JPH03275695A

JPH03275695A - 活性カルボキシル基を持つシアル酸関連化合物

Info

Publication number: JPH03275695A
Application number: JP7628090A
Authority: JP
Inventors: Shoji Yoshimura; 吉村　昌治; Koki Watanabe; 幸喜渡辺; Makoto Tanaka; 誠田中
Original assignee: Mect Corp
Current assignee: Mect Corp
Priority date: 1990-03-26
Filing date: 1990-03-26
Publication date: 1991-12-06

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、新規なシアル酸誘導体に関し、さらに詳しく
は、分子中に活性カルボキシル基を有するシアル酸誘導
体、このシアル酸誘導体とアミノ化合物とが結合したシ
アル酸誘導体、およびこのシアル酸誘導体の合成に用い
る中間体化合物に関する。

〔従来の技術〕

Ｎ−アセチルノイラミン酸を始めとするノイラミン酸誘
導体、すなわちシアル酸誘導体は、動物界あるいはいく
つかの細菌類などの細胞表面にシアロ複合体（糖蛋白質
、糖脂質、オリゴ糖および多糖）として広く存在するこ
とが知られている。

上記シアル酸誘導体は、近年、神経機能、癌、炎症、免
疫、ウィルス感染、分化、ホルモンレセプターなど医学
ならびに薬学分野において重要視されている化合物であ
り、細胞表面に局在する特異な活性分子として注目され
つつある。

〔発明が解決しようとする課題〕

しかしながら、前記シアロ複合体においてシアル酸誘導
体が演する役割については、従来より種々の説が唱えら
れてはいるものの、未だ不明の点も多く、いずれも推測
の域を出るに至っていないのが現状である。

ところで、ペプチド性医薬品の欠点の１つに、生体内で
の半減期が短いことがある。糖を導入することにより生
体内半減期を延ばせることが知られている。そこで本発
明者らは、ペプチド性医薬品に糖を導入するためのシア
ル酸活性体について種々検討してきた。その結果、顕著
な生理活性を示すシアル酸誘導体の合成に成功しく特開
昭６３−２６４４９３号）、さらに、顕著を生理活性を
示す新たなシアル酸誘導体を見出し特許出願した（特願
昭６３−３０１９５５号）。このシアル酸誘導体は、各
種アミノ化合物に対して高い反応性を示し、各種生理活
性物質の生物学的半減期延長剤として使用できるもので
ある。

さらに上記シアル酸誘導体と、アミノ酸、アミン類を始
めとする各種アミノ化合物とがアミド結合を介して結合
されたシアル酸誘導体も提供した。

ところが、上記シアル酸誘導体は、合成の過程で副反応
が生じてしまい、高収率で目的物を得ることが容易でな
かった。

そこで本発明の目的は、合成の過程で副反応を生じるこ
となしに、得られる新規な活性カルボキシル基を有する
シアル酸誘導体を提供することにある。

本発明の別の目的は、上記新規なシアル酸誘導体合成用
の中間体及び上記新規なシアル酸誘導体にアミノ化合物
を導入した新規化合物を提供することにある。

〔課題を解決するための手段〕

本発明のシアル酸誘導体は、一般式ＣＩ）ＲＩ（式中、Ｒ１はアセチル基を示し、Ｒ１は低級アルキル
基を示し、Ｒ３はＣ’、　Ｈ、、ＣｓＨ＊またはＣ２Ｈ
！を示し、Ｒ４は水酸基、ヒドラジノ基、アジド基、活
性エステルのアルコール部から水素を除いた残基アルキ
ルオキシカルボニルオキシ基またはアリールオキシカル
ボニルオキシ基を示し、ＡＣはアセチル基を示し、ｐｈ
はフェニル基を示し、Ｘは酸素を示す）で示される活性
カルボキシル基を持っシアル酸誘導体である。

上記シアル酸誘導体において、Ｒ１で示される低級アル
キル基は、具体的には炭素数１〜６のアルキル基であり
、メチル、エチル、ｎ−プロピル、１ｓｏ−プロピル、
ｎ−ブチル、１ｓｏ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−
ペンチル、ｎ−ヘキシル等を例示できる。

Ｒ４で示される活性エステルのアルコール部から水素を
除いた残基は、例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド
、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２，３−ジカル
ボキシイミド、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド、Ｎ−ヒド
ロキシベンゾトリアゾール、ｐ−ニトロフェノール、２
．４−ジニトロフェノール、２，４．５−トリクロロフ
ェノール、ペンタフルオロフェノール及びペンタクロロ
フェノールを挙げることができる。

また、Ｒ’で示されるアルキルオキシカルボニルオキシ
基としては、アルキル基が例えば、メチル基、エチル基
、ｎ−ブチル基及びイソブチル基であるものを挙げられ
る。又、アリールオキシカルボニルオキシ基のアリール
基としては、フェニル基及びベンジル基を例示すること
ができる。

尚、フェニル基の結合位置は、好まし゛くは１．４−ジ
置換である。

上記活性カルボキシル基を持っシアル酸誘導体〔■〕は
、下記の式（式中、Ａｃはアセチル基（ＣＨａＣＯ−）を表す、以
下同様）で示されるＮ−アセチルノイラミン酸を出発物
質として、下記一般式（ＩＩ）で示される、本発明のシ
アル酸誘導体を経由して製造することができる。

（式中、Ｒ２は水素または低級アルキル基を示し、Ａｃ
はアセチル基を示し、Ｐｈはフェニル基を示し、Ｘは酸
素を示し、ＺはＮＨＣＨＯ又ハＮＨＣ）１．を示す）尚
、フェニル基の結合位置は、好ましくはｌ。

４−ジ置換である。

以下、スキーム１に従って説明する。

スキーム１０Ｈ υｎ（Ａ）（Ｂ）まず、Ｎ−アセチルノイラミン酸をイオン交換樹脂ダウ
エックス（Ｄｏｗｅｘ）　５０　Ｗ　（Ｈ”　）の存在
下でメタノールと反応させると、メチルエステル体（Ａ
）が高収率で得られる。次に、このメチルエステル体（
Ａ）を過量の塩化アセチル（ＣＨｓＣＯＣｊ！　）と反
応させた後、冷却下でエタノールと反応させると、クロ
ル体（Ｂ）が高収率で得られる。次に、得られたクロル
体（Ｂ）を無水ジメチルホルムアミド中でｐ−ニトロフ
ェノールの無水ナトリウム塩と反応させると、ｐ−ニト
ロフェニルグリコシ）’　（Ｃ）が得られる。このｐ−
ニトロフェニルグリコシド（Ｃ）は、”Ｃａｒｂｏｈｙ
ｄｒａｔｅ　Ｒｅ５ｅｒｃｈ、１６２（１９８７）　２
０４−２９７”に記載された既知化合物であり、その合
成法の詳細は、下記の参考例１で詳述する。

次に、上記ｐ−ニトロフェニルグリコシドをメタノール
中、５％Ｐｄ　／Ｃの存在下で水素添加すると、ｐ−ア
ミノフェニルグリコシド（Ｄ）が得られる（参考例２）
。

ｐ−アミノフェニルグリコシド（Ｄ）は、例えば無水テ
トラヒドロフラン（ＴＨＦ）中で酢酸ギ酸無水物と反応
させることにより本発明のＮ−ホルミル体（１）（一般
式（Ｉ［）中のｚがＮＨＣＩ（Ｏテある）を得ることが
できる。この反応は例えば−３０〜−１０℃で行うこと
ができる。

Ｎ−ホルミル体（１）は、例えば無水ＴＨＦ中でボラン
・メチルスルフィドコンプレックスで還元することによ
り本発明のＮ−メチル体（２）（一般式（ＩＩＩ）中の
２がＮＨＣＨＩである）を得ることができる。

次に、Ｎ−メチル体（２）を無水テトラヒドロフラン中
で小過量の無水コハク酸と反応させると、アミドカルボ
ン酸（３）が得られる。アミドカルボン酸（３）は、一
般式〔！〕中のＲ４が水酸基である（Ｒ’　＝アセチル
基、Ｒ２＝メチル基、ＲｊＩＣオＨ，）化合物である。

Ｒ３がＣ３Ｈ５の化合物を得るには、無水コハク酸の代
りに無水グルタル酸を用い、又Ｒ３がＣＪ！の化合物を
得るには無水コハク酸の代りに無水マレイン酸を用いれ
ば良い。

Ｎ−メチル体（２）以降の合成スキームをスキーム２に
示す。

スキーム２＋７１又は（４）呻（８）（４）→（９） α・又は（４）→αυ （４）呻０（４）→（至）（７）又は（４）吟０（７）呻（至）（７）呻００→ｑ４Ｒ４厘ＮＨＣｔｌｔＣＯＯＣＨ，＊瓢ｌＲ４冨ＮＨＣｌ
１．Ｃ０ＯＨ鵬冨！Ｒ４ｍベスタチン残基−−１１１’−ＦＴＳ残基　　１−ｍｌ１’−タフトシン残基１電１Ｒ４１１１１酸化型グルタチオン残基１雪２Ｒ’＝ＮＨ
ＮＨ＋　　　　　ｍ璽１１４、、インスリン残基１１１１１１〜３１３還元型グ
ルタチオン残基ｍ−１（７）：　Ｒ’Ｗ−ＯＣＯＯ−ｉｓｏ−Ｂｕアミドカル
ボン酸（３）を原料として、例えばＮ−オキシコハク酸
イミドエステル、ｐ−ニトロフェニルエステル等を用い
る活性エステル法により、本発明の化合物（１）のうち
Ｒ４が活性エステルのアルコール部から水素を除いた残
基を有する化合物〔例えば化合物（４）、（５）、（６
）〕を得ることができる。

化合物（４）は、アミドカルボン酸（３）を、例えば無
水アセトニトリル中、ＤＳＣ（Ｎ、Ｎ’−ジスクシンイ
ミジルカーボネート）とトリエチルアミンの存在下反応
させて得ることができる。

化合物（５）は、アミドカルボン酸（３）を、例えば無
水ジメチルホルムアミド中、ｐ−ニトロフェノールと縮
合剤として例えばＷＳＣ（１−エチル−３−（３−ジメ
チルアミノプロピル）−カルボジイミド）の存在下で反
応させることにより得られる。

化合物（６）は、アミドカルボン酸（３）を、例えば無
水アセ°トニトリル中、（ｐ−ヒドロキシフェニル）ジ
メチルスルホニウムメチルスルフェートとＤＣＣの存在
下反応させることにより得られる。

本発明の特徴の１つは、上記活性エステル法において、
アミドカルボン酸が分子内閉環を生じず、その結果、目
的物である本発明の化合物（１）を高収率で得られるこ
とである。

又、一般式（１）中のＲ４がアルキルオキシカルボニル
オキシ基及びアリールオキシカルボニルオキシ基である
化合物は、アミドカルボン酸（３）とクロル炭酸アルキ
ル又はクロル炭酸アリールとを塩基の存在下反応させる
ことにより得られる。

例えばＲ４が一０ＣＯＯ−ｉｓｏ−ブチルである化合物
（７）は、クロル炭酸−１ｓｏ−ブチルとアミドカルボ
ン酸（３）とを反応させることにより得られる。

又、一般式（１）のＲ４がアジド基である化合物はスク
シンアニリド酸ヒドラジドａωと塩酸酸性下、亜硝酸ア
ルキルエステル、例えば亜硝酸イソペンチル、イソアミ
ル、ｔ−ブチル、ｎ−ブチル、を反応させることにより
得られる。

次に、下記＝般式（ＩＩＩ）で表わされるシアル酸誘導
体について説明する。

（式中、Ｒ１はアセチル基を示し、Ｒ１は低級アルキル
基を示し、ＲｓはＣＩＨ，、ＣＩＨ＠まタハＣＩＨ２を
示し、Ａｃはアセチル基を示し、ｍは１〜６０の整数で
あり、ｐｈはフェニル基を示し、Ｘは酸素を示し、Ｙは
アミノ化合物からｍ個のアミノ基を除いた残基を示す）式中、Ｒ１，Ｒ１及びＲ１は式（１）と同義である。Ｙ
のアミノ化合物としては、低級アミン、アミノ酸及びペ
プチドを例示でき、具体的にはグリシンメチルエステル
、グリシン、ベスタチン、ＦＴＳ　（血清胸腺因子）、
酸化型グルタチオン、還元型グルタチオン、ヒドラジン
、インスリン、タフトシン等を例示できる。

このシアル酸誘導体（ＩＩ）は、前記活性カルボキシル
基を持つシアル酸誘導体（１）とアミノ化合物とから、
活性エステル法、混合酸無水物法及び酸アジ１法等を用
いて製造することができる。

例えばアミド体（８）は、前記化合物（４）を、例えば
無水アセトニトリル中でグリシンメチルエステルと反応
させることにより得られる。

これとは別に、化合物（４）と、グリシン、ペンタチン
、ＦＴＳ、酸化型グルタチン及びタフトシンとを、それ
ぞれ反応させることにより、アミド体（９）、（１１）
、（１２）、（１３）、（１６）が得られる。

この反応は、例えばアセトニトリル／水（１：　ｌ）の
溶媒中で行われる。

酸化型グルタチオン誘導体（１３）は、例えばリン酸等
の緩衝液（ｐＨ＝　７．０　）中、ジチオスレイトール
（ＤＴＴ）で還元することにより、還元型グルタチオン
誘導体（１４）を得ることができる。

一方、混合酸無水物法では、まず、前記アミドカルボン
酸（３）を無水テトラヒドロフラン中、イソブチルクロ
ロホルメートと反応させて混合酸無水物として、次いで
、この混合酸無水物をヒドラジンと反応させると、本発
明のアミド体（１０）が得られる。又、ヒドラジンの代
りにインスリンを用いるとアミドカルボン酸−インスリ
ン付加物（１５）を得ることができる。アミド体（ｌＯ
）は、塩酸酸性下に亜硝酸イソペンチルと反応させてア
ジド体とし、ベスタチンと反応させることによりアミド
体（１１）を得ることができる。

この混合酸無水物法によれば、前記アミドカルボン酸の
脱アセチル体からも、同様の反応条件でアミド体が得ら
れる。尚、一般式（Ｉ）及び［ｎＩ）中、Ｒ１が水素で
ある脱アセチル体は、上記アミドカルボン酸化合物のア
セチル体を無水メタノール中でナトリウムメトキシドと
反応させた後、ダウエックス５ｏｗ　（Ｈ”　）で酸性
化または中和することにより得られる。

又、酸アジド法によれば、前記酸ヒドラジド（１０１の
脱アセチル体、或いは脱アセチル・脱メチル体から、同
様のアジド化反応条件で、アミド体が得られる。

尚、一般式（Ｉ）中、Ｒ１が水素であり、Ｒ１がメチル
基であり、Ｒ４がＮＨＮＨＩである脱アセチル体、及び
一般式（ＩＩ）中、Ｒ１が水素であり、Ｒ２がメチル基
であり、Ｒ４がＮ１（ＮＯ３である脱アセチル体は、前
記酸ヒドラジドαωを無水メタノール中でナトリウムメ
トキシドと反応させた後、酢酸で酸性化するか、又は中
和することにより得られる。

又、一般式（Ｉ）中、Ｒ１及びＲ２がそれぞれ水素であ
り、Ｒ４がＮＨＮＨＩである脱アセチル・脱メチル体、
及び一般式（ＩＩ）中、Ｒ１及びＲ２がそれぞれ水素で
あり、Ｒ４がＮＨＮＨＩである脱アセチル・脱メチル体
は、上記脱アセチル体を脱メチル化することにより得ら
れる。

〔発明の効果〕

一般式（Ｉ）で示される本発明のシアル酸誘導体は、そ
の分子中に活性なカルボキシル基を有することから、ア
ミノ化合物のように、エステル基と反応可能な官能基を
有する他の化合物に対して高い反応性を示す。すなわち
、本発明の活性エステル基を有するシアル酸誘導体は、
各種のシアル酸誘導体を合成する際の原材料ないしは中
間体として、極めて有用な化合物である。しかもシアル
酸誘導体は、合成途中で副反応（分子内閉環反応）を生
じない構造を有しているため、高収率で得ることができ
る。

また、アミノ酸を栄養剤として動物や人体に投与する場
合、あるいは、インシュリン、成長ホルモン、インター
フェロン、免疫原などを医薬として投与する場合に、こ
れらを一般式［ｎ）で示されるシアル酸誘導体として投
与すると、シアル酸の存在によって生理活性物質本来の
生物学的反応が阻害ないし遅緩されるものと予想される
ことから、生理活性物質の体内における持続性が高まる
。

少量の投与で有効な薬効を呈するなどの効果が得られる
。

〔実施例〕

以下、本発明の好ましい具体例を実施例により説明する
が、本発明は、以下の実施例に限定されるものではない
。

参考例１メチル（４−ニトロフェニル　５−アセタミド−４，７
，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３゜５−ジデオキシ
−α−Ｄ−グリセローＤ−ガラクトー２−ノニュロピラ
ノシド）オネートの合成：■Ｎ−アセチルノイラミン酸
をメタノール中、ダウエックス（Ｄｏｗｅｘ）　５　Ｑ
　Ｗ　（Ｈ”　）の存在下、室温で６時間反応させ、メ
チルエステル体（Ａ）を得た（収率＝８０％）。

■メチルエステル体（Ａ）と適量の塩化アセチルとを一
日間反応させた後、冷却下（−３０℃）でエタノールを
添加し、１０日間放置してクロル体（Ｂ）を得たく収率
＝８３％）。

■ｐ−ニトロフェノールの無水ナトリウム塩１０．２６
ｇと、上記■で得たクロル体（Ｂ）（メチル　５−アセ
タミド−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−２−
クロロ−３，５−ジデオキシ−β−Ｄ−グリセローＤ−
ガラクトー２−ノニュロピラノソネート）６．０ｇとを
無水ジメチルホルムアミド１２０−に溶解し、防湿下、
２４時間撹拌反応した。

次いで、減圧下で溶媒を留去した後、キシレンを加え、
繰り返し溶媒を留去した。得られた残渣に酢酸エステル
を加えて撹拌し、酢酸エステル抽出を充分に行った。抽
出液より溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマ
トグラフィ　（ワコーゲルＣ−３００）に付した。最初
、エーテルで溶出してｐ−ニトロフェノールを除いた後
、酢酸エステルで溶出して目的物の分画液を得た。この
分画液より溶媒を留去して油状のｐ−ニトロフェニル体
（Ｃ）（粗収量＝６．８７ｇ１粗収率＝９５°４％、融
点＝９５〜９８℃）を得た。

Ｔ　Ｌ　Ｃ：　Ｒｆ　＝０．４１　（Ｋｉｅｓｅｌｇｅ
ｌ　６０　Ｆｚｓ４、メルク社製　酢酸エステル）Ｒｆ　＝０．４４　（Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ　６０　Ｆ！
！１４、メルク社製　ＣＨＣｌ！ｓ／ＭｅＯＨ＝２０／
１）（参考文献）１）　　Ｖｏｌｋｅｒ　Ｅｓｃｈｅｎｆｅｌｄｅｒ　ａ
ｎｄ　Ｒｅ１ｎｈａｒｄ　Ｂｒｏｓｓｍｅｒ。

Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、　１６
２（１９８７）　２９４−２９７には上記合成法が記載
されているが、収率は５７％（融点＝１０４〜１０８°
　（ｄｅｃ、　）（エーテル／ヘキサン））とよくない
。

〔生成物の物性値〕

’Ｈ−ＮＭＲｓｏ：Ｍｎ、　（ＣＤ　ＣＩ！　、　ＴＭ
　Ｓ　）１．９３２（３８，Ｓ、　　−Ｎ）ｌｃＯｃＨ
３）、２．０５５；　２．０６１；　２．１１９；　２
．１９３　（全て３Ｈ，全てｓ、　　−０ＣＯＣＨｓ　
Ｘ　４）、２．３０４（１１（、ｔ、　　Ｊ＝１２．８Ｈｚ、　Ｈ
ｓ−、ｌ）、２．７４４（ＩＨ，ｄｄ、　Ｊ＝１３．２
Ｈｚ、　４．８Ｈ２，Ｈｓ、＊　）、３．６６３（３８
，ｓ、　２−ＣＯｏＣ）Ｉｎ）、４．９８６（ＬＨ，ｄ
ｄｄ、　Ｊ＝１２．１．１０．３．４．８）１ｚ、　）
ｌ−４）、７．１５３（２Ｈ，ｄ、　　Ｊ＝９．２Ｈｚ
、　　フェニル−Ｈ）、８．１８９（２８，ｄ、　　Ｊ
＝９．２Ｈｚ、　　フェニル−Ｈ）　。

Ｉ　Ｒｖ　、、ａ−ｘ　ａｎ−’　：　１７４０．１６
６０．１５２０．１３４０．１２２０参考例２メチル（４−アミノフェニル　５−アセタミド−４，７
，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３゜５−ジデオキシ
−α−Ｄ−グリセローＤ−ガラクトー２−ノニュロピラ
ノシド）オネートの合成：参考例１■で得た化合物（Ｃ
）〔メチル（４−ニトロフェニル　５−アセタミド−４
，７，８゜９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオ
キシ−α−Ｄ−グリセローＤ−ガラクトー２−ノニュロ
ピラノシド）オネート）６．８７ｇをメタノール５０−
に溶解し、５％パラジウム／カーボンをスパーチルで少
量加えた後、撹拌下、室温にて水素還元した。

２日間反応後、触媒を濾去し、得られた濾液より溶媒を
留去して油状物質４．９１ｇ（収率＝　７１．８３％）
を得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィ（ワコーゲ
ルＣ−３００、ＣＨＣｌ５／ＭｅＯＨ＝４０／１）でさ
らに精製し、下記に示すＴＬＣワンスポット精製品とし
て目的物であるｐ−アミノ体（Ｄ）を白色粉末状結晶（
融点！９５〜９９℃）として得た。

ＴＬ　Ｃ：　Ｒｆ　−０，２９（Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ　
６０　Ｆｓｓｓ、メルク社製　酢酸エステル）Ｒｆ　＝　０．３５　（Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ　ｓｏ　Ｆ
ｕｓｓ、メルク社製　ＣＨＣｆ　ｓ／ＭｅＯＨ＝２０／
１）〔生成物の物性優〕ＣｔａＨ３４０ｔｓＮ　ｔＦ　Ａ　Ｂ−ＭＳ　　ＩＩ／Ｚ：５８３（Ｍ”＋　１　
）’ＨＮＭＲｓａｏｍｏ−（ＣＤＣ１，ＴＭＳ）１．８
９６（３Ｈ，ｓ、−ＮＨＣＯＣＨｓ）、２．０２８．２
．０５５；　２．１１５．２．１３９　（全て３Ｈ，全
てｓ、　　−０ＣＯＣＨｓ　Ｘ　４）、２．６７６（ＩＨｌｄｄ、　　Ｊ＝１２．８．４．８Ｈ
ｚ、　　Ｈｚ−＊　）　　、３．６７１（３Ｈ，ｓ、２
−ＣＯｏＣＨｓ）、４．９３６（１８，Ｊ＝１２．１．
１０．３．４．８Ｈ２，Ｉ（−４）　　、６．５６９（
２Ｈ，ｄ、　　Ｊ＝８．８Ｈｚ、　　フェニル−Ｈ）、
６．８８６（２Ｈ，ｄ、　　Ｊ＝８．８Ｈｚ、　　フェ
ニル−Ｈ）　。

実施例１メチル（４−ホルミルアミノフェニル　５−アセタミド
−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジ
デオキシ−α−Ｄ−グリセローＤ−ガラクトー２−ノニ
ュロピラノシド）オネート（１）の合成：水冷下に無水酢酸０．８８−へ９８％ギ酸の０．４２−
を加えて５０〜６０℃にて撹拌加熱した。生成した無水
物へ乾燥テトラヒドロフラン４−を加え、−２０℃に冷
却、Ｎ２置換下、参考例２で得たメチル（４−アミノフ
ェニル　５−アセタミド−４゜７．８．９−テトラ−Ｏ
−アセチル−３，５−ジデオキシ−α−Ｄ−グリセロー
Ｄ−ガラクトー２−ノニュロピラノシド）オネート２．
０ｇの乾燥テトラヒドロフラン４ｗ１１溶解溶液を加え
て、２時間、−２０℃にて撹拌子反応した。次いで室温
に戻して撹拌した。シリカゲルＴ　Ｌ　Ｃ（ＣＨＣｆ　
ｓ／ＭｅＯＨ＝２０／ｌ）でアミノ体の消失を確認後、
溶解を減圧留去し得た残渣は、シリカゲルカラムクロマ
ト精製（ＣＨＣｊ！　ｓ／ＭｅＯＨ＝２０／１）　して
、白色粉末の目的物（１）１、４７　ｇを得た。収率７
０．０％本品は、ＮＭＲ測定により以下の互変異性体（Ｉ）、（
ｎ）、（ＩＩＩ）の混合物であった。

Ｔ　Ｌ　ＣＲｆ　　＝　０．１７　　（Ｋｉｅｓｅｌｇ
ｅｌ　　ｓｏ　Ｆ＊ｓ４　、ＣＨＣｊ！　ｓ／ＭｅＯＨ
＝２０／１）融点：１０２〜１０４℃ ’Ｈ−ＮＭＲｓａｏｍ□（ＣＤ　ＣＩ　、ＴＭＳ）１．
９１３；　１．９０６（３Ｈ，全てＳの−ＮＨＣＯＣＨ
Ｉ）２．１９５（０，５Ｈ，ｔ、　　Ｊ＝１２．８Ｈｚ。

のＨｌ、）（１）及び（Ｉ［＋Ｉ［［）（＋）或は（Ｉｒ＋Ｉ［Ｉ）（ＩＩＩ）２．２０８（０，５Ｈ，ｔ＋　Ｊ＝１２．８Ｈｘ、　（
１）或は（ＩＩ＋ＩＩＩ）のＨｌ、）２．７１０（０，５Ｈ，ｄｄ、　Ｊ＝１２．８．４．８
Ｈｚ、　（１）或は（Ｉ［＋Ｉ［Ｉ）のＨ５□）２．７２５（０，５Ｈ，ｄｄ、　Ｊ＝１２．８．４．８
Ｈｚ、　（１）或は（Ｉ［＋Ｉ［［）のＨ，、、）３．６８０；　３．６６５（３Ｈ，全てｓ、　（１）及
び（ＩＩ＋Ｉ）の−ｃｏｏｃｔｔｓ）８．３４４；　８．３４０（０，５Ｈ，全てｓ、（ＩＩ
）及び（ｎＩ）８．５８９（０，５Ｈ，ｄ、　ｄ＝１１
．４Ｈｘ、　　（１）の−ＮＨＣＨＯ）ＦＡＢ−ＭＳｍＨｚ　　：　６１１（Ｍ”＋　１　）実施例２メチル（４−メチルアミノフェニル　５−アセタミド−
４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデ
オキシ−α−Ｄ−グリセローＤ−ガラクトー２−ノニュ
ロピラノシド）オネート（２）の台底：実施例１で得たホルミルアミノ体（Ｌ　）　０．１７４
ｇを乾燥テトラヒドロフラン３−にとかし、水冷下、ボ
ラン・メチルスルフィドコンプレックス（ＣＨｓ）ａｓ
　　　ＢＨｘ　　８５．５μｌを加え、Ｎ２置換下に１
日夜撹拌した。シリカゲルＴ　Ｌ　Ｃ（ＣＨＣ１ｓ／Ｍ
ｅＯＨ＝２０／１）にてホルミルアミノ体の消失を確認
した後、メタノールを滴下すると発泡し、２〜３時間撹
拌した。減圧下に溶媒を留去後、得た残渣をシリカゲル
カラムクロマト精製（ＭｅＯＨ／ＣｌＣ１！ｓ：１／４
０）　して、白色粉末の目的物（２）０．１Ｈｇを得た
。収率５８．８％ＴＬ　Ｃ：　Ｒｆ　＝０．２７　（Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ
　６０　Ｆ！８４、ＣＨＣｌ’　ｓ／ＭｅＯＨ＝２０／
１）融点＝８７１〜９０℃ ’Ｈ−ＮＭＲｉｏ；Ｍａｇ　（ＣＤＣＩ。

ＴＭＳ）１．８８９（３Ｈ，Ｓ、　　−ＮＨＣＯＣＨｓ）２．０
２４；　２．０５１．２．１１０．２．１４０　（全て
３Ｈ，全てｓ、　　−０ＣＯＣＨｓ　Ｘ　４）２、１５６（１８，ｔ、　　Ｊ”１２．８Ｈ２，Ｈｓ−
−）２．６７３（ＩＨ，ｄｄ、　　Ｊ＝１２．８．４．
８Ｈｚ、　　Ｈｓ−）２．８０８（３Ｈ，ｓ、−ＮＨＣ
Ｈｓ）３．６８５（３Ｈ，ｓ、　　−ＣＯＯＣ）Ｉｓ）
４．９４２（ＩＨ，ｄｄｄ、　　Ｊ＝１２．ｌ、　　１
０．３．４．８Ｈｚ、　　Ｈ−４）８．４８９（２Ｈ，
ｄ、　　Ｊ＝８．８Ｈ２，ｙｘニル　Ｈ）６．９２６（
２Ｈ，ｄ、　　Ｊ＝８．８Ｈ１，１ｘニル　Ｈ）１６７
０　（アミド）ＦＡＢ−ＭＳ　　ｍＨｚ−５９７（Ｍ”　　＋ｌ）実施
例３Ｎ−メチル−４−〔（メチル　５−アセタミド−４，７
，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ
−α−Ｄ−グリセローＤ−ガラクトー２−〕二二ロピラ
ノシルオネート）オキシ〕スクシンアニリド酸（３）の
合成実施例２で得たメチルアミノ体（２）０．１ｇを乾燥テ
トラヒドロフラン２ｄに溶かし、無水コハク酸２０■を
加えて、Ｎ、置換下に一日夜撹拌反応した。シリカゲル
Ｔ　Ｌ　Ｃ（ＣＨＣ１’　ｓ／ＭｅＯＨ＝２０／１）に
てメチルアミノ体の消失を確認した後、溶媒を減圧留去
して残渣を得た。次いでゲル濾過クロマトグラフィ　（
ＬＨ−２０、ＭｅＯＨ）　、に付して無水コハク酸を除
いたものを、更にシリカゲルクロマトグラフィ（ＣＨＣ
Ｉ！ｓ／ＭｅＯＨ＝４０／１−１０／ｌ）にて精製して
白色粉末状の目的物（３）を得た。収率１，２１ｇ１収
率９４．２％Ｔ　Ｌ　Ｃ：　Ｒｆ　＝　０．０７　（ＣＨＣ１ｇ／Ｍ
ｅＯＨ＝２０／１）融点：１０８−１１０℃ ’ＨＮＭＲｓ。。２□（ＣＤＣｊ！、ＴＭＳ）１．９２
３（３Ｈ，ｓ、　　−ＮＨＣＯＣＨｓ）２．０４１；　
２．０５２．２．１３６．２．１３７　（全て３８．全
てｓ、　　−０ＣＯＣＨｓ　Ｘ　４）２．２３０（ＩＨ，ｔ、　　Ｊ＝１２．８Ｈｚ、　　Ｈ
ｓ、、　）２．３７５（２Ｈ，ｔ、　　Ｊ＝６．６Ｈｚ
、　　−ＣＨ＊−ＣＨｚ−）２．５８６（２Ｈ，ｔ、　
　Ｊ＝６．６Ｈ２，−ＣＨｚ−ＣＨｚ−）２．７４３（
ＬＨ，ｄｄ、　　Ｊ＝１２．８．４．７Ｈｚ、　　Ｈｓ
、−）３．２５７（３Ｈ，ｓ、　　−ＮＨ−ＣＨｓ）３
．６７７（３Ｈ，ｓ、　　−ＣＯＯＣＨｓ）Ｉ　Ｒｖ　
、、、’　ａｎ−’　：　１７５０（−Ｃｏｏｌ、　−
ＣＯＯＣＨｓ）、（アミド）ＦＡＢ−ＭＳ　　ＩＩ／Ｚ＝６９７　　（Ｍ”　＋　１
）６５０実施例４メチル−（４−（Ｎ−メチル−３−（Ｎ−スクシンイミ
ジルオキシカルボニル）プロピオンアミド）フェニル　
５−アセタミド−４，７、８，９−テトラ−Ｏ−アセチ
ル−３，５−ジデオキシ−α−Ｄ−グリセローＤ−ガラ
クトー２−ノニュロピラノシド〕オネート（４）の合成実施例３で得たスクシンアニリド酸（３）１．０ｇ、Ｄ
ＳＣ（Ｎ、Ｎ’　−ジスクシンイミジルカルーボネート
）３８０■を無水アセトニトリル２〇−に溶解した後、
無水トリエチルアミン２００μｌを加え、室温にて撹拌
反応した。ＴＬＣにて原料の消失を確認後、反応溶媒を
減圧下留去した。

得られた残渣をシリカゲルカラムクロマト（無水ＴＨＦ
）に付した後、得られた分画液の残渣を、さらにゲルク
ロマトグラフィー（ＬＨ−２０、無水ＴＨＦ）に付し、
分画液より白色粉末状結晶の目的物（４）　０．７１　
ｇ　（収率６１．４％、融点８７〜９０℃）を得た。

ＴＬ　Ｃ：　Ｒｆ　＝０．８２　（Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ
　８０　Ｆ！！４、無水ＴＨＦ） ’ＨＮＭＲｓｏ：Ｍｏ、（ＣＤＣ１，ＴＭＳ）１．９２
１（３Ｈ，ｓ、　　−Ｎ）ｌｃＯｃＨｚ）２．０３９．
２．０５１；　２．１３４．２．１３７　（全て３８．
全てｓ、　　−ＣＯＣＯＣＨｓ　　Ｘ　４）２．２４６
（ＬＨ，ｔ、　　Ｊ・１２．８Ｈｚ、　Ｈｓａ、）２．
７４２（ＩＨ，ｄｄ、　Ｊ：１２．８．４．７Ｈｚ、　
Ｈｓ−）２．８０６（４Ｈ，Ｓ、　　スクシンイミドの
　−ＣＨｔＣＨ２−）３．２５１（３Ｈ，ｓ、　　−Ｎ
Ｈ要、）３．６５９（３Ｈ，ｓ、　　−ＣＯＯ江、）Ｉ
　Ｒｖ　ｗａｘ　ａｎ−’　：　１７４０（−ＣＯＯＭ
ｅ）、１６６０　（アミド）ＦＡＢ−ＭＳ　ｍ／ｚ＝７
９４　（Ｍ”　＋１）実施例５メチル（４−（Ｎ−メチル−３−ｐ−ニトロフェニルオ
キシカルボニルプロピオンアミド）フェニル　５−アセ
タミド−４，７，８，９−テトラ−〇−アセチルー３，
５−ジデオキシ−α−Ｄ−グリセローＤ−ガラクトー２
−ノニュロピラノシド〕オネート（５）の合成実施例３で得たスクシンアニリド酸（３）５４■とＷＳ
Ｃ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）
−カルボジイミド塩酸塩）１６．８■とｐ−ニトロフェ
ノール２６．９■とを無水ジメチルホルムアミドｌ艷に
溶解し一日夜室温にて撹拌反応した。ＴＬＣにて原料の
消失を確認後、反応溶媒を留去し、得られた残渣をシリ
カゲルカラムクロマトグラフィ　（ワコーゲルＣ−３０
０、トルエン／アセトン＝１／１）に付し、目的物を含
む分画液を得た。この分画液より溶媒を留去して白色粉
末状晶の目的物（５）４’４．４■（収率７０％、融点
９５〜９８°Ｃ）を得た。

ＴＬＣ：　Ｒｔ　＝０．４８　（Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ　
ｓｏ　Ｆ！８４、トルエン／アセトン＝　１／１） ’ＨＮＭＲｓ。。□＝（ＣＤＣｆ３　、ＴＭＳ）１．９
２３（３Ｈ，ｓ、−ＮＨＣＯＣＨ３）２．０３７；　２
．０５１．２．１３４；　２．１３９　（全て３Ｈ，全
てＳ。

−０ＣＯＣＨ，Ｘ４）２．２４０（ＩＨ，ｔ、　　Ｊ＝１２．８Ｈｚ、　　）
１３−’　）２．７４１（ＩＦＩ、　　ｄｄ、　　Ｊ”
１３．２．４．８Ｈｚ、　　Ｈｓ−−）３．２６１（３
Ｈ，ｓ、−ＮＨＣＨｓ）３．６８７（３Ｈ，ｓ、−ＣＯ
ＯＣＨｓ）７．３０８（２Ｈ，ｄ、　　Ｊ＝９．２Ｈｚ
、　　ｐ−Ｊｏフェニル　Ｈ）８．２５７（２１（、ｄ
、　　Ｊ＝９．２Ｈｚ、　　ｐ−ニトロフェニル　Ｈ）
１５２０．１５００．１３７０．１３５０ＦＡＢ−ＭＳ
　　１ｍ／Ｚ＝８１８　　（Ｍ”　　＋１）実施例６（４−［（Ｎ−メチル−４’−（（メチル　５−アセタ
ミド−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５
−ジデオキシ−α−Ｄ−グリセローＤ−ガラクトー２−
ノニュロピラノシルオネート）オキシフスクシンアニロ
イル）オキシフフェニル）ジメチルスルホニウムメチル
スルフェート（６）実施例３で得たスクシンアニリド酸（３）５０■及び（
ｐ−ヒドロキシフェニル）ジメチルスルホニウムメチル
スルフェート１９．５■を無水アセトニトリルに溶解、
０℃下に、ＤＣＣ１５■を加えて撹拌１日夜反応した。

抽出した白色沈澱物を濾去し、濾液より溶媒を減圧留去
して白色粉末状の目的物（６）５４．２■を得た。収率
８０％Ｔ　Ｌ　Ｃ：　Ｒｆ　＝　０．５　（Ｋｉｅｓｅ
ｌｇｅｌ　６０　Ｆｚｓ４、ＣＨＣｆ　ｓ／ＭｅＯＨ＝
　１０／３）’Ｈ−ＮＭＲｓ。。Ｍ□（ＣＤ　Ｃ１ｓ　
　、ＴＭＳ）１．９２３（３Ｈ，ｓ、−ＮＨＣＯＣＨｓ
）２．０１９；　２．０３７；　２．１１５．２．１３
４　（全て３Ｈ，全てＳ。

ＪＣＯＣＨ３Ｘ４）２．１９５（ＬＨ，ｔ、　　Ｊ＝１２．５Ｈｚ、　　Ｈ
ｓ、ｘ）３．２５４（３Ｈ，ｓ、　　−ＮＨ−ＣＨｓ）
○ ３．６６５（３８，Ｓ、　　　ＣＨ３ＳＯ４３，７２２
（３Ｈ，ｓ、　　−ＣＯＯＣＲｓ）（６）実施例７Ｎ−（Ｎ−メチル−４’−（（メチル　５−アセタミド
−４，７，８，９−テトラ−０−アセチル３．５−ジデ
オキシ−α−Ｄ−グリセローＤ−ガラクトー２−ノニュ
ロピラノシルオネート）オキシ〕スクシンアニロイル）
グリシンメチルエステル（８）の合成実施例３で得たスクシンアニリド酸（３）０．１ｇ、Ｄ
ＳＣ３８■、トリエチルアミン２０μｌの無水アセトニ
トリル２−の溶液を１日夜撹拌反応した。次いで、グリ
シンメチルエステル塩酸塩１８、３９■とトリエチルア
ミン２０．３８μｌとを溶解させた無水アセトニトリル
１ｒｎｌの溶液を上記の活性エステルの溶液に加えて１
日夜撹拌反応した。反応溶媒を減圧にて留去し、得られ
た残渣をゲルクロマトグラフィ　（ＬＨ−２０ＳＭｅＯ
Ｈ）に付して未反応物質を除き、更にシリカゲルクロマ
トグラフィ　（アセトン／トルエン＝１／ｌ）に付し、
分画液より白色粉末状目的物（８）４９．５■（収率４
５％、融点８４〜８８℃）を得た。

ＴＬＣ：　Ｒｆ　＝０．２５　（Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ　
６０　Ｆ！！＋４、トルエン／アセトン＝　１／１）Ｒｆ　＝０．８０　（Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ　６０　Ｆ！
５４、ＴＨＦ） ’ＨＮＭＲ６０１１ＭＨ−（ＣＤ　Ｃｊ！　ｓ　　、Ｔ
ＭＳ）１．９１９（３Ｈ，ｓ。

２．０４４．２．０５１；一０ＣＯＣＨｓ２．２４１（ＩＨ，ｔ。

２．７３４（ＩＨ，ｄｄ。

３、２３９　（３Ｈ。

３、６７９　（３Ｈ。

３、７４５　（３Ｈ。

４．０１３（２Ｈ。

−ＮＨＣＯＣＲ１）２．１３８；　２．１４３　（全て３Ｈ，全てＳ×４）Ｊ＝１２．８Ｈｚ、　　Ｈｓａｘ　　）Ｊ＝１２．８．
４．８Ｈ２，Ｈｓ、、　　）ｓ、−Ｎ−ＣＨｓ）ｓ、５ｚ２−ＣＯＯＣＨｓ）ｓ、　　−ＮＨＣＨｓＣＯＯＣＨｓ）ｄ、　　Ｊ：５．５Ｈｚ、　　−ＮＨＣＨｓ−ＣＯＯＣ
Ｈｓ）Ｉ　Ｒｖ　Ｉｌｖ　ａｎ−’　：　１７５０（Ｃ
ＯＯＣＨｓ）、１６６０　（アミド）ＦＡＢ−ＭＳ　　
ｍ／ｘ−７６８（Ｍ”　　＋１）（８）実施例８Ｎ−（Ｎ−メチル−４’−（（メチル　５−アセタミド
−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジ
デオキシ−α−Ｄ−グリセローＤ−ガラクトー２−ノニ
ュロピラノシルオネート）オキシ〕スクシンアニロイル
）グリシン（９）の合成グリシン４．７■とトリエチルアミン１７μｌをアセト
ニトル／ＨｚＯ（ｔ　：　ｔ）に溶した溶液中へ、室温
、撹拌下に、スクシンアニリド酸のＮ−スクシンイミド
エステル５０■（実施例４の化合物（４））を加えた。

１日夜反応後、溶媒を減圧留去し、メタノールにとかし
Ｄｏｗｅｘ　５０　Ｗ　（Ｈ型）を加えて酸性とし、口
過して溶媒留去後、得られた残渣をゲルクロマトグラフ
ィ　（ＬＨ−２０，ＭｅＯＨ）に付して未反応物質を除
き、更にシリカゲルクロマトグラフ４　（ＣＨＣ１’　
＊／ＭｅＯ）Ｉ＝１０／１）に付し、分画液より白色粉
末状晶の目的物（９）２８．５■（収率６０％、融点１
１０〜１１４℃）を得た。

Ｔ　Ｌ　Ｃ：　Ｒｆ　＝０．３５　（Ｋｉｅｓｅｌｇｅ
ｌ　ｓｏ　Ｆｚａ４、酢ニス／メタノール＝　５／３）Ｒｆ　＝０．２５　（Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ　６０　Ｆ’
０、クロロホルム／メタノール＝　１０／３）’ＨＮＭ
Ｒ：ｏ：山（ＣＤＣ１’ｊ、ＴＭＳ）１．９２６（３）
１．ｓ、−ＮＨＣＯＣＨ＊）２、０４７（６Ｈ，ｓ、　
　−０ＣＯＣ）Ｉｓ　Ｘ　２）２、１３７．２．１５０
　（全て３Ｈ，全てｓ、　−０ＣＯＣＨｓ　Ｘ　２）２
．２２６（ＬＨ，ｔ、　　Ｊ＝１２．８Ｈｚ、　　３Ｈ
，、）２．７１９（ＩＨ，ｄｄ、　　Ｊ＝１２．８．４
．４Ｈｚ、　　Ｈｓ−）３．２３６（３Ｈ，ｓ、−ＮＨ
ＣＨｓ）３．６８６（３Ｈ，ｓ、−ＣＯＯＣＨｓ）３．
９９８（２Ｈ，ｄ、Ｊ＝４．８Ｈｚ、　　−ＮＨＣＨｘ
ＣＯＯＨ）ＦＡＢ−ＭＳ　　ｍ／ｚ＝７５４　　（Ｍ”
　　＋　１）（９）実施例９Ｎ−メチル−４’−（（メチル　５−アセタミド−４，
７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−グリセロ
ーＤ−ガラクトー２−ノニュロピラノシルオネート）オ
キシ〕スクシンアニリド酸ヒドラジド（ｌＯ）の合成実施例３で得たスクシンアニリド酸（３）１０２■とト
リエチルアミン２０．４μｌとを無水テトラヒドロフラ
ン２−に溶解し、冷却（−１５℃）、撹拌下で、イソブ
チルクロロホルメー）　１　Ｂ、　９μｌを加えて３０
分間反応した。次いで無水ヒドラジン９．３μｌを溶解
したテトラヒドロフラン−水（１：　１）混液１ｄに、
冷却（０℃）、撹拌下で上記の混合酸無水物の溶液を加
え０℃にて１時間、次いで室温にて１日間撹拌反応した
。酢酸にてｐＩ（を酸性とし溶媒を減圧留去し得た残渣
はゲルクロマトグラフィー（ＬＨ−２０、Ｍｅａｌ）に
付し、未反応物質を除き、更にトリエチルアミン添加後
シリカゲルクロマトグラフィ　（ワコーゲルｃ−ａｏｏ
、ＣＨＣｆ　ｓ／ＭｅＯＩ（”１０／１）に付し、分画
液より白色粉末の目的物（１０）５２■（収率５０％、
融点１０４〜１０５℃）を得た。

Ｔ　Ｌ　Ｃ：　Ｒｆ　−０，２（Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ　
６０　Ｆ！３４、ＣＨＣｌ　ｓ／ＭｅＯＨ＝１０／　１
）’Ｈ−ＮＭＲｉｓ：ｍｏｗ（ＣＤＣ１ｓ　ＳＴＭＳ）
１．９２０（３Ｈ，ｓ、　　−ＮＨＣＯＣＨｓ）２．０
４５；　２．０５４；　２．１４１．２．１４９　（全
て３Ｈ，全てＳ。

−０ＣＯＣＨｓ　ｘ　４）２．２４４（ＩＨ，ｔ、　Ｊ＝１２．８）ＩＺ、　３１
．、　）２．７３９（ＩＨ，ｄｄ、　Ｊ＝１２．８．４
．８Ｈｚ、　３１．、　）３．２３２（３Ｈ，ｓ、　−
ＩＨ朋、）３．６９０（３Ｈ，Ｓ、　　−ＣＯＯＣＨｓ
）４．９６５（４Ｈ，ｄｄｄ、　Ｊ＝４．８．１０．６
．１２．４Ｈｚ、　４−Ｈ）ＦＡＢ−ＭＳ　ＩＩ／Ｚ＝
７５４　　（Ｍ”　＋１）（１０）実施例１ＯＮ−（Ｎ−メチル−４’−［（メチル　５−アセタミド
−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジ
デオキシ−α−Ｄ−グリセローＤ−ガラクトー２−ノニ
ュロピラノシルオネート）オキシ］スクシンアニロイル
）ベスタチン（１１）第１法ベスタチン１５．４■とトリエチルアミン６．９７μｌ
をアセトニトリル／Ｈ＊Ｏ（１：　１　）に溶かした溶
液中へ、スクシンアニリド酸のＮ−スクシンイミドエス
テル３９■（実施例４の化合物（４））を加えた。次い
でトリエチルアミン６μｌを追加し一日夜撹拌反応した
。反応混液より溶媒を減圧留去し得た残渣は、メタノー
ルにとかしダウエックス（Ｄｏｗｅｘ）　５０　Ｗ　（
Ｈ型）を加えて酸性とし、濾過して溶媒を留去後、得ら
れた残渣をゲルクロマトグラフィー（ＬＨ−２０、メタ
ノール）に付して、未反応物質を除き、更にシリカゲル
クロマトグラフィ（ＣＨＣｌ　ｓ／ＭｅＯＨ＝　ｔｏ／
１）に付し、分画液より溶媒を留去し、白色粉末の目的
物（１１）３６．４■（収率７５％、融点　１３２〜１
３６℃）を得た。

ＴＬ　Ｃ：　Ｒｆ　＝０．３６　（Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ
　６０　Ｆ！８４、ＣＨＣ１＊／ＭｅＯＨ＝１０／２） ’Ｈ−ＮＭＲｓ＋ａｍｏ−（ＣＤＣ１ｓ　　、ＴＭＳ）
１．９１９（３Ｈ，ｓ、ＣＨｓＣＯＮＨ−）２．０３７
．２．０４９；　２．１２５．２．１３４　（全て３Ｈ
，全て３゜−０ＣＯＣＨｓ　Ｘ　４）２．２４１（ＩＨ，ｔ、　　Ｊ＝１２．８Ｈｘ、　　Ｈ
ｓ−−）２．７４３（ＬＨ，ｄｄ、Ｊ＝１２．８．４．
８Ｈ２，Ｈ３−＊　）３．１８３（３Ｈ，ｓ、　　−Ｎ
−ＣＨｓ）３．６５８（３Ｈ，ｓ、２−ＣＯＯＣＨｓ）
７．１６３−７．２２４（５Ｈ，ｍ、　　ベスタチン・
フェニル−Ｈ）ＦＡＢ−ＭＳ　　Ｉｌｌ／Ｚ＝９８８　
　（Ｍ”　　＋１）高分解能　ＦＡＢ−ＭＳ　ｍ／ｚ　
：　９８７．４１１５　　（Ｍ”＋ｌ　）ＣＣ４ｔＨａ
ｓｏｒ＊Ｎ４の計算値、９８７．４０８６）第２法ヒドラジド体［１０）　ｌ　２０■を無水ＤＭＦ５−に
溶解した後、−３０℃に冷却し、４Ｎ塩酸／ジオキサン
１２７μｌを加え均一の溶液とした。この溶液に亜硝酸
イソペンチル２０．１μｌを加えて一３０℃下に３０分
間攪拌した。次にトリエチルアミン７４μｌを滴下して
中和（リドマス紙で中性）し、１５分間振とうした。別
に、ベスタチン２５゜９■及びトリエチルアミン１２μ
ｌのＤＭＦ／水（１／１）溶液を０℃に冷却し、上記ア
シルアジド溶液中に滴下し、さらにトリエチルアミンで
ｐＨを８〜９とした後、２日間Ｏ℃で攪拌した。反応溶
液より溶媒を減圧下に留去し、ＬＨ−２０（メタノール
）精製した。最初の分画液から溶媒を留去して白色粉末
状晶が得られた。この白色粉末状晶は、ＩＲ，マススペ
クトル、ＮＭＲの測定結果から、目的物（１１）と同定
された。

ＴＬＣＲｆ−０，１６（ＣＨＣＩｓ／ＭｅＯＨ＝１０／
２）ニンヒドリン発色なし実施例１１一アセタミドー４．７，８．９−テトラ−０−アセチル
−３，５−ジデオキシ−α−Ｄ−グリセローＤ−ガラク
トー２−ノニュロピラノシルオネート）オキシ〕スクシ
ンアニロイル）−ＦＴＳ（１２）ＦＴＳ−ＡｃＯＨ・２
Ｈ２０２５■とトリエチルアミン１０．９μｌをアセト
ニトリル／Ｈ２０（１：　１）　　１−に溶かした溶液
中へ、Ｎ−スクシンイミドエステル３０■（実施例４の
化合物（４））を加え１日夜撹拌反応した。反応混合酸
より溶媒を留去し得た残渣は、ＭｅＯ）１に溶かし、Ｄ
ｏｗｅｘ　５０Ｗ　（Ｈ”型）を加えて酸性とし、濾過
して溶媒を留去後、得られた残渣をゲルクロマトグラフ
ィー（ＬＨ−２０、Ｈ８０）に付した。目的物を含む分
画液より水を凍結乾燥で除き白色粉末状晶の目的物（１
２）２０■（収率＝　４９．７％、融点１７０〜１７４
℃）を得た。

ＴＬ　Ｃ：　Ｒｆ　＝０．３８　（Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ
　６０　Ｆｘｓｎ、ｎ−ＢｕＯＨ／ＡｃＯＨ／ＨｚＯ＝
７／２１５）高分解能　ＦＡＢ−ＭＳ　ｍ／Ｚ　：　１
５３７，６２００　（Ｍ”＋１　）（ＣｓｓＨｓ４０□
Ｎ１１の計算値、１５３７．６１８０）’ＨＮＭＲｓ。

。Ｈ，（Ｄ！Ｏ，ＴＳＰ）１．３９３（３Ｈ，ｄ、　　
Ｊ＝７．０Ｈｚ、　　アラニンの　ＣＨｓ）１、９３４
（３Ｈ，ｓ、　　　−ＮＨＣＯＣＨｓ）２．０６９．２
．０８５；　２．１２５；　２．１４０　（全て３Ｈ，
全てＳ。

−０ＣＯＣＨｓ　Ｘ　４）３、２１３（３８，ｓ、　　−ＮＨＣＨｓ）３．７４２
（３Ｈ，ｓ、　　−ＣＯＯＣＨｓ）７．２１５（２Ｈ，
ｄ、　　Ｊ＝８．８Ｈｚ、　　フェニル　Ｈ）７．２９
９（２Ｈ，ｄ、　　Ｊ＝８．８Ｈｚ、　　フェニル　Ｈ
）実施例１２ジー（Ｎ−メチル−４’−（（メチル　５−アセタミド
−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジ
デオキシ−α−Ｄ−グリセローＤ−ガラクトー２−］二
二ロピラノシルオネート）オキシ〕スクシンア、ニロイ
ル）−シーＬ−グルタミルーＬ−シスチニルジグリシン
（１３）第１法グルタチオン（酸化型）１９．２９■とトリエチルアミ
ン１７．７μｌをアセトニトリル／Ｈ２０（１：１）１
−に溶かした溶液中へ、Ｎ−スクシンイミドエステル５
０■（実施例４の化合物（４））を加えた。次いでトリ
エチルアミン５μｌを追加して一日夜撹拌反応した。反
応混液より溶媒を留去し得た残渣は、ＭｅＯＨにとかし
Ｄｏｗｅｘ　５０　Ｗ　（Ｈ型）を加えて酸性とし、濾
過して溶媒を留去後、得られた残渣をゲルクロマトグラ
フィ（ＬＨ−２０、ＭｅＯＨ）に付した。目的物を含む
分画液より溶媒を留去して白色粉末状晶の目的物（１３
）　４３．４■（収率＝７０％、融点１５２〜１５４℃
）を得た。

Ｔ　Ｌ　Ｃ：　Ｒｆ　＝０．５２　（Ｋｉｅｓｅｌｇｅ
ｌ　６０　Ｆｘｓ４、ｎ−ＢｕＯＨ／ＡｃＯＨ／Ｈ＊Ｏ
＝７：２：５）第２法実施例３で得たスクシンアニリド酸（３）　６１２■及
びトリエチルアミン１２２．４μｌを無水ＴＨＦ３−に
溶解させ一１Ｏ℃に冷却撹拌下に、イソブチルクロロホ
ルメート１１３．８８μｌを加え３０分間反応した。次
いで酸化型グルタチオン１５６．８■を溶解したＴＨＦ
−ＨｔＯ（１：　１）混液２−へ冷却（０℃）撹拌下で
上記の混合酸無水物を加え０°Ｃにて１時間室温にて１
日間撹拌した。減圧下に、溶媒を留去し残渣は、メタノ
ールにとかしＤｏｗｅｘ５０　Ｗ　（Ｈ”　）にて酸性
化後、ＬＨ−２０（ＭｅＯＨ）にて精製した。目的物を
含む分画液より溶媒を留去し白色粉末の目的物（１３）
３２７■（収率７０％）を得た。

Ｔ　Ｌ　Ｃ：　Ｒｆ　＝０．５０　（Ｋｉｅｓｅｌｇｅ
ｌ　６０　Ｆ２ａ４、ｎ−ＢｕＯＨ／ＡｃＯＨ／１（ｚ
Ｏ＝　７：２：５）’ＨＮＭＲＩＩＩＩＯＮ−（Ｄ！Ｏ
Ｓ　ＴＳ　Ｐ）１．９２６（３Ｈ，ｓ、　　−ＮＨＣＯ
ＣＴｏ）２．０６９．２．０７８．２．１１１；　２．
１３８　（全て３Ｈ，全てＳ。

−０ＣＯＣＨｓＸ４）２．２１１（ＩＨ，ｔ＋　　Ｊ＝１２．８Ｈ２，Ｈｓ、
、　）２．８９８（ＩＨ，ｔ＋　　Ｊ”１２．８Ｈｚ、
　　Ｈｓ−＠）２．９６１（ＬＨ，ｄｄ、　　Ｊ’１４
．３．９．９Ｈ２，−ＣＨ−３−）３．１８９（３Ｈ，
ｓ、　　−ＮＨＣＨｓ）３．２８２（１８，ｄｄ、Ｊ＝
１４．３，４．４Ｈｚ、−ＣＨ−３−）３．７０４（３
Ｈ，ｓ、　　２−ＣＯｏＣＨｓ）■ ３．８４０（ＩＨ，ｄ、　　Ｊ＝１７．６Ｈｚ、　　−
ＮＨＣＨＣＯＯＨ）３．８８２（１）１．　　ｄ、　　
Ｊ＝１７．６Ｈｚ、　　−ＮＨＣＨ−ＣＯＯＨ）７．１
６７（２Ｈ，ｄ、　　Ｊ＝８．８Ｈ２，フェニルＨ）７
．２５３（２Ｈ，ｄ、　　Ｊ＝８．８Ｈｚ、　　フェニ
ルＨ）ＦＡＢ−ＭＳ　　ＩＩ／Ｚ：　　１９６９　　（
Ｍ”＋　１）ＦＡＢ高分解能Ｍ　Ｓ　ｍｉｘ　：　１９
６９．６１５０　　ＣＭ”＋　ｌ　）ＣＩ！０１１１１
０４１ＮＩＩＩＳＩの計算値、１９８９．６１４９実施
例１３一アセタミドー４．７，８．９−テトラ−Ｏ−アセチル
−３，５−ジデオキシ−α−Ｄ−グリセローＤ−ガラク
トー２−ノニュロピラノシルオネート）オキシ〕スクシ
ンアニロイル）−シーＬ−グルタミルーＬ−システイニ
ルグリシンの２ナトリウム塩（１４）実施例１２で合成したシアル酸−酸化型グルタチオン３
０■を０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ＝　７．０　）ｌ−
にとかしＤＴＴ　（ジチオスレイトール）３０■を加え
、Ｎｓガス置換下、−日夜撹拌した。反応溶液は、セフ
ァデックスＧ−２５カラム（展開溶媒、水）で分画した
。アンモニア−２％ニトロプルシドナトリウム塩溶液で
陽性の分画液を分取し、凍屹した。白色粉末の目的物（
１４）　２５■を得た。収率８０．８８％、融点１６２
〜１６７℃Ｔ　Ｌ　Ｃ：　Ｒｆ　＝０．５０　（Ｋｉｅ
ｓｅｌｇｅｌ　６０　Ｆｚａ４、ｎ−ＢｕＯＨ／ＡｃＯ
Ｈ／Ｈ＊０　＝　７：２：５）’ＨＮＭＲ＠。。□　（
Ｄ！Ｏ，ＴＳＰ）１、９４８（３Ｈ，ｓ、　　−ＮＨＣ
ＯＣＩｂ）２．０８０；　２．０９８；　２．１４４；
　２．１４８　（全て３１゜−０ＣＯＣＨｓ　Ｘ　４）２、２５２（ＩＨ，ｔ＋　　Ｊ＝１２．８Ｈｚ、　　Ｈ
ｓ−）２．９０〜２．９８（３Ｈ，ｍ、　　Ｈｓ、ｑ＋
Ｈ３ＣＨ２）３．２３０（３Ｈ，Ｓ、　　−ＮＨ−ＣＨ
３）３．７７６（３Ｈ，ｓ、　　２−ＣＯｏＣＨｓ）３
．８１３（３Ｈ，ｓ、　　グリシン　の　−ＣＨ，−）
７．２２９（２Ｈ，ｄ、　　Ｊ＝８．３Ｈｚ、　　フェ
ニルＨ〉７．３２２（２Ｈ，ｄ、　　Ｊ：８．３Ｈｘ、
　　７ｚニルＨ）全てＳ。

実施例１４一４’−（（メチル　５−アセタミド−４，７゜８．９
−テトラ−０−アセチル−３，５−ジデオキーα−Ｄ−
グリセローＤ−ガラクト−２−ノニュロビラノシルオネ
ート）オキシ〕スクシンアニロイル）〕−ウシインスリ
ン（１５）の合威実施例３で得たスクシンアニリド酸（
３）　１７７、７４■とトリエチルアミン３５．５μｌ
とを無水テトラヒドロフラン５にに溶解し、冷却（−１
５℃）、撹拌下でイソブチルクロロホルメート３３．ｌ
μｌを加えて３０分間反応した。次いで水冷下、ウシイ
ンスリン（ＣＲ−インスリン＝コラボレイテイプ、リサ
ーチ）４９■のＴＨＦ／Ｈ２０（１：　１）６ｒｎｌ溶
液にトリエチルアミンを滴下してｐＨ＝９．５とした。

その溶液へ撹拌下に、上記混合酸無水物溶液を少量ずつ
加え同時にｐＨ＝　９．５に保つ様にトリエチルアミン
を加えた。更に水１ｄを加え、０℃下に５時間、室温に
て２４時間撹拌反応した。

反応混液は、透析（スペクトラ／ポア？　（ＭＷＣＯ２
，０００）、外液に１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．
０）１ｍ’を２回、純水２１を２回用いた）後、内液を
凍結乾燥に付した。次いで、凍乾品を純水に溶解させた
溶液から、脱塩装置（マイクロ・アシライザー（旭化或
）ＭＷＣＯＬ、０００、ＡＣ−２３０−１０カートリツ
ジ）を用いて、適量に加えた原料スクシンアニリド酸（
３）を除去した。

透析溶液と装置膜の５０＋ｎＭリン酸緩衝液洗浄溶液を
合体し、再度、透析（スペクトラ／ボア７（ＭＷＣＯ２
，０００）外液に純水を用いた）し、凍結乾燥に付し、
白色粉末の目的物（１５）３０■を得た。

ＨＰＬＣ分析： ■Ａｓａｈｉｐａｋ　ＣＧ−３２０（７，６Ｍ　ＩＤＸ
　５００　ｍｍＬ）移動相：　ＮａＨ２ＰＯ４−ＮａＨ
２Ｏ４（ｐＨ＝７．０）／ＭｅＯ）ｌ＝８０／２０流　速：　Ｉ　Ｗｌ／１１ｉｎ検　出：　ＵＶＵＶ−２１Ｏｎチヤ一ト速度３００　閣
／ｈｒ■ＴＳＫ　ｇｅｌ　０ｃｔａｃｌｅｃＹＩ−４Ｐ
Ｗ（４，６ｍｎ１ＤＸ　１５ａｎ）グラジェント（５０
分）移動相：０．２％ＴＦＡ−８０％ＣＨｓＣＮ　ｉｎ　Ｏ
，２％ＴＦＡ流　量：　１．０７／ａｉｎ検　出：　ＵＵＶ−２１０ｎ、チャート速度３００　閣
／ｈｒ全　、＼Ｓ　　マＨＰＬＣ分析充てん剤：　　Ａｓａｈｉｌｌａｋ　Ｇ５−３２０（７
，６ｍｍＸ５００　ｕｍ）移動値　：　　１０ｍＭ　Ｎ
ａＨ２ＰＯ４−ＮａＨ２Ｏ４（ｐＨ”７．０）／ＭｅＯ
Ｈ＝８０／２０流　　　量：　　１．Ｏｍ／／ｗｉｎ検　　　出：　　ＵＶ−２ＵＶ−２１０ｎ、１６）チャ
ート速度：３００叩／ｈｒ試　　料：化合物αＳ＼＼−−／／実施例１５ジー（Ｎ−メチル−４’−（（メチル　５−アセタミド
−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジ
デオキシ−α−Ｄ−グリセローＤ−ガラクトー２−ノニ
ュロピラノシルオネート）オキシ〕スクシンアニロイル
）−タフトシンａ■タフトシン・２ＡｃＯＨ・４Ｈ２０
（２５■、０．０３６Ｂｍｏｌ）とトリエチルアミン（
３６μｊ？、０．２５ｍｍｏ１）をアセトニトリル／Ｈ
ｚＯ（１：　１）　２−に溶かした溶液中へ、Ｎ−スク
シンイミドエステル（実施例４の化合物（４）　）　１
１５＋ａｇ　（０，１４４ｍｍｏ１）を加え、−日夜撹
拌反応した。反応混液より溶媒を留去し得た残渣は、メ
タノールＭｅＯＨに溶かし、ダウエックス（Ｄｏｗｅｘ
）　５０Ｗ　（Ｈ型）を加えて酸性とし、濾過して溶媒
を留去後、得られた残渣をゲルクロマトグラフィ（ＬＨ
−２０、ＭｅＯＨ）に付した。目的物を含む分画液より
溶媒を留去して白色粉末核晶の目的物（１８５１■（収
率＝７６％、融点１６２〜１６４℃）を得た。

ＩＲ（ＫＢｒ）ｖ　：　３７００〜２８００゜１７５０
．１６４５ｃｍ−’ ’ＨＮＭＲｓｏａｎｇ　　（ＤｘＯｌ　５００ＭＨｚ）
１．８６４（３Ｈ，ｄ、　　Ｊ・６．４１Ｈｚ、　　−
Ｃ（ＯＨ）ＨＣＨｓ）２、０８１　（６Ｈ，Ｓ、　　−
０ＣＯＣＨｓ　　Ｘ　２）２、０８９（６Ｈ，ｓ、　　
−０ＣＯＣＨｓ　　Ｘ　２）２、１１６（６８，ｓ、　
　−０ＣＯＣＨｓ　　Ｘ　２）２、１６２（ＯＲ，Ｓ、
　　−０ＣＯＣＨｓ　　Ｘ　２）３、１７３（６８，ｓ
、　　＝Ｎ−ＣＨｓ　Ｘ　２）３、７２５（ＯＲ，ｓ、
　　−ＣＯＯＣＨｓ　　Ｘ　２）４．９７３−５．０２
６（２Ｈ，Ｌ　　４−Ｈ）７．１６２−７．１９９（４
Ｈ，Ｉｔ、　　フェニル　Ｈ）７．２３２−７．２６５
（４８，ｍ、　　フェニル　Ｈ）ＦＡＢ−ＭＳ　　ｍ／
Ｚ：　　１８５７　　（Ｍ”＋　１）ＦＡＢ高分解能Ｍ
Ｓ　ＩＩ／Ｚ：　１８５７．７７００　　ＣＭ”＋　Ｉ
Ｃ５ｓＨ＋＋ｙＯｓＪ＋＊の計算値、１８５７．７６９
０〕実施例１６参考例２で得たｐ−アミノ体（Ｄ）４．９１　ｇと無水
コハク酸１．２６　ｇとを無水ＴＨＦ　１００ｍｌに溶
解し、室温にて１日間攪拌した。ＴＬＣによて原料の消
滅を確認後、反応溶媒を減圧下で留去し、得られた残渣
をゲル濾過クロマトグラフィー（ＬＨ−２０、メタノー
ル）に付し、無水コハク酸を含まない分画液を得た。こ
の分画液より溶媒を留去して得た残渣を酢酸エステルよ
り再結晶し、下記式で示される４’−（（メチル　５−
アセタミド−４，７，８，９−テトラ−０−アセチル−
３５−ジデオキシ−α−Ｄ−グリセローＤ−ガラクトー
２−ノニュロピラノシルオネート）オキシ〕スクシンア
ニリド酸４．８１ｇ（３番晶までの合計、収率８３．７
％、融点１３０〜１３１”ｃ）を得た。

このスクシンアニリド酸１００■と、Ｎ、Ｎ’−ジスク
シンイミジルカーボネート３８■とを無水アセトニトリ
ルｌＯ−に溶解した後、無水ピリジン１１．７μｌを加
え、室温にて攪拌反応した。

ＴＬＣにて原料の消失を確認後、反応溶媒を減圧下で留
去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラ
フィー（ワコーゲル　Ｃ３００、トルエン／アセトン＝
１／１）に付した後、得られた分画液の残渣をさらにゲ
ル濾過クロマトグラフィー（ＬＨ−２０、トルエン／ア
セトン＝１／１）に付し、分画液より下記式で示される
メチル〔４−（３−（Ｎ−スクシンイミジルオキシカル
ボニル）プロピオンアミド）フェニル　５−アセタミド
−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジ
デオキシ−α−Ｄ−グリセローＤ−ガラクトー２−ノニ
ュロピラノシド〕オネートを白色粉末状結晶９１■（収
率８０％、融点１１５〜１１７℃）として得た。

ウシインスリン４０　■（６，９６μｍｏｌ）を０．１
　Ｍリン酸緩衝液３５−に溶解し、上記で得たオネート
２１６、５■（２０８μ５ｏｌ）をアセトニトリル２−
に溶解させた溶液を加えて、室温下、１日夜攪拌した。

外液を純水を用いて透析した後、凍結した。さらに、乾
燥品は、０．５　Ｍ　　ＣＩｊＣＯＯＮＨ＜に溶解した
後、遠沈して得た上澄液に５Ｎ酢酸を加えてｐＨを５．
１〜５．３として生じた沈澱を濾取して目的物ａ〃を得
た。

第２法（混合酸無水物法、溶媒ＤＭＦ）先に得た４’−
（（メチル　５−アセタミド−４，７，８，９−テトラ
−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−α−Ｄ−グリセ
ローＤ−ガラクトー２−ノニュロビラノシルオネート）
オキシ〕スクシンアニリド酸１４３■とトリエチルアミ
ン２９、１μｌを無水ＤＭＦに溶解し、−１５℃で冷却
し、攪拌下にイソブチルクロルホルメート２７．ｌμｌ
を加えて３０分間反応した。次いで、水冷下にウシイン
スリン４０■のＤＭＦ／水（１：　１）３−溶液にトリ
エチルアミンを滴下してｐＨを９゜５とした。その溶液
に攪拌下、上記混合酸無水物を少量ずつ加え、同時にｐ
Ｈを９．５にたもっためにトリエチルアミンを加えた。

０℃にて１時間攪拌した後、１日夜室温にて攪拌反応し
た。

透析チューブ（スペクトラ／ボアク（ＭＩＶＣ０２，０
００）にて外液に１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）
１１を２回、次いで純水２１を２回を実施した後、凍結
乾燥した。さらに、凍結乾燥品は、０．５Ｍ　　ＣＩｊ
ＣＯＯＮＨ４に溶解した後、遠沈して得た上澄液に５Ｎ
酢酸を加えてｐＨを５．１〜５゜３として生じた沈澱を
濾取して目的物αｑを得た。

ＨＰＬＣ分析充てん剤：　　Ａｓａｈｉｐａｋ　Ｇ５−３２０（７，
６ＷＩＸ５００　ｍ）移動値　：　　５０＋ｓＭ　Ｎａ
ＨｘＰＯａ−ＮａＪＰＯ４（ｐＨ”７．０）／ＭｅＯＨ
＝８０／２０流　　　量　　１ｆｆｌ／ｍｔｎ検　　出：　　ＵＵＶ−２１０ｎ　（感度：ＸＯ，１６
）チャート速度：　３００　ｗｏｎ／ｈｒ試　　料：化
合物α〃結果：上記凍結乾燥品の保持時間は、第１法の生成物が８．８
分であり、第２法の生成物が８．２分であり、それぞれ
単一のピークであった（但し、インスリンの保持時間は
１０分であり、原料のスクシンアニリド酸誘導体は１１
．６分であった。）。

第２法（混合酸無水物法、溶媒ＴＨＦ）先に得た４’−
［（メチル　５−アセタミド−４，７，８，９−テトラ
−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−α−Ｄ−グリセ
ローＤ−ガラクトー２−ノニュロピラノシルオネート）
オキシ］スクシンアニリド酸２１４．５■とトリエチル
アミン４３、６５μｌを無水テトラヒドロフラン５ｗｌ
に溶解し、−１５℃で冷却し、攪拌下にイソブチルクロ
ルホルメート４０．６５μｌを加えて３０分間反応した
。次いで、水冷下にウシインスリン６０■のＴＨＦ／水
（１：１）１０−溶液にトリエチルアミンを滴下してｐ
Ｈを９．５とした。その溶液に攪拌下、上記混合酸無水
物を少量ずつ加え、同時にｐｔ−ｔを９．５にたもった
めにトリエチルアミンを加えた。０℃にて４時間攪拌し
た後、１０時間室温にて攪拌反応した。

透析チューブ（スペクトラ／ボアク（ＭＩＶＣ０２，０
００）にて外液に１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）
２１を２回、次いで純水２１を２回を実施した後、内液
を凍結乾燥した（生成物１２４．６■）。さらに、凍結
乾燥品は、水に溶かし、電気透析装置（マイクロアシラ
イガ−１旭化成）に付し、原料のスクシンアニリド酸誘
導体を完全に除去し、次いで内液凍結乾燥して目的物α
力を得た。

ＨＰＬＣ分析充てん剤：　　Ａｓａｈｉｐａｋ　Ｇ５−３２０（７，
６ＷＩＸ５００　ｍ）移動相　：　　１０ｍＭ　ＮａＨ
ｘＰ０４−Ｎａ２ＨＰＯ４（１）ｔｌ”７．０）／Ｍｅ
ＯＨ＝８０／２０流　　　量：　　ｌＷｔ／ｗｉｎ検　　出：　　ＵＵＶ−２１０ｎ　（感度：Ｘｏ、　１
６）チャート速度：　３００　ａｍ／ｈｒ試　　料：化合物Ｑ７＋結果：上記凍結乾燥品の保持時間は９．４分であり、単
一のピークであった（但し、インスリンの保持時間は１
０００分であり、原料のスクシンアニリド酸誘導体は１
３．４分であった。）。

シアル酸定性・定量ＨＰＬＣ充てん剤：　　Ａｍ１ｎｅｘ　ＨＰＸ−８７１（（７，
８ｍｍＸ３００　ｍ）移動相　：　　０．ＯＩＮ　Ｈｚ
ＳＯ１流　　　量：　　０．６ｍｇ／ｗｉｎ温　　　度：　３８℃ 検　　　出：　　ＵＵＶ−２０６ｎ感　　　度：　　Ｘｏ、１６チヤート速度：　２００　ｍ＋／ｈｒ加水分解条件凍結乾燥品６．０１■を秤量し、０．１　Ｍ　Ｈ２ＳＯ
４２−中、８０℃で１時間加熱した。次いで、純水で全
量を５ｄとした。その溶液は遠沈し、上澄液２５μｌを
ＨＰＬＣ分析した。

結果：凍結乾燥品の分解物であるＮ−アセチルノイラミ
ン酸は、保持時間が８．６分に出現し、定量試験により
、Ｎ−アセチルノイラミン酸０．４０９５７３２■を生
成した。これより、インスリン１分子当たり、シアル酸
リガンドは、１．４８分子であり、以下の構造式で表さ
れる。

■−一一一一二二ノ

Claims

【特許請求の範囲】

（１）一般式〔 I 〕 ▲数式、化学式、表等があります▼〔 I 〕（式中、Ｒ＾１はアセチル基を示し、Ｒ＾２は低級アル
キル基を示し、Ｒ＾３はＣ＿２Ｈ＿４、Ｃ＿３Ｈ＿６ま
たはＣ＿２Ｈ＿２を示し、Ｒ＾４は水酸基、ヒドラジノ
基、アジド基、活性エステルのアルコール部から水素を
除いた残基アルキルオキシカルボニルオキシ基またはア
リールオキシカルボニルオキシ基を示し、Ａｃはアセチ
ル基を示し、Ｐｈはフェニル基を示し、Ｘは酸素を示す
）で示される活性カルボキシル基を持つシアル酸誘導体
。
（２）活性エステルのアルコール部が、Ｎ−ヒドロキシ
スクシンイミド、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−
２，３−ジカルボキシイミド、Ｎ−ヒドロキシフタルイ
ミド、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール、ｐ−ニトロ
フェノール、２，４−ジニトロフェノール、２，４，５
−トリクロロフェノール、ペンタフルオロフェノールお
よびペンタクロロフェノールからなる群より選ばれる一
種である請求項１記載の活性カルボキシル基を持つシア
ル酸誘導体。
（３）アルキルオキシカルボニルオキシ基のアルキル基
が、メチル基、エチル基、ｎ−ブチル基又はイソブチル
基であり、アリールオキシカルボニルオキシ基のアリー
ル基が、フェニル基またはベンジル基である請求項１記
載の活性カルボキシル基を持つシアル酸誘導体。
（４）一般式〔II〕 ▲数式、化学式、表等があります▼〔II〕（式中、Ｒ＾１は水素またはアセチル基を示し、Ｒ＾２
は水素または低級アルキル基を示し、Ｒ＾３はＣ＿２Ｈ
＿４、Ｃ＿３Ｈ＿６またはＣ＿２Ｈ＿２を示し、Ａｃは
アセチル基を示し、ｍは１〜６０の整数であり、Ｐｈは
フェニル基を示し、Ｘは酸素を示し、Ｙはアミノ化合物
からｍ個のアミノ基を除いた残基を示す）で示されるシ
アル酸誘導体。
（５）前記アミノ化合物は、アミノ酸、アミノ酸の誘導
体またはペプチドである請求項４記載のシアル酸誘導体
。
（６）一般式〔III〕 ▲数式、化学式、表等があります▼〔III〕（式中、Ｒ＾２は水素または低級アルキル基を示し、Ａ
ｃはアセチル基を示し、Ｐｈはフェニル基を示し、Ｘは
酸素を示し、ＺはＮＨＣＨＯ又はＮＨＣＨ＿３を示す。）で示されるシアル酸誘導体。
（７）以下の式で表されるシアル酸誘導体。 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ａｃはアセチル基を示し、Ｐｈはフェニル基を
示し、ｎは１〜６０の整数であり、Ｒ＾５はインスリン
を示す）