JPH0330697A - 試薬系におけるアスコルビン酸塩妨害の減少のための薬剤及びそれに関連する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 １亙Ｌ１１ ■、産業上の利用分野 本発明は、試薬系、特にオキシダーゼ／ペルオキシダー
ゼ結合反応、又は同様の種類のレドックス化学を用いる
試験系におけるアスコルビン酸塩妨害を除去するための
薬剤及び方法に関する。本発明は、基質がアスコルビン
酸塩のような還元体に感受性である酵素／基質反応を伴
う試薬系に用いることもできる。したがって、本発明は
、グルコース、）替血、コロステロール、トリグリセリ
ド及び尿酸、並びにその他の分析物の測定のための分析
物試験系におけるアスコルビン酸塩の妨害を除去するた
めに用い得る。さらに、本発明の薬剤及び方法は、水不
溶性セリウム（ＩＶ）化合物の使用を包含する。

ＩＩ　、従来技術の考察 アスコルビン酸は、果物及び野菜のような多数の食物中
に天然に存在する重要かつ十分公知の栄養素であって、
食物添加物又はビタミン補給体として安価に合成するこ
ともできる。その結果、アスコルビン酸は相対的に豊富
であって、一般の人々は必要以上のアスコルビン酸を摂
取しがちである。

過剰量のアスコルビン酸は一般的に無害である。という
のは、身体はその短期間の需要に見合うに十分な量のア
スコルビン酸のみを吸収し、その過剰量を身体の排尿系
によって迅速に一掃するからである。その結果、アスコ
ルビン酸は、医学分析に用いる尿試料中にしばしば見出
される。

残念ながら、尿中のアスコルビン酸は、現存の多数の尿
試験に対する望ましくない妨害となり得る。尿試験は、
概して、一般の人々を診断及び治療する際の重要な医学
的な手段であり、したがって、近年、この問題に多（の
注意が集まっている。

尿試験はしばしばレドックス指示薬を包含し、これらの
指示薬は、一般に、その還元形態で試験系に混入される
。指示薬は、酸化剤の存在によりそれらが還元状態から
酸化状態に移る時に色を変えるために、酸化されると変
色し、したがって「レドックスｊ指示薬と呼ばれる。

多数の試験系において、問題の分析物は直接又は間接的
に試験系のレドックス指示薬の酸化を引き起こし、それ
によって分析物の存在と相関する検出可能な応答を引き
起こす、言い替えれば、試験系に適当な分析物を加えた
場合、レドックス指示薬は以下の反応を行う： Ｉ　ｒ　ｓ　６−１゜８　＋　少なくとも１個の電子（
式中、■１．６は還元状態の指示薬であり（陰性の色応
答）　、　１．、は酸化状態の指示薬である（陽性色応
答）。

しかしながら、溶液中のアスコルビン酸は次のように反
応する： アスコルビン酸　アスコルビン酸塩　水素イオン（式中
、ＡはＣ−８６０４と定義される）、アスコルビン酸塩
は、電子を供与し、それによって電子を受容する物質を
還元し得るために、還元体である： このようにして、アスコルビン酸塩は、それが酸化形態
である場合は指示薬を還元することによりレドックス指
示薬を妨害し得るし、それによって意図した変色を阻害
し、「偽陰性Ｊ　（誤って陰性となること）を引き起こ
す。

多くの方法が試みられてきたが、その中には上首尾に、
アスコルビン酸がある試験系のレドックス指示薬に及ぼ
し得る悪作用を除去する方法もある。首尾よく行われた
一方法は、Ｍａｙａｍｂａｌａ−Ｍｗａｎｉｋａ等によ
り米国特許第４，５８７．２２０号に開示されているが
、この場合、第二鉄錯体はヒドロペルオキシドと化合し
て、アスコルビン酸塩掃去剤として作用する。この掃去
剤系は、レドックス指示薬のアスコルビン酸塩による還
元を防止する。

Ｍａｙａｍｂａｌａの場合、Ｆ　ｅ　＋ｓはＨＥ　Ｄ　
Ｔ、Ａ（Ｎ−２−ヒドロキシエチルエチレン−ジアミン
三酢酸）のような鉄キレート化合物と錯体を形成し、ア
スコルビン酸と反応する。鉄（ＩＩＩ　）キレート化合
物は、以下のようにアスコルビン酸を掃去する： Ｍａｙａｍｂａｌａの掃去剤は、アスコルビン酸中の第
二アルコール基をケトンに酸化し、このようにしてアス
コルビン酸を、レドックス指示薬系を妨害しない非還元
性化合物に転換する。しかしながら、Ｆ　ｅ　（ＩＩ　
）　−［（Ｅ　Ｄ　Ｔ　Ａは、以下のように、ペルオキ
シド又はヒドロペルオキシドを用いてＦ　ｅ　（ＩＩＩ
　）　−ＨＥ　Ｄ　ＴＡにリサイクルされる：ラジカル
　イオン その結果中じる水酸化物ラジカルは、以下の反応： ＋１０’　　＋　　　１個の電子　　→　１１０−によ
って電子を受は取ることができ、したがって酸化剤とし
て作用し得る。その結果、指示薬がその還元（本来の）
形態である場合、水酸化物ラジカルはレドックス指示薬
を酸化することができ、それによって、問題の分析対象
物が存在するか否かにかかわらず、変色を引き起こす。

その結果として、アスコルビン酸による偽陰性を防止す
る際に、Ｍａｙａｍｂａｌａのアスコルビン酸掃去剤は
望ましくない偽陽性を生じ得る。アスコルビン酸掃去剤
系は１つの問題を解決せんとして他の問題を生じる。

Ｍａｙａｍｂａｌａの特許は、掃去剤系の酸化作用を最
小限にするために慣用緩衝液による試験系のｐＨの調節
を示唆している。事実、酸化反応は通常酸触媒性であり
、異なる酸化反応は異なる動的相互作用を伴い得るため
、アスコルビン酸掃去剤系による指示薬の酸化を実質的
に促進することなく分析対象物による指示薬の酸化を促
すｐＨを見出し得る。

Ｍａｙａｍｂａｌａの特許は、試薬系を２つの浸漬溶液
に分ける乾性層フォーマットをも示唆している。

一方の浸漬液を支持体上に包含せしめて乾燥し、その後
第二の浸漬液も支持体上に包含せしめて、乾燥する。し
たがって、Ｍａｙａｍｂａｌａは、所望の酸化反応が望
ましくない酸化反応の優位を占める方法で、試薬系のあ
る種の成分が乾性フォーマットにおいておそらく分離さ
れ得る、ということを示唆している。

しかしながら、ｐｌ（調節が全ての試薬系に対して有益
であると立証され得るわけではなく、乾性相系を生じる
ための多重浸漬工程が全ての試薬系に対して常に実際的
又は実行可能であるとは限らない。さらに、液体フォー
マットは、いくつかの場合においては、乾性相フォーマ
ットより望ましいことがある。

その結果として、レドックス指示薬系の信頼性に悪影響
を及ぼさずにアスコルビン酸塩又は同様の種類の還元体
による妨害を除去し得る系を提供することが、本発明の
目的である。

さらに本発明の目的は、溶液形態で用い得る、又はある
浸漬法を用いて試薬ストリップ中に包含せしめ得るアス
コルビン酸塩耐性試験系を提供することである。

本発明のその他の目的及び特徴は、以下の明細書、特に
好ましい実施例の詳細な説明及び特許請求の範囲を読め
ば、当業者には明らかになる。

ＩＩＩ　、情報開示 Ｋａｍｉｎａｇａｙａｓｈｉ等”Ａ　Ｃｏｎｔａｉｎｅ
ｒ　ｆｏｒ　ＳａｍｐｌｅＡｎａｌｙｓｉｓ　Ｂａ５ｅ
ｄ　ｏｎ　Ｅｎｚｙｍｉｃ　ａｎｄ　Ｄｉａｚｏ　Ｃｏ
ｕｐｌｉｎｇＲｅａｃｔｉｏｎｓ　、　　日本国特許出
願第８４１５３４７８号、３月２２日（１９８４）は、
アスコルビン酸妨害を実質的に伴わずに尿中グルコース
を測定するための用具としての、メチルセルロース（２
，５％）及びＮ　ａ　Ｉ　Ｏ４（１０ｍｇ／−）を含む
溶液で処理した耐水性紙コツプの使用を記載している。

Ｔ　ｏ　ｍ　［”Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ”；　　欧州
特許出願筒１０３．９５８号、３月２８日（１９８４）
］は、検出可能顔料の生成を触媒するためにベルオキシ
ターゼを用いる試薬ストリップ免疫試験法を開示してい
る。試薬固定後に過ヨウ素酸塩に吸水性支持体を含浸し
て、試料中のアスコルビン酸塩による妨害を低減又は除
去する。

”Ｍｅｔｈｏｄ　　ａｎｄ　　Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ　
　Ａｇｅｎｔｓ　　ｆｏｒ　　ｔｈｅＤｅｔｅｃｔｉｏ
ｎ　ｏｆ　Ｒｅｄｏｘ　Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ　　（欧州
特許出願第００３７０５６号、１９８１年３月２４日）
には、アスコルビン酸を酸化するためのヨウ素酸塩の使
用が記載されている。過ヨウ素酸塩は、アスコルビン酸
に加えてほとんどの指示薬を酸化するために、使用し得
ないことが特に教示されている。

Ｔｏｍｉｏｋａ等［”Ｃｅｒｉｕｍ　（ａｔａｌｙｚｅ
ｄ　５ｅｌｅｃｔｉｖｅＯｘｉｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　５
ｅｃｏｎｄａｒｙ　Ａｌｃｏｈｏｌｓ　ｉｎ　ｔｈｅＰ
ｒｅｓｅｎｃｅ　ｏｆ　Ｐｒｉｍａｒｙ　０ｎｅｓ　、
　ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔｅｒｓ、　２３（５
）：５３９−５４２（１９８２１］は、選択的酸化のた
めに有効な試薬として（ＮＨ４１２Ｃｅ（Ｎ　ｏ　ｓｅ
ａ　−Ｎ　ａ　Ｂ　ｒ　ｏ　３又はＣｅ　（ＳＯ４）２
−２　Ｈ２Ｓ　Ｏ４−Ｎ　ａ　Ｂ　ｒ　Ｏ３の組み合せ
を記載している。

Ｆｉｒｏｕｚａｂａｄｉ等（”Ｄｉｎｉｔｒａｔｏｃｅ
ｒｉｕｍ　（ＩＶ　）Ｃｈｒｏｍａｔｅ　Ｄｉｈｙｄｒ
ａｔｅ、　　［Ｃｅ　　（ＮＯｓ）ｔｌｃｒ　０４−２
　Ｈ２０、ａ　Ｍｉｌｄ　Ｒｅａｇｅｎｔ　ｆｏｒ　ｔ
ｈｅ　０ｘｉｄａｔｉｏｎｏｆ　　Ｏｒｇａｎｉｃ　　
Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　　ｉｎ　　Ｏｒｇａｎｉｃ　　Ｍ
ｅｄｉａ−３ｙｎｔｈｅｔｉｃ　Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔ
ｉｏｎｓ、　　１４（１０１：９３７−９８１（１９８
４）　＞は、ベンジルアルコール及びジオールのような
種々の有機基質のベンゼン中における酸化のための表題
化合物の調製及び使用を考察している。

Ｆｉｒｏｕｚａｂａｄｉ等（°°　ビス［トリニトラト
セ＋）　ウｈ　（Ｉｖ）　］　］’ｙロメー１−１ｃｅ
　（Ｎ　Ｏ３）２］Ｃｒ　Ｏ４：　Ａ　Ｍｉｌｄ　０ｘ
ｉｄａｎｔ　ｉｎ　ＯｒｇａｎｉｃＳｙｎｔｈｅｓｉｓ
”、　５ｙｎｔｈｅｔｉｃ　Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏ
ｎｓ、　１４ｆ７）：６３１−６３７　ｆ１９８４１　
）は、ベンジルアルコールのアルデヒド及びケトンへの
酸化、α−ヒドロキシケトンのジケトンへの酸化、ヒド
ロキノンのｐ−ベンゾキノンへの酸化、及びカテコール
の。−ベンゾキノンへの酸化に際しての表題化合物の調
製及び使用を論じている。

Ｆｉｒｏｕｚａｂａｄｉ等（°°トリスートリニトラセ
リウム（ＩＶ）パラペルイオデート［（ＮＯ３）３Ｃｅ
］　　　ＨｚＩＯａ、ＡｎＥｆｆｉｃｉｅｎｔａｎｄａ
Ｖｅｒｓａｔｉｌｅ　０ｘｉｄａｎｔ　ｉｎ　Ｏｒｇａ
ｎｉｃ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ”：５ｙｎｔｈｅｔｉｃ　
（：ｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ、　１４（ｉｌｌ：１
０３３−１０４２（１９ｓ４））は、好収量を伴う、ド
ライベンゼンにおけるベンジルアルコール及びジオール
のような種々の有機化合物の酸化のための表題化合物の
調製及び使用を論じている。

Ｆｉｒｏｕｚａｂａｄｉ　　等　（”Ｃｅｒｉｃ　　Ｔ
ｒｉｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍＮｉｔｒａｔｅ［Ｃｅ
　　（Ｅｔａ　ＮＨｌｚｌｆＮＯｓ　）ｓ　ａｎＥｆｆ
ｉｃｉｅｎｔ　　０ｘｉｄａｎｔ　　ｆｏｒ　　ｔｈｅ
　　０ｘｉｄａｔｉｏｎ　　ｏｆＢｅｎｚｙｌｉｃ　　
Ａｌｃｏｈｏｌｓ　　ａｎｄ　　ａ　−ｈｙｄｒｏｘｙ
　　Ｋｅｔｏｎｅｓ　　ｔ。

Ｔｈｅｉｒ　　Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　　（ａｒ
ｂｏｎｙｌ　　Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　　ＵｎｄｅｒＭｉ
ｌｄ　　Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　　、　　５ｙｎｔｈｅ
ｔｉｃ　　Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ。

１３（１３１：１１４３−１１４７（１９８３１）は、
ベンジルアルコールの酸化、及びα−ヒドロキシケトン
の、好収量を伴う塩化メチレンにおけるそれに対応する
化合物への酸化のための表題化合物の調製及び使用を論
じている。

Ｈｏ　　［”Ｃｅｒｉｕｍ［ＩＶ　）　　０ｘｉｄａｔ
ｉｏｎ　　Ｗｉｔｈ　　ａ　　ＤｕａｌＯｘｉｄａｎｔ
　　Ｓｙｓｔｅｍ　　：　　Ｒｅａｃｔｉｏｎ　　ｏｆ
　ＳｏｍｅＡｒｙｌｍｅｔｈａｎｏｌｓ”　；　５ｙｎ
ｔｈｅｓｉｓ、　　１２．　ｐｐ、　９３６（１９７８
）　］は、Ｃｅ（ＩＶ）／臭素酸塩の二重酸化体系を記
載している。

上記の引用例は、全般に、本発明の化学に関係する。し
かしながら、これらの参考文献の中で、本発明のセリウ
ム（ＩＶ）化合物がアスコルビン酸塩を選択的に酸化す
るために使用可能であり、それによって試験系に通常使
用される所望のレドックス結合反応を妨害することな（
、アスコルビン酸妨害を除去し得る、ということを教示
又は示唆しているものはない。

及」五皿力 本発明は、試薬系、特にオキシダーゼ／ペルオキシダー
ゼ結合反応、又は同様の種類のレドックス化学を用いる
試験系におけるアスコルビン酸・塩妨害を除去するため
の薬剤及び方法に関する。本発明は、基質がアスコルビ
ン酸塩のような還元体に感受性である酵素／基質反応を
伴う試薬系に用いることもできる。本発明の薬剤は、水
不溶性セリウム（ＩＶ）化合物を包含する。

ムましい　　　の詳　な言ロ レドックス反応を用いた多くの試験系が、アスコルビン
酸の存在による悪影響を受ける０本発明は、水不溶性セ
リウム１■化合物の使用に関する。

硝酸セリウム、硫酸セリウム、硝酸アンモニウムセリウ
ム（ｃ）ＡＮ）、硝酸トリエチルアンモニウムセリウム
（ｃ）ＴＥＮ）等のような可溶性セリウム化合物に比し
て、水酸化セリウム、酸化セリウム、フッ化セリウム、
ヨウ素酸セリウム、トリス（トリニトラトセリウム）パ
ラペルイオデート（ＴＮＣＰ）、ビス（トリニトラトセ
リウム）クロメ−１−（ＢＴＣＣ）　、セリウムアセチ
ルアセトナート、セリウムトリフルオロアセチルアセト
ナート、及びピリジニウムへキサクロロセレートのよう
な不溶性セリウム化合物は、アスコルビン酸妨害の克服
に有用である。本発明の化合物は、任意の水不溶性セリ
ウム１■化合物であり得る。スラリー形態でのこのよう
な水不溶性セリウムＩＶ化合物の濃度は、一般的に、約
５〜約５０ｍＭ（ミリモル）、特に約７〜約３７ｍＭの
範囲である。濃度が５ｍＭより低い場合は一般的に有効
でなく、方、約５０ｍＭを上回る濃度の場合は有効では
あるがしかし利益増大をもたらさない傾向がある。

本発明の化合物はアスコルビン酸塩を選択的に酸化し、
それによってアスコルビン酸妨害を除去する。本発明の
セリウムＩＶ酸化体は特異的であって、慣用レドックス
指示薬系存在下では、通常、いかなる発色をも生じない
。

例えば、実施例に示される化合物ＴＮＣＰは、１０秒間
の混合時間以内に、試験試料中に存在する２５０ミリグ
ラム／デシリツトル（ｍｇ／ｄ１）までのアスコルビン
酸のアスコルビン酸妨害を除去し得る。アスコルビン酸
塩妨害の迅速且つ有効な除去により、オキシダーゼ／ベ
ルオキシダーゼ結合反応及びレドックス指示薬系を用い
る大半の試験の精度が改良される。

本発明のセリウムＩＶ酸化体は、ｐＨ依存性でない、そ
れらを容易に調製し、濾過具上で容易に含浸又は固定し
て不均質試験系を生成し得る。

夫血立 ■、水不溶性セリウムＩＶ化合物（１）及び（２）、並
びに水溶性セリウム化合物（３）の合セリウム（ＩＶ）
酸化体を、以下の操作により調製した： （１）トリス　トリニトラトセリウム　パラペルイオデ
ート（ＴＮＣＰ） ［（Ｎ０ｓｌｓ　Ｃｅ１ａＨｚ　Ｉ　Ｏａ過ヨウ素酸カ
リウム（４，６ｇｍ、２０　ｍｍｏｌ）を２００ｍｔｌ
の加温脱イオン水に溶解した。その溶液をわずかに放冷
した後、３０−の脱イオン水に溶解した硝酸アンモニウ
ムセリウム（３２，９ｇｍ、６０　ｍｍｏｆ）の溶液を
５分間に亙って滴下添加した。次いで、その結果中じた
反応混合液を室温で３時間撹拌した。レモン色の固体が
分離したが、これを？濾過し、脱イオン水で２回洗浄し
、１０・０−の脱イオン水中に懸濁し、凍結乾燥して、
１０．．８ｇｍ（ダラム）の黄色固体を得た（収率４８
％）、このようにして調製した物質は、水溶液中り、″
より容易に再懸、濁し得る。

（２）ビス　トリニトラトセリウム　クロメ−ｌ　（Ｂ
ＴＣＣ） ［（Ｎ０ｓｌａ　　ｃｅ］２ｃｒｏ４ 重クロム酸カリウム（１１，８ｇｍ、４０ｍｍｏｆ）を
２００−の脱イオン水に溶解し、つぎに、６０−の脱イ
オン水に溶解した硝酸アンモニウムセリウム（２１，９
ｇｍ、４０　ｍｍｏｌ）の溶液を１０分間に亙って滴下
添加した。直ちに、オレンジ色の固体が分離した。室温
で２時間撹拌後、その反応混合液を濾過し、脱イオン水
で３回洗浄した。つぎにその固体を５０−の脱イオン水
に再懸濁し、凍結乾燥して、１４．３ｇｍのオレンジ色
の固体を得た（収率９２％）。

（３）　　　トリエチルアンモニウムセリウム（ｃ）Ｔ
ＥＮ） Ｃｅ　（Ｅ　ｔ　ｓ　ＮＨ）ｉ　（Ｎｏｓｅｓ水酸化セ
リウム（ｌｏ、４ｇｍ、５０ｍｍｏりを加熱しなから３
５−の硝酸に溶解した。その溶液をわずかに放冷し、ト
リエチルアミン（２０，９ｄ、１５０　ｍｍｏｆ）を約
５分間に亙って滴下添加した。その結果生じた反応混合
液を室温で３時間撹拌し、次いで水浴中で冷却した。そ
の結果生じたオレンジ色の沈澱物を濾過し、脱イオン水
で素速く洗浄し、熱水から再結晶化して、４ｇｍのオレ
ンジ色の固体を得た（融点１３５℃、収率１１％）。

ＩＩ　、アスコルビン酸塩妨害を防止するための水不溶
性セリウム１■化合物の使用 ２つの浸漬溶液中にＷｈａｔｍａｎ　５４紙を含浸する
ことにより、低範囲グルコースパッドを作製した。第一
の浸漬液は１−メトキシ−２−プロパツールに溶解した
１００ｍＭ（ミリモル）テトラメチルベンジジン（ＴＭ
Ｂ）及び０．５％エアゾールＯＴ　（Ａｅｒｏｓｏｌ　
ＯＴ）から成っており、第二の浸漬液は、０．２Ｍスル
ホン酸モルフォリノエタン（緩衝液としてナトリウム塩
（ｐＨ６，Ｏ）］に溶解した２５０単位／ＭｌのＳｉｇ
ｍａ　Ｖｕ型グルコースオキシグーゼ、５００単位／Ｖ
ｌｌのペルオキシダーゼ、２％ポリビニルピロリドン（
ＰＶＰ）Ｋ−６０、及び０．Ｏ１％ＦＤ＆Ｃイエロー＃
５がら成っている。

表■は、セリウム酸化体がアスコルビン酸掃去剤として
いかに働いたかについての結果を示す。

酸化体を用いない場合に比して、酸化体が存在する場合
はパッド反応性の顕著な改良が観察された。

比較として、表ＩＩはある種の水溶性セリウム酸化体の
結果を示す。いかなるグルコース又はアスコルビン酸も
存在しない場合には、これらの可溶性セリウム酸化体は
偽陽性の結果をもたらすと考えられる。

反応率測定値は、十分に公知のＫｕｂｅｌｋａ−Ｍｕｎ
ｋの等式［Ｇｕｓｔａｖ　Ｋｏｒｔｕｍ、　”Ｒｅｆｌ
ｅｃｔａｎｃｅｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ　、　ｐｐ、
１０６−１１１．　Ｓｐｒｉｎｇｅｒ　Ｖｅｒｌａｇ。

ＮＹ（１９６９）参照］の簡易形態を用いて評価した：
に／Ｓ＝　（１−Ｒ１”／２Ｒ（式中、Ｒは試験具から
の反射率であり、Ｋは定数であり、Ｓは特定の反射媒質
の光の散乱係数である）。

フィルタープランジャー及びポリプロピレン試験管から
成る試験用具を開発した。慣用試験試薬系をセリウムＩ
Ｖ酸化体とともに試験管に入れる。

フィルタープランジャーを試験管内に押し込んで溶液か
ら固体セリウム酸化体を分離し、それによって、不溶性
セリウムＩＶ酸化体による妨害を伴なわずに試薬系の分
析ができる。

実験は、以下の通りに実施した：水に溶解した０、２Ｍ
トリス（トリニトラトセリウム）パラペルイオデート懸
濁液１００１（マイクロリットル）を含入するポリプロ
ピレン試験管に、１００ｍｇ／ｄＩのグリコース及び１
００ｍｇ／ｄＩのアスコルビン酸を含む０．１Ｍ燐酸塩
（ｐＨ７）　１１ｎＩ！を加えた。その懸濁液を５秒間
部合し、つぎにフィルタープランジャーを押し込んだ、
５０μのアリコートをピペットで移し、ｏ、ｉｕ燐酸塩
（ｐＨ７）溶液で５００μに希釈した。次いで、７Ｍを
ピペットで低範囲グルコースパッド上に移し、５ｅｒａ
ｌｙｚｅｒ■反射光度計を用いて６００ｎｍ（ナノメー
タ）の波長で反射率を測定した。６０秒反応でのに／Ｓ
を記録した６図は、０１３０．５０．６５．８０．９０
及び１２０ｍｇ／ａ７のグルコースを含む溶液を用いた
場合の標準曲線の結果を示す。

ＩＩＩ　、液体フォーマットにおけるＴＮＣＰ　（）−
リス（トリニトラトセリウム）バラベルイオデート）の
性能 酸化体ＴＮＣＰを、アスコルビン酸掃去剤としてのその
反応性に関して液体試験でスクリーニングした。用いた
全操作を以下に示す： １）１２ｘ７５ｍｍ試験管中で、酸化体を緩衝液と混合
した。

２）グルコース及びアスコルビン酸溶液を加え、その結
果生じた物質を約ｌＯ秒間部合した。

３）緩衝液ＭＥＳ　（４−モルホリンエタンスルホン酸
）（ｐＨ６）に溶解したそれぞれ１００ｍＭ、３００単
位／１ｎ１、及び５００単位／−の溶液に含浸したテト
ラメチルベンジジン（ＴＭＢ）、グルコースオキシダー
ゼ、及びペルオキシダーゼを含むグルコースパッド（Ｗ
ｈａｔｍａｎ　５４紙）をその混合液中に含浸し、発色
率を記録した。

４）対照実験を行なったが、この場合、酸化体又はグル
コースあるいはアスコルビン酸は存在しなかった。

７ｍＭ　　　　　　−非常によく 反応する １９ｍＭ　　　　　　−茫常にバ 応する ３６ｍＭ　　　　　　−成常によ（ 応する １　スラリー形態で、 ０　グルコース及びアスコルビン酸がともに存在しない
場合には、偽陽性試験を実施した。

混合後１０秒以内に反応性を測定した。

したがって、前述から、本発明は本発明の全目的を達成
するのに、並びにアスコルビン酸により妨害されるレド
ックス反応を用いた試験系によるその他の多数の利益を
得るのに十分適合していることが判かる。酸化体系は非
常に迅速で且つ有効である１例えば、ＴＮＣＰは、１０
秒間の混合時間内に試験試料中に存在する２５０ｍｇ／
ｄｆ！までのアスコルビン酸の妨害を除去し得る。つぎ
に、酸化体系は特異的である。ＴＮＣＰ及びＢＴＣＣの
ような水不溶性酸化体は、グルコースが存在しない場合
は、指示薬テトラメチルベンジジンと反応して発色する
ことはない。ＣＡＮ及びＣＴＥＮのようなより水溶性の
セリウム酸化体は、グルコースの非存在下では１０％未
満の発色を示す。

本発明のさらなる利点は、アスコルビン酸塩妨害を有効
に除去すると、試験溶液中のグルコース測定のための精
度が改良されるという事実である。さらに、本発明の酸
化体系はｐＨ依存性でない、さらにまた、酸化体を容易
に調製し、不均質試験系のための濾過用具上に容易に含
浸し、又は固定化し得る。

明らかに、前述と同様の本発明のその他の多数の改良及
び変法は、本発明の精神及び範囲を逸脱することな〈実
施し得るので、したがって、添付の特許請求の範囲で示
されるような制限が課せられるだけである。

【図面の簡単な説明】

図は、異った一定のグルコース濃度を有する溶液の、グ
ルコース濃度とに／Ｓ値の間の関係を示す標準曲線であ
る。

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）試薬系におけるアスコルビン酸塩妨害を実質的に
   除去するための方法であって、試薬系に水不溶性セリウ
   ムIV化合物を添加することを特徴とする方法。
2. （２）セリウムIV化合物が次の： （ａ）トリス（トリニトラトセリウム）パラペルイオデ
   ート、 （ｂ）ビス（トリニトラセリウム）クロメート、 （ｃ）フッ化セリウム、 （ｄ）水酸化セリウム、 （ｅ）酸化セリウム、及び （ｆ）ヨウ素酸セリウム から成る群の一員である請求項１記載の方法。
3. （３）試薬系におけるアスコルビン酸塩妨害を実質的に
   除去するための薬剤であって、水不溶性セリウムIV化合
   物を含むことを特徴とする薬剤。
4. （４）セリウムIV化合物が次の： （ａ）トリス（トリニトラトセリウム）パラペルイオデ
   ート、 （ｂ）ビス（トリニトラセリウム）クロメート、 （ｃ）フッ化セリウム、 （ｄ）水酸化セリウム、 （ｅ）酸化セリウム、及び （ｆ）ヨウ素酸セリウム から成る群の一員である請求項３記載の薬剤。