JPH03290193A

JPH03290193A - 生理活性物質ｔａｎ―１３２３、その製造法および用途

Info

Publication number: JPH03290193A
Application number: JP32777890A
Authority: JP
Inventors: Masayuki Muroi; 室井　正之; Tsuneaki Hida; 飛田　恒明; Yukimasa Nozaki; 野崎　幸正
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Current assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1990-01-23
Filing date: 1990-11-27
Publication date: 1991-12-19

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】産業上の利用分野本発明は血管新生の異常増殖を伴う各種疾患に対する予
防・虐療に有効な生理活性物質ＴＡＮ１３２３、その製
造法および用途に関する。

従来の技術血管新生は、胚発生、女性性周期による排卵または胎盤
形成なと、ヒトまたは動物の通常の生理的状態、創傷治
癒、炎症などの修復過程および毛細血管が急激に増殖、
増大して組織に対して重篤な損傷をもたらす多くの病的
状態などに起ることが知られている。このような毛細血
管の病的増加による疾患としては、眼科領域における糖
尿病性網膜症、後水晶体線維増殖症、角膜移植に伴う血
管新生、線内症、眼腫瘍およびトラコーマなどが、皮膚
科領域における乾せんおよび化膿性肉芽腫なとか、小児
科領域における血管睡および線維性血管腫などか、外科
領域における肥大性はん痕および肉芽なとか、内科領域
におけるリューマチ性関節炎および浮腫性硬化症などが
、心臓疾患におけるアテローム性動脈硬化症および各種
腫瘍なとが知られている。

特に、糖尿病性網膜症およびトラコーマにおける異常な
血管新生の増加は多くの人々を失明に追いやり、また、
リューマチ性関節炎においては関節における異常な血管
新生か関節中の軟骨の破壊を起こし多くの人を悩まして
いる。したかって、このような血管新生の異常増殖を伴
う疾患の治療、予防薬として有用な化合物の開発が望ま
れている。

また、腫瘍の急速な増殖進展は、腫瘍細胞の産生ずる血
管新生因子により誘導される新生血管形成によると考え
られており、血管新生阻害剤は各種腫瘍に対する新しい
虐療薬になると期待され、血管新生阻害剤の探索研究か
開始されている［ジェイ・フォルクマン（Ｊ　、　　Ｆ
　ｏｌｋｍａｎ）、　　アドバンンス・イン・キャンサ
ー・リサーチ（Ａ　ｄｖａｎｃｅｓ　　ｉ　ｎＣａｎｃ
ｅｒ　　Ｒｅ５ｅｒａｃｈ）、　　４３　　］　７５．
　１９８５シヨージ・クライン（Ｇｅｏｒｇｅ　　Ｋｌ
ｅｉｎ）およびシトニー・ワインハウス（Ｓ　１ｄｎｅ
ｙ　　Ｗｅｉｎｈｏｕｓｅ）編集］。

すてに、ヘパリンまたはヘパリンフラグメントとコーチ
リンをはじめとする、いわゆる、血管新生阻害ステロイ
ド（ａｎｇｉｏｓＬａｔｉｃ　　５ｔｅｒｏｉｄ）との
併用によって血管新生か阻害されることが知られている
［／エイ・フォルクマンら（Ｊ　、　　Ｆ　ｏｌｋｍａ
ｎｅｔ　　ａｌ、）、　サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）
、　　２２１７１９（１９８３）；　ジェイ・フォルク
マンら（Ｊ。

Ｆ　ｏｌｋｍａｎ　　ｅｔ　　ａｌ、　）、エナルズ・
オブ・サーンエリー（Ａ　ｎｎａｌｓ　　ｏｆ　　Ｓ　
ｕｒｇｅｒｙ）、　　２０６３７４（１９８７）コ。

さらに、アセチンンカルホン酸（Ｌ　−ａｚｅｔｉｄｉ
ｎｅ２−ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ　　ａｃｉｄ）やンスー
ハイドロキシブロリン（ｃｉｓ−ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏ
ｌｉｎｅ）なとのコラ−ケン合成阻害剤、およびコラ−
ケン・フロリン・ハイドロキンラーセ（ｃｏｌｌａｇｅ
ｎ　ｐｒｏｌｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ）の阻害
剤やコラーゲン架橋形成阻害剤とβ−サイクＣデキスト
リン・テトラデカサルフェート（βｃｙｃｌｏｄｅｘｔ
ｒｉｎ−ｔｅｔｒａｄｅｃａｓｕｌｆａｔｅ）またはヘ
パリンとの併用によって血管新生阻害作用を示すことか
報告されている［ティ・イングハーおよびンエイ・フォ
ルクマン（Ｄ　、　　ｌ　ｎｇｂｅｒ　　ａｎｄ　　Ｊ
Ｆ　ｏｌｋｍａｎ）、ラホラトリー・インへスティゲー
ション（Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　　Ｉ　ｎｖｅｓｔｉｇ
ａｔｉｏｎ）、　　５９　４４（＋９８８）］。

また、基底膜および基底膜中のコラーゲン合成か血管新
生において重要な役割をはたすことか指摘されている［
エム・イー・マラゴウタキス、エム・サーモニカおよび
エム・バノウトサコポラス（Ｍ、　　Ｅ、　Ｍａｒａｇ
ｏｕｄａｋｉｓ、　Ｍ、　　Ｓａｒｍｏｎｉｋａ　　ａ
ｎｄＭ、　　Ｐ　ａｎｏｕｔｓａｃｏｐｏｕｌｏｕｓ）
、　　シャーナル１オブ０フアーマコロンー・アンド・
エクスペリメンタル・テラボウティックス（Ｊ　、　　
Ｐ　ｈａｒｍａｃｏｌ、　　Ｅ　ｘｐ。

Ｔｈｅｒ、）、　　２４４　　７２９（１９８８）、デ
イ・イー・イングハー、シェイ・エイ・マトリ−および
ンエイ・フォルクマン（Ｄ、　Ｅ、　ｌ　ｎｇｂｅｒ、
、Ｊ＝４Ａ　、　　Ｍａｄｒｉ　　ａｎｄ　　Ｊ　、　　Ｆ　ｏ
ｌｋｍａｎ）、　　エンドクリノロン（Ｅｎｄｏｃｒｉ
ｎｏｌｏｇｙ）、　　１　］　９　１７６８（１９８６
）］。

さらに、アスペルキウス・フミガタス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　　ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）か
産生じ、従来、抗菌剤および抗原虫剤として知られてい
るフマギリン（ｆｕｍａｇｉｌｉｎ）か強力な血管新生
阻害作用を示し、かつヘパリンまたはβ−サイクロデキ
ストリンテトラテカ硫酸塩との併用によって一層効果的
に血管新生阻害作用を示すことか認められている［シェ
イ・フォルクマンおよびティ・カナマル（ＪＦ　ｏｌｋ
ｍａｎおよびＴ、　　Ｋ　ａｎａｍａｒｕ）ら、ＥＰ−
Ａ３２５１９９号公報］。

その他、合成黄体ホルモンとして開発されたステロイド
ホルモン剤メドロキンプロケステロン・アセテート（ｍ
ｅｄｒｏｘｙｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ　　ａｃｅｔａ
ｔｅ）かウサキ角膜を用いた血管新生評価系で各種腫瘍
によって誘発される血管新生を阻害することが報告され
ている［ブロン−デインゲス・オブ・ザ・ナンヨナル・
アカテミー・オブ・サイエンス・ニー・工ス９エイ（Ｐ
ｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　　ｏｒ　　ｔｈｅ　　Ｎａｔｉ
ｏｎａｌＡｃａｄｅｍｙ　　ｏｆ　　５ｃｉｅｎｃｅ、
　　Ｕ、Ｓ、Ａ、）、　　７８１１７６（１９８１）］
。また、インドメタンン（Ｉ　ｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ
）、シクロツェナｙり◆ソジウム（ｄｉｃｌｏｆｅｎａ
ｃ　　ｓｏｄｉｕｍ）、アスピリン（ａｓｐｉｒｉｎ）
などのプロスタグランジン合成阻害剤［アンチキャンサ
ー１ノサーチ（Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ　　Ｒｅ５ｅａｒ
ｃｈ）６　２５１（１９８６）］やマイトキサントロン
（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）、ビサントレン（ｂｉｓ
ａｎｔｒｅｎｅ）などのアンスラセン系の抗ガン剤［バ
イオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・
コミュニケーションＣＢ　ｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　　＆
　　Ｂ　１ｏｐｈｙｓｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ　　Ｃ
ｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ）、　　１４０　９０１（１
９８６）］にも血管新生阻害活性が認められている。

また、最近になり、ゴールド・ソシウム・チオマレイド
（ｇｏｌｄ　　ｓｏｄｉｕｍ　　ｔｈｉｏｍａｌａｔｅ
）、オーラノフィン（ａｕｒａｎｏｆ　ｉｎ）などの金
を含有する抗すューマチ薬が血管新生阻害活性を示すこ
とが明らかにされ、これらの化合物の抗リューマチ作用
の少なくとも一部は血管新生阻害活性が関与しているこ
とか示唆された［ジャーナル・オフ・クリニカル・イン
ベステイケーション（Ｊ　ｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃ１ｉ
ｎｉｃａＣ１１ｎｉｃａｌＩｎｖｅｓｔｉ、　　７９　
１４４０（１９８７）：バイオケミカル・アンド・バイ
オフィジカル・リサーチ・コミュニケーション（Ｂ　ｉ
ｏｃｈｅｍｉｃａｌ　　＆Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ　　
Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　　Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ）１
５４　２０５（１９８８）］。

以上の非タンパク性の血管新生阻害剤の他に、タンパク
性の血管新生阻害剤についても幾つかの報告、例えば、
軟骨由来の因子［サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、　　
１９３　７０（１９７６）］、プロタミン（ｐｒｏｔａ
ｍｉｎｅ）　［８イチ＋　−（Ｎ　ａｔｕｒｅ）、　　
２９７３０７（１９Ｂ２）］、ヒト網膜色素上皮細胞由
来因子［アーカイブズ・オフ・オフタルモロジー（Ａｒ
ｃｈ、　Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ、）、　　１０３　１８
７０（１９８５）］、インターフェロン［キャンサー・
リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ　　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）、　　
４７　５１５５（１９８７）］などが知られているが、
医薬としての実用性には乏しいと考えられる。

７発明が解決しようとする課題血管新生阻害作用を示す化合物については、前記のごと
くいくつかの報告があるが、未だその阻害活性は臨床応
用に洪するには不充分であると考えられる。したがって
、臨床的に使用しうる、低分子の強い血管新生阻害剤の
取得が強く望まれている。

課題を解決するための手段このような事情に鑑み、本発明者らは阻害活性がより強
力で副作用の少ない新規な血管新生阻害剤を目的として
多数の微生物を分離、探索したところ、ある種の微生物
が新規な血管新生阻害剤を産生ずることを見い出した。

該微生物がストレプトミセス属に属すること、該微生物
を適宜の培地に培養することによって血管新生を強く抑
制する４種の活性物質（ＴＡＮ−１３２３Ａ、Ｂ、Ｃ。

Ｄ）を菌体中に蓄積しうることなどを認めた。これら活
性物質を単離し、その物理化学的性質から、当該活性物
質のうち２種（ＴＡＮ−１３２３ｃおよびＤ）が次式で表わされる新規物質であることを確かめ、これらの知
見に基づいて、さらに研究を続けた結果、本発明を完成
するにいたった。

すなわち、本発明は、（１）新規生理活性物質ＴＡＮ−１３２３ｃおよびＤま
たはその塩、（２）ストレプトミセス属に属し、生理活性物質ＴＡＮ
−１，３２３ｃおよび／またはＤを生産する能力を有す
る微生物を培地に培養！２、培養物中に生理活性物質Ｔ
ＡＮ−１３２３Ｃおよび／またはＤを生成、蓄積せしめ
、これを採取することを特徴とする生理活性物質ＴＡＮ
−１３２３Ｃおよび／またはＤの製造法、および（３）生理活性物質ＴＡＮ−１３２３Ａ、Ｂ、Ｃおよび
／またはＤまたはその塩を含有する血管新生阻害剤、に関するものである。

本発明の生理活性物質ＴＡＮ−１３２３Ａ、Ｂ。

Ｃおよび／またはＤ（以下、単にＴＡＮ−１３２３と略
称することもある）を生産する菌としては、ストレプトミセス（Ｓ　ｔ
ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属し、ＴＡＮ−１３２３を
産生ずる能力を有する微生物であればいずれのものでも
よい。

その例としては、たとえば宮崎県の海岸て採集された土
壌から分離されたストレプトミセス・エスピー（Ｓ　ｔ
ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　　ｓｐ、　）Ｓ　−４５６２８
株（以下ｒＳ−４５６２８株」と略称することもある）
が挙げられる。

Ｓ−４５６２８株について、インターナンヨナル・ンで
−ナル・オフ・ンスティマティノク・ハタテリオロシ−
［Ｉ　ｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　　Ｊ　ｏｕｒｎａｌ
　　ｏｆＳｙｓｔｅｍａｔｉｃ　　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ
ｏｇｙ）、　　１６（３）３１３−３４０（１９６６）
］記載の方を去に準して検討した性状は下記のとおりで
ある。なお、培地上の所見は、特に記載のないかきり、
２８°Ｃにおいて１４日間培養し、観察したものである
。

（１）形態的特徴本菌株の気菌糸はよく沖長分技した基土菌糸から単純分
枝状に伸長しており、その先端には開放したらせん状の
胞子の連鎖（通常１０個以上）か認められるか、輪生糸
は認められない。胞子は卵形で大きさは０．６　Ｘ　０
．８〜０．９μｍで、その表面はとげ状である。

（２）各種培地上の生育状態各種培地における生育の程度（Ｇ）、気菌糸（Ａ　Ｍ）
の着色と色調、裏面の色調（Ｒ）、可溶性色素の有無と
その色調（ｓｐ）などについては第１表に示すとおりで
ある。なお、色の記載についてｔカッコ内に示す標準色調記号はコンテイナー・コーボレ
ー／ヨン・オフ・アメリカ（Ｃｏｎｔａｉｉ＋ｅｒＣｏ
ｒｐｏｒａｔｉｏｎ　　ｏｆ　　Ａｍｅｒｉｃａ）のす
０カラー３ハーモニー０マニユアル（Ｔ　ｈｅ　　Ｃｏ
ｌｏｒ　　ＨａｒｍｏｎｙＭａｎｕａｌ）第４版、１９
５８年によった。

２（３）生理的性質ア）生育温度範囲（酵母エキス・麦芽エキス寒天培地、
１週間観察）＝　１３〜４４°Ｃイ）セラチンの液化　
　、陰性つ）澱粉の加水分解　　・陽性工）脱脂乳の凝固　　　、陰性脱脂乳のペプトン化・陽性オ）メラニン様色素の生成チロ７ン寒天　陽性ペプトン・酵母エキス・鉄寒天：陽性（４）炭素源の同化性（プリートノ＼ム・ゴツトリーブ
寒天培地）各種炭素源に対する同化性は第２表に示すとおりである
。

第２表十二同化する　　　−・同化しない（５）細胞壁組成全細胞加水分解物中の２，６−ジアミノピメリン酸はエ
ルエル型（Ｌ　Ｌ　　ｔｙｐｅ）である。

以上の性状から、Ｓ−４５６２８株はストレプトミセス
属に属することが明らかである。

このストレプトミセス・エスピー・５４５６２８株は財団法人発酵研究所に平成１年１２月１
３日から寄託番号ＩＦ０１４９Ｂ、０として寄託されて
おり、また、本微生物は、日本国通商産業省工業技術院
微生物工業技術研究所（ＦＲＹ、日本国茨木県つくば不
束１丁目１番３号）に平成２年１月１０日からブタペス
ト条約の５下、寄託番号ＦＥＲＭ　　Ｂｌ”２７１Ｂとして寄託さ
れている。

本発明方法に用いられるストレプトミセス属放線菌は、
一般にその性状が変化しやすく、例えば紫外線、Ｘ線、
化学薬品（例、ニトロソグアニジン、エチルメタンスル
ホン酸）などを用いる人工変異手段で容易に変異しうる
ちのであるが、どの様な変異株であっても、本発明の対
象とするＴＡＮ−１３２３の生産能を有するものはすべ
て本発明方法に使用することができる。

ＴＡＮ−１３２３を生産する菌の培養に際しては、炭素
源としては、例えば、グルコース、麦芽糖、乳糖、廃糖
蜜、油脂類（例、大豆油、オリーブ油など）、有機酸類
（例、クエン酸、コハク酸、グルコン酸など）など生産
菌が資化しうるものが適宜用いられる。窒素源としては
、例えば、大豆粉、綿実粉、コーン・ステイープ・リカ
ー、乾燥酵母、酵母エキス、肉エキス、ペプトン、尿素
、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、塩化アンモニ
ウム、リン酸アンモニウムなどの有ｔａ窒素化６合物や無機窒素化合物が利用できる。また、無機塩とし
ては、例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、炭酸カ
ルシウム、硫酸マグネシウム、リン酸−カリウム、リン
酸二ナトリウムなどの通常放線菌の培養に必要な無機塩
類が単独もしくは適宜、組合せて使用される。また、Ｔ
ＡＮ−１３２３を生産する菌の資化しうる硫黄化合物、
例えば硫酸塩（例、硫酸アンモニウムなど）、チオ硫酸
塩（例、チオ硫酸アンモニウムなど）、亜硫酸塩（例、
亜硫酸アンモニウム）などの無機硫黄化合物、含硫アミ
ノ酸（例、シスチン、システィン、Ｌ−チアゾリジン−
４−カルボン酸）、ヒポタウリン、含硫ペプチド（例、
グルタチオン）などの有機硫黄化合物またはこれらの混
合物を培地に添加すると、目的物の生成量が増大する場
合がある。

また、硫酸第１鉄、硫酸銅などの重金属類、ビタミンＢ
、、ビオチンなどのビタミン類なども必要に応じて添加
される。さらに、シリコーンオイルやポリアルキレング
リコールエーテルなどの消泡剤や界面活性剤を培地に添
加してもよい。その他、生産菌の発育を助け、ＴＡＮ−
１３２３の生産を促進するような有機物や無機物を適宜
に添加してもよい。

培養方法としては、一般に、抗生物質の生産方法と同様
に行なえばよく、固体培養でも１ｆｌｋ体培養てもよい
。液体培養の場合は静置培養、撹拌培養、振盪培養、通
気培養などいずれを実施してもよいか、特に、通気撹拌
培養が好ましい。また、培養温度は約１５℃ないし３５
°Ｃの範囲が好ましく、さらに好ましくは約２４°Ｃな
いし２８°Ｃてあり、培地のｐＨは約４ないし８の範囲
、さらに好ましくは約６ないし７の範囲であり、約８時
間ないし１６８時間、好ましくは約２４時間ないし１４
４時間培養する。

生成した生理層性物質ＴＡＮ７１３２３は、培養濾液中
よりも、むしろ菌体中に主に存在するので、培養物を遠
心分離あるいは濾過などの方法て上清液と菌体とに分離
した後、その菌体をメタノール、アセトン、ブタノール
、酢酸エチルなどの有機溶媒を用いて抽出、精製するか
、または、培養物に直接上記のような有機溶媒を添加し
て得られる抽出ｌ戊から精製することも出来る。

ＴＡＮ−１３２３を培養液から採取するには、当該物質
か中性あるいは酸性脂溶性物質であるので、そのような
微生物代謝産物を採取する為に通常用いられる分離・精
製手段か適宜利用される。

例えば、夾雑物との溶解度の差を利用する方法、活性炭
、非イオン性ハイポーラス樹脂、ンｌ）カケル、アルミ
ナ、デキストランゲル等の各種担体を用いるクロマトグ
ラフィーなどかそれぞれ単独または組合わせて利用され
る。

培養物中に生産されるＴＡＮ−１３２３を採取する方法
を具体的に説明すると、まず、培養液をハイフロス−パ
ーセルなとの濾過助剤ヲ用いて濾過して得られた菌体に
、メタノールまたはアセトンのような当該化合物を溶解
し得る有機溶媒を加えて撹拌、抽出した後、濾過助剤を
用いて濾過する。抽出ｌ慮肢を濃縮し、ｐＨを中性とし
て酢酸エチルのような水と混和しない有機溶媒で抽出す
る。

抽出に用いられる有機溶媒としては、酢酸エチル、９酢酸ブチルのようなエステル類、クロロポルム、塩化メ
チレンのようなハロケン化炭化水素類、ｎブタノール、
１−ブタノールのようなアルコール類なとが挙げられる
。

抽出岐を水洗した後、ｔａ縮して得られる粗粉末をシリ
カケルのカラムクロマトグラフィーに付す。

展開溶媒としては、例えば、クロロホルム−メタノール
、あるいはヘキサン−酢酸エチルなどの屏合溶媒か用い
られ、順次、各々の溶媒系中の極性溶媒の比率を増して
いくことにより、他の夾雑物と分離して溶出することが
できる。

例えば、りロロホルムーメタノールの混合溶媒を用いた
場合には、最初に化合物ＴＡＮ１３２３Ａが、ついで、
ＴＡＮ−１３２３Ｂ。

ＴＡＮ−１３２３Ｃ，最後にＴＡＮ−１３２３Ｄの順に
溶出される。各々の成分は、溶出画分を濃縮した後、メ
タノール−水のような溶媒から結晶化することにより単
離される。生産量が少なく夾雑物が多くて、−同で精製
が困難な場合、さらにソリ力ゲルのクロマトグラフィー
を繰返すことに０より、結晶を得ることかてきる。

このようにして単離されたＴＡＮ−１３２３ｃおよびＤ
の物理化学的性質は次に示す通りである。

（］）ＴＡＮ−１３２３Ｃ１）形状　無色結晶２）融点　１６７〜１６８５°Ｃ３）比旋光度・［α１ドー３１．９°（Ｃ＝０．４１Ｄ
ＭＦ）４）分子式・Ｃ４５８７４０，４５）元素分析値（Ｃ４５Ｈ７，○１．−１／２Ｈ２０と
して）・計算値：　Ｃ，６３，７３，Ｈ，８，９１実測
値・Ｃ，６３，７６Ｈ，８，９８６）紫外線吸収スペクトル λ’：ｇＨ（Ｅに）：　２４４（４９０）、２８４（２
３０）ｎｍ７）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ錠法による）第１図
に示す通り。

８）’Ｈ核磁気共鳴スペクトル（３００Ｍ　Ｈｚｄ、、
−ＤＭＳＯ中）第２図に示す通り。

９）　１３Ｃ核磁気共鳴スペクトル（７５ＭＨｚｄ６−
ＤＭＳＯ中でのケミカルシフト、δｐｐｍ）１６４．０
（ｓ）、　１４２．１　（ｓ）、　１４１．６（ｓ）１
４１．０（ｄ）、　１３２．、９（ｄ）、　１３０．８
（ｄ）１２９．９（ｓ）、　１２９．０（ｄ）、　１２
７．３（ｄ）１２６、６（ｄ）、　１２２．４（ｄ）、
　９９．３（ｄ）。

９５．４（ｄ）、　８２．０（ｄ）、　７８．２（ｄ）
、　７４．６（ｄ）、７４．３（ｄ）、７２．１（ｄ）
、７２．１（ｄ）。

７１．８（ｄ）、　７１．０（ｄ）、　７０．７（ｄ）
、　６９．３（ｄ）、　６８．７（ｄ）、　５８．６（
ｑ）、　５５．１　（Ｑ）。

４５．５（ｔ）、４３．７（ｄ）、４２．３（ｄ）、４
１．０（ｄ）、　３７．９（ｄ）、　３６．７（ｔ）、
　３４．７（ｄ）。

３４．６（ｄ）、２２．１（ｔ）、２１．９（ｑ）、　
１７．８（ｑ）、　１７．４（ｑ）、　１７．２（ｑ）
、　１６．２（ｑ）１３．９（ｑ）、　１３．５（ｑ）
、　１１．９（ｑ）、　９．８（ｑ）。

６．９（ｑ）ただし、Ｓ：シングレット（ｓｉｎｇｌｅｔ）、ｄ：ダ
ブレット（ｄｏｕｂｌｅｔ）、ｔ・トリプレット（ｔｒ
ｉｐｌｅｔ）、ｑ、クアルテット（ｑｕａｒｔｅｔ）を
示す。

１０）呈色反応陽性ニリンモリブデン酸、ヨウ素、硫酸陰性、ニンヒド
リン、バートン１１）溶解性易溶：酢酸エチル、メタノール、ジメチルスルホキシド
、ジメチルホルムアミド難溶：へキサン、水１２）薄層クロマトグラフィー（担体、シリカゲルガラ
スプレート６０　Ｆ　ｔｓａ、０．２５ｍｍ、西独メル
ク社製）：１３）酸性、中性、塩基性の別：中性１４）構造式：％式％（））４）分子式：　Ｃ４３Ｈ６６０１３５）元素分析値（Ｃ４ｓＨｅｅｏ１＊・ｌ／２Ｈ，Ｏと
して）：計算値：　Ｃ，６４，５６，Ｈ，８，４４実測
値：　Ｃ，６４，４８，Ｈ，８，７０６）紫外線吸収ス
ペクトル λ丑Ｈ（Ｅ巴）：　２１１（３７５）、２４３（５６０
）、　２８４（２５０）ｎｍ７）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ錠法による）：第３
図に示す通り。

８）１Ｈ核磁気共鳴スペクトル（３００ＭＨｚ、重ＤＭ
ＳＯ中）：第４図に示す通り。

９）１３ｃ核磁気共鳴スペクトル（７５ＭＨｚ、重ＤＭ
ＳＯ中てのケミカルシフト、δｐｐｍ）　：１６５．６
（ｓ）、１６４．２（ｓ）、１６４．１（ｓ）。

１４２．２（ｓ）、　１４１．６（ｓ）、　１４１．１
（ｄ）４１３４、７（ｄ）、　１３３．０（ｄ）、　１３２．６
　（ｄ）。

１３０．３（ｄ）、　１３０．０（ｓ）、　１２９．２
（ｄ）。

１２７．８（ｄ）、　１２６．６（ｄ）、　１２２．５
（ｄ）９９．３（ｓ）、８１．９（ｄ）、７８．２（ｄ
）、７４．４（ｄ）、７４．４（ｄ）、７４．１（ｄ）
、７２．１（ｄ）。

６９．４（ｄ）、５８．６（ｑ）、５５．１（ｑ）、４
５．６（ｔ）、　４３．８（ｄ）、　４２．１　（ｄ）
、　４０．２（ｄ）。

３８．０（ｔ）、３７．９（ｄ）、３４．７（ｄ）、３
４．７（ｄ）、　２２．２（ｔ）、　２２．０（ｑ）、
　１７．４（ｑ）。

１７．２（ｑ）、　１６．２（ｑ）、　１３．９（ｑ）
、　１３．０（ｑ）、　１１．９（ｑ）、　９．８（ｑ
）、　６．９（ｑ）１０）呈色反応：陽性ニリンモリブデン酸、ヨウ素、硫酸陰性：ニンヒド
リン、バートン１１）溶解性：易溶：酢酸エチル、メタ／−ル、ジメチルスルホキシド
、ジメチルホルムアミド難溶：へキサン、水１２）薄層りロマトグラフィ−（担体、シリカゲルガラ
スプレート６０　Ｆ　、、、、０．２５ｍｍ、西独メル
ク社製）１３）酸性、中性、塩基性の別・酸性１４）構造式化合物ＴＡＮ−１３２３ＣおよびＤは、１８員環マクロ
ライドであるコンカナマイシン（ｃｏｎｃａｎａｍｙｃ
ｉｎ）系に属する新規物質てあ１り、また、併産される
ＴＡＮ１３２３ＡおよびＢはそれぞれコンカナマイシン（ｃｏ
ｎｃａｎａｍｙｃｉｎ）ＣおよびＡと同定された［ンで
−ナル・オフ・アンチビオティクス（ＪＡｎｔｉｂｉｏ
ｔｉｃｓ）、　　８７　１３３３（１９８４）］。

化合物ＴＡＮ−１３２３Ｄは酸性物質であるので、それ
自体公知の方法て、ナトリウム塩、カリウム塩、カル／
ラム塩等の金属塩、アンモニウム塩あるいはトリエチル
アミン塩などの有機アミンとの塩など、生理学的に許容
される塩を形成させることかできる。

ＴＡＮ−１３２３（Ａ、ＢＸＣおよびＤ）は強力な血管
新生阻害活性を示し、先に記載した血管新生の異常増殖
に基つく多くの疾患の予防治療薬として極めて有用であ
る。また、強い血管新生阻害作用に基つく抗腫瘍活性も
期待しうる。

該化合物は経口的または非経口的に哺乳動物（例えば、
う、１・、うさぎ、さるおよびヒト）に錠剤、顆粒剤、
カプセル剤、ンロノブ剤、散剤、注射剤、局所投与のク
リームまたは点眼薬などの形態に調剤されて投与される
。形削により活性物質と共に用いられる製薬組成物には
、慣用されている適当な添加剤（製剤原料）、例えば、
賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、安
定化剤などか含まれていてもよい。また組成物は徐放性
ポリ７マーなとを用いたサスティント・レリーズ（ｓｕｓＬａ
ｉｎｅｄ　　ｒｅｌｅａｓｅ）の手法を用いて投与され
てもよい。例えば、組成物をエチレン−酢酸ビニル共重
合体ベレット（ｅｔｈｙｌｅｎｅ　　ｖｉｎｙｌ　　ａ
ｃｅｔａｔｅｃｏｐｏｌｙｍｅｒ　　ｐｅｌｌｅｔ）に
取り込ませて、そのペレットを治療すべき組織中に外利
的に移植することかてきる。

例えば、腫瘍や糖尿病性網膜症の治療に用いる場合、薬
理学的に許容されるキャリで−を含有する組成物を経口
的または静脈内圧射て投与される。

さらに具体的には、患者の状態、疾患の程度によるか、
例えば１日５０μ９〜５０ｍｇを２〜３回に分けて経口
的または非経口的に投与するのが望ましい。ＴＡＮ−１
３２３Ａ、Ｂ、ＣまたはＤはこのような投与量において
重篤な毒性は認められない。前記網膜症およびトラコー
マの治療には点眼薬としても用いられ、患者の状態によ
り日に１〜４回の頻度で眼に滴下作用することができる
。

作用本発明化合物の血管新生阻害活性を、無数鶏胚２８漿尿膜（Ｓ　ｈｅｌｌ　−１ｅｓｓ　ｃｈｏｒｉｏａｌ
ｌａｎｔｏｉｃ　ｍｅｍｂｒａｎｅ。

ＣＡＭ）を用い、ンエイ・フォルクマン（ＪＦｏｌｋｍ
ａｎ）らの方を去［アール・クラムら（Ｒ，Ｃｒｕｍｅ
ｔ、　ａｌ）、　サイエンス（Ｓ　ｃｉｅｎｃｅ）、　
　２３０１３７５（＋９８５）］を若干改変した方法に
よって測定した。すなわち、３日間培養した鶏受精卵の
卵殻を割って、得られた鶏胚をプラスチック製カップ内
てポリエチレンを用いてハンモック状につるし、無菌的
にさらに６日間培養を続けた。

検定試料の調製は以下の通りに行った。すなわち、無菌
的に調製した本発明化合物のメタノール溶酸と１％メチ
ルセルロース水溶液を等容にまぜ合セ、その混合溶液１
０μＱをポリプロピレンシート上に静かに滴下して、こ
れを無菌的に風乾すると、試料を含有する直径約４＋＋
＋ｍのメチルセルロース・ティスフか得られる。卵割後
培養６日目の鶏胚上に、前記の方法で調製したメチルセ
ルロース・ティスフを静かにのせて、さらに鶏胚の培養
を無菌的に続け２４時間後及び４８時間後に、ティスフ
の周辺に形成された血管新生阻止ソー７を顕微鏡下（Ｘ
２０ＳＳＭＺ−１０ＳＮｉｋｏｎ）に観察した。血管新
生阻害活性（％）は、試験に用いた全ティスフの数当り
、血管新生阻害ゾーンか認められたディスクの比で算出
した。

本発明化合物の血管新生阻害活性を前記の無殻鶏胚漿尿
膜（ＣＡＭ）法により測定したところ、第３表に示すと
おり、極めて強い血管新生阻害作用を有することか明ら
かにされた。

＊２４時間後の測定値寒施週以下に、実施例をあげて本発明をさらに具体的に説明す
る。なお、実施例中、特に断らない限り「％」は重量％
である。

実施例１グルコース２％、可溶性澱粉３％、コーン・スチープ・
リカーｉ％、生大豆粉１％、ポリペプトン０．５％、塩
化ナトリウム０．３％および沈降性炭酸カルシウム０．
５％（ｐＨ７，０）からなる種培養培地５００ｍＱを２
Ｑ容坂ロフラスコに分注し、１２００Ｃで２０分間ｌ威
菌したのち、ストレプトミセス・エスピーＳ−４５６２
８株（ＩＦ○１４９８０、ＦＥＲＭ　　ＢＰ−２７１８
）を接種し、２８°Ｃて４０時間往復振盪機上で培養し
た。

かくして得られた種培養物５００ｍｆ２を上記と同一組
成の種培養培地３ＯＮ（たたし、消泡剤アクトコール０
．０５％含む）を含む５０Ｑ容タンクに移植し、２８°
Ｃで４２時間通気撹拌培養［通気量１００％（３０Ｃ／
分）、撹拌・毎分２８０回転コした。

かくして得られた種培養物６Ｑをグルコース０５％、デ
キストリン５％、脱脂大豆２％、コーン・グルテン・ミ
ール１５％、沈降性炭酸力１ルシウム０．７％およびアクトコール０．０５％（ｐＨ
７，０）からなる主培養培地１２０（を含む２００Ｑ、
容タンクに移植味２８℃で６６時間通気撹拌培養［通気
量ｉｏｏ％（１２０Ｍ分）、撹拌。

毎分１５０回転コし、培養物９５Ｑを得た。

実施例２実施例１で得られた培養液（９５Ｑ）をハイフロス−バ
ーセル（Ｊ　ｏｈｎｓ−Ｍａｎｖｉｌｌｅ社、米国）を
濾過助剤として用いて濾過した。菌体にメタノール（１
００１２）を加え、室温で１時間撹拌し、ハイフロス−
バーセルを用いて濾過し、得られた抽出濾波を約２’Ｏ
Ｑ迄濃縮した後、ｐＨを７０として酢酸エチル（１０Ｑ
）で２回抽出した。

酢酸エチル層（１８Ｑ）を水洗（１０１２）した後、濃
縮して粗粉末（４３，５９）を得た。この粗粉末をシリ
カゲル（５００９、メルク社、西独）のカラムクロマト
グラフィーに付し、クロロホルムーメタノールノ混合溶
媒（３０：１．３．０（１，ｒｒ、　１−６・２０１．
３．０（、ｆｒ、７−１２；　　］　Ｏ：１．３．０Ｑ
、ｆｒ、１３−１８；　５：Ｉ、３．０Ｑ、　ｆｒ、　
１９２２４）で展開した。フラクションＮｏ、６に；よ化合物
ＴＡＮ−１３２３Ａ、フラクションＮｏ７〜１１にはＴ
ＡＮ−１３２３Ｂか溶出された。

フラクションＮｏ、１７〜２４の画分を集めて濃縮する
と、ＴＡＮ−１３２３Ｄの粗結晶（１５８ｇ）か得られ
、これをざらにメタノール−水から再結晶すると、ＴＡ
Ｎ−１３２３Ｄの無色鱗片状結晶（９１５ｘｙ）が得ら
れた。

フラクションＮｏ、１３〜１５の画分を集め濃縮すると
、ＴＡＮ−１３２３Ｃを含む粉末（１，４８０が得られ
た。これをシリカゲル（５０９）カラムクロマトグラフ
ィーに付し、クロロホルム−メタノール（３０：１．３
００＋（！、ｆｒ、１−６：　２０：１．６００ｍＱ、
　ｒｒ、　？　−］、　８）の混合溶媒で展開し、フラ
クションＮｏ、１６〜１８の画分を集めて濃縮し、メタ
ノール−水から結晶化すると、ＴＡＮｌ　３２３Ｃ（１
４１ｍ９：が無色鱗片状結晶として得られた。

発明の効果本発明の生理活性物質ＴＡＮ−１３２３Ａ、Ｂ。

ＣおよびＤは血管新生阻害作用を有しており、血管新生
の異常増殖を伴う各種疾患、とりわけ腫瘍の予防・治療
に有用である。

【図面の簡単な説明】

第１図はＴＡＮ−１３２３Ｃの赤外線吸収スペクトルを
、第２図はＴＡＮ−１３２３Ｃの１ＨＮＭＲスペクトル
を、第３図はＴＡＮ−１３２３Ｄの赤外線吸収スペクト
ルを、第４図はＴＡＮｌ、　３２３　Ｄの’ＨＮＭＲス
ペクトルをそれぞれ示す。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）次式で表わされる生理活性物質ＴＡＮ−１３２３
ＣまたはＤあるいはその塩。 ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中Ｒは、式▲数式、化学式、表等があります▼また
は式▲数式、化学式、表等があります▼で表わされる基を
示す。］
（２）ストレプトミセス属に属し、生理活性物質ＴＡＮ
−１３２３Ｃおよび／またはＤを生産する能力を有する
微生物を培地に培養し、培養物中に生理活性物質ＴＡＮ
−１３２３Ｃおよび／またはＤを生成、蓄積せしめ、こ
れを採取することを特徴とする生理活性物質ＴＡＮ−１
３２３Ｃおよび／またはＤの製造法。
（３）生理活性物質ＴＡＮ−１３２３Ａ、Ｂ、Ｃおよび
／またはＤを含有する血管新生阻害剤。