）前記エンベロープ糖タンパク質を前記宿主に投与
し、次いで前記ペプチドをその宿主に投与する、請求項
３に記載の方法。 - （６）前記エンベロープ糖タンパク質がウィルスのｇｐ
１６０である、請求項３に記載の方法。 - （７）少くとも１つの前記ペプチドが前記ペプチドの混
合物から成り、そのペプチドを担体分子と共役しない遊
離状態で宿主に投与する、請求項３に記載の方法。 - （８）ペプチドが担体分子に共役している、請求項７に
記載の方法。 - （９）担体がリポペプチドである、請求項７に記載の方
法。 - （１０）エンベロープ糖タンパク質がＨＩＶ−１及びＨ
ＩＶ−２のエンベロープ糖タンパク質の混合物から成り
、かつ前記ペプチドがＨＩＶ−１中和エピトープを有す
る少くとも１つのペプチド及びＨＩＶ−２中和エピトー
プを有する少くとも１つのペプチドを含有する混合物か
ら成る、請求項３に記載の方法。 - （１１）エンベロープ糖タンパク質及びペプチドをアジ
ュバントと併用して宿主に投与する、請求項３に記載の
方法。 - （１２）アジュバントが脂質溶媒中のムラミルジペプチ
ド又は不完全フロイントアジュバントである、請求項１
１に記載の方法。 - （１３）エンベロープ糖タンパク質を宿主に経口投与す
る、請求項３に記載の方法。 - （１４）エンベロープ糖タンパク質を非経口的に宿主に
投与する、請求項３に記載の方法。 - （１５）ペプチドを宿主に経口投与する、請求項３に記
載の方法。 - （１６）ペプチドを宿主に皮内投与する、請求項３に記
載の方法。 - （１７）前記エンベロープ糖タンパク質が異なるＨＩＶ
分離株（血清型）から由来のｇｐ１６０糖タンパク質混
合物であり、かつ少くとも１つの前記ペプチドが対応す
る中和エピトープの混合物である、請求項３に記載の方
法。 - （１８）前記エンベロープ糖タンパク質が異なるＨＩＶ
分離株（血清型）から由来の糖タンパク質ｇｐ１２０の
混合物であり、かつ少くとも１つの前記ペプチドが対応
する中和エピトープの混合物である、請求項３に記載の
方法。 - （１９）前記エンベロープ糖タンパク質がＨＩＶのｇｐ
１２０である、請求項３に記載の方法。 - （２０）ウィルスによる感染に対し宿主に予防接種する
ための組成物であって、その組成物が （Ａ）エンベロープ糖タンパク質を投与する宿主に予防
接種を施すのに充分な量の少くとも１つのエンベロープ
糖タンパク質、及び （Ｂ）前記エンベロープ糖タンパク質のアミノ酸配列か
ら誘導される少くとも１つのペプチドであって、そのペ
プチドが前記糖タンパク質の少くとも１つのウィルス中
和エピトープを含むペプチドから成り、かつその組成物
が宿主の持続性中和抗体の誘発を増強するのに充分な量
の前記ペプチドを含有する前記組成物。 - （２１）少くとも１つの前記ペプチドがＨＩＶの糖タン
パク質のペプチドの混合物から成る、請求項１７に記載
の組成物。 - （２２）ペプチドがその担体に結合している、請求項１
８に記載の組成物。 - （２３）組成物が宿主の予防接種を増強するのに充分な
量のアジュバントを含有する、請求項１９に記載の組成
物。
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